JP2001221798A - Immunoassay instrument - Google Patents
Immunoassay instrumentInfo
- Publication number
- JP2001221798A JP2001221798A JP2000030640A JP2000030640A JP2001221798A JP 2001221798 A JP2001221798 A JP 2001221798A JP 2000030640 A JP2000030640 A JP 2000030640A JP 2000030640 A JP2000030640 A JP 2000030640A JP 2001221798 A JP2001221798 A JP 2001221798A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- sample
- reaction
- indicator
- immunoassay device
- display section
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 52
- 239000000835 fiber Substances 0.000 claims abstract description 29
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims abstract description 26
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 26
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims abstract description 26
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 19
- ZBQZBWKNGDEDOA-UHFFFAOYSA-N eosin B Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC([N+]([O-])=O)=C(O)C(Br)=C1OC1=C2C=C([N+]([O-])=O)C(O)=C1Br ZBQZBWKNGDEDOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 claims description 12
- OOYIOIOOWUGAHD-UHFFFAOYSA-L disodium;2',4',5',7'-tetrabromo-4,5,6,7-tetrachloro-3-oxospiro[2-benzofuran-1,9'-xanthene]-3',6'-diolate Chemical compound [Na+].[Na+].O1C(=O)C(C(=C(Cl)C(Cl)=C2Cl)Cl)=C2C21C1=CC(Br)=C([O-])C(Br)=C1OC1=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 OOYIOIOOWUGAHD-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 claims description 4
- GVKCHTBDSMQENH-UHFFFAOYSA-L phloxine B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=C(Cl)C(Cl)=C(Cl)C(Cl)=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 GVKCHTBDSMQENH-UHFFFAOYSA-L 0.000 abstract description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 19
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 13
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 11
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 7
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 7
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 6
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 5
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 4
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 3
- SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L eosin Y Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C([O-])=C(Br)C=C21 SEACYXSIPDVVMV-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- SJEYSFABYSGQBG-UHFFFAOYSA-M Patent blue Chemical compound [Na+].C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C(=CC(=CC=1)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 SJEYSFABYSGQBG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 2
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 2
- 239000000982 direct dye Substances 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 2
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N propan-1-ol Chemical compound CCCO BDERNNFJNOPAEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 239000001018 xanthene dye Substances 0.000 description 2
- UWEZBKLLMKVIPI-UHFFFAOYSA-N 2,5-dinitrophenol Chemical compound OC1=CC([N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]([O-])=O UWEZBKLLMKVIPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N Bromocresolgreen Chemical compound CC1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C(=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 FRPHFZCDPYBUAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N Ethyl urethane Chemical compound CCOC(N)=O JOYRKODLDBILNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003759 clinical diagnosis Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L congo red Chemical compound [Na+].[Na+].C1=CC=CC2=C(N)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3)C3=CC=C(C=C3)/N=N/C3=C(C4=CC=CC=C4C(=C3)S([O-])(=O)=O)N)=CC(S([O-])(=O)=O)=C21 IQFVPQOLBLOTPF-HKXUKFGYSA-L 0.000 description 1
- 239000003256 environmental substance Substances 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000004745 nonwoven fabric Substances 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009597 pregnancy test Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- -1 urine Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003466 welding Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analyzing Non-Biological Materials By The Use Of Chemical Means (AREA)
Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、液状の試料に含有
されている検体をイムノクロマトグラフ法により検出す
るために使用される免疫測定具に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to an immunoassay used for detecting a sample contained in a liquid sample by immunochromatography.
【０００２】[0002]
【従来の技術】イムノクロマトグラフ法は免疫測定法の
一種である。このイムノクロマトグラフ法に用いられる
免疫測定具は、試料採取部、試薬相、判定表示相がクロ
マトグラフ材上に形成されることにより構成されてい
る。2. Description of the Related Art Immunochromatography is one type of immunoassay. The immunoassay device used in the immunochromatography method is configured by forming a sample collection section, a reagent phase, and a judgment display phase on a chromatographic material.
【０００３】図３はイムノクロマトグラフ法に一般的に
用いられている免疫測定具を示し、厚紙等の帯状の支持
材１上に、試料採取部２，試薬相３，判定表示相４が順
に設けられている。試料採取部２，試薬相３，判定表示
相４は、毛管現象によって試料が展開できるクロマトグ
ラフ材が使用されており、上流側の部位が下流側の部位
の一部の上に重なるように並べられている。FIG. 3 shows an immunoassay device generally used for immunochromatography, in which a sampling section 2, a reagent phase 3, and a judgment display phase 4 are provided in this order on a band-like support material 1 such as cardboard. Have been. The sample collection unit 2, the reagent phase 3, and the judgment display phase 4 are made of a chromatographic material that allows the sample to be developed by capillary action, and are arranged so that the upstream site overlaps a part of the downstream site. Have been.
