JP2000060588A - コーヒー酸誘導体の生産方法 - Google Patents
コーヒー酸誘導体の生産方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 コーヒー酸誘導体を効率よく生産する方法を
提供する。 【解決手段】 ムラサキ科植物の細胞を培養し培養物よ
りコーヒー酸誘導体を分離する。 【効果】 これまで報告されている植物や培養細胞にお
いて、微量化合物としてしか含まれていなかったコーヒ
ー酸誘導体が飛躍的に大量に生産される。
提供する。 【解決手段】 ムラサキ科植物の細胞を培養し培養物よ
りコーヒー酸誘導体を分離する。 【効果】 これまで報告されている植物や培養細胞にお
いて、微量化合物としてしか含まれていなかったコーヒ
ー酸誘導体が飛躍的に大量に生産される。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ムラサキ科（Bora
ginaceae）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する能力を
有する植物の細胞または組織の培養物からのコーヒー酸
誘導体の製造方法に関する。
ginaceae）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する能力を
有する植物の細胞または組織の培養物からのコーヒー酸
誘導体の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】コーヒー酸由来の化合物についての有用
性については幾つかの報告がなされており、コーヒー酸
のエステル、アミドを構造に含む化合物については局所
適用に用いる脱色素用医薬または化粧用組成物としての
利用、コーヒー酸の４量体であるリソスペルミン酸Ｂお
よびその誘導体については血管拡張効果、抗エイズ作
用、ラブドシンについてはＤＮＡトポイソメラーゼII阻
害作用、活性酸素スカベンジャーとしての作用が知られ
ている。
性については幾つかの報告がなされており、コーヒー酸
のエステル、アミドを構造に含む化合物については局所
適用に用いる脱色素用医薬または化粧用組成物としての
利用、コーヒー酸の４量体であるリソスペルミン酸Ｂお
よびその誘導体については血管拡張効果、抗エイズ作
用、ラブドシンについてはＤＮＡトポイソメラーゼII阻
害作用、活性酸素スカベンジャーとしての作用が知られ
ている。
【０００３】これら化合物の天然の植物体に含まれる含
量は非常に低いものであり、その例としてはヘリオトー
プの葉部でリソスペルミン酸が１．０６％、リソスペル
ミン酸Ｂが０．３４％であり、根部でリソスペルミン酸
が１．３９％、リソスペルミン酸Ｂが０．０４％、in v
itro plantの葉部においてもリソスペルミン酸が０．５
７％、リソスペルミン酸Ｂが０．４２％（いずれも乾燥
重あたり）であることが報告されている（植物組織培養
(1996),13(1),73-74）。
量は非常に低いものであり、その例としてはヘリオトー
プの葉部でリソスペルミン酸が１．０６％、リソスペル
ミン酸Ｂが０．３４％であり、根部でリソスペルミン酸
が１．３９％、リソスペルミン酸Ｂが０．０４％、in v
itro plantの葉部においてもリソスペルミン酸が０．５
７％、リソスペルミン酸Ｂが０．４２％（いずれも乾燥
重あたり）であることが報告されている（植物組織培養
(1996),13(1),73-74）。
【０００４】また、コーヒー酸４量体リソスペルミン酸
Ｂおよび２量体ロズマリン酸の植物組織培養法を利用し
た生産研究についてはシソ科（Lamiaceae）植物であるS
alvia miltiorrhizaを材料とした研究がなされており、
カルス培養ではリソスペルミン酸Ｂが０．１％およびロ
ズマリン酸が１．２４％、カルスより再生した植物体の
葉部ではリソスペルミン酸Bが６．０５％およびロズマ
リン酸が６．９６％であることが報告されている（J. N
at. Prod.(1994),57(6),817-823）。
Ｂおよび２量体ロズマリン酸の植物組織培養法を利用し
た生産研究についてはシソ科（Lamiaceae）植物であるS
alvia miltiorrhizaを材料とした研究がなされており、
カルス培養ではリソスペルミン酸Ｂが０．１％およびロ
ズマリン酸が１．２４％、カルスより再生した植物体の
葉部ではリソスペルミン酸Bが６．０５％およびロズマ
リン酸が６．９６％であることが報告されている（J. N
at. Prod.(1994),57(6),817-823）。
【０００５】これまで植物組織培養法を用いた有用物質
