IT202100029279A1 - Ghost di Leishmania - Google Patents
Ghost di Leishmania Download PDFInfo
- Publication number
- IT202100029279A1 IT202100029279A1 IT102021000029279A IT202100029279A IT202100029279A1 IT 202100029279 A1 IT202100029279 A1 IT 202100029279A1 IT 102021000029279 A IT102021000029279 A IT 102021000029279A IT 202100029279 A IT202100029279 A IT 202100029279A IT 202100029279 A1 IT202100029279 A1 IT 202100029279A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- ghost
- protein
- cellular
- cov
- virus
- Prior art date
Links
- 241000222722 Leishmania <genus> Species 0.000 title claims description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 49
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 46
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 30
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 29
- 241000222702 Leishmania tarentolae Species 0.000 claims description 22
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 21
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 21
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 21
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 21
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims description 20
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 20
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 15
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 15
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 claims description 14
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 13
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 11
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 claims description 9
- 241000127282 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 claims description 7
- 206010047505 Visceral leishmaniasis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 claims description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 5
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 4
- 101710114810 Glycoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 241000222727 Leishmania donovani Species 0.000 claims description 3
- 241000222697 Leishmania infantum Species 0.000 claims description 3
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 claims description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims description 3
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 241000215452 Lotus corniculatus Species 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 14
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 14
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 10
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 9
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 8
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 8
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 7
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 208000025370 Middle East respiratory syndrome Diseases 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 3
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 3
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000005528 Arctium lappa Species 0.000 description 2
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 2
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 108010061994 Coronavirus Spike Glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- 241000222712 Kinetoplastida Species 0.000 description 2
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000000771 oncological effect Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 238000000399 optical microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 2
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004627 transmission electron microscopy Methods 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 102000004961 Furin Human genes 0.000 description 1
- 108090001126 Furin Proteins 0.000 description 1
- 102100034013 Gamma-glutamyl phosphate reductase Human genes 0.000 description 1
- 238000002738 Giemsa staining Methods 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001133924 Homo sapiens Gamma-glutamyl phosphate reductase Proteins 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 241000222734 Leishmania mexicana Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 206010061309 Neoplasm progression Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 229940122055 Serine protease inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 101710102218 Serine protease inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 101000629318 Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000007621 bhi medium Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000001280 germinal center Anatomy 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 1
- 239000000815 hypotonic solution Substances 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 1
- 230000006054 immunological memory Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000002809 long lived plasma cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000001806 memory b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002969 morbid Effects 0.000 description 1
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 210000003463 organelle Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 108020004418 ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- -1 sachets Substances 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 210000005212 secondary lymphoid organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 230000005751 tumor progression Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/10—Protozoa; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Description
DESCRIZIONE
Annessa a domanda di brevetto per INVENZIONE INDUSTRIALE avente per titolo
?Ghost di Leishmania?
La presente invenzione ha per oggetto un ghost comprendente una membrana plasmatica o una parte di essa di una cellula appartenente al genere Leishmania deprivata del contenuto citoplasmatico, del flagello e del nucleo.
STATO DELL?ARTE
La delivery di antigeni e di altre molecole ad azione farmacologica alle cellule della linea monocitaria macrofagica, ed in particolare alle cellule dendritiche, ? di estremo interesse in molti ambiti della farmacologia. Per esempio, un targeting mirato dell?antigene alle cellule dendritiche, i.e. alle cellule che presentano l?antigene ai linfociti Th CD4+ nelle fasi iniziali della risposta immunitaria, ? di grande importanza perch? sia assicurata l?efficacia dell?antigene stesso nell?induzione di una risposta protettiva. Le cellule della linea mieloide monocitaria-macrofagica, dalle cellule dendritiche sino ai macrofagi, svolgono un ruolo centrale non solo nella risposta immune nei confronti degli agenti infettivi, ma anche in molte patologie a base infiammatoria, cos? come nelle patologie oncologiche, laddove ad esempio la polarizzazione macrofagica pu? ostacolare (risposta di tipo M1) o favorire (risposta M2) la progressione tumorale. La delivery alle APCs non solo di antigeni, ma anche e soprattutto di molecole ad azione immunomodulante ? quindi di estremo interesse per lo sviluppo di nuovi approcci terapeutici per la cura di patologie oncologiche e immuno-mediate.
Sono descritti diversi sistemi per la delivery di antigeni e di altre molecole alle APC. Tuttavia, i sistemi noti consistono nella realizzazione di micro- o nano-particelle che incorporano le proteine per l?APC targeting attraverso processi di assemblaggio molecolare complessi, a partire da molecola di diversa origine. Per quanto efficaci, questi sistemi risultano costosi, difficilmente scalabili a processi di produzione industriale che assicurino la produzione di milioni di dosi di micro/nano particelle APC-targeted, come richiesto ad esempio nel corso di una campagna vaccinale.
