JP2000236882A

JP2000236882A - マウスナース細胞レセプター遺伝子

Info

Publication number: JP2000236882A
Application number: JP11046603A
Authority: JP
Inventors: Mototsugu Kitaura; 基次北浦; Yuji Tsuruta; 裕次鶴田; Ryuji Suzuki; 隆二鈴木
Original assignee: Shionogi and Co Ltd
Current assignee: Shionogi and Co Ltd
Priority date: 1999-02-24
Filing date: 1999-02-24
Publication date: 2000-09-05

Abstract

(57)【要約】【課題】新規なマウスナース細胞レセプター遺伝子を提
供する。【解決手段】配列番号２の１位のMetから８３３位のS
erまでのアミノ酸配列を含むポリペプチドまたは該アミ
ノ酸配列において１もしくは数個のアミノ酸が置換、欠
失、挿入または付加されたアミノ酸配列を含み、かつマ
ウスナース細胞レセプターであるポリペプチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、マウスナース細胞レセ
プター；本発明のポリペプチドをコードするDNA；本発
明の塩基配列中の連続した少なくとも１４個の塩基を含
み、該塩基配列と特異的に結合するDNA；本発明のポリ
ペプチドを特異的に認識する抗体；本発明の抗体を産生
するハイブリドーマ；本発明のDNAを含む発現ベクタ
ー；本発明の発現ベクターより得られる形質転換体；組
換えマウスナース細胞レセプターの製造方法；本発明の
マウスナース細胞レセプターに特異的に結合するリガン
ドのスクリーニング方法；本発明のマウスナース細胞レ
セプターとリガンドとの結合を阻害する化合物のスクリ
ーニング方法；本発明のスクリーニング方法により得ら
れる医薬；本発明プライマーを含むディジョージ症候群
を検出するためのキット；本発明プライマーを含む自己
免疫疾患を検出するためのキットに関する。

【０００２】

【従来の技術】胸腺は、免疫機能の発達に重要な役割を
果たし、特にT細胞の分化や成熟に不可欠な器官であ
る。胸腺微小環境は、マクロファージ、樹状細胞、線維
細胞、上皮細胞などから構成される。この上皮細胞に、
胸腺ナース細胞が存在している(Wekerle, H. et al., N
ature, 283:402, 1980; Wekerle, H. et al., J. Exp.
Med., 151:929, 1980)。さらに、ナース細胞は胸腺以外
の、ヒトやマウスの皮膚組織（Iwagami, S. etal., I.
Immunol., 153, 2927-2938, 1994）、骨髄（豊崎ら, 炎
症と免疫, 2:643-649, 1994）、リウマチ患者の滑膜
（豊崎ら, 臨床免疫, 27: 167, 1995）、腫瘍の原発巣
及び転移巣（Itoh, T. et al., Eur. J. Immunol., 18,
821-824,1988、Hiai, H. et al., J. Natl. Cancer In
st., 66, 713-722, 1981）に存在することが確認されて
いる。胸腺ナース細胞は、未熟なT細胞を細胞内に多数
抱え込んだ細胞である。従って、このナース細胞は、T
細胞の成熟・分化に関与し、T細胞のpositive selectio
nおよびnegative selectionに関与している可能性があ
るものの、その機能については不明な点が多い。

【０００３】一方、ディジョージ症候群は、胸腺の無ま
たは低形成、副甲状腺の無または低形成に起因する低カ
ルシウム血症、顔貌異常、心大血管系異常を特徴とする
先天性自己免疫疾患および臓器形成異常性疾患である。
ディジョージ症候群の多くの症例で、第２２染色体長腕
の欠失が観察されることにより、ディジョージ症候群を
含む臓器形成異常性疾患、特にＣＡＴＣＨ２２（cardia
c defects, abnormalfacies, thymic hypoplasia, clef
t palate, and hypocalcemia on chromosome22）の責任
遺伝子が同じ部位に存在するのではないかと想定されて
いる。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、マウ
スナース細胞レセプター；本発明のポリペプチドをコー
ドするDNA；本発明の塩基配列中の連続した少なくとも
１４個の塩基を含み、該塩基配列と特異的に結合するDN
A；本発明のポリペプチドを特異的に認識する抗体；本
発明の抗体を産生するハイブリドーマ；本発明のDNAを
含む発現ベクター；本発明の発現ベクターより得られる
形質転換体；組換えマウスナース細胞レセプターの製造
方法；本発明のマウスナース細胞レセプターに特異的に
結合するリガンドのスクリーニング方法；本発明のマウ
スナース細胞レセプターとリガンドとの結合を阻害する
化合物のスクリーニング方法；本発明のスクリーニング
方法により得られる医薬；本発明プライマーを含むディ
ジョージ症候群を検出するためのキット；本発明プライ
マーを含む自己免疫疾患を検出するためのキットを提供
することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、ナース細
胞の機能の解明を目指して鋭意研鑚を重ねてきた。その
結果、マウスナース細胞膜表面に発現するマウスナース
細胞レセプター（以下、マウスB6TNC#10または本レセプ
ターと略する）をコードする遺伝子を見出し、本発明を
完成するに至った。本レセプター遺伝子は、ディジョー
ジ症候群の原因領域に相当するマウスゲノムDNA配列（G
enBank Accesion No.: AC000096）に相同性を示す。ま
た、本レセプターは、遺伝子の塩基配列から予想される
オープンリーディングフレームでは８３３個のアミノ酸
からなるタンパク質である。本レセプターのcDNAと最も
高い相同性を示したのは、アセチル低比重リポタンパク
質（low density lipoprotein: LDL）レセプター（Adac
hi, H. et al., J. Biol.Chem., 272, 31217-31220, 19
97）であり、相同性は、３９％であった。アセチルLDL
レセプターは、アセチルLDLを細胞内へ取り込む機能を
有する（Goldstein, J. L. et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA, 76, 333-337, 1979）。このような機能を有
するレセプターは、スカベンジャーレセプターと命名さ
れている。スカベンジャーレセプターは、マクロファー
ジの泡沫化に関与し、動脈硬化形成の原因と考えられて
いる。本レセプターもスカベンジャーレセプターファミ
リーに属することが想定される。

【０００６】すなわち、本発明は、配列番号２の１位の
Metから８３３位のSerまでのアミノ酸配列を含むポリペ
プチド；本発明のアミノ酸配列において１もしくは数個
のアミノ酸が置換、欠失、挿入または付加されたアミノ
酸配列を含み、かつマウスナース細胞レセプターである
ポリペプチド；本発明のポリペプチドからなるマウスナ
ース細胞レセプター；本発明のポリペプチドをコードす
るDNA；配列番号１の６５位のAから２５６３位のCまで
の塩基配列を含む本発明のDNA；本発明のDNAとストリン
ジェントな条件でハイブリダイズし、かつマウスナース
細胞レセプターであるポリペプチドをコードするDNA；
本発明のDNAからなるマウスナース細胞レセプター遺伝
子；配列番号１に記載の塩基配列中の連続した少なくと
も１４個の塩基を含み、該塩基配列と特異的に結合する
DNA；配列番号４から１０のいずれかに記載の塩基配列
中の連続した少なくとも１４個の塩基を含む本発明のDN
A；本発明のポリペプチドを特異的に認識する抗体；モ
ノクローナル抗体である、本発明の抗体；本発明のモノ
クローナル抗体を産生するハイブリドーマ；本発明のDN
Aを有する発現ベクター；本発明の発現ベクターを宿主
に導入して得られる形質転換体；本発明の形質転換体を
培養する工程、および生産された組換えタンパク質を培
養培地から回収する工程を包含する、組換えマウスナー
ス細胞レセプターの製造方法；本発明の形質転換体また
は本発明の製造方法より得られたマウスナース細胞レセ
プターを用いた、マウスナース細胞レセプターに特異的
に結合するリガンドのスクリーニング方法；本発明の形
質転換体または本発明の製造方法より得られたマウスナ
ース細胞レセプターと本発明のスクリーニング方法より
得られるリガンドとの結合を阻害する化合物のスクリー
ニング方法；本発明のスクリーニング方法より得られる
医薬；本発明のDNAを含む、ディジョージ症候群を検出
するためのキット；本発明のDNAを含む、自己免疫疾患
を検出するためのキット、に関する。

【０００７】本発明のポリペプチドは、「配列番号２の
１位のMetから８３３位のSerまでのアミノ酸配列を含む
ポリペプチド」または「該アミノ酸配列において１もし
くは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入または付加され
たアミノ酸配列を含み、かつマウスナース細胞レセプタ
ーであるポリペプチド」を指す。「マウスナース細胞レ
セプター」とは、マウスナース細胞の細胞膜に発現する
タンパク質である。「ナース細胞」とは、リンパ球など
自分自身以外の細胞を細胞内に取り込むことができる能
力がある細胞を言う。マウスナース細胞株としては、B6
TNC（Nanno, M.et al., J. Immunol., 155, 2918, 199
5）、IT-79 MTNC3 (Itoh, T. et al.(1998) Eur. J. Im
munol. 18,821)、Doi Nurse（Iwagami, S. et al. (199
4) J. Immunol. 153,2927）、C3H10T¹/₂clone8 (ATCC
No.CCL-226)が例示できる。

【０００８】本発明のDNAとは、本発明のポリペプチド
をコードするDNAを指す。例えば、配列番号１の６５位
のAから２５６３位のCまでの塩基配列を含むDNAが例示
される。更に、本発明のDNAとストリンジェントな条件
でハイブリダイズし、かつマウスナース細胞レセプター
であるポリペプチドをコードするDNAも、本発明のDNAに
含まれる。「DNAにストリンジェントな条件でハイブリ
ダイズするDNA」は、コード領域のDNAをプローブとして
用いることにより得ることが出来る。ここで、「ストリ
ンジェントな条件でハイブリダイズする」とは、例え
ば、６ｘSSC、0.5%SDSおよび50%ホルムアミドの溶液中
で42℃にて加温した後、0.1xSSC、0.5%SDSの溶液中で68
℃にて洗浄する条件でも依然として陽性のハイブリダイ
ズのシグナルが観察されることを表す。更に、本発明の
DNAには、「配列番号１に記載の塩基配列中の連続した
少なくとも１４個の塩基を含み、該塩基配列と特異的に
結合するDNA」も含まれる。好ましくは、配列番号４か
ら１０のいずれかに記載の塩基配列を含むDNAである。
「特異的に結合する」とは、ハイブリダイスすることを
指す。このようなDNAは、プライマーまたはプローブと
して有用である。このようなDNAを用いることにより、
ディジョージ症候群の検出が可能となる。従って、本発
明のDNAはディジョージ症候群の検出キットを提供する
ものである。更に、本レセプターが欠損した場合には、
ナース細胞によるT細胞の成熟・分化が正常におこなわ
れない可能性がある。従って、本発明のDNAは、本レセ
プターの欠損に起因する自己免疫疾患の検出キットを提
供するものである。