生産検討は数多くの植物についてなされており、生産さ
れた有用物質は医薬品、色素などへの利用展開が検討さ
れてきた。ムラサキ科植物においても古くからムラサキ
（Lithospermum erythrorithon）培養細胞によるシコニ
ン生産研究がなされており、細胞の生育に適したＭＧ−
５培地とシコニン生産に適したＭ−９培地を組み合わせ
た二段培養法によりシコニンを高生産する技術が確立し
ている（Fujita Y. et al, Plant Cell Rep.,(1981),1,
61-63）。しかし、ムラサキ科植物の培養細胞または組
織を培養することでコーヒー酸誘導体の生産性が飛躍的
に向上することは知られていなかった。
生産検討は数多くの植物についてなされており、生産さ
れた有用物質は医薬品、色素などへの利用展開が検討さ
れてきた。ムラサキ科植物においても古くからムラサキ
（Lithospermum erythrorithon）培養細胞によるシコニ
ン生産研究がなされており、細胞の生育に適したＭＧ−
５培地とシコニン生産に適したＭ−９培地を組み合わせ
た二段培養法によりシコニンを高生産する技術が確立し
ている（Fujita Y. et al, Plant Cell Rep.,(1981),1,
61-63）。しかし、ムラサキ科植物の培養細胞または組
織を培養することでコーヒー酸誘導体の生産性が飛躍的
に向上することは知られていなかった。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ムラサキ科
（Boraginaceae）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する
能力を有する植物の細胞または組織を培養して得られる
培養物から、該コーヒー酸誘導体を分離することを目的
とする。
（Boraginaceae）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する
能力を有する植物の細胞または組織を培養して得られる
培養物から、該コーヒー酸誘導体を分離することを目的
とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明者らは英意研究を重ねた結果、ムラサキ科植
物がコーヒー酸誘導体を生産することを見出し、本発明
を成すに至った。
に、本発明者らは英意研究を重ねた結果、ムラサキ科植
物がコーヒー酸誘導体を生産することを見出し、本発明
を成すに至った。
【０００８】即ち、本発明はムラサキ科（Boraginacea
e）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する能力を有する
植物の細胞または組織を培養して得られる培養物から、
該コーヒー酸誘導体を分離することを特徴とするコーヒ
ー酸誘導体の製造方法である。
e）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する能力を有する
植物の細胞または組織を培養して得られる培養物から、
該コーヒー酸誘導体を分離することを特徴とするコーヒ
ー酸誘導体の製造方法である。
【０００９】
【発明の実施の形態】本発明において、コーヒー酸誘導
体を生産に使用される植物としてはムラサキ科植物に属
し、コーヒー酸誘導体を生産する植物であり、例えば、
ムラサキ（Lithospermum erythrorhizon）、ホタルカズ
ラ（Lithospermum zollingeri）、ミヤマホタルカズラ
（Lithospermum diffusum）、イヌムラサキ（Lithosper
mum arvense L.）、ロヘンシソウ（Lithospermum ruder
ale）、テンザンシソウ（Lithospermum tschimganicum
B. Fedtsch）、カシソウ（Arnebia guttata Bge.）、ナ
ンシソウ（Arnebia euchroma (Royle) Johnst）、パミ
ールカシソウ（Arnebia thomsonii Clarke）、シトウソ
ウ（Arnebia saxatilis Benth. et Hook.）、テンシソ
ウ（Onosma paniculatum Bur. et Franch）、チョウカ
テンシソウ（Onosmahookeri Clarke var. longiflorum
Duthie）などをあげることができ、中でもムラサキが好
ましい。
体を生産に使用される植物としてはムラサキ科植物に属
し、コーヒー酸誘導体を生産する植物であり、例えば、
ムラサキ（Lithospermum erythrorhizon）、ホタルカズ
