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JP2001514013A - Ｌｔｃ４シンターゼ多型の分析方法および診断への利用 - Google Patents

Ｌｔｃ４シンターゼ多型の分析方法および診断への利用

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JP2001514013A
JP2001514013A JP2000507836A JP2000507836A JP2001514013A JP 2001514013 A JP2001514013 A JP 2001514013A JP 2000507836 A JP2000507836 A JP 2000507836A JP 2000507836 A JP2000507836 A JP 2000507836A JP 2001514013 A JP2001514013 A JP 2001514013A
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synthase
seq
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ゼネカ・リミテッド
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract

(57)【要約】 本発明は、ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子、ＥＭＢＬ寄託番号Ｕ５０１３６、特に位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２のうち１以上における単一ヌクレオチド多型に関する。本発明はまた、ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の対立遺伝子変異を分析するための材料および方法、ならびにロイコトリエン仲介疾患、たとえば喘息およびアレルギー性鼻炎の診断および処置におけるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 本発明は、ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の多型性に関する。本発明はまた、ＬＴ Ｃ4シンターゼ遺伝子の対立遺伝子変異を分析するための材料および方法、なら びにロイコトリエン仲介疾患、たとえば喘息およびアレルギー性鼻炎の診断およ
び処置におけるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の使用に関する。
【０００２】 システイニル−ロイコトリエン類、ＬＴＣ4、ＬＴＤ4およびＬＴＥ4は有効な 気管支収縮物質であり、脈管透過性を高め、気道の粘液産生を増加させる。それ
らは喘息やアレルギー性鼻炎の病態生理に関与することが示唆されており、喘息
患者から気管支肺胞洗浄液中に高い濃度で見出される（特に抗原攻撃後）。ＬＴ
Ｄ4およびＬＴＥ4は、気道の神経性炎症反応も高める可能性がある。ロイコトリ
エン合成を阻害する化合物、たとえば５−リポキシゲナーゼ阻害薬であるジロイ
トン（ｚｉｌｅｕｔｏｎ）、またはロイコトリエン受容体アンタゴニストである
ザフィルルカスト（ｚａｆｉｒｌｕｋａｓｔ）は、喘息や鼻炎に対し有効である
ことが示されている（Ｂｕｓｓｅ Ｗ．Ｗ．，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｒｇ
ｙ，２６，８６８−８７９，１９９６；特に、ＬＴＣ4形成を触媒するＬＴＣ4シ
ンターゼの役割を指示したアラキドン酸カスケードを示す図１を参照）。
【０００３】 ロイコトリエンは膜リン脂質から誘導される。このリン脂質から細胞質ホスホ
リパーゼＡ２によりアラキドン酸が放出され、５−リポキシゲナーゼ活性化タン
パク質ＦＬＡＰの存在下で５−リポキシゲナーゼによりＬＴＡ4に変換される。 ５−ＬＯの多型性は、国際特許出願公開第ＷＯ９７／４２３４７号（ブリガム・
アンド・ウィミンズ・ホスピタル）に報告されている。ＬＴＡ4はＬＴＣ4シンタ
ーゼにより還元型グルタチオンと結合してＬＴＣ4を形成する。ＬＴＣ4のキャリ
ヤー仲介輸出に伴って、γ−グルタミルトランスペプチダーゼおよびジペプチダ
ーゼの逐次作用により生物学的活性代謝産物ＬＴＤ4およびＬＴＥ4が形成される
。
【０００４】 ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子がクローン化され、コード配列の５′側にある１， ４４６ヌクレオチドの配列、５つのエキソンおよび介在イントロン、ならびにポ
リＡシグナルより先の３９８ヌクレオチド長さの３′側配列を含む、４，４６５
ヌクレオチドのゲノム配列として発表された（Ｐｅｎｒｏｓｅら，Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．，２７１，１１３５６−１１３６１，１９９６；ＥＭＢＬ寄託番号
Ｕ５０１３６）。
【０００５】 １方法は、特定の医薬による療法に最も適した患者を確認する補助となる多型
性の知識を利用するものである（これはしばしば“遺伝薬理学”と呼ばれる）。
遺伝薬理学は薬物選択法を補助するための薬学研究にも利用できる。多型性は、
ヒトゲノムのマッピング、および疾病の遺伝子成分解明に利用される。遺伝薬理
学その他の用途における多型検出に関する背景の詳細については、以下の参考文
献を参照されたい：Ｌｉｎｄｅｒら，（１９９７），Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ，４３，２５４；Ｍａｒｓｈａｌｌ（１９９７），Ｎａｔｕｒｅ
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１５，１２４９；国際特許出願公開第ＷＯ９７／
４０４６２号（スペクトラ・バイオメディカル）；およびＳｃｈａｆｅｒら，（
