JP2000175693A - （ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体の製造方法 - Google Patents
（ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体の製造方法Info
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
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- C12P41/002—Processes using enzymes or microorganisms to separate optical isomers from a racemic mixture by oxidation/reduction reactions
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 医薬品の中間体として有用な（Ｒ）−２−ヒ
ドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体を、高い光学
純度で効率的に製造する方法を提供する。 【解決手段】 キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属
する微生物由来のカルボニル還元酵素、あるいは該酵素
の産生能を有する微生物の培養物あるいは該処理物を用
いて、フェノキシアセトン誘導体をＲ選択的に還元する
事を特徴とする、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノ
キシプロパン誘導体の製造方法。
ドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体を、高い光学
純度で効率的に製造する方法を提供する。 【解決手段】 キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属
する微生物由来のカルボニル還元酵素、あるいは該酵素
の産生能を有する微生物の培養物あるいは該処理物を用
いて、フェノキシアセトン誘導体をＲ選択的に還元する
事を特徴とする、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノ
キシプロパン誘導体の製造方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、Ｃａｎｄｉｄａ属
由来のカルボニル還元酵素、あるいは該酵素の産生能を
有する微生物の培養物あるいは該処理物を用いてフェノ
キシアセトン誘導体をＲ選択的に還元する事を特徴とす
る、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン
誘導体の製造方法に関する。（Ｒ）−２−ヒドロキシ−
１−フェノキシプロパン誘導体、とりわけ、３、４−ジ
フルオロ−２−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシプロピルオ
キシ））ニトロベンゼンは合成抗菌剤の中間体として有
用な化合物である。
由来のカルボニル還元酵素、あるいは該酵素の産生能を
有する微生物の培養物あるいは該処理物を用いてフェノ
キシアセトン誘導体をＲ選択的に還元する事を特徴とす
る、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン
誘導体の製造方法に関する。（Ｒ）−２−ヒドロキシ−
１−フェノキシプロパン誘導体、とりわけ、３、４−ジ
フルオロ−２−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシプロピルオ
キシ））ニトロベンゼンは合成抗菌剤の中間体として有
用な化合物である。
【０００２】
【従来の技術】フェノキシアセトン誘導体を微生物等を
用いて還元する方法は、既にいくつか報告されており、
パン酵母等を用いた場合では、一般的にプレログ側で説
明されている様にＳ体を優先的に生成する事が知られて
いる（Ａｃｔａ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．、４８
（６）、５０６、（１９９４））。ゆえに、フェノキシ
アセトン誘導体をＲ選択的に還元する能力を有する微生
物は非常に例が少なく、とりわけ厳密にＲ選択的に還元