【０００４】試料採取部２は液状の試料を吸収して展開
させるものである。試薬相３は試料中に含まれる検体
（抗原）を酵素、蛍光、ラジオアイソトープ、金コロイ
ド、ラテックス等の第１抗体により標識化する部位であ
る。判定表示相４は標識化された検体を捕捉する反応を
行う部位である。このため、判定表示相４では、試料採
取部よりクロマトグラフ材を通過し、試薬相３で第１抗
体により標識化が行われた検体を第２抗体とサンドイッ
チ複合体を形成させ、これにより試料中に含まれる検体
を検出するようになっている。The sampling section 2 absorbs and develops a liquid sample. The reagent phase 3 is a site for labeling a specimen (antigen) contained in the sample with a first antibody such as an enzyme, fluorescence, radioisotope, gold colloid, or latex. The judgment display phase 4 is a site where a reaction for capturing the labeled sample is performed. For this reason, in the judgment display phase 4, the specimen that has passed through the chromatographic material from the sample collection section and that has been labeled with the first antibody in the reagent phase 3 forms a sandwich complex with the second antibody, thereby The sample contained therein is detected.
【０００５】これらに用いられる抗体は、液体試料中に
含まれる抗原に対して特異性が高いため、様々な夾雑物
が混在する試料から微量の抗原を鋭敏、且つ簡易に検出
して同定することができる。従って、免疫測定具は、臨
床診断や、環境化学的分析、食品衛生管理等を中心とし
た様々な分野で利用されている。[0005] Since the antibodies used in these methods have high specificity for the antigen contained in the liquid sample, it is necessary to detect and identify a trace amount of antigen from a sample containing various contaminants in a sensitive and simple manner. Can be. Therefore, the immunoassay device is used in various fields such as clinical diagnosis, environmental chemical analysis, and food hygiene management.
【０００６】このような免疫測定具では、判定表示部４
で的確に免疫反応が行われたことを試験者に示す必要が
あり、このため、判定表示部４には反応終了表示部５が
連続するように設けられている。この反応終了表示部５
としては、判定表示相４と同様に抗原抗体反応を利用し
たものが多く用いられていた。しかしながら、抗原抗体
反応による判定終了の表示は、試料中に含まれる抗原の
量や、夾雑物の種類、ｐＨ、その他の要因に影響される
ことために明確でなく、判定終了合図をより安定して表
示できる免疫測定具が必要となっている。In such an immunoassay device, the judgment display section 4
Therefore, it is necessary to indicate to the tester that the immune reaction has been properly performed. Therefore, the determination display section 4 is provided with a reaction end display section 5 so as to be continuous. This reaction end display section 5
In many cases, a method utilizing an antigen-antibody reaction in the same manner as in the judgment display phase 4 was used. However, the indication of the completion of the determination by the antigen-antibody reaction is not clear because it is affected by the amount of antigen contained in the sample, the type of contaminants, pH, and other factors, and the determination completion signal is more stable. There is a need for an immunoassay device that can display information.
【０００７】特開平４−３５３７６４号公報及び特許第
２９４２０８７号公報には、以上のように要求されてい
る判定終了を表示するための従来の免疫測定具が開示さ
れている。[0007] Japanese Patent Application Laid-Open Nos. 4-353768 and 294,087 disclose conventional immunoassay devices for displaying the end of the determination required as described above.
【０００８】特開平４−３５３７６４号公報では、ブロ
モクレゾールグリーン、２，５ジニトロフェノール、ブ
ロムフェノールブルーを用い、これらの発色剤を濾紙に
吸収、乾燥させて反応終了表示部としている。これらの
発色剤は水に濡れたときに発色するため、反応の終了を
表示するものである。In Japanese Patent Application Laid-Open No. 4-353768, bromocresol green, 2,5-dinitrophenol, and bromophenol blue are used, and these color formers are absorbed by filter paper and dried to form a reaction completion indicator. Since these coloring agents develop color when wet with water, they indicate the end of the reaction.
【０００９】一方、特許第２９４２０８７号公報では、
指示薬として直接染料であるペンゾパープリン４Ｂ或い
はコンゴーレッドを用いている。この直接染料を濾紙に
吸収させて染色することにより反応終了表示部としてい
る。On the other hand, in Japanese Patent No. 2942087,
Penzoperpurin 4B or Congo Red which is a direct dye is used as an indicator. The direct dye is absorbed by filter paper and dyed to form a reaction completion indicator.
【００１０】[0010]
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の従来技術では、いずれも指示薬を保持するために濾紙
を用いているため、濾紙を免疫測定具に組み込む必要が
あり、免疫測定具の構成部品が多くなり、組立が面倒と
なっている。又、免疫測定具では、正確な判定結果を得
る目的でコーティング剤（ブロッキング剤）が塗布され
るが、上述した指示薬はコーティング剤のｐＨによる影
響を受けて変色する。このため、コーティング後には、
変色した状態から変色前の色調に戻す必要があり、その
操作が面倒となっている。However, in each of these prior arts, since filter paper is used to hold the indicator, it is necessary to incorporate the filter paper into the immunoassay tool. More and more, the assembly is troublesome. In the immunoassay device, a coating agent (blocking agent) is applied for the purpose of obtaining an accurate determination result, but the above-mentioned indicator is discolored under the influence of the pH of the coating agent. For this reason, after coating,
It is necessary to return from the discolored state to the color tone before the discoloration, and the operation is troublesome.