【０００９】本発明の抗体は、本発明のポリペプチドま
たはエピトープを構成しえるペプチド断片に対する抗体
であり、モロクローナル抗体とポリクローナル抗体のい
ずれをも含む。本発明のハイブリドーマは、該モノクロ
ーナル抗体を産生するハイブリドーマである。本発明の
抗体は、アフィニティークロマトグラフィー、cDNAライ
ブラリーのスクリーニング、診断薬・実験用試薬等に有
用である。また、医薬として使用することもできる。

【００１０】本発明には、本発明のDNAを有する発現ベ
クター、該発現ベクターを宿主に導入することにより形
質転換体、該形質転換体を用いた組換えマウスナース細
胞レセプターの製造方法が提供される。「発現ベクタ
ー」としては、例えば、細菌についてはpRSET、pET、pG
EMEX、pKK233-2など、酵母についてはpYES2、昆虫細胞
についてはpVL1393、pFastBac1、動物細胞についてはpE
F-BOS、pSRa、pDR2などが挙げられる。「宿主」として
は、細菌、酵母、昆虫細胞、または動物細胞が挙げられ
る。

【００１１】本発明は、本レセプターに特異的に結合す
るリガンドのスクリーニング方法と提供する。リガンド
としては、分泌型ペプチド、細胞膜タンパク質、
脂肪や核酸などの生体内代謝物、などが考えられる。リ
ガンドのスクリーニング方法としては、このようなリガ
ンド候補物質をアイソトープラベルや蛍光ラベルし、本
レセプターを発現する細胞または膜画分との結合試験を
行なう方法が挙げられる。実施例で示すとおり、本レセ
プターは、アセチルLDL（low density lipoprotein）レ
セプターと相同性を示す。アセチルLDLは、変性した脂
肪であり、生体内代謝物に該当する。従って、アセチル
LDLが本レセプターのリガンドである可能性は高い。

【００１２】リガンドが特定されれば、本マウスナース
細胞レセプターとリガンドの結合を阻害する化合物のス
クリーニングが可能となる。「リガンドの結合を阻害す
る化合物」には、アゴニスト及びアンタゴニストが含ま
れる。該化合物のスクリーニング方法としては、標識し
たリガンド、本レセプターおよび候補化合物をインキュ
ベートし、結合活性を測定する方法が挙げられる。

【００１３】前述のとおり、本発明のマウスナース細胞
レセプターは、スカベンジャーレセプターとして機能
し、動脈硬化に関与することが予想される。従って、本
発明のペプチドとリガンドとの結合を阻害する化合物
は、動脈硬化の治療に有用であると考えられる。また、
前述のとおり、ナース細胞は、胸腺、皮膚組織、骨髄、
リンパ節、肝臓、脳、リウマチ患者の滑膜、癌の原発巣
及び転移巣に存在することが確認されている。ナース細
胞は、血球系幹細胞の増殖と自己再生能の維持及びリン
パ球の正及び負の選択に関与し、正常な免疫系の発生と
メモリー細胞の維持に関与していると考えられる。よっ
て、ナース細胞膜表面に発現する本レセプターの機能異
常が免疫系の機能異常と自己免疫疾患の発症に関わるこ
とが予想される。そのため、本発明のスクリーニングに
より得られるアゴニストおよびアンタゴニストは、自己
免疫疾患と腫瘍に対する治療に有用であることが考えら
れる。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明は、おもにマウスナース細
胞レセプターに関する。以下に本発明タンパク質の調製
工程、抗体の調製工程、リガンドのスクリーニング方
法、アゴニスト及びアンタゴニストのスクリーニング方
法を説明する。本明細書において、特に指示のない限
り、当該分野で公知である遺伝子組換え技術、動物細
胞、昆虫細胞、酵母および大腸菌での組換えタンパク質
の生産技術、発現したタンパク質の分離精製法、分析法
および免疫学的手法が採用される。

【００１５】本発明タンパク質の調製本発明タンパク質をコードするDNAを含むDNA断片の配列
決定方法を例示する。このDNA断片の配列は、例えば、
マウス細胞株B6TNC（Nanno, M. et al., J. Immunol.,
155, 2918, 1995）などから由来したcDNAから得ること
ができる。そのためには、まず、cDNAから本タンパク質
をコードするcDNAのクローニングを行なうためのプライ
マーが必要である。（１）マウスナース細胞レセプターをコードするcDNA
断片の単離ナース細胞特異的に発現する遺伝子を得るため、ナース
細胞（例えば、B6TNC）および非ナース細胞（例えば、L
929細胞）よりmRNAを精製する。ナース細胞mRNAよりfir
st strand cDNAを合成する。得られたFirst strand cDN
Aは一本鎖化する。一方、非ナース細胞mRNAはビオチン
化を行なう。ナース細胞first strand cDNAとビオチン
化非ナース細胞mRNAをインキュベートする。インキュベ
ート後、ストレプトアビジンを添加し、ハイブリダイズ
したcDNAとビオチン化mRNAを抽出する。残ったcDNAはナ
ース細胞特異的cDNAである。このcDNAより二本鎖cDNAを
合成し、プラスミドベクターに挿入する。このプラスミ
ドを大腸菌などに遺伝子導入し、プラスミドDNAを回収
し、cDNA断片の塩基配列を決定する。

【００１６】（２）全長マウスB6TNC#10 cDNAの同定単離されたcDNA断片を元に、ホモロジー検索を行なう。
その結果、ディジョージ症候群遺伝子座に相当するマウ
スゲノムDNA配列と相同性を示した。このマウスゲノムD
NA配列は、アセチルLDLレセプターcDNAと相同性を示
す。そこで、ゲノム配列を元に、プライマーを合成す
る。つぎに、例えばマウス細胞株B6TNC（Nanno, M. et
al., J. Immunol., 155, 2918, 1995）、IT-79 MTNC3
(Itoh, T. et al.(1998) Eur. J. Immunol. 18,821)、Do
i Nurse（Iwagami, S. et al. (1994) J. Immunol. 15
3,2927）、C3H10T¹/₂clone8 (ATCC No.CCL-226)からTRI
zol^TM（LIFE TECHNOLOGIES,INC.社製）を用いてtotal R
NAを調製する。得られたtotal RNAはmRNA purification
Kit（ファルマシア社）を用いて精製し、mRNAを得る。
このmRNAからcDNA末端迅速増幅法（rapid amplificatio
n of cDNA enbs, RACE法）（Frohman et al., Proc. Na
tl.Acad. Sci. USA, 85: 8998-9002, 1988）により5'
側、3'側および5'RACEおよび3'RACEで同定していない領
域のcDNA断片を増幅し、cDNAの全長にわたる塩基配列を
決定する。5'RACEと3'RACEは、5' RACE System for Rap
id Amplification of cDNA Ends（Life Technologies,
Inc.）と合成したプライマーを用いる。5'RACEと3'RACE
で同定していない領域は、Super Script ^TM Preamplifi
cationSystem for First Strand cDNA Synthesis（Life
Technologies, Inc.）と合成したプライマーを用い
る。得られたそれぞれのDNA断片は、プラスミドベクタ
ーに挿入し、クローニングする。クローニングしたDNA
断片は、ABI Prism ^TM dRhodamine Terminator Cycle S
equenceing Ready Reaction Kit（Applied Biosystems
社）とABI Prism ^TM310 Genetic Analyzer（Applied B
iosystems社）を用いて、塩基配列決定を行なう。決定
した３種類のcDNAクローンの塩基配列に共通する領域を
調べ、これにより、全長cDNAの塩基配列が決定される。

【００１７】（３）組換え体の発現得られた全長cDNAを適当な発現ベクターに組み込み、タ
ンパク質を発現するための発現ベクターとする。適切な
発現ベクターとしては、例えば、細菌についてはpRSE
T、pET、pGEMEX、pKK233-2など、酵母についてはpYES
2、昆虫細胞についてはpVL1393、pFastBac1、動物細胞
についてはpEF-BOS、pSRa、pDR2などが挙げられる。こ
の発現ベクターを適当な宿主細胞に導入して、形質転換
体を作製する。宿主細胞としては、細菌、酵母、昆虫細
胞、または動物細胞が挙げられる。大腸菌、酵母では、
強力なプロモーターの下流にタンパク質をコードする遺
伝子を挿入した発現ベクターで形質転換し、これら形質
転換体を培養することによりタンパク質を産生できる。
昆虫細胞、動物細胞では、タンパク質の遺伝子を強力な
プロモーターの下流に挿入し、効果的な選択マーカーと
共に動物細胞に導入し、薬剤に対する耐性により細胞を
選択し、高発現の細胞株を樹立し得る。また、タンパク
質前駆体の遺伝子をウイルスまたはレトロウイルスに組
み込み、この組換えウイルスを動物細胞に感染させるこ
とにより、発現し得る。これら形質転換体を培養するこ
とにより、タンパク質が産生され得る。得られたタンパ
ク質の精製は、当業者に周知の方法、例えば、アフィニ
ティーカラム、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾
過クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー、疎水
クルマトグラフィーなどを組み合わせて行なうことがで
きる（Imai et al., J. Biol. Chem., 271: 21514-2152
1, 1996）。

