HUT77258A - Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba - Google Patents
Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba Download PDFInfo
- Publication number
- HUT77258A HUT77258A HU9701819A HU9701819A HUT77258A HU T77258 A HUT77258 A HU T77258A HU 9701819 A HU9701819 A HU 9701819A HU 9701819 A HU9701819 A HU 9701819A HU T77258 A HUT77258 A HU T77258A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- nucleic acid
- adenovirus
- motoneurons
- genome
- medullary
- Prior art date
Links
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 title claims description 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 31
- 239000013598 vector Substances 0.000 title description 17
- 238000012546 transfer Methods 0.000 title description 11
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 title description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 claims description 72
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 33
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 33
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 33
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 19
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 17
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 12
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 12
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 9
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 8
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 claims description 6
- 210000002976 pectoralis muscle Anatomy 0.000 claims description 6
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 claims description 5
- 102000007072 Nerve Growth Factors Human genes 0.000 claims description 5
- 239000003900 neurotrophic factor Substances 0.000 claims description 5
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 claims description 5
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 3
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 claims description 3
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000598171 Human adenovirus sp. Species 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 21
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 16
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 14
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 12
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 10
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 8
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 108090000932 Calcitonin Gene-Related Peptide Proteins 0.000 description 5
- 102000004414 Calcitonin Gene-Related Peptide Human genes 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 5
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 5
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 5
- 230000007441 retrograde transport Effects 0.000 description 5
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 4
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 4
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 4
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 4
- 210000004705 lumbosacral region Anatomy 0.000 description 4
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 4
- 230000002232 neuromuscular Effects 0.000 description 4
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 3
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 3
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 3
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 3
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 3
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 208000002320 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 3
- 206010068597 Bulbospinal muscular atrophy congenital Diseases 0.000 description 2
- 108010005939 Ciliary Neurotrophic Factor Proteins 0.000 description 2
- 102100031614 Ciliary neurotrophic factor Human genes 0.000 description 2
- 208000027747 Kennedy disease Diseases 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000003954 Spinal Muscular Atrophies of Childhood Diseases 0.000 description 2
- 208000006269 X-Linked Bulbo-Spinal Atrophy Diseases 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000030214 innervation Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000007823 neuropathy Effects 0.000 description 2
- 201000001119 neuropathy Diseases 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 2
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 1
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 1
- 241000928106 Alain Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 102000004219 Brain-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108090000715 Brain-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 108060001064 Calcitonin Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701157 Canine mastadenovirus A Species 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 102100038909 Caveolin-2 Human genes 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 101150081880 FGF1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000034615 Glial cell line-derived neurotrophic factor Human genes 0.000 description 1
- 108091010837 Glial cell line-derived neurotrophic factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039289 Glial fibrillary acidic protein Human genes 0.000 description 1
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 102000008214 Glutamate decarboxylase Human genes 0.000 description 1
- 108091022930 Glutamate decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 102000004457 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 1
- 101000740981 Homo sapiens Caveolin-2 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 241000551546 Minerva Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 108090000742 Neurotrophin 3 Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 241000009328 Perro Species 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000033526 Proximal spinal muscular atrophy type 3 Diseases 0.000 description 1
- 241001068295 Replication defective viruses Species 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100032889 Sortilin Human genes 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 102000004357 Transferases Human genes 0.000 description 1
- 108090000992 Transferases Proteins 0.000 description 1
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 1
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 102000001307 androgen receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010080146 androgen receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000004960 anterior grey column Anatomy 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960004015 calcitonin Drugs 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 1
- 208000015114 central nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- -1 etc. Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000004815 juvenile spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001095 motoneuron effect Effects 0.000 description 1
- 230000003387 muscular Effects 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 208000033808 peripheral neuropathy Diseases 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Inorganic materials [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 230000033912 thigmotaxis Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000005030 transcription termination Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000017105 transposition Effects 0.000 description 1
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 208000032471 type 1 spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000032527 type III spinal muscular atrophy Diseases 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000005167 vascular cell Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/10011—Adenoviridae
- C12N2710/10311—Mastadenovirus, e.g. human or simian adenoviruses
- C12N2710/10341—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/10343—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Neurology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
A bejelentés napja:
1995.12.12
Elsőbbsége:
1994.12.13 (94/15014) FR
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/FR95/01650
A nemzetközi közzététel száma: WO 96/18740
A találmány tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálására szolgál. A kívánt nukleinsav olyan anyagot kódolhat, amely az idegsejtekre jótékony hatás kifejtésére képes, például növekedési faktort, neurotrofikus faktort, citokint, neurotranszmittert vagy enzimet vagy receptort. Az adenovírus lehet például emberi vagy állati eredetű. Az intramuszkuláris bevitelt végezhetik egy adott izom egy vagy több pontjába vagy több izomba történő injektálással. A gyógyszerkészítmény medulláris sérüléseknek vagy a motoneuronok degenerálódásos betegségeinek kezelésére szolgálhat .
ANVGiad jgjy.aiázzÓM ···· ·· ···· « · • · · · · · « · . * · · · • · ···· ·· · ·
s._.
Nemzetközi
Szabadalmi Iroda
H-1062 Budapest. Andrássy utl ·
63.871/BE
Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba
RHONE-POULENC RORER S.A., ANTONY, FR
INSTITUT NATIONAL DE LA SANTE ET DE LA RECHERCHE MEDICALE, PARIS, FR
Feltalálók:
FINIELS Fran^oise, PARIS, FR
GIMENEZRIBOTTA Minerva, MONTPELLIER, FR MALLET Jacques, PARIS, FR
PRIVÁT Alain, SAINT-CLÉMENT-DE-RIVIÉRE, FR REVAH Frédéric, ANTONY, FR
A bejelentés napja: 1995.12.12.
Elsőbbsége: 1994.12.13., FR 94/15014
A nemzetközi bejelentés száma: PCT/FR95/01650
A nemzetközi közzététel száma: WO 96/18740 • · · · • · · · ·· ···· ·· · · ·· ·
A találmány a génterápia területét érinti. Részletesebben egy, az idegrendszeri betegségek medulláris motoneuronokba történő adenovírus vektor által közvetített génátvitellel való kezelésére szolgáló új eljárásra vonatkozik.
A génterápia és a módosított vírusok vektorként való alkalmazása a neurodegeneratív betegségek esetében egy új, különösen ígéretes terápiás megközelítés. A szakirodalomban erre a célra alkalmazott vírusok közül különösen az adenovírusokat [ Le Gál La Salle et al., Science 259, 988-990], a herpesz vírusokat, az adeno-asszociált vírusokat és a retrovírusokat említhetjük meg. A szakterületen megjelent tanulmányok rámutatnak, hogy ezek a vektorok különösen az adenovírusok, képesek igen nagy hatásfokkal fertőzni a központi idegrendszer sejtjeit. Ezek az eredmények lehetővé teszik tehát a központi idegrendszer betegségeinek kezelésére szolgáló olyan eljárások kidolgozását, melyek során egy terápiás gént tartalmazó rekombináns adenovírust közvetlenül a központi idegrendszerbe injektálnak (különösen sztereotaxissal).
Ami a gerincvelőt illeti, bizonyos neurodegeneratív betegségekben vagy sérülésekben a génterápia itt is lehetővé tehetné a motoneuronok degenerálódása elleni küzdelmet bizonyos, például növekedési faktorokat kódoló gének bevitelével. Ezeket az alkalmazásokat azonban még korlátozza, hogy nincsenek olyan egyszerű eljárások, melyek lehetővé tennék egy gén specifikus transzferét a gerincvelőbe. A találmány erre a problémára nyújt megoldást.