する能力を有する微生物は未だ見い出されていない。例
えば、サーモアエロバクター属に属する微生物を用いて
フェノキシアセトンをＲ選択的に還元する方法が知られ
ているが、生成物の光学純度は９０％ｅｅ程度である
（特開平８−２６６２９２号）。コリネバクテリウム属
に属する微生物を用いて、２−アセトニルオキシ−３、
４−ジフルオロニトロベンゼンをＲ選択的に還元する方
法も知られているが、生成物の光学純度は８８．４％ｅ
ｅ程度である（特開平５−６８５７７号）。その他、糸
状菌類を用いて２−アセトニルオキシ−３、４−ジフル
オロニトロベンゼンをＲ選択的に還元する方法も知られ
ているが、生成物の光学純度は８４〜９４％ｅｅ程度で
あり、基質濃度が非常に低く生産性に課題がある（特開
平３−１８３４８９号）。上記微生物菌体を用いる場合
では、菌体中にＳ選択的カルボニル還元酵素が共存する
為に、生成物の光学純度が低下している場合もある。そ
こで、精製したＲ選択的アルコール脱水素酵素、補酵素
及び該補酵素を再生する為に必要な酵素を用いて、フェ
ノキシアセトン等をＲ選択的に還元する方法も知られて
いるが、光学純度は十分高くなく、高価な精製酵素を用
いている為に、現実的な製法とは言い難い（ＵＳ５３８
５８３３号）。
用いて還元する方法は、既にいくつか報告されており、
パン酵母等を用いた場合では、一般的にプレログ側で説
明されている様にＳ体を優先的に生成する事が知られて
いる（Ａｃｔａ．Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ．、４８
（６）、５０６、（１９９４））。ゆえに、フェノキシ
アセトン誘導体をＲ選択的に還元する能力を有する微生
物は非常に例が少なく、とりわけ厳密にＲ選択的に還元
する能力を有する微生物は未だ見い出されていない。例
えば、サーモアエロバクター属に属する微生物を用いて
フェノキシアセトンをＲ選択的に還元する方法が知られ
ているが、生成物の光学純度は９０％ｅｅ程度である
（特開平８−２６６２９２号）。コリネバクテリウム属
に属する微生物を用いて、２−アセトニルオキシ−３、
４−ジフルオロニトロベンゼンをＲ選択的に還元する方
法も知られているが、生成物の光学純度は８８．４％ｅ
ｅ程度である（特開平５−６８５７７号）。その他、糸
状菌類を用いて２−アセトニルオキシ−３、４−ジフル
オロニトロベンゼンをＲ選択的に還元する方法も知られ
ているが、生成物の光学純度は８４〜９４％ｅｅ程度で
あり、基質濃度が非常に低く生産性に課題がある（特開
平３−１８３４８９号）。上記微生物菌体を用いる場合
では、菌体中にＳ選択的カルボニル還元酵素が共存する
為に、生成物の光学純度が低下している場合もある。そ
こで、精製したＲ選択的アルコール脱水素酵素、補酵素
及び該補酵素を再生する為に必要な酵素を用いて、フェ
ノキシアセトン等をＲ選択的に還元する方法も知られて
いるが、光学純度は十分高くなく、高価な精製酵素を用
いている為に、現実的な製法とは言い難い（ＵＳ５３８
５８３３号）。
【０００３】この様に、上記微生物等を用いた還元方法
は、１）医薬品原料として要求される高い光学純度の生
成物を得る事ができない、２）基質濃度が低い為、生産
性が悪い、３）高価な精製酵素を用いる等、いずれの方
法も工業的製法としては、改善すべき点を有している。
は、１）医薬品原料として要求される高い光学純度の生
成物を得る事ができない、２）基質濃度が低い為、生産
性が悪い、３）高価な精製酵素を用いる等、いずれの方
法も工業的製法としては、改善すべき点を有している。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明者等は、医薬品
の中間体として有用な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フ
ェノキシプロパン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間
体として有用な３、４−ジフルオロ−２−（（Ｒ）−２
−（ヒドロキシプロピルオキシ））ニトロベンゼンを高
い光学純度で効率的に製造する事を目的として、鋭意検
討した結果、安価に入手可能なフェノキシアセトン誘導
体を、高いＲ選択性で効率的に（Ｒ）−２−ヒドロキシ
−１−フェノキシプロパン誘導体に還元する能力を有す
るカルボニル還元酵素を見出し本発明を完成した。
の中間体として有用な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フ