【００１８】（４）変異体の作成アミノ酸配列は、任意のアミノ酸配列を欠失させ、所望
のアミノ酸、ないしはアミノ酸配列を導入することによ
って置換される。アミノ酸配列の置換処理には、プロテ
インエンジニアリングとして知られる方法が広く利用で
きるが、例えば、Site-diredted deletion（部位指定削
除）法（Nucl. Acids Res., 11, 1645,1983）、Site-sp
ecific mutagenesis（部位特異的変異）法（Zoller, M.
J. etal., Methods in Enzymol., 100, 468, 1983、Ku
nkel. T.A. et al., Methods in Enzymol., 154, 367-3
82, 1987）、PCR突然変異生成法、制限酵素処理と合成
遺伝子の利用による方法等がある。部位特異的変異法で
あれば、例えばMolecuar Cloning: A Laboratory Manua
l第２版第１−３巻 Sambrook, J.ら著、Cold Spring Ha
rber Laboratory Press出版New York 1989年に記載の部
位特異的変異誘発法やPCR法などの方法を用い、本発明
のDNA配列に変異を導入する。これら方法により変異が
導入されたDNA配列は、適当なベクターおよび宿主系を
用いて、例えばMolecuar Cloning: A Laboratory Manua
l第２版第１−３巻 Sambrook, J.ら著、Cold Spring Ha
rber Laboratory Press出版New York 1989年に記載の方
法により、遺伝子工学的に発現させればよい。例えば、
Mutan ^TM -SuperExpress Km、Mutan ^TM -K（宝酒造社
製）、Quik Change Site- Directed Mutagenesis Kit
（Stratagene社製）といったキットが使用できる。

【００１９】一般に、部位特異的変異法は、まず、タン
パク質をコードするDNA配列をその配列中に含む一本鎖
ベクターを得ることによって実施することができる。所
望の突然変異した配列を持つオリゴヌクレオチドプライ
マーを、一般的には合成によって、例えばクレア等（Cr
ea, R. et al., Proc. Natl. Acsd. Sci. U.S.A., 75,
5765, 1978）の方法によって製造する。次ぎに、このプ
ライマーを一本鎖の本レセプター配列含有ベクターとア
ニーリングし、大腸菌ポリメラーゼIクレノウフラグメ
ントのようなDNA重合酵素を作用させて、突然変異含有
鎖の合成を完成する。このようにして、第一の鎖は元の
非突然変異配列をコードしており、第二の鎖は所望の突
然変異を有しているヘテロ二本鎖が形成される。次い
で、この二本鎖ベクターを用いて、適当な細菌、または
細胞を形質転換し、³²P−標識突然変異生成プライマー
から成る放射性プローブへのハイブリダイゼーションを
介してクローンを選択する（Wallace, R.B., Nucleic A
cids Res., 9, 3647, 1981）。選択されたクローンに
は、突然変異した配列を有する組換えベクターを含んで
いる。このようなクローンを選択した後、突然変異した
本レセプターの領域を形質転換に使用される型の発現ベ
クターに入れることができる。

【００２０】本発明タンパク質に対する抗体の調製本発明のレセプターに対する抗体は、以下の方法により
作製される。（１）ポリクローナル抗体の作製推定されるアミノ酸配列の一部に基づいて通常のペプチ
ド合成機で合成した合成ペプチドや、本レセプターを発
現するベクターで形質転換した細菌、酵母、昆虫細胞、
動物細胞、などにより産生されたタンパク質を通常のタ
ンパク化学的方法で精製し、これらを免疫原とする。こ
の免疫原を用いて、Antibodies; A Laboratory Manual,
Lane,H.D.ら編、Cold Spring Harber Laboratory Pres
s出版 New York 1989年などに記載の方法に従って、適
切な方法で動物を免疫することにより、抗原となるタン
パク質を特異的に認識するポリクローナル抗体を容易に
作製し、精製することができる。ラット、ハムスター、
ウサギなどの動物を免疫し、その血清由来のポリクロー
ナル抗体を作製すればよい。

【００２１】（２）モノクローナル抗体前述の免疫原で免疫したハムスターやラットの脾臓また
はリンパ節からリンパ球を取りだし、ミエローマ細胞と
融合させてKohlerとMilsteinの方法［Nature,256, 495-
497(1975)］またはその改良法であるUedaらの方法［Pro
c.Natl.Acad.Sci.USA, 79:4386-4390, 1982)］に従って
ハイブリドーマを作製した後、該ハイブリドーマから単
クローン抗体を産生させ得る。例えば以下の工程により
本レセプターのモノクルーナル抗体を得ることができ
る：（ａ）タンパク質によるハムスターの免疫、（ｂ）
免疫ハムスターの脾臓の除去および脾臓細胞の分離、
（ｃ）分離された脾臓細胞とハムスターミエローマ細
胞との融合促進剤（例えばポリエチレングリコール）の
存在下での上記のKohlerらに記載の方法による融合、
（ｄ）未融合ミエローマ細胞が成長しない選択培地で
の得られたハイブリドーマ細胞の培養、（ｅ）酵素結
合免疫吸着検定 (ELISA)、ウェスターンブロットなどの
方法による所望の抗体を生産するハイブリドーマ細胞の
選択および限定希釈法等によるクローニング、（ｆ）
モノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細胞を培
養し、モノクルーナル抗体を収穫する。

【００２２】リガンドのスクリーニング方法リガンドのスクリーニング方法としては、例えば、放射
性アイソトープ、ペルオキシダーゼやアルカリフォスフ
ァターゼのような酵素あるいは蛍光色素などで標識した
一定量のリガンド候補物質に、本レセプターを発現した
細胞または細胞膜画分を加え、結合試験を行わせる方法
が例示できる。細胞等と結合した標識リガンド候補物質
と細胞等に結合していない標識リガンド候補物質とを適
当な方法で分離し、細胞等と結合した標識リガンド候補
物質の放射能量、酵素活性または蛍光強度を測定する。
これにより、標識リガンド候補物質が、本レセプターの
リガンドとなりうるかどうかを判定することが出来る。
本発明のレセプターのリガンドとしては、分泌型ペプ
チド、細胞膜タンパク質、脂肪や核酸などの生体内
代謝物、などが考えられる。本レセプターは、アセチル
LDLレセプターと相同性を示ため、アセチルLDLが本レセ
プターのリガンドであることが期待できる。

【００２３】アゴニスト及びアンタゴニストのスクリー
ニング方法本レセプターのリガンドが特定された後、アゴニスト及
びアンタゴニストのスクリーニングは以下の方法により
行なうことができる。排除型の結合実験の場合、一定量
の本レセプターを発現する細胞に一定量の標識リガンド
と各種の濃度の非標識のアゴニスト及びアンタゴニスト
候補化合物を加えて反応させる。洗浄後、細胞を50μl
の1% Triton X-100を含む10 mM Tris-HCl (pH 8.0)など
で溶解し、上清中の放射能量、酵素活性または蛍光強度
を測定する。一定濃度の標識リガンドに対し非標識のア
ゴニスト及びアンタゴニスト候補化合物の濃度を変化さ
せたときの標識リガンドの本レセプター発現細胞への結
合量の変化を調べる。これにより、アゴニスト及びアン
タゴニストの結合阻害活性を検討することができる。飽
和型の結合実験の場合、一定量の本レセプターを発現す
る細胞に各種濃度の標識リガンドと一定量の非標識のア
ゴニスト及びアンタゴニスト候補化合物を加えて反応さ
せる。上記と同様に、洗浄後、細胞を50μlの1% Triton
X-100を含む10 mM Tris-HCl (pH 8.0)などで溶解し、
遠心後、上清中の放射能量、酵素活性または蛍光強度を
測定する。一定濃度の非標識アゴニスト及びアンタゴニ
スト候補化合物に対し標識リガンドの濃度を変化させた
ときの標識リガンドの本レセプター発現細胞への結合量
の変化を調べる。

【００２４】

【実施例】本発明を以下の実施例によりさらに説明す
る。本発明の各工程において用いた一般的な実験手法
（DNAのアガロースゲル電気泳動、ライゲーション反
応、大腸菌の形質転換、DNAの制限酵素による消化、ノ
ザン解析等）はCurrent Protocols in Molecular Biolo
gy (F. M. Ausubel et al. Ed., John Wiley & Sons. I
nc.)によった。

【００２５】実施例１マウスB6TNC#10 c DNAの単離（１）ナース細胞特異的遺伝子の単離マウス細胞株B6TNC（Nanno, M. et al. (1995) J. Immu
nol. 155,2918）および、L929細胞（ATCC No.CCL-1）よ
り、AGPC法（Analytical Biochemistry （1987） 162,
156-159）によりtotal RNAを調製し、PolyATtract syst
em 1000（Promega社製）を用いてmRNAを精製した。B6TN
C mRNAからfirst strand cDNAを合成するためにNot I p
rimer-adapter用いた。 Not I primer-adapter 5'-pGACTAGTTCTAGATCGCGAGCGGCC
GCCC（T）₁₅-3'(配列番号３)

【００２６】B6TNC mRNA 5 μgにNot I primer-adapter
をアニーリング後、MMLV RTase （LIFE TECHNOLOGIES,I
NC.社製SuperScript Plasumid System）を用いてInstru
ction Manualに従いfirst strand cDNAを合成した。合
成したfirst strand cDNAをフェノール/クロロホルム抽
出、エタノール沈殿・乾燥後50μlのTEに溶解した。こ
れを終濃度0.3 N NaOH、0.025 M EDTAで25℃、一晩処理
し、1本鎖化をおこなった。終濃度100 mM Tris-HCl （p
H8.0）、0.12 N HClなるようにし、中和をおこない、エ
タノール沈殿・乾燥後40μlのDEPC処理水に溶解した。1
本鎖化をおこなったfirst strand cDNAの３'端をグアニ
ン残基の付加をTakara Manualの条件下terminal deoxyn
ucleotidyl transferase (宝酒造社製) 0.3u/μlの濃度
で30℃、30分反応後、終濃度6mMのEDTAを添加した。以
下定法に従いフェノール/クロロホルム抽出、エタノー
ル沈殿・乾燥後20μlのDEPC処理水に溶解した。

【００２７】一方、L929 mRNAのビオチン化をBresatec
社Photobiotin Labelling Kit Manualに従いおこなっ
た。L929 mRNA 15 μg (1 μg/μl)とフォトビオチン酢
酸塩15μg (1 mg/ml) (Bresatec社製、Sigma社製) を加
え、BHRF-300水銀ランプ下10 cmで20分間照射後、2-ブ
タノールで抽出し、エタノール沈殿、８０% エタノール
洗浄、乾燥しD.D.WでmRNA終濃度(1μg/μl)に溶解し
た。さらに、このビオチン化操作を2回（計3回）おこな
った後、D.D.W.でmRNA終濃度(1μg/μl)に溶解した。