L?alternativa alla generazione di nanoparticelle attraverso l?assemblaggio di molecole prodotte in modo indipendente ? l?utilizzo di piattaforme derivate da virus, che possono incorporare in modo diretto sia antigeni che molecole per l?APC-targeting. La dimensione delle particelle virali non ? tuttavia sempre ottimale per l?APC targeting. Inoltre, le piattaforme virali presentano una flessibilit? limitata per il caricamento con molecole di diversa origine e con caratteristiche diverse.
SOMMARIO DELL?INVENZIONE
Un primo aspetto della presente invenzione riguarda un ghost comprendente una membrana plasmatica o una parte di essa di una cellula appartenente al genere Leishmania deprivata del contenuto citoplasmatico, del flagello e del nucleo.
Un secondo aspetto della presente invenzione riguarda una composizione vaccinale comprendente il ghost come sopra descritto. Preferibilmente, la composizione oggetto della presente invenzione pu? ulteriormente comprendere almeno un eccipiente farmacologicamente accettabile, ovvero un composto accettabile per uso farmaceutico, che sia utile nella preparazione della composizione o che sia utile come adiuvante e che sia generalmente biologicamente sicuro e non tossico.
Un terzo aspetto della presente invenzione riguarda il ghost o la composizione vaccinale sopra descritti per l?uso come medicamento.
Un quarto aspetto della presente invenzione riguarda il ghost o la composizione vaccinale sopra descritti per l?uso nella prevenzione di un?infezione virale o di una patologia causata da un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae. In una forma di realizzazione il virus ? scelto tra: SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2. Preferibilmente, il virus ? il SARS-CoV-2.
Un quinto aspetto della presente invenzione riguarda un processo per la generazione di un ghost di una cellula appartenente al genere Leishmania comprendente almeno una proteina o parte di essa di un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae, comprendente le fasi di: a) introdurre in una cellula appartenente al genere Leishmania un vettore, comprendente un polinucleotide codificante per almeno una proteina di un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae o per almeno una porzione di detta proteina;
(b) selezionare almeno una cellula ospite prodotta nella fase (a) che esprima detta proteina o porzione di detta proteina;
(c) lisare detta almeno una cellula ottenuta nella fase (b) e
(d) separare il ghost dai flagelli e dai residui nucleo-citoplasmatici.
Un sesto aspetto della presente invenzione riguarda un metodo per prevenire un?infezione virale o una patologia causata da un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae. In una forma di realizzazione il virus ? scelto tra: SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2. Preferibilmente, il virus ? il SARS-CoV-2.
Il metodo prevede almeno una fase di somministrazione della composizione vaccinale sopra descritta ad un individuo.
BREVE DESCRIZIONE DELLE FIGURE
La Figura 1 a-b mostra un?osservazione al microscopio ottico (ingrandimento 100x) di Leghosomi ottenuti da promastigoti di Leishmania tarentolae mediante esposizione a shock ipotonico e lisi con CaCl2;
La Figura 2 mostra un?osservazione in microscopia elettronica (TEM) dei Leghosomi di Leishmania tarentolae;
La Figura 3 a-b mostra una colorazione Giemsa di macrofagi murini in seguito a incubazione per 24h con i Leghosomi ottenuti dal protozoo Leishmania tarentolae esprimente Spike (100X);
La Figura 4 mostra osservazioni tramite microscopio confocale di ghost cellulari ottenuti da promastigoti di Leishmania tarentolae dopo colorazione con anticorpo monoclonale GTX135709 anti-Spike (verde). Le membrane cellulari sono colorate con concanavalina-A (rosso) ed il materiale nucleare con DAPI (blu); e
La Figura 5 mostra la verifica della produzione della proteina Spike da pellet di ghost di Leishmania tramite analisi Western blot con anticorpo SARS Coronavirus Spike Protein Polyclonal Antibody. M: marcatore di peso molecolare (kDa). 1-9 cloni di Leishmania tarentolae analizzati per l?espressione della proteina di interesse a livello della membrana cellulare.
DEFINIZIONI
Nel contesto della presente invenzione con il termine coronavirus (abbreviato in ?CoV?) si intende un?ampia famiglia di virus respiratori che possono causare malattie da lievi a moderate, che vanno dal comune raffreddore a sindromi respiratorie come la MERS (sindrome respiratoria mediorientale, Middle East respiratory syndrome) e la SARS (sindrome respiratoria acuta grave, Severe acute respiratory syndrome).
Nel contesto della presente invenzione, con il termine ?infezione? si intende un processo caratterizzato dalla penetrazione e moltiplicazione, nei tessuti viventi, di microrganismi patogeni unicellulari (agenti infettivi: batteri, miceti, protozoi) o da virus. Il concetto di infezione non si identifica con quello di malattia infettiva o di patologia poich? esistono casi di infezione senza alcun fenomeno morboso, ovvero individui asintomatici portatori del patogeno.
DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL?INVENZIONE
Un primo aspetto della presente invenzione riguarda un ghost comprendente una membrana plasmatica o una parte di essa di una cellula appartenente al genere Leishmania deprivata del contenuto citoplasmatico, del flagello e del nucleo. Detto ghost ha preferibilmente una morfologia ed una costituzione biochimica integra, ovvero non modificata rispetto alla membrana plasmatica di una cellula appartenente al genere Leishmania.