ェノキシプロパン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間
体として有用な３、４−ジフルオロ−２−（（Ｒ）−２
−（ヒドロキシプロピルオキシ））ニトロベンゼンを高
い光学純度で効率的に製造する事を目的として、鋭意検
討した結果、安価に入手可能なフェノキシアセトン誘導
体を、高いＲ選択性で効率的に（Ｒ）−２−ヒドロキシ
−１−フェノキシプロパン誘導体に還元する能力を有す
るカルボニル還元酵素を見出し本発明を完成した。
【０００５】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明は、キャン
ディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物由来のカル
ボニル還元酵素、あるいは該酵素の産生能を有する微生
物の培養物あるいは該処理物と、一般式（２）
ディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生物由来のカル
ボニル還元酵素、あるいは該酵素の産生能を有する微生
物の培養物あるいは該処理物と、一般式（２）
【０００６】
【化４】
【０００７】（式中、Ｒはフェノキシ基または置換基を
有するフェノキシ基を表す。）で示されるフェノキシア
セトン誘導体とを反応させる工程、及び生成した一般式
（１）
有するフェノキシ基を表す。）で示されるフェノキシア
セトン誘導体とを反応させる工程、及び生成した一般式
（１）
【０００８】
【化５】
【０００９】（式中、Ｒは前記と同様である。）で示さ
れる（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン
誘導体を採取する工程を含有する、製造方法を提供す
る。以下に本発明を詳細に説明する。
れる（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン
誘導体を採取する工程を含有する、製造方法を提供す
る。以下に本発明を詳細に説明する。
【００１０】
【発明の実施の形態】前述式（１）及び（２）におい
て、Ｒで表される、置換基を有するフェノキシ基として
は、ｐ−ニトロフェノキシ基、ｐ−アミノフェノキシ
基、ｐ−クロロフェノキシ基、ｐ−ブロモフェノキシ
基、３，５−ジニトロフェノキシ基、２，３−ジフルオ
ロ−５−ニトロフェノキシ基等が挙げられ、好ましくは
２，３−ジフルオロ−５−ニトロフェノキシ基が挙げら
れる。
て、Ｒで表される、置換基を有するフェノキシ基として
は、ｐ−ニトロフェノキシ基、ｐ−アミノフェノキシ
基、ｐ−クロロフェノキシ基、ｐ−ブロモフェノキシ
基、３，５−ジニトロフェノキシ基、２，３−ジフルオ
ロ−５−ニトロフェノキシ基等が挙げられ、好ましくは
２，３−ジフルオロ−５−ニトロフェノキシ基が挙げら
れる。
【００１１】本発明の原料である一般式（２）で表され
るフェノキシアセトン誘導体、例えば、２−アセトニル
オキシ−３、４−ジフルオロニトロベンゼンの場合、
２，３−ジフルオロ−５−ニトロフェノールを、強塩基
存在下、クロロアセトンと反応させる事により、容易に
合成できる事が知られている（特開昭６１−２４６１５
１号）。
るフェノキシアセトン誘導体、例えば、２−アセトニル
オキシ−３、４−ジフルオロニトロベンゼンの場合、
２，３−ジフルオロ−５−ニトロフェノールを、強塩基
存在下、クロロアセトンと反応させる事により、容易に
合成できる事が知られている（特開昭６１−２４６１５
１号）。
【００１２】Ｒ選択的に還元する能力を有するカルボニ
ル還元酵素としては、キャンディダ属（Ｃａｎｄｉｄ
ａ）に属する微生物由来、好ましくはキャンディダ・マ
グノリエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｇｎｏｌｉａｅ）由
来、さらに好ましくはキャンディダ・マグノリエ ＩＦ
Ｏ０７０５由来の酵素が挙げられる。
ル還元酵素としては、キャンディダ属（Ｃａｎｄｉｄ
ａ）に属する微生物由来、好ましくはキャンディダ・マ
グノリエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｇｎｏｌｉａｅ）由
来、さらに好ましくはキャンディダ・マグノリエ ＩＦ
Ｏ０７０５由来の酵素が挙げられる。
【００１３】また上記酵素の産生能を有する微生物とし
ては、野生株または変異株のいずれでもあり得る。ある
いは細胞融合または遺伝子操作等の遺伝学的手法により