１９９８），Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１６，３３。
【０００６】 ロイコトリエンアンタゴニストによる処置に対する患者の応答は不均一である
ことが臨床試験で示された。したがってロイコトリエンアンタゴニストによる医
薬設計および療法のための改良された方法が要望されている。
【０００７】 本発明は、ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子における５つの単一ヌクレオチド多型（ ＳＮＰ）を見出したことに基づく。３つのＳＮＰはこの遺伝子の５′側非翻訳領
域、２つは第１イントロン中に見出され、それぞれＵ５０１３６のナンバリング
に基づく位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２に位置する。
本発明者らによる最初の出願日以前にはＬＴＣ4シンターゼ遺伝子における多型 ／対立遺伝子変異は開示されていないと確信する。
【０００８】 本発明の１態様によれば、ヒトにおいてＬＴＣ4シンターゼにおける単一ヌク レオチド多型を診断する方法であって、配列番号：１中の位置により定められる
ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２ ７４２のうち１以上におけるヒト核酸配列を決定し、そしてＬＴＣ4シンターゼ 遺伝子多型を参照してそのヒトの状態（ｓｔａｔｕｓ）を判定する方法が提供さ
れる。
【０００９】 ヒトという用語には、ロイコトリエン仲介疾患を伴うか、または伴う疑いのあ
るヒト、ならびに無症状のヒトであってロイコトリエン仲介疾患の素質もしくは
それに対する感受性について試験を受ける可能性のあるヒトがいずれも含まれる
。各位置において、ヒトは対立遺伝子についてホモ接合性であるか、またはヒト
はヘテロ接合性である。
【００１０】 本発明の１態様において、好ましくは本明細書に記載する診断法は、位置３７
５の単一ヌクレオチド多型がＧおよび／またはＡの存在である方法である。 本発明の他の態様において、好ましくは本明細書に記載する診断法は、位置８
１５の単一ヌクレオチド多型がＣおよび／またはＡの存在である方法である。
【００１１】 本発明の他の態様において、好ましくは本明細書に記載する診断法は、位置１
００３の単一ヌクレオチド多型がＡおよび／またはＣの存在である方法である。
仮説的考察に拘束されたくはないが、この位置のＣ対立遺伝子の存在がＬＴＣ4 シンターゼ濃度上昇と関連するので、この存在を調べるのが特に好ましい（本明
細書に説明するように）。
【００１２】 本発明の他の態様において、好ましくは本明細書に記載する診断法は、位置２
１６９の単一ヌクレオチド多型がＣおよび／またはＴの存在である方法である。 本発明の他の態様において、好ましくは本明細書に記載する診断法は、位置２
７４２の単一ヌクレオチド多型がＣおよび／またはＴの存在である方法である。
【００１３】 本発明の診断法は、好ましくは増幅不応変異系（ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ ｍｕｔａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ）および／または制
限断片長多型から選択される方法で配列を決定する方法である。
【００１４】 本発明の他の態様において本発明者らは、下記を含むロイコトリエン仲介疾患
の診断法を提供する： ｉ）個体から試料核酸を採取し、 ｉｉ）ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３および２１ ６９のうち１以上における変異ヌクレオチドの存否を決定し、そして ｉｉｉ）ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を参照してその個体の状態を判定する 。
【００１５】 発表されたＬＴＣ4シンターゼ遺伝子（ＥＭＢＬ寄託番号Ｕ５０１３６）を配 列番号：１に示す。この配列において本発明で見出された変異部位は、位置３７
５、８１５、１００３、２１６９および２７４２である。
【００１６】 位置３７５の対立遺伝子変異は、Ｇ（発表された塩基）からたとえばＡへの単
一塩基置換からなる。位置８１５の対立遺伝子変異は、Ｃ（発表された塩基）か
らたとえばＡへの単一塩基置換からなる。位置１００３の対立遺伝子変異は、Ａ
（発表された塩基）からたとえばＣへの単一塩基置換からなる。位置２１６９の
対立遺伝子変異は、Ｃ（発表された塩基）からたとえばＴへの単一塩基置換から
なる。位置２７４２の対立遺伝子変異は、Ｃ（発表された塩基）からたとえばＴ
への単一塩基置換からなる。個体の状態は、前記遺伝子座のうち１、２、３、４
または５つ全部における対立遺伝子変異を参照して判定できる。
【００１７】 Ｓａｎａｋら（１９９８），Ｌａｎｃｅｔ，３５０，１５９９には、アスピリ
ン誘発性喘息（ＡＩＡ）が位置１００３における多型性と関連すると報告されて
いる。この報文は、位置１００３にＣ対立遺伝子が存在するとＬＴＣ4シンター ゼ濃度が上昇することを示唆している（Ｃｏｗｂｕｒｎら（１９９８），Ｊ．Ｃ
ｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１０１，８３４も参照）。ＡＩＡは成人喘息の約１０
％に影響を与えている。アスピリンその他のシクロオキシゲナーゼ阻害薬はＬＴ
類を気道へ放出させ、感受性個体に喘息発作を起こさせる。ＡＩＡを処置するた
めの臨床的方法には、抗ロイコトリエン薬による前処置が含まれる（Ｓｚｃｚｅ
ｋｌｉｋ（１９９７），Ａｌｌｅｒｇｙ，５２，６１３−９）。解説者らはＬＴ
Ｃ4多型検出の臨床的有用性を支持する記載を行っている（Ｈｏｌｇａｔｅ（１ ９９８），Ｌａｎｃｅｔ，３５１，１３００−１３０１、特に最終節を参照）。
抗ロイコトリエン薬については、下記の刊行物に概説されている：Ｈｏｒｗｉｔ
ｚら（１９９８），Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１