A találmány egy különösen hatásos eljárást ír le gének gerincvelőbe történő szelektív bejuttatására. A találmány annak a felismerésnek az eredménye, hogy egy gént specifikusan bevihe• · · · ·· ···· • · · · • · .· β·· ····· • · ···· · · · «··· tünk a motoneuronokba egy, az adott gént tartalmazó adenovírus vektornak az izomba történő beadásával. A bejelentés rámutat arra, hogy különösen előnyös módon, az adenovirusok a neuromuszkuláris szinapszisok (motoros plakkok) területén abszorbeálódnak, és a motoneuronok sejttestjéig (a gerincvelő ventrális szarva) jutnak el a motoneuronok axonjai mentén retrográd transzporttal. Az adenovírus vektorok találmány szerinti intramuszkuláris bevitele tehát a motoneuronok egy új, igen specifikus, retrográd transzporttal megvalósuló transzformációs eljárását képezi, amely lehetővé teszi, hogy a velőnek pontosan azt a területét célozzuk meg, amelyre hatni szeretnénk, a sérülés és/vagy degenerálódás helyének függvényében.
A találmány szerinti eljárás különösen előnyös, mivel lehetővé teszi, hogy a neuro-muszkuláris szinapszisok pontos térképét követve a velő különböző funkcionális területeinek motoneuronjait egyoldalúan, specifikusan transzformáljuk. Ez az eljárás sokkal kevésbé bizonyult traumatikusnak, mint egy sztereotaxikus injekció a velő parenchimába, amely mindenképpen diffúzabb, és nem korlátozódik a motoneuronokra.
A találmány egyik tárgya tehát genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportáiására szolgál.
Amint azt a korábbiakban jeleztük, a találmány szerinti eljárás igen előnyös, mivel lehetővé teszi, hogy a velő minden funkcionális területén pontosan a motoneuronokat célozzuk meg. így a • · · · kezelni kívánt módosítási hely szerint a bevitelt az adott helylyel idegi összeköttetésben levő izomba végezzük. A találmány szerint lehetőség van a különböző injekciók megfelelő megválasztásával különböző területeken elhelyezkedő nagy számú motoneuron specifikus és egyoldali fertőzésére. Egy előnyös megvalósítási módként a felső végtagok izmaiba (bicepsz, tricepsz) történő beadás lehetővé teszi egy gén transzferét a nyaki motoneuronokba; a mellkas izmaiba (mellizmok) történő beadás lehetővé teszi egy gén transzferét a mellkasi motoneuronokba; vagy az alsó végtagok izmaiba (lábszárizom) történő beadás lehetővé teszi egy gén transzferét az ágyéki és keresztcsonti motoneuronokba. Természetesen más izmokat is alkalmazhatunk az ezen motoneuronokba történő bevitelhez, és más motoneuronokat is megcélozhatunk.
Ebből a célból a neuro-muszkuláris szinapszisok pontos térképeit használhatjuk ahhoz, hogy a megcélzott medulláris terület függvényében meghatározzuk a bevitelhez legmegfelelőbb izmot vagy izmokat. Az ilyen térképek a szakember számára hozzáférhetők [ lásd például Nicholopoulos et al., J. Comp. Neurol. 217, 78-85; Peyronnard et Charon, Exp. Brain Rés. 50, 125-132] . A fertőzéshez megfelelőnek mutatkozó medulláris terület alapján egy vagy több olyan izmot is választhatunk, melyről ismert, hogy a kérdéses területről idegződik be.
Az adenovírus intramuszkuláris bevitelét különböző módokon végezhetjük. Egy első megvalósítási mód szerint egy adott izom különböző pontjain történő injektálással végezzük oly módon, hogy a motoros plakkok igen nagy számát érintse. Ez a megvalósítási mód különösen akkor hatásos, ha az ideg csatlakozási pontja • · ···· ·· · az adott izomban nem azonosítható. Amennyiben az ideg csatlakozási pontja megismerhető, a bevitelt előnyösen az adott pont területén vagy ahhoz közeli helyen beadott egy vagy több injekcióval végezzük. Ezen megvalósítási mód szerint nagyobb az átvitel hatásfoka, mivel a bevitt vektorból nagyobb mennyiség abszorbeálódik a neuro-muszkuláris szinapszis területén.
A találmány egy első előnyös megvalósításában az intramuszkuláris bevitelt egy adott izom különböző pontjaiba történő injektálással végezzük.
A találmány egy másik előnyös megvalósításában az intramuszkuláris bevitelt az ideg csatlakozási pontjának területén vagy ahhoz közeli terület(ek)en történő injektálással végezzük.
A találmány tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a felső végtagok izmaiba (például bicepsz, tricepsz) történő bevitel útján a nukleinsav nyaki medulláris motoneuronokba való transzportálására szolgál.
A találmány másik tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a mellkas izmaiba (például mellizmok) történő bevitel útján a nukleinsav mellkasi medulláris motoneuronokba való transzportálására szolgál.
A találmány további tárgya genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely az alsó végtagok izmaiba (például lábszárizom) történő bevitel útján a nukleinsav ágyéki és/vagy keresztcsonti medulláris motoneuronokba való transzportálására • · · • · szolgál.
A találmány szerinti eljárást különböző eredetű adenovírusokat alkalmazva valósíthatjuk meg. Különböző szerotípusú adenovírusokat jellemeztek, melyeknek szerkezete és tulajdonságai kissé eltérnek. Ezen szerotípusok közül a találmány keretein belül előnyben részesítjük a 2 vagy 5 típusú humán adenovírusok (Ad 2 vagy Ad 5) vagy az állati eredetű adenovírusok (FR 93 05954 számú szabadalmi irat) használatát. A találmány keretein belül alkalmazható állati eredetű adenovírusok között megemlíthetjük a kutya, szarvasmarha, egér [például Mavl, Beard et al., Virology 75, 81 (1990)] , juh, sertés, madár vagy majom(például SAV) eredetű adenovírusokat. Az állati eredetű adenovírus előnyösen egy kutya adenovírus, még előnyösebben egy CAV2 adenovírus [ például a Manhattan vagy A26/61 (ATCC VR-800) törzs] .
A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint az alkalmazott adenovírus humán eredetű. Egy másik előnyös mód szerint az adenovírus egy állati eredetű adenovírus.
Az adenovírusok genomja mindkét végén tartalmaz egy inverz ismétlődő szekvenciát (ITR), ezen kívül egy kapszidképződésért felelős szekvenciát (Psi), korai és késői géneket. A főbb korai géneket az El, E2, E3 és E4 területek tartalmazzák. Ezek közül az El területen lévő gének (Ela és Elb) a virális replikációhoz szükségesek. Az E4 és L5 régióknak a vírus terjedésében van szerepük. A fő késői géneket az L1-L5 területek tartalmazzák. Az
Ad5 adenovírus teljes genomját szekvenálták, és adatbázisokban hozzáférhető (lásd nevezetesen Genebank M73260). Ezen felül különböző szerotípusú adenovírusok (Ad2, Ad7, Adl2, stb.) genom• · • · ···· · · • · ·· · jának részeit, egyes esetekben az egész genomot szintén szekvenálták. A találmány megvalósításához felhasznált adenovírus vektorok az ITR-eket, egy kapszidképződésért felelős szekvenciát és a kívánt nukleinsavat tartalmazzák.