ラ（Lithospermum zollingeri）、ミヤマホタルカズラ
（Lithospermum diffusum）、イヌムラサキ（Lithosper
mum arvense L.）、ロヘンシソウ（Lithospermum ruder
ale）、テンザンシソウ（Lithospermum tschimganicum
B. Fedtsch）、カシソウ（Arnebia guttata Bge.）、ナ
ンシソウ（Arnebia euchroma (Royle) Johnst）、パミ
ールカシソウ（Arnebia thomsonii Clarke）、シトウソ
ウ（Arnebia saxatilis Benth. et Hook.）、テンシソ
ウ（Onosma paniculatum Bur. et Franch）、チョウカ
テンシソウ（Onosmahookeri Clarke var. longiflorum
Duthie）などをあげることができ、中でもムラサキが好
ましい。
【００１０】本発明におけるコーヒー酸誘導体としては
下記の一般式１［化２］
下記の一般式１［化２］
【００１１】
【化２】
［式中、Ｒは水素原子、又は炭素数１−６のアルキル基
を表す。]を有する化合物、または下記の式２［化３］
に示すエピラブドシン（epi-rabdosiin）である。
を表す。]を有する化合物、または下記の式２［化３］
に示すエピラブドシン（epi-rabdosiin）である。
【００１２】
【化３】
一般式１における炭素数１−６のアルキル基としては、
例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロ
ピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル
基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等
を挙げることができる。
例えばメチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロ
ピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル
基、ｔ−ブチル基、ｎ−ペンチル基、ｎ−ヘキシル基等
を挙げることができる。
【００１３】一般式１に含まれる化合物の好適例として
はリソスペルミン酸Ｂ（ＬＡ−Ｂ）（化４）、リソスペ
ルミン酸−２（ＬＡＢ−２）等を挙げることができる。
はリソスペルミン酸Ｂ（ＬＡ−Ｂ）（化４）、リソスペ
ルミン酸−２（ＬＡＢ−２）等を挙げることができる。
【００１４】
【化４】
本発明で用いられる培地としては、次に示す（１）
〜（）濃度条件のうち少なくとも１以上の条件を満たす
培地であれば良い。 （１） 窒素源のうちアンモニウムイオンの割合が１
０モル％以下、 （２） 銅イオン濃度が０．２μＭ以上、 （３） サイトカイニン類の濃度：５μＭ以下、 （４） イノシトール濃度：５０ｍｇ／ｌ以下、 （５） チアミン濃度：０．０５ｍｇ／ｌ以下、 （６） ピリドキシン濃度：０．２５ｍｇ／ｌ以下、 （７） ニコチン酸濃度：０．５ｍｇ／ｌ以下、 （８） アスコルビン酸濃度：１．０ｍｇ／ｌ以下、 （９） グリシン濃度：１．０ｍｇ／ｌ以下、 （１０） Ｌ−システイン濃度：５．０ｍｇ／ｌ以下、 （１１） Ｌ−グルタミン濃度：５．０ｍｇ／ｌ以下、 （１２） 硫酸イオン濃度：０．１ｍＭ以下、 （１３） マンガンイオン濃度：１０μＭ以下、 （１４） モリブデンイオン濃度：０．００３μＭ以
下、 （１５） ヨウ素イオン濃度：２．０μＭ以下 （１６） 流動パラフィンおよび／または油脂濃度：１
０ｍｌ／ｌ以上 その中でも、本発明で用いられる培地としては、Ｍ−９
培地が特に好ましい。
〜（）濃度条件のうち少なくとも１以上の条件を満たす
培地であれば良い。 （１） 窒素源のうちアンモニウムイオンの割合が１
０モル％以下、 （２） 銅イオン濃度が０．２μＭ以上、 （３） サイトカイニン類の濃度：５μＭ以下、 （４） イノシトール濃度：５０ｍｇ／ｌ以下、 （５） チアミン濃度：０．０５ｍｇ／ｌ以下、 （６） ピリドキシン濃度：０．２５ｍｇ／ｌ以下、 （７） ニコチン酸濃度：０．５ｍｇ／ｌ以下、 （８） アスコルビン酸濃度：１．０ｍｇ／ｌ以下、 （９） グリシン濃度：１．０ｍｇ／ｌ以下、 （１０） Ｌ−システイン濃度：５．０ｍｇ／ｌ以下、 （１１） Ｌ−グルタミン濃度：５．０ｍｇ／ｌ以下、 （１２） 硫酸イオン濃度：０．１ｍＭ以下、 （１３） マンガンイオン濃度：１０μＭ以下、 （１４） モリブデンイオン濃度：０．００３μＭ以
下、 （１５） ヨウ素イオン濃度：２．０μＭ以下 （１６） 流動パラフィンおよび／または油脂濃度：１