５７，１３６３（特に薬物リストについての表１を参照）；およびＴａｎ（１９
９８），Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｐｕｌｍｏｎａｒｙ Ｍｅｄ
ｉｃｉｎｅ，４，２５。
【００１８】 核酸被験試料は、個体から得た血液、気管支肺胞洗浄液、喀痰、または他の体
液もしくは組織であることが好都合である。被験試料が被験試料中の前記配列に
対応する核酸配列であってもよいことは理解されるであろう。すなわちＬＴＣ4 シンターゼ変異の分析前にまず、試料核酸中の前記領域の全部または一部を、任
意の好都合な手法、たとえばＰＣＲにより増幅させてもよい。
【００１９】 ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および ２７４２のうち１以上における変異ヌクレオチドの存否を判定するために使用で
きる分析法が多数あることは、当業者には明らかであろう。一般に、対立遺伝子
の検出には変異識別法、所望により増幅反応およびシグナル発生系が必要である
。表１に多数の変異検出法を挙げる。一部はＰＣＲに基づく。これらを多数のシ
グナル発生系と組み合わせて使用できる。その選択を表２に挙げる。他の増幅法
を表３に挙げる。対立遺伝子検出のために現在用いられている多数の方法がＮｏ
ｌｌａｕら，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．，４３，１１１４−１１２０，１９９７；な
らびに標準的テキスト、たとえば“Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ
ｆｏｒ Ｍｕｔａｔｉｏｎ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ”，Ｕ．Ｌａｎｄｅｇｒｅｎ
，オックスフォード大学出版社，１９９６、および“ＰＣＲ”，第２版，Ｎｅｗ
ｔｏｎおよびＧｒａｈａｍ編，ＢＩＯＳサイエンティフィック・パブリッシャー
ズ社，１９９７に概説されている。略号： ＡＩＡ アスピリン誘発性喘息 ＡＬＥＸ（商標） 増幅不応変異系線状伸長法 ＡＰＥＸ アレイドプライマー伸長法 ＡＲＭＳ（商標） 増幅不応変異系 ｂ−ＤＮＡ 分枝鎖ＤＮＡ ＣＭＣ 化学的な不適正塩基対開裂 ｂｐ 塩基対 ＣＯＰＳ 競合オリゴヌクレオチドプライミング系 ＤＧＧＥ 変性剤濃度勾配ゲル電気泳動 ＦＬＡＰ ５−リポキシゲナーゼ活性化タンパク質 ＦＲＥＴ 蛍光共鳴エネルギー伝達 ＬＣＲ リガーゼ連鎖反応 ５−ＬＯ ５−リポキシゲナーゼ ＬＴ ロイコトリエン ＭＡＳＤＡ 複対立遺伝子特異性診断アッセイ法 ＮＡＳＢＡ 核酸配列ベース増幅 ＯＬＡ オリゴヌクレオチド連結アッセイ ＰＣＲ ポリメラーゼ連鎖反応 ＰＴＴ タンパク質トランケーション試験 ＲＦＬＰ 制限断片長多型 ＳＤＡ 鎖置換増幅 ＳＮＰ 単一ヌクレオチド多型 ＳＳＣＰ 一本鎖高次構造多型 ＳＳＲ 自己持続型複製 ＴＧＧＥ 温度勾配ゲル電気泳動表１−変異検出法 全般：ＤＮＡ配列決定、ハイブリダイゼーションによる配列決定 走査：ＰＴＴ*、ＳＳＣＰ、ＤＧＧＥ、ＴＧＧＥ、開裂、ヘテロ二本鎖分析、Ｃ ＭＣ、酵素による不適正塩基対開裂 * 注釈：プロモーター多型の検出には有用でない ハイブリダイゼーションをベースとするもの 固相ハイブリダイゼーション：ドットブロット法、ＭＡＳＤＡ、逆ドットブロ
ット法、オリゴヌクレオチドアレイ（ＤＮＡチップ） 液相ハイブリダイゼーション：タクマン（Ｔａｑｍａｎ、商標）−米国特許第
５２１００１５および５４８７９７２号（ホフマン−ラ・ロッシュ）、モレキュ
ラー・ビーコンズ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｅａｃｏｎｓ）、−Ｔｙａｇｉら（
１９９６），Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１４，３０３；国際
特許出願公開第ＷＯ９５／１３３９９号（パブリック・ヘルス社、ニューヨーク
） 伸長をベースとするもの：ＡＲＭＳ（商標）、ＡＬＥＸ（商標）−欧州特許第３
３２４３５Ｂ１号（ゼネカ社）、ＣＯＰＳ−Ｇｉｂｂｓら（１９８９），Ｎｕｃ
ｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１７，２３４７ 取込みをベースとするもの：ミニ−配列決定、ＡＰＥＸ 制限酵素をベースとするもの：ＲＦＬＰ、制限部位生成ＰＣＲ 連結をベースとするもの：ＯＬＡ その他：インベーダーアッセイ表２−シグナル発生または検出系 蛍光：ＦＲＥＴ、蛍光消光、蛍光偏光−英国特許第２２２８９９８号（ゼネカ社
） その他：化学発光、電気化学発光、ラマン、放射能、比色、ハイブリダイゼーシ
ョン保護アッセイ、質量分析表３−その他の増幅法 ＳＳＲ、ＮＡＳＢＡ、ＬＣＲ、ＳＤＡ、ｂ−ＤＮＡ 好ましい変異検出法には、ＡＲＭＳ（商標）、ＡＬＥＸ（商標）、ＣＯＰＳ、
タクマン、モレキュラー・ビーコンズ、ＲＦＬＰ、ならびに制限部位ベースＰＣ
ＲおよびＦＲＥＴの各方法が含まれる。
【００２０】 特に好ましい方法には、ＡＲＭＳ（商標）およびＲＦＬＰをベースとする各方
法が含まれる。ＡＲＭＳ（商標）が殊に好ましい方法である。 他の態様において本発明の診断法は、喘息、鼻炎その他のロイコトリエン仲介
疾患の処置における療法用化合物の効率を評価するために用いられる。本発明に
おいて同定される多型性は、ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の５′側非翻訳領域およ び第１イントロン中に起きる。これらは遺伝子転写および遺伝子翻訳の制御に重
要な領域である。変異の位置は、それぞれ既知の転写因子結合部位内にある；変
異位置３７５におけるＡの置換はＡＰ−２ ＣＳ４転写因子結合部位を修飾し、
変異位置８１５におけるＡの置換はＡＰ−２ ＣＳ５転写因子結合部位を修飾し
、変異位置１００３におけるＣの置換はグルココルチコイド受容体結合部位ＧＧ
ＧＡＣＡを修飾し、変異位置２１６９におけるＴの置換はＭＲＥｃ−（３）転写