In una forma di realizzazione, il ghost ? ottenuto grazie ad un processo che comprende almeno le fasi di:
(a) lisare almeno una cellula appartenente al genere Leishmania; e
(b) separare la membrana plasmatica dai residui nucleo-citoplasmatici e dal flagello.
In una forma di attuazione, il ghost ? ottenuto grazie ad un processo che comprende almeno le seguenti fasi di:
a) introdurre in una cellula appartenente al genere Leishmania un vettore comprendente un polinucleotide codificante per almeno una proteina, preferibilmente detta almeno una proteina ? un antigene di un virus o di un altro agente infettivo o un recettore di homing leucocitario, o altra proteina in grado di legare specifici recettori, o una porzione di dette proteine;
(b) selezionare almeno una cellula prodotta nella fase (a) che esprima detta proteina o porzione di detta proteina;
(c) lisare l?almeno una cellula ottenuta nella fase (b); e
(d) separare la membrana plasmatica dai residui nucleo-citoplasmatici e dal flagello.
In una forma di realizzazione, la lisi dell?almeno una cellula ? ottenuta grazie ad uno shock ipotonico o con un altro metodo noto al tecnico del settore. Preferibilmente, la fase di separazione della membrana plasmatica dai residui nucleo-citoplasmatici e dal flagello viene effettuata tramite centrifugazione in gradiente di densit? o con un altro metodo noto al tecnico del settore.
In una forma di realizzazione, il ghost comprende una parte o un frammento di una membrana plasmatica di una cellula appartenente al genere Leishmania. Preferibilmente, la membrana plasmatica, dopo essere stata deprivata del contenuto nucleo-citoplasmatico e del flagello, viene frammentata al fine di ottenere un ghost dalle dimensioni ridotte, detto micro-ghost o nano-ghost.
In una forma di realizzazione, il processo con il quale ? ottenuto il ghost comprende inoltre una fase di caricamento del ghost con almeno una molecola o con almeno una sostanza attiva. Preferibilmente, detta almeno una molecola attiva ? scelta tra: un antigene, un modulatore della risposta immunitaria, un antitumorale, un antinfiammatorio, un antibiotico, un antivirale e un anticorpo.
In una forma di realizzazione, il polinucleotide codificante per detta almeno una proteina ? scelto tra DNA e RNA, preferibilmente ? DNA.
In una forma di realizzazione, il polinucleotide comprende una sequenza nucleotidica sostanzialmente identica a SEQ ID NO.1 (Tabella 1). Per esempio, il polinucleotide comprende una sequenza nucleotidica identica per almeno il 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o pi? alla SEQ ID NO.1. Preferibilmente, il polinucleotide comprende una sequenza nucleotidica identica per almeno l?80%, pi? preferibilmente per almeno il 90% alla SEQ ID NO.1.
In una forma di realizzazione, il polinucleotide consiste in una sequenza nucleotidica sostanzialmente identica a SEQ ID NO.1. Per esempio, il polinucleotide consiste in una sequenza nucleotidica identica per almeno il 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o pi? alla SEQ ID NO.1.
Preferibilmente, il polinucleotide consiste in una sequenza nucleotidica omologa o identica per almeno l?80%, pi? preferibilmente per almeno il 90% alla SEQ ID NO.1.
In una forma di realizzazione dell?invenzione, la cellula appartenente al genere Leishmania appartiene ad una specie di Leishmania scelta tra: L. tarentolae e L. infantum. L. donovani, e L. major. Preferibilmente, la cellula appartiene alla specie L. tarentolae.
In una forma di realizzazione, il ghost comprende almeno una molecola attiva, preferibilmente, detta molecola attiva ? incapsulata nel ghost od ? legata, in modo covalente o non covalente alla membrana di superficie del ghost. In altre parole, la molecola attiva ? caricata nel ghost e si trova racchiusa nella membrana plasmatica od ? legata ad essa.
In una forma di attuazione, l?almeno una proteina ? una glicoproteina Spike, o almeno una porzione di essa, di un virus membro della famiglia Coronaviridae scelto tra: SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2. In una forma di realizzazione preferita dell?invenzione, l?ameno una proteina ? una proteina, preferibilmente una glicoproteina spike, del virus SARS-CoV-2 o almeno una porzione di essa.
In una forma di attuazione, l?almeno una proteina comprende una sequenza amminoacidica sostanzialmente identica a SEQ ID NO.2. Per esempio, l?almeno una proteina comprende una sequenza amminoacidica identica per almeno il 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o pi? alla SEQ ID NO.
2.
In una forma di realizzazione preferita, l?almeno una proteina comprende una sequenza amminoacidica identica per almeno l?80%, pi? preferibilmente per almeno il 90% alla SEQ ID NO.2.
In una forma di realizzazione, l?almeno una proteina consiste in una sequenza amminoacidica sostanzialmente identica a SEQ ID NO. 2. Per esempio, l?almeno una proteina consiste in una sequenza amminoacidica identica per almeno il 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o pi? alla SEQ ID NO.
