JP2000505642A

JP2000505642A - 非病原性微生物の新規接着因子および特定の共生的性質について微生物をスクリーニングするためのその適用；そのような微生物と接着因子とを含む新規薬剤学的組成物および食品添加物

Info

Publication number: JP2000505642A
Application number: JP9515715A
Authority: JP
Inventors: レーア，ロベルト・ジヤン; ポーウエルス，ピーター・ヘンドリク; コンウエイ，パトリシア・リン
Original assignee: ネーデルランドセ・オルガニザテイエ・フール・テゲパスト−ナトウールベテンシヤツペリーク・オンデルツエク・テイエヌオー
Priority date: 1995-10-20
Filing date: 1996-10-21
Publication date: 2000-05-16
Also published as: EP0857213A1; AU7229496A; AU727676B2; WO1997014802A1

Abstract

(57)【要約】非病原性微生物から取得することができる、粘膜結合促進活性および２０〜４０ｋＤの分子量を有する蛋白質が開示される。粘膜に特異的に結合することができる微生物について非病原性微生物をスクリーニングする方法（前記方法は微生物上もしくは微生物中、または微生物の培養物中での特別な蛋白質の存在の、それ自体知られる方法での検出を含み、前記特別な蛋白質は既に特定された蛋白質である）における、前記非病原性微生物に由来するもののような蛋白質もしくはペプチドの適用。そのようなスクリーニング法に適するキットも開示される。粘膜定着性病原性微生物に関連する疾患もしくは病気の予防および／また治療のための薬剤学的組成物中の薬剤学的活性構成成分としての、そのような蛋白質もしくはペプチドをコードする核酸を含む発現ベクター；そのような蛋白質もしくはペプチドを発現する組換え微生物または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）；そのような蛋白質もしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）：として特定される蛋白質もしくはペプチドを含む構成成分の群より選択される一つの構成成分の使用。そのような構成成分を含む食品添加物および組成物としてのそのような構成成分の使用が記載される。

Description

【発明の詳細な説明】非病原性微生物の新規接着因子および特定の共生的性質について微生物をスクリーニングするためのその適用；そのような微生物と接着因子とを含む新規薬剤学的組成物および食品添加物発明の要約本発明は、レセプターと称される粘膜の特異的部位に接着することができる細菌についての細菌、特に非病原性細菌のスクリーニングに関する。より具体的には本発明は非病原性グラム（Ｇｒａｍ）陽性細菌、特に乳酸菌（ＬＡＢ）種、より特別にはラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）およびビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属のスクリーニングに関する。農場の動物、ペット、およびヒトに固有な細菌をスクリーニングすることが好ましい。本発明は、以前には認識されていない非病原性細菌の接着因子の特定の群についてのスクリーニングの方法を含む。特に、例えば乳酸杆菌のようなものの接着因子が目的となる。この非病原性細菌の接着因子の新規群はある一定の種類の病原性微生物の毒性因子に構造的に関連する蛋白質を含む。本発明は更には、本発明のスクリーニング方法を介して取得することができる細菌、特に前記接着因子を産生する乳酸杆菌の適用、接着因子そのものとしての適用、その細菌の部分の適用、および様々な薬剤学的適用のための新規群からの接着因子の部分の適用にも関する。そのような適用は胃腸管、呼吸管、尿生殖路、口腔、もしくは身体のいずれかの他の部分、特に病原性微生物が定着することができる身体のいずれかの内部部分の感染症の治療もしくは予防を含むことがあってよい。本出願の他の適切な例は、粘膜の細胞への特異的化合物の標的化を含み、それは例えば前記化合物に対する特異的粘膜免疫応答を誘発する、もしくはその免疫応答を調節することを目的とする。例えば組換えＤＮＡ技術を通して取得することができ、いずれかの新規接着因子もしくはその有効部分を発現もしくは過剰発現する新規微生物も本発明に包含される。これらの接着因子をコードする核酸配列、および粘膜結合性発現産物をコードする前記配列の断片も、前記核酸配列の発現によりもたらされる組換え産物同様に本発明の一部となる。核酸もしくはその発現産物、または新規種類の接着因子を発現もしくは過剰発現する微生物を含む新規薬剤学的組成物も本発明の範囲内に含まれる。発明の背景病原性ウイルスおよび細菌はレセプターと称される粘膜の特異的部位に接着し、かつそれらのレセプターを介してその基盤となっている細胞を侵食して、宿主細胞の病気もしくは死さえももたらすことができる。公衆衛生面でのケアおよび動物衛生上のケアのためには効果的かつ廉価な手法を用いてヒトおよび動物における感染性疾患を予防および／または治癒しうることが必須である。粘膜は、例えばグラム（Ｇｒａｍ）陰性細菌の属エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、カンピロバクテル（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、ハエモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、パステウレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、イエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、例えばミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）などのグラム（Ｇｒａｍ）陽性細菌、およびロタウイルス、ポリオウイルス、ハシカのようなウイルス類、および微生物感染の分野の当業者によく知られている多くの他の微生物からなる多数の病原性細菌の侵入口（ｔｈｅｐｏｒｔｅｄｅｎｔｒ６ｅ）を形成する。例えばカンピロバクテル（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）属の細菌は経口摂取の後にはヒトおよび動物において重度の腸炎を引き起こすことがある。Ｃ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）はヒトそして時としては動物における下痢の主要原因となる。下痢以外にもＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）は時としてはヒトにおける虫垂炎、髄膜炎、流産、、および尿路感染症をも引き起し得る。発展途上国では全年齢にわたる人々が病に罹っており、そしてカンピロバクテル（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）感染症はサルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、もしくはビブリオコレラエ（Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ）により引き起こされる感染症と同様に一般的である。ミコバクテリウムツベルクロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）やミコバクテリウムレプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｅｐｒａｅ）のようなマイコバクテリアもそれぞれ結核や癩病のような重篤な疾患を引きおこす。これらの細菌はあまり発展の具合が芳しくない国々においては特に多くの個体の死をもたらす。これらの微生物は呼吸管の粘膜を介して身体を侵す。病原性微生物は、例えば胃腸管のような身体の部分に接着し、そのことにより疾患を開始することができる。宿主生物体の身体の部分への病原性微生物の接着の研究により豊富なデータがもたらされている。これらの研究により病原性細菌の接着は蛋白質により媒介され得ることが明らかにされている。例えばコラーゲン、フィブロネクチン、もしくはプロテオグリカンのような細胞外マトリックスの構成成分に結合する病原性細菌からの蛋白質については詳細な情報が入手可能である。特別な例は、マイコバクテリアのフィブロネクチン結合性蛋白質、連鎖球菌とブドウ球菌の特異的腸内細菌の線毛タイプのもののフィブロネクチン結合性蛋白質とコラーゲン結合性蛋白質、およびエルシニアの表面蛋白質とアエロモナス（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ）のＡ−蛋白質（Ａ−ｐｒｏｔｅｉｎ）である（総説としては、ＷｅｓｔｅｒｌｕｎｄａｎｄＫｏｒｈｏｎｅｎ，Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．９：６８７−６９４１９９３、を参照されたい）。グラム（Ｇｒａｍ）陽性で非病原性細菌の、宿主生物体の表面への接着についての情報は一層限定されていて、特に非病原性微生物による粘膜レセプターの特異的結合に関しての情報は希少である。正常なヒトの胃腸管には、ラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトコックス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコックス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、クロストリディウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、バクテリオイディス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｄｅｓ）属、および他のものの細菌を含む多種多様の非病原性微生物が定着している。これらの微生物はヒトに固有なマイクロフローラの部分を形成する。このようなわけで、かなりの興味が接着のメカニズムおよび胃腸での定着の際の接着の役割を解明することに向けられてきている。しかしながら、ヒトと動物の腸内マイクロフローラ中に存在する非病原性細菌の内の非常に調査が進んでいる群であるＬＡＢの接着のメカニズムは一般的には胃腸病原体のものと比較すると一層複雑である（Ｈａｓｔｙｅｔａｌ．、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０：２１４７−２１５２１９９２）。非病原性細菌の接着は特異的であるかもしくは非特異的（ａｓｐｅｃｉｆｉｃ）であることもできる。疎水性でありかつ静電的接着メカニズムが非特異的（ｎｏｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ）接着に関与している。特異的接着は、接着因子が特異的レセプターに結合するという、いわゆる「鍵と鍵穴のメカニズム」を特徴とする。特異的接着は通常では生きた組織上のレセプターへの微生物の接着に関連する。接着因子もしくはアドヘシン（ａｄｈｅｓｉｎ）は一般的には表面結合分子である。アドヘシンは細菌の表面に強固に結合するか、もしくは緩く結合することができる。レセプターは、アドヘシンの活性部位が細菌に結合するであろう、細胞の表面上の構成成分もしくは構造である（Ｒｕｔｔｅｒｅｔａｌ．、１９８４Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆａｄｈｅｓｉｎｉｎ ”Ｍｉｃｒｏｂｉａｌａｄｈｅｓｉｏｎａｎｄａｇｇｒｅｇａｔｉｏｎ” Ｍａｒｓｈａｌｌ，Ｋ．Ｃ．ｅｄ．ｐｐ５−１９，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｂｅｒｌｉｎ）。乳酸菌、特にラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）およびエンテロコックス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）は、ヒトと動物との胃腸管のマイクロフローラの樹立と維持において主要な役割を演じる非病原性グラム（Ｇｒａｍ）陽性細菌の例である。ラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）種はヒトの胃腸管の様々な領域から単離されている（Ｍｏｌｉｎｅｔａｌ．、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂａｃｔｒｉｏｌ．７４、３１４−３２３１９９３）。幾つかの株の接着の原因となっていると思われる決定基が研究されており、そしてある一定の構造が接着のメカニズムに関与していることが報告されている。しかしながら腸の生態系は複雑であるがゆえに、胃腸管の特異的領域にどうして、そしてどのようにして所定の細菌株が接着かつ定着するのかについてはほとんど解明されていない。刊行物においては胃腸粘膜への乳酸杆菌の接着もメカニズムについての大きな食い違いが生じていることは確かである。Ｆｕｌｌｅｒは、ニワトリ砂嚢上皮へのラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）の接着を記載し、そして接着は多糖類により媒介されていると結論づけた（Ｆｕｌｌｅｒ、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．８７：２４５−２５０１９７５）。しかしながらＣｏｎｗａｙとＡｄａｍｓ（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３５：１１６７−１１７３１９８９）は乳酸杆菌の接着の際の多糖類の役割については何の証拠も見いだせず、他の構成成分が係わりうることを示唆した。他の研究者らもリポタイコ酸（ＬＴＡ）がラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）とストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）の接着の際には非常に重要となることを示し、そしてＬＴＡがフィブロネクチンや歯垢と連鎖球菌との会合の原因となっていることを提案した（ＨｏｇｇａｎｄＭａｎｎｉｎｇ、Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂａｃｔｅｒｉｏ．６５：４８３−４８９；ＶｉｃｋｅｒｍａｎａｎｄＪｏｎｅｓ、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０：４００１０４００８１９９２）。Ｓｕｅｇａｒａら（Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１２：１７３−１７９）は、蛋白質性物質が乳酸杆菌のラットの胃上皮への接着を媒介することを記載している。ＣｕｒｒｅｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏ１．２８（１９９４）ｐ．２３１−２３６ではＡｌｅｌｊｕｎｇＰ．らはコラーゲンタイプＩに結合するＬ．レウテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＮＣ１Ｂ１１９５１の２つのコラーゲン結合性蛋白質の精製を記載している。３１ｋＤのものの配列はＸＳＮＫＰＩＩＶＧＳＫ＊ＸＶである。２９ｋＤのものの配列はＡＳＳ＊ＡＶＮＳＥＬＶである。最も近い相同性があるものは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のトリガー因子（ｔｒｉｇｇｅｒｆａｃｔｏｒ）であるように思われた。ＴＩＧは７９％の相対的スコアで２７−３３に位置する。Ｌ．レウテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）のＣｎＢＰが、ニワトリ消化管への接着に関与していることが説明されている蛋白質タイプであるＳ蛋白質ではなさそうであることも述べられている。彼らは「ここで非病原性の固有の腸マイクロフローラは細胞外マトリックス結合性蛋白質に結合するものとして説明される」と述べている。しかしながら粘膜もしくはムチンへのインビトロもしくはインビボでの結合を説明してはいない。彼らは単に、粘膜内に存在することが知られている構成成分そのものへの結合を説明しているに過ぎない。粘膜内に存在する形態をとるそのような構成成分への結合の説明は何も提供されていない。粘膜内に存在する際のコラーゲンにそのような結合が生じるかどうかは、その結合部位がどこであるかがはっきりしないという事実があるため明らかではなく、そしてムチンもしくは粘膜内に存在する際にはコラーゲンには結合のためにそのような部位が利用可能もしくは存在するかどうかは明らかではない。ＥＣＭもしくは粘膜への非病原性微生物接着の説明は何も提供されていない。この論説は性質上かなり不確実なものである。最近Ｔｏｂａらはラクトバキルスクリスパトウス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃｒｉｓｐａｔｕｓ）の細胞外マトリックスへの接着がＳ−レイヤー（Ｓ −ｌａｙｅｒ）蛋白質により媒介されることを示している（Ｔｏｂａｅｔａｌ．、Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎｍ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．６１：１９９５）。欧州特許第０２１０５７９号（１９８４年１１月の優先日）では、マウスとブタにおける扁平上皮への細菌接着の促進の原因化合物であることが主張されている１４ｋＤのＭｗの蛋白質を含む調製物が記載されている。１４ｋＤの蛋白質を含むこの調製物は、糖とアミノ酸に富む培地中でラクトバキルスフェルメントゥム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）を培養することにより取得された。欧州特許第０２１０５７９号からは、この接着促進因子が非病原性細菌に特異的であるかどうか、もしくはそれが通常は接着しない病原体の接着を促進しうるかどうかは明らかではない。また欧州特許第０２１０５７９号からは、この接着促進因子か特異的部位（レセプター）もしくは非特異的（ａｓｐｅｃｉｆｉｃ）部位への接着を促進するか否かも明らかではない。それに加え、欧州特許第０２１０５７９号はその１４ｋＤ蛋白質の起源が何であるかを明らかにしてもいない。この１４ｋＤ蛋白質がＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）そのものにより合成されているかどうか、もしくはそれがＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の活性により培地構成成分から生じているかどうかも未解決のままである。従って、その１４ｋＤ蛋白質の同定および適用性の両方ともがこの刊行物ではあいまいなままである。後続の多数の刊行物も異なる蛋白質性構成成分が関与していることを示唆してはいるが、決定的なデータは何も提供されてはいない。ＣｏｎｗａｙとＫｊｅｌｌｅｂｅｒｇの国際公開第９０／０９３９８号は例えば、抗−病原体活性を呈し、Ｌ．クリスパティス（Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｉｓ）１０４に由来する３０ｋＤを上回る断片を記載している。この３０ｋＤを上回る断片はプロナーゼもしくはトリプシンでの処理の後にその活性を保持している。これは複合培地内でのＬ．クリスパティス（Ｌ．ｃｒｉｓｐａｔｉｓ）の育成により取得される。この出願も、８０００〜３０，０００の対応断片は抗−病原体活性を呈さなかったことを述べている。この出願は原因となる構成成分（一つもしくは複数）の厳密な特徴にっいては何の言及も行っていない。その出願は、ヒトと動物の胃腸上皮への病原体の接着の阻害も示唆している。彼らはこの問題に関し、更に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）Ｋ８８株のブタ腸粘膜への接着がブタから単離された乳酸杆菌の高分子量代謝物により阻害されたが、マウスの消化管からの乳酸杆菌のものではそのような現象は生じなかったことを示している。後続の研究により、これはカス（ｃａｓｕ）内での成長阻害化合物ではなく、かつ接着の阻害のメカニズムは検討を要するものであることが示された。乳酸杆菌代謝物は恐らくは、多くの株にとっての病原性のための先行必須条件である粘膜表面の病原体定着を阻害するかもしれない。結果的には、成長阻害活性に加えて他の因子も考慮に入れるべきである。粘膜結合阻害については何の説明もなされてはいない。説明されている事柄は、ラクトバキルスフェルメントゥム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＫＬＤは大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株、カンピロバクテルジェジェウニ（Ｃａｍｐｉｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｅｕｎｉ）、サルモネラソフィア（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｓｏｆｉａ）、およびストレプトコッカスファエキウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｆａｅｃｉｕｍ）の成長をインビトロで阻害したことである。例えばＢＨＩ培地中でのグルコースでのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の成長の際に得ることができる上澄は、その後の透析および１０，０００と３０，０００のＭｗのカットオフでの限外濾過を通しての分画化により処理するとそのような効果を誘導することができるものとして記載されている。前述の特徴についての最も最近の刊行物はＢｌｏｍｂｅｒｇＬ．；ＨｅｎｒｉｋｓｓｏｎＡ．；ＣｏｎｗａｙＰ．（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．ｆｅｂ．９１、ｐ４９９−５０２）ものもであり、この刊行物では培養液のレテンテート（ｒｅｔｅｎｔａｔｅ）分画中に存在する２５０、０００を上回るＭＷを持つ蛋白質による、ラクトバキルスフェルメントゥム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）株のマウス扁平上皮への蛋白質媒介性接着メカニズムについての仮定がなされている。この刊行物はその蛋白質の性質についての記載を行っておらず、そしてその蛋白質がまだ単離されてはおらず、かつ更に詳細な実験によりその効力をこれから実証すべきであることを明確に記述している。結果として：細菌性病原体の接着におけるその蛋白質の役割および性質については明白かつ十分な報告もなされてはいるものの、非病原性細菌の接着における蛋白質の役割は未だに少なくとも論議が絶えずかつ未解決の状態である。多くの疾患は抗生物質もしくは薬剤で治療することができるものの、そのような化合物の使用を制限するという一般的な傾向があり、なぜなら病原性生物体が抗生物質と薬剤に対して益々その耐性を強めてきているためである。腸疾患の治療用の薬剤に対する非常に期待の高い代用物は、共生的（ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ）性質を兼ね備えた非病原性細菌の使用である。共生物質は「ヒトもしくは動物に死んだ細胞としてかもしくは発酵させた産物として適用され、固有のマイクロフローラの特性を改善させることにより宿主に有用な影響を及ぼす生きた生物体の単一もしくは混合させた培養物」と定義される。ラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株およびビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）株の内の幾つかの株がプロ生物的特性を有することが報告されている。これらの有益な影響は、例えば大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）のようなグラム（Ｇｒａｍ）−陰性病原体の増殖を低下させる条件であるｐＨの低下が原因となっている。それに加え、乳酸細菌の内の多くの種はバクテリオシンと称される抗−細菌特性を有するオリゴペプチドを産生する。これらの化合物は例えばクロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）などのようなグラム（Ｇｒａｍ）−陽性細菌病原体にとっては静菌的もしくは抗菌的となる。幾つかの乳酸杆菌は動物およびインビトロモデルでの病原体の接着を阻害することが示唆されている。これらの阻害効果は通常は病原体のためのレセプターの非特異的立体障害により説明される。それに対し、各病原体は特異的腸レセプターを有する（Ｆａｌｋｏｗｅｔａｌ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：３３３−３６３１９９２）。乳酸杆菌もしくは乳酸杆菌で作成された調製物は従って腸および尿路の疾患を治療するのに広く用いられている（例えば、国際公開第９５１６４６１号；ロシア連邦特許第２０００１１６号；国際公開第９４１８９９７号：欧州特許第０５７７９０３号；英国特許第２２６１３７２号；国際公開第９３０１８２３号；国際公開第０９２１４７５号；米国特許第７８２２５０５号；カナダ特許第１２９８５５６号：欧州特許第０１９９５３５号；欧州特許第０２１０５７９号、を参照されたい）。このような調製物の有益な効果は様々な因子に起因しているが、このような健康刺激性化合物の特性および作用様式はまだ公開されていないか、あるいはせいぜい単に仮説として提唱されているに過ぎないかのいずれかである。共生物質のメカニズムに関する答えは新規の強化された共生物質を発見し、そしてその使用を至適化させる目的では決定的に重要である。科学的に証明されている共生物質の効果を示すスターター（ｓｔａｒｔｅｒ）株を用いることの食品業者にとっての経済的重要性、および粘膜用ワクチンの開発のための担体としてＧＲＡＳ（一般的に安全として認識されている（ＧｅｎｅｒａｌｌｙＲｅｃｏｇｎｉｓｅｄＡｓＳａｆｅ））生物体を用いることの製薬会社の同等に大きな利益を考慮すると、細菌、特にＧＲＡＳ生物体、一層特別には乳酸杆菌を、共生的特性および／または免疫調節用特性についてスクリーニングする際には多大な努力が支払われる。既存のスクリーニング用プログラムの主要な欠点は、それらが骨の折れる作業であり、時間がかかり、そしてそのため費用も非常に多大になるということである。細菌株の共生的特性もしくは免疫調節性特性についてのスクリーニングを行うための簡潔かつ信頼性のある検査システムは一つも利用可能ではない。発明の目的本発明の目的は上述の難題を克服することである。今では２９ｋＤの蛋白質性化合物がブタとマウスとの粘膜のレセプター部位へのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の特異的接着の原因となっていることが明らかなものとして証明されており、そしてそれゆえ、類似の構造と機能を備える蛋白質を合成する他の微生物についてスクリーニングするための方法がここに提供される。Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の接着促進物が、所定の病原性細菌の接着因子に構造的に関連する２９ｋＤの蛋白質であるということを証明すること、そしてその接着因子をコードする遺伝子のヌクレオチド配列を示すことにより本発明は新規種類の接着因子をコードする遺伝子を含む微生物の迅速スクリーニングのための方法、および標準的な蛋白質と核酸用の技術を用いることでそのような接着因子を産生する微生物をスクリーニングするための方法を提供する。病原性細菌の毒性因子と非病原性細菌接着因子すなわち（ｉ．ｃ．）乳酸杆菌のとの間の構造的関連性を初めて証明することにより本発明は、胃腸管、尿生殖路、口腔、呼吸管、および鼻腔の粘膜のレセプターへの病原体の接着を選択的かつ特異的に妨害するため、および既述の種類の病原体の接着を妨害する能力について微生物をスクリーニングするための方法を提供する。本明細書では可能となる多くの適用が以下に一層詳細に説明される。ｉ）共生的特性および／または免疫調節性特性を有する細菌のための、一層迅速でかつ方向付けられた細菌のスクリーニング法が本明細書で可能となる。本発明により、粘膜レセプターへの病原体の接着を妨害する能力について細菌を迅速にスクリーニングすることが可能となる。特に本発明は、ヒトおよび動物の胃腸管、尿生殖路、呼吸管、および口腔／鼻腔の粘膜の細菌レセプター（一つもしくは複数）への非病原性グラム（Ｇｒａｍ）陽性細菌の特異的接着、より特別には乳酸杆菌の接着を促進する接着因子の存在について細菌をスクリーニングするための方法を提供する。スクリーニングされる予定の微生物がヒトと動物とにおける非病原性である微生物であることが好ましい。このような微生物はヒトおよび／または動物にとって固有なものであり、従ってそれらが適用される予定の環境に耐えることが既に可能であり、そして更にはそれらが取得される特別な種に対しては毒性を持たないことが明らかであることが好ましい。適切な非病原性微生物の例は、属ラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、ビフィドバクテリウム（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、およびバクテリオイデス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ）を含む。