JP2002171972A - 肝炎ウイルスエピトープ - Google Patents
肝炎ウイルスエピトープInfo
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
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- C07K16/42—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against immunoglobulins
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の感
染を阻止するのに有用なペプチドを提供する。 【構成】 ＨＣＶの感染を阻止するチンパンジー血清中
の中和抗体と結合する、X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-L
euなる式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aa
は任意のアミノ酸とする）を含むペプチド及び該ペプチ
ドを主成分とするワクチン、該ペプチドを免疫抗原とし
て得られる抗体並びに上記ペプチド及び抗体を利用する
ＨＣＶの診断薬及び治療薬。
染を阻止するのに有用なペプチドを提供する。 【構成】 ＨＣＶの感染を阻止するチンパンジー血清中
の中和抗体と結合する、X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-L
euなる式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aa
は任意のアミノ酸とする）を含むペプチド及び該ペプチ
ドを主成分とするワクチン、該ペプチドを免疫抗原とし
て得られる抗体並びに上記ペプチド及び抗体を利用する
ＨＣＶの診断薬及び治療薬。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】 本発明はＨＣＶに対する中
和抗体を誘導するエピトープの利用に関する。さらに詳
細には、該エピトープを含むペプチド及びこれを認識す
る抗体並びにその利用に関する。
和抗体を誘導するエピトープの利用に関する。さらに詳
細には、該エピトープを含むペプチド及びこれを認識す
る抗体並びにその利用に関する。
【０００２】
【従来技術】肝炎ウイルスは感染様式によって、流行性
ウイルスと血清肝炎ウイルスの２種類に大別される。流
行性肝炎は経口的に感染するタイプで、病原ウイルスと
してＡ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルスなどが知られ
ている。このタイプの肝炎は一過性であり、通常慢性化
することはない。一方、血清肝炎は血液を介して感染す
るタイプであり、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、デルタ
肝炎ウイルス、ＨＣＶなどがある。このタイプの肝炎は
一過性のみならず、持続感染もあることが流行性肝炎と
大きく異なる特徴である。
ウイルスと血清肝炎ウイルスの２種類に大別される。流
行性肝炎は経口的に感染するタイプで、病原ウイルスと
してＡ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルスなどが知られ
ている。このタイプの肝炎は一過性であり、通常慢性化
することはない。一方、血清肝炎は血液を介して感染す
るタイプであり、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）、デルタ
肝炎ウイルス、ＨＣＶなどがある。このタイプの肝炎は
一過性のみならず、持続感染もあることが流行性肝炎と
大きく異なる特徴である。
【０００３】ＨＣＶ感染によって引き起こされる肝炎は
高率に慢性化し、ＨＣＶが持続感染した状態で肝硬変、
肝癌へ進展する深刻な感染症である。ＨＣＶの本体につ
いては、最初にその遺伝子が発見され、遺伝子解析が進
展した（Choo QL,et al. Scince 244:359-362, 1989及
びKato N et al. Proc Natl Acad Sci USA 87:9524-952
8, 1990）。その結果、ＨＣＶ遺伝子は顕著な遺伝的多
様性を示し、現在でも１０種類以上の遺伝子型の存在が
報告されている（Simmonds P Hepatoloty 21:570-583,
1995）。その多様性はエンベロープタンパク（Ｅ１，Ｅ
２）をコードする領域で顕著である。そのなかでも、特
にＥ２のＮ末部（３８４−４１０）に多様性の激しい領
域が存在し超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれている（Kato
N et al.Bilchem Biophys Res Commun 189:119-127, 1
992）。ＨＣＶ遺伝子の多様性は、同一検体から分離さ
れるウイルスクローン間にも認められ、感染宿主内では
様々な変異をもったクローンが混在するｑｕａｓｉｓｐ
ｅｓｉｅｓという状態が形成されている。感染宿主内で
変異し続けるＨＣＶのＨＶＲに対して、宿主はそれを抗
原と認識して抗体を産生していることが判っている（Ta
niguchi S et al. Viroloty 195:297-301, 1993）。つ
まり、ＨＣＶはＨＶＲの変異により宿主の免疫機構から
逃れ持続感染を成立するといわれている。ＨＶＲ内のエ
ピトープについては、患者血清とＨＶＲ内の合成ペプチ
ドを用いた実験により、４０１−４０７にそのエピトー
プが存在することが報告されている（特許、国際公開番
号ＷＯ９４／２６３０６）。しかし、これまでのとこ
ろ、ＨＶＲがウイルス中和に関係するエピトープを担
い、ＨＶＲに対する抗体が中和抗体であることを直接的
に実証するデータはない。
高率に慢性化し、ＨＣＶが持続感染した状態で肝硬変、
肝癌へ進展する深刻な感染症である。ＨＣＶの本体につ
いては、最初にその遺伝子が発見され、遺伝子解析が進
展した（Choo QL,et al. Scince 244:359-362, 1989及
びKato N et al. Proc Natl Acad Sci USA 87:9524-952
8, 1990）。その結果、ＨＣＶ遺伝子は顕著な遺伝的多
様性を示し、現在でも１０種類以上の遺伝子型の存在が
報告されている（Simmonds P Hepatoloty 21:570-583,
1995）。その多様性はエンベロープタンパク（Ｅ１，Ｅ
２）をコードする領域で顕著である。そのなかでも、特
にＥ２のＮ末部（３８４−４１０）に多様性の激しい領
域が存在し超可変領域（ＨＶＲ）と呼ばれている（Kato
N et al.Bilchem Biophys Res Commun 189:119-127, 1
992）。ＨＣＶ遺伝子の多様性は、同一検体から分離さ
れるウイルスクローン間にも認められ、感染宿主内では
様々な変異をもったクローンが混在するｑｕａｓｉｓｐ
ｅｓｉｅｓという状態が形成されている。感染宿主内で
変異し続けるＨＣＶのＨＶＲに対して、宿主はそれを抗
原と認識して抗体を産生していることが判っている（Ta
niguchi S et al. Viroloty 195:297-301, 1993）。つ
まり、ＨＣＶはＨＶＲの変異により宿主の免疫機構から
逃れ持続感染を成立するといわれている。ＨＶＲ内のエ
ピトープについては、患者血清とＨＶＲ内の合成ペプチ
ドを用いた実験により、４０１−４０７にそのエピトー
プが存在することが報告されている（特許、国際公開番
号ＷＯ９４／２６３０６）。しかし、これまでのとこ
ろ、ＨＶＲがウイルス中和に関係するエピトープを担
い、ＨＶＲに対する抗体が中和抗体であることを直接的
に実証するデータはない。
【０００４】このような研究と共に、ワクチンの研究も
進められている（Choo QL, et al.Proc Natl Acad Sci
USA 91:1294-1298, 1994）。遺伝子組換えでつくられた
Ｅ１／Ｅ２タンパクをチンパンジーに免疫した結果、Ｈ
ＣＶの感染を防御出来たことが報告されており、Ｅ１／
Ｅ２によるワクチンの可能性を示している。しかし、本
報告ではＥ１／Ｅ２をまるごと用いる必要があり、その
なかでどこの部分がワクチンとして必須なのかは明らか
ではない。さらに、多様性に富むＨＣＶに対して、一種
類のＥ１／Ｅ２で対応できるかも明らかではない。
進められている（Choo QL, et al.Proc Natl Acad Sci
USA 91:1294-1298, 1994）。遺伝子組換えでつくられた
Ｅ１／Ｅ２タンパクをチンパンジーに免疫した結果、Ｈ
ＣＶの感染を防御出来たことが報告されており、Ｅ１／
Ｅ２によるワクチンの可能性を示している。しかし、本
報告ではＥ１／Ｅ２をまるごと用いる必要があり、その
なかでどこの部分がワクチンとして必須なのかは明らか
ではない。さらに、多様性に富むＨＣＶに対して、一種
類のＥ１／Ｅ２で対応できるかも明らかではない。
【０００５】上記の如く、これまで、ＨＣＶのＨＶＲが
中和抗体と関連するかもしれないとの可能性は指摘され
ながら、唯一のＨＣＶ感染動物であるチンパンジーを用
いたＨＶＲペプチドを免疫抗原としたワクチン試験は全
く試みられていなかったため、果たしてＨＣＶのＨＶＲ
がＨＣＶ感染動物で中和抗体を誘導してワクチンとなる
のかは不明であった。
中和抗体と関連するかもしれないとの可能性は指摘され
ながら、唯一のＨＣＶ感染動物であるチンパンジーを用
いたＨＶＲペプチドを免疫抗原としたワクチン試験は全
く試みられていなかったため、果たしてＨＣＶのＨＶＲ
がＨＣＶ感染動物で中和抗体を誘導してワクチンとなる
のかは不明であった。
【０００６】このような状況の下、我々はＨＣＶのＨＶ
Ｒに相当するペプチドを合成してチンパンジーに免疫し
て、ＨＶＲ抗体を上昇させ、その動物にＨＣＶを接種し
て、その動物がＨＣＶの感染から逃れることが可能か否
かを検討した。このような実験によって始めてＨＣＶの
ＨＶＲが中和抗体を誘導するか否かが実証可能となる。
Ｒに相当するペプチドを合成してチンパンジーに免疫し
て、ＨＶＲ抗体を上昇させ、その動物にＨＣＶを接種し
て、その動物がＨＣＶの感染から逃れることが可能か否
かを検討した。このような実験によって始めてＨＣＶの
ＨＶＲが中和抗体を誘導するか否かが実証可能となる。
【０００７】さらに、ＨＣＶのＨＶＲペプチド免疫によ
りＨＣＶ感染が防御されたチンパンジーの抗血清を用い
て、ＨＶＲ内のどの領域が重要な領域であるかを細かく
検討した。多様性の多いＨＶＲ内又はその近傍の保存さ
れた領域で、一定の核となる配列を有する中和エピトー
プがさらに限定されるならば、多様性に富むＨＣＶに対
するワクチンや中和抗体開発において極めて重要な情報
を提供することになる。
りＨＣＶ感染が防御されたチンパンジーの抗血清を用い
て、ＨＶＲ内のどの領域が重要な領域であるかを細かく
検討した。多様性の多いＨＶＲ内又はその近傍の保存さ
れた領域で、一定の核となる配列を有する中和エピトー