2.
In una forma di realizzazione preferita, l?almeno una proteina consiste in una sequenza amminoacidica identica per almeno l?80%, pi? preferibilmente per almeno il 90% alla SEQ ID NO.2.
In una forma di realizzazione dell?invenzione, l?almeno una proteina comprende modifiche alla regione N-terminale e/o C-terminale. Dette modifiche sono scelte preferibilmente tra delezioni, addizioni, alterazioni di amminoacidi e loro combinazioni. Alternativamente detta almeno una proteina pu? essere modificata, preferibilmente nella struttura primaria, mediante acetilazione, carbossilazione, fosforilazione e loro combinazioni.
Un secondo aspetto della presente invenzione riguarda una composizione vaccinale comprendente il ghost come sopra dettagliatamente descritto. Preferibilmente, la composizione oggetto della presente invenzione pu? ulteriormente comprendere almeno un eccipiente farmacologicamente accettabile, ovvero un composto, accettabile per uso farmaceutico, che sia utile nella preparazione della composizione o che sia utile come adiuvante e che sia generalmente biologicamente sicuro e non tossico. In una forma di realizzazione, la composizione ? formulata per la somministrazione parenterale, preferibilmente come soluzione, sospensione, emulsione sterili, o polvere da risospendere prima dell?uso. In una forma di realizzazione, la composizione ? formulata per la somministrazione enterale, preferibilmente come compresse, capsule, tavolette, polvere granulare, opercoli, granuli orosolubili, bustine, o confetti.
In una forma di realizzazione, la composizione ? formulata per la somministrazione per via inalatoria.
Un terzo aspetto della presente invenzione riguarda il ghost o la composizione vaccinale sopra dettagliatamente descritti per l?uso come medicamento.
La Richiedente, infatti, ha sviluppato un protocollo per la produzione dei ghost da Leishmania tarentolae, che assicura un ottimo livello di purificazione dei medesimi rispetto alle altre componenti cellulari, grazie a metodologie di frazionamento cellulare e centrifugazione. Inoltre, partendo da un ceppo di Leishmania tarentolae esprimente in membrana plasmatica l?antigene Spike di SARS-CoC-2, la Richiedente ha prodotto dei ghost che mantengono il medesimo Spike in superficie.
La Richiedente ha dimostrato che il ghost o la composizione vaccinale della presente invenzione ? in grado di convogliare un antigene all?interno di cellule immunitarie deputate alla presentazione dell?antigene (APC professionali), ed in particolare nelle cellule dendritiche, e quindi verosimilmente il suo trasporto agli organi linfoidi secondari (e.g. linfonodi). Inoltre, ci si aspetta che la composizione vaccinale della presente invenzione permetta di indirizzare la risposta linfonodale in senso favorente la formazione dei centri germinativi, lo switch isotipico anticorpale, la differenziazione di cellule B memoria e di plasmacellule a lunga vita, finalizzata ad inibire una modulazione della memoria immunologica in senso pro-infiammatorio (Th1 ed M1).
Infatti, come dimostrato nell?esempio, il ghost contenuto nella composizione vaccinale ivi descritta, ? in grado di essere fagocitato da cellule dendritiche e cellule della linea macrofagica, attivando il sistema immunitario. In altre parole, il ghost viene internalizzato sia dai macrofagi che dalle cellule dendritiche. Infatti, come mostrato nell?esempio, il ghost della presente invenzione mantiene tutte le caratteristiche biochimiche e molecolari della membrana plasmatica di Leishmania. Inoltre, anche l?espressione di un antigene virale sulla superficie della membrana plasmatica viene mantenuta dal ghost. In altre parole, l?almeno una proteina virale, o altra tipologia di proteina antigenica, espressa sulla membrana plasmatica del ghost viene riconosciuta dagli anticorpi specifici presenti nel siero di pazienti positivi a SARS-CoV-2.
Pertanto, un quarto aspetto della presente invenzione riguarda il ghost o la composizione vaccinale sopra dettagliatamente descritti per l?uso nella prevenzione di un?infezione virale o di una patologia causata da un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae. In una forma di realizzazione il virus ? scelto tra: SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2. Preferibilmente, il virus ? il SARS-CoV-2.
In una forma di realizzazione, la patologia causata da un virus della famiglia Coronaviridae ? una malattia infettiva, una patologia respiratoria acuta, oppure una patologia di tipo sistemico, o una infezione asintomatica o paucisintomatica causata preferibilmente dal virus SARS-CoV-2, nota come COVID-19.
In una forma di realizzazione, per gli usi medici o veterinari sopra descritti, la composizione vaccinale ? somministrata in una singola dose.
In una forma di realizzazione alternativa, per gli usi medici o veterinari sopra descritti, la composizione vaccinale ? somministrata in due dosi separate, preferibilmente, la seconda dose ? somministrata almeno 20 giorni dopo la prima dose, pi? preferibilmente almeno 25 giorni dopo.