このスクリーニングは、例えばポリペプチドもしくは蛋白質のプローブおよび／または検出される予定の接着因子（一つもしくは複数）に特異的な抗体を用いる核酸増幅およびハイブリダイゼーション技術、ならびに蛋白質もしくはペプチドのアッセイのような、それ自体が蛋白質検出もしくは核酸検出のために知られている標準的技術を用いて蛋白質および／または核酸のレベルで行うことができる。従って本発明は更に、所望される接着特性を有する蛋白質をコードする核酸の存在について微生物をスクリーニングするための方法をも提供する。蛋白質および核酸のアッセイは、即席の事例としては、適切なアミノ酸と核酸の配列がいったん既に決定されていれば当業者により容易に実施される。このような情報により、例えば、その蛋白質の核酸配列および／または適切なアミノ酸配列が決定および単離もしくは合成されていれば、プローブとプライマーを構築することが可能となる。純粋な蛋白質の単離および／または純粋な蛋白質の発現により、それ自体知られている方法での抗体の産生が可能となる。本発明に従うと細菌を、以下に詳細に記載される非病原性微生物の新規種類の接着因子の定義に含まれる蛋白質の存在、もしくはそのような蛋白質もしくはその活性部分をコードするＤＮＡ配列の存在についてスクリーニングすることができる。このようにして本発明の適用は特に、生きた組織に接着する能力について細菌をスクリーニングする骨の折れ、高くつく経路を回避する。一層特別には本発明の適用はスクリーニング目的のための動物および／またはヒトボランティアの使用を回避する。粘膜に特異的に結合することができる微生物について非病原性微生物をスクリーニングする方法であって、微生物上もしくは微生物中、または微生物の培養物上もしくは微生物の培養物中で、ある特別な蛋白質の存在をそれ自体知られている方法で検出することを含み、前記特別な蛋白質が請求の範囲１〜１３の内のいずれかに従う蛋白質である方法は保護範囲に含まれる。別法では粘膜に特異的に結合することができる微生物についての非病原性微生物のスクリーニングの方法であって、ある微生物上もしくは微生物中、または微生物の培養物上もしくは微生物の培養物中の特別な遺伝子の存在をそれ自体知られている方法で検出することを含み、前記特別な遺伝子が請求の範囲１〜１３の内のいずれかに従う蛋白質をコードする方法は本発明の範囲内に含まれる。本発明は更に、粘膜に特異的に結合することができる非病原性微生物の検出に適するキットをも含み、前記キットは例えば抗体のような、請求の範囲１〜１３の内のいずれかに従う蛋白質に特異的に結合することができる構成成分を含む。他の態様では、本発明は粘膜に特異的に結合することができる非病原性微生物の検出に適するキットを含み、前記キットは例えば核酸プローブもしくはプライマーのような請求の範囲１〜１３の内のいずれかに従う蛋白質をコードする核酸配列の一部分に特異的に結合することができる構成成分を含む。ｉｉ）粘膜に特異的に結合することができる蛋白質もしくはポリペプチドをヒトもしくは動物に適用することによるか、あるいはそのような蛋白質もしくはポリペプチドを発現することができる微生物またはそのような微生物の培養物をヒトもしくは動物に適用することにより、本明細書では粘膜もしくはムチンへの病原性微生物の接着を妨害することが可能となる。特に、ヒトおよび動物の尿生殖路、胃腸管、呼吸管、および／または口腔／鼻腔への病原性微生物による接着を予防もしくは減少させることが可能となる。特に興味深いことは本発明が、粘膜の細菌レセプターへの所定の種類の病原体の接着を効果的かつ選択的に妨害するため、および所定の種類の病原体の接着を妨害することができる微生物についてのスクリーニングを行うための方法を提供することである。本明細書で防除の対象となりうる病原体はグラム（Ｇｒａｍ）陽性およびグラム（Ｇｒａｍ）陰性の細菌の両方、特に粘膜レセプターに特異的に結合するものを含む。防除すべき病原体の例は、属エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、カンピロバクテル（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、ハエモフィルス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ）、パステウレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、イエルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、マイコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、リステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、ならびに例えばロタウイルス、ポリオウイルス、および麻疹のようなウイルスの株を含む。本発明は、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着蛋白質のものに類似する接着因子を通して粘膜レセプターに接着する病原体の感染性は、立体障害という一層一般的なメカニズムによるよりはむしろレセプターとの特異的相互作用によりＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着蛋白質のもののような構造を有する接着蛋白質を宿すプロ生物的細菌により低減されるであろうという結果を利用している。本発明に従うと、所定の病原体（Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の接着蛋白質に構造的に関連する接着因子により接着するもの）の接着を、そのような接着蛋白質もしくはそのような接着蛋白質を産生する微生物を例えば食物もしくは飼料内に投与することによるか、または薬剤学的組成物として投与することにより特異的に阻害するための戦略が考案され得る。この適用は薬剤学的組成物および／または飼料添加物に通常適用されるいずれかの用量で、局所的、経口的、もしくは静脈内のものであることができる。選択される用量形態は防除すべき感染性病原体の種類により左右される。この用量形態は固体もしくは液体であることができる。純度および衛生、すなわちそのような組成物に通常適用される滅菌性に関する所定の標準は厳守されなければならない。そのような状況は当業者にはよく知られている。薬剤学的に許容される投与形態には、薬剤学的に活性な構成成分として−請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチド −請求の範囲２４もしくは２５に従う発現ベクター −請求の範囲２６もしくは２７に従う組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する） −請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）を含む構成成分の群から選択される構成成分、および薬剤学的に許容される担体を含む組成物は本発明に含まれる。食品添加物としての使用に適する形態をとる既述の構成成分を含む組成物も本発明の範囲内に含まれると見なされる。粘膜定着性の病原性微生物に関連する疾患もしくは病気の予防および／または治療のための薬剤学的組成物には、薬剤学的に活性な構成成分として、 −請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチド −請求の範囲２４もしくは２５に従う発現ベクター −請求の範囲２６もしくは２７に従う組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する） −請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）を含む構成成分の群より選択される構成成分の使用も本発明の範囲内に含まれる。上記より明らかになるであろうように、食品産物を改善するための、請求の範囲１〜２１もしくは２４〜２７の内のいずれかに従う産物、および／または請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物もしくは前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）の食品産物への添加を含む方法は本発明の一つの態様を形成する。このような方法が請求の範囲１〜２１もしくは２４〜２７の内のいずれかに従う産物の食品産物への添加を含むことが好ましい。請求の範囲１〜２１もしくは２４〜２７の内のいずれかに従う産物、および／または請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物もしくは前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合更新活性を発現する）を添加物として含む食品産物も明らかに本発明に含まれる。請求の範囲１〜２１もしくは２４〜２７の内のいずれかに従う産物を添加物として含む食品産物は特に適切な態様である。当業者はこの阻害効果は更に、例えば粘液およびムチンに特異的に結合することが見いだされるＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の２９ｋＤ接着蛋白質に由来するペプチドのような接着蛋白質の部分の添加によっても取得されることがあってよいことを認識するであろう。これらの活性ペプチドは化学的に合成されるかもしくは遺伝子工学的に作成された微生物により微生物的に作成されるかのいずれかであることができる。別法ではその蛋白質を、非組換え体もしくは組換え体の微生物により産生することができ、そしてその後に例えば蛋白質分解性の消化および蛋白質分解分画の光学的分割を介して所望されるポリペプチドが取得され得る。その２９ｋＤの接着因子、ならびに病原性生物体である大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）およびヘリコバクテルピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉ）の株の接着因子、ならびにコレラ毒素の分析から共通配列ＫＫＸＸＸＫ（配列番号３０）が仮定され、その配列中、Ｘはいずれかのアミノ酸を表し、そしてＫはリシンを表す。本発明に従う２９ｋＤの蛋白質は３つのそのような配列を含む。これらは成熟蛋白質の位置４７〜５２（ＫＫＭＧＬＫ）、１７３〜１７８（ＫＫＮＳＴＫ）、および２２３〜２３８（ＫＫＬＳＥＫ）で、その蛋白質分子全体にわたりだいたい均等に分散している。番号付けは配列表の配列番号２のアミノ酸５４〜５９、１８０〜１８５、および２３０〜２３５に対応しており、この配列中では成熟蛋白質は位置８のＡｌａから開始する。本発明に従う蛋白質もしくはペプチド内にこのＫＫＸＸＸＫ配列の内の少なくとも一つ、好ましくはこれらの配列の内の２つが存在することが好ましい。３つのこのような配列が存在することが最も好ましい。特別な態様ではこの共通配列は先に開示される２９ｋＤ蛋白質内に存在する天然に生じるアミノ酸配列の内の一つであろう。天然の環境に存在するものに対応する配列が用いられることが好ましいが、しかしながらこのような配列は例えば先に記載されるＤＮＡ合成機、メリフィールド（Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ）合成、およびクローニング技術を通すことなどで、当該技術分野において一般的に知られる遺伝子工学的手段もしくは合成用手段を通して到達することができる。このような配列が更には、その三次元構造が天然のものに似るようにして、ある配列中に存在することも好ましい。このことはそれ自体知られている方法でコンピューター技術を用いて確認することができる。このような配列は陰性に荷電している腸のレセプターへの結合に関与する。例えばアスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）、およびラクトコッカス（Ｌａｃｔｏｃｏｃｃｕｓ）のようにＧＲＡＳ状態を有する微生物はこのような目的には非常に適する。当業者は他の微生物も接着因子もしくはそれに由来するペプチドの産生に用いることができることを認識するであろう。しかしながらＧＲＡＳ生物体を利用するにはヒトへの適用が好ましいであろう。ＧＲＡＳ生物体のリストは食料品および／または医薬品の分野の当業者にとっては容易に入手可能であり、そして引用により本明細書に取り込まれる。例えば米国食品医薬品局（ＵＳＦＤＡ）はそのような生物体のリストを保持している。Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４ＲもしくはＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質のものに類似する構造を有する蛋白質を産生する微生物の接着促進蛋白質のような蛋白質は類似の構造を有する接着蛋白質を保持する病原体の特異的接着を妨害するであろうという結果は、そのような接着促進蛋白質もしくは接着促進蛋白質産生性微生物が類似の構造を有する接着因子を産生しない病原体の接着を妨害しないであろうということを必ずしも示唆するのではない。当業者は、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒのもののような接着促進蛋白質を有する微生物の使用のコロラリー（ｃｏｒｒｏｌａｒｙ）は、特異的レセプターへのそのような細菌の接着もやはり、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）様接着因子のもの以外の接着因子を有する病原体の接着をも立体障害の一般的メカニズムにより制限するであろうことがあってよいことを即座に認識するであろう。従って、防除することができる病原性微生物は、非病原性生物体からの接着因子による特異的結合を受ける粘膜レセプターに結合する微生物のみを含むのではない。ｉｉｉ）所望の活性を呈する蛋白質の群が現在知られており、そしてアミノ酸配列および核酸配列が既に決定されているため、所望の蛋白質もしくはポリペプチドの改善された産生、すなわち過剰発現が可能な微生物を開発および／または選択することが本明細書では可能になる。このことは、培養条件の通常の至適化を介し、改善されたレセプター結合特性を有する蛋白質を発現する株のそれ自体知られている方法での選択を介して達成することができる。遺伝子工学を介して核酸配列（一つもしくは複数）をよりすぐりの微生物内に取り込ませ、そしてそのことによりその微生物を、粘膜結合促進構成成分の（過剰）発現および好ましくは分泌を行うことができるようにすることも可能となる。その微生物が例えば乳酸菌のようなＧＲＡＳ生物体であることが好ましい。更には、コードされる配列（一つもしくは複数）を、そのコードされる配列に通常連結される調節配列を用いた場合よりは一層高い発現を可能にする調節配列に操作的に連結されるように取り込ませることも可能である。多数の高発現ベクターが、例えば乳酸菌のような特別なＧＲＡＳ微生物内の様々な微生物について知られている。