JP2001512733A - 抗腫瘍活性を有するマクロライド剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 構造（Ｉ）を有するＩＢ−９６２１２としてここで言及される化合物は、受託番号ＣＥＣＴ−３３３３の下に入手可能なミクロモノスポラ ｓｐ．ＥＳ２５−００８株を培養することにより得ることができ、加水分解して構造（ＩＩ）を有するＩＢ−９６２１２Ｂを与える。Ｌ−ロディノースである糖はそれ自体誘導されることができ、あるいはその糖は置き換えられることができ、いずれの場合においても、糖の位置にＬ−ロディノース以外の基を有するＩＢ−９６２１２の誘導体を与える。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （技術分野） 本発明は新しい海洋微生物菌の培養液から単離された新規なマクロライド化合
物に関する。さらに本発明は、調節された条件下における好気性発酵及びその単
離と精製による新規化合物の生産、並びに誘導体化合物の生産、および抗腫瘍活
性、その他の活性の発見に基づく付加的な面に関する。

【０００２】 （背景技術） オリゴマイシンおよびホモオリゴマイシンと呼ばれるマクロライド剤（macrol
ides）は、J. Antibiotics 46, 1334〜1341, 1993; J. Antibiotics 45, 171〜1
79, 1992;およびJ. Antibiotics 49, 1275〜1277, 1996により知られている。

【０００３】 （発明の目的） 新しい抗増殖性化合物は、ＭＤＲ表現型を示す癌細胞系を包含する多数の癌細
胞系があらゆる薬物によっても有効に治療されないという事実のために、いくつ
かの人間の腫瘍の治療のためにまだ必要である。

【０００４】 本発明のさらに他の目的は、活性化合物を用いて治療の必要のある患者に投与
するための医薬組成物を提供することである。

【０００５】 微生物による生産物は工業的生産が現時点において確立されているので興味が
ある。それ故、本発明の他の目的は、活性化合物の生産およびその結果得られた
発酵ブイヨンからのそれらの単離および精製に指向されており、その上、アグリ
コン化合物に加水分解および関連化合物への誘導体化に指向されている。

【０００６】 （発明の要約） 本発明は次の式を有するＩＢ−９６２１２と称するマクロライド様の構造を有
する化合物を提供する：

【０００７】

【化４】

【０００８】 また、ＩＢ−９６２１２を得るための方法が提供され、好ましい方法は、調節
された水中での好気性条件下で同化できる炭素および窒素源および塩を有する栄
養になる水性媒体中においてＩＢ−９６２１２を生産することが可能な微生物の
株を培養することを含んでいる。また、その結果得られた抗腫瘍活性を有するブ
イヨン（broth）自体は、未精製または部分的に精製されているいずれでも本発 明の一部である。化合物ＩＢ−９６２１２は、培養ブイヨンから回収および精製
することができる。その化合物および発酵ブイヨンは、癌に対して感受性があり
かつ多薬物抵抗性（multi-drug resistant）（ＭＤＲ）白血病細胞であるものは
、人間のいくつかの癌細胞に対して興味ある活性を示す。さらに、ＩＢ−９６２
１２はある種のグラム陽性菌に対して抗生活性を示す。

【０００９】 この化合物ＩＢ−９６２１２からＬ−ロディノース（L-rhodinose）として同 定されるトリデオキシ糖を加水分解によって除き、親ＩＢ−９６２１２の核２６
−員マクロライド環系を有する活性アグリコン化合物ＩＢ−９６２１２Ｂを残す
ことができる。

【００１０】 それ故、本発明により次の構造を有する化合物ＩＢ−９６２１２Ｂがさらに提
供される：

【００１１】

【化５】

【００１２】 ＩＢ−９６２１２Ｂは、ＩＢ−９６２１２Ｂに匹適する活性を有する。

【００１３】 化合物ＩＢ−９６２１２において、本発明者がＬ−ロディノースと同定したト
リデオキシ糖は、それ自体誘導することができ、またはいずれかのケースにおい
て、糖を置換して糖の位置にＬ−ロディノースより他の基を有するＩＢ−９６２
１２の誘導体をさらに得ることができる。それ故、さらに広く、本発明により次
の一般式の化合物が提供される：