【００１１】以上に加えて、特開平４−３５３７６４号
公報では、試料のｐＨにより発色剤の発色が正常に行わ
れない場合があるばかりでなく、発色剤が発色しても液
状の試料の通過に伴って試料と共に流失するため、試験
者は絶えず指示薬を目視する必要があり、反応の終了を
確認する場合の利便性に欠けている。[0011] In addition to the above, in Japanese Patent Application Laid-Open No. 4-353774, not only the coloring of the coloring agent may not be performed normally depending on the pH of the sample, but also the passage of the liquid sample even if the coloring agent is colored. As a result, the tester must constantly observe the indicator because it is washed away with the sample, which is inconvenient when confirming the completion of the reaction.
【００１２】本発明はこのような従来の問題点を考慮し
てなされたものであり、反応の終了を確実に、しかも長
時間表示することができる免疫測定具を提供することを
目的とする。The present invention has been made in view of such conventional problems, and an object of the present invention is to provide an immunoassay device capable of displaying the end of a reaction reliably and for a long time.
【００１３】[0013]
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するた
め、請求項１の発明は、液状の試料を吸収して展開し、
試料中の検体を標識化した後、標識化された検体を捕捉
して判定表示を行うイムノクロマトグラフ法に用いる免
疫測定具において、前記判定表示を行う部位に反応終了
表示部が連続しており、この反応終了表示部が、酸含有
のアルコール溶液に溶解した指示薬をニトロセルロース
繊維からなるクロマトグラフ材に吸収させて乾燥するこ
とにより構成されていることを特徴とする。In order to achieve the above object, the invention according to claim 1 absorbs and develops a liquid sample,
After labeling the sample in the sample, in the immunoassay used for the immunochromatography method of capturing the labeled sample and performing determination and display, the reaction completion display portion is continuous to the site for performing the determination and display, The reaction completion display section is characterized in that the indicator dissolved in the acid-containing alcohol solution is absorbed by a chromatographic material composed of nitrocellulose fibers and dried.
【００１４】この発明では、指示薬が溶解している酸性
のアルコール溶液をニトロセルロース繊維に吸収させ、
乾燥させることにより、指示薬がニトロセルロース繊維
からなるクロマトグラフ材に直接に固定される。この指
示薬は酸性側の色調でクロマトグラフ材に固定されてお
り、免疫測定具にコーティング剤（ブロッキング剤）を
塗布しても、酸性側の色調が保持されるため一定時間変
色することがない。このため、変色を戻す操作が不要と
なる。又、指示薬を固定するための濾紙が不要となるた
め、簡単な構造とすることができる。According to the present invention, a nitrocellulose fiber absorbs an acidic alcohol solution in which an indicator is dissolved,
By drying, the indicator is fixed directly to the chromatographic material made of nitrocellulose fibers. This indicator is fixed to the chromatographic material in a color tone on the acidic side. Even if a coating agent (blocking agent) is applied to the immunoassay device, the color tone on the acid side is maintained, so that the indicator does not discolor for a certain period of time. For this reason, the operation of returning the discoloration becomes unnecessary. Further, since a filter paper for fixing the indicator is not required, a simple structure can be obtained.
【００１５】この発明の免疫測定具では、試料を吸収
し、展開することにより、検体が標識化されて検体の判
定表示を行う。反応終了表示部では、試料が通過するこ
とにより、指示薬が変色するため、反応の終了を表示す
る。このとき、指示薬はクロマトグラフ材に固定されて
いるため、試料の通過と共に流失することがない。従っ
て、判定の終了を確実に、しかも長時間表示することが
できる。In the immunoassay device of the present invention, the sample is labeled by absorbing and developing the sample, and the sample is determined and displayed. The reaction completion display section displays the completion of the reaction because the indicator discolors as the sample passes. At this time, since the indicator is fixed to the chromatographic material, the indicator does not flow away as the sample passes. Therefore, the end of the determination can be displayed for a long time without fail.
【００１６】請求項２の発明は、請求項１記載の発明で
あって、前記指示薬が酸性染料であることを特徴とす
る。[0016] The invention of claim 2 is the invention of claim 1, wherein the indicator is an acid dye.
【００１７】酸性染料はニトロセルロース繊維を染色す
ることにより、ニトロセルロース繊維に固定されるた
め、試料が通過しても流出することがなく、安定した表
示を長時間行うことができる。Since the acid dye is fixed to the nitrocellulose fiber by dyeing the nitrocellulose fiber, it does not flow out even if the sample passes, and stable display can be performed for a long time.
【００１８】請求項３の発明は、請求項２記載の発明で
あって、前記酸性染料は、エオシンＢ、フロキシンＢ、
ブロムフェノールブルー又はこれらの関連物質の内の少
なくとも一種であることを特徴とする。The invention of claim 3 is the invention of claim 2, wherein the acid dye is eosin B, phloxin B,
Bromophenol blue or at least one of these related substances.
【００１９】これらの酸性染料は、いずれもニトロセル
ロース繊維を良好に染色するため、ニトロセルロース繊
維に確実に固定化される。All of these acid dyes dye nitrocellulose fibers favorably, and thus are reliably immobilized on nitrocellulose fibers.
【００２０】[0020]
【発明の実施の形態】図１は本発明の一実施の形態の免
疫測定具１０であり、支持材１１上に試料採取部１２，
試薬相１３，判定表示相１４，反応終了表示部１５が連
続するように順に並べられている。支持材１１は上述し
た各部位を支持するものであり、厚紙、プラスチック片
等の適宜の硬質材を帯状に成形して使用される。試料採
取部１２，試薬相１３，判定表示相１４及び反応終了表
示部１５は、この支持材１１上に接着、溶着、係着等に
よって接合されている。この接合によって試料採取部１
２，試薬相１３，判定表示相１４及び反応終了表示部１
５に剛性が付与されるため、これらの部位が撓んだり、
変形することがなくなる。FIG. 1 shows an immunoassay device 10 according to one embodiment of the present invention.