A találmány egy előnyös megvalósítási módjában az alkalmazott adenovírus genomjából a teljes El régió vagy annak egy része hiányzik. Az El régió elengedhetetlen a vírus replikációjához, és inaktivációja replikáció-defektív vírusok kialakulásához vezet, azaz olyan vírusokhoz, melyek képtelenek autonóm módon replikálódni a fertőzött sejtben. Az El régiót vagy bármely más virális területet működésképtelenné lehet tenni bármely, a szakember számára ismert eljárással, nevezetesen teljes szupresszióval, szubsztitúcióval, részleges delécióval vagy egy vagy több bázisnak a megfelelő génhez vagy génekhez való hozzáadásával. Ilyen módosításokat in vitro (izolált DNS-en) vagy in situ végezhetünk, például a géntechnológia módszereivel vagy mutagén ágensekkel végzett kezeléssel. Előnyösen az alkalmazott adenovírus genomjából az El régiónak a 454-3328. maradékoknak (PvuII-BglII fragmentum) vagy a 382-3446. maradékoknak (HinfII-Sau3A fragmentum) megfelelő része hiányzik.
Egy különösen előnyös megvalósítási mód szerint az alkalmazott adenovírus genomjából a teljes E3 és/vagy E4 régió vagy azok egy része is hiányzik. A bejelentés bemutatja, hogy elő lehet állítani az ezeket a különböző típusú deléciókat hordozó vektorokat. Ezek a kiegészítő deléciók megnövelik a vektor biztonságát és kapacitását.
A kívánt nukleinsavat az adenovírus genomjának különböző helyeire lehet beépíteni. Előnyösen az El, E3 vagy E4 régiók területére építhetjük be. Mindamellett világos, hogy más helyeket is alkalmazhatunk a beépítéshez. Részletesen a genom nukleotid szekvenciájának ismerete lehetővé teszi a szakember számára, hogy a beépítéshez alkalmazható restrikciós helyeket azonosítson vagy hozzon létre.
A találmány szerinti detektív rekombináns adenovírusokat bármely szakember számára ismert módszerrel előállíthatjuk [ Levrero et al., Gene 100, 195 (1991); EP 185 573; Graham, EMBO J. 3, 2917 (1984)] . Például egy adenovírus és egy többek között a kívánt DNS szekvenciát hordozó plazmid közötti homológ rekombinációval állíthatók elő. A homológ rekombináció egy megfelelő sejtvonalnak az adenovírussal és a plazmiddal való kotranszformálása után jön létre. Az alkalmazott sejtvonal előnyösen (i) transzformálható az említett elemekkel, és (ii) hordozza a detektív adenovírus genomjának hiányzó részét komplementálni képes szekvenciákat, előnyösen integrált formában, a rekombináció veszélyének elkerülésére. Példaképpen megemlíthetjük a 293 humán embrionális vese sejtvonalat [Graham et al., J. Gén. Virol. 36, 59 (1977)], amely genomjába integrált módon tartalmazza az Ad5 adenovírus genomjának bal részét (12%).
Egy első eljárás abból áll, hogy az in vitro előállított rekombináns vírus DNS-sel (detektív) egy kompetens, azaz a detektív vírus komplementációjához minden szükséges funkciót transz helyzetben hordozó sejtvonalat transzformálunk. Ezek a funkciók előnyösen a sejt genomjába integrálódtak, ami lecsökkenti a rekombináció veszélyét, és a sejtvonalnak megnövekedett stabili···· ·· ···· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · ·
9· ·· · ·· ·· ·· ···· ·· · · ·· · tást biztosít. Azon adenovírusok esetében, melyekből csak az El régió hiányzik, az előnyös sejtvonal a 293 sejtvonal.
Egy második megközelítés abból áll, hogy egy megfelelő sejtvonalat kotranszformálunk az in vitro előállított defektív rekombináns vírus DNS-ével és egy vagy több helper vírus vagy plazmid DNS-ével. E szerint az eljárás szerint nem szükséges olyan kompetens sejtvonallal rendelkezni, amely a rekombináns adenovírus minden hiányzó funkcióját képes komplementálni. Ezen funkciók egy részét ugyanis a helper vírus vagy vírusok komplementálják. Ez vagy ezek a helper vírusok maguk is defektívek.
Adenovírusokból származó vektorok előállításának stratégiáit ismertetik a FR 93/05954 és a FR 93/08596 számú szabadalmi iratok is.
Ezután a megsokszorozódott adenovírusokat a molekuláris biológia klasszikus módszerei szerint nyerjük ki és tisztítjuk, amint azt a példák bemutatják.
A találmány szerinti alkalmazásukhoz az adenovírusokat előnyösen injektálható formulázáshoz gyógyászatilag elfogadható hordozókkal kapcsoljuk. Különösen steril, izotóniás sóoldatokról (mononátrium-, dinátrium-foszfát, nátrium-, kálium-, kalciumvagy magnézium-klorid, stb. vagy ilyen sók keverékei) vagy száraz, nevezetesen liofilizált vegyületekről lehet szó, melyekkel az adott esettől függően steril víz vagy fiziológiás szérum hozzáadásával injektálható oldatokat hozhatunk létre. A bevitelhez alkalmazott vírusok dózisát különböző paraméterek, nevezetesen a bevitel helye, az injektálások száma, a kifejezni kívánt gén vagy a vizsgált kezelés időtartama függvényében választhatjuk • * · · · · · • · · ··· · • · ···· ·· · · ·· · meg. A találmány szerinti rekombináns adenovírusokat általánosan 104 és 1014 pfu, előnyösen 1O6-1O10 pfu közötti dózisban formulázzuk és visszük be. A pfu (plaque forming unit) kifejezés egy vírusoldat fertőzőképességét fejezi ki, és egy megfelelő sejtkultúra fertőzésével, és általában 15 nap elteltével a fertőzött sejt-plakkok számának mérésével határozzuk meg. Egy vírusoldat pfu titerének meghatározásának technikáit az irodalom bőségesen ismerteti.
A találmány szerinti eljárás különösen előnyös a medulláris sérüléseknek vagy a motoneuronok degenerálódásos betegségeinek kezelésére. A medulláris sérülések részletesebben a motoneuronok szintjén meglévő átmetszéseknek felelnek meg, amelyek megfosztják azokat a felsőbb központ felől jövő beidegződésüktől, és degenerálódásukhoz vezetnek. Egy növekedési faktorokat kódoló génnek a találmány szerinti retrográd transzporttal való bevitele a sérült terület alatti motoneuronokba megadja a lehetőségét annak, hogy visszaszorítsuk vagy akár meg is akadályozzuk ezt a degenerálódást. A motoneuronok neuropátiáiról beszélve például az amiotrófiás lateroszklerózist, az I. (Werdnig Hoffman betegség), II. vagy III. (Kugelberg-Welander betegség) típusú spinális izomsorvadást, a bulbáris spinális izomsorvadást (mint például a Kennedy betegség) említhetjük meg. A növekedési faktorokat vagy más, neurotrofikus hatásukról ismert molekulákat kódoló gének találmány szerinti átvitele a degenerálódó motoneuronokba új lehetőséget kínál az ilyen típusú betegségek kezelésében. A találmány szerinti eljárás hatásosságát különösen állatkísérletekkel tehetjük nyilvánvalóvá: a gerincvelő teljes vagy részle• · ··« ii .............
ges átmetszése, Wobbler egerek (amiotrófiás lateroszklerózis vizsgálatának modellállata [ Leestma J. E., Am. J. Pathol. 100,
821-824] ); mnd egerek (motoneuron degeneration: amiotrófiás lateroszklerózis vizsgálatának modellállata [ Messer et al., Genomics 18, 797-802 (1992)] ) vagy pmn egerek (Progressive motoneurone neuropathy: a fejlődés alatti motoneuronális degenerálódás vizsgálatának modellállata), a példákban bemutatott módon. A humán beépülést, toleranciát és az emberre való ártalmatlanságot in vitro humán embrionális medulláris neuronsejt tenyészeten tesztelhetjük.