適切な核酸を含む非病原性微生物もしくは組換え発現ベクターからの接着因子の新規の群の粘膜の結合を促進することができるポリペプチドもしくは蛋白質を発現もしくは過剰発現することができる組換え微生物も本発明の範囲内に含まれる。遺伝子工学的に作成される微生物はすでにその接着因子を発現していることがあってよいが、その微生物はその新規群の接着蛋白質を天然の状態では発現しない群から選択されうる。その微生物は、薬剤としてかもしくは食品／飼料添加物として後に単離および適用されうる蛋白質もしくはポリペプチドのための産生プラント（ｐｌａｎｔ）として単に利用されることがあってよく、あるいはその微生物自体が薬剤としてかもしくは食品／食料添加物として用いられることがあってよい。この蛋白質もしくはポリペプチド産生性微生物が非病原性であることが好ましい。特にＧＲＡＳ微生物は、薬剤学的組成物もしくは食品／食料添加物の活性成分としてのその発現産物および／または微生物の適用を可能にさせる目的には好ましい。組換えＤＮＡ技術においてそれ自体知られているいずれかの態様ではその核酸配列はプラスミドベクター内に取り込ませるかもしくは染色体内に組み込ませることがあってよい。大多数の形質転換用および発現用ベクターおよび技術が当該技術分野の状況下では知られており、そして現在商品として入手可能でもある。ＧＲＡＳ微生物に適する食品等級の形質転換用および発現用ベクターならびに方法が好ましい。選択および／または形質転換されるべき微生物が以下の特徴を有することが好ましい： −活性を示さなければならない場所での環境条件での生存 −活性を示す場所での増殖および／または定着 −プロ生物的株に対する免疫反応の不在 −プロ生物的株自体、その発酵産物、もしくは細菌の死亡後のその細胞構成成分による病原性、毒性、アレルギー性、突然変異性、もしくは発癌性反応の不在 −遺伝子的な安定性、プラスミド転移反応不在 −容易かつ再現性のある産生 −処理および保存中の生存能力。一般的には用語「組換え微生物」は、請求の範囲２３に従う核酸配列、および／または請求の範囲２４もしくは２５に従う発現ベクターを含むとされ、前記核酸配列および／または発現ベクターは対応する非組換え微生物内では不在であるか、もしくはその代用物が低コピー数で存在するか、または低い程度で発現される。更に別の態様では、本発明はまさに特定される（請求の範囲２６に従って）組換え微生物を含み、前記微生物は非病原性微生物であり、好ましくはヒトもしくは動物のマイクロフローラに固有である微生物、より好ましくはヒトのマイクロフローラに固有な微生物である。本発明は更に、請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチドの内のいずれかをコードする核酸配列、およびそのような核酸配列を含み発現調節配列に操作可能に連結される発現ベクターを含み、前記発現ベクターは例えばＧＲＡＳ微生物のような非病原性微生物内でその核酸の発現を行うことができ、そして前記発現ベクターはＧＲＡＳ微生物に由来する核酸を含むことが好ましい。更に別の態様では、本発明に従う発現ベクターは、発現調節配列が天然の状態ではその核酸配列が取得されてくる接着因子をコードする遺伝子に連結してはいないベクターである。ｉｖ）接着蛋白質の３Ｄ構造、アミノ酸配列、および核酸配列は今や確認されており、そして他の蛋白質群との間の類似性は既に決定されているため、改善された結合特性を呈する蛋白質もしくはポリペプチドをも設計することは当業者の技術範囲に含まれ、そしてそのような改善により薬剤学的適用もしくは食品／飼料添加物としての適用がもたらされる。従って本発明は図３のアミノ酸配列を有する蛋白質よりも優れた粘膜結合、および目的の記述の実験部分において特定されるポリペプチドＩ〜Ｖの内のいずれかよりも優れた粘膜結合を呈する突然変異ポリペプチドおよび蛋白質をも含む。本発明は更に、天然の状態で入手することができる等価配列、および突然変異体としての等価配列、すなわち２９ｋＤの蛋白質およびそのような蛋白質もしくはポリペプチドの粘膜結合活性を少なくとも有する蛋白質もしくはポリペプチドをコードする核酸配列、ならびに記述および／または請求の範囲の方法の内のいずれかでのそれらの適用をも含む。ｖ）粘膜に特異的に結合することができる蛋白質とペプチドとの群を発見したことで、その蛋白質もしくはペプチドを発現する微生物を粘膜に対して標的化することのみでなく、そのような微生物を、粘膜に対する免疫応答を除去するための例えば薬剤、粘液調節剤、もしくは抗原のような追加的化合物を標的化するための担体として使用することも可能になる。この微生物はこの特別な特性を既に有するために選択されることができ、あるいはその微生物が所望の薬剤、免疫調節剤、もしくは抗原を後に産生するように遺伝子操作により作成されることもできる。更にこの微生物は、粘膜結合促進性アミノ酸配列および粘膜に対して標的化しなければならないよりすぐりの特徴的活性を有する追加的な所望のアミノ酸配列もしくは分子を含む融合蛋白質もしくはペプチドを開発することも可能にする。従って粘膜に対して特異的に標的化される新規の薬剤学的化合物の全ての株を開発することができる。本発明はそのような新規微生物および分子、ならびに薬剤学的組成物としてのそれらの適用を含む。従って本発明は、例えば病原性生物体の抗原をコードする遺伝子のような目的の遺伝子を発現する細菌を、粘膜の特異的レセプターに対して標的化し、そしてそのことによりその抗原に対する特異的免疫応答を誘発させる、および／または免疫応答を調節するための方法をも含む。本発明はよりすぐりの薬剤、免疫調節剤、もしくは抗原に連結される請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチドをも含む融合蛋白質もしくはペプチドを含む。粘膜に対して追加的薬剤学的活性構成成分（前記追加的薬剤学的構成成分は標的化用構成成分に物理学的に連結されている）を標的化させるための薬剤学的組成物中の標的構成成分として −請求の範囲１−２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはペプチド −請求の範囲２４もしくは２５に従う発現ベクター −請求の範囲２６もしくは２７に従う組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する） −請求の範囲１〜２１の内のいずれかに従う蛋白質もしくはぺプチドを発現することができる非病原性微生物または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）、を含む構成成分の群から選択される構成成分の使用は本発明の範囲内に含まれる。本発明に従う粘膜のレセプターに対する乳酸杆菌の特異的接着の促進は、例えば病原性生物体の抗原もしくはヒトの蛋白質を発現する乳酸菌のような目的の化合物を保持する細胞をその粘膜の細胞に対して特異的に標的化するための機会を提供し、そのことによりその抗原／ヒト蛋白質に対する免疫応答を調節し、そしてこれは本発明の好ましい態様である。本発明に従うと、プロ生物的株の接着能力は接着蛋白質の特性を変えることにより調節されることがあってよい。このような特性はその接着蛋白質の粘膜レセプターとの相互作用もしくは他の（補助）蛋白質との相互作用を必要とすることもある。発明の詳細な記述本発明に従うと特に、これまでには記載されたことがなかったブタ胃腸管から単離された株であるＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの２９ｋＤのＭｗを有する蛋白質、および／またはその接着蛋白質をコードするＤＮＡ配列の使用が行われる。この新規蛋白質は接着促進活性を有する。特に、この接着促進活性は粘膜もしくはムチンへの結合を呈することを含む。この接着蛋白質は表面に存在し、そしてＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒはこの接着蛋白質をその培養培地内にはがれ落としもする。本発明は一層特別には、接着促進蛋白質の特別な特性、すなわちその蛋白質が、例えばカンピロバクテルジェジュニ（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒｊｅｊｕｎｉ）、パステウレラハエモリティカ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、およびミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）からの接着因子に対するような数々の病原性細菌の毒性蛋白質に構造的に類似するという特別な特性を利用する。これらの特徴は以下の文節に記載される。本発明に従うと、その２９ｋＤの蛋白質のものに類似する特性を有する蛋白質の存在は、当業者によく知られている技術であるウエスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）ブロツト技術を用いることで決定することができる。Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒからの接着促進蛋白質はクラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩ）溶質輸送体と称される種類の蛋白質に属し、その基本型はヒスチジンン輸送体（ＨｉｓＪ）、グルタミン輸送体（ＧｌｕｎＨ）、そしてリシン、アルギニン、およびオルニチン輸送体（ＬＡＯ）である。これらの蛋白質の内の２つのもの、ＨｉｓＪとＬＡＯの３−Ｄ構造が知られている。Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質のアミノ酸配列により、一方ではＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）のＰｅｂ１およびｐ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）のＬａｐＴのような病原体の接着蛋白質との、そしてもう一方では例えばＬＡＯやＨｉｓＪのようなクラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩ）溶質輸送体蛋白質のメンバーとの顕著な類似性が示される。蛋白質のモデル化により、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）接着因子の予想される３−Ｄ構造もＬＡＯとＨｉｓＪのものに類似することが示されている。リガンド結合にとっては必須であるクラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩ）溶質輸送体のドメインＩ内の蛋白質内のアミノ酸はこの種類の蛋白質の全てのメンバーの間では保存されている。これらのアミノ酸はまた、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質およびＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）の毒性蛋白質内の類似する位置に見いだされた。言い換えると、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒからの接着促進蛋白質は、Ｃ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）やＰ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）のような病原体の接着因子のものに類似する３−Ｄ構造を有する。本発明に従って特定される新規蛋白質の群に属する蛋白質は非病原性微生物から取得することができる蛋白質として特定され、前記蛋白質は粘膜結合促進活性および２０〜４０ｋＤの分子量を有する。分子量は２０〜３０ｋＤの間であることが好ましい。具体的な態様が請求の範囲１〜１３に開示される。特に、本発明に従う蛋白質は以下の特性の内の一つもしくは複数を含む：ａ）２０ｋＤと４０ｋＤとの間の分子量ｂ）クラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩ）溶質輸送体および／またはＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）のＰｅｂ１、Ｐ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）のＬａｐＴ、ならびににミコバクテリウムツベルクロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）もしくはミコバクテリウムレプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｅｐｒａｅ）の８５Ｋ複合蛋白質Ａ、Ｂ、およびＣという毒性蛋白質のアミノ酸配列と２０％を上回る同一アミノ酸および４０％を上回る類似アミノ酸を呈するアミノ酸配列ｃ）Ｃ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）、Ｐ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、もしくはミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の内のいずれかにより用いられもする粘膜レセプターへの特異的結合を促進するｄ）ＬＡＯもしくはＨｉｓＪのように２つのローブ（丸い突出部）を有する３− Ｄ構造を有するｅ）以下のアミノ酸配列に９０％もしくはそれを上回る類似性を示す一つもしくは複数のアミノ酸配列を含むＩ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡ（アミノ酸配列ＩＩ〜Ｖが好ましい）。具体的な態様は、蛋白質が図４および５に説明される共通配列を呈するということを更に特徴とする蛋白質の群により形成される。そのようにして特許請求される蛋白質は，病原性微生物の毒性因子もしくはクラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩ）溶質輸送体は含まず、そしてその種類の組換え蛋白質は、おそらく本特許出願の出願日に当該技術の報告書を形成することがあるかもしれない組換え毒性因子もしくは組換えクラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩ）レポーターを含みもしない。本発明に従う適用に適する蛋白質の群に属する蛋白質が、実施例に詳細に説明される粘膜結合性アッセイにより決定することができる図３のアミノ酸配列を有するＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４の２９ｋＤ蛋白質により呈示されるものよりも高いかもしくはそれに等しいＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）、Ｐ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）、もしくはミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の内のいずれかにより用いられる粘膜レセプターについて結合促進活性を呈示することが好ましい。