【００１４】

【化６】

【００１５】 （式中、Ｒは、水素または置換基である）

【００１６】 例示的に、Ｒは、水素、または糖基、ヒドロカルビル基、アシル基、ヘテロ環
式基（複素環基）またはある種の他の適当な置換基から選ばれた基である。置換
基の性質は臨界的でない。糖基は、デオキシ糖であってよい適当なモノ−、ジ−
、またはトリ−糖類である。ヒドロカルビル基は、アルキル、シクロアルキル、
アリール、アラルキル、またはアルキルアリール、特にＣ₁−Ｃ₆アルキル、シク
ロ−（Ｃ₄−Ｃ₈）アルキル、フェニル、ナフチルまたはベンジルでありうる。ヘ
テロ環式基は、１〜４個のヘテロ原子をを有する４〜８員環、特に酸素、硫黄ま
たは窒素から選ばれた１〜２個のヘテロ原子を有する５または６員環でありうる
。ヒドロカルビル基、アシル基またはヘテロ環式基は、例えば、Ｃ₁−Ｃ₆アルキ
ル、Ｃ₁−Ｃ₆アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシ、アミノまたは他の基から選ば
れた１、２または３個の置換基でそれ自体を置換させることができる。

【００１７】 ＩＢ−９６２１２を得るための好ましい培養菌はＥＳ２５−００８と称される
新しい株であり、その化学的、生化学的および形態学的の特性は、分類学的にミ
クロモノスポラ エスピー（Micromonospora sp）として分類されているミクロ モノスポラ属に属していることを示している。

【００１８】 前述のように、ＩＢ−９６２１２およびＩＢ−９６２１２Ｂは、多くのヒトお
よびネズミの白血病細胞−多薬物抵抗性（ＭＤＲ）、同様に感受性細胞系の増殖
活性の防止に有効であり、同様にヒトの他の腫瘍に対する増殖活性の防止に有効
であることが見出された。前記一般式の他の化合物もそのような活性を保有して
いる。

【００１９】 （発明の詳細な説明） 微生物の生産 ＩＢ−９６２１２およびＩＢ−９６２１２Ｂの生産のために利用する微生物は
、好ましくはミクロモノスポラ エスピー、株ＥＳ２５−００８であり、この培
養菌は、受託番号ＣＥＣＴ３３３３のもとにスペインのバレンシア大学における
コレクシオン エスパノーラ ド カルティボス チポ（Coleccion Espanola d
e Cultivos Tipo）に寄託された。この寄託はブダペスト条約（Budapest Treaty
）の規定によりなされ、04 August 1997の寄託日が与えられた。微生物は同定さ
れていない海のスポンジから単離した。本明細書に記載された分類法は第１表に
報告した方法である。全ての培養物を２７℃においてインキュベートし、それら
結果の記録を２１日まで毎週行なった。

【００２０】 第１表１．コロニーの形態学的研究（colonial morphology studies）のための培地 ＩＳＰ培地Ｎｏ．２、３、５および６：Shirling & Gotlieb（７） ＡＴＣＣ培地Ｎｏ．１７２：ＡＴＣＣカタログ Czapek寒天Difco Benner寒天：Waksman（９） １．５％水寒天：Luedemann（５） 全ての培地は５０％ＡＳＷで補った。２．生理的特性の研究 ＩＳＰ媒体Ｎｏ．１：ShirlingおよびGotlieb（７） ＮａＣｌ抵抗：０、２、４、７および１０％ＮａＣｌを有するＡＴＣＣ１７２
炭素の利用：ＩＳＰ−９、E.B.Shirling & Gotlieb（７）３．化学組成物の研究 脂肪酸の分析：Van der Auwera et al.（８） 全細胞の糖の分析：GuerrantおよびMoss（３）

【００２１】 微生物の記載は次の如くである。 形態学： ２８℃において２１日後、人工海水（ＡＳＷ）を補ったＩＳＰ２および１７２
ブイヨン中の生長を観察した。多くのオレンジ色が研究した異った培地上に観察
された。空気中で生長する菌糸体は形成されなかった。基質菌糸体は枝分かれし
た。基質菌糸体上に単離した頂生胞子が生じた。胞子は球形であった。いくらか
過形成の菌糸体の集まりがいくつかの培地中にインキュベーションの少なくとも
１４日後に検出することができた。

【００２２】 生理的特性： 拡散性色素は株ＥＳ２５−００８によって形成されなかった。固体または液体
のいずれの培地でも形成されなかった。ＮａＣｌに対する抵抗性は４％を超えた
。最適生長温度範囲は２５℃〜３５℃であった。微生物は、唯一の炭素源として
、グルコース、スクロース、キシロースおよびマンノースにより生長したが、ラ
フィノース、イノシトール、ガラクトース、フルクトース、メリビオール、エタ
ノール、グリセロールおよびラムノースによる生長は否定的であり、そしてマン
ニトールによる生長は疑わしかった。

【００２３】 細胞の化学組成： アミノ酸： 株ＥＳ２５−００８の全細胞加水分解産物中にメソ−２，６−ジアミノピメリ
ン酸を存在させた。 脂肪酸： ＦＡＭＥ組成は第２表のとおりである。

【００２４】

【表１】

【００２５】 糖： 全細胞の糖のパターンは、ガスクロマトグラフィーにより分析したとき、キシ
ロース、リボース、およびグルコースの存在を示した。アラビノールは微量で検
出された。このパターンは、この株をLechevalier et al.（４）のＤ群の範囲内
にまとめた。検出された他の糖はマンノース、ガラクトース、ｍ−イノシトール
およびマンノサミンであった。ポリアルコールのアラビトールおよびムラミン酸
は他の細胞から成る成分であった。マドロース（madurose）は検出されなかった
。

【００２６】 前述の特性に基づいて、培養物はミクロモノスポラ属の種として決定した。こ
れは、国際的な収集において利用できるこの属の既知タイプの株のいずれにも類
似性がない。脂肪酸のクロマトグラフィー分析による最も近い類似は、８０％だ
けの類似性を有するミクロモノスポラ チァルセア（Micromonospora chalcea）
ＡＴＣＣ３１３９５であった。

【００２７】 寄託された微生物が明らかに好ましいが、本発明はこの特別な株または微生物
に限定されない。本発明の意図は、本発明の範囲内のあらゆる他のＩＢ−９６２
１２生産性微生物、株または変異体を包含することである。

【００２８】 発酵： ミクロモノスポラ エスピー ＥＳ２５−００８は、適当な培地中で調節され
た条件下で培養したときに、抗生のＩＢ−９６２１２を生産する。この株は、栄
養分のある水性培地中で、好気性および中温（mesophilic）の条件下で、好まし
くは６．０〜８．０のｐＨ範囲における２４℃〜３５℃において生長する。広範
囲の液体培養基を微生物の培養のために利用できる。有用な培地は、同化できる
炭素源、例えばデンプン、デキストリン、糖密、グリセロール、グルコース、ス
クロース等、同化できる窒素源、例えばタンパク質、タンパク質の加水分解産物
、脱脂ミール、コーンスティープ（corn steep）、等、および有用な無機のアニ
オンおよびカチオン、例えばナトリウム、マグネシウム、カリウム、アンモニウ
ム、サルフェート、クロライド、ホスフェート、カーボネート、等を包含する培
地である。また、微量の元素を加えてもよい。エアレーションは、好ましくは、
発酵培地に空気を供給することによって達成される。攪拌は機械式インペラー（
impeller）によって提供される。慣用の発酵用タンクが本微生物の培養を行なう
ために十分に適当であることが見出された。発酵の異なった段階の間における栄
養になるものの添加およびｐＨの調節、同様に消泡剤の添加は、生産を増加しか
つ発泡を避けるために必要である。

【００２９】 好ましい微生物によってＩＢ−９６２１２を生産するために必要な欠かせない
工程を次に記載する： 冷凍菌糸体または凍結乾燥菌糸体を用いて始める。中温においてかつ好気性条
件において、前述したある種の成分を含有する培地を有する振り動かされたフラ
スコ中の最初の細胞を培養して菌糸体の集りを得る。この工程を必要なだけ数回
繰返し、集めた物質を接種物として使用し、適当な培地を有する１個または数個
の発酵タンクに接種する。所望するならばこれらのタンクをまた接種物として利
用できる。そしてこの工程を必要なときは数回繰返すことができる。またはこれ
らのタンクを必要とするブイヨン容量により生産段階として役立たせることもで
きる。時には、生産用培地は接種物として使用した培地と異なることがある。

【００３０】 第３表において、接種物の発生およびＩＢ−９６２１２の生産のために使用す
ることができる典型的な培地を記載した。

【００３１】 第３表接種物用培地 生産用培地 グルコース ５ｇ グルコース ５ｇ デンプン ２０ｇ デンプン ２０ｇ 牛肉エキス ３ｇ 大豆ミール １５ｇ 酵母エキス ５ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトン ５ｇ トリプトン ２ｇ ＣａＣＯ₃ ４ｇ ＣａＣＯ₃ ４ｇ ＮａＣｌ ４ｇ ＮａＣｌ ４ｇ Ｎａ₂ＳＯ₄ １ｇ Ｎａ₂ＳＯ₄ １ｇ ＫＣｌ ０．５ｇ ＫＣｌ ０．５ｇ ＭｇＣｌ₂ ２ｇ ＭｇＣｌ₂ ２ｇ Ｋ₂ＨＰＯ₄ ０．５ｇ Ｋ₂ＨＰＯ₄ ０．５ｇ 水道水で１，０００ｍＬにした 水道水で１，０００ｍＬにした

【００３２】 ＩＢ−９６２１２の生産は、細胞系マウス白血病Ｐ−３８８に対する全ブイヨ
ン検査により、またはＨＰＬＣにより、監視することができる。

【００３３】 ＩＢ−９６２１２の単離 抗生ＩＢ−９６２１２は、菌糸体ケーキから、ＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ：Ｈ₂Ｏ のような溶剤の適当な混合液を用いて抽出することにより単離することができる
。活性はより低い層において濃厚である。２回の繰返し抽出からの抽出液を一緒
にし、真空中で乾燥するまで蒸発させる。

【００３４】 粗活性抽出物からＩＢ−９６２１２の分離および精製は、従来のクロマトグラ
フィー技術の適当な組み合わせを使用することにより行なうことができる。

【００３５】 分別は、画分の抗腫瘍活性により、または濃Ｈ₂ＳＯ₄中のバニリンで目視され
るＴＬＣにより、またはダイオード配列検出器を有する分析ＨＰＬＣにより、導
くことができる。ＨＰＬＣ分析は、室温において（Waters ＲＣＭ８×１０、８ Ｃ１８ １０カートリッジ）、移動相としてメタノール：水、９２：８を使用し
、２ｍｍ／分の流速を使用して行ない、そして２２５ｎｍにおいてプロットした
。これらの条件においてＩＢ−９６２１２の保持時間は第１図に示されているよ
うに３．６４分である。

【００３６】 それらの種々なスペクトル特性の詳細な分析に基づいて、純粋な化合物はＩＢ
−９６２１２として同定できる（第２図〜第６図に再現されたデータを参照）。

【００３７】 Ｕ．Ｖ．スペクトルは第２図に報告したように２２５ｍｎにおいて吸収を示し
た。

【００３８】 ＫＢｒにおける赤外線吸収スペクトルは添付図面の第３図に示した。 １Ｈおよび１３ＣＮ．Ｍ．Ｒ．スペクトルは、それぞれ第４図および第５図に
示した。 １０２１において（Ｍ＋Ｎａ）^-ピークを示したＦＡＢ−ＭＳスペクトルは第 ６図に報告した。

【００３９】 ＩＢ−９６２１２の¹Ｈ−ＮＭＲデータを以下のように表にする。

【００４０】

【表２】

【００４１】 ＩＢ−９６２１２Ｂの¹Ｈ−ＮＭＲデータを以下のように表にする。

【００４２】

【表３】

【００４３】 ＩＢ−９６２１２及びＩＢ−９６２１２Ｂの¹³Ｃ−ＮＭＲデータを以下のよう
に表にする。

【００４４】

【表４】

【００４５】 図１〜６のデータを基に、我々の優先権主張するＧＢ特許出願に示された構造
を我々は最初に特定した。しかし、ＩＢ−９６２１２及びＩＢ−９６２１２Ｂ双
方のその後の図の追加データを参考にすると、次のようなＩＢ−９６２１２の構
造に達した。

【００４６】

【化７】

【００４７】 糖置換基を加水分解により除くことができ、下式の化合物ＩＢ−９６２１２Ｂ
が得られる。

【００４８】

【化８】

【００４９】 ＩＢ−９６２１２の糖を慣用手段で誘導し、またはＩＢ−９６２１２Ｂを慣用
手段で誘導して、糖を他の置換基に置き換えることにより、下式の化合物が得ら
れる。

【００５０】

【化９】

【００５１】 上式中、Ｒは任意に変更できる。

【００５２】 生物活性 化合物ＩＢ−９６２１２はミクロコッカスルテウスに対して優れた抗菌活性を
示し、黄色ブドウ球菌および枯草菌に対しては高濃度でかなりの活性を示す。液
状のミューラー−ヒントン媒体中で種々の濃度のＩＢ−９６２１２および選択さ
れた株を３５℃で培養することにより、化合物ＩＢ−９６２１２の抗菌活性を調
査した。

【００５３】 ＩＢ−９６２１２およびＩＢ−９６２１２Ｂは、数種の哺乳類癌細胞系に対し
て優れた抗癌活性（抗腫瘍活性）を示している。ベルゲロンら（２）およびシュ
ローダーら（６）が述べた方法論に従って腫瘍細胞を培養して、生体外で抗癌活
性を検知した。白血病、結腸癌、ＮＳＣ肺癌などのような数種のヒト腫瘍に対す
る活性が観察された。

【００５４】 ある種の腫瘍は他の腫瘍より高感度である。一例として、白血病細胞およびＭ
ＤＲ白血病細胞は、結腸癌より少なくとも１００倍の感度であった。

【００５５】 また、生体内活性は、Ｐ３８８を用い、ＱＤ１−５腹膜腔内注射を行った雌の
マウス群で評価し、表４に示す結果を得た。

【００５６】

【表５】

【００５７】 また、本発明は、活性成分として化合物ＩＢ−９６２１２およびＩＢ−９６２ １２Ｂまたは前記一般式で示される他の誘導体を含む薬剤の製剤、ならびに製剤
方法に関するものである。

【００５８】 薬剤組成物の例は、経口、局所または非経口投与に適した組成物を含む全ての
固体（錠剤、丸剤、カプセル、顆粒剤など）または液体（溶液、懸濁液または乳
濁液）を含み、且つ純粋な化合物を含んでもよく、あるいは非経口投与の場合に
は、組成物に無菌状が要求されることがある。

【００５９】 ＩＢ−９６２１２、ＩＢ−９６２１２Ｂまたは誘導体からなる薬剤組成物の正
確な投与量は、特定の調合、応用モード、および特定の位置、ホストおよび処置
される腫瘍に応じて多様に変化する。また、年齢、体重、性別、食事制限、投薬
の外皮、排泄頻度、ホストの状態、薬物併用、反応感度、症状の重さのような他
の要素も考慮しなければならない。投与は、最大許容量の範囲内で連続的または
周期的に行うことができる。

【００６０】 （実施例） 下記の実施例を参照して本発明をよく説明するが、実施例は本発明の理解を助
けるためのものであって、これに限定して解釈すべきではない。実施例で用いる パーセントは、特に断りのない限り、重量％で表している。温度は摂氏度で表し
ている。全ての培養は２８℃で行い、フラスコはオービタルシェーカー中で震と
うする。全ての媒体と受容体は無菌状であり、全ての培養過程も無菌状で行われ
る。

【００６１】 実施例１ 保存培養：ミクロモノスポラ種ＥＳ２５−００８純培養菌の全ての液体培養基
を２０％グリセロールとして冷凍保存する。

【００６２】 接種物：冷凍培養または十分成熟した寒天斜面培養菌（５容量％）を用いて、
２５０ｃｃの震とうフラスコに収容された前記１００ｍｌの接種媒体に接種する
。このフラスコを４８時間培養する。２Ｌエルレンメイヤーフラスコ中の５００
ｍｌの同一媒体に、１０％の第１ステージの接種物を接種する。このフラスコを
４８時間培養する。

【００６３】 醗酵：１７Ｌの醗酵タンク内で、前記した５０Ｌの生産媒体に２．５Ｌの第２
ステージの接種物を接種する。醗酵は、４００ｒｐｍの攪拌と０．５Ｖ／Ｖ．Ｍ
の空気流下で、９６時間行う。Ｐ−３８８に対する全液体培養基の分析またはＨ
ＰＬＣ分析により二次メラボライトの生成を監視した。

【００６４】 実施例２ 分離：収穫された１０Ｌの全ての液体培養基をろ過して、生物体および他の固
体を分離した。ＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ：Ｈ₂Ｏ（２：１：１）の混合溶剤（２． ４Ｌ）を用いて菌糸体ケーキを２度抽出し、活性を低層部に濃縮させた。真空下
で有機溶剤を濃縮、揮発させて４５０ｍｌの粗抽出物を得た。

【００６５】 溶離溶剤としてヘキサン／酢酸エチルを用いて、抽出物をシリカゲル上でクロ
マトグラフ分析した。ヘキサン／酢酸エチル３０：７０を用いて、４４ｍｇの抗
癌活性をもつ成分を溶離した。カラムクロマトグラフイーによりシリカゲル上で
さらなる精製を行い、クロロホルム／メタノール９２：８を用いて活性を溶離し
、１９ｍｇの乾燥物を作成した。溶離溶剤としてメタノール／水９０：１０を用
いてカラムクロマトグラフイーによりＣＩ８逆相上で最終精製を行い、１２ｍｇ
の純ＩＢ−９６２１２を作成した。

【００６６】 実施例３ 加水分解によるＩＢ−９６２１２Ｂ：３１ｍｇのＩＢ−９６２１２を３ｍｌの
ＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ１：１に溶解し、これを１０ｍｌの１５％Ｈ₂ＳＯ₄溶液に
加えて、３時間還流した。反応混合物を１５ｍｌの水で希釈し、２５ｍｌのＣＨ
Ｃｌ₃を用いて２度抽出し、３０ｍｇの反応生成物を得、これをシリカゲル上で クロマトグラフ分析し、ＣＨＣｌ₃：ＣＨ₃ＯＨ９６：４を用いて溶離を行った。
加水分解生成物として２０ｍｇのアグリコンを得た。

【００６７】 実施例４ 生物活性：用いた抗癌細胞は、Ｐ−３８８（ＤＢＡ／２マウスから得たリンパ
系新生物の懸濁培養菌）、Ａ−５４９（ヒト大球性肺癌の単層培養菌）、ＨＴ−
２９（ヒト結腸癌の単層培養菌）、ＭＥＬ−２８（ヒト黒色腫の単層培養菌）、
その他の記載した細胞系であった。

【００６８】 Ｐ−３８８細胞を、表示濃度の薬物を含有する１ｍｌ試料のＭＥＭ５ＦＣＳ中
で容器当たり１×１０^-4細胞濃度として１６ｍｍの容器に接種した。対照標準と
して無薬剤の培養菌の分離セットを接種して、細胞が急激な成長相に留まること
を確認した。測定はすべて２回実施した。３７℃、１０％ＣＯ₂雰囲気、９８％ 湿度下で３日培養後、０．１％クリスタルバイオレットを用いて容器を着色した
。薬物を用いた容器の成長と無薬物の対照標準容器とを比較して、ＩＣ５０を算
出した。

【００６９】 ＩＣ５０（ｍｃｇ／ｍｌ）として表した活性を表５に掲載した。

【００７０】

【表６】

【００７１】 試験対象の微生物とＩＢ−９６２１２を、液状のミューラー−ヒントン媒体を
用い３５℃で培養して、化合物ＩＢ−９６２１２の抗菌活性を調査した。ＩＢ−
９６２１２を用い２４時間の培養後に、培養媒体の濁り度を観察してＭＩＣを測 定した。表６にその結果を示した。ＩＢ−９６２１２は、グラム陽性細菌に対し
て細菌性の活性を示す。

【００７２】 表６ 微生物 ＭＩＣ（μｇ／ｍｌ） 大腸菌 ＞１００ 肺炎杆菌 ＞１００ 緑膿菌 ＞１００ 黄色ぶどう球菌 １００ 枯草菌 １００ ミクロコッカス ルテウス ０．４

【００７３】 参考文献 以下のような参考文献がここで引用され、参考のためここに取入れられる。

【００７４】

【表７】

【００７５】 本願発明は、好ましい態様を含め詳細に記述された。しかし、本願の開示内容
を考慮して当業者なら修正及び／または改善を行なうことができることが理解さ
れるであろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】 第１図は精製されたＩＢ−９６２１２のＨＰＬＣクロマトグラムである。

【図２】 第２図は精製されたＩＢ−９６２１２の紫外線スペクトル（ＵＶ）である。

【図３】 第３図は精製されたＩＢ−９６２１２の赤外線スペクトル（ＩＲ）である。

【図４】 第４図は精製されたＩＢ−９６２１２のプロトンＮＭＲ（１Ｈ）スペクトルで
ある。

【図５】 第５図は精製されたＩＢ−９６２１２の炭素−１３ＮＭＲ（１３Ｃ）スペクト
ルである。

【図６】 第６図は精製されたＩＢ−９６２１２の質量スペクトルである。

【図７】 第７図はアセトン−ｄ₆の中で取られたＩＢ−９６２１２のＨＭＢＣ ＮＭＲ スペクトルである。

【図８】 第８図はアセトン−ｄ₆の中で取られたＩＢ−９６２１２のＣＯＳＹ ＮＭＲ スペクトルである。

【図９】 第９図はアセトン−ｄ₆の中で取られたＩＢ−９６２１２のＨＭＱＣ １３２ Ｈ_Z ＮＭＲスペクトルである。

【図１０】 第１０図はＩＢ−９６２１２ＢのＮＭＲ相関関係を示す。

【図１１】 第１１図はＩＢ−９６２１２Ｂの質量スペクトルである。

【図１２】 第１２図はアセトン−ｄ₆の中で取られたＩＢ−９６２１２ＢのＨＭＢＣ６０ ｍｓＮＭＲスペクトルである。

【図１３】 第１３図はアセトン−ｄ₆の中で取られたＩＢ−９６２１２ＢのＨＭＢＣ１１ ０ｍｓＮＭＲスペクトルである。

【図１４】 第１４図はアセトン−ｄ₆の中で取られたＩＢ−９６２１２ＢのＣＯＳＹ Ｎ ＭＲスペクトルである。および

【図１５】 第１５図はアセトン−ｄ₆の中で取られたＩＢ−９６２１２ＢのＨＭＱＣ１４ ５Ｈ_ZＮＭＲスペクトルである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） //(Ｃ０７Ｄ 493/20 (Ｃ０７Ｄ 493/20 313:00 313:00 311:00） 311:00） (Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:29） Ｃ１２Ｒ 1:29） (Ｃ１２Ｐ 17/18 (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:29） Ｃ１２Ｒ 1:29） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，Ｕ Ｓ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ロメロ、フランシスコ スペイン国 オンゾニラ、モド、２．02 イ ２．03、 エディフィシオ セイ、ポ リグ、インダストリアル、 インスチチュ ート バイオマル ソシエダッド アノニ マ内 (72)発明者 エスプリエゴ、フェルナンド スペイン国 オンゾニラ、モド、２．02 イ ２．03、 エディフィシオ セイ、ポ リグ、インダストリアル、 インスチチュ ート バイオマル ソシエダッド アノニ マ内 (72)発明者 フェルナンデズ − プエンテス、ホセ ルイス スペイン国 オンゾニラ、モド、２．02 イ ２．03、 エディフィシオ セイ、ポ リグ、インダストリアル、 インスチチュ ート バイオマル ソシエダッド アノニ マ内 (72)発明者 フェルナンデズ − シメノ、ローザ イ ザベル スペイン国 オンゾニラ、モド、２．02 イ ２．03、 エディフィシオ セイ、ポ リグ、インダストリアル、 インスチチュ ート バイオマル ソシエダッド アノニ マ内 (72)発明者 ペレズ − バズ、ジュリア スペイン国 オンゾニラ、モド、２．02 イ ２．03、 エディフィシオ セイ、ポ リグ、インダストリアル、 インスチチュ ート バイオマル ソシエダッド アノニ マ内 Ｆターム(参考） 4B064 AE59 BH02 BH04 BH05 BH06 CA03 DA05 4B065 AA35X AC14 BA22 CA18 CA44 4C071 AA04 BB02 CC13 DD32 EE07 FF18 GG01 HH05 HH09 KK17 LL01 4C086 AA01 AA02 AA03 CA03 MA01 MA04 NA14 ZB26 ZB27

Claims (13)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式： 【化１】 の化合物（式中、Ｒは水素または置換基である）。
2. 【請求項２】 Ｒが水素であるか、または、糖基（ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
   ｇｒｏｕｐ）、ヒドロカルビル基、アシル基または複素環基から選択される基で
   ある、請求項１に記載の化合物。
3. 【請求項３】 以下の構造： 【化２】 を有するＩＢ−９６２１２としてここで言及される化合物、または、以下の構造
   ： 【化３】 を有するＩＢ−９６２１２Ｂとしてここで言及される化合物である、請求項１に
   記載の化合物。
4. 【請求項４】 ＩＢ−９６２１２としてここで言及される化合物であって：
   図１は精製されたＩＢ−９６２１２のＨＰＬＣクロマトグラムであり； 図２は精製されたＩＢ−９６２１２の紫外スペクトル（ＵＶ）であり； 図３は精製されたＩＢ−９６２１２の赤外スペクトル（ＩＲ）であり； 図４は精製されたＩＢ−９６２１２のプロトンＮＭＲ（１Ｈ）スペクトルであり
   ； 図５は精製されたＩＢ−９６２１２のカーボン−１３ＮＭＲ（１３Ｃ）スペクト
   ルであり；そして、 図６は精製されたＩＢ−９６２１２のマススペクトルである、化合物。
5. 【請求項５】 化合物ＩＢ−９６２１２を製造することが可能な微生物の菌
   を、調整された条件下で水性培養液（ｎｕｔｒｉｅｎｔ ｍｅｄｉｕｍ）中で培
   養することを包含する、請求項３または４に記載の化合物ＩＢ−９６２１２の製
   法。
6. 【請求項６】 培養液（ｃｕｌｔｕｒｅ ｂｒｏｔｈ）から化合物ＩＢ−９
   ６２１２を単離し精製することを更に包含する、請求項５に記載の製法。
7. 【請求項７】 ＩＢ−９６２１２を製造する微生物が、実質的に、受託番号
   ＣＥＣＴ−３３３３の下にＣｏｌｅｃｃｉｏｎ Ｅｓｐａｎｏｌａ ｄｅ Ｃｕ
   ｌｔｉｖｏｓ Ｔｉｐｏから入手可能な純粋な培養株ＥＳ２５−００８である、
   請求項５または６に記載の製法。
8. 【請求項８】 請求項３に記載の化合物ＩＢ−９６２１２を加水分解するこ
   とを包含する、請求項３に記載の化合物ＩＢ−９６２１２Ｂの製法。
9. 【請求項９】 Ｒが水素である請求項１に記載の化合物の誘導（ｄｅｒｉｖ
   ａｔｉｓａｔｉｏｎ）を包含する、Ｒが水素でない請求項１に記載の化合物の製
   法。
10. 【請求項１０】 請求項１に記載の化合物の使用であって、該化合物に感受
    性のある哺乳動物の癌の治療のための前記の使用。
11. 【請求項１１】 請求項１に記載の化合物を含む製剤組成物。
12. 【請求項１２】 哺乳動物の１種以上の腫瘍に対して有効量の化合物ＩＢ−
    ９６２１２または化合物ＩＢ−９６２１２Ｂを含む、抗腫瘍製剤組成物。
13. 【請求項１３】 受託番号（ａｃｃｅｓｉｏｎ ｎｕｍｂｅｒ）ＣＥＣＴ−
    ３３３３の下に入手可能なミクロモノスポラ（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ）
    ｓｐ．ＥＳ２５−００８株。