A találmány szerinti adenovírus vektorokba beépült nukleinsav előnyösen neuroaktív anyagot kódol, azaz olyan anyagot, amely az idegsejtekre jótékony hatást tud kifejteni. Egy endogén anyag hiányának kompenzálására vagy túlsúlyának csökkentésére képes anyagról lehet szó, vagy egy olyan anyagról, mely a sejteket új tulajdonságokkal látja le. Részletesebben egy növekedési faktorról, egy neurotrofikus faktorról, egy citokinről, egy neurotranszmitterről vagy egy enzimről vagy egy hormon vagy neurotranszmitter receptoráról lehet szó.
A növekedési faktorok közül előnyösen a telep (colony) stimuláló faktorokat (G-CSF, GM-CSF, M-CSF, CSF, stb.), a fibroblaszt növekedési faktorokat (FGFa, FGFb) vagy a vaszkuláris sejtnövekedési faktorokat (VEGF) említhetjük meg. A neurotrofikus faktorok között az előnyben részesített faktorok a ciliáris neurotrofikus faktor (CNTF), a gliasejt érési faktorok (GMFa, b) , a GDNF, a BDNF, az NT3, az NT5, stb. Az előnyös citokinek az interleukinek és az interferonok, és az enzimek közül előnyösen • · · · « · · · » · « · • · « · · · · • · · ··· · • ·· · · · · ·· • · ···· · · · ··«· a neurotranszmitterek bioszintézisének enzimeit (tirozin hidroxiláz, acetilkolin transzferáz, glutaminsav dekarboxiláz), a lizoszómális enzimeket (hexóz-aminidázok, aril-szulfatáz, glukocerebrozidáz, HGPRT), a szabad gyökök detoxifikálásában résztvevő enzimeket (szuperoxid diszmutáz I, II vagy III, kataláz, glutation peroxidáz) alkalmazzuk. A receptorok közül többek között az androgének receptorait alkalmazhatjuk (a Kennedy betegségben van szerepük).
E különböző faktorokat natív formában vagy egy ugyanolyan típusú aktivitással rendelkező variáns vagy fragmentum formájában alkalmazhatjuk.
Antiszensz szekvenciák átvitele is lehetséges.
A nukleinsav lehet természetes vagy mesterséges eredetű.
Genomiális DNS-ről (gDNS), komplementer DNS-ről (cDNS), hibrid szekvenciákról vagy szintetikus vagy félig szintetikus szekvenciákról lehet szó. Ezek lehetnek humán, állati, növényi, bakteriális, virális, stb. eredetűek. Ezeket a szekvenciákat bármely, a szakember számára ismert eljárással megkaphatjuk, például bankok szűrésével, kémiai szintézissel vagy olyan kevert eljárásokkal, melyek a bankok szűrésével kapott szekvenciák kémiai vagy enzimatikus módosításait foglalják magukban. Előnyösen cDNS-ről vagy gDNS-ről van szó.
A nukleinsav általában tartalmaz egy a motoneuronokban működőképes transzkripciós promoter régiót is, valamint egy transzkripciós terminációs szignált meghatározó, a kérdéses géntől 3' irányban elhelyezkedő régiót és egy poliadenilációs helyet. Ezen elemek összessége képezi az expressziós kazettát.
• Μ· 4· • · *·«· w » ·* ♦ · · · • · · ··« · • ·· ·'·« · · • · ··«· ·· t ·« * ·
Ami a promoterrégiót illeti, amennyiben az működőképes a fertőzött sejtben, az adott gén expressziójáért természetes körülmények között felelős promoterről lehet szó. Eltérő eredetű területekről is lehet szó (melyek más proteinek expressziójáért felelősek, vagy szintetikusak). Részletesebben eukariota vagy virális gének promoter szekvenciáiról lehet szó. Például szó lehet a fertőzni kívánt sejt genomjából származó promoter szekvenciákról. Ezen felül szó lehet egy vírus genomjából származó promoter szekvenciákról is, beleértve az alkalmazott adenovírust is. Ebben a tekintetben például az E1A, MLP, CMV, RSV, stb. gének promotereit említhetjük meg. Másrészt ezeket a promoter régiókat aktivációs vagy regulációs, vagy szövetspecifikus vagy nagymértékű expressziét lehetővé tevő (GFAP, enoláz, stb.
promoterek) szekvenciák hozzáadásával módosíthatjuk is. Másrészt ha a heterológ nukleinsav nem tartalmaz promoter szekvenciákat, akkor a vírus genomjában egy ilyen szekvencia alá építhetjük be.
A találmány tárgya egy nukleinsavaknak a motoneuronokba való átvitelére szolgáló eljárás is, amely eljárás egy olyan adenovírus vektor muszkuláris beadását foglalja magában, amely a nukleinsavat genomjában beépítve tartalmazza. A találmány szerinti eljárást előnyösen egyetlen izom több pontján végzett injektálás (ok) kai valósítjuk meg, vagy amennyiben az ideg inszerciós pontja meghatározható, az inszerciós pontba vagy annak közelébe végzett egy vagy több injektálással.
A találmányt részletesebben a következő példák segítségével szemléltetjük, amelyek azonban nem korlátozzák a találmány oltalmi körét, csupán illusztrációként szolgálnak.
* » · · • · ··
Az ábrák magyarázata:
1. ábra:
Patkány gerincvelő ágyéki területének hosszanti metszete (50 μπι) β-galaktozidáz jelzéssel, β-galaktozidáz-adenovírus lábszárizomba történt intramuszkuláris injektálása után.
- számos motoneuronos sejttest diffúz jelölődése (Δ),
- néhány motoneuron intenzívebb jelölődése a sejttestek és a axonok szintjén, mely a motoneuronok tipikus morfológiáját mutatja be (A) .
2. ábra (1-gyel azonos, nagyobb nagyítás):
Patkány gerincvelő ágyéki területének hosszanti metszete (50 μπι) β-galaktozidáz jelzéssel, β-galaktozidáz-adenovírus lábszárizomba történt intramuszkuláris injektálása után.
3. ábra:
Patkány gerincvelő ágyéki területéhek hosszanti metszete (50 μπι) β-galaktozidáz jelzés - kalcitonin génnel kapcsolt peptid (Calcitonin Gene Related Peptid, CGRP) immunocitokémiai jelzés együttesen, β-galaktozidáz-adenovírus lábszárizomba történt intramuszkuláris injektálása után.
Példák
1. A β-galaktozidáz-adenovírus injektálása egészséges vagy a gerincvelő mellkasi részén féloldali metszésnek alávetett patkányok lábszárizmába.
A példa a β-gal gén átvitelét írja le az ágyéki motoneuronokba, a gént tartalmazó adenovírus lábszárizomba történő bevitelével .