接着促進蛋白質のヌクレオチド構造は知られているため、非病原性微生物をＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着蛋白質のものに類似する構造を有する蛋白質をコードするＤＮＡ配列の存在についてスクリーニングすることもできる。これは同一の粘膜結合性活性を少なくとも呈示する蛋白質もしくはポリペプチドをコードするいわゆる等価配列である。特にこのような核酸配列はＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの２９ｋＤ蛋白質のものに対応する図２のアミノ酸配列をコードする核酸配列である。図４および５の共通アミノ酸配列をコードする核酸配列自体も本発明の範囲内に含まれる。特に、アミノ酸共通配列を含む２０〜４０ｋＤの蛋白質をコードし、そして更に２９ｋＤ配列の配列に対応する核酸（唯一の違いは、疎水性特性は類似した状態のままとなり、かつ得られる蛋白質もしくはポリペプチドの高度な立体配座の変化は全く期待され得ないような他の類似のアミノ酸によるアミノ酸の置換をもたらす一つもしくは複数の突然変異の存在である）は本発明の範囲内に含まれる。このような配列は、配列番号２に従う配列と比較する際にはアミノ酸の保存的変化が生じているものとして知られている。本発明は更に、それ自体知られている方法でブロットアッセイを実施する際には緊縮ハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズすることができるいずれかの核酸配列をも含む。従ってそのような配列は、それ自体知られている方法で配列番号２に従うアミノ酸配列の部分をコードするオリゴヌクレオチドプローブ、好ましくはスクリーニングされるべき微生物の好むコドン使用を考慮に入れてあるプローブを用いる交差ハイブリダイゼーション技術を通して他の非病原性微生物から取得することができる核酸配列によるコードされる配列を含む。このような等価配列を取得するには例えばＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ、a ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＮｅｗＹｏｒｋＭａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．Ｆｒｉｔｓｃｈ，Ｅ．Ｆ．ａｎｄＳａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ，（１９８２）に記載される緊縮ハイブリダイゼーション条件を適切なものとして適用することができる。引用されるこの引用文献は更にはこの記述の他の場所のどこかに記載される多数の他の標準的技術に関する情報も提供し、そして引用により本明細書に取り込まれる。特に、この説明内に既に述べられている属に属する非病原性微生物からの配列が好ましい。好ましい態様では更には、配列番号３０に従う少なくとも一つの共通配列が存在する。別法でか、あるいはそれに加え、ポリペプチドＩ〜Ｖの配列の内の一つが存在する。共通配列の外側でアミノ酸が突然変異を生じており、配列番号２の成熟蛋白質の粘膜結合性活性を少なくとも有する配列番号２の成熟蛋白質のアミノ酸配列を有する蛋白質もしくはポリペプチドも本発明の範囲内に含まれる。先の定義の内のいずれかを兼ね合わせるいずれかの配列も本発明の範囲内に含まれ、かつ好ましい態様を形成する。ある等価配列がそのものとしては、ある微生物からは取得可能ではないが、例えば組換えＤＮＡ技術、ＰＣＲなどのような代替方法で産生できるということも可能である。先の態様は更にそのような代替（突然変異）配列にも当てはまり、かつ本発明の範囲内に含まれる。本発明に従う蛋白質もしくはポリペプチドは細胞抽出物および他の混入性蛋白質は含まない。実質的な純度は例えば８０％を上回る純度であることが好ましい。その純度は薬剤および食品添加物としての適用、ならびに本発明に従う適用において必要とされる活性を達成するのに十分なものである。本発明に従うと細菌は、例えばプラスチックもしくは金属表面のような非生物体表面に接着することができるＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着蛋白質のような蛋白質の存在についてスクリーニングされることがあってもよい。このようなスクリーニングは先に記載される要領で、２９ｋＤ接着蛋白質のアミノ酸配列に基づくオリゴプローブを用いて行うことができる。このようなプローブが図４および５の共通配列の一部分をコードすることが好ましい。それに加え、適切なプローブは配列番号３０の共通配列をコードする配列を含む。この共通配列もしくはその部分は少なくとも５つの連続したアミノ酸分の長さがあり、そしてそのプローブは完全に共通配列を構成していることが好ましい。粘膜結合性活性に必要とされる２９ｋＤ蛋白質もしくはその活性部分にできる限り近い同一性を呈する蛋白質もしくはポリペプチドをコードする配列を取得する目的ではそのようなプローブの組み合わせ物の使用も可能である。発明の態様の更に詳しい詳細ｉ）ラクトバキルスフェルメントゥム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）からの接着蛋白質の産生および精製本発明の好ましい態様では、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質は細菌をＭＲＳブイヨンもしくはＬＤＭ培地（ＣｏｎｗａｙａｎｄＫｊｅｌｌｅｂｅｒｇ、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３５：１１７５−１１８６１９８９）中、１４〜２４時間培養することにより産生される。この２９ｋＤ接着蛋白質はその培地から、硫酸アンモニウム沈殿、ゲル濾過、および親和性クロマトグラフィーにより見かけ上均一になるまで精製される。接着促進活性は接着阻害アッセイおよびドットブロットアッセイにより分画内で検出され、そしてセイヨウワサビパーオキシダーゼでラベル化した粘液もしくはムチンを用いるＰＡＧＥ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、およびウエスタンブロットにより可視化される。精製された蛋白質は、非変性条件下、ならびに還元および変性条件下では（標準蛋白質を用いて得られる検量曲線を用いる無勾配変性用ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ならびにその標準曲線に相関させるゲル濾過クロマトグラフィー）２９ｋＤという予想されたＭｗを有し、そしてプロナーゼに対して感受性を示し、そしてそのため欧州特許第０２１０５７９号および国際公開第９０／０９３９８号に記載および／または示唆される接着蛋白質、ならびにＣｏｎｗａｙとＫｊｅｌｌｅｎｂｅｒｇ（Ｊ．Ｇｅｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１３５、１１７５−１１８６）、Ｂｌｏｍｂｅｒｇら（Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎｍ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．５９、３４−３９１９９３）、およびＡｌｅｌｊｕｎｇら（ＣｕｒｒｅｎｔＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙｖｏｌ２８（１９９４）ｐ．２３１−２３６）により記載されるものとも異なる。引用される引用文献にそのようなものとして具体的に開示される蛋白質は蛋白質もしくはペプチドの請求の範囲の保護範囲には含まれない。引用される引用文献にそのようなものとして具体的に記載される組成物は組成物の請求の範囲の保護範囲には含まれない。特に、病原体の阻害についてそのようなものとして具体的に記載される国際公開第９０／０９３９８号の組成物の適用は保護範囲には含まれない。この文節において具体的に述べられる場合には、このことは実施例もしくはその後の記載においては引用される引用文献の材料および方法を意味する。このような引用文献の遺伝子に関する概括的な開示の範囲は本発明の幾つかの態様をカバーしうるが、それにもかかわらず本発明は前記引用文献に対して選択発明を形成する。接着促進蛋白質はＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の細胞表面から、１ＭＬｉＣｌおよび低濃度のリゾチームでのその細菌の処理により抽出することができた。ブタもしくはマウスからの小腸粘液および胃ムチンの両方に対して親和性を有する接着促進因子は２４時間成長させた後にはその培養物上清液内に放出された。ｉｉ）Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）様接着蛋白質の存在についての微生物のスクリーニング本発明の他の好ましい態様では乳酸杆菌は、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）からの接着促進蛋白質のものに類似する特徴を有する接着促進蛋白質の存在について、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、およびＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの精製された接着蛋白質に対してウサギ内で作成されたポリクローナル抗体を用いるウエスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）ブロットによる一夜培養物の培養物培地からの蛋白質の分離によりスクリーニングされる。ｉｉｉ）Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）様接着蛋白質をコードする遺伝子の存在についての微生物のスクリーニング本発明の他の好ましい態様ではＤＮＡは、スクリーニングにかけられ、そしてＰＣＲ分析に供される微生物から、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着蛋白質をコードする遺伝子のヌクレオチド配列に基づく対のプライマーを用いて単離される。形成される産物は説明書（例えば、この記述のどこか別の場所に引用されるもの）に記載される標準的分子生物学的技術もしくは市販品として入手できるキットにより分析される。ｉｖ）Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ以外の生物体内での接着促進蛋白質の合成本発明の他の特異的態様では、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒからか、もしくは他の選択された株からの、既述の方法により単離された接着蛋白質をコードする遺伝子が、例えばアスペルギルスニゲル（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｎｉｇｅｒ）、ラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）などのようなＧＲＡＳ産生生物体内の強力で、好ましくは誘導性のプロモーターおよび分泌シグナルの後ろにクローン化される。この培養培地はそのものとして用い、そして食品／飼料添加物もしくは薬剤組成物として用いるか、あるいは接着促進蛋白質をまず精製し（標準的技術により）、そしてその後に食品／飼料調製物もしくは薬剤学的組成物に添加するかのいずれかである。核酸配列は、その配列が図２の２９ｋＤのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着蛋白質の同一アミノ酸配列をコードするように調節されることがあってよいが、ただしコドンは取り込みが行われる宿主の好むコドン使用に調節されている。好まれるコドン使用の詳細は核酸発現の技術分野の当業者に知られる源から入手することができる。ｖ）接着促進特性を有するペプチドの産生本発明の他の好ましい態様では、接着促進特性を示すＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着蛋白質に由来するペプチドは化学的に合成され、そして食品／飼料添加物として用いられる。別法では、そのようなペプチドをコードするＤＮＡ配列が、例えばＡ．ニゲル（Ａ．ｎｉｇｅｒ）もしくはラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）などのようなＧＲＡＳ産生生物体内で強力で、好ましくは誘導性のプロモーターの後ろにクローン化される。そのペプチドをコードする配列が分泌シグナルをコードする配列の後ろにクローン化され、そしてそのペプチドが培地内に分泌される場合には、その培地を食品／飼料添加物として用いることができる。そのペプチドが培地内に分泌されない場合には、生物体全体、もしくはそのような生物体から作成される抽出物を食品／飼料添加物として用いることができる。別法では所望の蛋白質もしくはポリペプチドが例えば単離予定の蛋白質もしくはポリペプチドに特異的な抗体と組み合わせて例えば蛋白質もしくはポリペプチドを単離するためのそれ自体知られている方法で例えばクロマトグラフィーを用いることで単離されてよい。請求の範囲１〜２０の内のいずれかに従うエピトープまたは蛋白質もしくはペプチドに結合することができる抗体もしくは抗体分画は本発明の範囲内に含まれる。このような抗体はポリクローナル抗体（実施例を参照されたい）もしくはモノクローナル抗体であることができる。先に引用される引用文献の内のいずれかに具体的に開示される抗体はそのようなものとしての抗体の請求の範囲についての保護範囲から外れる。ｖｉ）抗原もしくはヒト蛋白質の粘膜への標的化本発明の他の態様では、ある病原体のある抗原を、その抗原に対する粘膜免疫応答を促進させるために粘膜に対して標的化させるには粘膜組織に特異的に接着する接着蛋白質の能力が用いられる。この目的のためには接着蛋白質および目的の抗原を合成することができる微生物が構築される。別法では、自己免疫応答を抑制する目的でヒト蛋白質に対する免疫応答を調節するためには、ヒト蛋白質をコードする遺伝子を保持する微生物が、それらの微生物がＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）接着蛋白質のものに類似する特性を有する接着蛋白質を合成するような様式で遺伝子工学的に作成される。実施例ｉ）ブタからの小腸粘液と胃ムチンとに結合するラクトバキルスフェルメントゥム（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）からの表面蛋白質の精製および特徴決定１４〜２４時間培養物からの使用済み培養液を６０００ｇで２０分間の遠心分離により回収し、そして超純水に対して４℃で透析した。レテンネート（ｒｅｔｅｎａｔｅ）を、１４ｋＤａ分子量カットオフ膜を通す限外濾過により濃縮した。高分子量分画を凍結乾燥させ、そして４℃で保存した。