In una forma di realizzazione alternativa, per gli usi medici o veterinari sopra descritti, la composizione vaccinale ? somministrata in pi? di due dosi separate.
Un quinto aspetto della presente invenzione riguarda un processo per la generazione di un ghost di una cellula appartenente al genere Leishmania comprendente almeno una proteina o parte di essa di un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae, comprendente le fasi di: a) introdurre in una cellula appartenente al genere Leishmania un vettore, comprendente un polinucleotide codificante per almeno una proteina di un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae o per almeno una porzione di detta proteina;
(b) selezionare almeno una cellula ospite prodotta nella fase (a) che esprima detta proteina o porzione di detta proteina;
(c) lisare detta almeno una cellula ottenuta nella fase (b) e
(d) separare il ghost dai flagelli e dai residui nucleo-citoplasmatici.
In una forma di realizzazione, il processo comprende inoltre una fase di caricamento del ghost con almeno una molecola o con almeno una sostanza attiva. Preferibilmente, detta almeno una molecola attiva ? scelta tra: un antigene, un antitumorale, un antinfiammatorio, un modulatore della risposta immunitaria, un antibiotico, un antivirale e un anticorpo.
In una forma di realizzazione, il polinucleotide codificante per detta almeno una proteina ? scelto tra DNA e RNA, preferibilmente ? DNA.
In una forma di realizzazione, il polinucleotide comprende una sequenza nucleotidica sostanzialmente identica a SEQ ID NO.1 (Tabella 1). Per esempio, il polinucleotide comprende una sequenza nucleotidica identica per almeno il 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o pi? alla SEQ ID NO.1.
Preferibilmente, il polinucleotide comprende una sequenza nucleotidica identica per almeno l?80%, pi? preferibilmente per almeno il 90% alla SEQ ID NO.1.
In una forma di realizzazione, il polinucleotide consiste in una sequenza nucleotidica sostanzialmente identica a SEQ ID NO.1. Per esempio, il polinucleotide consiste in una sequenza nucleotidica identica per almeno il 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% o pi? alla SEQ ID NO.1.
Preferibilmente, il polinucleotide consiste in una sequenza nucleotidica omologa o identica per almeno l?80%, pi? preferibilmente per almeno il 90% alla SEQ ID NO.1.
In una forma di realizzazione dell?invenzione, la cellula appartenente al genere Leishmania appartiene ad una specie di Leishmania scelta tra: L. tarentolae e L. infantum. L. donovani, e L. major. Preferibilmente, la cellula appartiene alla specie L. tarentolae.
Un sesto aspetto della presente invenzione riguarda un metodo per prevenire un?infezione virale o una patologia causata da un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae. In una forma di realizzazione il virus ? scelto tra: SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2. Preferibilmente, il virus ? il SARS-CoV-2.
In una forma di realizzazione, la patologia causata da un virus della famiglia Coronaviridae ? una malattia infettiva, una patologia respiratoria acuta, oppure una patologia di tipo sistemico, o una infezione asintomatica o paucisintomatica causata preferibilmente dal virus SARS-CoV-2, nota come COVID-19.
Il metodo prevede almeno una fase di somministrazione della composizione vaccinale sopra dettagliatamente descritta ad un individuo. In una forma di realizzazione, la composizione vaccinale ? somministrata in una singola dose.
In una forma di realizzazione alternativa, la composizione vaccinale ? somministrata in due dosi separate, preferibilmente, la seconda dose ? somministrata almeno 20 giorni dopo la prima dose, pi? preferibilmente almeno 25 giorni dopo.
In una forma di realizzazione alternativa, la composizione vaccinale ? somministrata in pi? di due dosi separate.
ESEMPIO
1. Ingegnerizzazione del protozoo Leishmania tarentolae per l?espressione del dominio della proteina Spike di SARS-CoV-2.
? stato generato un ceppo di Leishmania tarentolae per l?espressione della proteina Spike di SARS-CoV-2. La sequenza della proteina Spike ? stata derivata dal genoma del ?Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 isolate Wuhan-Hu-1?, ID number MN908947.
Sono stati selezionati 3720 nucleotidi per un totale di 1240 aminoacidi. La sequenza genica dello Spike ? stata sintetizzata inserendo al C-terminale la coda GTHHHHHH. ? stata inoltre apportata una sostituzione con gli amminoacidi ?GSAS? al furin cleavage site. La sequenza nucleotidica utilizzata ? la SEQ ID N.1 della Tabella 1.
? stato utilizzato il vettore di espressione pLEXSY-sat2.1 (Jena Bioscience), progettato per l?integrazione della cassetta di espressione nel locus SSU del gene codificante per l?RNA ribosomale. La secrezione della proteina ? stata ottenuta dalla fusione della regione codificante la proteina target con la regione codificante il peptide segnale di Leishmania mexicana. Nel vettore di espressione ? presente, inoltre, il gene per la resistenza all?antibiotico Nurseotricina. I ceppi di L. tarentolae cos? ingegnerizzati sono stati coltivati a 26?C in aerobiosi in terreno liquido BHI addizionato di Emina, Penicillina-Streptomicina e Nurseotricina per la selezione dei ceppi.
2. Lisi cellulare controllata del protozoo Leishmania tarentolae ingegnerizzato per l?espressione della proteina Spike, finalizzata alla rimozione del contenuto nucleo-citoplasmatico e alla produzione di ?ghost? cellulari (Leghosomi)
Promastigoti di Leishmania tarentolae ingegnerizzati per l?espressione della proteina Spike del virus SARS-CoV-2 sono stati sottoposti ad una procedura di lisi cellulare che sfrutta uno shock ipotonico effettuato in condizioni controllate, a freddo e in agitazione.
La lisi osmotica delle cellule ? stata ottenuta mediante aggiunta di una soluzione ipotonica di Tris-HCl (5mM, pH 7.5), in presenza dell?inibitore delle serin proteasi fenil-metil-sulfonil-fluoride (PMSF,concentrazione finale 0.5 mM). La sospensione ? stata incubata in agitazione per 90 minuti a 4?C.
La lisi cellulare ? stata completata aggiungendo CaCl2 (concentrazione finale: 2mM).
Prodotti finali di questo processo sono ?ghost? cellulari (Leghosomi) costituiti da membrane cellulari che mantengono intatte le proteine di membrana (e, quindi, le propriet? antigeniche), solitamente prive di flagello e di contenuto citoplasmatico.
La preparazione cos? ottenuta ? stata sottoposta a gradiente di saccarosio (concentrazioni utilizzate: 20% per la preparazione del ?cuscino?; 5% per la risospensione del preparato cellulare), al fine di separare i ?ghost? dai flagelli e dai residui di materiale nucleo-citoplasmatico.
3. Verifica della produzione di ghost tramite osservazioni in microscopia ottica ed elettronica
La produzione di Leghosomi purificati ? stata confermata tramite osservazioni in microscopia ottica e in microscopia a trasmissione elettronica (TEM). Come mostrato nella Figura 1a-b: i Leghosomi sono delimitati dalla membrana citoplasmatica visibile in colore viola dopo colorazione con colorante di Giemsa. All?interno non ? presente n? il nucleo n? il citoplasma. Spesso ? possibile notare la presenza del kinetoplasto (piccolo organello colorato in viola scuro) che risulta saldamente legato al citoscheletro e alla membrana della cellula. La produzione di Leghosomi per le analisi l?osservazione in microscopia elettronica ? stata effettuata seguendo il metodo descritto in precedenza; i campioni dopo lavaggio, sono stati fissati attraverso con una soluzione al 3,6% paraformaldeide e 2% gluteraldeide cos? da poter essere poi inclusi ed analizzati in microscopia elettronica.
4. Internalizzazione di Leghosomi di Leishmania tarentolae producente Spike da parte di cellule presentanti l?antigene.
Uno dei prerequisiti per lo sviluppo di veicoli per la delivery mirata di antigeni e di molecole ad azione farmacologica alle cellule del sistema immunitario di linea mieloide ? la capacit? di essere attivamente fagocitati dalle cellule del sistema monocitario macrofagico e dalle cellule dendritiche. ? stata quindi testata la capacit? dei Leghosomi di essere fagocitati in esperimenti in vitro. Le cellule sono state incubate con Leghosomi per 24h. Al termine del periodo di incubazione le cellule sono state citocentrifugate e colorate con Giemsa al fine di osservare in microscopia ottica l?effettiva internalizzazione dei Leghosomi all?interno delle cellule presentanti l?antigene (Figura 3a-b). Come mostrato nei pannelli della Figura 3, dopo 24h, i Leghosomi vengono internalizzati dalle cellule del sistema macrofagico.
5. Valutazione dell?espressione e della localizzazione della proteina Spike mediante saggi di immunofluorescenza e osservazione in microscopia confocale.
Al fine di valutare l?effettiva espressione dell?epitopo antigenico di interesse (la proteina Spike del virus SARS-CoV-2) da parte di Leishmania tarentolae e la sua localizzazione a livello della membrana citoplasmatica, ? stata sfruttata una colorazione in immunofluorescenza. Questa ha permesso di evidenziare la co-localizzazione della proteina Spike (visibile in colore verde nella Figura 4) con le membrane citoplasmatiche dei ghost (visibili in colore rosso in Figura 4 attraverso l?uso di concanavalina-A). In Figura 4 ? inoltre possibile notare la mancanza di nuclei e la presenza di kinetoplasto come unica ?riserva? di acidi nucleici (colorati in blu attraverso l?uso di DAPI).
Al fine di confermare la presenza della proteina Spike da parte dei ghost di L. tarentolae, l?espressione della proteina Lt-Spike ? stata valutata tramite analisi Western Blot a partire dal pellet cellulare utilizzando l?anticorpo primario SARS Coronavirus Spike Protein Polyclonal Antibody e l?anticorpo secondario horseradish peroxidase (HRP)-conjugated IgG antirabbit. Tutti i cloni di Leishmania tarentolae esprimono una proteina visibile tramite analisi western-blot al peso di circa 180 kDa, corrispondente al peso molecolare della proteina di interesse.