The reagent phase 13, the judgment display phase 14, and the reaction end display section 15 are arranged in order so as to be continuous. The support material 11 supports each of the above-described portions, and is formed by forming an appropriate hard material such as a cardboard or a plastic piece into a belt shape. The sample collection section 12, the reagent phase 13, the judgment display phase 14, and the reaction end display section 15 are joined to the support material 11 by bonding, welding, fastening, or the like. By this joining, the sampling section 1
2, reagent phase 13, judgment display phase 14, and reaction end display section 1
5 is given rigidity, so that these parts bend,
No deformation.
【００２１】なお、検査に供される液状の試料として
は、尿、血液、血清等の体液や、液体に懸濁した菌体等
を選択することができる。尿に用いる場合には、妊娠の
有無を早期に判定することもできる。As the liquid sample to be tested, body fluids such as urine, blood, and serum, and cells suspended in the liquid can be selected. When used for urine, the presence or absence of pregnancy can be determined at an early stage.
【００２２】試料採取部１２，試薬相１３，判定表示相
１４及び反応終了表示部１５は、いずれも液状の試料が
展開可能なクロマトグラフ材によって形成されている。
クロマトグラフ材としては、濾紙等のセルロース系繊
維、不織布、棉系繊維、ナイロン、ウレタン等のプラス
チック系繊維或いはこれらの混合繊維、その他のものを
使用することができる。試料採取部１２，試薬相１３，
判定表示相１４及び反応終了表示部１５としては、同じ
クロマトグラフ材であっても良く、異なったクロマトグ
ラフ材であっても良く、それぞれの部分が一体化しても
良い。この場合において、反応終了表示部１５のクロマ
トグラフ材としては、ニトロセルロース繊維を用いるも
のである。The sample collecting section 12, the reagent phase 13, the judgment display phase 14, and the reaction end display section 15 are all formed of a chromatographic material on which a liquid sample can be developed.
As the chromatographic material, cellulosic fibers such as filter paper, non-woven fabrics, cotton fibers, plastic fibers such as nylon and urethane, or mixed fibers thereof, and others can be used. Sampling section 12, reagent phase 13,
The judgment display phase 14 and the reaction end display section 15 may be the same chromatographic material or different chromatographic materials, and the respective portions may be integrated. In this case, a nitrocellulose fiber is used as the chromatographic material of the reaction end display section 15.
【００２３】並べられている試料採取部１２，試薬相１
３，判定表示相１４及び反応終了表示部１５は、その一
部が隣接した部位に部分的に重ねられている。この実施
の形態において、試料採取部１２はその下流側の部分が
試薬相１３の上に重ねられており、試薬相１３の下流側
の部分が判定表示相１４の上に重ねられている。一方、
反応終了表示部１５は、その上流側の部分が判定表示相
１４の上に重ねられている。このように隣接した部位が
重ねられることにより、液状の試料を試料採取部１２か
ら反応終了表示部１５に円滑に展開させることができ
る。The sample collection unit 12 and the reagent phase 1 which are arranged
3. The judgment display phase 14 and the reaction end display section 15 are partially overlapped with adjacent portions. In this embodiment, the downstream portion of the sample collection section 12 is overlaid on the reagent phase 13, and the downstream portion of the reagent phase 13 is overlaid on the determination display phase 14. on the other hand,
The upstream side of the reaction end display section 15 is superimposed on the determination display phase 14. By overlapping the adjacent portions in this manner, the liquid sample can be smoothly developed from the sample collection section 12 to the reaction completion display section 15.
【００２４】試料採取部１２は液状の試料に浸漬される
或いは液状の試料が滴下や塗布される部位であり、これ
らの操作により試料は試料採取部１２から試薬相１３，
判定表示相１４，反応終了表示部１５５に順に展開され
る。The sample collecting section 12 is a part which is immersed in a liquid sample or where a liquid sample is dropped or applied.
The judgment display phase 14 and the reaction end display section 155 are sequentially developed.
【００２５】試薬相１３は第１抗体によって試料中の検
体を標識化する部位である。このため、第１抗体は試料
中に含まれている検体（抗原）に特異的に結合する物質
が使用される。第１抗体は、金コロイド、酵素、蛍光、
ラジオアイソトープ、着色ラテックス等によって検体を
標識化するものであり、試薬相１３のクロマトグラフ材
に含浸されている。The reagent phase 13 is a site for labeling a sample in a sample with the first antibody. For this reason, a substance that specifically binds to the specimen (antigen) contained in the sample is used as the first antibody. The first antibody is colloidal gold, enzyme, fluorescent,
The sample is labeled with a radioisotope, a colored latex, or the like, and is impregnated in the chromatographic material of the reagent phase 13.