【００２８】1本鎖化したB6TNC first strand cDNA（0.
5〜1.5μｇ）とビオチン化L929 mRNA（15μｇ）を合わ
せ、ポリエチレングリコール沈殿、エタノール洗浄、乾
燥後、hybridization buffer(終濃度50 mM Hepes pH 7.
6、2 mM EDTA、0.5 M NaCl、0.2％ SDS)20μlに溶解、
ミネラルオイルを一滴滴下し、95℃、1分間処理し、65
℃、50時間インキュベートした。クロロホルム抽出後、
水層（50μl）に10μgのstreptavidin (1 mg/ml)を加
え、室温、5分間放置し、等量のフェノールで抽出操作
をおこなう。この操作によりビオチン化mRNAとハイブリ
ダイズしたcDNAは有機層および中間層に抽出される。こ
の操作を計３回おこなった。次に、水層（250μl）をエ
ーテル抽出、エタノール沈殿、８０% エタノール洗浄、
乾燥後、20μlのD.D.W.に溶解し、subtracted single s
trand cDNAサンプルとした。

【００２９】次に、LIFE TECHNOLOGIES Instruction Ma
nualに従い２本鎖cDNAを合成した。subtracted single
strand cDNAサンプルとOligoｄ（pＧ）_12-18primer（終
濃度50ng/μl）をアニーリングし、大腸菌 DNA Polymer
ase を用いて２本鎖cDNAを合成後、T４DNA Polymerase
で末端修復をおこない、Not Iで切断した。このサンプ
ルをプラスミドベクターpCDL SRα296 (Takebe, Y. et
al. (1988) Mol. Cell.Biol. 8, 466)のSma I、Not I部
位に挿入した。このプラスミドを大腸菌 JM109に遺伝子
導入し、プラスミドDNAを回収し、塩基配列の決定をお
こなった。決定した塩基配列をGenBankに対してホモロ
ジー検索を行ない、新規遺伝子と考えられるクローンに
ついて、B6TNC細胞での発現特異性を調べるために、B6T
NC細胞およびL929細胞におけるmRNAの発現をノザンブロ
ット法で調べた。その結果、B6TNC細胞に発現し、L929
細胞に発現していないB6TNC細胞特異的遺伝子マウスB6T
NC#10 クローン遺伝子断片を得ることができた。

【００３０】（２）全長マウスB6TNC#10 cDNAの同定単離したマウスB6TNC#10 cDNA断片をもとに遺伝子解析
プログラムBLAST(インターネット・アドレス http://ww
w.ncbi.nlm.gov/BLAST)で検索し、ヒトDiGeorge症候群
遺伝子座に相当するマウスゲノムDNA配列（アクセッシ
ョンナンバー AC000096）の一部と相同性を示した。こ
のマウスゲノムDNA配列をもとに以下のプライマーを合
成した。 B6RACE 5'-CTGTCTGTGGATCG-3' (配列番号４) B6K36 5'-CCTCGTTTTCTGAGCACGTGGAATTGCCTTCG-3' (配列番号５) B6K311 5'-AGCCAGAGCAGCAGCAGCAGTC-3' (配列番号６) B6K56 5'-TGCGCGACAAGACTCGCAGC-3' (配列番号７) B6N10-51 5'-AAGGCATTTCATTGGCCCCCAA-3' (配列番号８) B6K58 5'-ACTCCGCTTCCGGCCGCCCTTG-3' (配列番号９) B6N10-33 5'-AGCTTTGGCCTGCTATGAGGA-3' (配列番号１０) また、マウスB6TNC#10遺伝子の5'RACE、3'RACEに必要な
プライマーの配列を示す。 3'RACE Adapter Primer （3'RACE AP） 5'-GGCCACGCGTCGACTAGTAC(T)₁₇-3' (配列番号１１) Abridged Universal Amplification Primer (AUAP) 5'-GGCCACGCGTCGACTAGTAC-3' (配列番号１２)

【００３１】全長マウスB6TNC#10 cDNAを単離するため
に、まず、B6TNC細胞mRNAを調製した。マウス細胞株B6T
NC細胞5X 10⁶個当たり１mlのTRIzol^TM（LIFE TECHNOLOG
IES,INC.社製）を加え、細胞を溶解した。クロロホルム
0.2 ml添加し、攪拌後、12,000rpm 10分間遠心した。上
清を回収し、0.5 mlのイソプロパノールを添加し攪拌
後、12,000 rpm 10分間遠心し、75%エタノール洗浄後、
風乾し、沈殿を注射用水（扶桑薬品工業社製）で溶解
し、 B6TNC細胞total RNAサンフ゜ルとした。B6TNC細胞total
RNAよりmRNA Purification Kit （ファルマシア社製）
を用いてB6TNC細胞mRNAを精製した。

【００３２】次に、マウスB6TNC#10 cDNAの5'RACEをお
こなった。genomic DNAを除去するために、Deoxyribonu
clease I, Amplification Grade（LIFE TECHNOLOGIES,I
NC.社製）を用いた。 B6TNC細胞mRNA 1.5μg（1.5μl）
、10X DNase I Buffer１μl、RNase free DNase I (1
U/μl) 1μl、D.D.W. 6.5μlで室温15分間インキュベ
ートした。25 mM EDTA (pH 8.0)を1μl添加し、65 ℃、
15分間インキュベート後、氷上に5分間、放置した。B6T
NC細胞cDNAの合成するために、５’RACE System for Ra
pid Amplification of cDNA Ends，Version 2.0 (LIFE
TECHNOLOGIES,INC.社製）を用いた。DNase I処理したB6
TNC細胞cDNA 0.5μg(5 μl) にD.D.W. 15μl、1μM B6R
ACE primer（配列番号４） 5μlを添加し、70 ℃、10分
間インキュベートし、50℃に保温する（溶液Ａ）。一
方、10 X PCR buffer 5μl、25 mMMgCl₂5μl、10mM d
NTPs 2.5μl、 0.1 M DTT 5μl、D.D.W. 6.5μlを50℃
で保温する（溶液Ｂ）。溶液Ａと溶液ＢとSUPERSCRIPT
^TM II (200 units/μl) 1μl混ぜ合わせ50℃、50分間
インキュベートした。70℃、15分間処理後、氷上に5分
間放置した。RNase MIX 1 μl添加し37℃、30分間イン
キュベートした。225μlの6M NaIを添加し、GLASSMAX D
NA Isolation Spin Cartridge Systemを用い、cDNAを50
μlのD.D.W.で溶出して精製した。精製したcDNA 10μl
に、D.D.W. 4μl、5X Tailing Buffer 5μl、1 mM dATP
5μlを添加し、94℃、2分間処理後、氷上に1分間放置
した。terminal deoxynucleotidyl transferaseを1μl
添加し、37℃、10分間インキュベートした。65℃、10分
間処理後、氷上に放置し、これを5' RACE用の鋳型cDNA
とした。

【００３３】Polymerase Chain Reaction（PCR）はTaKa
Ra LA Taq^TMwith GC Buffer（宝酒造社製）を用いて
おこなった。上記の鋳型cDNA 2.5μl、2X GC buffer 1
2.5μl、2.5 mM dNTPs 4μl、10μM 3'RACE-AP primer
(配列番号１１) 1μl、10 μMB6K36 primer (配列番号
５) 1μl、TaKaRa LA Taq (5 U/μl) 0.25μl、D.D.W.
3.75μlを混ぜた溶液を94℃、2分間を1回、94℃、1分
間、55℃、1分間、72℃、2分間を30回、72℃、2分間を1
回で1回目のPCRをおこなった。1回目のPCR反応液を50倍
希釈したものを2.5μl、2X GC buffer 12.5μl、2.5 mM
dNTPs 4μl、10μM AUAP primer (配列番号１２) 1μ
l、10μM B6K311 primer (配列番号６) 1μl、TaKaRa L
A Taq (5 U/μl) 0.25μl、D.D.W. 3.75μlを混ぜて、9
4℃、2分間を1回、94℃、1分間、55℃、1分間、72℃、2
分間を20回、72℃、2分間を1回で2回目のPCRをおこなっ
た。2回目のPCR反応液をフェノール／クロロホルム抽
出、エタノール沈澱後、3％低融点アガルース電気泳動
により確認した約230 bpのDNA断片をWizard ^TM PCR Pre
ps DNA Purification System (Promega社製) を用いて
回収した。このDNA断片をプラスミドベクター pGEM-T-E
asy （Promega社製）に挿入し、塩基配列の決定をABI P
RISM^TM dRhodamine Terminator Cycle Sequencing Read
y Reaction Kit （Applied Biosystems社製）とABI PRI
SM ^TM 310 ジェネティックアナライザー（Applied Bio
systems社製）を用いておこなった。

【００３４】次に、マウスB6TNC#10 cDNAの3'RACEをお
こなった。genomic DNAを除去するために、Deoxyribonu
clease I, Amplification Grade（LIFE TECHNOLOGIES,I
NC.社製）を用いた。 B6TNC細胞mRNA 1.5μg（1.5μl）
、10X DNase I Buffer１μl、RNase free DNase I (1
U/μl) 1μl、D.D.W. 6.5μlで室温15分間インキュベ
ートした。25 mM EDTA (pH 8.0)を1μl添加し、65 ℃、
15分間インキュベート後、氷上に5分間、放置した。B6T
NC細胞cDNAの合成するために、５’RACE System for Ra
pid Amplification of cDNA Ends，Version 2.0 (LIFE
TECHNOLOGIES,INC.社製）と新たに合成した3’RACE AP
プライマー(配列番号１１)を用いた。DNase I処理したB
6TNC細胞cDNA 0.5 μg(5 μl) にD.D.W. 19 μl、10 μ
M 3’RACEAPプライマー(配列番号１１) 1μlを添加し、
70 ℃、10分間インキュベートし、50℃に保温する（溶
液Ｃ）。一方、10X PCR buffer 5μl、25 mM MgCl₂5
μl、10mM dNTPs 2.5 μl、 0.1 M DTT 5μl、D.D.W.
6.5μlを50℃で保温する（溶液Ｄ）。溶液Ｃと溶液Ｄと
SUPERSCRIPT^TM II (200 units/μl) 1μl混ぜ合わせ50
℃、50分間インキュベートした。70℃、15分間処理後、
氷上に5分間放置した。RNase MIX 1μl添加し37℃、30
分間インキュベートした。これを3’RACE用の鋳型cDNA
とした。

【００３５】Polymerase Chain Reaction（PCR）はTaKa
Ra LA Taq^TMwith GC Buffer（宝酒造社製）を用いて
おこなった。上記の鋳型cDNA 2.5μl、2X GC buffer 1
2.5μl、2.5 mM dNTPs 4μl、10μM AUAPプライマー(配
列番号１２) 1μl、10μM B6K56プライマー(配列番号
７) 1μl、TaKaRa LA Taq (5 U/μl) 0.25μl、D.D.W.
3.75μlを混ぜた溶液を94℃、2分間を1回、94℃、1分
間、55℃、1分間、72℃、2分間を30回、72℃、5分間を1
回で1回目のPCRをおこなった。1回目のPCR反応液を50倍
希釈したものを2.5μl、2X GC buffer 12.5μl、2.5 mM
dNTPs 4 μl、10μM AUAPプライマー (配列番号１２)
1μl、10μM B6N10-51プライマー(配列番号８) 1μl、T
aKaRa LA Taq (5 U/μl) 0.25μl、D.D.W. 3.75μlを混
ぜて、94℃、2分間を1回、94℃、1分間、55℃、1分間、
72℃、2分間を20回、72℃、5分間を1回で2回目のPCRを
おこなった。2回目のPCR反応液をフェノール／クロロホ
ルム抽出、エタノール沈澱後、3％低融点アガロース電
気泳動により確認した約600 bpのDNA断片をWizard ^TM P
CR Preps DNA Purification System (Promega社製)を用
いて回収した。このDNA断片をプラスミドベクター pGEM
-T-Easy （Promega社製）に挿入し、塩基配列の決定をA
BI PRISM^TM dRhodamine Terminator CycleSequencing R
eady Reaction Kit （Applied Biosystems社製）とABI
PRISM ^TM310 ジェネティックアナライザー（Applied B
iosystems社製）を用いておこなった。

【００３６】全長マウスB6TNC#10 cDNAの塩基配列の決
定するために、5’RACEと3’RACEで同定していないマウ
スB6TNC#10 cDNAの領域を同定した。genomic DNAを除去
するために、Deoxyribonuclease I, Amplification Gra
de（LIFE TECHNOLOGIES,INC.社製）を用いた。 B6TNC細
胞mRNA 1μg（1μl）、10X DNase I Buffer１μl、RNa
se free DNase I (1 U/μl) 1μl、D.D.W. 7μlで室温1
5分間インキュベートした。25 mM EDTA (pH 8.0)を1μ
l添加し、65 ℃、15分間インキュベート後、氷上に5分
間、放置した。B6TNC細胞cDNAの合成するために、SUPER
SCRIPT^TM Preamplification System for First Strand
cDNA Synthesis (LIFE TECHNOLOGIES,INC.社製）を用い
た。DNase I処理したB6TNC細胞cDNA 0.5μg(5μl) にD.
D.W. 19μl、Oligo（dT）_12-18 primer（0.5μg/μl）1
μlを添加し、70 ℃、10分間インキュベートし、50℃に
保温する（溶液Ｅ）。一方、10X PCR buffer 5μl、25
mMMgCl₂5μl、10mM dNTPs 2.5μl、 0.1 M DTT 5μ
l、D.D.W. 6.5μlを50℃で保温する（溶液Ｆ）。溶液Ｅ
と溶液ＦとSUPERSCRIPT^TM II (200 units/μl) 1μl混
ぜ合わせ50℃、50分間インキュベートした。70℃、15分
間処理後、氷上に5分間放置した。RNase MIX 1μl添加
し37℃、30分間インキュベートし、これを鋳型DNAとし
た。鋳型DNA 1μl、2X GC buffer 25μl、2.5 mM dNTPs
8μl、100μM B6K58プライマー(配列番号９) 0.25μ
l、100μM B6N10-33プライマー(配列番号１０) 0.25μ
l、TaKaRa LA Taq (5 U/μl) 0.5μl、D.D.W. 15μlを
混ぜて、94℃、2分間を1回、94℃、1分間、60℃、1分
間、72℃、4分30秒間を35回、72℃、2分間を1回でPCRを
おこなった。PCR反応液をフェノール／クロロホルム抽
出、エタノール沈澱後、1％低融点アガロース電気泳動
により確認した約３kbpのPCR増幅DNA断片をWizard ^TM P
CR Preps DNA Purification System (Promega社製) を
用いて回収した。このDNA断片をプラスミドベクター pG
EM-T-Easy （Promega社製）に挿入し、塩基配列の決定
をABI PRISM^TM dRhodamine Terminator Cycle Sequenci
ng Ready Reaction Kit （Applied Biosystems社製）と
ABI PRISM ^TM 310ジェネティックアナライザー（Applie
d Biosystems社製）を用いておこなった。以上、マウス
B6TNC#10遺伝子の5'RACEと3'RACEのPCR産物、ならびにB
6K58プライマーとB6N10-33プライマーにより得られたPC
R産物の塩基配列をもとに全長マウスB6TNC#10 cDNAの塩
基配列（配列番号１）を確定した。その結果、マウスB6
TNC#10 cDNAは全長3,274 bpからなることを同定した。

【００３７】実施例２マウスB6TNC#10の推定アミノ酸配列解析確定したマウスB6TNC#10 cDNAの塩基配列および内部に
終始コドンを持たないopen reading frame (ORF)のアミ
ノ酸配列を図１（図１Ａ及び図１Ｂ）に示す。マウスB6
TNC#10 cDNAは全長3,274 bpからなり、3' 非翻訳領域に
ポリＡ付加シグナル（二重下線）を確認できた。この遺
伝子は833個のアミノ酸配列よりなるORFを有し、2箇所
に疎水性の強いアミノ酸（下線）を有する遺伝子である
ことが明らかになり、膜タンパク質、もしくは膜に存在
するレセプタータンパク質であることが推定される。こ
の833個のアミノ酸からなるタンパク質の分子量は、計
算によると87,772であった。

【００３８】アミノ酸配列の類似性解析は遺伝子解析ソ
フトGENETYX-SV/RC Ver.3.2.0（ソフトウェアー開発社
製）を用いておこなった。マウスB6TNC#10と最も相同性
が高かったヒトアセチルLDLレセプター（Adachi, H., T
sujimoto, M., Arai, H. & Inoue, K. (1997) J. Biol.
Chem. 272, 31217-31220）との結果を図２（図２Ａ及
び図２Ｂ）に示す。保存されているアミノ酸を＊で示し
た。マウスB6TNC#10とヒトアセチルLDLレセプターとの
相同性は39％で、特に、細胞外領域と考えられる部分の
相同性が高かった。このことからマウスB6TNC#10はスカ
ベンジャー受容体ファミリーの一つであることが予想さ
れる。

【００３９】図３、４および５にマウスB6TNC#10の蛋白
質の推定される構造を示す。マウスB6TNC#10とヒトアセ
チルLDLレセプターで保存されているアミノ酸の繰り返
し配列のアミノ酸配列を示した。マウスB6TNC#10の細胞
外領域と考えられる部分でシステイン残基とグリシン残
基が保存された10個の繰り返し配列がヒトアセチルLDL
レセプター同様存在した（図３）。また、アミノ酸の繰
り返し配列中にEGF様リピートが保存されており、タン
パク質間の結合、またはリガンドの結合に必要な領域で
あることが推定される（図４、図５）。2箇所に疎水性
の強いアミノ酸（図５細下線）で示した。マウスB6TNC#
10の細胞外領域にはヒトアセチルLDLレセプター同様、E
GF様リピート（図５太下線）が保存されており、タンパ
ク質間の結合、またはリガンドの結合に必要な領域であ
ることが推定される。また、細胞内領域はセリン／プロ
リンに富んでおり、リン酸化を受けることが予想され、
マウスB6TNC#10はシグナルを細胞内に伝えることができ
る分子であることが推定される。特に、波線で示した領
域はチロシン残基がリン酸化を受けた時、SH２ドメイン
を持つタンパク質の結合部位になることが予想される。
また、二重下線のプロリン残基が富んだ領域はSH３ドメ
インを持つタンパク質の結合部位になることが予想され
る。

【００４０】実施例３ノーザンブロット法解析によるマウスB6TNC#10 mRNAの
発現解析マウスB6TNC#10 mRNAの発現を調べるためにマウス細胞
株B6TNC（Nanno, M. etal. (1995) J. Immunol. 155,29
18）、IT-79 MTNC3 (Itoh, T. et al.(1998) Eur. J. I
mmunol. 18,821)、Doi Nurse（Iwagami, S. et al. (19
94) J. Immunol. 153,2927）、C3H10T¹/₂clone8 (ATCC
No.CCL-226)、L929 (ATCC No.CCL-1)、IT76-M712（Sav
ino, W. et al. (1989) Eur. J. Immunol. 19,1727）、
NIH3T3 (ATCC No.CRL-1658)からTRIzol^TM（LIFE TECHNO
LOGIES,INC.社製）を用いてtotalRNAを調製した。ま
た、マウスの組織におけるマウスB6TNC#10 mRNAの発現
を調べるためにBalb/cマウスの脳、胸腺、心臓、肺、脾
臓、リンパ節、胃、肝臓、腎臓、小腸、膵臓を摘出しTR
Izol^TM（LIFE TECHNOLOGIES,INC.社製）を用いてtotal
RNAを調製した。調製したマウス細胞株のtotal RNA 10
μg、マウスの組織のtotal RNA 20 μgをホルムアルデ
ヒドを含む1％アガロースゲルで電気泳動し、ナイロン
膜Hybond^TM-N+ （アマシャム社製）に転写した。

【００４１】マウスB6TNC#10のプローブを作製した。B6
K58プライマー（配列番号９）とB6N10-33プライマー
（配列番号１０）により得られたPCR産物をプラスミド
ベクターpGEM-T-Easy （Promega社製）に挿入したもの
を鋳型としてB6N10-51プライマー（配列番号８）とB6N1
0-33プライマー（配列番号１０）でPCRをおこなった。P
CR産物をフェノール／クロロホルム抽出、エタノール沈
澱後、3％低融点アガロース電気泳動により確認した約
600 bpのPCR増幅DNA断片をWizard ^TM PCR Preps DNA Pu
rification System (Promega社製) を用いて回収し、マ
ウスB6TNC#10のプローブとした。マウスB6TNC#10のプロ
ーブをPrime-It II Random Primer LabelingKits （STR
ATAGENE社製）を用いて³²P標識をおこない、NICK^TM Col
umn （ファルマシア社製）で精製した。

【００４２】転写したナイロン膜をハイフ゛リタ゛イセ゛ーションハ゛ッ
ファー（5X SSPE、10X デンハルト溶液、2％ SDS、50％ホ
ルムアミド、100μg/mlサケ精子DNA）中で42℃、2時間
処理し、³²P標識したマウスB6TNC#10プローブを加え、4
2℃、一晩インキュベートした。ナイロン膜を取り出
し、2X SSC、0.1％ SDS溶液で室温15分間２回、2X SS
C、0.1％ SDS溶液で６５℃、15分間、０.５ XSSC、0.1
％ SDS溶液で６５℃、15分間、０.１X SSC、0.1％ SDS
溶液で６５℃、15分間洗浄した。洗浄したナイロン膜を
３日間、-８０℃でＸ線フィルム（コダック社製）に感
光させた。マウスの臓器では特に肺で強い発現が見ら
れ、その他の組織で弱い発現が見られた。この結果、ナ
ース細胞は、既に報告されている組織以外にも存在する
ことが推定される。また、B6TNC、IT-79 MTNC3、Doi Nu
rse、C3H10T¹/₂clone8、NIH3T3で約３kbのバンドを検出
した。ナース細胞であるB6TNC、IT-79 MTNC3、Doi Nurs
e、C3H10T¹/₂clone8で発現がマウスB6TNC#10が確認でき
たことからマウスB6TNC#10がナース細胞の機能に関るこ
とが推定される。

【００４３】

【発明の効果】本発明によれば、マウスナース細胞レセ
プター；本発明のポリペプチドをコードするDNA；本発
明の塩基配列中の連続した少なくとも１４個の塩基を含
み、該塩基配列と特異的に結合するDNA；本発明のポリ
ペプチドを特異的に認識する抗体；本発明の抗体を産生
するハイブリドーマ；本発明のDNAを含む発現ベクタ
ー；本発明の発現ベクターより得られる形質転換体；組
換えマウスナース細胞レセプターの製造方法；本発明の
マウスナース細胞レセプターに特異的に結合するリガン
ドのスクリーニング方法；本発明のマウスナース細胞レ
セプターとリガンドとの結合を阻害する化合物のスクリ
ーニング方法；本発明のスクリーニング方法により得ら
れる医薬；本発明プライマーを含むディジョージ症候群
を検出するためのキット；本発明プライマーを含む自己
免疫疾患を検出するためのキットが提供される。

【００４４】本発明のDNAの一部をプライマーとして用
いることにより、ディジョージ症候群の検出が可能とな
る。更に、本レセプターが欠損した場合には、ナース細
胞によるT細胞の成熟・分化が正常におこなわれない可
能性がある。従って、本発明のDNAの一部をプライマー
として用いることにより、本レセプターの欠損に起因す
る自己免疫疾患の検出が可能となる。更に、本発明のレ
セプターは、レセプターに対するアゴニスト及びアンタ
ゴニストのスクリーニングに有用である。前述のとお
り、本レセプターは、スカベンジャーレセプターとして
機能し、動脈硬化に関与することが予想される。従っ
て、本レセプターの阻害物質は、動脈硬化の治療に有用
であると考えられる。

【００４５】また、前述のとおり、ナース細胞は、胸
腺、皮膚組織、骨髄、リンパ節、肝臓、脳、リウマチ患
者の滑膜、癌の原発巣及び転移巣に存在することが確認
されている。ナース細胞は、血球系幹細胞の増殖と自己
再生能の維持及びリンパ球の正及び負の選択に関与し、
正常な免疫系の発生とメモリー細胞の維持に関与してい
ると考えられる。よって、ナース細胞膜表面に発現する
本レセプターの機能異常が免疫系の機能異常と自己免疫
疾患の発症に関わることが予想される。そのため、本発
明のスクリーニングにより得られるアゴニストおよびア
ンタゴニストは、自己免疫疾患と腫瘍に対する治療に有
用であることが考えられる。