因子結合部位を撹乱すると考えられる。
【００２１】 後記の実施例３には、他の多型、すなわち位置２７４２におけるＣからＴへの
置換を記載する。この変異は、ＲＩＰＥ３ｂ部位を撹乱する（Ｓｈｉｅｈおよび
Ｔｓａｉ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６，１６７０８−１６７１４，１９
９１）。
【００２２】 前記多型性のうち１以上が転写レベルおよび／またはメッセージ安定性に影響
を与えるか否かを検出するためのアッセイ、たとえばリポーターベースアッセイ
を考案できる。
【００２３】 したがって、ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の特定の対立遺伝子変異体をもつ個体 は種々の生理学的条件下で酵素生合成を調節する能力に差を示す可能性があり、
種々の疾病に対し反応する能力に変化を示すであろう。さらに、対立遺伝子変異
の結果生じる酵素調節の差は、薬物療法に対する個体の応答に直接的影響をもつ
可能性がある。したがって、ＬＴＣ4シンターゼ多型は、ＬＴＣ4シンターゼまた
はロイコトリエン経路の他の成分を調節するために設計された薬物の効力にきわ
めて大きな影響を与える可能性がある。ただし、多型性はロイコトリエンにより
調節される他の生化学的経路に作用する薬剤に対する応答に影響を与える可能性
もある。したがって本発明の診断法は、このような薬剤に対する臨床応答を推定
し、かつ療法用量を決定するのに有用であろう。
【００２４】 他の態様において本発明の診断法は、ロイコトリエンにより仲介される疾病に
対する個体の素質および／または感受性を評価するのに用いられる。ＬＴＣ4シ ンターゼ多型は、喘息、および他の炎症性疾患、たとえばアレルギー性鼻炎の発
症に特に関連すると考えられ、本発明は特にこれらの状態を発症するリスクのあ
る個体を識別するのに利用できる。
【００２５】 他の態様において本発明の診断法は、ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の１以上の対 立遺伝子変異を選択的にターゲティングする新規薬物療法の開発に利用される。
特定の対立遺伝子変異と疾病発症に対する素質または薬物療法に対する応答との
関連を確認することは、新規薬物の設計に著しい影響を与えるであろう。他の変
異に対する影響を最小限に抑えながら、その疾病プロセスに関連することが示さ
れている変異の生物学的活性を調節する薬物を設計できる。
【００２６】 本発明の診断法の他の態様においては、制限酵素が認識する部位の喪失または
獲得を参照して変異ヌクレオチドの存否を検出する。後記の実施例１には、ＬＴ
Ｃ4シンターゼ遺伝子多型の結果、喪失または獲得しやすい部位の詳細を示す。 当業者は、実施例１または３に挙げた部位のうち１以上の喪失または獲得により
起きる制限断片長多型の検出に基づく診断法を設計および実行することができる
であろう。
【００２７】 さらに他の態様において本発明は、位置３７５、８１５、１００３および２１
６９における１以上の特異的多型を含むＬＴＣ4シンターゼ遺伝子変異体を提供 する。
【００２８】 本発明の他の態様は、位置３７５、８１５および１００３のうち１以上におけ
る多型を含むＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の５′側非翻訳領域を含む。特に位置３ ７５における多型はＧからＡである。特に位置８１５における多型はＣからＡで
ある。特に位置１００３における多型はＡからＣである。本発明の他の態様は、
位置２１６９における多型を含むＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の第１イントロンを 含む；特にこの多型はＣからＴである。
【００２９】 本発明の他の態様によれば、配列番号：１中の位置により定められる位置３７
５、８１５および１００３のうち１以上に対応する多型を含むＬＴＣ4シンター ゼの５′側非翻訳領域を含み、位置３７５にＡがあり、位置８１５にＡがあり、
位置１００３にＣがある核酸が提供される。ＬＴＣ4シンターゼの５′側非翻訳 領域は、配列番号：１の位置１〜１４４６として定められる。これらの対立遺伝
子変異のうち少なくとも１つを含む５′側非翻訳領域断片も本発明の範囲に含ま
れる。
【００３０】 断片は、少なくとも１７塩基、より好ましくは少なくとも２０塩基、さらに好
ましくは少なくとも３０塩基である。相補鎖も本発明の範囲に含まれる。 本発明の他の態様によれば、配列番号：１中の位置により定められる位置２１
６９および２７４２のうち１以上に対応する多型を含むＬＴＣ4シンターゼの第 １イントロンを含み、位置２１６９にＴがあり、位置２７４２にＴがある核酸が
提供される。ＬＴＣ4シンターゼの第１イントロンは、配列番号：１の位置１５ ０５〜２９４９として定められる。これらの対立遺伝子変異のうち少なくとも１
つを含む第１イントロン断片も本発明の範囲に含まれる。
【００３１】 本発明はさらに、本発明のＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を検出するヌクレオ チドプライマーを提供する。 本発明の他の態様によれば、配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4 シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２の
うち１以上におけるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を検出できる診断用核酸プラ イマーが提供される。
【００３２】 診断用核酸プライマーは対立遺伝子特異性プライマーと定義できる。これらは
一般に定常プライマーと共にＰＣＲ反応などの増幅反応に用いられ、たとえばＡ
ＲＭＳ（商標）アッセイ法に用いるように特定の配列位置における１つの対立遺
伝子を選択的に増幅させることにより、対立遺伝子間の識別を行う。本明細書の
実施例２参照。本発明の診断用プライマーは好ましくは１７〜５０ヌクレオチド