０ｍｌ／ｌ以上 その中でも、本発明で用いられる培地としては、Ｍ−９
培地が特に好ましい。
【００１５】ムラサキ科植物の培養細胞または組織を培
養することにより得られる培養物からコーヒー酸誘導体
を採取するための好ましい例としては、次の方法が挙げ
られる。尚、培養物とは培養を行う際の培養細胞、組
織、培地を示す。
養することにより得られる培養物からコーヒー酸誘導体
を採取するための好ましい例としては、次の方法が挙げ
られる。尚、培養物とは培養を行う際の培養細胞、組
織、培地を示す。
【００１６】ムラサキ科植物の一部、例えば根、生長
点、葉、茎、種子などから採取される植物片を殺菌処理
後、ゲランガムで固めたリンスマイヤー・スクーグ培地
などの固体培地上に置床し、１０〜３５℃で１４〜６０
日程度経過させて組織片の一部から、カルスを生成させ
る。このようにして得られたカルスを継代培養すると生
育速度が漸次高まり安定化したカルスが得られる。ここ
で、安定化したカルスとは、培養中に目的外の器官分化
が起こらない状態を保持する性質をもちカルスの生育速
度が均質であるものをいう。
点、葉、茎、種子などから採取される植物片を殺菌処理
後、ゲランガムで固めたリンスマイヤー・スクーグ培地
などの固体培地上に置床し、１０〜３５℃で１４〜６０
日程度経過させて組織片の一部から、カルスを生成させ
る。このようにして得られたカルスを継代培養すると生
育速度が漸次高まり安定化したカルスが得られる。ここ
で、安定化したカルスとは、培養中に目的外の器官分化
が起こらない状態を保持する性質をもちカルスの生育速
度が均質であるものをいう。
【００１７】この安定化したカルスを増殖に適した液体
培地、例えばリンスマイヤー・スクーグの液体培地に移
して増殖させる。液体培地において更に生育速度が高め
られる。
培地、例えばリンスマイヤー・スクーグの液体培地に移
して増殖させる。液体培地において更に生育速度が高め
られる。
【００１８】本発明の培養のための温度としては、通常
は約１０〜３５℃、特に２３〜２８℃が増殖速度が大き
いので好適である。また、培養期間としては、７〜４２
日間が好適である。
は約１０〜３５℃、特に２３〜２８℃が増殖速度が大き
いので好適である。また、培養期間としては、７〜４２
日間が好適である。
【００１９】また、光照射条件下で培養を行うことによ
り、コーヒー酸誘導体の生産を抑制することなく、同時
に生産されるシコニン系化合物の生産を抑制することが
可能であり、光照射条件下での培養はコーヒー酸誘導体
の分離精製を効率よく行うことに有利である。本発明の
培養のための光照射培養における照度としては、通常は
５００〜２００００ルクス、特に２０００〜１００００
ルクスが好適である。
り、コーヒー酸誘導体の生産を抑制することなく、同時
に生産されるシコニン系化合物の生産を抑制することが
可能であり、光照射条件下での培養はコーヒー酸誘導体
の分離精製を効率よく行うことに有利である。本発明の
培養のための光照射培養における照度としては、通常は
５００〜２００００ルクス、特に２０００〜１００００
ルクスが好適である。
【００２０】培養された細胞は、公知の方法で植物体に
再分化させ、優良系統選抜などの育種用途に使用するこ
とができる。また、培養細胞および／または培地から目
的とするコーヒー酸誘導体を有機溶媒による抽出等の方
法によって分離することができる。
再分化させ、優良系統選抜などの育種用途に使用するこ
とができる。また、培養細胞および／または培地から目
的とするコーヒー酸誘導体を有機溶媒による抽出等の方
法によって分離することができる。
【００２１】コーヒー酸誘導体の抽出に用いられる有機
溶媒としては、コーヒー酸誘導体が溶解する有機溶媒で
あれば特に制限はなく、メチルアルコール、エチルアル
コール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコ
ール、ｎ−ブチルアルコール、イソブチルアルコール、
酢酸エチル、クロロホルム、アセトン、ヘキサンなどを
挙げることができる。
溶媒としては、コーヒー酸誘導体が溶解する有機溶媒で
あれば特に制限はなく、メチルアルコール、エチルアル
コール、ｎ−プロピルアルコール、イソプロピルアルコ
ール、ｎ−ブチルアルコール、イソブチルアルコール、
酢酸エチル、クロロホルム、アセトン、ヘキサンなどを
挙げることができる。
【００２２】
【実施例】以下、実施例、比較例により本発明をさらに
具体的に説明するが、本発明の範囲はこれら実施例に限
定されるものではない。 〔実施例１〕リンスマイヤー・スクーグ（ＬＳ）の寒天
固体培地に、前もって２％アンチホルミン溶液または７
０％エタノール溶液等で滅菌処理したムラサキの子葉の