プがさらに限定されるならば、多様性に富むＨＣＶに対
するワクチンや中和抗体開発において極めて重要な情報
を提供することになる。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】すなわち、本発明は、
ＨＣＶに対する感染防御又は中和抗体を誘導するエピト
ープの核となるアミノ酸配列を明らかにし、該エピトー
プを有するペプチド及び該ペプチドを認識する抗体を提
供することを目的としている。
ＨＣＶに対する感染防御又は中和抗体を誘導するエピト
ープの核となるアミノ酸配列を明らかにし、該エピトー
プを有するペプチド及び該ペプチドを認識する抗体を提
供することを目的としている。
【０００９】また、本発明の他の目的は、上記のＨＣＶ
に対する感染防御又は中和抗体を誘導するエピトープを
有するペプチド又は該ペプチドをコードする遺伝子断片
を含むＤＮＡ断片を主成分とするＨＣＶワクチンを提供
することにある。
に対する感染防御又は中和抗体を誘導するエピトープを
有するペプチド又は該ペプチドをコードする遺伝子断片
を含むＤＮＡ断片を主成分とするＨＣＶワクチンを提供
することにある。
【００１０】また、本発明の他の目的は、上記のＨＣＶ
に対する感染防御又は中和抗体を誘導するエピトープを
有するペプチドを認識する抗体を主成分とするＨＣＶの
治療剤を提供することにある。
に対する感染防御又は中和抗体を誘導するエピトープを
有するペプチドを認識する抗体を主成分とするＨＣＶの
治療剤を提供することにある。
【００１１】本発明の更に他の目的は、上記の抗体のイ
デオトープを認識する抗イデオタイプ抗体を主成分とす
るワクチンを提供することにある。
デオトープを認識する抗イデオタイプ抗体を主成分とす
るワクチンを提供することにある。
【００１２】本発明の更に他の目的は、上記のペプチド
もしくは抗体の組み合わせによるＨＣＶ又は該ウイルス
に対する抗体を検出する方法を提供することにある。
もしくは抗体の組み合わせによるＨＣＶ又は該ウイルス
に対する抗体を検出する方法を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の目
的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、ＨＣＶのＨ
ＶＲの遺伝子配列から推定されるアミノ酸配列を有する
合成ペプチドで免疫されたチンパンジーは、ＨＣＶによ
る感染から防御され得ることを発見した。更に、このウ
イルス感染から免れたチンパンジーの血清及びＨＣＶの
ＨＶＲに相当する合成ペプチドを用いたエピトープマッ
ピングを行うことにより、X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln
-Leuなる式で表されるペプチドが、上記チンパンジー血
清と反応することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。
的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、ＨＣＶのＨ
ＶＲの遺伝子配列から推定されるアミノ酸配列を有する
合成ペプチドで免疫されたチンパンジーは、ＨＣＶによ
る感染から防御され得ることを発見した。更に、このウ
イルス感染から免れたチンパンジーの血清及びＨＣＶの
ＨＶＲに相当する合成ペプチドを用いたエピトープマッ
ピングを行うことにより、X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln
-Leuなる式で表されるペプチドが、上記チンパンジー血
清と反応することを見出し、本発明を完成するに至っ
た。
【００１４】また、本発明は、上記のX1aa-X2aa-Gln-X3
aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列を含むペ
プチドを免疫抗原として作製されるポリクローナル抗体
及びモノクローナル抗体を包含する。
aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列を含むペ
プチドを免疫抗原として作製されるポリクローナル抗体
及びモノクローナル抗体を包含する。
【００１５】また、本発明は、上記のX1aa-X2aa-Gln-X3
aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列を含むペ
プチド又はプロモータの下流に動作的に該ペプチドをコ
ードする遺伝子断片を結合したＤＮＡ断片を主成分とす
るワクチンを包含する。
aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列を含むペ
プチド又はプロモータの下流に動作的に該ペプチドをコ
ードする遺伝子断片を結合したＤＮＡ断片を主成分とす
るワクチンを包含する。
【００１６】また、本発明は、上記のX1aa-X2aa-Gln-X3
aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列を含むペ
プチドを認識するモノクローナル抗体を主成分とする治
療薬を包含する。
aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列を含むペ
プチドを認識するモノクローナル抗体を主成分とする治
療薬を包含する。
【００１７】更に、本発明は、上記ペプチド又は抗体を
用いたＨＣＶ及び該ウイルスに対する抗体を検出する方
法を包含する。以下に、本発明について更に詳述する。
用いたＨＣＶ及び該ウイルスに対する抗体を検出する方
法を包含する。以下に、本発明について更に詳述する。
【００１８】本発明のペプチド、抗体及び方法は、アミ
ノ酸配列、X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式で表
されるアミノ酸配列を含むペプチドにより特徴づけられ
る。ここで、X1aaX2aa及びX3aaは任意のアミノ酸であっ
て、上記ペプチドは本発明において得た中和抗体を有す
るチンパンジー血清と結合し得る。好ましくは、上記式
で表されるアミノ酸配列において、X1aaはPro、Ala及び
Serからなる群、X2aaはSer、Ala、Lys及びArgからなる
群、並びにX3aaはLys、Asn及びAspからなる群から選ば
れるアミノ酸を有する配列を含むペプチドが使用され
る。更に、好ましくは、Ala-Ser-Gln-Lys-Ile-Gln-Leu
なるアミノ酸配列を含むペプチドが使用される。
ノ酸配列、X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式で表
されるアミノ酸配列を含むペプチドにより特徴づけられ
る。ここで、X1aaX2aa及びX3aaは任意のアミノ酸であっ
て、上記ペプチドは本発明において得た中和抗体を有す
るチンパンジー血清と結合し得る。好ましくは、上記式
で表されるアミノ酸配列において、X1aaはPro、Ala及び
Serからなる群、X2aaはSer、Ala、Lys及びArgからなる
群、並びにX3aaはLys、Asn及びAspからなる群から選ば
れるアミノ酸を有する配列を含むペプチドが使用され
る。更に、好ましくは、Ala-Ser-Gln-Lys-Ile-Gln-Leu
なるアミノ酸配列を含むペプチドが使用される。
【００１９】チンパンジーの免疫又はＨＣＶのＨＶＲ及
びその近傍のエピトープを決定するために用いるペプチ
ドは、日本のＣ型肝炎患者血清（ＪＮｏ．６）に由来す
るＨＣＶのＨＶＲ及びその近傍の塩基配列から推定され
るアミノ酸配列に基づいて製造される。上記のアミノ酸
配列を含むペプチドは、通常の化学的合成法あるいは目
的のアミノ酸配列をコードする塩基配列を発現するよう
に形質転換された宿主を用いる遺伝子組換え技術により
取得できる。
びその近傍のエピトープを決定するために用いるペプチ
ドは、日本のＣ型肝炎患者血清（ＪＮｏ．６）に由来す
るＨＣＶのＨＶＲ及びその近傍の塩基配列から推定され
るアミノ酸配列に基づいて製造される。上記のアミノ酸
配列を含むペプチドは、通常の化学的合成法あるいは目
的のアミノ酸配列をコードする塩基配列を発現するよう
に形質転換された宿主を用いる遺伝子組換え技術により
取得できる。
【００２０】化学的合成法によりペプチドを製造する場
合は、例えば、ペプチド合成機（４３０Ａペプチドシン
セサイザー：パーキンエルマージャパン・アプライドバ
イドバイオシステムズ社製）を使用し、同装置のプロト
コールに従ったＦａｓｔＭｏｃＴＭ固相合成法により、
所望のペプチドが合成される。得られたペプチドの脱保
護とレジンからの切り出しは、添付されたプロトコール
「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｌｅａｖａｇｅ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」に記載された方法により実施
される。脱保護レジンから切り出された粗ペプチドの精
製は、蛋白質化学において通常使用される方法、例え
ば、塩析法、限外濾過法、等電点沈殿法、電気泳動法、
イオン交換クロマトグラフィー法、ゲル濾過クロマトグ
ラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法等を
適宜選択して行うことができる。
合は、例えば、ペプチド合成機（４３０Ａペプチドシン
セサイザー：パーキンエルマージャパン・アプライドバ
イドバイオシステムズ社製）を使用し、同装置のプロト
コールに従ったＦａｓｔＭｏｃＴＭ固相合成法により、
所望のペプチドが合成される。得られたペプチドの脱保
護とレジンからの切り出しは、添付されたプロトコール
「Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｌｅａｖａｇｅ
Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」に記載された方法により実施
される。脱保護レジンから切り出された粗ペプチドの精
製は、蛋白質化学において通常使用される方法、例え
ば、塩析法、限外濾過法、等電点沈殿法、電気泳動法、
イオン交換クロマトグラフィー法、ゲル濾過クロマトグ
ラフィー法、アフィニティークロマトグラフィー法等を
適宜選択して行うことができる。
【００２１】遺伝子組換え技術によりペプチドを製造す
る場合は、ＤＮＡ合成機を用いて合成した目的のアミノ
酸配列をコードするＤＮＡ断片を適当な発現ベクターに
組み込み、これを用いて、微生物又は動物細胞を形質転
換し、形質転換体を培養することにより、該ペプチドを
生産することができる。発現ベクターとしては、プラス
ミド、ウイルスベクター等を用いることができる。該発
現ベクターに含まれるプロモーターは、宿主として用い
る微生物又は動物細胞との組み合わせにより、Ｌａｃ、
ｔａｃ、ｐｈｏ５、ａｄｈ、ＳＶ４０初期、ＳＶ４０後
期、βアクチンなどから選択するすることができる。ま
た、他の蛋白質やペプチド、例えば、β−ガラクトシダ
ーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、マルト