、より好ましくは１７〜３５ヌクレオチド、さらに好ましくは１７〜３０ヌクレ
オチドである。
【００３３】 本発明は、下記に示す配列またはその誘導体を含む診断用プライマーを提供す
る。誘導体は、３′−末端のヌクレオチド約６〜８個が下記の配列と等しく、残
りのヌクレオチドのうち最高１０個、たとえば８、６、４、２または１個は診断
用プライマーの特性に有意の影響を与えずに変更できる。診断用プライマーの配
列は下記のもの、より好ましくは後記実施例２に記載のものであることが好都合
である。診断用プライマーは好ましくは１７〜５０ヌクレオチド、より好ましく
は１７〜３５ヌクレオチド、さらに好ましくは１７〜３０ヌクレオチドである。
【００３４】
【表１】
【００３５】 * プライマー１〜８をそれぞれ配列番号：２〜９として示す プライマーは、任意の好都合な合成法で調製できる。そのような方法の例は、
標準的テキスト、たとえば“オリゴヌクレオチドおよび類似体に関するプロトコ
ル：合成と特性”，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇ
ｙ Ｓｅｒｉｅｓ；Ｖｏｌ．２０；Ｓｕｄｈｉｒ Ａｇｒａｗａｌ編，ヒューマ
ナＩＳＢＮ：０−８９６０３−２４７−７；１９９３；第１版中にある。必要で
あれば、検出を容易にするためにプライマー（１以上）を標識してもよい。
【００３６】 本発明の他の態様によれば、配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4 シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２の
うち１以上におけるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を検出できる対立遺伝子特異 性オリゴヌクレオチドプローブが提供される。
【００３７】 本発明の対立遺伝子特異性オリゴヌクレオチドプローブは、好ましくは１７〜
５０ヌクレオチド、より好ましくは１７〜３５ヌクレオチド、さらに好ましくは
１７〜３０ヌクレオチドである。
【００３８】 そのようなプローブの設計は当業者が容易になしうるであろう。そのようなプ
ローブは、任意の好都合な長さ、たとえば最高５０塩基、最高４０塩基、より好
都合には最高３０塩基の長さ、たとえば８〜２５または８〜１５塩基の長さであ
る。一般にそのようなプローブは、ＬＴＣ4遺伝子中の対応する野生型または変 異型の部位に完全に相補的な塩基配列を含むであろう。しかし必要であれば、そ
のオリゴヌクレオチドプローブの識別力が不適当な影響を受けない限り、１以上
の不適正塩基対を導入してもよい。本発明のプローブは、検出を容易にするため
に１以上の標識を保有してもよい。
【００３９】 本発明の他の態様によれば、本発明の診断用核酸プライマーおよび／または本
発明の対立遺伝子特異性オリゴヌクレオチドプライマーを含む、診断用キットが
提供される。
【００４０】 診断用キットは、適切な包装および本発明方法に用いる指示書を含むことがで
きる。そのようなキットはさらに、適切な緩衝剤（１以上）およびポリメラーゼ
（１以上）、たとえば熱安定性ポリメラーゼ（たとえばｔａｑポリメラーゼ）を
含むことができる。
【００４１】 ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子は染色体５ｑ３５にマッピングされた（Ｐｅｎｒｏ ｓｅら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７１，１１３５６−１１３６１，１９９
６）。本発明の他の態様においては、本発明の単一ヌクレオチド多型を結合試験
においてこの領域の遺伝子マーカーとして使用できる。この態様は特に１００３
における多型性に適用される。その頻度が比較的高いからである（Ｋｒｕｇｙｌ
ａｋ，Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，１７，２１−２４，１９９７）。
【００４２】 本発明の他の態様によれば、抗ロイコトリエン薬による処置を必要とするヒト
を処置する方法であって、 ｉ）ヒトのＬＴＣ4シンターゼにおける単一ヌクレオチド多型を診断し、その 診断は、配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の位 置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２のうち１以上における核
酸配列を決定し、そしてＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を参照してそのヒトの状 態を判定することを含み；そして ｉｉ）有効量の抗ロイコトリエン薬を投与する ことを含む方法が提供される。
【００４３】 好ましくは、ヒトの状態の判定は臨床試的に有用である。臨床的有用性の例に
は、どのロイコトリエン薬（１以上）を投与するかの決定、および／または薬物
（１以上）の有効量の決定が含まれる。
【００４４】 本発明の他の態様によれば、配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4 シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２の
うち１以上における単一ヌクレオチド多型をもつと診断されたヒトにおいてロイ
コトリエン仲介疾患の処置に用いる医薬の製造における、抗ロイコトリエン薬の
使用が提供される。
【００４５】 本発明の他の態様によれば、抗ロイコトリエン薬、ならびに配列番号：１中の
位置により定められるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００ ３、２１６９および２７４２のうち１以上における単一ヌクレオチド多型につい
て診断試験されたヒトに薬物を投与するための指示書を含む医薬パックが提供さ
れる。
【００４６】 適切な抗ロイコトリエン薬には、ロイコトリエンＤ4受容体アンタゴニスト、 ＦＬＡＰアンタゴニストおよび５−リポキシゲナーゼ阻害薬（特に下記文献の表