誘導される微生物も用いられ得る。遺伝子操作された本
酵素を生産する微生物は、例えば、これらの酵素を単離
及び／または精製して酵素のアミノ酸配列の一部または
全部を決定する工程、このアミノ酸配列に基づいて酵素
をコードするＤＮＡ配列を得る工程、このＤＮＡを他の
微生物に導入して組み替え微生物を得る工程、及びこの
組み替え微生物を培養して、本酵素を得る工程を含有す
る方法により得られ得る（ＷＯ９８−３５０２５号）。
例えば、上記カルボニル還元酵素をコードするＤＮＡ、
及び該酵素が依存する補酵素を再生する能力を有する酵
素をコードするＤＮＡを有するプラスミドで形質転換さ
れた形質転換細胞が挙げられ、好ましくは前記補酵素を
再生する能力を有する酵素がグルコース脱水素酵素であ
る上記形質転換細胞、前記グルコース脱水素酵素が、バ
シラス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔ
ｅｒｉｕｍ）由来である上記形質転換細胞、前記プラス
ミドがｐＮＴＳ１Ｇである上記形質転換細胞、形質転換
細胞が大腸菌である上記形質転換細胞等が挙げられ、よ
り好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１（ｐＮＴＳ１
Ｇ） 受託番号ＦＥＲＭ−ＢＰ５８３５が挙げられる。
ては、野生株または変異株のいずれでもあり得る。ある
いは細胞融合または遺伝子操作等の遺伝学的手法により
誘導される微生物も用いられ得る。遺伝子操作された本
酵素を生産する微生物は、例えば、これらの酵素を単離
及び／または精製して酵素のアミノ酸配列の一部または
全部を決定する工程、このアミノ酸配列に基づいて酵素
をコードするＤＮＡ配列を得る工程、このＤＮＡを他の
微生物に導入して組み替え微生物を得る工程、及びこの
組み替え微生物を培養して、本酵素を得る工程を含有す
る方法により得られ得る（ＷＯ９８−３５０２５号）。
例えば、上記カルボニル還元酵素をコードするＤＮＡ、
及び該酵素が依存する補酵素を再生する能力を有する酵
素をコードするＤＮＡを有するプラスミドで形質転換さ
れた形質転換細胞が挙げられ、好ましくは前記補酵素を
再生する能力を有する酵素がグルコース脱水素酵素であ
る上記形質転換細胞、前記グルコース脱水素酵素が、バ
シラス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔ
ｅｒｉｕｍ）由来である上記形質転換細胞、前記プラス
ミドがｐＮＴＳ１Ｇである上記形質転換細胞、形質転換
細胞が大腸菌である上記形質転換細胞等が挙げられ、よ
り好ましくは、Ｅ．ｃｏｌｉ ＨＢ１０１（ｐＮＴＳ１
Ｇ） 受託番号ＦＥＲＭ−ＢＰ５８３５が挙げられる。
【００１４】本発明方法において、カルボニル還元酵素
の産生能を有する微生物の為の培養培地は、その微生物
が増殖し得るものである限り特に限定されない。例え
ば、炭素源として、グルコース、シュークロース等の糖
質、エタノール、グリセロール等のアルコール類、オレ
イン酸、ステアリン酸等の脂肪酸及びそのエステル類、
菜種油、大豆油等の油類；窒素源として、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム、ペプトン、カザミノ酸、コーン
スティープリカー、ふすま、酵母エキスなど；無機塩類
として、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カル
シウム、燐酸１水素カリウム、燐酸２水素カリウムな
ど；他の栄養源として、麦芽エキス、肉エキス等を含有
する通常の液体培地が使用され得る。培養は好気的に行
い、通常、培養時間、１〜５日間程度、培地のｐＨ、３
〜９、培養温度、１０〜５０℃で行い得る。
の産生能を有する微生物の為の培養培地は、その微生物
が増殖し得るものである限り特に限定されない。例え
ば、炭素源として、グルコース、シュークロース等の糖
質、エタノール、グリセロール等のアルコール類、オレ
イン酸、ステアリン酸等の脂肪酸及びそのエステル類、
菜種油、大豆油等の油類；窒素源として、硫酸アンモニ
ウム、硝酸ナトリウム、ペプトン、カザミノ酸、コーン
スティープリカー、ふすま、酵母エキスなど；無機塩類
として、硫酸マグネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カル
シウム、燐酸１水素カリウム、燐酸２水素カリウムな
ど；他の栄養源として、麦芽エキス、肉エキス等を含有
する通常の液体培地が使用され得る。培養は好気的に行