>.*· ** • « - ·* * » ··» « ο ·· » · · · * · ·» «.··· ·· * ♦*» ·
Részletesebben a vizsgálatot olyan modell patkányon végeztük, melynek gerincvelejét az alsó mellkasi területen teljesen vagy részlegesen átmetszettük, ami az állatot mindkét vagy egyik alsó végtagján megbénította. Egy ilyen metszés megfosztja a motoneuronokat a felsőbb központokból jövő beidegződésüktől, és degenerálódásukat vonja maga után. A bevitelt a sérülés területén lévő motoneuronok retrográd transzporttal történő fertőzésével valósítottuk meg.
Az ebben a példában alkalmazott adenovírus vektor az Ad.RSV.pgal vektor. Ez a vektor nem tartalmazza a replikációjához szükséges szekvenciákat, de az általa fertőzhető sejtekbe való bejutáshoz szükséges szekvenciákat, valamint az adenovírus részecske képződéséhez elengedhetetlenül szükséges szekvenciákat tartalmazza. Hordozza még az E. coli β-galaktozidáz génjét az RSV promoter szabályozása alatt. A detektív rekombináns Ad.RSV^gal adenovírus előállítását az irodalom ismerteti [Stratford-Perricaudet et al., J.
Clin. Invest. 90, 626 (1992)] . Röviden, az Ad.RSV^gal egy olyan detektív (El és E3 régiója deletált) rekombináns adenovírus, melyet a mutáns Ad-dl324 adenovírus [ Thimmappaya et al., Cell 31, 543 (1982)] és a pAD.RSVbGal plazmid [Akii et al. (1993)] közötti homológ rekombinációval kapunk meg.
A pAD.RSVbGal plazmid 5' ->3' irányban a következőket tartalmazza:
- az Ad5 adenovírus bal szélének megfelelő PvuII fragmentumot, amely az ITR szekvenciát, a replikációs origót, a részecskeképződés szignáljait és az E1A amplifikátort tartalmazza;
- a β-galaktozidázt kódoló gént az RSV promoter (Raus szarko16 ·· ···· · · • · · · .· · · · · • · · · · · · ma vírusból) kontrollja alatt;
- az Ad5 adenovírus genomjának egy második fragmentumát, amely a dl324 adenovírus és a pAD.RSVbGal plazmid közötti homológ rekombinációt teszi lehetővé.
Clal enzimmel végzett linearizálás után a pAD.RSVbGal plazmidot és a dl324 adenovírust kalcium-foszfát jelenlétében 293 sejtvonalba kotranszfektáljuk, ami lehetővé teszi a homológ rekombinációt. Az így kialakított rekombináns adenovírusokat plakk-tisztítással szelektáljuk. Izolálás után a rekombináns adenovírus DNS-ét 293 sejtvonalban amplifikáljuk, ami olyan sejttenyészet felülúszóhoz vezet, amely nem tisztított detektív rekombináns adenovírusokat tartalmaz körülbelül 1O10 pfu/ml titerrel. A vírus részecskéket azután cézium-klorid gradiens centrifugálással tisztítjuk az ismert eljárás szerint [ lásd Graham et al., Virology 52., 456 (1973)] . Az adenovírust azután tisztított formában alkalmazzuk egy foszfát sóoldatban (PBS).
Közvetlenül azután, hogy az állatot a gerincvelő féloldali átmetszésének (alsó mellkasi terület, melynek hatására az állat egyik alsó végtagja lebénul) vetettük alá (vagy nem vetettük alá) , háromszor injektáltunk Ad-RSV-b-Gal adenovírust (107 pfu injekciónként) a lábszárizomba. Injekciós pontonként 9 μΐ adenovírust injektáltunk Hamilton fecskendővel.
Az állatokat az injektálás után négy nappal öltük le (4% paraformaldehid perfúziójával), amely idő minimálisan szükséges ahhoz, hogy a retrográd transzport az izomtól a gerincvelőig megvalósuljon. Hosszában három gerincvelő blokkot vágtunk ki a nyaki, a mellkasi és az ágyéki területeken, 50 mM vastagságú • · · · • · · · · · • · • .· · ♦ · · · *·· ...........
metszetekként. A metszeteket a β-galaktozidáz kimutatására kezeltük, ami lehetővé tette a vírus által fertőzött sejtek kimutatását. Bizonyos metszeteket ezen felül anti-kalcitonin génnel kapcsolt peptid (CGRP) immuncitokémiai vizsgálatnak vetettünk alá, ami a motoneuronok specifikus jelölését tette lehetővé.
A β-galaktozidázt szubsztrátjával, az X-Gal-lal mutattuk ki;
a reakciótermék kék elszíneződést mutat.
A kalcitonin génnel kapcsolt peptid, a CGRP egy neurotranszmitter, a motoneuronok specifikus markere. Ezt egy peroxidázhoz kötött második antitesttel végzett immunkémiai vizsgálattal mutattuk ki, enzimszubsztrátként diamino-benzidint alkalmazva; a reakciótermék gesztenyebarna elszíneződést mutat.
A β-galaktozidáz vizsgálata kimutatta, hogy kizárólag az ágyéki területen vannak fertőzött motoneuronok, a sérülés alatt, az injekciónak megfelelő oldalon, a féloldali metszésnek alávetett patkányok esetében.
Két típusú jelölődést kaptunk. Nagy számú motoneuron esetében a sejttest jelölődött diffúz módon, a motoneuronok egy kisebb részénél a sejttest és a axonok intenzívebben jelölődtek (1. és
2. ábrák). Ez a jelölődés intenzitásában mutatkozó eltérés valószínűleg annak a ténynek tulajdonítható, hogy csak néhány, az injektálás helyéhez igen közeli motoneuron tudta intenzíven abszorbeálni a vírust.
A β-galaktozidáz kimutatással kapcsolt anti-CGRP immuncitokémiai vizsgálat azt mutatta ki kettős jelöléssel, hogy a CGRP-pozitív (azaz motoneuron) sejttestek majdnem mindegyike fertőzött a vírussal (3. ábra).
···· «· · · · · ·· · · • · · · · · · • · « · · · ·
Claims (13)
1. Genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a felső végtagok izmaiba (például bicepsz, tricepsz) történő bevitel útján a nukleinsav nyaki medulláris motoneuronokba transzportálására szolgál.
2. Genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely a mellkas izmaiba (például· mellizmok) történő bevitel útján a nukleinsav mellkasi medulláris motoneuronokba transzportálására szolgál.
3. Genomjában egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely az alsó végtagok izmaiba (például lábszárizom) történő bevitel útján a nukleinsav ágyéki és/vagy keresztcsonti medulláris motoneuronokba transzportálására szolgál.
4. Az El régióban vagy annak egy részében és az E3 és/vagy E4 régiókban vagy azok egy részében hiányos genommal rendelkező, egy kívánt nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálására szolgál.
5. Genomjában az NT3-at kódoló nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálására szolgál.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal • · · · · · • · · · · jellemezve, hogy az adenovírus humán eredetű adenovírus.
7. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az adenovírus állati eredetű adenovírus.
8. Az előző igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav az adenovírus genomjában az El, E3 vagy E4 régió területén van beépítve.
9. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav az idegsejtekre jótékony hatás kifejtésére képes anyagot kódol.
10. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav növekedési faktort, neurotrofikus faktort, citokint, neurotranszmittert vagy enzimet vagy receptort kódol.