使用済み培養液を更に１０倍、中空線維限外濾過装置により濃縮し、そして硫酸アンモニウムをその濃縮液に溶かした（４℃での４０、６０、および１００％飽和）。これらの沈殿物を遠心分離により回収し（１８０００×ｇ／３０分）、超純水に溶解し、そして０．０１Ｍ重炭酸アンモニウムに対して透析した。この溶液を凍結乾燥し、そして４℃に保存した。限外濾過により濃縮された２４時間の使用済み培養物からの凍結乾燥した調製物をヘペス−ハンクス（ＨＥＰＥＳ−Ｈａｎｋｓ）に溶解、そして濾過（０．２２μｍ）することにより不溶性粒子を除去した。この溶液（２．１ｍｇの蛋白質）の４ｍｌアリコートをゲル濾過クロマトグラフィーのためにＸＫ−２６カラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ−ＬＫＢ社、ＵｐｐｓａｌａＳｗｄｅｎ）中、セファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ｇ２００にかけた。ヘペス−ハンクス（ＨＥＰＥＳ−Ｈａｎｋｓ）緩衝液を用いてカラムを平衡化し、そして試料を溶離した。２８０−ｎｍの各吸収ピークを持つ分画をドットブロットアッセイにより、そしてマイクロタイタープレート接着阻害アッセイにおける粗精製粘液に結合する乳酸杆菌の阻害の際に、ＨＰＲ−ムチンとＨＰＲ−粗精製粘液に結合する能力についてアッセイした。２８０ｎｍの各吸収ピークを持つ活性分画をプールし、透析し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタンブロット分析用に凍結乾燥させた。代替用精製法。ムチンを活性化ＣＨ−セファロース４Ｂに対し、その製造業者（Ｐｈａｒｍａｃｉａ−ＬＫＢ社、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）の説明書に従って共役結合によりカップリングさせた。カラムＣ１０／４０（３０ｍｌの分離床体積）この吸着体で充填し、そしてヘペス−ハンクス（ＨＥＰＥＳ−Ｈａｎｋｓ）で平衡化させた。Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の使用済み培養液、細胞抽出物、もしくはゲル濾過クロマトグラフィーからの活性分画をそのカラムにかけた。そのカラムを６ｍＬ／時間の流速で２倍の分離床体積の平衡化用緩衝液で洗浄し、その後に違う溶液（０．１ＭグリシンｐＨ３．０、０．１ＭトリスｐＨ８、および０〜２Ｍの塩酸ナトリウム濃度勾配液）で続けて洗浄した。この接着促進活性は、接着阻害アッセイおよびドットブロットアッセイによりそれらの分画内で検出し、そしてそれをセイヨウワサビパーオキシダーゼでラベル化させた粘液もしくはムチンを用いるＰＡＧＥ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、およびウエスタンブロットにより可視化させた。この接着促進蛋白質は、その細菌の１ＭＬｉＣｌおよび低濃度のリゾチームでの処理によりＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の細胞表面から抽出することができた。小腸粘液と胃ムチンとの両方に対する親和性を有する接着促進蛋白質は、２４時間成長させた後にその培養物上清液内に放出された。この活性分画を、過ヨウ素酸Ｓｃｈｉｆｆ染色法（ＳＩＧＭＡ社）とＤＩＧグリカン検出キット（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｈｅｉｍ社、Ｇｅｒｍａｎｙ）中、炭水化物の存在下でアッセイすることによりその特徴決定を行い、そしてその接着促進蛋白質の活性領域の熱安定性を決定した。この接着促進活性は炭水化物を欠失しており、かつＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）からのＬｉＣｌ細胞抽出物を１００℃ で５分間加熱し、そしてドツトブロット接着アッセイにより検査した際には、生物学的には完全に活性なままであった。精製された蛋白質は、非変性条件下、ならびに還元および変性条件下（標準蛋白質を用いて取得される検量曲線を用いるＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびその標準曲線に相関させるゲル濾過クロマトグラフィー；図１）では推定される２９ｋＤのＭｗを有する。この接着促進蛋白質については更にＮ−末端アミノ酸配列を決定することにより特徴決定を施し、そのことにより以下の配列：ＡＸＸＡＶＮＸＥＬＶ（Ｖ）（Ｋ）が示された。この接着促進蛋白質を改変させたブタトリプシンで消化させ、そして形成されたペプチドを逆相ＨＰＬＣにより精製したところ、多数のペプチドが粘液およびムチンに特異的に接着することが、ドットブロットアッセイおよびムチン接着アッセイにより測定した際に見いだされた。このペプチドのアミノ酸配列は：Ｉ：ＡＮＦＶＰＴＫ、ＩＩ：ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫ、ＩＩＩ：ＩＳＡＬＦＮＫ、ＩＶ：ＩＩＡＧ（Ｔ）Ｇ（Ｔ）ＮＮＡである。これらの配列ではＸはセリン（Ｓ）を表すことが最もよくある。ｉｉ）接着因子をコードする蛋白質のクローニングおよび配列決定接着促進蛋白質遺伝子をＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒのゲノムバンクからクローン化した。接着遺伝子配列を同定するプローブを作成するために、接着促進蛋白質の配列が決定されたペプチドのアミノ酸配列データに基づきオリゴヌクレオチドプライマーを合成した。これらのオリゴヌクレオチドをＰＣＲ反応において様々な組み合わせで用いた。各々、Ｎ−末端ペプチドおよびペプチドＩに対応するオリゴヌクレオチド４２（センス：５'-CTI.GC I.GTI.AAC/T.TCI.GAG/A.TTG/A.GT-３'）および１０５（アンチセンス：５'-GCC. GGGA.TCC.TTT.G/A/T/CGT.G/TGG.G/TAC.G/AAA.G/ATT.G/A/TGC-3'）はＥｃｏＲＩおよびＢａｍＨＩ部位にフランクされる１８３ｂｐ（７）ＰＣＲ産物を生じ、この産物は３．５ｋｂＳｓｔＩ−ＰｓｔＩ染色体Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）断片でのサザン（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ）ブロットでハィブリダイズした。この断片を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中でｐＧＥＭ３内にクローン化させた。接着因子をコードする遺伝子の位置を制限酵素分析により決定し、そしてその３．５ｋｂ断片の適切な部位のヌクレオチド配列を決定した（図２）。この接着蛋白質の予想されるアミノ酸配列が図３に示される。ｉｉｉ）Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着蛋白質のアミノ酸配列の分析Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着蛋白質のアミノ酸配列のコンピューター支援分析を行った。図４は、その蛋白質がＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）からのＰｅｂ１およびＰ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）からのＬａｐＴという毒性蛋白質と顕著な類似性を示すことを示す。図５は、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）接着蛋白質は更に、クラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩ）溶質輸送体との類似性を示すことを示す。図６は、この接着蛋白質がミコバクテリウムレプラエ（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｌｅｐｒａｅ）およびミコバクテリウムトゥベルクロシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）の８５Ｋ複合毒性蛋白質に対する類似性を示すことを示す。蛋白質モデル化研究により、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着蛋白質の予想される３ −Ｄ構造はＬＡＯおよびＨｉｓＪのものに類似することが示される。これらの研究により更に、Ｐｅｂ１はＬＡＯおよびＨｉｓＪのものに類似する３−Ｄ構造を有することも示される。ｉｖ）ラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株内での接着蛋白質様蛋白質の決定約２０のラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株をＬＤＭ培地内で培養し、その培養培地を回収し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥにより蛋白質を分離した。接着蛋白質様蛋白質の存在は標準的分子生物学的技術に従いウエスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）ブロットにより決定した。表１に示される結果により幾つかのラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ）株が接着蛋白質様蛋白質を産生する一方で、他のものはそうではないことが示される。図面の簡単な説明図１ブロッティングについてＨＲＰでラベル化させた粘液を用いる接着促進蛋白質（ＡＰＰ）のＳＤＳ−ＰＡＧＥおよびウエスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）ブロット。Ａ）分子量マーカー（レーン１）；親和性クロマトグラフィー後のＡＰＰ（レーン２、６、および７）；天然のＰＡＧＥからのＡＰＰ（レーン３、４、および５）。Ｂ）分子量マーカー（レーン１）；ゲル濾過クロマトグラフィーからのＡＰＰ（レーン２および３）。レーン３の矢印はＡＰＰの位置を示す；Ｃ）ゲル濾過クロマトグラフィーの後のＳＤＳ−ＰＡＧＥからのＡＰＰのウエスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）ブロット（レーン１）；親和性クロマトグラフィー後（レーン２）；１４時間成長させた後のＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）の１ＭＬｉＣｌ抽出（レーン３）；ＰＡＧＥからのもの（レーン４）。図２Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質のヌクレオチド配列。読み取り枠はヌクレオチド１から開始し、そしてヌクレオチド７３４で終了する。図３Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質のアミノ酸配列。図４Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質、Ｃ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）からのＰｅｂ１、およびＰ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）からのＬａｐＴのアミノ酸配列の比較。共通配列が下の配列に示される。太字は同一のアミノ酸もしくは保存されている置換を意味する。図５Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質と、クラスＩＩＩ（ＣｌａｓｓＩＩＩＩ）溶質輸送体蛋白質（Ａｔｕｎｏｐ、アグロバクテルツメファキエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）のノパリン；Ａｔｕｏｃｔ、アグロバクテルツメファキエンス（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）のオクトピン；ＧｌｎＨ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のグルタミン結合性蛋白質；ＨｉｓＪ、ヒスチジン結合性蛋白質、ＬＡＯ、サルモネラティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｈｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）のリシン、アルギニン、オルニチン結合性蛋白質のアミノ酸配列の比較。共通配列が下の配列に示される。他の蛋白質にも生じる接着促進蛋白質のアミノ酸が太字大文字で現れ；コロンは保存された置換を表し、そして星印はあまり保存度が高くない置換を表す。図６Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒの接着促進蛋白質と、ミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）の８５Ｋ複合体の蛋白質のアミノ酸配列の比較。共通配列が下の配列に示される。アデヘシンと、一つもしくは複数のミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）蛋白質との中での同一なアミノ酸が太字大文字で表される。コロンは保存された置換を表し、そして星印はあまり保存度が高くない置換を表す。表１プローブとしてのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着促進蛋白質に対して作成された抗体を用いるラクトバキルス（Ｌａｃｔｏｂａｖａｃｉｌｌｕｓ）株の培養培地のウエスタン（Ｗｅｓｔｅｒｎ）ブロットシグナルＬ．ガッセリ（Ｌ．ｇａｓｓｅｒｉ）ＮＣＫ８９＋Ｌ．レウテリ（Ｌ．ｒｅｕｔｅｒｉ）ＭＬ１＋＋Ｌ．ムリヌス（Ｌ．ｍｕｒｉｎｕｓ）＋Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）２３９９＋／− Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｍｔａｒｕｍ）＋＋Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）ＫＬＤ − Ｌ．アニマリス（Ｌ．ａｎｉｍａｌｉｓ）３６４Ｔ＋Ｌ．アニマリス（Ｌ．ａｎｉｍａｌｉｓ）３６４＋／− Ｌ．カセイ（Ｌ．ｃａｓｅｉ）ＡＴＣＣ３９３＋／− Ｌ．アキドフィルス（Ｌ．ａｃｉｄｏｐｈｉｌｕｓ）ＮＣＫ６５− Ｌ．アニマリス（Ｌ．ａｎｉｍａｌｉｓ）３６２ − Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）８０１４＋／− Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）ＬＰ８０＋Ｌ．ブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）Ｒ３＋Ｌ．ブレビス（Ｌ．ｂｒｅｖｉｓ）ＭＬ１２＋大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ） − Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ＋＋Ｌ．プランタルム（Ｌ．ｐｌａｎｔａｒｕｍ）２５６＋＋