【００２６】判定表示相１４は試薬相１３で標識化され
た検体を捕捉する第２抗体が含浸されている。判定表示
相１４では、第２抗体が標識化された検体と反応してサ
ンドイッチ複合体を形成することにより、着色或いは発
色するため、試料中における検体の有無を判定すること
ができる。The determination display phase 14 is impregnated with a second antibody that captures the sample labeled with the reagent phase 13. In the determination display phase 14, since the second antibody reacts with the labeled sample to form a sandwich complex, thereby coloring or developing, the presence or absence of the sample in the sample can be determined.
【００２７】反応終了表示部１５は判定表示相１４に連
続するように配置されており、判定表示相１４を通過し
た試料が展開される。反応終了表示部１５は上述したよ
うにクロマトグラフ材としてニトロセルロース繊維が使
用されており、このニトロセルロース繊維に指示薬を固
定化することにより構成されている。The reaction end display section 15 is arranged so as to be continuous with the judgment display phase 14, and the sample that has passed through the judgment display phase 14 is developed. As described above, the reaction end display section 15 uses nitrocellulose fibers as a chromatographic material, and is configured by fixing an indicator to the nitrocellulose fibers.
【００２８】反応終了表示部１５の指示薬としては、酸
性染料が用いられる。この酸性染料としては、エオシン
Ｂ、フロキシンＢ、ブロムフェノールブルー又はこれら
の関連物質の内の一種を選択することができる。An acid dye is used as an indicator of the reaction completion display section 15. As the acidic dye, eosin B, phloxin B, bromophenol blue, or one of these related substances can be selected.
【００２９】エオシンＢ及びフロキシンＢは共に、陰イ
オン性キサンテン染料であり、酸性側で無色、アルカリ
性側の鮮明な桃色に発色する。具体的には、エオシンＢ
は約２．５以上のｐＨで桃色に発色し、フロキシンＢは
約３．３以上のｐＨで桃色に発色する。Both eosin B and phloxin B are anionic xanthene dyes, which are colorless on the acidic side and bright pink on the alkaline side. Specifically, eosin B
Develops pink at a pH of about 2.5 or higher, and phloxin B develops pink at a pH of about 3.3 or higher.
【００３０】ブロムフェノールブルーは酸性指示薬とし
て使用されているスルホフタレイン系染料である。ブロ
ムフェノールブルーは酸性色が黄色、アルカリ性色が青
色であり、約３．０〜４．６のｐＨがその変色点となっ
ている。Bromphenol blue is a sulfophthalein dye used as an acidic indicator. Bromphenol blue has a yellow acidic color and a blue alkaline color, and has a pH of about 3.0 to 4.6 as its discoloration point.
【００３１】これらの酸性染料は、所定のｐＨの液状の
試料と接触することによって変色し、この変色によって
試薬相１３及び判定表示相１４を液状の試料が通過して
反応が終了したことを表示する。ここで、酸性染料はニ
トロセルロース繊維からなるクロマトグラフ材を染色
し、染色後はニトロセルロース繊維に固定化されて移動
することがない。このため、液状の試料がクロマトグラ
フ材を通過しても、酸性染料が流失することがなく、反
応の終了を長時間表示することができる。These acid dyes change color when they come into contact with a liquid sample having a predetermined pH, and the color changes indicate that the liquid sample has passed through the reagent phase 13 and the judgment display phase 14 and the reaction has been completed. I do. Here, the acid dye dyes a chromatographic material made of nitrocellulose fibers, and after dyeing, is immobilized on the nitrocellulose fibers and does not move. Therefore, even if the liquid sample passes through the chromatographic material, the acid dye does not flow away, and the end of the reaction can be displayed for a long time.
【００３２】酸性染料としては、以上の化合物の関連物
質を用いることができる。関連物質としては、例えば、
キサンテン染料であるエオシンＹを使用することができ
る。エオシンＹは上述した指示薬と同様にニトロセルロ
ース繊維を染色することにより固定化される。この固定
化状態で、エオシンＹは酸性領域で黄色から桃色に変色
するため、反応の終了を長時間表示することができる。As the acid dye, substances related to the above compounds can be used. As related substances, for example,
Eosin Y, a xanthene dye, can be used. Eosin Y is immobilized by dyeing nitrocellulose fibers in the same manner as the indicator described above. In this immobilized state, eosin Y changes color from yellow to pink in the acidic region, so that the end of the reaction can be displayed for a long time.
【００３３】以上の指示薬のニトロセルロース繊維への
固定化は、酸含有のアルコール溶液に指示薬を溶解して
ニトロセルロース繊維に吸収させ、乾燥させることによ
り簡単に行うことができる。すなわち、指示薬は酸性側
の色調でニトロセルロース繊維に固定されるものであ
る。The above-described fixing of the indicator to the nitrocellulose fiber can be easily performed by dissolving the indicator in an alcohol solution containing an acid, absorbing the indicator into the nitrocellulose fiber, and drying. That is, the indicator is fixed to the nitrocellulose fiber in a color tone on the acidic side.
【００３４】用いる酸としては、クエン酸、サリチル
酸、その他の有機酸を選択することができる。アルコー
ルとしては、エチルアルコール、液状のプロピルアルコ
ール等を使用することができる。このアルコールに対
し、指示薬が酸性色を保持できる酸性側のｐＨとなるよ
うに酸が添加される。As the acid to be used, citric acid, salicylic acid and other organic acids can be selected. As the alcohol, ethyl alcohol, liquid propyl alcohol and the like can be used. An acid is added to this alcohol so that the indicator has an acidic pH at which an acidic color can be maintained.