【００４６】

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Shionogi & Co.,Ltd. <120> A Gene Encoding Mouse Nures Cell Receptor <130> A005977 <140> <141> <160> 12 <170> PatentIn Ver. 2.0 <210> 1 <211> 3274 <212> DNA <213> Mus musculus <220> <221> CDS <222> (65)..(2563) <400> 1 actccgcttc cggccgccct tgccgcggcc gcacccgcgc ccacccgcgc ctgccccgcg 60 cctc atg gag ggc gca ggg tcc cgg ggg gcc ggg ccg gcg cgg cgc cag 109 Met Glu Gly Ala Gly Ser Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Arg Gln 1 5 10 15 gga gcc cga ggg ctg gga ctg ctg ctg ctg ctc tgg ctg ctg ccc ggt 157 Gly Ala Arg Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Trp Leu Leu Pro Gly 20 25 30 ctc gcg gcg ccc cag gac ttg aac ccg cga ggc cgc aac gtg tgc cgc 205 Leu Ala Ala Pro Gln Asp Leu Asn Pro Arg Gly Arg Asn Val Cys Arg 35 40 45 acg ccc ggt tcc cag gtg ctc acg tgt tgc gct ggc tgg agg cag ctg 253 Thr Pro Gly Ser Gln Val Leu Thr Cys Cys Ala Gly Trp Arg Gln Leu 50 55 60 ggg gat gag tgt ggg ata gcg gtg tgc gaa ggc aat tcc acg tgc tca 301 Gly Asp Glu Cys Gly Ile Ala Val Cys Glu Gly Asn Ser Thr Cys Ser 65 70 75 gaa aac gag gtg tgc gtg cgg cca ggc gaa tgc cgc tgc cga cat ggc 349 Glu Asn Glu Val Cys Val Arg Pro Gly Glu Cys Arg Cys Arg His Gly 80 85 90 95 tac ttt ggt gcc aac tgc gac aca aag tgc ccg cgc cag ttc tgg ggc 397 Tyr Phe Gly Ala Asn Cys Asp Thr Lys Cys Pro Arg Gln Phe Trp Gly 100 105 110 cct gac tgc aag gag agg tgc agt tgc cac ccg cac gga cag tgc gag 445 Pro Asp Cys Lys Glu Arg Cys Ser Cys His Pro His Gly Gln Cys Glu 115 120 125 gac gtg acc gga cag tgt acg tgt cac gcg cgc cgc tgg ggt gcg cgc 493 Asp Val Thr Gly Gln Cys Thr Cys His Ala Arg Arg Trp Gly Ala Arg 130 135 140 tgc gag cat gct tgc caa tgc cag cat ggc acg tgc cac ccg cgg agc 541 Cys Glu His Ala Cys Gln Cys Gln His Gly Thr Cys His Pro Arg Ser 145 150 155 ggc gcg tgc cgg tgc gag ccg ggc tgg tgg ggt gcg caa tgc gct agc 589 Gly Ala Cys Arg Cys Glu Pro Gly Trp Trp Gly Ala Gln Cys Ala Ser 160 165 170 175 gct tgc tat tgc agc gct act tcc cgg tgc gat cca cag aca ggc gcc 637 Ala Cys Tyr Cys Ser Ala Thr Ser Arg Cys Asp Pro Gln Thr Gly Ala 180 185 190 tgc ctg tgc cac gta ggc tgg tgg ggc cgc agc tgt aac aac cag tgc 685 Cys Leu Cys His Val Gly Trp Trp Gly Arg Ser Cys Asn Asn Gln Cys 195 200 205 gcc tgc aac tcg tcg ccc tgc gag cag cag agt ggc cgc tgc cag tgt 733 Ala Cys Asn Ser Ser Pro Cys Glu Gln Gln Ser Gly Arg Cys Gln Cys 210 215 220 cgc gag cgc atg ttt ggc gcc cgc tgt gat cgc tat tgc cag tgc tct 781 Arg Glu Arg Met Phe Gly Ala Arg Cys Asp Arg Tyr Cys Gln Cys Ser 225 230 235 cac ggt cgc tgc cac ccg gtg gac ggc acg tgt gcc tgc gat cct ggc 829 His Gly Arg Cys His Pro Val Asp Gly Thr Cys Ala Cys Asp Pro Gly 240 245 250 255 tac cgg ggc aag tat tgt cgc gag cca tgc ccc gct gga ttc tat ggc 877 Tyr Arg Gly Lys Tyr Cys Arg Glu Pro Cys Pro Ala Gly Phe Tyr Gly 260 265 270 ccg ggc tgt cgc cgt cgg tgt ggc caa tgc aaa ggc cag cag ccg tgc 925 Pro Gly Cys Arg Arg Arg Cys Gly Gln Cys Lys Gly Gln Gln Pro Cys 275 280 285 acg gta gtc gaa ggc cgc tgt ctg aca tgc gag ccc ggc tgg aac gga 973 Thr Val Val Glu Gly Arg Cys Leu Thr Cys Glu Pro Gly Trp Asn Gly 290 295 300 acc aaa tgt gac caa ccc tgc gcc acc ggt ttc tac ggc gaa ggt tgt 1021 Thr Lys Cys Asp Gln Pro Cys Ala Thr Gly Phe Tyr Gly Glu Gly Cys 305 310 315 ggc cac cgc tgc cca ccc tgc cgc gac ggg cat gcc tgc aac cat gtc 1069 Gly His Arg Cys Pro Pro Cys Arg Asp Gly His Ala Cys Asn His Val 320 325 330 335 acc ggc aag tgt acg cac tgc aat gcg ggc tgg atc ggc gac cgg tgc 1117 Thr Gly Lys Cys Thr His Cys Asn Ala Gly Trp Ile Gly Asp Arg Cys 340 345 350 gag act aag tgc agt aat ggc act tac ggt gag gac tgt gcc ttc gtg 1165 Glu Thr Lys Cys Ser Asn Gly Thr Tyr Gly Glu Asp Cys Ala Phe Val 355 360 365 tgc tct gat tgc ggc agc ggc cac tgt gac ttc cag tcc ggg cgc tgc 1213 Cys Ser Asp Cys Gly Ser Gly His Cys Asp Phe Gln Ser Gly Arg Cys 370 375 380 ctt tgc agc cct ggt gtt cac gga cct cac tgt aat gta act tgc ccg 1261 Leu Cys Ser Pro Gly Val His Gly Pro His Cys Asn Val Thr Cys Pro 385 390 395 gcc ggg ctc cac ggc gtg gac tgc gcc cag gcc tgc agc tgt cac gag 1309 Ala Gly Leu His Gly Val Asp Cys Ala Gln Ala Cys Ser Cys His Glu 400 405 410 415 gaa tca tgc gac ccg gtc acc ggt gcc tgc cac ctg gag acc aat cag 1357 Glu Ser Cys Asp Pro Val Thr Gly Ala Cys His Leu Glu Thr Asn Gln 420 425 430 cgc aaa ggt gtg atg ggc gcg ggc gct ctg ctc acg ctg ctc ctc ggc 1405 Arg Lys Gly Val Met Gly Ala Gly Ala Leu Leu Thr Leu Leu Leu Gly 435 440 445 ctg ctg ctc tcg ctg ctc ggt tgt tgc tgc gcc tgc cgg ggc aag gac 1453 Leu Leu Leu Ser Leu Leu Gly Cys Cys Cys Ala Cys Arg Gly Lys Asp 450 455 460 tcg gcg cgc cgg gag ctc acc ctt gga agg aag aag gcg cct caa cgt 1501 Ser Ala Arg Arg Glu Leu Thr Leu Gly Arg Lys Lys Ala Pro Gln Arg 465 470 475 ttt tgt gga agc ttc agc cgc atc agc atg aag ctg ccc cga atc ccg 1549 Phe Cys Gly Ser Phe Ser Arg Ile Ser Met Lys Leu Pro Arg Ile Pro 480 485 490 495 ctt cgc agg cag aag ctg ccc aaa gtc gta gtg gcc cat cat gac cta 1597 Leu Arg Arg Gln Lys Leu Pro Lys Val Val Val Ala His His Asp Leu 500 505 510 gac aac aca ctc aac tgc agt ttt ctg gac cca ccc tca ggg ctg gag 1645 Asp Asn Thr Leu Asn Cys Ser Phe Leu Asp Pro Pro Ser Gly Leu Glu 515 520 525 cag ccc tct cca tca tgg tcc tcc agg gcc tcc ttc tca tca ttc gac 1693 Gln Pro Ser Pro Ser Trp Ser Ser Arg Ala Ser Phe Ser Ser Phe Asp 530 535 540 acc aca gat gaa ggc cct gtg tac tgt gtg ccc cac gag gaa gcg act 1741 Thr Thr Asp Glu Gly Pro Val Tyr Cys Val Pro His Glu Glu Ala Thr 545 550 555 gcc gac agc cga gac ctg gaa gcg act gcc gct ctc act gag gtg gcc 1789 Ala Asp Ser Arg Asp Leu Glu Ala Thr Ala Ala Leu Thr Glu Val Ala 560 565 570 575 gct gtg tcc tta gag ccc acg ggc acc tcg acg ccc ggg gag gag gca 1837 Ala Val Ser Leu Glu Pro Thr Gly Thr Ser Thr Pro Gly Glu Glu Ala 580 585 590 gcg gtc ctc cct gca tcc tca gac agc gag cgc tcc gca tca agc gtg 1885 Ala Val Leu Pro Ala Ser Ser Asp Ser Glu Arg Ser Ala Ser Ser Val 595 600 605 gag ggg ccg agc ggg gcg ctg tac gcg cgt gtg gcc cgg cgc gag gcc 1933 Glu Gly Pro Ser Gly Ala Leu Tyr Ala Arg Val Ala Arg Arg Glu Ala 610 615 620 cgg ccg gcc cgg acc cga aat gag gct ggg ggc ttg tca ctg tcc cca 1981 Arg Pro Ala Arg Thr Arg Asn Glu Ala Gly Gly Leu Ser Leu Ser Pro 625 630 635 tcg ccc gag cgc agg aag ccg cca cca cca gac cct gcc acc aag cct 2029 Ser Pro Glu Arg Arg Lys Pro Pro Pro Pro Asp Pro Ala Thr Lys Pro 640 645 650 655 aag gtg tcc tgg atc cac ggc aag cac agc gcc gct gcc gct gca ccg 2077 Lys Val Ser Trp Ile His Gly Lys His Ser Ala Ala Ala Ala Ala Pro 660 665 670 tcg cct ccg cct gca ggc cgc aag gct gcg ccg agc cct agc ggg agg 2125 Ser Pro Pro Pro Ala Gly Arg Lys Ala Ala Pro Ser Pro Ser Gly Arg 675 680 685 aaa cgg acc ccc agc aac tcg tcg gtg cag ccc ccc gga ctg acc gag 2173 Lys Arg Thr Pro Ser Asn Ser Ser Val Gln Pro Pro Gly Leu Thr Glu 690 695 700 gag gcc ccc ggc ccg gct tca ccc acg cca ccc cgc gcc cga gcg cgc 2221 Glu Ala Pro Gly Pro Ala Ser Pro Thr Pro Pro Arg Ala Arg Ala Arg 705 710 715 ggc cgc ggc ctg ggg ctc tcg gag cca acg gac gcg gga ggt ccc ccg 2269 Gly Arg Gly Leu Gly Leu Ser Glu Pro Thr Asp Ala Gly Gly Pro Pro 720 725 730 735 cgc agc gcg ccc gag gcc gcc tct atg ctg gca gct gag ctg cgc gac 2317 Arg Ser Ala Pro Glu Ala Ala Ser Met Leu Ala Ala Glu Leu Arg Asp 740 745 750 aag act cgc agc tta ggc cgc gcc gag aag ccg ccg ccg ccg cag aag 2365 Lys Thr Arg Ser Leu Gly Arg Ala Glu Lys Pro Pro Pro Pro Gln Lys 755 760 765 gcc aag cgc tcc gtg ctc ccc gcc gcg acg gtc cgc aca gcc tcg gcg 2413 Ala Lys Arg Ser Val Leu Pro Ala Ala Thr Val Arg Thr Ala Ser Ala 770 775 780 tcc gag gcc tcg ggg tca gag aag gcg gcg gcc agc gca cct gcg ccc 2461 Ser Glu Ala Ser Gly Ser Glu Lys Ala Ala Ala Ser Ala Pro Ala Pro 785 790 795 gag acc cct cgg aag aaa acc ccc atc cag aaa ccg cct cgg aag aag 2509 Glu Thr Pro Arg Lys Lys Thr Pro Ile Gln Lys Pro Pro Arg Lys Lys 800 805 810 815 agc agg gag gca gcg ggg gag ccg agt agg gcg ggc acg gcc ccc gga 2557 Ser Arg Glu Ala Ala Gly Glu Pro Ser Arg Ala Gly Thr Ala Pro Gly 820 825 830 gct tcc taagctcgca gccccaggag gctttctcac caccatttcc ccgcgcggcc 2613 Ala Ser gcagcgaagg catttcattg gcccccaaag cccagcgccc gcccaagcct gcgtctggtt 2673 ggcctaggct caagcagccg cggcctggtt ggatctgctc tcgggcctcg cagacactta 2733 gctggctacc cgctcccact agcaaagttg tggagctttt ctagtaatct ctgtctcgtt 2793 ggccatggct tggagagcct acagacttct tactggccaa gaagagtgtt cttggcaggg 2853 ctaccttgtc actggccgat gccagcagcg cttctgcctc ttggctgcct ctcatttgcc 2913 aaggcctggt gcctatggct gaagggtctt tttctctgaa gacaaaaaga ggttgcgtcc 2973 ataaactggg ctccagagta tctggttggc ccgaacctgg ggagaagagc tggtctcttc 3033 ttcgcagggg gctcagccca tgttggcttg tccccttccc acgcacgcca gccctggtct 3093 ctcagccatc aagctggttt tgatggcctc ctatcacccc acgagggaac cccagggcct 3153 actctggtgg ctttagatgt atttataggc cctgggcagg gcttctctca tcccatctgg 3213 gaccttctgg atgggctcct catagcaggc caaagctttc tttaataaaa tgcttctccc 3273 c 3274 <210> 2 <211> 833 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 2 Met Glu Gly Ala Gly Ser Arg Gly Ala Gly Pro Ala Arg Arg Gln Gly 1 5 10 15 Ala Arg Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Trp Leu Leu Pro Gly Leu 20 25 30 Ala Ala Pro Gln Asp Leu Asn Pro Arg Gly Arg Asn Val Cys Arg Thr 35 40 45 Pro Gly Ser Gln Val Leu Thr Cys Cys Ala Gly Trp Arg Gln Leu Gly 50 55 60 Asp Glu Cys Gly Ile Ala Val Cys Glu Gly Asn Ser Thr Cys Ser Glu 65 70 75 80 Asn Glu Val Cys Val Arg Pro Gly Glu Cys Arg Cys Arg His Gly Tyr 85 90 95 Phe Gly Ala Asn Cys Asp Thr Lys Cys Pro Arg Gln Phe Trp Gly Pro 100 105 110 Asp Cys Lys Glu Arg Cys Ser Cys His Pro His Gly Gln Cys Glu Asp 115 120 125 Val Thr Gly Gln Cys Thr Cys His Ala Arg Arg Trp Gly Ala Arg Cys 130 135 140 Glu His Ala Cys Gln Cys Gln His Gly Thr Cys His Pro Arg Ser Gly 145 150 155 160 Ala Cys Arg Cys Glu Pro Gly Trp Trp Gly Ala Gln Cys Ala Ser Ala 165 170 175 Cys Tyr Cys Ser Ala Thr Ser Arg Cys Asp Pro Gln Thr Gly Ala Cys 180 185 190 Leu Cys His Val Gly Trp Trp Gly Arg Ser Cys Asn Asn Gln Cys Ala 195 200 205 Cys Asn Ser Ser Pro Cys Glu Gln Gln Ser Gly Arg Cys Gln Cys Arg 210 215 220 Glu Arg Met Phe Gly Ala Arg Cys Asp Arg Tyr Cys Gln Cys Ser His 225 230 235 240 Gly Arg Cys His Pro Val Asp Gly Thr Cys Ala Cys Asp Pro Gly Tyr 245 250 255 Arg Gly Lys Tyr Cys Arg Glu Pro Cys Pro Ala Gly Phe Tyr Gly Pro 260 265 270 Gly Cys Arg Arg Arg Cys Gly Gln Cys Lys Gly Gln Gln Pro Cys Thr 275 280 285 Val Val Glu Gly Arg Cys Leu Thr Cys Glu Pro Gly Trp Asn Gly Thr 290 295 300 Lys Cys Asp Gln Pro Cys Ala Thr Gly Phe Tyr Gly Glu Gly Cys Gly 305 310 315 320 His Arg Cys Pro Pro Cys Arg Asp Gly His Ala Cys Asn His Val Thr 325 330 335 Gly Lys Cys Thr His Cys Asn Ala Gly Trp Ile Gly Asp Arg Cys Glu 340 345 350 Thr Lys Cys Ser Asn Gly Thr Tyr Gly Glu Asp Cys Ala Phe Val Cys 355 360 365 Ser Asp Cys Gly Ser Gly His Cys Asp Phe Gln Ser Gly Arg Cys Leu 370 375 380 Cys Ser Pro Gly Val His Gly Pro His Cys Asn Val Thr Cys Pro Ala 385 390 395 400 Gly Leu His Gly Val Asp Cys Ala Gln Ala Cys Ser Cys His Glu Glu 405 410 415 Ser Cys Asp Pro Val Thr Gly Ala Cys His Leu Glu Thr Asn Gln Arg 420 425 430 Lys Gly Val Met Gly Ala Gly Ala Leu Leu Thr Leu Leu Leu Gly Leu 435 440 445 Leu Leu Ser Leu Leu Gly Cys Cys Cys Ala Cys Arg Gly Lys Asp Ser 450 455 460 Ala Arg Arg Glu Leu Thr Leu Gly Arg Lys Lys Ala Pro Gln Arg Phe 465 470 475 480 Cys Gly Ser Phe Ser Arg Ile Ser Met Lys Leu Pro Arg Ile Pro Leu 485 490 495 Arg Arg Gln Lys Leu Pro Lys Val Val Val Ala His His Asp Leu Asp 500 505 510 Asn Thr Leu Asn Cys Ser Phe Leu Asp Pro Pro Ser Gly Leu Glu Gln 515 520 525 Pro Ser Pro Ser Trp Ser Ser Arg Ala Ser Phe Ser Ser Phe Asp Thr 530 535 540 Thr Asp Glu Gly Pro Val Tyr Cys Val Pro His Glu Glu Ala Thr Ala 545 550 555 560 Asp Ser Arg Asp Leu Glu Ala Thr Ala Ala Leu Thr Glu Val Ala Ala 565 570 575 Val Ser Leu Glu Pro Thr Gly Thr Ser Thr Pro Gly Glu Glu Ala Ala 580 585 590 Val Leu Pro Ala Ser Ser Asp Ser Glu Arg Ser Ala Ser Ser Val Glu 595 600 605 Gly Pro Ser Gly Ala Leu Tyr Ala Arg Val Ala Arg Arg Glu Ala Arg 610 615 620 Pro Ala Arg Thr Arg Asn Glu Ala Gly Gly Leu Ser Leu Ser Pro Ser 625 630 635 640 Pro Glu Arg Arg Lys Pro Pro Pro Pro Asp Pro Ala Thr Lys Pro Lys 645 650 655 Val Ser Trp Ile His Gly Lys His Ser Ala Ala Ala Ala Ala Pro Ser 660 665 670 Pro Pro Pro Ala Gly Arg Lys Ala Ala Pro Ser Pro Ser Gly Arg Lys 675 680 685 Arg Thr Pro Ser Asn Ser Ser Val Gln Pro Pro Gly Leu Thr Glu Glu 690 695 700 Ala Pro Gly Pro Ala Ser Pro Thr Pro Pro Arg Ala Arg Ala Arg Gly 705 710 715 720 Arg Gly Leu Gly Leu Ser Glu Pro Thr Asp Ala Gly Gly Pro Pro Arg 725 730 735 Ser Ala Pro Glu Ala Ala Ser Met Leu Ala Ala Glu Leu Arg Asp Lys 740 745 750 Thr Arg Ser Leu Gly Arg Ala Glu Lys Pro Pro Pro Pro Gln Lys Ala 755 760 765 Lys Arg Ser Val Leu Pro Ala Ala Thr Val Arg Thr Ala Ser Ala Ser 770 775 780 Glu Ala Ser Gly Ser Glu Lys Ala Ala Ala Ser Ala Pro Ala Pro Glu 785 790 795 800 Thr Pro Arg Lys Lys Thr Pro Ile Gln Lys Pro Pro Arg Lys Lys Ser 805 810 815 Arg Glu Ala Ala Gly Glu Pro Ser Arg Ala Gly Thr Ala Pro Gly Ala 820 825 830 Ser <210> 3 <211> 44 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 3 gactagttct agatcgcgag cggccgccct tttttttttt tttt 44 <210> 4 <211> 14 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 4 ctgtctgtgg atcg 14 <210> 5 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 5 cctcgttttc tgagcacgtg gaattgcctt cg 32 <210> 6 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 6 agccagagca gcagcagcag tc 22 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 7 tgcgcgacaa gactcgcagc 20 <210> 8 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 8 aaggcatttc attggccccc aa 22 <210> 9 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 9 actccgcttc cggccgccct tg 22 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 10 agctttggcc tgctatgagg a 21 <210> 11 <211> 37 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 11 ggccacgcgt cgactagtac tttttttttt ttttttt 37 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 12 ggccacgcgt cgactagtac 20