ース結合蛋白、プロテインＡ、ヒスチジンヘキサマー、
ウイルス蛋白質（ＨＢＶコア蛋白質など）等との融合蛋
白として発現させることもできる。マーカー遺伝子とし
て、微生物細胞用発現ベクターを用いる場合は、宿主と
して大腸菌を用いる場合アンピシリン耐性遺伝子、テト
ラサイクリン耐性遺伝子、宿主として酵母を用いる場合
β−イソプロピルリンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子など
が利用される。また、動物細胞用発現ベクターを用いる
場合は、アミノグリコシド３’ホスホトランスフェラー
ゼ遺伝子やジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、グルタミン合
成酵素遺伝子などを利用できる。選択用添加物質として
は、Ｇ−４１８、ネオマイシン、メソトレキセート等が
例示される。宿主細胞の形質転換は公知の方法、例え
ば、塩化カルシウム法、燐酸カルシウム共沈澱法、ＤＥ
ＡＥデキストラン法、リポフェクチン法、プロトプラス
トポリエチレングリコール融合法、エレクトロポレーシ
ョン法などが利用でき、用いる宿主細胞により適当な方
法を選択すればよい。ＨＣＶペプチドの精製は、該ペプ
チドを産生する形質転換細胞を大量培養し、回収したそ
の細胞抽出液又は培養上清から、前述した蛋白質化学に
おいて通常使用される方法を適宜選択することにより達
成される。
る場合は、ＤＮＡ合成機を用いて合成した目的のアミノ
酸配列をコードするＤＮＡ断片を適当な発現ベクターに
組み込み、これを用いて、微生物又は動物細胞を形質転
換し、形質転換体を培養することにより、該ペプチドを
生産することができる。発現ベクターとしては、プラス
ミド、ウイルスベクター等を用いることができる。該発
現ベクターに含まれるプロモーターは、宿主として用い
る微生物又は動物細胞との組み合わせにより、Ｌａｃ、
ｔａｃ、ｐｈｏ５、ａｄｈ、ＳＶ４０初期、ＳＶ４０後
期、βアクチンなどから選択するすることができる。ま
た、他の蛋白質やペプチド、例えば、β−ガラクトシダ
ーゼ、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ、マルト
ース結合蛋白、プロテインＡ、ヒスチジンヘキサマー、
ウイルス蛋白質（ＨＢＶコア蛋白質など）等との融合蛋
白として発現させることもできる。マーカー遺伝子とし
て、微生物細胞用発現ベクターを用いる場合は、宿主と
して大腸菌を用いる場合アンピシリン耐性遺伝子、テト
ラサイクリン耐性遺伝子、宿主として酵母を用いる場合
β−イソプロピルリンゴ酸デヒドロゲナーゼ遺伝子など
が利用される。また、動物細胞用発現ベクターを用いる
場合は、アミノグリコシド３’ホスホトランスフェラー
ゼ遺伝子やジヒドロ葉酸還元酵素遺伝子、グルタミン合
成酵素遺伝子などを利用できる。選択用添加物質として
は、Ｇ−４１８、ネオマイシン、メソトレキセート等が
例示される。宿主細胞の形質転換は公知の方法、例え
ば、塩化カルシウム法、燐酸カルシウム共沈澱法、ＤＥ
ＡＥデキストラン法、リポフェクチン法、プロトプラス
トポリエチレングリコール融合法、エレクトロポレーシ
ョン法などが利用でき、用いる宿主細胞により適当な方
法を選択すればよい。ＨＣＶペプチドの精製は、該ペプ
チドを産生する形質転換細胞を大量培養し、回収したそ
の細胞抽出液又は培養上清から、前述した蛋白質化学に
おいて通常使用される方法を適宜選択することにより達
成される。
【００２２】チンパンジーの免疫は一般的な方法によ
り、例えば、上記の合成ぺプチドを通常の免疫賦活剤と
併用して、チンパンジーに腹空内投与、皮下投与、皮内
投与あるいは静脈内投与することにより行われる。免疫
賦活剤としては、フロインド完全アジュバント（ＦＣ
Ａ）、フロインド不完全アジュバント（ＩＦＣＡ）、水
酸化アルミニウムゲル、ムラミルジペプチド、スカシガ
イヘモシアニン（ＫＬＨ）等が挙げられる。好ましく
は、合成ペプチドとＫＬＨを混和し、更にＦＣＡもしく
はＩＦＣＡを添加し、充分に混合して乳剤とし、これを
チンパンジーの背部皮下に５から６ヶ所に分けて接種す
ることによって行われる。免疫抗原を認識する抗体の検
出は、通常使用されるＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、ウエス
タンブロット法等に従って行われる。上記方法に使用さ
れる抗原は合成ペプチドもしくは遺伝子組換え技術によ
る形質転換細胞が産生するペプチドのいずれであっても
良い。好ましくは、合成ペプチドを固相抗原とするＥＬ
ＩＳＡ法が使用される。
り、例えば、上記の合成ぺプチドを通常の免疫賦活剤と
併用して、チンパンジーに腹空内投与、皮下投与、皮内
投与あるいは静脈内投与することにより行われる。免疫
賦活剤としては、フロインド完全アジュバント（ＦＣ
Ａ）、フロインド不完全アジュバント（ＩＦＣＡ）、水
酸化アルミニウムゲル、ムラミルジペプチド、スカシガ
イヘモシアニン（ＫＬＨ）等が挙げられる。好ましく
は、合成ペプチドとＫＬＨを混和し、更にＦＣＡもしく
はＩＦＣＡを添加し、充分に混合して乳剤とし、これを
チンパンジーの背部皮下に５から６ヶ所に分けて接種す
ることによって行われる。免疫抗原を認識する抗体の検
出は、通常使用されるＥＬＩＳＡ法、ＲＩＡ法、ウエス
タンブロット法等に従って行われる。上記方法に使用さ
れる抗原は合成ペプチドもしくは遺伝子組換え技術によ
る形質転換細胞が産生するペプチドのいずれであっても
良い。好ましくは、合成ペプチドを固相抗原とするＥＬ
ＩＳＡ法が使用される。
【００２３】かくして免疫されたチンパンジーの感染防
御能は、該チンパンジーのＨＣＶによる攻撃試験によ
り、実証することができる。すなわち、ＨＣＶ攻撃前後
のチンパンジー血清中のＨＣＶＲＮＡの増減を検出する
ことによって、ＨＣＶ感染の有無を調べることができ
る。ＨＣＶＲＮＡは、ＲＴ−Ｎｅｓｔｅｄ−ＰＣＲ法も
しくはＤＮＡプローブ法により検出することが可能であ
るが、好ましくは、ＤＮＡプローブ法が使用される。よ
り具体的には、最終免疫後、免疫抗原に対する抗体の上
昇を確認した後、チンパンジー感染価１０ＣＩＤ50のＨ
ＣＶを含むＪＮｏ．６を、チンパンジーの静脈内に接種
する。ＨＣＶ攻撃前後のチンパンジー血清からアンプリ
テックＨＣＶアンプリコア専用核酸抽出キット（日本ロ
シュ株式会社製）を用いて、ＲＮＡを抽出し、逆転写反
応及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、ｃＤＮ
Ａの合成と増幅を行う。次いで、ＨＣＶＲＮＡ検出用キ
ットアンプリコアＨＣＶ（日本ロシュ株式会社製）を用
いて、ＨＣＶｃＤＮＡをプローブとするハイブリダイゼ
ーションを行うことにより、ＨＣＶＲＮＡを検出する。
御能は、該チンパンジーのＨＣＶによる攻撃試験によ
り、実証することができる。すなわち、ＨＣＶ攻撃前後
のチンパンジー血清中のＨＣＶＲＮＡの増減を検出する
ことによって、ＨＣＶ感染の有無を調べることができ
る。ＨＣＶＲＮＡは、ＲＴ−Ｎｅｓｔｅｄ−ＰＣＲ法も
しくはＤＮＡプローブ法により検出することが可能であ
るが、好ましくは、ＤＮＡプローブ法が使用される。よ
り具体的には、最終免疫後、免疫抗原に対する抗体の上
昇を確認した後、チンパンジー感染価１０ＣＩＤ50のＨ
ＣＶを含むＪＮｏ．６を、チンパンジーの静脈内に接種
する。ＨＣＶ攻撃前後のチンパンジー血清からアンプリ
テックＨＣＶアンプリコア専用核酸抽出キット（日本ロ
シュ株式会社製）を用いて、ＲＮＡを抽出し、逆転写反
応及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により、ｃＤＮ
Ａの合成と増幅を行う。次いで、ＨＣＶＲＮＡ検出用キ
ットアンプリコアＨＣＶ（日本ロシュ株式会社製）を用
いて、ＨＣＶｃＤＮＡをプローブとするハイブリダイゼ
ーションを行うことにより、ＨＣＶＲＮＡを検出する。
【００２４】ＨＣＶ感染から免れたチンパンジー血清中
の中和抗体の存在は、該チンパンジー血清と攻撃試験に
用いたＨＣＶとを一旦混合した後、これを新たにチンパ
ンジーに接種し、上記と同様の方法により、チンパンジ
ー血清中のＨＣＶＲＮＡを調べ、ＨＣＶＲＮＡが存在し
ないことを確認することにより、実証される。該中和抗
体が認識するエピトープは、ペプチドマッピングを行う
ことによって明らかにすることができる。すなわち、配
列表の配列番号：２〜５１に記載したペプチドを固相抗
原とするＥＬＩＳＡ法により、これらのペプチドと中和
抗体を有するチンパンジー血清との反応性から、中和抗
体に対するエピトープが決定される。かくして得られる
エピトープ部分のアミノ酸の出現頻度は、例えば、各遺
伝子型のＨＶＲ１におけるアミノ酸の出現頻度の表（加
藤宣之 分子肝炎ウイルス病学（上巻）p64-69、１９９
５年９月４日、日本臨床 増刊号）から求めることがで
き、エピトープ部分のアミノ酸頻度を考慮することによ
って、置換可能なアミノ酸を予測することができる。
の中和抗体の存在は、該チンパンジー血清と攻撃試験に
用いたＨＣＶとを一旦混合した後、これを新たにチンパ
ンジーに接種し、上記と同様の方法により、チンパンジ
ー血清中のＨＣＶＲＮＡを調べ、ＨＣＶＲＮＡが存在し
ないことを確認することにより、実証される。該中和抗
体が認識するエピトープは、ペプチドマッピングを行う
ことによって明らかにすることができる。すなわち、配
列表の配列番号：２〜５１に記載したペプチドを固相抗
原とするＥＬＩＳＡ法により、これらのペプチドと中和
抗体を有するチンパンジー血清との反応性から、中和抗
体に対するエピトープが決定される。かくして得られる
エピトープ部分のアミノ酸の出現頻度は、例えば、各遺
伝子型のＨＶＲ１におけるアミノ酸の出現頻度の表（加
藤宣之 分子肝炎ウイルス病学（上巻）p64-69、１９９
５年９月４日、日本臨床 増刊号）から求めることがで
き、エピトープ部分のアミノ酸頻度を考慮することによ
って、置換可能なアミノ酸を予測することができる。
【００２５】一旦、中和抗体が認識するエピトープが明
らかにされると、逆に、このエピトープを認識し、且
つ、中和活性を有するモノクローナル抗体の作製が可能
となる。このような中和モノクローナル抗体は、今日で
は常法となっている細胞融合法により、該エピトープと
結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
を作製することにより取得できる。抗体を作製する際の
免疫抗原としては、チンパンジーの免疫に用いた合成ペ
プチドあるいは上記のエピトープのみを含むペプチドが
使用される。免疫は、上述した一般的な方法により行わ
れる。モノクローナル抗体を作製する際の免疫細胞とし
ては、最終投与の２〜４日後に摘出した脾臓細胞を用い
るのが好ましい。マウスミエローマ細胞としては、例え
ば、ＮＳＩ−Ａｇ４／１（Eur. J. Immunol.6:511）、
Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８．Ｕ１（Curr. Topics Microbiol.