１参照：Ｈｏｒｗｉｔｚら（１９９８），Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ
Ｃａｒｅ Ｍｅｄ，１５７，１３６３）、好ましくはロイコトリエンＤ4受容体 アンタゴニスト、より好ましくはモンテルカスト（ｍｏｎｔｅｌｕｋａｓｔ）お
よびザフィルルカストが含まれ、これらのうちザフィルルカストが最も好ましい
。
【００４７】 位置１００３におけるＣ対立遺伝子の存在の試験が特に好ましい。仮説的考察
に拘束されたくはないが、これとＬＴＣ4シンターゼ濃度上昇と関連するからで ある（本明細書に説明するように）。
【００４８】 以下の実施例を参照して本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されない
。温度はすべて摂氏による。 以下の実施例中、別途記載しない限り、下記の方法および材料を用いた。
【００４９】 熱安定性ＤＮＡポリメラーゼ源としては、ＡＭＰＬＩＴＡＱ（商標、パーキン
−エルマー・シータスから入手）を用いる。 一般的な分子生物学的方法は、“Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ−Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ”，第２版，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔ
ｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ（コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリ
ー，１９８９）に記載の方法のいずれかに従うことができる。
【００５０】 電気泳動図は標準法により得られた：ＡＢＩ３７７データ収集ソフトウェアお
よびＡＢＩプリズム配列決定分析（２．１．２）で得た波形によりデータを収集
した。実施例１ 多型性の同定 １．方法ＤＮＡの調製 ＤＮＡは、ＥＤＴＡ中に採集した凍結血液試料から、プロトコルＩ（Ｍｏｌｅ
ｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ｐ．
３９２，Ｓａｍｂｒｏｏｋ，ＦｒｉｔｓｃｈおよびＭａｎｉａｔｉｓ，第２版，
コールド・スプリング・ハーバー・プレス，１９８９）に従い、下記の変更を行
って調製された。融解血液をリン酸緩衝塩類溶液の代わりに等容量の標準塩類ク
エン酸で希釈して、溶解赤血球を除去した。試料を３回のフェノール抽出ではな
く、フェノール、次いでフェノール／クロロホルム、次いでクロロホルムで抽出
した。このＤＮＡを脱イオン水に溶解した。鋳型の調製 鋳型は、下記のオリゴヌクレオチドプライマーおよびアニーリング温度を用い
てＰＣＲで調製された。伸長温度は７２℃、変性温度は９４℃であった。一般に
５０ｎｇのゲノムＤＮＡを各反応に用い、４０サイクルのＰＣＲを行った。
【００５１】
【表２】
【００５２】 ダイ−プライマー（ｄｙｅ−ｐｒｉｍｅｒ）配列決定のために、正オリゴヌク
レオチドおよび逆オリゴヌクレオチドそれぞれの５′−末端にＴ７およびＳＰ６
プライマー配列（ＡＢＩプロトコルＰ／Ｎ ４０２１１４、アプライド・バイオ
システムズ）を含有するようにこれらのプライマーを修飾した。化学的な不適正塩基対開裂（ＣＭＣ） ＣＭＣは、Ｒｏｗｌｅｙら（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，３０，５７４−５８２，１９
９５）の記載に従って、蛍光色素（ＲＧ６およびＲ１１０）によるプローブおよ
びターゲットの内部標識を用いて行われた。１２ｃｍのプレート上（モジュール
ＧＳ１２−２４００Ａ）の６％アクリルアミドゲルを自動ＤＮＡシークエンサー
（ＡＢＩ３７７、アプライド・バイオシステムズ）に導入し、適切なソフトウェ
ア（ＡＢＩ ＧｅｎｅＳｃａｎ（商標）２．１）で分析した。ダイ−プライマー配列決定 Ｔ７およびＳＰ６プライマーを用いるダイ−プライマー配列決定は、“Ａｍｐ
ｌｉＴａｑ ＦＳ”（商標）ＤＮＡポリメラーゼを含むＡＢＩプリズム（ＡＢＩ
Ｐｒｉｓｍ、商標）ダイ−プライマーサイクル配列決定コアキットについての
ＡＢＩプロトコルＰ／Ｎ ４０２１１４の記載に従った。これを、アニーリング
温度が４５℃であり、サイクル配列決定ミックスに最終濃度５％となるようにＤ
ＭＳＯを添加した点で変更した。
【００５３】 各塩基の伸長反応物をプールし、エタノール／酢酸ナトリウム沈殿させ、洗浄
し、装填用ホルムアミド緩衝液に再懸濁した。 ４．２５％アクリルアミドゲルを自動シークエンサー（ＡＢＩ３７７、アプラ
イド・バイオシステムズ）に導入した。 ２．結果 位置はすべてＵ５０１３６ナンバリング法に基づく。変異位置３７５ 断片１（６２〜１０４３）のＣＭＣ分析により、９／４９の被験者において約
３００ｂｐおよび６７０ｂｐの開裂生成物が生成した。このパターンを示す被験
者２人に由来する断片１のダイ−プライマー配列分析で、位置３７５のＧがＡで
置換されていることが明らかになった。これは、これらの被験者のうち１人に由
来する断片１の６クローンの配列決定により確認された；５／６は位置３７５に
Ａをもち、１／６はＧをもっていた。
【００５４】 位置３７５のＧがＡで置換されると、位置３６８のＭｎ１部位が修飾される。
４９人の被験者に由来するＬＴＣ4シンターゼ位置２７１〜４０７からのＰＣＲ 生成物をＭｎ１で消化した。この生成物は位置３３５に非変異Ｍｎ１部位を含み
、部位３６８が存在しない場合は非変異６１ｂｐ断片および多型断片７２ｂｐを
生じ、３６８にＭｎ１が存在する場合は３３ｂｐおよび３９ｂｐを生じる。９／
４９の被験者が７２ｂｐおよび３３／３９ｂｐ生成物の両方を生じた。これは、
一方の対立遺伝子からは位置３６８のＭｎ１部位が失われ、これらの被験者は位
置３７５においてヘテロ接合体であることを示した。したがって３７５における
Ａ対立遺伝子の頻度は９／９８である。
