JP2001524523A

JP2001524523A - 出血性大腸菌感染治療剤の製造のためのビコザマイシンの使用

Info

Publication number: JP2001524523A
Application number: JP2000522917A
Authority: JP
Inventors: 佳巳松本; 晶子池本; 千壽森永; 修一俵; 好子横田
Original assignee: 藤沢薬品工業株式会社
Priority date: 1997-11-27
Filing date: 1998-11-20
Publication date: 2001-12-04
Also published as: AUPP059897A0; BR9815110A; WO1999027931A1; EP1051175A1; US6328989B1

Abstract

(57)【要約】ビコザマイシンを有効成分とするＶＴＥＣからのベロ毒素産生および／または放出抑制用医薬組成物、特に、ＶＴＥＣ感染の予防および治療用組成物、並びに動物からのＶＴＥＣ除菌用組成物。該組成物およびその用途を明示した文書を含む商業的パッケージ。ＶＴＥＣをビコザマイシンで処理することを含むＶＴＥＣからのベロ毒素産生および／または放出の抑制方法。特に、ビコザマイシンを投与することを含むＶＴＥＣ感染の予防および治療方法、並びにビコザマイシン類を投与することを含む動物からのＶＴＥＣの除菌方法。ＶＴＥＣからのベロ毒素産生および／または放出抑制剤の調製のためのビコザマイシンの使用、特に、ＶＴＥＣ感染の予防および治療剤の調製のためのビコザマイシンの使用、並びに動物からのＶＴＥＣ除菌剤の調製のためのビコザマイシンの使用。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】発明の分野本発明はビコザマイシンの新規用途に関する。詳細には、本発明は、ヒトのベ
ロ毒素産生大腸菌感染症の予防および治療、並びにベロ毒素産生大腸菌を保菌す
る家畜からの該大腸菌の除菌のためのビコザマイシンの使用に関する。

【０００２】発明の背景大腸菌Ｏ−１５７等の腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）感染症の報告例がここ数
年間増加している。ＥＨＥＣ感染は出血性大腸炎、溶血性尿毒症症候群（ＨＵＳ
）あるいは血栓性血小板減少性紫斑病（ＴＴＰ）のような生命を脅かす疾患を引
き起こすので、ＥＨＥＣ感染の予防および治療方法の確立が大いに要望されてい
る。ＥＨＥＣは赤痢菌により生産される志賀毒素と類似したベロ毒素を産生する
が、これが上記の重篤な疾患を引き起こす主原因であると考えられている。

【０００３】ベロ毒素産生大腸菌（ＶＴＥＣ）に強い抗菌力を有する抗菌薬は数多く知られ
ているが、それらのほとんどすべてはベロ毒素の産生を亢進したり、該毒素の菌
体外への放出を促進する。ベロ毒素の増加により、患者はしばしば重篤且つ致死
的な症状を起こすので、そのような抗菌薬は役に立たないばかりでなく有害であ
り、ＶＴＥＣ感染の最も好ましい治療方法は未だ確立されていない。一方、ＶＴＥＣはウシやブタなどの家畜の腸に定着しており、これらがヒトへ
のＶＴＥＣの感染源である場合が多い。したがって、ＶＴＥＣを保菌する家畜か
ら本菌を除菌することはヒトへのＶＴＥＣ感染を予防する上で極めて重要である
。

【０００４】発明の要約したがって、本発明の目的は、ＶＴＥＣに対する抗菌活性だけでなく、ベロ毒
素の産生および放出抑制作用を示す抗菌性化合物を提供することであり、該化合
物を用いたＶＴＥＣ感染症の予防および治療方法、並びに家畜からのＶＴＥＣの
除菌方法を提供することである。上記の目的を達成すべく検討を重ねた結果、本発明者らは、ビコザマイシンま
たはその誘導体（以下、一括してビコザマイシン類という場合もある）が、ＶＴ
ＥＣに対して抗菌的に有効な濃度でさえも、インビトロおよびインビボで高いベ
ロ毒素産生および放出抑制作用を有することを見出した。

【０００５】すなわち、本発明はビコザマイシン類を有効成分とするＶＴＥＣのベロ毒素産
生および／または放出抑制用組成物、特に、ＶＴＥＣ感染症の予防および治療剤
を提供する。さらに、本発明はＶＴＥＣに感染した動物におけるＶＴＥＣ除菌剤
を提供する。

【０００６】本発明はまた、ＶＴＥＣにベロ毒素の産生および放出を抑制するのに有効な量
のビコザマイシン類で該大腸菌を処理することを含むベロ毒素の産生および／ま
たは放出抑制方法を提供する。特に、本発明はＶＴＥＣ感染症の予防および治療
上有効な量のビコザマイシン類を投与することを含むＶＴＥＣ感染症の予防およ
び治療方法を提供する。さらに、本発明は、ＶＴＥＣを除菌するのに有効な量の
ビコザマイシン類を投与することを含むＶＴＥＣに感染した動物からのＶＴＥＣ
の除菌方法を提供する。

【０００７】本発明はまた、ベロ毒素の産生および／または放出抑制剤を調製するためのビ
コザマイシン類の使用を提供する。特に、本発明はＶＴＥＣ感染症の予防および
治療剤を調製するためのビコザマイシン類の使用を提供する。さらに、本発明は
ＶＴＥＣに感染した動物におけるＶＴＥＣ除菌剤の調製のためのビコザマイシン
類の使用を提供する。

【０００８】発明の詳細な説明ビコザマイシンは、土壌試料から分離されたストレプトマイセス・サッポロエ
ンシス（Streptomyces sapporoensis；ATCC No.21532）が生産する公知の抗生物
質であり、飼料添加物用に、また、動物の細菌性下痢症の治療に従来より使用さ
れている。ビコザマイシンは、例えば上記微生物を培養し、得られる培養濾液か
ら当該技術分野において周知慣用の方法を用いて単離精製することができる（TH
E MERCK INDEX, 第12版, 第1249頁 (1996)）。本発明において、ビコザマイシン
類とは、ビコザマイシンまたはその誘導体を包含するものである。誘導体として
は、ベロ毒素産生および放出の抑制並びにＶＴＥＣに対する抗菌活性を有する限
り特に制限はない。例えば、エステル類（例えば、安息香酸エステル、パルミチ
ン酸エステル等）などが挙げられるが、動物体内で代謝された後に上記活性を示
すプロドラッグ型の化合物もこの中に含まれる。

【０００９】ビコザマイシン類は、ＶＴＥＣに対する抗菌活性の他に、ベロ毒素の産生およ
び／または放出抑制活性を有するので、ヒトのＶＴＥＣ感染による下痢症の予防
および治療に有用であり、したがって、出血性大腸炎、ＨＵＳおよびＴＴＰを含
む、ベロ毒素に起因する合併症の予防に有用である。また、ビコザマイシン類は
、ヒトのＶＴＥＣ感染の主要感染源である家畜（例えば、ウシ、ブタ、ウマ、ヒ
ツジ、ヤギ、ニワトリ等）からのＶＴＥＣの除菌にも有用である。

【００１０】本発明においては、ビコザマイシンは、有効成分としてビコザマイシンを、経
口または非経口（静脈内、腹腔内、皮下および筋肉内注射を含む）投与に適した
医薬上許容され得る担体または賦形剤とともに含有する医薬製剤の形態で使用さ
れる。

【００１１】経口投与に好適な製剤には、水あるいは生理食塩水のような希釈液に有効量の
化合物を溶解させた液剤、各々、特定量の活性成分を固体や顆粒として含んでい
るカプセル剤、サッシェ剤あるいは錠剤、適当な液体での懸濁液剤および好適な
乳剤が含まれる。錠剤にはラクトース、マンニトール、トウモロコシデンプン、
バレイショデンプン、微晶性セルロース、アラビアゴム、ゼラチン、コロイド性
二酸化シリコン、クロスカルメロースナトリウム、タルク、ステアリン酸マグネ
シウム、ステアリン酸およびその他の賦形剤、着色剤、希釈液、緩衝剤、吸湿剤
、保存剤、芳香剤および医薬上適合し得る担体を１つあるいはそれ以上含めるこ
とができる。トローチ型は、有効成分を香味成分、通常はシュークロースおよび
アラビアゴムまたはトラガカントゴム中に含み得るし、また、香錠剤は有効成分
をゼラチンおよびグリセリン、またはシュークロースおよびアラビアゴムのよう
な不活性な基剤中に含み、乳化剤、ゲル剤などは有効成分に加えて、当技術分野
において知られているような賦形剤を含有する。

【００１２】静脈内あるいは腹腔内投与に好適な製剤としては、例えば水性および非水性の
等張な無菌注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤および予定され
たレシピエントの血液と製剤を等張にするための溶質が含まれていても良く、ま
た、水性および非水性の無菌懸濁液剤があり、これには懸濁剤、可溶化剤、肥厚
剤、安定化剤および保存剤が含まれていてもよい。製剤はアンプルやバイアルの
ように単位投与量あるいは複数回投与量で容器に封入され、フリーズドライ（凍
結乾燥）され、注射するためには使用直前に例えば水のような注射用の無菌液状
担体を添加するだけでよい状態で保存され得る。前述の種類の無菌粉末、顆粒お
よび錠剤の即席の注射液剤や懸濁液剤が調製され得る。

【００１３】ビコザマイシン類の投与量は、レシピエントの動物種、年齢および／または体
重、投与経路等に応じて変更することができるが、レシピエントがヒト下痢症患
者の場合は、ビコザマイシン類の好ましい投与量は、成人１日あたり１〜１００
ｍｇ／ｋｇの範囲から選択することができ、症状に応じて１回または数回投与す
ることができる。以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明の範囲がこれ
らに限定されないことはいうまでもない。

【００１４】実施例１（１）大腸菌Ｏ−１５７：Ｈ７に対するビコザマイシンの抗菌活性大腸菌Ｏ−１５７：Ｈ７株に対するビコザマイシンおよびアモキシリンの最小
阻害濃度（ＭＩＣ）を慣用の寒天希釈法を用いて測定した。１００倍希釈した一
夜培養液を、系列希釈した試験化合物を含むMueller-Hinton寒天（Difco）平板培地上に接種した。好気または嫌気条件下で３５℃、１８時間培養後に菌の増殖
が目視できない最小の濃度をＭＩＣとした。その結果を表１に示す。

【００１５】

【表１】

【００１６】（２）大腸菌Ｏ−１５７：Ｈ７からのベロ毒素（ＶＴ１およびＶＴ２）の産生お
よび放出に及ぼすビコザマイシンの効果大腸菌Ｏ−１５７：Ｈ７株の一夜培養液を遠心して上清を除去した。得られた
ペレットをＣＡＹＥ（カザミノ酸−酵母エキス）肉汁培地で１回リンスした後、
ＣＡＹＥ肉汁培地中に１０⁷〜１０⁸ｃｆｕ／ｍｌとなるように再懸濁して好気条
件下１時間前培養した。ビコザマイシン（１０，２５または１００μｇ／ｍｌ）
またはアモキシリン（１０μｇ／ｍｌ）で３５℃、３時間処理した後、各培養物
を遠心して上清を放出毒素溶液として使用した。得られたペレットは、等容の５
，０００単位のポリミキシンＢを含む生理食塩水に再懸濁して、３５℃で３０分
間インキュベートした。１２，０００ｒｐｍで５分間遠心して上清を回収し、菌
体内毒素溶液として使用した。両方の試料溶液中のＶＴ１およびＶＴ２量を、VT
EC-RPLA検出キット（Seiken）を用いた逆受身ラテックス凝集反応法により測定した。その結果を表２に示す。

【００１７】

【表２】

【００１８】ＭＩＣを超える濃度のアモキシリンで処理した大腸菌では、ベロ毒素の産生お
よび放出のどちらも未処理の大腸菌に比べて著しく増加した。大腸菌をＭＩＣを
超える濃度のビコザマイシンで処理すると、ベロ毒素の産生および放出の増加は
劇的に抑制された。

【００１９】実施例２大腸菌Ｏ−１５７に感染したマウスにおけるビコザマイシンの治療効
果大腸菌を接種する４日前から、ＤＢＡ／２マウス（雄性，４週齢）にストレプ
トマイシン（ＳＭ；５ｇ／Ｌ）を含む水を３日間与えた。次いで、該マウスを１
日間絶食・絶水させた。前培養した大腸菌ＦＰ１９６２を、５ｇ／ＬのＳＭを含
有するトリプチケース−醤油肉汁培地中に接種し、３５℃で４〜５日間振とう培
養して菌体を回収した。該菌体を２０％シュークロース溶液中に濁度２．０（４
．４×１０⁹ｃｆｕ／ｍｌ）となるように懸濁し、該菌体懸濁液（０．５ｍｌ／マウス）を該マウスに経口的に接種した。これらのマウスを４群（ＢＣＭ群，Ｆ
ＯＭ群，ＣＡＭ群およびＮＦＬＸ群；各群６匹）に分け、各群にそれぞれビコザ
マイシン（３２ｍｇ／ｋｇ／回）、フォスフォマイシン（３２ｍｇ／ｋｇ／回）
、クラスロマイシン（３２ｍｇ／ｋｇ／回）、あるいはノルフロキサシン（１０
ｍｇ／ｋｇ／回）を、１日２回、４日間（計８回）経口投与した。６日後、０．
０５μｇ／ｍｌセフェキシムおよび２．５μｇ／ｍｌ亜テルル酸カリウムを含有
するMacConkey−ソルビトール寒天（NISSUI）上で３５℃、１８時間インキュベートした後に目視可能な各マウスの盲腸内にある菌体数を計測した。各マウスの
盲腸をホモジナイズし、１２，０００ｒｐｍで５分間遠心した。上清中のＶＴ１
およびＶＴ２を、実施例１の（２）と同様にして、VTEC-RPLA（Seiken）を用いて定量した。その結果を表３に示す。

【００２０】

【表３】

【００２１】ビコザマイシンはＶＴＥＣに対する抗菌活性を示すだけでなく、該大腸菌から
のベロ毒素の産生および放出を抑制した。対照的に、他の３つの抗生物質はベロ
毒素の産生抑制効果がないばかりか、その産生を増進しさえした。ＮＦＬＸは大
腸菌に対して強い抗菌活性を有するという事実にもかかわらず、ＮＦＬＸを投与
した試験マウス６匹のうち５匹が増加したベロ毒素のために死亡した。

【００２２】本出願はオーストラリア国で出願された出願第ＰＰ０５９８／９７号を基礎と
しており、その内容はここで言及することにより本明細書中に組み込まれるもの
である。本明細書において引用したすべての文献は、引用によりその内容のすべ
てが本明細書中に組み込まれるものである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者横田好子大阪府茨木市若園町25−８Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 CB22 MA01 MA04 NA14 ZA66 ZB35

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ビコザマイシンまたはその誘導体を有効成分とする、ベロ毒
素産生大腸菌からのベロ毒素産生および／または放出抑制用組成物。
【請求項２】ビコザマイシンまたはその誘導体を有効成分とする、ベロ毒
素産生大腸菌感染の予防および治療用組成物。
【請求項３】ビコザマイシンまたはその誘導体を有効成分とする、動物か
らのベロ毒素産生大腸菌の除菌用組成物。
【請求項４】ベロ毒素産生大腸菌を、有効量のビコザマイシンまたはその
誘導体で処理することを含む、該大腸菌からのベロ毒素産生および／または放出
抑制方法。
【請求項５】予防および治療上有効な量のビコザマイシンまたはその誘導
体を投与することを含む、ベロ毒素産生大腸菌感染の予防および治療方法。
【請求項６】有効量のビコザマイシンまたはその誘導体を投与することを
含む、動物からのベロ毒素産生大腸菌の除菌方法。
【請求項７】ベロ毒素産生大腸菌からのベロ毒素産生および／または放出
抑制剤の調製のための、ビコザマイシンまたはその誘導体の使用。
【請求項８】ベロ毒素産生大腸菌感染の予防および治療剤の調製のための
、ビコザマイシンまたはその誘導体の使用。
【請求項９】動物からのベロ毒素産生大腸菌除菌剤の調製のための、ビコ
ザマイシンまたはその誘導体の使用。
【請求項１０】請求項１の組成物および該組成物がベロ毒素産生大腸菌か
らのベロ毒素産生および／または放出抑制、ベロ毒素産生大腸菌感染の予防およ
び治療、あるいは動物からのベロ毒素産生大腸菌の除菌に使用すべきであるか、
使用することができることを明示した添付文書を含む商業的パッケージ。