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１０月１７日（１９９７．１０．１７）【補正内容】請求の範囲１．非病原性微生物から得ることができ、そして粘膜結合活性および２０〜４０ｋＤ、好ましくは２０〜３０Ｋｄの分子量を有する蛋白質もしくはそれに等価なポリペプチドであって、以下のアミノ酸配列Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡに８０％を上回る割合で同一な一つもしくは複数のアミノ酸配列を含む蛋白質もしくはポリペプチド。２．粘膜結合活性が、病原性微生物、好ましくは病原体カンピロバクテル（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、ミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、もしくはパステウレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、例えばＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）、Ｐ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）の内のいずれかにより粘膜上で認識されるレセプターへの結合を含む請求の範囲１に記載の蛋白質もしくはポリペプチド。３．粘膜結合活性が、配列番号２のアミノ酸配列を有するＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ２９ｋＤ接着因子のものに等しいかもしくはそれを上回る前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。４．配列番号６に詳細に説明されるアミノ酸共通配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。５．配列番号１３に詳細に説明されるアミノ酸共通配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。６．配列番号６および配列番号１３に具体的に記載されているアミノ酸共通配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。７．存在するアミノ酸配列がＩ〜Ｖの内のいずれかのものに９０％を上回る割合で同一な前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。８．存在するアミノ酸配列がアミノ酸配列ＩＩ〜Ｖの内の一つもしくは複数に８０％を上回る割合、好ましくは９０％を上回る割合で同一な前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。９．一つもしくは複数の以下のアミノ酸配列Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡを含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１０．一つもしくは複数の好ましくはアミノ酸配列ＩＩ−Ｖを含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１１．２つのローブ構造を有する前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１２．以下の蛋白質、ｎｏｃ、ｏｃｃ、ＧｌｎＨ、ＨｉｓＪ、ＬＡＯの内のいずれかのアミノ酸配列に２０％を上回る割合で同一なアミノ酸配列を有する前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１３．以下の蛋白質、ｎｏｃ、ｏｃｃ、ＧｌｎＨ、ＨｉｓＪ、ＬＡＯの内のいずれかのアミノ酸配列に４０％を上回る割合で同一なアミノ酸配列を有する前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１４．配列番号２の２９ｋＤのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着因子のアミノ酸配列に４０％を上回る割合、一層好ましくは６０％を上回る割合、一層好ましくは８０％を上回る割合で同一なアミノ酸配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１５．配列番号２の２９ｋＤのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着因子のアミノ酸配列に同一なアミノ酸配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１６．配列番号２の２９ｋＤのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着因子のアミノ酸配列との、その蛋白質もしくはポリペプチドに対して作成されたポリクローナルもしくはモノクローナルのいずれかの抗体への結合により取得することができる前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１７．粘膜結合活性を有する少なくとも５および好ましくは７のアミノ酸でできている前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドの断片であるポリペプチド断片であって、少なくとも５および好ましくは７アミノ酸でできている前記ポリペプチド断片が前述の請求の範囲に記載の蛋白質もしくはポリペプチドの内のいずれかのものの中の連続配列として存在し、前記断片が６０アミノ酸を下回る長さを有するポリペプチド断片。１８．４０アミノ酸を下回る長さの請求の範囲１７に記載のポリペプチド断片。１９．ペプチド、Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡＶＩ）配列番号６の共通配列、およびＶＩＩ）配列番号１３の共通配列、好ましくはペプチドＩＩ〜ＶＩＩ、から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一な、少なくとも一連の５アミノ酸からなるアミノ酸配列を含む請求の範囲１７もしくは１８に記載のポリペプチド断片。２０．ペプチド、Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡＶＩ）配列番号６の共通配列、およびＶＩＩ）配列番号１３の共通配列、から選択されるアミノ酸配列と同一なアミノ酸配列を含む、請求の範囲１７〜１９の内のいずれかに記載のポリペプチド断片。２１．前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片の内のいずれかのアミノ酸配列を含む、組換え蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片。２２．よりすぐりの薬剤、免疫調節剤、もしくは抗原に連結させてある、前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の粘膜結合活性を有する蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片を含む融合蛋白質もしくはポリペオプチド。２３．請求の範囲１〜２１の内のいずれか一つに記載の、好ましくは請求の範囲１〜１６の内のいずれか一つに記載の蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片上のエピトープに結合することができる抗体もしくは抗体断片、好ましくはモノクローナル抗体。２４．請求の範囲１〜２２の内のいずれか一つに記載の蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片の内のいずれかをコードする核酸配列。２５．ある発現調節配列に操作的に連結させてある請求の範囲２４に記載の核酸を含む発現ベクターであって、例えばＧＲＡＳ微生物のような非病原性微生物内で請求の範囲２４に記載される核酸を発現することができ、そしてＧＲＡＳ微生物に由来する核酸を含むことが好ましい発現ベクター。２６．発現ベクター調節配列が、その核酸配列を取得してきた接着因子をコードする遺伝子とは天然の状態では連結していない請求の範囲２５の記載の発現ベクター。２７．請求の範囲２４に記載の核酸配列および／または請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクターを含む組換え微生物であって、前記核酸配列および／または発現ベクターが非存在であるか、もしくは低コピー数で存在するか、もしくは非組換え微生物内では低い程度で発現される組換え微生物。２８．非病原性微生物、好ましくはヒトもしくは動物のマイクロフローラに固有な微生物、一層好ましくはヒトのマイクロフローラに固有な微生物である請求の範囲２７に記載の組換え微生物。２９．薬剤学的に許容される用量形態中の薬剤学的に活性な組成物として − 請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の、好ましくは請求の範囲１〜１６の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片（前記蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片は粘膜結合活性を有する）、 − 請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクター − 請求の範囲２７もしくは２８に記載の組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する） − 請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド、もしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する）、を含む構成成分の群より選択される一つの構成成分、ならびに薬剤学的に許容される一つの担体を含む組成物。３０．粘膜定着性病原性微生物に関連する疾患もしくは病気の予防および／または治療のための薬剤学的組成物中の薬剤学的に活性な構成成分として − 粘膜結合活性を有する、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片、 − 請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクター − 請求の範囲２７もしくは２８に記載の組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する） − 請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する）、からなる構成成分の群より選択される一つの構成成分の使用。３１．粘膜に対して一つの追加的薬剤学的活性構成成分を標的化するための薬剤学的組成物中の標的化用構成成分として（前記追加的薬剤学的構成成分はその標的用構成成分に物理的に連結される）、 − 粘膜結合活性を有する、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片、 − 請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクター − 請求の範囲２７もしくは２８に記載の組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する） − 請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する）、を含む構成成分の群より選択される一つの構成成分の使用。３２．食品産物への、請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物および／または請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片を発現することができる非病原性微生物または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する）の添加を含む食品産物を改善するための方法。３３．食品産物への、請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物の添加を含む食品産物を改善するための方法。３４．請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物および／または請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片を発現することができる非病原性微生物または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合活性を発現する）を含む食品産物。３５．添加物として、請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物を含む食品産物。３６．粘膜に特異的に結合することができる微生物について非病原性微生物をスクリーニングする方法であって、微生物上もしくは微生物中、または微生物の培養物中での、ある特別な蛋白質もしくはポリペプチドの存在の、それ自体知られている方法での検出を含み、前記特別な蛋白質もしくはポリペプチドが請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドである方法。３７．粘膜に特異的に結合することができる微生物について非病原性微生物をスクリーニングする方法であって、ある微生物中でのある特別な遺伝子の存在の、それ自体知られている方法での検出を含み、前記特別な遺伝子が請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドをコードする方法。３８．粘膜に特異的に結合することができる非病原性微生物の検出に適するキットであって、例えば抗体のような、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドに特異的に結合することができる一つの構成成分を含むキット。３９．粘膜に特異的に結合することができる非病原性微生物の検出に適するキットであって、例えば核酸プローブもしくはプライマーのような、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドをコードする核酸配列の一部分に特異的に結合することができる一つの構成成分を含むキット。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 14/205 Ｃ０７Ｋ 14/285 14/285 14/335 14/335 14/35 14/35 16/12 16/12 19/00 19/00 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 ＡＣ１２Ｑ 1/68 Ｇ０１Ｎ 33/53 ＤＧ０１Ｎ 33/53 33/569 Ｚ 33/569 Ａ６１Ｋ 35/66 // Ａ６１Ｋ 35/66 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者コンウエイ，パトリシア・リンオーストラリア・ニユーサウスウエールズ 2036・ルペルース・グーラワールアベニユー22