い、通常、培養時間、１〜５日間程度、培地のｐＨ、３
〜９、培養温度、１０〜５０℃で行い得る。
【００１５】反応は、適当な溶媒中に基質フェノキシア
セトン誘導体、補酵素ＮＡＤＰ及び上記微生物の培養物
またはその処理物等を添加し、ｐＨ調整下攪拌する事に
より行い得る。反応は１０〜７０℃、ｐＨ＝４〜１０で
行う。基質の仕込み濃度は０．１〜９０％（ｗ／ｖ）基
質を一括、または連続的に添加し得る。反応はバッチ方
式または連続方式で行い得る。
セトン誘導体、補酵素ＮＡＤＰ及び上記微生物の培養物
またはその処理物等を添加し、ｐＨ調整下攪拌する事に
より行い得る。反応は１０〜７０℃、ｐＨ＝４〜１０で
行う。基質の仕込み濃度は０．１〜９０％（ｗ／ｖ）基
質を一括、または連続的に添加し得る。反応はバッチ方
式または連続方式で行い得る。
【００１６】ここで、「微生物の培養物」とは、菌体を
含む培養液あるいは培養菌体を意味し、「その処理物」
とは、例えば、粗抽出液、凍結乾燥微生物体、アセトン
乾燥微生物体、またはそれら菌体の磨砕物等を意味す
る。さらにそれらは、酵素自体あるいは菌体のまま公知
の手段で固定化されて用いられ得る。固定化は、当業者
に周知の方法（例えば架橋法、物理的吸着法、包括法
等）で行い得る。
含む培養液あるいは培養菌体を意味し、「その処理物」
とは、例えば、粗抽出液、凍結乾燥微生物体、アセトン
乾燥微生物体、またはそれら菌体の磨砕物等を意味す
る。さらにそれらは、酵素自体あるいは菌体のまま公知
の手段で固定化されて用いられ得る。固定化は、当業者
に周知の方法（例えば架橋法、物理的吸着法、包括法
等）で行い得る。
【００１７】反応は、一般に用いられるＮＡＤＰＨ再生
系を組み合わせて用いる事により、高価な補酵素の使用
量を大幅に減少させ得る。代表的なＮＡＤＰＨ再生系と
しては、例えば、グルコース脱水素酵素及びグルコース
を用いる方法が挙げられる。反応条件は用いる酵素、微
生物またはその処理物、基質濃度によって異なるが、基
質濃度約０．１〜９０重量％、反応温度１０〜５０℃、
ｐＨ＝５〜８、反応時間１〜３６時間である。
系を組み合わせて用いる事により、高価な補酵素の使用
量を大幅に減少させ得る。代表的なＮＡＤＰＨ再生系と
しては、例えば、グルコース脱水素酵素及びグルコース
を用いる方法が挙げられる。反応条件は用いる酵素、微
生物またはその処理物、基質濃度によって異なるが、基
質濃度約０．１〜９０重量％、反応温度１０〜５０℃、
ｐＨ＝５〜８、反応時間１〜３６時間である。
【００１８】カルボニル還元酵素遺伝子及びこの酵素が
依存する補酵素を再生する能力を有する酵素（例えばグ
ルコース脱水素酵素）の遺伝子を同一宿主微生物内に導
入した形質転換微生物の培養物またはその処理物等を用
いて上記同様の反応を行えば、別途に補酵素の再生に必
要な酵素源を調整する必要がないため、より低コストで
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導
体が製造され得る。
依存する補酵素を再生する能力を有する酵素（例えばグ
ルコース脱水素酵素）の遺伝子を同一宿主微生物内に導
入した形質転換微生物の培養物またはその処理物等を用
いて上記同様の反応を行えば、別途に補酵素の再生に必
要な酵素源を調整する必要がないため、より低コストで
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導
体が製造され得る。
【００１９】反応で生じた（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１
−フェノキシプロパン誘導体は、常法により精製され得
る。例えば、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシ
プロパン誘導体は、微生物等を用いた場合には必要に応
じ遠心分離、濾過等の処理を施して菌体等の懸濁物を除
去し、次いで酢酸エチル、トルエン等の有機溶媒で抽出
し、有機溶媒を減圧下で除去し、そして減圧蒸留または
クロマトグラフィー等の処理を行うことにより、精製さ
れ得る。
−フェノキシプロパン誘導体は、常法により精製され得
る。例えば、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシ
プロパン誘導体は、微生物等を用いた場合には必要に応
じ遠心分離、濾過等の処理を施して菌体等の懸濁物を除
去し、次いで酢酸エチル、トルエン等の有機溶媒で抽出
し、有機溶媒を減圧下で除去し、そして減圧蒸留または