組織片を置床し、２５℃、暗所にて静置培養してムラサ
キのカルスを得た。継代を繰り返すことにより、数多く
のフラスコからｐ−Ｏ−β−Ｄ−グルコシル安息香酸
（ＰＨＢＯＧ）含量が高く維持されたＭ−１８ＴＯＭ株
を取得した。また、継代の過程で細胞がシコニンを全く
生産しないＣＯ株を取得した。次にＭ−１８ＴＯＭ株の
カルス１ｇ（新鮮重）をＬＳの液体培地（ただし植物ホ
ルモン類として１μＭインドール酢酸および１０μＭカ
イネチン、炭素源として３０ｇ／ｌシュークロースを含
む）２０ｍｌ入りの三角フラスコに移し、ロータリーシ
ェーカー上で旋回培養（振幅２５ｍｍ、１００ｒｐｍ）
し、１４日毎に継代し、カルスの生育速度を速めた。液
体培養による継代過程において試験的にＭ−９の液体培
地で培養したところ、シコニンを生産する培養細胞の入
ったフラスコと生産しない培養細胞が入ったフラスコが
あり、生産する培養細胞をＭ−１８ＴＯＭ株、生産しな
い培養細胞をＷＭ１８株とした。
具体的に説明するが、本発明の範囲はこれら実施例に限
定されるものではない。 〔実施例１〕リンスマイヤー・スクーグ（ＬＳ）の寒天
固体培地に、前もって２％アンチホルミン溶液または７
０％エタノール溶液等で滅菌処理したムラサキの子葉の
組織片を置床し、２５℃、暗所にて静置培養してムラサ
キのカルスを得た。継代を繰り返すことにより、数多く
のフラスコからｐ−Ｏ−β−Ｄ−グルコシル安息香酸
（ＰＨＢＯＧ）含量が高く維持されたＭ−１８ＴＯＭ株
を取得した。また、継代の過程で細胞がシコニンを全く
生産しないＣＯ株を取得した。次にＭ−１８ＴＯＭ株の
カルス１ｇ（新鮮重）をＬＳの液体培地（ただし植物ホ
ルモン類として１μＭインドール酢酸および１０μＭカ
イネチン、炭素源として３０ｇ／ｌシュークロースを含
む）２０ｍｌ入りの三角フラスコに移し、ロータリーシ
ェーカー上で旋回培養（振幅２５ｍｍ、１００ｒｐｍ）
し、１４日毎に継代し、カルスの生育速度を速めた。液
体培養による継代過程において試験的にＭ−９の液体培
地で培養したところ、シコニンを生産する培養細胞の入
ったフラスコと生産しない培養細胞が入ったフラスコが
あり、生産する培養細胞をＭ−１８ＴＯＭ株、生産しな
い培養細胞をＷＭ１８株とした。
【００２３】このようにして得られたＭ−１８ＴＯＭ株
培養細胞を、Ｍ−９の液体培地で２０ｍｌ入りの三角フ
ラスコに移し、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振
幅２５ｍｍ、１００ｒｐｍ）し、暗所下、２１日間培養
した。得られた培養物を濾紙を用いて細胞と培地に分離
した後、細胞１ｇ（新鮮重）に対して１０ｍｌのメタノ
ールを加え、ソニケーターを用いて０℃、９０分間超音
波処理することによりコーヒー酸誘導体の抽出を行っ
た。得られた抽出液に対し、定量のための内部標準とし
て１ｍｇ／ｍｌβ−ナフトール（ｎ−ブタノール溶液）
を加え、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ｎ−ブ
タノール相を以下に示す条件により高速液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した。また、培地２０ｍｌ
に対し、１ｍｇ／ｍｌβ−ナフトール（ｎ−ブタノール
溶液）を加え、更に２０ｍｌのｎ−ブタノールを加えて
１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ｎ−ブタノール
相を以下に示す条件によりＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬ
Ｃ分析結果のクロマトグラムを図２［図２］に、コーヒ
ー酸誘導体を含むフェニルプロパノイドの含量を表１
［表１］に示す。
培養細胞を、Ｍ−９の液体培地で２０ｍｌ入りの三角フ
ラスコに移し、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振
幅２５ｍｍ、１００ｒｐｍ）し、暗所下、２１日間培養
した。得られた培養物を濾紙を用いて細胞と培地に分離
した後、細胞１ｇ（新鮮重）に対して１０ｍｌのメタノ
ールを加え、ソニケーターを用いて０℃、９０分間超音
波処理することによりコーヒー酸誘導体の抽出を行っ
た。得られた抽出液に対し、定量のための内部標準とし
て１ｍｇ／ｍｌβ−ナフトール（ｎ−ブタノール溶液）
を加え、１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ｎ−ブ
タノール相を以下に示す条件により高速液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）で分析した。また、培地２０ｍｌ