【００５５】 この変異により生じた他のＲＦＬＰは、Ｍ．ＣｖｉＡ ＩＶおよびＭ．Ｓｓｓ Ｉ部位の喪失である。 この変異により、転写因子結合部位ＡＰ−２ ＣＳ４が修飾される。変異位置８１５ 断片１のＣＭＣ分析により、２／４９の被験者において約２３０ｂｐおよび７
５０ｂｐの開裂生成物が生成した。このパターンを示す被験者１人に由来する断
片１のダイ−プライマー配列分析で、位置８１５のＣがＡで置換されていること
が明らかになった。これは、この被験者に由来する断片１の８クローンの配列決
定により確認された；４／８は位置８１５にＡをもち、４／８はＣをもっていた
。
【００５６】 位置８１５のＣがＡで置換されると、８１３にＡｖａ ＩＩ部位が生じる。 ５３人の被験者に由来するＬＴＣ4シンターゼ位置４１７〜１０４３からのＰ ＣＲ生成物をＡｖａ ＩＩで消化した。５／５３の被験者において、位置８１５
にＡｖａ ＩＩ部位が形成された。これらの被験者は位置８１５においてヘテロ
接合体であった。したがってＡ対立遺伝子の頻度は５／１０６対立遺伝子であっ
た。
【００５７】 この変異により生じた他のＲＦＬＰは、Ａｃａ Ｉ、ＣｖｉＫ Ｉ、Ｍ．Ｃｖ
ｉＡ ＩＶ、ＣｖｉＪ ＩおよびＨａｅ ＩＩＩ部位の喪失、ならびにＡｓｐ６
９７ Ｉ、ＶｐａＫ１ １Ａ ＩおよびＳｉｎ Ｉ部位の獲得である。
【００５８】 この変異により、転写因子結合部位ＡＰ−２ ＣＳ５が修飾される。変異位置１００３ 断片１のＣＭＣ分析により、２２／４９の被験者において約９４０ｂｐの開裂
生成物が生成した。断片２（８５１〜１８２４）のＣＭＣ分析により約８００ｂ
ｐのバンドが生じた。このパターンを示す被験者２４人に由来する断片２のダイ
−プライマー配列分析で、位置１００３のＡがＣで置換されていることが明らか
になった。これは、９４０ｂｐの開裂生成物をもつ被験者２人に由来する断片１
の１４クローンの配列決定により確認された。６／１４は位置１００３にＣをも
ち、８／１４はＡをもっていた。
【００５９】 位置１００３のＡがＣで置換されると、位置９９９にＡｖａ ＩＩ部位が生じ
る。５３人の被験者に由来するＬＴＣ4シンターゼ位置４１７〜１０４３からの ＰＣＲ生成物をＡｖａ ＩＩで消化した。２６／５３の被験者において、位置１
００３にＡｖａ ＩＩ部位が形成された。これらの被験者のうち１人は位置８１
５においてホモ接合体Ｃ／Ｃであり、２５人はヘテロ接合体Ｃ／Ａであった。し
たがってＣ対立遺伝子の頻度は２７／１０６対立遺伝子であった。
【００６０】 １００３変異は８１５Ａ変異と同一染色体上にはない。 この変異により生じた他のＲＦＬＰは、Ｂｃｒ Ｉ、ＡｈａＢ Ｉ、Ａｓｐ６
９７ Ｉ、ＶｐａＫ１ １Ａ Ｉ、Ａｓｕ Ｉ、Ｆｍｕ Ｉ、Ｓａｕ９６ Ｉ、
Ｓｉｎ Ｉ、Ｎｌａ ＩＶ、Ａｓｐ Ｉ、Ａｓｐ７４８ Ｉ、ＢｓａＣ Ｉ、Ｄ
ｓａ Ｖ、Ｅｃｏ１８３１ Ｉ、Ｈｉｎ２ Ｉ、Ｈｐａ ＩＩ、Ｍｓｐ Ｉ、Ｂ
ｃｎ Ｉ、Ｎｃｉ Ｉ、ＳｃｒＦ ＩおよびＭ．Ｓｓｓ Ｉに対する部位の獲得
である。
【００６１】 この変異により、グルココルチコイド受容体結合部位ＧＧＧＡＣＡが修飾され
る（Ｃｈａｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６，２２６３４−２２６４４
，１９９１）。
【００６２】 Ｓａｎａｋら（１９９８），Ｌａｎｃｅｔ，３５０，１５９９には、アスピリ
ン誘発性喘息（ＡＩＡ）がこの多型性と関連すると報告されている（Ｓａｎａｋ
の位置−４４４は本発明者らの位置１００３と等しい）。ＡＩＡは成人喘息の約
１０％に影響を与えている。アスピリンその他のシクロオキシゲナーゼ阻害薬は
ＬＴ類を気道へ放出させ、感受性個体に喘息発作を起こさせる。ＡＩＡを処置す
るための臨床的方法には、抗ロイコトリエン薬による前処置が含まれる（Ｓｚｃ
ｚｅｋｌｉｋ（１９９７），Ａｌｌｅｒｇｙ，５２，６１３−９）。解説者らは
ＬＴＣ4多型検出の臨床的有用性を支持する記載を行っている（Ｈｏｌｇａｔｅ （１９９８），Ｌａｎｃｅｔ，３５１，１３００−１３０１、特に最終節を参照
）。変異位置２１６９ ４７人の被験者に由来する断片６（１５０３〜２４００）のダイ−プライマー
配列決定で、３人の被験者において位置２１６９のＣがＴで置換されていること
が示された。
【００６３】 位置２１６９のＣがＴで置換されると、位置６４７にＡｐａ ＬＩ部位が生じ
る。 断片６をＡｐａ ＬＩで消化した。３／５４の被験者において、Ａｐａ ＬＩ
部位が形成された。これらの被験者はＲＦＬＰについてヘテロ接合体であった。
したがって位置２１６９におけるＴ対立遺伝子の頻度は３／１０８対立遺伝子で
ある。
【００６４】 この変異により生じた他のＲＦＬＰは、Ｍ．ＣｖｉＡ ＩＶ、Ｂｃａ Ｉ、Ｈ
ｉｎｐ Ｉ、Ｈｉｎｐ１ Ｉ、Ｃｆｏ Ｉ、Ｈｈａ ＩおよびＭ．Ｓｓｓ Ｉ部
位の喪失、ならびにＡａｑ Ｉ、Ｂｋａ１１２５ Ｉ、ＢｓａＧ Ｉ、ＣｖｉＲ
Ｉ、ＢｓｉＨＫＡ Ｉ、Ｂｓｐ １２８６ Ｉ、Ｈｇｉ Ａ ＩおよびＮｓｐ
ＩＩ部位の獲得である。
【００６５】 この変異は、ＭＲＥｃ−（３）部位を撹乱する（Ｌａｂｂｅら，Ｎｕｃ．Ａｃ
ｉｄ Ｒｅｓ．，１９，４２２５−４２３１，１９９１）。実施例２ ＡＲＭＳ（商標）を用いた変異体３７５、８１５、１００３および２１６９の検
出 ＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３および２１６９に おける対立遺伝子変異を識別するためのＡＲＭＳ（商標）ＰＣＲに、下記のプラ
イマーを用いた。
【００６６】
【表３】
【００６７】 ** これらのプライマーをそれぞれ配列番号：１０〜２１により示す *** これらのプライマーをそれぞれ配列番号：２２〜２６により示す 上記プライマー対を用いて、ゲノムＤＮＡ（５０ｎｇ）を３５サイクル増幅し
た。アニーリング温度は、３７５、８１５、１００３および２１６９についてそ
れぞれ６２、６０、６４および６０°であった。
【００６８】 より一般的でない対立遺伝子のホモ接合体は、位置１００３についてのみ得ら
れた。前記プライマー類および条件は、位置１００３におけるＡ／Ａ、Ａ／Ｃお