クロマトグラフィー等の処理を行うことにより、精製さ
れ得る。
【００２０】
【実施例】以下に実施例を挙げ、本発明を更に具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。
【００２１】実施例１ 組替え大腸菌ＨＢ１０１（ｐＮＴＳ１Ｇ）受託番号ＦＥ
ＲＭ−ＢＰ５８３５を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中で
滅菌した１００ｍｌの半合成培地（グリセリン１５ｇ、
イーストエキス３ｇ、Ｎａ2 ＨＰＯ4 ６ｇ、ＫＨ2 ＨＰ
Ｏ4 ３ｇ、ＮａＣｌを２ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏを
０．５ｇ、水１Ｌ、ｐＨ＝７．２）に接種し、３７℃で
２８時間振とう培養した。得られた培養液５０ｍｌにフ
ェノキシアセトン５ｇ、グルコース９ｇ、ＮＡＤＰ４．
４ｍｇを添加し、５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ
＝６．５に調整しつつ３０℃で攪拌、２４時間反応を行
った。反応終了後、反応液をトルエンで抽出、減圧濃縮
し、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン
濃縮物を得た。反応液のＨＰＬＣ分析［カラム：Ｆｉｎ
ｅｐａｋＣ18:5（日本分光社製）、溶離液：アセトニト
リル／０．１％燐酸溶液＝３０／７０、流速：０．７ｍ
ｌ／ｍｉｎ、検出波長：２１０ｎｍ］を行ったところ変
換率は７９％であった。また、上記濃縮物の一部をシリ
カゲルカラム精製した後、ＨＰＬＣ分析［カラム：Ｃｈ
ｉｒａｌｃｅｌ ＡＳ（ダイセル社製）、溶離液：ヘキ
サン／イソプロパノール＝９８／２、流速：１ｍｌ／ｍ
ｉｎ、温度：４０℃、検出波長：２１０ｎｍ］を行った
ところ、光学純度は９９．７％ｅｅであった。
ＲＭ−ＢＰ５８３５を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中で
滅菌した１００ｍｌの半合成培地（グリセリン１５ｇ、
イーストエキス３ｇ、Ｎａ2 ＨＰＯ4 ６ｇ、ＫＨ2 ＨＰ
Ｏ4 ３ｇ、ＮａＣｌを２ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏを
０．５ｇ、水１Ｌ、ｐＨ＝７．２）に接種し、３７℃で
２８時間振とう培養した。得られた培養液５０ｍｌにフ
ェノキシアセトン５ｇ、グルコース９ｇ、ＮＡＤＰ４．
４ｍｇを添加し、５Ｎの水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ
＝６．５に調整しつつ３０℃で攪拌、２４時間反応を行
った。反応終了後、反応液をトルエンで抽出、減圧濃縮
し、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン
濃縮物を得た。反応液のＨＰＬＣ分析［カラム：Ｆｉｎ
ｅｐａｋＣ18:5（日本分光社製）、溶離液：アセトニト
リル／０．１％燐酸溶液＝３０／７０、流速：０．７ｍ
ｌ／ｍｉｎ、検出波長：２１０ｎｍ］を行ったところ変
換率は７９％であった。また、上記濃縮物の一部をシリ
カゲルカラム精製した後、ＨＰＬＣ分析［カラム：Ｃｈ
ｉｒａｌｃｅｌ ＡＳ（ダイセル社製）、溶離液：ヘキ
サン／イソプロパノール＝９８／２、流速：１ｍｌ／ｍ
ｉｎ、温度：４０℃、検出波長：２１０ｎｍ］を行った
ところ、光学純度は９９．７％ｅｅであった。
【００２２】実施例２ 実施例１で用いた培養液５０ｍｌに２−アセトニルオキ
シ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン２．５ｇ、グル
コース２．９７ｇ、ＮＡＤＰ２．９ｍｇを添加し、５Ｎ
の水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ＝６．５に調整しつつ
３０℃で攪拌、２３時間反応を行った。反応終了後、反
応液をトルエンで抽出、減圧濃縮し、３，４−ジフルオ
ロ−２−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシプロピルオキ
シ））ニトロベンゼン濃縮物を得た。反応液のＨＰＬＣ
分析（実施例１と同様）を行ったところ変換率は８０％
であった。また、上記濃縮物の一部をカラム精製し、ジ
ニトロベンゾイル化した後、ＨＰＬＣ分析（カラム：Ｃ
ｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（ダイセル社製）、溶離
液：ヘキサン／イソプロパノール＝５０／５０、流速：
１ｍｌ／ｍｉｎ、温度：４０℃、検出波長：２５４ｎ
ｍ）を行ったところ、光学純度は９９％ｅｅ以上であっ
た。
シ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン２．５ｇ、グル
コース２．９７ｇ、ＮＡＤＰ２．９ｍｇを添加し、５Ｎ
の水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ＝６．５に調整しつつ
３０℃で攪拌、２３時間反応を行った。反応終了後、反
応液をトルエンで抽出、減圧濃縮し、３，４−ジフルオ
ロ−２−（（Ｒ）−２−（ヒドロキシプロピルオキ
シ））ニトロベンゼン濃縮物を得た。反応液のＨＰＬＣ
分析（実施例１と同様）を行ったところ変換率は８０％
であった。また、上記濃縮物の一部をカラム精製し、ジ
ニトロベンゾイル化した後、ＨＰＬＣ分析（カラム：Ｃ
ｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（ダイセル社製）、溶離
液：ヘキサン／イソプロパノール＝５０／５０、流速：
１ｍｌ／ｍｉｎ、温度：４０℃、検出波長：２５４ｎ
ｍ）を行ったところ、光学純度は９９％ｅｅ以上であっ
た。
【００２３】
【発明の効果】本発明の方法により、医薬品中間体とし
て極めて有用な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキ
シプロパン誘導体を効率的に製造する事ができる。
て極めて有用な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキ
シプロパン誘導体を効率的に製造する事ができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 井上 健二 兵庫県加古川市加古川町粟津82−２−501 (72)発明者 長谷川 淳三 兵庫県明石市大久保町高丘２−13−４ Ｆターム(参考） 4B064 AB05 CA02 CA06 CA21 CB18 DA01
Claims (12)
- 【請求項１】 一般式（１） 【化１】 （式中、Ｒはフェノキシ基または置換基を有するフェノ
キシ基を表す。）で示される（Ｒ）−２−ヒドロキシ−
１−フェノキシプロパン誘導体の製造方法であって、該
方法はキャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属する微生
物由来のカルボニル還元酵素、あるいは該カルボニル還
元酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいは該処理
物と、一般式（２） 【化２】 （式中、Ｒは前記と同様である。）で示されるフェノキ
シアセトン誘導体とを反応させる工程、及び生成した一
般式（１） 【化３】 （式中、Ｒは前記と同様である。）で示される（Ｒ）−
２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体を採取
する工程を含有する、製造方法。 - 【請求項２】 前記Ｒが２，３−ジフルオロ−５−ニト
ロフェノキシ基である事を特徴とする請求項１に記載の
製造方法。 - 【請求項３】 前記カルボニル還元酵素の産生能を有す
る微生物が、キャンディダ・マグノリエ（Ｃａｎｄｉｄ
ａ ｍａｇｎｏｌｉａｅ）である請求項１〜２のいずれ
かに記載の製造方法。 - 【請求項４】 前記カルボニル還元酵素の産生能を有す
る微生物が、キャンディダ・マグノリエ ＩＦＯ０７０
５である請求項１〜３のいずれかに記載の製造方法。 - 【請求項５】 前記カルボニル還元酵素の産生能を有す
る微生物が、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属に属す
る微生物由来であるカルボニル還元酵素をコードするＤ
ＮＡ、及び該酵素が依存する補酵素を再生する能力を有
する酵素をコードするＤＮＡを有するプラスミドで形質
転換された形質転換細胞である請求項１〜２のいずれか
に記載の製造方法。 - 【請求項６】 前記補酵素を再生する能力を有する酵素
がグルコース脱水素酵素である請求項１〜２、５に記載
の製造方法。 - 【請求項７】 前記グルコース脱水素酵素が、バシラス
・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕａｓ ｍｅｇａｔｅｒ