【図面の簡単な説明】

【図１Ａ、図１Ｂ】マウスナース細胞レセプターcDNA
（mB6TNC#10）の塩基配列およびアミノ酸を示す図であ
る。

【図２Ａ、図２Ｂ】マウスナース細胞レセプターのア
ミノ酸配列（mB6TNC#10）とヒトアセチルLDLレセプター
のアミノ酸配列（hAcLDLR）の相同性を示す図である。

【図３】マウスナース細胞レセプター（mB6TNC#10）と
ヒトアセチルLDLレセプター（hAc-LDLR）で保存されて
いる１０個のシステイン残基とグリシン残基の繰り返し
配列を示す図である。

【図４】マウスナース細胞レセプター（mB6TNC#10）と
ヒトアセチルLDLレセプター（hAc-LDLR）で保存されて
いるEGF様リピートを示す図である。

【図５】マウスナース細胞レセプターのアミノ酸配列中
の、疎水性アミノ酸部位、EGF様リピート部位、SH２ド
メインを持つタンパク質の結合部位、SH３ドメインを持
つタンパク質の結合部位を示す図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 15/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/15 ＺＧ０１Ｎ 33/15 33/50 Ｔ 33/50 Ｐ 33/566 33/566 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ // Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91）Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA34 AA35 BB20 CB01 CB21 DA12 DA13 DA14 DA36 FB03 4B024 AA01 AA11 BA43 BA63 CA04 CA12 DA06 EA04 GA11 HA01 HA15 4B064 AG20 AG27 CA02 CA19 CC24 DA01 DA13 4C084 AA17 ZB072 4H045 AA10 AA11 BA10 CA40 DA50 DA86 EA20 EA50 FA74

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列番号２の１位のMetから８３３位のSer
までのアミノ酸配列を含むポリペプチド。
【請求項２】請求項１に記載のアミノ酸配列において１
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入または付加
されたアミノ酸配列を含み、かつマウスナース細胞レセ
プターであるポリペプチド。
【請求項３】請求項１記載のポリペプチドからなるマウ
スナース細胞レセプター。
【請求項４】請求項１または２に記載のポリペプチドを
コードするDNA。
【請求項５】配列番号１の６５位のAから２５６３位のC
までの塩基配列を含む請求項４記載のDNA。
【請求項６】請求項４または５に記載のDNAとストリン
ジェントな条件でハイブリダイズし、かつマウスナース
細胞レセプターであるポリペプチドをコードするDNA。
【請求項７】請求項４、５または６のいずれかに記載の
DNAからなるマウスナース細胞レセプター遺伝子。
【請求項８】配列番号１に記載の塩基配列中の連続した
少なくとも１４個の塩基を含み、該塩基配列と特異的に
結合するDNA。
【請求項９】配列番号４から１０のいずれかに記載の塩
基配列中の連続した少なくとも１４個の塩基を含む請求
項８に記載のDNA。
【請求項１０】請求項１または２に記載のポリペプチド
を特異的に認識する抗体。
【請求項１１】モノクローナル抗体である、請求項１０
に記載の抗体。
【請求項１２】請求項１１に記載のモノクローナル抗体
を産生するハイブリドーマ。
【請求項１３】請求項４から６のいずれかに記載のDNA
を有する発現ベクター。
【請求項１４】請求項１３記載の発現ベクターを宿主に
導入して得られる形質転換体。
【請求項１５】請求項１４に記載の形質転換体を培養す
る工程、および生産された組換えタンパク質を培養培地
から回収する工程を包含する、組換えマウスナース細胞
レセプターの製造方法。
【請求項１６】請求項１４記載の形質転換体または請求
項１５に記載の製造方法より得られたマウスナース細胞
レセプターを用いた、マウスナース細胞レセプターに特
異的に結合するリガンドのスクリーニング方法。
【請求項１７】請求項１４記載の形質転換体または請求
項１５に記載の製造方法より得られたマウスナース細胞
レセプターと請求項１６に記載のスクリーニング方法よ
り得られるリガンドとの結合を阻害する化合物のスクリ
ーニング方法。
【請求項１８】請求項１７に記載のスクリーニング方法
より得られる医薬。
【請求項１９】請求項８または９に記載のDNAを含む、
ディジョージ症候群を検出するためのキット。
【請求項２０】請求項８または９に記載のDNAを含む、
自己免疫疾患を検出するためのキット。