11. A 9. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a kívánt nukleinsav többek között az anyagnak a motoneuronokban történő kifejeződését lehetővé tevő szignálokat tartalmaz.
12. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az intramuszkuláris bevitelt egy adott izom több pontjába történő injektálással valósítjuk meg.
13. Genomjában egy neurotrofikus faktort kódoló nukleinsavat tartalmazó rekombináns adenovírus alkalmazása olyan gyógyszerkészítmény előállítására, amely intramuszkuláris bevitel útján a nukleinsav medulláris motoneuronokba történő transzportálásával az amiotrófiás lateroszklerózis kezelésére szolgál.
A meghatalmazott:
·· ·«·· » · • · · · • Λ · « ρ+ίΰΐί,η ANyaijd
ΙΊ31313ΖΖ0>ί
1/3
63?&71/ΒΕ
1. ábra
PTO Η19 KÖZZÉTÉTELI
PÉLDÁNY
2/3
- 63*871/BE
2. ábra
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9415014A FR2727867B1 (fr) | 1994-12-13 | 1994-12-13 | Transfert de genes dans les motoneurones medullaires au moyen de vecteurs adenoviraux |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT77258A true HUT77258A (hu) | 1998-03-02 |
Family
ID=9469770
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9701819A HUT77258A (hu) | 1994-12-13 | 1995-12-12 | Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6632427B1 (hu) |
| EP (1) | EP0797677A1 (hu) |
| JP (1) | JPH10510428A (hu) |
| AU (1) | AU712775B2 (hu) |
| BR (1) | BR9510090A (hu) |
| CA (1) | CA2208224A1 (hu) |
| CZ (1) | CZ180697A3 (hu) |
| FI (1) | FI972491L (hu) |
| FR (1) | FR2727867B1 (hu) |
| HU (1) | HUT77258A (hu) |
| NO (1) | NO972712D0 (hu) |
| SK (1) | SK74597A3 (hu) |
| WO (1) | WO1996018740A1 (hu) |
Families Citing this family (76)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5846782A (en) | 1995-11-28 | 1998-12-08 | Genvec, Inc. | Targeting adenovirus with use of constrained peptide motifs |
| US6465253B1 (en) | 1994-09-08 | 2002-10-15 | Genvec, Inc. | Vectors and methods for gene transfer to cells |
| US5770442A (en) * | 1995-02-21 | 1998-06-23 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral fiber protein and methods of using same |
| US6127525A (en) * | 1995-02-21 | 2000-10-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same |
| ATE445705T1 (de) | 1995-06-15 | 2009-10-15 | Crucell Holland Bv | Verpackungssysteme für humane rekombinante adenoviren zur gentherapie |
| US6783980B2 (en) | 1995-06-15 | 2004-08-31 | Crucell Holland B.V. | Packaging systems for human recombinant adenovirus to be used in gene therapy |
| AU6614398A (en) * | 1997-01-17 | 1998-08-07 | Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale | Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons |
| FR2761258B1 (fr) * | 1997-03-26 | 1999-06-11 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procede de stimulation de la regeneration nerveuse |
| US20030017138A1 (en) | 1998-07-08 | 2003-01-23 | Menzo Havenga | Chimeric adenoviruses |
| US6929946B1 (en) * | 1998-11-20 | 2005-08-16 | Crucell Holland B.V. | Gene delivery vectors provided with a tissue tropism for smooth muscle cells, and/or endothelial cells |
| US6492169B1 (en) | 1999-05-18 | 2002-12-10 | Crucell Holland, B.V. | Complementing cell lines |
| US6913922B1 (en) | 1999-05-18 | 2005-07-05 | Crucell Holland B.V. | Serotype of adenovirus and uses thereof |
| US20050232900A1 (en) * | 1999-05-18 | 2005-10-20 | Crucell Holland B.V. | Serotype of adenovirus and uses thereof |
| AU1775901A (en) * | 1999-11-17 | 2001-05-30 | Avigen, Inc. | Recombinant adeno-associated virus virions for the treatment of lysosomal disorders |
| DE60138403D1 (de) | 2000-09-26 | 2009-05-28 | Crucell Holland Bv | Adenovirale vektoren für die übertragung von genen in zellen der skelettmuskulatur oder myoblasten |
| EP1478236B1 (en) * | 2001-12-21 | 2009-02-11 | The Salk Institute For Biological Studies | Targeted retrograde gene delivery to motor neurons |
| US6998118B2 (en) * | 2001-12-21 | 2006-02-14 | The Salk Institute For Biological Studies | Targeted retrograde gene delivery for neuronal protection |
| JP4495587B2 (ja) * | 2002-04-25 | 2010-07-07 | クルセル ホランド ベー ヴェー | 組換えアデノウイルスベクターおよびその使用 |
| ES2618787T5 (es) * | 2006-04-25 | 2022-10-21 | Univ California | Administración de factores de crecimiento para el tratamiento de trastornos del SNC |
| CA2752239C (en) | 2009-02-12 | 2021-03-30 | Opko Curna, Llc | Treatment of glial cell derived neurotrophic factor (gdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to gdnf |
| CA2752237C (en) | 2009-02-12 | 2020-03-24 | Opko Curna, Llc | Treatment of brain derived neurotrophic factor (bdnf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to bdnf |
| EP2403946A4 (en) | 2009-03-04 | 2012-11-14 | TREATMENT OF SIRTUIN 1 (SIRT1) -HANDLED ILLNESSES BY INHIBITING THE NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT AGAINST SIRT 1 | |
| WO2010107733A2 (en) | 2009-03-16 | 2010-09-23 | Curna, Inc. | Treatment of nuclear factor (erythroid-derived 2)-like 2 (nrf2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to nrf2 |
| JP5904935B2 (ja) | 2009-03-17 | 2016-04-20 | クルナ・インコーポレーテッド | デルタ様１ホモログ（ｄｌｋ１）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｄｌｋ１関連疾患の治療 |
| CN106237345A (zh) | 2009-05-06 | 2016-12-21 | 库尔纳公司 | 通过针对脂质转运和代谢基因的天然反义转录物的抑制治疗脂质转运和代谢基因相关疾病 |
| ES2609655T3 (es) | 2009-05-06 | 2017-04-21 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con tristetraprolina (TTP) mediante inhibición de transcrito antisentido natural para TTP |
| CN102575251B (zh) | 2009-05-18 | 2018-12-04 | 库尔纳公司 | 通过抑制针对重编程因子的天然反义转录物来治疗重编程因子相关的疾病 |
| EP2432882B1 (en) | 2009-05-22 | 2019-12-25 | CuRNA, Inc. | TREATMENT OF TRANSCRIPTION FACTOR E3 (TFE3) and INSULIN RECEPTOR SUBSTRATE 2 (IRS2) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO TFE3 |
| JP5960049B2 (ja) | 2009-05-28 | 2016-08-02 | クルナ・インコーポレーテッド | 抗ウイルス遺伝子に対する天然アンチセンス転写物の抑制による抗ウイルス遺伝子関連疾患の治療 |