ｉｕｍ）由来である請求項１〜２、５〜６いずれかに記
載の製造方法。 - 【請求項８】 前記カルボニル還元酵素がキャンディダ
・マグノリエ（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｇｎｏｌｉａｅ）
由来である、請求項１〜２、５〜７のいずれかに記載の
製造方法。 - 【請求項９】 前記カルボニル還元酵素がキャンディダ
・マグノリエ ＩＦＯ０７０５由来である、請求項１〜
２、５〜８のいずれかに記載の製造方法。 - 【請求項１０】 前記プラスミドがｐＮＴＳ１Ｇである
請求項１〜２、５〜９いずれかに記載の製造方法。 - 【請求項１１】 前記形質転換細胞が大腸菌である請求
項１〜２、５〜１０いずれかに記載の製造方法。 - 【請求項１２】 前記形質転換細胞がＥ．ｃｏｌｉ Ｈ
Ｂ１０１（ｐＮＴＳ１Ｇ） 受託番号ＦＥＲＭ−ＢＰ５
８３５である請求項１〜２、５〜１１いずれかに記載の
製造方法。
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| JP10359902A JP2000175693A (ja) | 1998-12-18 | 1998-12-18 | （ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体の製造方法 |
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|---|---|---|---|
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2007010944A1 (ja) * | 2005-07-20 | 2007-01-25 | Kaneka Corporation | 光学活性２－（ｎ－置換アミノメチル）－３－ヒドロキシ酪酸エステル類の製造方法 |
| CN102925368A (zh) * | 2012-11-07 | 2013-02-13 | 浙江大学宁波理工学院 | 一种可催化不对称还原反应的球孢白僵菌及其应用 |
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| JPH02295969A (ja) * | 1989-05-10 | 1990-12-06 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性なアミノアルコール誘導体の製造法 |
| JPH02295970A (ja) * | 1989-05-10 | 1990-12-06 | Asahi Chem Ind Co Ltd | 光学活性なプロパン―２―オール誘導体の製造法 |
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| KR100506134B1 (ko) * | 1997-02-07 | 2005-08-08 | 카네카 코포레이션 | 신규한 카르보닐 환원효소 및 이것을 코딩하는 유전자 및 이러한 환원효소 및 유전자 이용방법 |
-
1998
- 1998-12-18 JP JP10359902A patent/JP2000175693A/ja active Pending
-
1999
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- 1999-12-20 CA CA002321450A patent/CA2321450A1/en not_active Abandoned
- 1999-12-20 KR KR1020007009099A patent/KR20010041061A/ko not_active Application Discontinuation
- 1999-12-20 CN CN99802955A patent/CN1291236A/zh active Pending
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|---|---|---|---|---|
| WO2007010944A1 (ja) * | 2005-07-20 | 2007-01-25 | Kaneka Corporation | 光学活性２－（ｎ－置換アミノメチル）－３－ヒドロキシ酪酸エステル類の製造方法 |
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