Claims

【特許請求の範囲】１．非病原性微生物から得ることのできる蛋白質であって、粘膜結合促進活性および２０〜４０kＤ、好ましくは２０〜３０ｋＤの分子量を有する蛋白質、もしくはそれに等価なポリペプチド。２．粘膜結合促進活性が、病原性微生物、好ましくはカンピロバクテル（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、ミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）、もしくはパステウレラ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）、例えばＣ．ジェジュニ（Ｃ．ｊｅｊｕｎｉ）、Ｐ．ハエモリティカ（Ｐ．ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃａ）のいずれかにより粘膜上で認識されるレセプターへの結合を促進することを含む請求の範囲１に記載の蛋白質もしくはポリペプチド。３．粘膜結合促進蛋白質活性が、Ｌ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ２９ｋＤ接着因子のものに等しいかもしくはそれを上回る前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。４．図４および／または図５で具体的に記載されるアミノ酸共通配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。５．配列番号３０で具体的に記載されるアミノ酸共通配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。６．以下のアミノ酸配列Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡに８０％を上回る割合、好ましくは９０％を上回る割合で同一、一層好ましくはアミノ酸配列ＩＩ−Ｖの内の一つもしくは複数に８０％を上回る割合で、好ましくは９０％を上回る割合で同一な一つもしくは複数のアミノ酸配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。７．以下のアミノ酸配列Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡの内の一つもしくは複数を含む、より好ましくはアミノ酸配列ＩＩ−Ｖの内の一つもしくは複数を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。８．２つのローブ構造を有する前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。９．以下の蛋白質、Ａｔｕｏｃｔ、Ａｔｕｎｏｐ、ＧｌｎＨ、ＨｉｓＪ、ＬＡＯの内のいずれかのアミノ酸配列に２０％を上回る割合で同一なアミノ酸配列を有する前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１０．以下の蛋白質、Ａｔｕｏｃｔ、Ａｔｕｎｏｐ、ＧｌｎＨ、ＨｉｓＪ、ＬＡＯの内のいずれかのアミノ酸配列に４０％を上回る割合で同一なアミノ酸配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１１．図３の２９ｋＤのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着因子のアミノ酸配列に４０％を上回る割合、一層好ましくは６０％を上回る割合、一層好ましくは８０％を上回る割合で同一なアミノ酸配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１２．図３の２９ｋＤのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着因子のアミノ酸配列に同一なアミノ酸配列を含む前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１３．図３の２９ｋＤのＬ．フェルメントゥム（Ｌ．ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）１０４Ｒ接着因子のアミノ酸配列との、その蛋白質もしくはポリペプチドに対して作成されたポリクローナルもしくはモノクローナルのいずれかの抗体への結合により取得される前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチド。１４．粘膜結合促進活性は必ずしも有する必要のない少なくとも５および好ましくは７のアミノ酸からなる前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドの断片であるポリペプチド断片であって、前記ポリペプチド断片の少なくとも５および好ましくは７アミノ酸が前述の請求項に記載の蛋白質もしくはポリペプチドの内のいずれかのものの中の連続配列として存在するアミノ酸配列である蛋白質もしくはポリペプチド。１５．６０アミノ酸を下回る長さの請求の範囲１４に記載のポリペプチド断片。１６．４０アミノ酸を下回る長さの請求の範囲１５に記載のポリペプチド断片。１７．連続配列として配列番号３０の共通配列内に存在する５アミノ酸からなる少なくとも一つの配列のアミノ酸配列を含む請求の範囲に１４〜１６の内の一つに記載のポリペプチド配列。１８．ペプチド、Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡＶＩ）図４の共通配列、およびＶＩＩ）図５の共通配列、好ましくはペプチドＩＩ−ＶＩＩ、から選択されるアミノ酸配列と少なくとも８０％同一、好ましくは少なくとも９０％同一なアミノ酸配列を含むペプチドから選択される、請求の範囲１４〜１８の内のいずれかに記載のポリペプチド断片。１９．ペプチド、Ｉ）ＡＡＳＡＶＮＳＥＬＶＨＫＩＩ）ＡＮＦＶＰＴＫＩＩＩ）ＤＴＡＩＱＳＳＹＮＫＩＶ）ＩＳＡＬＦＮＫＶ）ＩＡＧＴＧＴＮＮＡＶＩ）図４の共通配列、およびＶＩＩ）図５の共通配列、から選択されるアミノ酸配列と同一なアミノ酸配列を含む、請求の範囲１４〜１８の内のいずれかに記載のポリペプチド断片。２０．請求の範囲１４〜１８の内のいずれかに記載の複数のポリペプチド断片の組み合わせ物であるポリペプチド断片。２１．前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片の内のいずれかのアミノ酸配列を含む、組換え蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片。２２．よりすぐりの薬剤、免疫調節剤、もしくは抗原に連結させてある、前述の請求の範囲の内のいずれかに記載の粘膜結合促進活性を有する蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片を含む融合蛋白質もしくはポリペプチド。２３．請求の範囲１〜２１の内のいずれかに記載の、好ましくは請求の範囲１〜１３の内のいずれかに記載の蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片上のエピトープに結合することができる抗体もしくは抗体断片、好ましくはモノクローナル抗体。２４．請求の範囲１〜２２の内のいずれか一つに記載の蛋白質、ポリペプチド、もしくはポリペプチド断片の内のいずれかにコードされる核酸配列。２５．ある発現調節配列に操作可能に連結した請求の範囲２４に記載の核酸を含む発現ベクターであって、例えばＧＲＡＳ微生物のような非病原性微生物内で請求の範囲２１に記載される核酸を発現することができ、そしてＧＲＡＳ微生物に由来する核酸を含むことが好ましい発現ベクター。２６．発現調節配列が、その核酸配列を取得してきた接着因子をコードする遺伝子とは天然の状態では連結していない請求の範囲２５の記載の発現ベクター。２７．請求の範囲２４に記載の核酸配列および／または請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクターを含む組換え微生物であって、前記核酸配列および／または発現ベクターが非存在であるか、もしくは低コピー数で存在するか、もしくは非組換え微生物内では一層低い程度で発現される組換え微生物。２８．非病原性微生物、好ましくはヒトもしくは動物のマイクロフローラに固有な微生物、一層好ましくはヒトのマイクロフローラに固有な微生物である請求の範囲２７に記載の組換え微生物。２９．薬剤学的に許容される用量形態中の薬剤学的に活性な組成物として − 請求の範囲１〜２１の内のいずれかに記載の、好ましくは請求の範囲１〜１３の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片（前記蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片は粘膜結合促進活性を有する）、 − 請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクター − 請求の範囲２７もしくは２８に記載の組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する） − 請求の範囲１〜２１の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）、を含む構成成分の群より選択される−つの構成成分、ならびに薬剤学的に許容される−つの担体を含む組成物。３０．粘膜定着性病原性微生物に関連する疾患もしくは病気の予防および／または治療のための薬剤学的組成物中の薬剤学的に活性な構成成分として − 粘膜結合促進活性を有する、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片、 − 請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクター − 請求の範囲２７もしくは２８に記載の組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する） − 請求の範囲１〜２１の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはペプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）、を含む構成成分の群より選択される一つの構成成分の使用。３０．粘膜に対して一つの追加的薬剤学的活性構成成分を標的化するための薬剤学的組成物中の標的化用構成成分として（前記追加的薬剤学的構成成分はその標的用構成成分に物理的に連結される）、 − 粘膜結合促進活性を有する、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片、 − 請求の範囲２５もしくは２６に記載の発現ベクター − 請求の範囲２７もしくは２８に記載の組換え微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する） − 請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはぺプチドを発現することができる非病原性微生物、または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）、を含む構成成分の群より選択される一つの構成成分の使用。３２．食品産物への、請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物および／または請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片を発現することができる非病原性微生物または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）の添加を含む食品産物を改善するための方法。３３．食品産物への、請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物の添加を含む食品産物を改善するための方法。３４．請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物および／または請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドもしくはポリペプチド断片を発現することができる非病原性微生物または前記微生物の一部分（前記部分は粘膜結合促進活性を発現する）を含む食品産物。３５．添加物として、請求の範囲１〜２２もしくは２５〜２８の内のいずれかに記載の産物を含む食品産物。３６．粘膜に特異的に結合することができる微生物について非病原性微生物をスクリーニングする方法であって、微生物上もしくは微生物中、または微生物の培養物中ての、ある特別な蛋白質もしくはポリペプチドの存在の、それ自体知られている方法での検出を含み、前記特別な蛋白質もしくはポリペプチドが請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドである方法。３７．粘膜に特異的に結合することができる微生物について非病原性微生物をスクリーニングする方法であって、ある微生物中でのある特別な遺伝子の存在の、それ自体知られている方法での検出を含み、前記特別な遺伝子が請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドをコードする方法。３８．粘膜に特異的に結合することができる非病原性微生物の検出に適するキットであって、例えば抗体のような、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドに特異的に結合することができる一つの構成成分を含むキット。３９．粘膜に特異的に結合することができる非病原性微生物の検出に適するキットであって、例えば核酸プローブもしくはプライマーのような、請求の範囲１〜２２の内のいずれかに記載の蛋白質もしくはポリペプチドをコードする核酸配列の一部分に特異的に結合することができる一つの構成成分を含むキット。