Claims (15)
1. Un ghost cellulare comprendente una membrana plasmatica o una parte di essa di una cellula appartenente al genere Leishmania deprivata del contenuto citoplasmatico, del flagello e del nucleo.
2. Il ghost cellulare secondo la rivendicazione 1, comprendente almeno una molecola attiva caricata in esso.
3. Il ghost cellulare secondo la rivendicazione 2, dove la molecola attiva ? scelta tra: un antigene, antitumorale, un antinfiammatorio, un modulatore della risposta immunitaria, un antibiotico, un antivirale e un anticorpo.
4. Il ghost cellulare secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-3, ottenuto con un processo che comprende le fasi di:
a) introdurre in una cellula appartenente al genere Leishmania un vettore, comprendente un polinucleotide codificante per almeno una proteina di un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae o per almeno una molecola o recettore di homing linfocitario, o per almeno una porzione di dette proteine;
(b) selezionare almeno una cellula ospite prodotta nella fase (a) che esprima detta proteina o porzione di detta proteina;
(c) lisare detta almeno una cellula ottenuta nella fase (b) e
(d) separare il ghost dai flagelli e dai residui nucleo-citoplasmatici.
5. Il ghost cellulare secondo la rivendicazione 4, dove il polinucleotide ha una sequenza identica per almeno l?80% alla SEQ ID NO:1, preferibilmente identica per almeno il 90% alla SEQ ID NO:1.
6. Il ghost cellulare secondo la rivendicazione 4 o 5, dove l?almeno una proteina ? una glicoproteina Spike, o almeno una porzione di essa, di un virus membro della famiglia Coronaviridae scelto tra: SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2.
7. Il ghost cellulare secondo la rivendicazione 5 o 6, dove l?almeno una proteina virale ha una sequenza con un?identit? di almeno il 90% con la SEQ ID NO.2.
8. Il ghost cellulare secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-7, dove la cellula ospite appartiene ad una specie di Leishmania scelta tra: L. tarentolae, L. donovani, L. major e L. infantum, preferibilmente L. tarentolae.
9. Una composizione vaccinale comprendente il ghost cellulare secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-8.
10. Il ghost cellulare secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-8 o la composizione vaccinale secondo la rivendicazione 9 per l?uso come medicamento.
11. Il ghost cellulare secondo una qualsiasi delle rivendicazioni 1-8 o la composizione vaccinale secondo la rivendicazione 9, per l?uso nella prevenzione di un?infezione virale o di una patologia causata da un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae.
12. Il ghost cellulare o la composizione per l?uso secondo la rivendicazione 11, dove il virus ? scelto tra: SARS-CoV, MERS-CoV e SARS-CoV-2.
13. Il ghost cellulare o la composizione per l?uso secondo la rivendicazione 11 o 12, dove il virus ? il SARS-CoV-2.
14. Un processo per la generazione di un ghost di una cellula appartenente al genere Leishmania comprendente almeno una proteina o parte di essa di un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae, comprendente le fasi di:
a) introdurre in una cellula appartenente al genere Leishmania un vettore, comprendente un polinucleotide codificante per almeno una proteina di un virus appartenente alla famiglia dei Coronaviridae o per almeno una porzione di detta proteina;
(b) selezionare almeno una cellula ospite prodotta nella fase (a) che esprima detta proteina o porzione di detta proteina;
(c) lisare detta almeno una cellula ottenuta nella fase (b) e
(d) separare il ghost dai flagelli e dai residui nucleo-citoplasmatici.