に対し、１ｍｇ／ｍｌβ−ナフトール（ｎ−ブタノール
溶液）を加え、更に２０ｍｌのｎ−ブタノールを加えて
１５０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、ｎ−ブタノール
相を以下に示す条件によりＨＰＬＣで分析した。ＨＰＬ
Ｃ分析結果のクロマトグラムを図２［図２］に、コーヒ
ー酸誘導体を含むフェニルプロパノイドの含量を表１
［表１］に示す。
【００２４】（ＨＰＬＣ分析条件）
カラム：Hikalisil C18 （４．６×２５０ｍｍ）
移動相：１％のアルコールを含むＣＨ3ＣＮ／Ｈ2Ｏ（li
near gradient condition） 流 量：１ｍｌ／ｍｉｎ． オーブン温度：４０℃ 検出波長：２５４ｎｍ Gradient conditionは図１［図１］のとおり。
near gradient condition） 流 量：１ｍｌ／ｍｉｎ． オーブン温度：４０℃ 検出波長：２５４ｎｍ Gradient conditionは図１［図１］のとおり。
【００２５】〔比較例１〕実施例１に於いて、Ｍ−９の
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を図２［図２］およ
び表１［表１］に示す。
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を図２［図２］およ
び表１［表１］に示す。
【００２６】〔実施例２〕実施例１に於いて、Ｍ−１８
ＴＯＭ株 の代わりにＣＯ株を用いたこと以外は該実施
例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示す。
ＴＯＭ株 の代わりにＣＯ株を用いたこと以外は該実施
例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示す。
【００２７】〔比較例２〕実施例２に於いて、Ｍ−９の
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示
す。
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示
す。
【００２８】〔実施例３〕実施例１に於いて、Ｍ−１８
ＴＯＭ株 の代わりにＷＭ１８株を用いたこと以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示
す。
ＴＯＭ株 の代わりにＷＭ１８株を用いたこと以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示
す。
【００２９】〔比較例３〕実施例３に於いて、Ｍ−９の
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示
す。
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を表１［表１］に示
す。
【００３０】
【表１】
【００３１】〔実施例４〕インタクトのムラサキ植物の
上、中、下部の葉、茎部、根部、側根部から実施例１に
示した抽出方法によりコーヒー酸誘導体を含むフェニル
プロパノイドの抽出を行い、更に該実施例に示したＨＰ
ＬＣ条件により分析を行い、含量を求めた。その結果を
表２［表２］に示す。
上、中、下部の葉、茎部、根部、側根部から実施例１に
示した抽出方法によりコーヒー酸誘導体を含むフェニル
プロパノイドの抽出を行い、更に該実施例に示したＨＰ
ＬＣ条件により分析を行い、含量を求めた。その結果を
表２［表２］に示す。
【００３２】
【表２】
【００３３】〔実施例５〕実施例１に於いて、培養期間
を０，２，４，７，１４，２１日と継時的に変化させた
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を図３［図
３］に示す。
を０，２，４，７，１４，２１日と継時的に変化させた
以外は該実施例と同様に操作した。その結果を図３［図
３］に示す。
【００３４】〔比較例４〕実施例５に於いて、Ｍ−９の
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を図４［図４］に示
す。
液体培地の代わりにＬＳの液体培地で培養した以外は該
実施例と同様に操作した。その結果を図４［図４］に示
す。
【００３５】〔実施例６〕ムラサキ培養細胞をＬＳの液
体培地またはＭ−９の液体培地２０ｍｌ入りの三角フラ
スコに移し、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅
２５ｍｍ、１００ｒｐｍ）し、暗所下または光照射条件
下で２１日間培養した。得られた培養物から実施例１に
示した抽出方法によりコーヒー酸誘導体を含むフェニル
プロパノイドの抽出を行い、更に該実施例に示したＨＰ
ＬＣ条件により分析を行い、含量を求めた。その結果を
図５［図５］に示す。
体培地またはＭ−９の液体培地２０ｍｌ入りの三角フラ
スコに移し、ロータリーシェーカー上で旋回培養（振幅
２５ｍｍ、１００ｒｐｍ）し、暗所下または光照射条件
下で２１日間培養した。得られた培養物から実施例１に
示した抽出方法によりコーヒー酸誘導体を含むフェニル
プロパノイドの抽出を行い、更に該実施例に示したＨＰ
ＬＣ条件により分析を行い、含量を求めた。その結果を
図５［図５］に示す。
【００３６】〔実施例７〕実施例６に於いて、培養フラ
スコ内に３ｍｌ流動パラフィンを添加して培養した以外
は該実施例と同様に操作した。その結果を図５［図５］
に示す。
スコ内に３ｍｌ流動パラフィンを添加して培養した以外
は該実施例と同様に操作した。その結果を図５［図５］
に示す。
【００３７】
【発明の効果】本発明によれば、ムラサキ科（Boragina
ceae）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する能力を有す
る植物の細胞または組織を培養条件をコントロールして
培養することにより、これまで報告されている植物種や
培養細胞においては微量化合物としてしか含まれていな
かったコーヒー酸誘導体の生産が飛躍的に促進されるこ
とから、興味深い薬理活性を有するコーヒー酸誘導体を
効率よく生産することができる。
ceae）に属し、コーヒー酸誘導体を生産する能力を有す
る植物の細胞または組織を培養条件をコントロールして
培養することにより、これまで報告されている植物種や
培養細胞においては微量化合物としてしか含まれていな
かったコーヒー酸誘導体の生産が飛躍的に促進されるこ
とから、興味深い薬理活性を有するコーヒー酸誘導体を
効率よく生産することができる。
【図１】ＨＰＬＣにおけるグラジエントコンディション
を示すグラフである。
を示すグラフである。
【図２】Ｍ−９培地で培養した細胞の抽出液をＨＰＬＣ
分析したクロマトグラム（上部、実施例１）、またはＬ
Ｓ培地で培養した細胞の抽出液をＨＰＬＣ分析したクロ
マトグラム（下部、比較例１）を比較した図である。
分析したクロマトグラム（上部、実施例１）、またはＬ
Ｓ培地で培養した細胞の抽出液をＨＰＬＣ分析したクロ
マトグラム（下部、比較例１）を比較した図である。
【図３】Ｍ−９培地で培養した培養細胞の生育（白丸
印）およびＰＨＢＯＧ含量（白三角印）およびコーヒー
酸誘導体含量（エピラブドシン：黒丸印、リソスペルミ
ン酸Ｂ−２：白四角印、ロズマリン酸：黒三角印、リソ
スペルミン酸Ｂ：黒四角印）の経時変化を示すグラフで
ある。
印）およびＰＨＢＯＧ含量（白三角印）およびコーヒー
酸誘導体含量（エピラブドシン：黒丸印、リソスペルミ
ン酸Ｂ−２：白四角印、ロズマリン酸：黒三角印、リソ
スペルミン酸Ｂ：黒四角印）の経時変化を示すグラフで
ある。
【図４】ＬＳ培地で培養した培養細胞の生育（白丸印）
およびＰＨＢＯＧ含量（白三角印）およびコーヒー酸誘
導体含量（エピラブドシン：黒丸印、リソスペルミン酸
Ｂ−２：白四角印、ロズマリン酸：黒三角印、リソスペ
ルミン酸Ｂ：黒四角印）の経時変化を示すグラフであ
る。
およびＰＨＢＯＧ含量（白三角印）およびコーヒー酸誘
導体含量（エピラブドシン：黒丸印、リソスペルミン酸
Ｂ−２：白四角印、ロズマリン酸：黒三角印、リソスペ
ルミン酸Ｂ：黒四角印）の経時変化を示すグラフであ
る。
【図５】コーヒー酸誘導体生産に対する光の影響を示す
グラフである。
グラフである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
Ｆターム(参考） 4B064 AE45 CA11 CD12 CE08 CE10
DA01
4C037 QA15
Claims (5)
- 【請求項１】 ムラサキ科（Boraginaceae）に属し、コ
ーヒー酸誘導体を生産する能力を有する植物の細胞また
は組織を培養して得られる培養物から、該コーヒー酸誘
導体を分離することを特徴とするコーヒー酸誘導体の製
造方法。 - 【請求項２】 ムラサキ科植物がLithospermum erythror
hizonである請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 コーヒー酸誘導体が、下記の一般式１
［化１］ 【化１】 ［式中Ｒは水素原子、又は炭素数１−６のアルキル基を
表す。］で示される化合物ある請求項１または２に記載