【００３５】このように指示薬が酸性側の色調で固定化
されることにより、免疫測定具にコーティング剤（ブロ
ッキング剤）を塗布して指示薬と接触させても、酸性側
の色調が保持されるため、指示薬が一定時間変色するこ
とがない。このため、変色を戻す操作が不要となる。
又、指示薬はニトロセルロース繊維へ塗布後、乾燥する
ことにより、支持体１０に容易に固定することができ
る。Since the indicator is immobilized in the acidic color tone as described above, the acidic color tone is maintained even when a coating agent (blocking agent) is applied to the immunoassay and brought into contact with the indicator. The indicator does not discolor for a certain period of time. For this reason, the operation of returning the discoloration becomes unnecessary.
The indicator can be easily fixed to the support 10 by drying after being applied to the nitrocellulose fiber.
【００３６】図２は別の実施の形態の免疫測定具２０を
示し、上述した実施の形態と同一の要素は同一の符号を
付して対応させてある。この形態の免疫測定具２０で
は、判定表示相１４及び反応終了表示部１５が同一のク
ロマトグラフ材２１に設けられている。このクロマトグ
ラフ材２１としては、反応終了表示部１５における指示
薬に染色される必要があるため、ニトロセルロース繊維
が使用される。FIG. 2 shows an immunoassay device 20 according to another embodiment, in which the same elements as those in the above-described embodiment are assigned the same reference numerals and corresponded. In the immunoassay device 20 of this embodiment, the judgment display phase 14 and the reaction end display section 15 are provided on the same chromatographic material 21. As the chromatographic material 21, nitrocellulose fiber is used because it is necessary to dye the indicator in the reaction completion display section 15.
【００３７】又、反応終了表示部１５の下流側には、吸
収用クロマトグラフ材２２が反応終了表示部１５の下流
側に部分的に重なった状態で配置されている。吸収用ク
ロマトグラフ材２２は液状の試料が使用採取部１２から
反応終了表示部１５に円滑に展開できる毛細管力を付与
するために配置されるものであり、このため、濾紙等が
使用されている。従って、この形態では、液状の試料を
円滑且つ迅速に展開させることができる。On the downstream side of the reaction end display section 15, an absorption chromatographic material 22 is disposed so as to partially overlap the downstream side of the reaction end display section 15. The absorption chromatographic material 22 is arranged to provide a capillary force that allows the liquid sample to smoothly spread from the use sampling section 12 to the reaction end display section 15, and for this purpose, filter paper or the like is used. . Therefore, in this embodiment, the liquid sample can be developed smoothly and quickly.
【００３８】[0038]
【実施例】（実施例１）０．３Ｍのクエン酸を含有した
濃度６０％のエチルアルコール水溶液を調整し、このア
ルコール水溶液にエオシンＢを０．０２５重量％の濃度
となるように溶解した。一方、図１に示す免疫測定具１
０を妊娠検査用に調整した。そして、この免疫測定具１
０のニトロセルロース繊維からなる反応終了表示部１５
に上述したエオシンＢ溶解液を塗布し、乾燥することに
より反応終了表示部１５に固定した。エオシンＢは、反
応終了表示部１５のニトロセルロース繊維を染色して固
定化されるが、酸性側では無色のため、外見的にはニト
ロセルロース繊維の地色のままであった。EXAMPLES (Example 1) A 60% ethyl alcohol aqueous solution containing 0.3 M citric acid was prepared, and eosin B was dissolved in the alcohol aqueous solution to a concentration of 0.025% by weight. On the other hand, the immunoassay device 1 shown in FIG.
0 was adjusted for pregnancy testing. And this immunoassay device 1
Reaction end indicator 15 made of nitrocellulose fiber
The eosin B solution described above was applied thereto, and was dried and fixed to the reaction completion display unit 15. Eosin B was immobilized by dyeing the nitrocellulose fiber of the reaction end display section 15, but was colorless on the acidic side, so that the nitrocellulose fiber was apparently the ground color of the nitrocellulose fiber.
【００３９】その後、免疫測定具１０をコーティング剤
に浸漬した。コーティング剤としては、１％ＢＳＡを含
む１０ｍＭ濃度のリン酸緩衝液を用い、このコーティン
グ剤に免疫測定具１０を３０秒間浸漬してコーティング
処理を行った。このコーティング処理によって、免疫測
定具１１の表面は、ｐＨ７．０に曝されたが、反応終了
表示部１５におけるエオシンＢ塗布部位は変色せず、乾
燥後はニトロセルロース繊維の地色のままであった。Thereafter, the immunoassay device 10 was immersed in the coating agent. As a coating agent, a 10 mM phosphate buffer containing 1% BSA was used, and the immunoassay device 10 was immersed in the coating agent for 30 seconds to perform a coating treatment. By this coating treatment, the surface of the immunoassay device 11 was exposed to pH 7.0, but the site of eosin B application in the reaction completion display unit 15 did not change color, and after drying, the nitrocellulose fiber remained the ground color. Was.