よびＣ／Ｃ遺伝子型を識別する。
【００６９】 ３７５Ａ／Ａホモ接合体は得られなかったので、Ｇ特異性プライマーがＡ／Ａ
ホモ接合体を識別しないのではなくＡ特異性プライマーがＧ／Ｇホモ接合体を識
別しなかったということを証明できなかった。８１５Ａ／Ａホモ接合体は得られ
なかったので、Ｃ特異性プライマーがＡ／Ａホモ接合体を識別しないのではなく
Ａ特異性プライマーがＣ／Ｃホモ接合体を識別しなかったということを証明でき
なかった。２１６９Ｔ／Ｔホモ接合体は得られなかったので、Ｃ特異性プライマ
ーがＴ／Ｔホモ接合体を識別しないのではなくＴ特異性プライマーがＣ／Ｃホモ
接合体を識別しなかったということを証明できなかった。実施例３ 位置２７４２における多型 実施例１の記載に従った５人の被験者に由来する断片２１８０〜２９７２のダ
イ−プライマー配列決定で、２人の被験者において位置２７４２のＣがＴで置換
されたことが証明された。鋳型は実施例１と同様にして、下記の条件を用いて調
製された。
【００７０】
【表４】
【００７１】 この変異はＲＩＰＥ３ｂ部位を撹乱する（ＳｈｉｅｈおよびＴｓａｉ，Ｊ．Ｂ
ｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６６，１６７０８−１６７１４，１９９１）。
【配列表】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (14)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ヒトにおいてＬＴＣ4シンターゼにおける単一ヌクレオチド多 型を診断する方法であって、配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4シ ンターゼ遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２のう
    ち１以上におけるヒト核酸配列を決定し、そしてＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型 を参照してそのヒトの状態を判定する方法。
  2. 【請求項２】 位置３７５の単一ヌクレオチド多型がＧおよび／またはＡの存
    在である、請求項１記載の方法。
  3. 【請求項３】 位置８１５の単一ヌクレオチド多型がＣおよび／またはＡの存
    在である、請求項１記載の方法。
  4. 【請求項４】 位置１００３の単一ヌクレオチド多型がＡおよび／またはＣの
    存在である、請求項１記載の方法。
  5. 【請求項５】 位置２１６９の単一ヌクレオチド多型がＣおよび／またはＴの
    存在である、請求項１記載の方法。
  6. 【請求項６】 位置２７４２の単一ヌクレオチド多型がＣおよび／またはＴの
    存在である、請求項１記載の方法。
  7. 【請求項７】 増幅不応変異系および制限断片長多型から選択される方法で配
    列を決定する、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法。
  8. 【請求項８】 配列番号：１中の位置により定められる位置３７５、８１５お
    よび１００３のうち１以上に対応する多型を含むＬＴＣ4シンターゼの５′側非 翻訳領域を含み、位置３７５にＡがあり、位置８１５にＡがあり、位置１００３
    にＣがある核酸。
  9. 【請求項９】 配列番号：１中の位置により定められる位置２１６９および２
    ７４２のうち１以上に対応する多型を含むＬＴＣ4シンターゼの第１イントロン を含み、位置２１６９にＴがあり、位置２７４２にＴがある核酸。
  10. 【請求項１０】 配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4シンターゼ 遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２のうち１以上
    におけるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を検出できる、診断用核酸プライマー。
  11. 【請求項１１】 配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4シンターゼ 遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２のうち１以上
    におけるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を検出できる、対立遺伝子特異性オリゴ ヌクレオチドプローブ。
  12. 【請求項１２】 請求項１０記載の診断用核酸プライマーおよび／または請求
    項１１記載の対立遺伝子特異性オリゴヌクレオチドプライマーを含む、診断用キ
    ット。
  13. 【請求項１３】 抗ロイコトリエン薬による処置を必要とするヒトを処置する
    方法であって、 ｉ）ヒトのＬＴＣ4シンターゼにおける単一ヌクレオチド多型を診断し、その 診断は、配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4シンターゼ遺伝子の位 置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２のうち１以上における核
    酸配列を決定し、そしてＬＴＣ4シンターゼ遺伝子多型を参照してそのヒトの状 態を判定することを含み；そして ｉｉ）有効量の抗ロイコトリエン薬を投与する ことを含む方法。
  14. 【請求項１４】 配列番号：１中の位置により定められるＬＴＣ4シンターゼ 遺伝子の位置３７５、８１５、１００３、２１６９および２７４２のうち１以上
    における単一ヌクレオチド多型をもつと診断されたヒトにおいてロイコトリエン
    仲介疾患の処置に用いる医薬の製造における、抗ロイコトリエン薬の使用。
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