Immunol. 81:1）、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３（J. Immuno
l. 123:1548, 1979）等を使用することができる。
らかにされると、逆に、このエピトープを認識し、且
つ、中和活性を有するモノクローナル抗体の作製が可能
となる。このような中和モノクローナル抗体は、今日で
は常法となっている細胞融合法により、該エピトープと
結合するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
を作製することにより取得できる。抗体を作製する際の
免疫抗原としては、チンパンジーの免疫に用いた合成ペ
プチドあるいは上記のエピトープのみを含むペプチドが
使用される。免疫は、上述した一般的な方法により行わ
れる。モノクローナル抗体を作製する際の免疫細胞とし
ては、最終投与の２〜４日後に摘出した脾臓細胞を用い
るのが好ましい。マウスミエローマ細胞としては、例え
ば、ＮＳＩ−Ａｇ４／１（Eur. J. Immunol.6:511）、
Ｐ３Ｘ６３−Ａｇ８．Ｕ１（Curr. Topics Microbiol.
Immunol. 81:1）、Ｘ６３−Ａｇ８．６５３（J. Immuno
l. 123:1548, 1979）等を使用することができる。
【００２６】脾臓細胞とマウスミエローマ細胞との融合
反応はMilsteinらの方法（Method Enzymol. 73, 3−46,
1981）に準じて行うことができる。すなわち、融合す
る際には、マウスミエローマ細胞に対し、１〜１０倍程
度の脾臓細胞が用いられる。また、融合促進剤として
は、分子量１，０００〜６，０００のポリエチレングリ
コールが３０〜５０％（w/v）の濃度で使用される。好
ましくは、細胞融合は、約１０8個の脾臓細胞と約 １０
7個のＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．Ｕ１ミエローマ細胞を用い
て、予め３７℃に加温した４５％ポリエチレングリコー
ル４，０００を含むリンパ細胞の培養に通常に用いられ
る培地、例えば、ＲＰＭＩ１６４０ 培地中で行われ
る。ハイブリドーマは、未融合細胞が死滅するのに十分
な時間、通常数日〜数週間ＨＡＴ培地中で培養すること
により得られる。かくして得られるハイブリドーマに対
し、その培養上清を用いて、通常の限界希釈法に従い、
目的とする抗体産生株の選択及びクローン化が行われ
る。チンパンジー血清中の中和抗体に対するエピトープ
を認識するモノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マの検索は、上記のペプチドマッピングに用いた合成ペ
プチドを利用することができる。かくして得られた中和
エピトープを認識するモノクローナル抗体を産生するハ
イブリドーマからの該抗体の採取には、該ハイブリドー
マを大量に培養し、その培養上清から又は該ハイブリド
ーマに適合するマウスにこれを投与して増殖させ、その
腹水から得る方法等がとられる。モノクローナル抗体の
精製は、前述した蛋白質化学において通常使用される方
法を適宜選択することにより達成される。
反応はMilsteinらの方法（Method Enzymol. 73, 3−46,
1981）に準じて行うことができる。すなわち、融合す
る際には、マウスミエローマ細胞に対し、１〜１０倍程
度の脾臓細胞が用いられる。また、融合促進剤として
は、分子量１，０００〜６，０００のポリエチレングリ
コールが３０〜５０％（w/v）の濃度で使用される。好
ましくは、細胞融合は、約１０8個の脾臓細胞と約 １０
7個のＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．Ｕ１ミエローマ細胞を用い
て、予め３７℃に加温した４５％ポリエチレングリコー
ル４，０００を含むリンパ細胞の培養に通常に用いられ
る培地、例えば、ＲＰＭＩ１６４０ 培地中で行われ
る。ハイブリドーマは、未融合細胞が死滅するのに十分
な時間、通常数日〜数週間ＨＡＴ培地中で培養すること
により得られる。かくして得られるハイブリドーマに対
し、その培養上清を用いて、通常の限界希釈法に従い、
目的とする抗体産生株の選択及びクローン化が行われ
る。チンパンジー血清中の中和抗体に対するエピトープ
を認識するモノクローナル抗体を産生するハイブリドー
マの検索は、上記のペプチドマッピングに用いた合成ペ
プチドを利用することができる。かくして得られた中和
エピトープを認識するモノクローナル抗体を産生するハ
イブリドーマからの該抗体の採取には、該ハイブリドー
マを大量に培養し、その培養上清から又は該ハイブリド
ーマに適合するマウスにこれを投与して増殖させ、その
腹水から得る方法等がとられる。モノクローナル抗体の
精製は、前述した蛋白質化学において通常使用される方
法を適宜選択することにより達成される。
【００２７】このようにして得たモノクローナル抗体あ
るいはその一部を免疫抗原として、この抗体のエピトー
プに対する抗体、すなわち、イデオトープに対する抗イ
デオタイプ抗体を、モノクローナル抗体の作製と同様の
方法により取得することが出来る。得られた抗イデオタ
イプ抗体はマウスモノクローナル抗体を作製する際に免
疫源とした抗原と同じ構造をしており、Ｃ型肝炎のワク
チンとして有用である。この様にして得られるマウスモ
ノクローナル抗体は、Ｒｉｅｃｈｉｍａｎｎらの方法
（ Nature, vol.332 p323-327, 1988）に従って、抗原
−抗体反応において、結合に関与する超可変領域のみを
ヒト由来の抗体分子に移植することにより、副作用の少
ないヒト型化抗体とすることが可能である。
るいはその一部を免疫抗原として、この抗体のエピトー
プに対する抗体、すなわち、イデオトープに対する抗イ
デオタイプ抗体を、モノクローナル抗体の作製と同様の
方法により取得することが出来る。得られた抗イデオタ
イプ抗体はマウスモノクローナル抗体を作製する際に免
疫源とした抗原と同じ構造をしており、Ｃ型肝炎のワク
チンとして有用である。この様にして得られるマウスモ
ノクローナル抗体は、Ｒｉｅｃｈｉｍａｎｎらの方法
（ Nature, vol.332 p323-327, 1988）に従って、抗原
−抗体反応において、結合に関与する超可変領域のみを
ヒト由来の抗体分子に移植することにより、副作用の少
ないヒト型化抗体とすることが可能である。
【００２８】チンパンジー血清中の中和抗体に対するエ
ピトープを構成するアミノ酸配列からなるペプチドは、
ＨＣＶ感染防御を誘導する活性を有するものである。従
って、上記ペプチド又は該ペプチドのアミノ酸配列をコ
ードするＤＮＡのみを発現する様に構築された発現ベク
ター並びに該ペプチドに対するモノクローナル抗体、ポ
リクローナル抗体及び抗イデオタイプ抗体はＣ型肝炎の
ワクチンもしくは治療薬として、単独であるいは薬剤と
して投与可能な適当な担体、希釈液又は安定剤を添加す
ることにより、注射剤、経口剤等の任意慣用の方法で医
薬品に使用される。また、該ペプチド及びこれらとの結
合能を有する抗体は、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳ
Ａ法などの抗原及び抗体検出系に利用することができ、
診断薬を構築する材料となる。
ピトープを構成するアミノ酸配列からなるペプチドは、
ＨＣＶ感染防御を誘導する活性を有するものである。従
って、上記ペプチド又は該ペプチドのアミノ酸配列をコ
ードするＤＮＡのみを発現する様に構築された発現ベク
ター並びに該ペプチドに対するモノクローナル抗体、ポ
リクローナル抗体及び抗イデオタイプ抗体はＣ型肝炎の
ワクチンもしくは治療薬として、単独であるいは薬剤と
して投与可能な適当な担体、希釈液又は安定剤を添加す
ることにより、注射剤、経口剤等の任意慣用の方法で医
薬品に使用される。また、該ペプチド及びこれらとの結
合能を有する抗体は、ウエスタンブロット法、ＥＬＩＳ
Ａ法などの抗原及び抗体検出系に利用することができ、
診断薬を構築する材料となる。
【００２９】
【発明の効果】本発明によると、ＨＣＶに対する中和抗
体を認識するエピトープを含むペプチドが提供される。
体を認識するエピトープを含むペプチドが提供される。
【００３０】本発明者が見い出したＨＣＶに対する中和
抗体を認識するエピトープを含むペプチドは、X1aa-X2a
a-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式で表され、該アミノ酸配
列はＨＶＲ部分（X1aa-X2aa-Gln-X3aa）及びこれに隣接
する比較的保存されたアミノ酸配列（ILe-Gln-Leu）を
含み、ＨＣＶに対する中和抗体と結合することを特徴と
するペプチドである。本発明により、従来、ＨＣＶは変
異の多いＲＮＡウイルスであるために困難とされていた
Ｃ型肝炎のワクチンを提供することが可能となった。ま
た、上記式で表されるアミノ酸配列を持つペプチドとの
反応性を指標に、中和活性を有する抗体を作製すること
が可能となった。以下に実施例を挙げて本発明をさらに
具体的に説明する。
抗体を認識するエピトープを含むペプチドは、X1aa-X2a
a-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式で表され、該アミノ酸配
列はＨＶＲ部分（X1aa-X2aa-Gln-X3aa）及びこれに隣接
する比較的保存されたアミノ酸配列（ILe-Gln-Leu）を
含み、ＨＣＶに対する中和抗体と結合することを特徴と
するペプチドである。本発明により、従来、ＨＣＶは変
異の多いＲＮＡウイルスであるために困難とされていた
Ｃ型肝炎のワクチンを提供することが可能となった。ま
た、上記式で表されるアミノ酸配列を持つペプチドとの
反応性を指標に、中和活性を有する抗体を作製すること
が可能となった。以下に実施例を挙げて本発明をさらに
具体的に説明する。
【００３１】
【実施例】実施例１：３８４−４１４ペプチドの合成 ＪＮｏ．６由来のＨＣＶのＥ２に含まれる領域（３８４
−４１４位領域）で、配列表の配列番号：１で示される
ペプチドを化学合成した（ペプチドＩと称する）。この
ペプチドの化学合成は、パーキンエルマージャパン・ア
プライドバイオシステムズ社製４３０Ａペプチドシンセ
サイザーを使用し、同装置のプロトコールに従って、Ｆ
ａｓｔＭｏｃＴＭ固相合成法にて実施した。すなわち、
合成に際しては，Ｆｍｏｃ法ペプチド合成用レジン（パ
ーキンエルマージャパン・アプライドバイオシステムズ
社製）を用い、ペプチドのＮ末端に向かって順次アミノ
酸を結合させた。結合反応において、アミノ酸として、
パーキンエルマージャパン・アプライドバイオシステム
ズ社製のＦｍｏｃ保護アミノ酸をそれぞれ１ｍｍｏｌ用
いた。得られたペプチドの脱保護とレジンからの切り出
しはパーキンソンエルマージャパン・アプライドバイオ
システムズ社のプロトコール［Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｔｏ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」
に記載された方法に従って実施した。次に、レジンから
切り出された粗結晶から蒸留水でペプチドを抽出し、凍
結乾燥した後、再度、水に溶解した。これを０．１％ト
リフルオロ酢酸溶液で平衡化したＢｒｏｗｎｌｅｅ逆相
カラム（パーキンエルマージャパン・アプライドバイド
バイオシステムズ社製、直径１０ｍｍ、長さ２５０ｍ
ｍ）にかけた。目的のペプチドは、０．１％トリフルオ
ロ酢酸溶液と０．０９％トリフルオロ酢酸を含む７０％
アセトニトリル溶液の濃度勾配溶出を行うことにより分
取し、凍結乾燥した。
−４１４位領域）で、配列表の配列番号：１で示される
ペプチドを化学合成した（ペプチドＩと称する）。この
ペプチドの化学合成は、パーキンエルマージャパン・ア
プライドバイオシステムズ社製４３０Ａペプチドシンセ
サイザーを使用し、同装置のプロトコールに従って、Ｆ
ａｓｔＭｏｃＴＭ固相合成法にて実施した。すなわち、
合成に際しては，Ｆｍｏｃ法ペプチド合成用レジン（パ
ーキンエルマージャパン・アプライドバイオシステムズ
社製）を用い、ペプチドのＮ末端に向かって順次アミノ
酸を結合させた。結合反応において、アミノ酸として、
パーキンエルマージャパン・アプライドバイオシステム
ズ社製のＦｍｏｃ保護アミノ酸をそれぞれ１ｍｍｏｌ用
いた。得られたペプチドの脱保護とレジンからの切り出
しはパーキンソンエルマージャパン・アプライドバイオ
システムズ社のプロトコール［Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏ
ｎ ｔｏ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」
に記載された方法に従って実施した。次に、レジンから
切り出された粗結晶から蒸留水でペプチドを抽出し、凍
結乾燥した後、再度、水に溶解した。これを０．１％ト
リフルオロ酢酸溶液で平衡化したＢｒｏｗｎｌｅｅ逆相
カラム（パーキンエルマージャパン・アプライドバイド
バイオシステムズ社製、直径１０ｍｍ、長さ２５０ｍ
ｍ）にかけた。目的のペプチドは、０．１％トリフルオ
ロ酢酸溶液と０．０９％トリフルオロ酢酸を含む７０％
アセトニトリル溶液の濃度勾配溶出を行うことにより分
取し、凍結乾燥した。
【００３２】実施例２：チンパンジーの免疫 １．６ｍｇの粉末ペプチドＩをＩｎｊｅｃｔ Ａｃｔｉ
ｖａｔｅｄ Ｓｕｐｅｒ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅ
ｍ（ＰＩＥＲＣＥ社製）に添付されたＥＤＳＣｏｎｊｕ
ｇａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ１ｍｌに溶解し、これに同
量の活性化されたＫＬＨ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を加え、
室温で５時間混和し、続いて、０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ
７．４）に透析したものをＫＬＨコンジュゲートとし
た。この１ｍｌを同量のＦＣＡ（ＤＩＦＣＯ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ製）もしくはＩＦＣＡ（ＤＩＦＣＯ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）と混合し調製した乳剤及
び上記のＫＬＨコンジュゲートを免疫材料とした。免疫
は図１に示す投与スケジュールに従って実施した。すな
わち、合成ペプチド８００μｇに相当する量を１回の投
与量とし、ＦＣＡで調製した乳剤は初回（０週）と４週
目・７２週目に、ＦＩＣＡで調製した乳剤は８週目と１
２週目・２０週目・２１週目・７３週目に、ＫＬＨコン
ジュゲートは２８週目と３０週目・３４週目・４５週目
・４６週目・７７週目・７８週目に、それぞれチンパン
ジーの背部皮下に５から６ヶ所に分けて接種した。
ｖａｔｅｄ Ｓｕｐｅｒ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅ
ｍ（ＰＩＥＲＣＥ社製）に添付されたＥＤＳＣｏｎｊｕ
ｇａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ１ｍｌに溶解し、これに同
量の活性化されたＫＬＨ（ＰＩＥＲＣＥ社製）を加え、
室温で５時間混和し、続いて、０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ
７．４）に透析したものをＫＬＨコンジュゲートとし
た。この１ｍｌを同量のＦＣＡ（ＤＩＦＣＯ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｉｅｓ製）もしくはＩＦＣＡ（ＤＩＦＣＯ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ製）と混合し調製した乳剤及
び上記のＫＬＨコンジュゲートを免疫材料とした。免疫
は図１に示す投与スケジュールに従って実施した。すな
わち、合成ペプチド８００μｇに相当する量を１回の投
与量とし、ＦＣＡで調製した乳剤は初回（０週）と４週
目・７２週目に、ＦＩＣＡで調製した乳剤は８週目と１
２週目・２０週目・２１週目・７３週目に、ＫＬＨコン
ジュゲートは２８週目と３０週目・３４週目・４５週目
・４６週目・７７週目・７８週目に、それぞれチンパン
ジーの背部皮下に５から６ヶ所に分けて接種した。
【００３３】実施例３：ペプチドＩで免疫したチンパン
ジーの感染防御能 最終免疫後４日目のチンパンジー血清中のペプチドＩに
対する抗体をＥＬＩＳＡ法で測定した。蒸留水に溶解
後、更にコーティングＢｕｆｆｅｒ（０．１６％炭酸ナ
トリウム−０．３％炭酸水素ナトリウム水溶液）で希釈
し１μｇ／ｍｌに調製したペプチドＩ液を、ＥＬＩＳＡ
用マイクロプレート（Ｍａｘｉ Ｓｏｒｐ：Ｎｕｎｃ社
製）の各ウエルに１００μｌずつ分注し、３７℃１時間
静置後、さらに４℃に一晩放置した。プレートを洗浄用
Ｂｕｆｆｅｒ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１Ｍ
ＰＢＳ，ｐＨ７．４）で洗浄した後、希釈用Ｂｕｆｆｅ
ｒ（１０％スキムミルク、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、
０．０１ＭＰＢＳ，ｐＨ７．４）で５０００倍に希釈し
た被検血清（最終免疫４日目に採血した血清）１００μ
ｌをウエルに入れ、３７℃で１時間反応させた。洗浄Ｂ
ｕｆｆｅｒで洗浄後、希釈用Ｂｕｆｆｅｒで２万倍に希
釈したＨｏｒｓｅ Ｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓ
ｅ（ＨＲＰと称する）標識Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎＩｇＧ
（ｒ−ｃｈａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ：Ｃａｐｐｅｌｅ
社）１００μｌをウエルに入れ、３７℃で１時間反応さ
せた。洗浄Ｂｕｆｆｅｒで洗浄後、ＴＭＢＺ系の発色剤
１００μｌを入れ、暗所で２０分間発色させた。２Ｎの
Ｈ2ＳＯ4を５０μｌ加えて反応を停止して吸光度計（Ｏ
Ｄ450）で測定し１．０以上のＯＤ値を得た。
ジーの感染防御能 最終免疫後４日目のチンパンジー血清中のペプチドＩに
対する抗体をＥＬＩＳＡ法で測定した。蒸留水に溶解
後、更にコーティングＢｕｆｆｅｒ（０．１６％炭酸ナ
トリウム−０．３％炭酸水素ナトリウム水溶液）で希釈
し１μｇ／ｍｌに調製したペプチドＩ液を、ＥＬＩＳＡ
用マイクロプレート（Ｍａｘｉ Ｓｏｒｐ：Ｎｕｎｃ社
製）の各ウエルに１００μｌずつ分注し、３７℃１時間
静置後、さらに４℃に一晩放置した。プレートを洗浄用
Ｂｕｆｆｅｒ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、０．０１Ｍ
ＰＢＳ，ｐＨ７．４）で洗浄した後、希釈用Ｂｕｆｆｅ
ｒ（１０％スキムミルク、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０、
０．０１ＭＰＢＳ，ｐＨ７．４）で５０００倍に希釈し
た被検血清（最終免疫４日目に採血した血清）１００μ
ｌをウエルに入れ、３７℃で１時間反応させた。洗浄Ｂ
ｕｆｆｅｒで洗浄後、希釈用Ｂｕｆｆｅｒで２万倍に希
釈したＨｏｒｓｅ Ｒａｄｉｓｈ Ｐｅｒｏｘｉｄａｓ
ｅ（ＨＲＰと称する）標識Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎＩｇＧ
（ｒ−ｃｈａｉｎ ｓｐｅｃｉｆｉｃ：Ｃａｐｐｅｌｅ
社）１００μｌをウエルに入れ、３７℃で１時間反応さ
せた。洗浄Ｂｕｆｆｅｒで洗浄後、ＴＭＢＺ系の発色剤
１００μｌを入れ、暗所で２０分間発色させた。２Ｎの
Ｈ2ＳＯ4を５０μｌ加えて反応を停止して吸光度計（Ｏ
Ｄ450）で測定し１．０以上のＯＤ値を得た。
【００３４】正常なチンパンジー血清で調製したチンパ
ンジー感染価（ＣＩＤ50）１０ＣＩＤ50のＨＣＶを含む
ＪＮｏ．６の１ｍｌを、最終免疫後の７日目（初回免疫
から７９週目）にチンパンジーの静脈内に接種した。Ｈ
ＣＶ接種後、３日毎もしくは４日毎（週２回）に採血
し、血清分離したチンパンジー血清中のＨＣＶＲＮＡを
検出した。チンパンジー血清３００μｌから、アンプリ
テックＨＣＶアンプリコア専用核酸抽出キットを用い
て、ＲＮＡを抽出し、逆転写反応及びＰＣＲにより、ｃ
ＤＮＡの合成と増幅を行った。次いで、ＨＣＶＲＮＡ検
出用キットアンプリコアＨＣＶを用いて、ＨＣＶｃＤＮ
Ａをプローブとするハイブリダイゼーションにより、Ｈ
ＣＶＲＮＡを測定した。その結果、ＨＣＶによる攻撃試
験後１０週を経過しても、その間に採血した全てのチン
パンジー血清において、ＨＣＶＲＮＡは検出されなかっ
た（図２）。
ンジー感染価（ＣＩＤ50）１０ＣＩＤ50のＨＣＶを含む
ＪＮｏ．６の１ｍｌを、最終免疫後の７日目（初回免疫
から７９週目）にチンパンジーの静脈内に接種した。Ｈ
ＣＶ接種後、３日毎もしくは４日毎（週２回）に採血
し、血清分離したチンパンジー血清中のＨＣＶＲＮＡを
検出した。チンパンジー血清３００μｌから、アンプリ
テックＨＣＶアンプリコア専用核酸抽出キットを用い
て、ＲＮＡを抽出し、逆転写反応及びＰＣＲにより、ｃ
ＤＮＡの合成と増幅を行った。次いで、ＨＣＶＲＮＡ検
出用キットアンプリコアＨＣＶを用いて、ＨＣＶｃＤＮ
Ａをプローブとするハイブリダイゼーションにより、Ｈ
ＣＶＲＮＡを測定した。その結果、ＨＣＶによる攻撃試
験後１０週を経過しても、その間に採血した全てのチン
パンジー血清において、ＨＣＶＲＮＡは検出されなかっ
た（図２）。
【００３５】実施例４：チンパンジー血清中の中和抗体
の検出 初回免疫後７９週目（攻撃時直前）に採血した血清１ｍ
ｌを５６℃で３０分間加熱した後、これに攻撃試験に用
いた１０ＣＩＤ50のＨＣＶを含むＪＮｏ．６１ｍｌを試
験管内で混和し４℃に一晩放置した。その全量を別のチ
ンパンジーに接種した。接種後は、攻撃試験と同様に採
血し血清分離を行い、前述と同様のＤＮＡプローブ法に
従いＨＣＶＲＮＡの検出を行った。その結果、接種後８
週目まで採血した全てのチンパンジー血清において、Ｈ
ＣＶＲＮＡは検出されなかった。次に対照として、非免
疫チンパンジー血清で同様に処理したＪＮｏ．６を、先
に感染を否定できた同一チンパンジーに引き続き接種し
た。その結果、接種後２週目以後のチンパンジー血清か
らＨＣＶＲＮＡが検出され、ＨＣＶ感染が成立した。こ
の結果は、ペプチドＩで免疫したチンパンジー血清中に
はＨＣＶの感染を中和することのできる抗体が存在する
ことを示す（図３）。
の検出 初回免疫後７９週目（攻撃時直前）に採血した血清１ｍ
ｌを５６℃で３０分間加熱した後、これに攻撃試験に用
いた１０ＣＩＤ50のＨＣＶを含むＪＮｏ．６１ｍｌを試
験管内で混和し４℃に一晩放置した。その全量を別のチ
ンパンジーに接種した。接種後は、攻撃試験と同様に採
血し血清分離を行い、前述と同様のＤＮＡプローブ法に
従いＨＣＶＲＮＡの検出を行った。その結果、接種後８
週目まで採血した全てのチンパンジー血清において、Ｈ
ＣＶＲＮＡは検出されなかった。次に対照として、非免
疫チンパンジー血清で同様に処理したＪＮｏ．６を、先
に感染を否定できた同一チンパンジーに引き続き接種し
た。その結果、接種後２週目以後のチンパンジー血清か
らＨＣＶＲＮＡが検出され、ＨＣＶ感染が成立した。こ
の結果は、ペプチドＩで免疫したチンパンジー血清中に
はＨＣＶの感染を中和することのできる抗体が存在する
ことを示す（図３）。
【００３６】実施例５：中和抗体が認識するエピトープ
の検索 免疫に用いたペプチドＩのアミノ酸配列の一部からなる
配列表の配列番号：２〜４に記載の３種のペプチドを実
施例１に記載した方法により合成した。コーテングＢｕ
ｆｆｅｒで調製した１μｇ／ｍｌの上記３種のペプチド
液及びペプチドＩ液を、それぞれＥＬＩＳＡ用マイクロ
プレートの各ウエルに１００μｌずつ分注し、３７℃１
時間放置後、さらに４℃に一夜放置した。初回免疫後７
９週目血清を希釈用Ｂｕｆｆｅｒで１００倍に希釈し、
この１００μｌを用い、前述の方法に従い、ＥＬＩＳＡ
を行った。その結果、配列番号：４に記載のペプチドを
固相化したウェルに強い発色がみられた。また、この
時、配列番号：２のペプチドにも低いながら発色が認め
られた（図５）。
の検索 免疫に用いたペプチドＩのアミノ酸配列の一部からなる
配列表の配列番号：２〜４に記載の３種のペプチドを実
施例１に記載した方法により合成した。コーテングＢｕ
ｆｆｅｒで調製した１μｇ／ｍｌの上記３種のペプチド
液及びペプチドＩ液を、それぞれＥＬＩＳＡ用マイクロ
プレートの各ウエルに１００μｌずつ分注し、３７℃１
時間放置後、さらに４℃に一夜放置した。初回免疫後７
９週目血清を希釈用Ｂｕｆｆｅｒで１００倍に希釈し、
この１００μｌを用い、前述の方法に従い、ＥＬＩＳＡ
を行った。その結果、配列番号：４に記載のペプチドを
固相化したウェルに強い発色がみられた。また、この
時、配列番号：２のペプチドにも低いながら発色が認め
られた（図５）。
【００３７】次に吸収試験を以下のように実施した。希
釈用Ｂｕｆｆｅｒで５０倍に希釈した初回免疫後７９週
目血清と希釈用Ｂｕｆｆｅｒで８０μｇ／ｍｌに希釈し
た各ペプチドとを等量混和して、３７℃で１時間放置し
た。この混合液を、配列番号：４に記載のペプチドを１
μｇ／ｍｌで固相したＥＬＩＳＡ用マイクロプレートの
ウエルに１００μｌずつ入れ、前記と同様の方法でＥＬ
ＩＳＡを行った。対照として、未処理の血清を置いた。
その結果、未処理の血清に比べ、吸収処理したペプチド
Ｉ及び配列番号：４に記載のペプチドでは発色の低下が
みられるが、配列番号：２のペプチドでは未処理の血清
と同等の発色を示すことから、配列番号：２のペプチド
と初回免疫後７９週目血清との反応は非特異的な反応で
あることがわかった。この結果は、チンパンジー血清中
の中和抗体が認識するエピトープは、配列番号：４のペ
プチドのアミノ酸配列部分に存在することを示す（図
６）。
釈用Ｂｕｆｆｅｒで５０倍に希釈した初回免疫後７９週
目血清と希釈用Ｂｕｆｆｅｒで８０μｇ／ｍｌに希釈し
た各ペプチドとを等量混和して、３７℃で１時間放置し
た。この混合液を、配列番号：４に記載のペプチドを１
μｇ／ｍｌで固相したＥＬＩＳＡ用マイクロプレートの
ウエルに１００μｌずつ入れ、前記と同様の方法でＥＬ
ＩＳＡを行った。対照として、未処理の血清を置いた。
その結果、未処理の血清に比べ、吸収処理したペプチド
Ｉ及び配列番号：４に記載のペプチドでは発色の低下が
みられるが、配列番号：２のペプチドでは未処理の血清
と同等の発色を示すことから、配列番号：２のペプチド
と初回免疫後７９週目血清との反応は非特異的な反応で
あることがわかった。この結果は、チンパンジー血清中
の中和抗体が認識するエピトープは、配列番号：４のペ
プチドのアミノ酸配列部分に存在することを示す（図
６）。
【００３８】次に、更に詳細な中和エピトープ部分を検
索するために、ＪＮｏ．６由来Ｅ２タンパク質の３９９
位から４１７位までのアミノ酸配列をもとに、長さが１
０アミノ酸のペプチドをＮ末端から１アミノ酸づつずら
した、配列表の配列番号：５〜１４に記載のペプチドを
合成した。上記ペプチドは、MULTI PIN PEPUTIDE NCP K
IT（CHIRON MIMOTOPES社）を用い、キットに添付のEPIT
OPE SCANNING KIT MANUALに従って合成した。すなわ
ち、ピンをプレートにセットし、カップリング，脱保護
と洗浄を繰り返しながら、配列のＮ末端に向かって、任
意のアミノ酸を１個づつ結合させた。カップリングにお
いては合成用プレートの各アミノ酸を入れ、これにピン
の先端を浸し、２５℃で一昼夜、静置した。最後のカッ
プリングの終了後、Ｎ末のアセチル化後さらには側鎖の
脱保護を行った。
索するために、ＪＮｏ．６由来Ｅ２タンパク質の３９９
位から４１７位までのアミノ酸配列をもとに、長さが１
０アミノ酸のペプチドをＮ末端から１アミノ酸づつずら
した、配列表の配列番号：５〜１４に記載のペプチドを
合成した。上記ペプチドは、MULTI PIN PEPUTIDE NCP K
IT（CHIRON MIMOTOPES社）を用い、キットに添付のEPIT
OPE SCANNING KIT MANUALに従って合成した。すなわ
ち、ピンをプレートにセットし、カップリング，脱保護
と洗浄を繰り返しながら、配列のＮ末端に向かって、任
意のアミノ酸を１個づつ結合させた。カップリングにお
いては合成用プレートの各アミノ酸を入れ、これにピン
の先端を浸し、２５℃で一昼夜、静置した。最後のカッ
プリングの終了後、Ｎ末のアセチル化後さらには側鎖の
脱保護を行った。
【００３９】エピトープの検索は以下の反応に従った。
Pre-coat bufferで100倍に希釈したチンパンジー血清
（１７５ｕｌ／ｗｅｌｌ）をＥＬＩＳＡ用マイクロプレ
ートに入れ、これに、あらかじめ Pre-coat buffer（２
％ＢＳＡ，０．１％Ｔｗｅｅｎ２０，０．１％Ａｚａｉ
ｄ，０．０１ＭＰＢＳ，ｐＨ７．２）に浸しておいたピ
ンの先端を漬け、４℃で一昼夜静置した。洗浄buffer
（０．０１ＭＰＢＳ，ｐＨ７．２）で洗浄後、Pre-coat
buffer（Ａｚａｉｄ未添加）で ２万倍に希釈したＨＲ
Ｐ標識Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎＩｇＧ２００ｕｌをマイク
ロプレートに入れ、ピンの先端を漬け、室温で１時間静
置した。洗浄bufferで洗浄後、ＴＭＢＺ発色液を１５０
ｕｌ分注したマイクロプレートに移し、暗室で３分間発
色させた。１ＮＨ2ＳＯ4を５０ｕｌ加えて反応を停止し
て吸光度計（ＯＤ450）で測定した。その結果、配列番
号：１０、１１、１２及び１３の４種のペプチドが高い
反応性を示し（図７）、この４種のペプチドに共通のア
ミノ酸配列ＡＳＱＫＩＱＬがチンパンジー血清との反応
性に不可欠であることが推定された。さらに、４０１位
から４１６位までの配列をもとに、６から９アミノ酸の
それぞれの長さのペプチドをＮ末端から１アミノ酸づつ
ずらした配列表の配列番号：１５〜５１のペプチドをMU
LTI PIN PEPUTIDE NCP KITを用いて合成し、該ペプチド
とチンパンジー血清との反応性を前記と同様の方法で調
べた。その結果、配列番号の１９、２０、２１、２８、
２９、及び３８のペプチドが高い反応性を示し、前記の
推定を支持する結果を得た（図８）。
Pre-coat bufferで100倍に希釈したチンパンジー血清
（１７５ｕｌ／ｗｅｌｌ）をＥＬＩＳＡ用マイクロプレ
ートに入れ、これに、あらかじめ Pre-coat buffer（２
％ＢＳＡ，０．１％Ｔｗｅｅｎ２０，０．１％Ａｚａｉ
ｄ，０．０１ＭＰＢＳ，ｐＨ７．２）に浸しておいたピ
ンの先端を漬け、４℃で一昼夜静置した。洗浄buffer
（０．０１ＭＰＢＳ，ｐＨ７．２）で洗浄後、Pre-coat
buffer（Ａｚａｉｄ未添加）で ２万倍に希釈したＨＲ
Ｐ標識Ａｎｔｉ−ｈｕｍａｎＩｇＧ２００ｕｌをマイク
ロプレートに入れ、ピンの先端を漬け、室温で１時間静
置した。洗浄bufferで洗浄後、ＴＭＢＺ発色液を１５０
ｕｌ分注したマイクロプレートに移し、暗室で３分間発
色させた。１ＮＨ2ＳＯ4を５０ｕｌ加えて反応を停止し
て吸光度計（ＯＤ450）で測定した。その結果、配列番
号：１０、１１、１２及び１３の４種のペプチドが高い
反応性を示し（図７）、この４種のペプチドに共通のア
ミノ酸配列ＡＳＱＫＩＱＬがチンパンジー血清との反応
性に不可欠であることが推定された。さらに、４０１位
から４１６位までの配列をもとに、６から９アミノ酸の
それぞれの長さのペプチドをＮ末端から１アミノ酸づつ
ずらした配列表の配列番号：１５〜５１のペプチドをMU
LTI PIN PEPUTIDE NCP KITを用いて合成し、該ペプチド
とチンパンジー血清との反応性を前記と同様の方法で調
べた。その結果、配列番号の１９、２０、２１、２８、
２９、及び３８のペプチドが高い反応性を示し、前記の
推定を支持する結果を得た（図８）。
【００４０】
【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：３１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の３８４−４１４のアミノ酸配列に相当する 配列 His Thr Arg Val Thr Gly Gly Val Gln Gly His Val Thr Ser Thr 1 5 10 15 Leu Thr Ser Leu Phe Arg Pro Gly Ala Ser Gln Lys Ile Gln Leu 20 25 30 Val
【００４１】配列番号：２ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の３８４−３９３のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４２】配列番号：３ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の３９４−４０３のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４３】配列番号：４ 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０４−４１４のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４４】配列番号：５ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の３９９−４０８のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４５】配列番号：６ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４００−４０９のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４６】配列番号：７ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０１−４１０のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４７】配列番号：８ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０２−４１１のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４８】配列番号：９ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０３−４１２のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００４９】配列番号：１０ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０４−４１３のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５０】配列番号：１１ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０５−４１４のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５１】配列番号：１２ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０６−４１５のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５２】配列番号：１３ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０７−４１６のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５３】配列番号：１４ 配列の長さ：１０ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０８−４１７のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５４】配列番号：１５ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０１−４０９のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５５】配列番号：１６ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０２−４１０のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５６】配列番号：１７ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０３−４１１のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５７】配列番号：１８ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０４−４１２のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５８】配列番号：１９ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０５−４１３のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００５９】配列番号：２０ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０６−４１４のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００６０】配列番号：２１ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０７−４１５のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００６１】配列番号：２２ 配列の長さ：９ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０８−４１６のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００６２】配列番号：２３ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０１−４０８のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００６３】配列番号：２４ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０２−４０９のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００６４】配列番号：２５ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０３−４１０のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００６５】配列番号：２６ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０４−４１３のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００６６】配列番号：２７ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０５−４１２のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００６７】配列番号：２８ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０６−４１３のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００６８】配列番号：２９ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０７−４１４のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００６９】配列番号：３０ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０８−４１５のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００７０】配列番号：３１ 配列の長さ：８ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０９−４１６のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００７１】配列番号：３２ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０１−４０７のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【００７２】配列番号：３３ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０２−４０８のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００７３】配列番号：３４ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０３−４０９のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００７４】配列番号：３５ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０４−４１０のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００７５】配列番号：３６ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０５−４１１のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００７６】配列番号：３７ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０６−４１２のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００７７】配列番号：３８ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０７−４１３のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００７８】配列番号：３９ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０８−４１４のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００７９】配列番号：４０ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０９−４１５のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８０】配列番号：４１ 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４１０−４１６のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８１】配列番号：４２ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０１−４０６のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８２】配列番号：４３ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０２−４０７のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８３】配列番号：４４ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０３−４０８のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８４】配列番号：４５ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０４−４０９のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８５】配列番号：４６ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０５−４１０のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８６】配列番号：４７ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０６−４１１のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８７】配列番号：４８ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０７−４１２のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８８】配列番号：４９ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０８−４１３のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００８９】配列番号：５０ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４０９−４１４のアミノ酸
配列に相当する 配列
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【００９０】配列番号：５１ 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 鎖の数：１本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 起源：ＨＣＶ 他の情報：ＪＮｏ．６由来の４１０−４１５のアミノ酸
配列に相当する 配列
配列に相当する 配列
【図１】ペプチドＩでチンパンジーを免疫する際のペプ
チドＩの投与スケジュールを示した図である。初回免疫
（０週）後７９週目にＪＮｏ．６中のＨＣＶによる攻撃
を行った。
チドＩの投与スケジュールを示した図である。初回免疫
（０週）後７９週目にＪＮｏ．６中のＨＣＶによる攻撃
を行った。
【図２】ＪＮｏ．６の接種前後に採血したチンパンジー
血清中のＨＣＶＲＮＡ及び肝機能検査値（ＡＬＴ）の推
移を示した図である。縦軸はＡＬＴを表し、横軸はウイ
ルス接種後の経過週を表す。記号（−）はＨＣＶＲＮＡ
が検出されなかったことを示す。
血清中のＨＣＶＲＮＡ及び肝機能検査値（ＡＬＴ）の推
移を示した図である。縦軸はＡＬＴを表し、横軸はウイ
ルス接種後の経過週を表す。記号（−）はＨＣＶＲＮＡ
が検出されなかったことを示す。
【図３】ペプチドＩ免疫チンパンジー血清で処理したＪ
Ｎｏ．６の接種後に採血したチンパンジー血清中のＨＣ
ＶＲＮＡ及びＡＬＴの推移を示した図である。縦軸はＡ
ＬＴを表し、横軸はウイルス接種後の経過週を表す。記
号（−）はＨＣＶＲＮＡが検出されなかったことを示
す。記号（＋）はＨＣＶＲＮＡが検出されたことを示
す。
Ｎｏ．６の接種後に採血したチンパンジー血清中のＨＣ
ＶＲＮＡ及びＡＬＴの推移を示した図である。縦軸はＡ
ＬＴを表し、横軸はウイルス接種後の経過週を表す。記
号（−）はＨＣＶＲＮＡが検出されなかったことを示
す。記号（＋）はＨＣＶＲＮＡが検出されたことを示
す。
【図４】ペプチドＩのアミノ酸配列及びペプチドＩ免疫
チンパンジー血清中の中和抗体に対するエピトープを検
出するために用いた合成ペプチドのアミノ酸配列を示す
図である。図中のアミノ酸配列上部の番号は、ＨＣＶ全
アミノ酸配列の順位を示す。アルファベットは通常の１
文字アミノ酸表記に従ったアミノ酸を示す。
チンパンジー血清中の中和抗体に対するエピトープを検
出するために用いた合成ペプチドのアミノ酸配列を示す
図である。図中のアミノ酸配列上部の番号は、ＨＣＶ全
アミノ酸配列の順位を示す。アルファベットは通常の１
文字アミノ酸表記に従ったアミノ酸を示す。
【図５】ペプチドＩで免疫したチンパンジー血清と合成
ペプチドとの反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結果を
示す図で、ペプチドＩ及び配列番号：４のペプチドが強
く反応し、配列番号：２のペプチドが弱く反応している
ことを示す。
ペプチドとの反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結果を
示す図で、ペプチドＩ及び配列番号：４のペプチドが強
く反応し、配列番号：２のペプチドが弱く反応している
ことを示す。
【図６】未処理及び各合成ペプチドで吸収処理した初回
免疫後７９週目のチンパンジー血清と配列番号：４のペ
プチドとの反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結果を示
す図で、該チンパンジー血清がペプチドＩ及び配列番
号：４のペプチドで吸収されたことを示す。
免疫後７９週目のチンパンジー血清と配列番号：４のペ
プチドとの反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結果を示
す図で、該チンパンジー血清がペプチドＩ及び配列番
号：４のペプチドで吸収されたことを示す。
【図７】配列表の配列番号：５〜１４までの１０アミノ
酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後７
９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結
果を示す図で、配列番号：１０、１１、１２、及び１３
の４種のペプチドが強く反応していることを示す。図中
のアミノ酸配列上部の番号は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の
順位を示す。
酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後７
９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結
果を示す図で、配列番号：１０、１１、１２、及び１３
の４種のペプチドが強く反応していることを示す。図中
のアミノ酸配列上部の番号は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の
順位を示す。
【図８】配列表の配列番号：１５〜２２までの９アミノ
酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後７
９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結
果を示す図で、配列番号の１９、２０、２１のペプチド
が強く反応していることを示す。図中のアミノ酸配列上
部の番号は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後７
９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結
果を示す図で、配列番号の１９、２０、２１のペプチド
が強く反応していることを示す。図中のアミノ酸配列上
部の番号は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
【図９】配列表の配列番号：２３〜３１までの８アミノ
酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後７
９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結
果を示す図で、配列番号の２８、２９のペプチドが強く
反応していることを示す。図中のアミノ酸配列上部の番
号は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後７
９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた結
果を示す図で、配列番号の２８、２９のペプチドが強く
反応していることを示す。図中のアミノ酸配列上部の番
号は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
【図１０】配列表の配列番号：３２〜４１までの７アミ
ノ酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後
７９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた
結果を示す図で、配列番号の３８のペプチドが強く反応
していることを示す。図中のアミノ酸配列上部の番号
は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
ノ酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後
７９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた
結果を示す図で、配列番号の３８のペプチドが強く反応
していることを示す。図中のアミノ酸配列上部の番号
は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
【図１１】配列表の配列番号：４２〜５１までの６アミ
ノ酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後
７９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた
結果を示す図で、６アミノ酸ペプチドとは、反応性が認
められないことを示す。図中のアミノ酸配列上部の番号
は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
ノ酸からなるペプチドとチンパンジー血清（初回免疫後
７９週目血清）との反応性をＥＬＩＳＡ法により調べた
結果を示す図で、６アミノ酸ペプチドとは、反応性が認
められないことを示す。図中のアミノ酸配列上部の番号
は、ＨＣＶ全アミノ酸配列の順位を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 16/42 Ｃ０７Ｋ 16/42 Ｇ０１Ｎ 33/576 Ｇ０１Ｎ 33/576 Ｚ // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 (72)発明者 水野 喬介 熊本県熊本市龍田町上立田1725−１ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA14 AA20 BA31 BA33 BA41 BA61 CA01 CA04 CA09 CA11 DA20 HA14 4B064 AG26 AG27 AG31 AG33 CA10 CA20 CA50 CC24 DA03 DA15 4C085 AA03 AA13 AA14 AA15 AA17 AA19 BA87 BA92 BB24 CC08 CC22 CC23 CC32 DD62 EE01 4H045 AA10 AA11 AA30 BA14 BA15 BA16 BA18 CA02 DA75 DA76 DA86 EA31 FA34 FA72 FA73 FA74
Claims (27)
- 【請求項１】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式
で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意の
アミノ酸とする）を含み、Ｃ型肝炎ウイルス（以下、Ｈ
ＣＶと称することがある）に対する中和抗体と結合し得
るペプチド。 - 【請求項２】 上記X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuな
る式で表されるアミノ酸配列が、X1aaはPro、Ala及びSe
rからなる群、X2aaはSer、Ala、Lys及びArgからなる
群、並びにX3aaはLys、Asn及びAspからなる群から選ば
れるアミノ酸を有する配列であることを特徴とする請求
項１に記載のペプチド。 - 【請求項３】 Ala-Ser-Gln-Lys-Ile-Gln-Leuなるアミ
ノ酸配列を含む請求項１に記載のペプチド。 - 【請求項４】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式
で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意の
アミノ酸とする）を含み、ＨＣＶに対する中和抗体と結
合し得るエピトープ。 - 【請求項５】 上記X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuな
る式で表されるアミノ酸配列が、X1aaはPro、Ala及びSe
rからなる群、X2aaはSer、Ala、Lys及びArgからなる
群、並びにX3aaはLys、Asn及びAspからなる群から選ば
れるアミノ酸を有する配列であることを特徴とする請求
項４に記載のエピトープ。 - 【請求項６】 Ala-Ser-Gln-Lys-Ile-Gln-Leuなるアミ
ノ酸配列を含む請求項４に記載のエピトープ。 - 【請求項７】 前記エピトープがＨＣＶのＥ２を含む領
域に由来することを特徴とする請求項４ないし６のいず
れかに記載のエピトープ。 - 【請求項８】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式
で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意の
アミノ酸とする）を含み、ＨＣＶに対する中和抗体と結
合し得るペプチドをコードする塩基配列を有するＤＮＡ
断片。 - 【請求項９】 上記X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuな
る式で表されるアミノ酸配列が、X1aaはPro、Ala及びSe
rからなる群、X2aaはSer、Ala、Lys及びArgからなる
群、並びにX3aaはLys、Asn及びAspからなる群から選ば
れるアミノ酸を有する配列であることを特徴とする請求
項８に記載のＤＮＡ断片。 - 【請求項１０】 Ala-Ser-Gln-Lys-Ile-Gln-Leuなるア
ミノ酸配列を含むペプチドをコードする請求項８に記載
のＤＮＡ断片。 - 【請求項１１】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド又は該アミノ酸配列
を含むエピトープを認識し、ＨＣＶに対する中和活性を
有することを特徴とする抗体。 - 【請求項１２】 前記抗体がモノクローナル抗体である
請求項１１に記載の抗体。 - 【請求項１３】 前記抗体がポリクローナル抗体である
請求項１１に記載の抗体。 - 【請求項１４】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド又は該アミノ酸配列
を含むエピトープを認識する抗体のイデオトープを認識
し、ＨＣＶに対する中和抗体と結合し得る抗イデオタイ
プ抗体。 - 【請求項１５】 前記抗イデオタイプ抗体がモノクロー
ナル抗体である請求項１４に記載の抗イデオタイプ抗
体。 - 【請求項１６】 前記抗イデオタイプ抗体がポリクロー
ナル抗体である請求項１４に記載の抗イデオタイプ抗
体。 - 【請求項１７】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド又は該アミノ酸配列
を含むエピトープを認識し、ＨＣＶに対する中和活性を
有する抗体を惹起し得る組成物からなることを特徴とす
るＣ型肝炎のワクチン。 - 【請求項１８】 前記組成物の主成分が、X1aa-X2aa-Gl
n-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列（X1
aa、X2aa及びX3aaは任意のアミノ酸とする）を含むペプ
チドであることを特徴とする請求項１７に記載のＣ型肝
炎のワクチン。 - 【請求項１９】 前記組成物の主成分が、X1aa-X2aa-Gl
n-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列（X1
aa、X2aa及びX3aaは任意のアミノ酸とする）を含むペプ
チドをコードする塩基配列を有するＤＮＡ断片であるこ
とを特徴とする請求項１７に記載のＣ型肝炎のワクチ
ン。 - 【請求項２０】 前記組成物の主成分が、X1aa-X2aa-Gl
n-X3aa-Ile-Gln-Leuなる式で表されるアミノ酸配列（X1
aa、X2aa及びX3aaは任意のアミノ酸とする）を含むペプ
チド又は該アミノ酸配列を含むエピトープを認識する抗
体のイデオトープを認識する抗イデオタイプ抗体である
ことを特徴とする請求項１７に記載のＣ型肝炎のワクチ
ン。 - 【請求項２１】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド又は該アミノ酸配列
を含むエピトープを認識し、ＨＣＶに対する中和活性を
有する抗体を主成分とするＣ型肝炎の治療剤。 - 【請求項２２】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド、該ペプチド若しく
は該アミノ酸配列を含むエピトープを認識する抗体又は
該抗体のイデオトープを認識する抗イデオタイプ抗体を
用いることを特徴とするＨＣＶの検出方法。 - 【請求項２３】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド、該ペプチド若しく
は該アミノ酸配列を含むエピトープを認識する抗体又は
該抗体のイデオトープを認識する抗イデオタイプ抗体を
用いることを特徴とする、ＨＣＶに対する抗体の検出方
法。 - 【請求項２４】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド又は該アミノ酸配列
を含むエピトープを認識し、ＨＣＶに対する中和活性を
有する抗体を惹起する方法。 - 【請求項２５】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチドを用いることを特徴
とする請求項２４に記載の方法。 - 【請求項２６】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチドをコードする塩基配
列を有するＤＮＡ断片を用いることを特徴とする請求項
２４に記載の方法。 - 【請求項２７】 X1aa-X2aa-Gln-X3aa-Ile-Gln-Leuなる
式で表されるアミノ酸配列（X1aa、X2aa及びX3aaは任意
のアミノ酸とする）を含むペプチド又は該アミノ酸配列
を含むエピトープを認識する抗体のイデオトープを認識
する抗イデオタイプ抗体を用いることを特徴とする請求
項２４に記載の方法。
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| JP29335996 | 1996-10-14 | ||
| JP06544897A JP2002171972A (ja) | 1996-10-14 | 1997-03-03 | 肝炎ウイルスエピトープ |
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