の方法。 - 【請求項４】 コーヒー酸誘導体が、エピラブドシンで
ある請求項１または２に記載の方法。 - 【請求項５】 光照射条件下で培養を行うことを特徴と
する請求項１〜４の何れか１項に記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24067798A JP2000060588A (ja) | 1998-08-26 | 1998-08-26 | コーヒー酸誘導体の生産方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24067798A JP2000060588A (ja) | 1998-08-26 | 1998-08-26 | コーヒー酸誘導体の生産方法 |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2007280482A Division JP2008092954A (ja) | 2007-10-29 | 2007-10-29 | コーヒー酸誘導体の生産方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000060588A true JP2000060588A (ja) | 2000-02-29 |
Family
ID=17063073
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24067798A Pending JP2000060588A (ja) | 1998-08-26 | 1998-08-26 | コーヒー酸誘導体の生産方法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP2000060588A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002212175A (ja) * | 2001-01-16 | 2002-07-31 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 新規化合物 |
| JP2002308767A (ja) * | 2001-04-04 | 2002-10-23 | Mitsui Chemicals Inc | 過酸化脂質生成抑制剤 |
| JP2003267857A (ja) * | 2002-01-11 | 2003-09-25 | Mitsui Chemicals Inc | 皮膚外用剤及び皮膚外用剤組成物 |
| JP2008031088A (ja) * | 2006-07-28 | 2008-02-14 | Hokkaido Mitsui Chemicals Inc | マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤 |
| JP2010227033A (ja) * | 2009-03-27 | 2010-10-14 | Japan Health Science Foundation | 植物形質転換体の作出方法、及び、植物形質転換体 |
| CN102973631A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-03-20 | 廖矛川 | 一种抗早孕辅助药紫草酚酸的制备方法 |
| CN103087020A (zh) * | 2011-10-31 | 2013-05-08 | 复旦大学 | 紫草酚类化合物及其在制备抗补体药物中的用途 |
-
1998
- 1998-08-26 JP JP24067798A patent/JP2000060588A/ja active Pending
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN103087020A (zh) * | 2011-10-31 | 2013-05-08 | 复旦大学 | 紫草酚类化合物及其在制备抗补体药物中的用途 |
| CN103087020B (zh) * | 2011-10-31 | 2014-07-09 | 复旦大学 | 紫草酚类化合物及其在制备抗补体药物中的用途 |
| CN102973631A (zh) * | 2012-11-16 | 2013-03-20 | 廖矛川 | 一种抗早孕辅助药紫草酚酸的制备方法 |
| CN102973631B (zh) * | 2012-11-16 | 2015-04-01 | 武汉康鸿达科技有限公司 | 一种抗早孕辅助药紫草酚酸的制备方法 |
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