| WO2010148065A2 (en) | 2009-06-16 | 2010-12-23 | Curna, Inc. | Treatment of paraoxonase 1 (pon1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to pon1 |
| US20120171170A1 (en) | 2009-06-16 | 2012-07-05 | Opko Curna, Llc | Treatment of collagen gene related diseases by inhibition of natural antisense transcript to a collagen gene |
| JP6073133B2 (ja) | 2009-06-24 | 2017-02-01 | クルナ・インコーポレーテッド | 腫瘍壊死因子受容体２（ｔｎｆｒ２）に対する天然アンチセンス転写物の抑制によるｔｎｆｒ２関連疾患の治療 |
| ES2583691T3 (es) | 2009-06-26 | 2016-09-21 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con un gen del síndrome de Down mediante la inhibición de una transcripción antisentido natural a un gen del síndrome de Down |
| CA2769665A1 (en) | 2009-08-05 | 2011-02-10 | Opko Curna, Llc | Treatment of insulin gene (ins) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to an insulin gene (ins) |
| EP2470657B1 (en) | 2009-08-25 | 2019-10-23 | CuRNA, Inc. | Treatment of 'iq motif containing gtpase activating protein' (iqgap) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to iqgap |
| US9173895B2 (en) | 2009-12-16 | 2015-11-03 | Curna, Inc. | Treatment of membrane bound transcription factor peptidase, site 1 (MBTPS1) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to MBTPS1 |
| CA2782375C (en) | 2009-12-23 | 2023-10-31 | Opko Curna, Llc | Treatment of uncoupling protein 2 (ucp2) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to ucp2 |
| WO2011079261A2 (en) | 2009-12-23 | 2011-06-30 | Curna, Inc. | Treatment of hepatocyte growth factor (hgf) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to hgf |
| WO2011090741A2 (en) | 2009-12-29 | 2011-07-28 | Opko Curna, Llc | TREATMENT OF TUMOR PROTEIN 63 (p63) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENSE TRANSCRIPT TO p63 |
| KR101838305B1 (ko) | 2009-12-29 | 2018-03-13 | 큐알엔에이, 인크. | ＮＲＦ1(Ｎｕｃｌｅａｒ Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ Ｆａｃｔｏｒ 1)에 대한 천연 안티센스 전사체의 억제에 의한 핵 호흡 인자 1 관련된 질환의 치료 |
| CA2785832A1 (en) | 2010-01-04 | 2011-07-07 | Curna, Inc. | Treatment of interferon regulatory factor 8 (irf8) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to irf8 |
| JP5963680B2 (ja) | 2010-01-06 | 2016-08-03 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | 膵臓発生遺伝子に対する天然アンチセンス転写物の阻害による膵臓発生遺伝子疾患の治療 |
| DK2524039T3 (en) | 2010-01-11 | 2018-03-12 | Curna Inc | TREATMENT OF GENDER HORMON-BINDING GLOBULIN (SHBG) RELATED DISEASES BY INHIBITION OF NATURAL ANTISENCE TRANSCRIPTS TO SHBG |
| ES2671877T3 (es) | 2010-01-25 | 2018-06-11 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con la RNASA (H1) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a RNASA H1 |
| RU2608496C2 (ru) | 2010-02-22 | 2017-01-18 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с пирролин-5 карбоксилатредуктазой 1(pycr1), путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта к pycr1 |
| CA2795281A1 (en) | 2010-04-09 | 2011-10-13 | Curna, Inc. | Treatment of fibroblast growth factor 21 (fgf21) related diseases by inhibition of natural antisense transcript to fgf21 |
| JP2013525483A (ja) | 2010-05-03 | 2013-06-20 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | サーチュイン（ｓｉｒｔ）に対する天然アンチセンス転写物の阻害によるサーチュイン（ｓｉｒｔ）関連疾患の治療 |
| TWI586356B (zh) | 2010-05-14 | 2017-06-11 | 可娜公司 | 藉由抑制ｐａｒ４天然反股轉錄本治療ｐａｒ４相關疾病 |
| ES2664572T3 (es) | 2010-05-26 | 2018-04-20 | Curna, Inc. | Tratamiento de enfermedades relacionadas con el homólogo atonal 1 (ATOH1) mediante inhibición del transcrito antisentido natural a ATOH1 |
| JP5998131B2 (ja) | 2010-07-14 | 2016-09-28 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | Ｄｉｓｃｓｌａｒｇｅｈｏｍｏｌｏｇ（ｄｌｇ）ｄｌｇ１への天然アンチセンス転写物の阻害によるｄｌｇ関連疾患の治療 |
| JP5986998B2 (ja) | 2010-10-06 | 2016-09-06 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | シアリダーゼ４（ｎｅｕ４）への天然アンチセンス転写物の阻害によるｎｅｕ４関連疾患の治療 |
| JP6049623B2 (ja) | 2010-10-22 | 2016-12-21 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | α‐Ｌ‐イズロニダーゼ（ＩＤＵＡ）への天然アンチセンス転写物の阻害によるＩＤＵＡ関連疾患の治療 |
| KR101913232B1 (ko) | 2010-10-27 | 2018-10-30 | 큐알엔에이, 인크. | 인터페론-관련된 발달성 조절물질 1 (ifrd1)에 대한 자연 안티센스 전사체의 저해에 의한 ifrd1 관련된 질환의 치료 |
| RU2608493C2 (ru) | 2010-11-23 | 2017-01-18 | Курна, Инк. | Лечение заболеваний, связанных с nanog, путем ингибирования природного антисмыслового транскрипта nanog |
| JP6188686B2 (ja) | 2011-06-09 | 2017-08-30 | カッパーアールエヌエー，インコーポレイテッド | フラタキシン（ｆｘｎ）への天然アンチセンス転写物の阻害によるｆｘｎ関連疾患の治療 |
| CN110438125A (zh) | 2012-03-15 | 2019-11-12 | 科纳公司 | 通过抑制脑源神经营养因子(bdnf)的天然反义转录物治疗bdnf相关疾病 |
| WO2015171918A2 (en) | 2014-05-07 | 2015-11-12 | Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Compositions and uses for treatment thereof |
| GB201410693D0 (en) | 2014-06-16 | 2014-07-30 | Univ Southampton | Splicing modulation |
| AU2015327836B2 (en) | 2014-10-03 | 2021-07-01 | Cold Spring Harbor Laboratory | Targeted augmentation of nuclear gene output |
| KR102422625B1 (ko) | 2015-10-09 | 2022-07-20 | 유니버시티 오브 사우스앰톤 | 유전자 발현의 조절 및 탈조절된 단백질 발현의 스크리닝 |
| US11096956B2 (en) | 2015-12-14 | 2021-08-24 | Stoke Therapeutics, Inc. | Antisense oligomers and uses thereof |
| JP7049249B2 (ja) | 2015-12-14 | 2022-04-06 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | 中枢神経系疾患の処置のための組成物および方法 |
| CA3005254A1 (en) | 2015-12-14 | 2017-06-22 | Cold Spring Harbor Laboratory | Compositions and methods for treatment of retinitis pigmentosa 18 and retinitis pigmentosa 13 |
| JP2019500345A (ja) | 2015-12-14 | 2019-01-10 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | 肝臓病の処置のための組成物および方法 |
| ES2882500T3 (es) | 2015-12-14 | 2021-12-02 | Cold Spring Harbor Laboratory | Oligómeros antisentido para el tratamiento del síndrome de Dravet |
| JP2018538288A (ja) | 2015-12-14 | 2018-12-27 | コールド スプリング ハーバー ラボラトリー | アラジール症候群の処置のためのアンチセンスオリゴマー |
| AU2018322319B2 (en) | 2017-08-25 | 2021-08-05 | Stoke Therapeutics, Inc. | Antisense oligomers for treatment of conditions and diseases |