15. Il processo secondo la rivendicazione 14, dove il polinucleotide ha una sequenza identica per almeno l?80% alla SEQ ID NO:1, preferibilmente identica per almeno il 90% alla SEQ ID NO:1.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102021000029279A IT202100029279A1 (it) | 2021-11-19 | 2021-11-19 | Ghost di Leishmania |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102021000029279A IT202100029279A1 (it) | 2021-11-19 | 2021-11-19 | Ghost di Leishmania |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| IT202100029279A1 true IT202100029279A1 (it) | 2023-05-19 |
Family
ID=80625004
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT102021000029279A IT202100029279A1 (it) | 2021-11-19 | 2021-11-19 | Ghost di Leishmania |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| IT (1) | IT202100029279A1 (it) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021160346A1 (en) * | 2020-02-13 | 2021-08-19 | Institut Pasteur | Nucleic acid vaccine against the sars-cov-2 coronavirus |
-
2021
- 2021-11-19 IT IT102021000029279A patent/IT202100029279A1/it unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2021160346A1 (en) * | 2020-02-13 | 2021-08-19 | Institut Pasteur | Nucleic acid vaccine against the sars-cov-2 coronavirus |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| BRETON MARIE ET AL: "A recombinant non-pathogenic Leishmania vaccine expressing human immunodeficiency virus 1 (HIV-1) Gag elicits cell-mediated immunity in mice and decreases HIV-1 replication in human tonsillar tissue following exposure to HIV-1 infection", JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY, vol. 88, no. 1, 1 January 2007 (2007-01-01), pages 217 - 225, XP055936291, ISSN: 0022-1317, DOI: 10.1099/vir.0.81995-0 * |
| F. AFRIN ET AL: "Characterization of Leishmania donovani Antigens Encapsulated in Liposomes That Induce Protective Immunity in BALB/c Mice", INFECTION AND IMMUNITY, vol. 70, no. 12, 1 December 2002 (2002-12-01), US, pages 6697 - 6706, XP055284343, ISSN: 0019-9567, DOI: 10.1128/IAI.70.12.6697-6706.2002 * |
| MAYR U B ET AL: "Bacterial ghosts as antigen delivery vehicles", ADVANCED DRUG DELIVERY REVIEWS, ELSEVIER, AMSTERDAM , NL, vol. 57, no. 9, 17 June 2005 (2005-06-17), pages 1381 - 1391, XP027771420, ISSN: 0169-409X, [retrieved on 20050617] * |
| VAROTTO-BOCCAZZI ILARIA ET AL: "Epidemic Preparedness-Leishmania tarentolae as an Easy-to-Handle Tool to Produce Antigens for Viral Diagnosis: Application to COVID-19", FRONTIERS IN MICROBIOLOGY, vol. 12, 13 December 2021 (2021-12-13), Lausanne, XP055933353, ISSN: 1664-302X, DOI: 10.3389/fmicb.2021.736530 * |
| VAROTTO-BOCCAZZI ILARIA ET AL: "Leishmania tarentolae as an Antigen Delivery Platform: Dendritic Cell Maturation after Infection with a Clone Engineered to Express the SARS-CoV-2 Spike Protein", VACCINES, vol. 10, no. 5, 19 May 2022 (2022-05-19), CH, pages 803, XP055933368, ISSN: 2076-393X, Retrieved from the Internet <URL:http://dx.doi.org/10.3390/vaccines10050803> DOI: 10.3390/vaccines10050803 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP5932647B2 (ja) | エキソソームに結合した目的のポリペプチドの分泌を可能にする新規キメラポリヌクレオチド及びポリペプチド、並びにその使用 | |
| Kar et al. | Vault nanocapsules as adjuvants favor cell-mediated over antibody-mediated immune responses following immunization of mice | |
| Raychaudhuri et al. | Can soluble antigens induce CD8+ cytotoxic T-cell responses? A paradox revisited | |
| US20110268750A1 (en) | Chimeric polynucleotides and polypeptides enabling secretion of a polypeptide of interest in association with exosomes and use thereof for the production of immunogenic compositions | |
| Gaubin et al. | Processing of filamentous bacteriophage virions in antigen-presenting cells targets both HLA class I and class II peptide loading compartments | |
| Patel et al. | Influenza virus‐like particles engineered by protein transfer with tumor‐associated antigens induces protective antitumor immunity | |
| JP6786074B2 (ja) | エキソソーム標的ｄｎａワクチン | |
| JP7340639B2 (ja) | ワクチンとして使用するためのエキソソームアンカータンパク質を発現するヌクレオチド配列 | |
| US20240026317A1 (en) | PAN-RAS mRNA CANCER VACCINES | |
| CA3092925A1 (en) | Compositions comprising hiv envelopes to induce hiv-1 antibodies | |
| JP2022539417A (ja) | Ｈｉｖ抗原及びｍｈｃ複合体 | |
| JP2010540674A (ja) | Ｈｉｖ特異抗体に基づくｈｉｖ予防ワクチン | |
| Kawano et al. | SV40 virus-like particles as an effective delivery system and its application to a vaccine carrier | |
| US20140187752A1 (en) | Antigenic compositions and use of same in the targeted delivery of nucleic acids | |
| JP2025522297A (ja) | サルポックス抗原の送達のためのｒｎａ組成物及び関連する方法 | |
| IT202100029279A1 (it) | Ghost di Leishmania | |
| Kimura et al. | Efficient immunogenic peptide antigen delivery to dendritic cells using an ESCRT-mediated extracellular vesicle formation method | |
| IT202100004172A1 (it) | Nuova composizione | |
| US20240374697A1 (en) | MULTIPLEXED TP53 AND PAN-RAS mRNA CANCER VACCINES | |
| KR102714027B1 (ko) | 사스-코로나바이러스-2 델타 감염증 치료용 항체 mRNA 및 이를 포함한 조성물 | |
| WO2025024338A2 (en) | Ras mrna cancer vaccines and compositions and methods thereof | |
| HK1262832A1 (en) | Nucleotide sequence expressing an exosome-anchoring protein for use as vaccine | |
| HK1262832B (en) | Nucleotide sequence expressing an exosome-anchoring protein for use as vaccine | |
| Andreasson | Vaccination against Her2/neu-expressing cancer using chimeric virus-like particles | |
| Chiozzini et al. | HPV-E7 delivered by engineered exosomes elicits a protective 7 CD8 T cell-mediated immune response 8 |