【００４０】次に、この免疫測定具１０の試料採取部１
２に尿を滴下し、妊娠の有無を検査した。尿が反応終了
表示部１５に達したとき、反応終了表示部１５における
エオシンＢの塗布部位が鮮やかな桃色に変色し、尿が試
薬相１３、判定表示相１４を通過し、反応が行われたこ
とが明確に確認できた。Next, the sampling section 1 of the immunoassay device 10
Urine was dropped into No. 2 to check for pregnancy. When the urine reaches the reaction end display section 15, the application site of eosin B in the reaction end display section 15 turns vivid pink, and the urine passes through the reagent phase 13 and the judgment display phase 14, and the reaction is performed. This was clearly confirmed.
【００４１】その後、免疫測定具１０を室温に放置して
反応終了表示部１５の変化を観察したが、４８時間経過
してもエオシンＢの桃色が退色したり、変色することが
なかった。これにより、反応の終了を長時間、表示でき
ることが実証された。Thereafter, the immunoassay device 10 was allowed to stand at room temperature, and changes in the reaction completion display section 15 were observed. The pink color of eosin B did not fade or change even after 48 hours. This demonstrated that the end of the reaction could be displayed for a long time.
【００４２】（実施例２）フロキシンＢ、ブロムフェノ
ールブルーを妊娠検査用の免疫測定具にそれぞれ別個に
固定化した。固定化は実施例１と同様な条件及び操作で
行った。なお、フロキシンＢは０，０２５重量％の濃
度、ブロムフェノールブルーは０．８重量％の濃度とな
るように調整した。Example 2 Phloxin B and bromophenol blue were separately immobilized on an immunoassay for pregnancy test. The immobilization was performed under the same conditions and operation as in Example 1. The concentration of Phloxine B was adjusted to be 0.025% by weight, and the concentration of bromophenol blue was adjusted to be 0.8% by weight.
【００４３】これらの免疫測定具の試料採取部１２に対
し、実施例１と同様に尿を滴下した。これにより、フロ
キシンＢを用いた実施例では、桃色に変色し、ブロムフ
ェノールブルーを用いた実施例では、青色に変色し、反
応の終了をそれぞれ明確に確認できた。その後、実施例
１と同様に室温に放置して経時的に観察したが、４８時
間経過しても変色や退色がなかった。Urine was dropped on the sample collecting section 12 of these immunoassay devices in the same manner as in Example 1. As a result, in Examples using Phloxine B, the color changed to pink, and in Examples using bromophenol blue, the color changed to blue, and the completion of the reaction could be clearly confirmed. Thereafter, the sample was allowed to stand at room temperature and observed over time in the same manner as in Example 1, but no discoloration or fading was observed even after 48 hours.
【００４４】[0044]
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
エオシンＢ、フロキシンＢ、ブロムフェノールブルー等
の酸性染料をニトロセルロース繊維に固定化して反応終
了表示部１５としているため、コーティング剤（ブロッ
キング剤）を塗布しても変色することがなく、しかも、
試料の通過と共に流失することがないため、判定の終了
を確実に、しかも長時間表示することができる。As described above, according to the present invention,
Since an acid dye such as eosin B, phloxin B, and bromophenol blue is immobilized on the nitrocellulose fiber to form the reaction end display section 15, no discoloration occurs even when a coating agent (blocking agent) is applied.
Since the sample is not washed away as the sample passes, the end of the determination can be displayed for a long time without fail.
【図１】本発明の一実施の形態の免疫測定具の断面図で
ある。FIG. 1 is a sectional view of an immunoassay device according to an embodiment of the present invention.
【図２】別の実施の形態の免疫測定具の断面図である。FIG. 2 is a sectional view of an immunoassay device according to another embodiment.
【図３】イムノクロマトグラフ法に一般的に用いられて
いる免疫測定具の断面図である。FIG. 3 is a cross-sectional view of an immunoassay device generally used for immunochromatography.
１０、２０ 免疫測定具 １１ 支持体 １２ 試料採取部 １３ 試薬相 １４ 判定表示部 １５ 反応終了表示部 10, 20 immunoassay tool 11 support 12 sample collection unit 13 reagent phase 14 judgment display unit 15 reaction completion display unit
フロントページの続き (72)発明者 古井 聡 富山県富山市荒川１−１−25 株式会社ニ ッポンジーン免疫研究所内 (72)発明者 中川 かおる 富山県富山市荒川１−１−25 株式会社ニ ッポンジーン免疫研究所内Continued on the front page (72) Inventor Satoshi Furui 1-1-25 Arakawa, Toyama City, Toyama Prefecture Inside Nippon Gene Immunological Research Institute (72) Inventor Kaoru Nakagawa 1-1-25 Arakawa, Toyama City, Toyama Prefecture Nippon Gene Immunity Inc. In the laboratory
Claims (3)
検体を標識化した後、標識化された検体を捕捉して判定
表示を行うイムノクロマトグラフ法に用いる免疫測定具
において、 前記判定表示を行う部位に反応終了表示部が連続してお
り、この反応終了表示部が、酸含有のアルコール溶液に
溶解した指示薬をニトロセルロース繊維からなるクロマ
トグラフ材に吸収させて乾燥することにより構成されて
いることを特徴とする免疫測定具。1. An immunoassay device for use in an immunochromatography method for absorbing and developing a liquid sample, labeling a sample in the sample, capturing the labeled sample, and displaying the determined result. A reaction completion display section is continuous with a portion to be displayed, and the reaction completion display section is configured by absorbing an indicator dissolved in an alcohol solution containing an acid into a chromatographic material made of nitrocellulose fiber and drying the same. An immunoassay device comprising:
とする請求項１記載の免疫測定具。2. The immunoassay device according to claim 1, wherein the indicator is an acid dye.