| KR20250025519A (ko) | 2017-10-23 | 2025-02-21 | 스톡 테라퓨틱스, 인크. | 넌센스 매개 rna 분해 기반 병태 및 질환 치료를 위한 안티센스 올리고머 |
| EP3737692A4 (en) | 2018-01-09 | 2021-09-29 | Elstar Therapeutics, Inc. | CALRETICULIN AND MODIFIED T-LYMPHOCYTES BINDING CONSTRUCTIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES |
| WO2019178362A1 (en) | 2018-03-14 | 2019-09-19 | Elstar Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules that bind to calreticulin and uses thereof |
| CA3099280A1 (en) | 2018-05-04 | 2019-11-07 | Stoke Therapeutics, Inc. | Methods and compositions for treatment of cholesteryl ester storage disease |
| CN112955465A (zh) | 2018-07-03 | 2021-06-11 | 马伦戈治疗公司 | 抗tcr抗体分子及其用途 |
| IL298063A (en) | 2020-05-11 | 2023-01-01 | Stoke Therapeutics Inc | Opa1 antisense oligomers for treatment of conditions and diseases |
| AU2022255506A1 (en) | 2021-04-08 | 2023-11-09 | Marengo Therapeutics, Inc. | Multifunctional molecules binding to tcr and uses thereof |
| JP2024516168A (ja) | 2021-04-22 | 2024-04-12 | デイナ ファーバー キャンサー インスティチュート，インコーポレイテッド | がんを治療するための組成物および方法 |
| WO2023178311A1 (en) * | 2022-03-18 | 2023-09-21 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods for treating disorders under hypothermia and compositions relating to the same |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5703055A (en) | 1989-03-21 | 1997-12-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Generation of antibodies through lipid mediated DNA delivery |
| CA2119580A1 (en) * | 1991-10-01 | 1993-04-15 | George Cachianes | Production of gpa neurotrophic factor |
| ZA935355B (en) * | 1992-08-07 | 1995-01-23 | American Home Prod | Recombinant andenovirus vaccines |
| EP0669987B1 (en) * | 1992-09-25 | 2008-08-13 | Aventis Pharma S.A. | Adenovirus vectors for the transfer of foreign genes into cells of the central nervous system, particularly in brain |
| ATE304604T1 (de) * | 1993-06-24 | 2005-09-15 | Frank L Graham | Adenovirus vektoren für gentherapie |
| PL179877B1 (pl) * | 1993-07-13 | 2000-11-30 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Zdefektowany replikacyjnie adenowirus, linia komórkowa do infekowania zdefektowanym adenowirusem oraz srodek farmaceutyczny PL PL PL PL PL PL PL PL PL PL |
-
1994
- 1994-12-13 FR FR9415014A patent/FR2727867B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-12-12 HU HU9701819A patent/HUT77258A/hu unknown
- 1995-12-12 AU AU43502/96A patent/AU712775B2/en not_active Ceased
- 1995-12-12 EP EP95942249A patent/EP0797677A1/fr not_active Ceased
- 1995-12-12 WO PCT/FR1995/001650 patent/WO1996018740A1/fr not_active Application Discontinuation
- 1995-12-12 SK SK745-97A patent/SK74597A3/sk unknown
- 1995-12-12 BR BR9510090A patent/BR9510090A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-12-12 JP JP8518369A patent/JPH10510428A/ja not_active Ceased
- 1995-12-12 CZ CZ971806A patent/CZ180697A3/cs unknown
- 1995-12-12 CA CA002208224A patent/CA2208224A1/fr not_active Abandoned
-
1997
- 1997-01-17 US US08/785,074 patent/US6632427B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-06-12 FI FI972491A patent/FI972491L/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-06-12 NO NO972712A patent/NO972712D0/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| SK74597A3 (en) | 1997-12-10 |
| US6632427B1 (en) | 2003-10-14 |
| MX9704102A (es) | 1997-09-30 |
| FI972491A0 (fi) | 1997-06-12 |
| FR2727867A1 (fr) | 1996-06-14 |
| FI972491L (fi) | 1997-06-12 |
| JPH10510428A (ja) | 1998-10-13 |
| CZ180697A3 (en) | 1997-09-17 |
| WO1996018740A1 (fr) | 1996-06-20 |
| NO972712L (no) | 1997-06-12 |
| AU712775B2 (en) | 1999-11-18 |
| FR2727867B1 (fr) | 1997-01-31 |
| AU4350296A (en) | 1996-07-03 |
| BR9510090A (pt) | 1998-07-14 |
| CA2208224A1 (fr) | 1996-06-20 |
| EP0797677A1 (fr) | 1997-10-01 |
| NO972712D0 (no) | 1997-06-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT77258A (hu) | Adenovírus-vektor-közvetített génátvitel medulláris motoneuronokba | |
| Short et al. | Gene delivery to glioma cells in rat brain by grafting of a retrovirus packaging cell line | |
| JP2012139220A (ja) | 複製欠損アデノウイルスｔｎｆベクター | |
| Joung et al. | Effective gene transfer into regenerating sciatic nerves by adenoviral vectors: potentials for gene therapy of peripheral nerve injury | |
| KR20020013473A (ko) | 아데노바이러스-매개 유전자 치료법 | |
| AU2002364221B2 (en) | Targeted retrograde gene delivery to motor neurons | |
| US20110178282A1 (en) | Methods and compositions for cancer therapy using a novel adenovirus | |
| US20020144302A1 (en) | Novel constructs and vectors for the targeted and inducible expression of genes | |
| JPH11513390A (ja) | 細胞殺傷のウイルス増強のための方法および組成物 | |
| US7018628B1 (en) | Vectors derived from baculovirus and use for transferring nucleic acids into nerve cells of vertebrates | |
| JP2001524934A (ja) | 遺伝子治療ウイルスベクターの投与に対して哺乳類罹患動物を寛容化する方法 | |
| US6552003B2 (en) | Muscle reinnervation and motor axon sprouting by administering DNA sequences encoding NT-3 and CNTF | |
| WO1995027494A1 (en) | DEFECTIVE HERPES AND DEFECTIVE ADENO-ASSOCIATED VIRUS VECTORS WITH p53 FOR THE TREATMENT OF CANCER | |
| CN1225131A (zh) | 肌萎缩性侧索硬化的治疗方法 | |
| CN1871034B (zh) | 用新型腺病毒治疗癌症的方法和组合物 | |
| JP2002503709A (ja) | 遺伝子治療における治療用遺伝子のストレスプロモーターによる調節：その組成物及び方法 | |
| JP2003527816A (ja) | バキュロウイルス由来のベクター及び脊椎動物の神経細胞に核酸を導入するための該ベクターの使用 | |
| JP2001519702A (ja) | 神経再生刺激方法 | |
| JP2002529099A (ja) | トランスジーンの新規な発現調節系 | |
| MXPA97004102A (en) | Transfer of genes in the medular motoneurons by means of adenovira vectors | |
| WO1999036559A1 (en) | Viral vectors expressing self-polymerizing neuronal intermediate filaments and their use | |
| Seddighi et al. | Recent Progresses in Brain Gene Therapy | |
| KR20000070272A (ko) | 수질 운동 뉴런 중으로의 아데노바이러스 벡터 매개-유전자전달방법 | |
| AU2928202A (en) | Adenoviral-vector-mediated gene transfer into medullary motor neurons | |
| JP2002503476A (ja) | トランスジーンを神経特異的に発現させる負の調節要素の使用方法 |