ンＢ、ブロムフェノールブルー又はこれらの関連物質の
内の少なくとも一種であることを特徴とする請求項２記
載の免疫測定具。3. The immunoassay device according to claim 2, wherein the acid dye is at least one of eosin B, phloxin B, bromophenol blue, and a related substance thereof.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000030640A JP3385377B2 (en) | 2000-02-08 | 2000-02-08 | Immunoassay |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000030640A JP3385377B2 (en) | 2000-02-08 | 2000-02-08 | Immunoassay |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001221798A true JP2001221798A (en) | 2001-08-17 |
| JP3385377B2 JP3385377B2 (en) | 2003-03-10 |
Family
ID=18555626
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000030640A Expired - Fee Related JP3385377B2 (en) | 2000-02-08 | 2000-02-08 | Immunoassay |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3385377B2 (en) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008164300A (en) * | 2006-12-26 | 2008-07-17 | Sysmex Corp | Testing instrument for chromatography having reference section |
| US8865088B2 (en) | 2002-01-09 | 2014-10-21 | Alere Switzerland Gmbh | Liquid sample assay device |
| CN109884043A (en) * | 2019-03-14 | 2019-06-14 | 南通市建筑科学研究院有限公司 | Chloride content prod and preparation method thereof |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2325640B1 (en) | 2008-08-22 | 2017-03-15 | DENKA SEIKEN Co., Ltd. | Test apparatus for membrane assay equipped with reference display section |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2942087B2 (en) | 1993-01-29 | 1999-08-30 | ロート製薬株式会社 | Immunoassay |
-
2000
- 2000-02-08 JP JP2000030640A patent/JP3385377B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8865088B2 (en) | 2002-01-09 | 2014-10-21 | Alere Switzerland Gmbh | Liquid sample assay device |
| EP1463945B1 (en) * | 2002-01-09 | 2022-06-29 | Abbott Rapid Diagnostics International Unlimited Company | Liquid sample assay device |
| JP2008164300A (en) * | 2006-12-26 | 2008-07-17 | Sysmex Corp | Testing instrument for chromatography having reference section |
| CN109884043A (en) * | 2019-03-14 | 2019-06-14 | 南通市建筑科学研究院有限公司 | Chloride content prod and preparation method thereof |
| CN109884043B (en) * | 2019-03-14 | 2024-09-13 | 南通市建筑科学研究院有限公司 | Chloride content test bar and preparation method thereof |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3385377B2 (en) | 2003-03-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100492010C (en) | biological sensor | |
| US5939252A (en) | Detachable-element assay device | |
| JP3543000B2 (en) | Biosensor | |
| JP4608213B2 (en) | Liquid sample analysis device | |
| US20040018576A1 (en) | Bence Jones protein testing cassette | |
| EP3364189B1 (en) | Immunochromatographic test piece | |
| CA2413926C (en) | Analytical device | |
| CN101120253B (en) | Immunochromatographic test instrument and semiquantitative method using the same | |
| UA19871U (en) | Diagnostic device for detecting analyte | |
| RU2006135394A (en) | SYSTEM OF THE MEASURING DEVICE OF THE LEVEL OF ANALYZED SUBSTANCES IN BIOLOGICAL LIQUIDS AND CARTRIDGES FOR PERFORMANCE OF THE COMBINED GENERAL CHEMICAL AND SPECIFIC BINDING ANALYSIS | |
| JPWO2002052265A1 (en) | Specific binding analysis method and specific binding analyzer used for the same | |
| KR20120088342A (en) | Diagnostic strip and manufacturing method of the same | |
| CA2314546A1 (en) | Flow-through assay for visually detecting the presence of influenza a and b | |
| KR20190058357A (en) | A wide range of in-vitro diagnostic kit capable of quantitating target substance in high concentration specimen | |
| CN100430726C (en) | Immunochromatographic test piece and chromatographic analysis method | |
| JP2008051806A (en) | Use of bovine albumin p-aminophenyl N-acetyl β-D glucosaminide as a control system for immunoassay devices | |
| KR101854240B1 (en) | Hook-effect free lateral flow assay strip sensor | |
| JP2942087B2 (en) | Immunoassay | |
| JP3385377B2 (en) | Immunoassay | |
| KR20160120675A (en) | Rapid Quantitative Diagnostic Kit | |
| KR20220047198A (en) | Strips, kits for immunochromatography and sandwich immunochromatographic assays for measuring tryptase using the same | |
| JP3920741B2 (en) | Substance detection reagent and detection method | |
| WO2008086845A1 (en) | Lateral-flow test device providing improved test quality | |
| JP4470354B2 (en) | In vivo testing device for 1-100 UL samples | |
| JP3053494U (en) | Inspection tool |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
| R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 3385377 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090110 Year of fee payment: 6 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090110 Year of fee payment: 6 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100110 Year of fee payment: 7 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110110 Year of fee payment: 8 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20120110 Year of fee payment: 9 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130110 Year of fee payment: 10 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140110 Year of fee payment: 11 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |