HUT75701A

HUT75701A - Composition based on polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymers and container containing it

Info

Publication number: HUT75701A
Application number: HU9501104A
Authority: HU
Inventors: Craig William Davis; Alison Green Floyd; Mary Sou
Original assignee: Wellcome Found
Priority date: 1992-10-19
Filing date: 1993-10-18
Publication date: 1997-05-28
Also published as: WO1994008596A1; ZA937714B; PL308459A1; MX9306467A; SK44795A3; NO951462L; AU674895B2; NZ256890A; CA2147889A1; TW276183B; KR950703345A; SI9300545A; EP0671919A1; AU5284293A; CZ63395A3; HU9501104D0; IL107313A0; GB9221883D0; JPH08502284A; BR9307268A

Description

A találmány polioxi-propilén/polioxi-etilén blokk kopolimerből álló, stabil gyógyszerkészítményre vonatkozik.

Bizonyos felületaktív polioxi-propilén/polioxi-etilén blokk kopolimerekől megállapították, hogy az állati és humán gyógyászatban jótékony hatásúak. Ezek a kopolimerek keringési rendellenességek kezelésére önmagukban vagy más szerekkel, például fibrinolitikus enzimekkel, alvadásgátlókkal, szabad gyököket eltávolító szerekkel, gyulladásgátló szerekkel, antibiotikumokkal, membrán stabilizálókkal és/vagy alkalmazhatók. Ezeket perfúziós közeggel együtt egyaránt az alkalmazásokat a 3 641 240,

4	801	452,	4	873	083,	4 879	109,	4 837	014,	4	897	263,
4	937	070,	4	997	664,	5 017	370,	5 028	599,	5	030	448,
5	032	394,	5	039	520,	5 041	288,	5 047	236,	5	064	643,
5	071	649,	5	071	649,	5 078	995,.	5 080	894,	5	089	260,
5	152	979,	5 :	182	106 és	5 198	, 211	számú Amerikai	Egyesült

Államok-beli szabadalomban írták le, melyeket hivatkozásul említünk.

A felületaktív kopolimerek olyan keringési rendellenességek esetében hatásosak, ahol a sejtek és/vagy molekulák között kóros hidrofób interakció játszódik le. Ügy gondoljuk, hogy ezeket az interakciókat (1) a fibrinogén normálisnál magasabb koncentrációja; (2) intravaszkuláris vagy helyi szolubilis fibrin, elsősorban nagy molekulatömegű fibrin képződése; (3) a hajszálér-rendszerben tapasztalható fokozott súrlódás; vagy (4) a vérkomponenseket érő vagy ·· · * * · · · ·· • · · · · · · • · · · « mechanikai vagy kémiai sérülés (trauma) okozza. Ezek a rendellenességek a vérkomponensek (sejtek és molekulák) kóros hidrofób interakcióinak fokozódását okozzák. Úgy tartjuk, hogy a fibrin, különösen a szolubilis fibrin fokozza a sejtek egymáshoz tapadását, jelentősen növeli a kis véredények súrlódását, s fokozza a vér viszkozitását (különösen alacsony nyíróerőknél). Ogy gondoljuk, a felületaktív kopolimerek hatásai lényegében kenőhatások, mivel csökkentik az adhézió okozta súrlódást.

A kereskedelemben kapható felületaktív polioxipropilén/polioxi-etilén blokk kopolimerek általában antioxidánsokat tartalmaznak. A poloxamer 188 készítmény, amely a BASF-től (Parsippany, New Jersey, USA) szerezhető be, BHT-t (butilezett hidroxi-toluolt) tartalmaz. Ez az antioxidáns gyógyszerészeti alkalmazáshoz nem hitelesített. Ezenfelül, az antioxidánsok vizes közegben hidrofóbok és oldhatatlanok, s néhányuk toxicitási problémákat is okoz. Ez gyógyászati alkalmazáshoz való injektálható oldat esetében nyilvánvalóan nem kívánatos. Ennek megfelelően, a találmány egyik tárgya blokk kopolimerek vizes oldata, amely lényegében mentes az ilyen antioxidánsoktól.

A blokk kopolimer oldatokban az antioxidáns hiánya a kopolimerek oxicióját és lebomlását eredményezi, ami rövidebb láncú molekulák és melléktermékek, mint például szerves savak (pl. ecetsav) megjelenéséhez vezet, ami az oldat pH-jának 4-re vagy még alacsonyabb értékre való • ·

- 4 csökkenését eredményezi. Azt is tapasztaltuk, hogy minél alacsonyabb a pH, annál gyorsabb és alaposabb a kopolimer lebomlása. Következésképpen, a találmány egyik tárgyát blokk kopolimerek vizes oldata képezi.

Az EP-A-103290 számú európai szabadalmi leírásban elektrolitok és pufferek hozzáadásával fiziológiailag elfogadható pH értékre (előnyösen 6-8-ra) beállított vizes polioxi-propilén és polioxi-etilén gyógyszerészeti készítményeket írnak le. Az említett szabadalmi leírásban azonban polioxi-propilén/polioxi-etilén blokk kopolimerből készült gyógyszerészeti készítményt nem írnak le, s az ilyen polimerrel kapcsolatos, fentebb említett hátrányokról sem írnak. Hasonlóan, a 4 938 961 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban polipropilén-glikol vizes oldatát írják le, de polioxi-propilén/polioxi-etilén blokk kopolimer oldatokról nem tesznek említést.

A találmány további tárgya polioxi-propilén/polioxi-etilén blokk kopolimer injektáláshoz, elsősorban intravénás injektáláshoz alkalmas vizes oldata.

Ilyenformán, olyan gyógyszerészetileg megfelelő, lezárt tartályt bocsátunk rendelkezésre, amely vákuumban vagy inért atmoszférában az I. képlet szerinti blokk kopolimer

HO(C₂H4O)b(C3HeO)_a(C2H4O)toH (I) injektálható, steril vizes oldatát tartalmazza, mely oldat lényegében mentes az antioxidánsoktól, és 5,5-6,5 pH-ra • * 4 · ···«

puffereit. Az I. képletben a jelentése olyan egész szám, mellyel a (CsHeO) hidrofób rész molekulatömege 950-4000 Dalton, előnyösen körülbelül 1200-3500 Dalton, és b jelentése olyan egész szám, mellyel a (C2H4O) hidrofil rész a kopolimer 50-95 m/m %-át teszi ki.

Az I. képlet szerinti előnyben részesített blokk kopolimerben a (CsHsO) hidrofób rész molekulatömege hozzávetőleg 1750 Dalton, s a kopolimer teljes molekulatömege hozzávetőleg 8400 Dalton. Az ilyen blokk kopolimerre konkrét példa a poloxamer nevű kopolimer (BASF, Parsippany, New Jersey, USA). A poloxamerek és poloxamin blokk kopolimerek leírása megtalálható: Schmolka, I.R.: A Review of Block Polymer Surfactants, J. AM. 0IL CHEMISTS SOC., 54, 110-116, (1977), melyet hivatkozásul említünk.

A poloxamer 188 kereskedelemben beszerezhető forrásainak megállapított molekulatömege hozzávetőleg 8400 Dalton. A valóságban a blokk kopolimerek 3000 Daltonnál kevesebbtől 20 000 Daltonnál többig terejedő molekulatömeggel rendelkező molekulákból állnak. A kereskedelmi poloxamer 188 molekuláris diverzitása és megoszlása áteresztő gél kromatográfia alkalmazásával detektált széles primer és szekunder csúcsokkal jellemezhető (W0 92/16484).

A nagy molekulatömegű komponensek, azaz a 15 kD-nál nagyobb molekulatömegűek, a kereskedelmileg beszerezhető poloxamer 188-ban normálisan a blokk kopolimerre vonatkoztatva 3 m/m % • 9 vagy még nagyobb arányban vannak jelen. Ez a jelentős mennyiség a blokk kopolimer klinikai alkalmazásakor nem kívánatos mellékhatásokat okozhat. Ezen komponensek eliminációs felezési ideje a kopolimer nagyobb hányadáénál hosszabb, s ezáltal felhalmozódnak a vérplazmában és a vesékben. Ráadásul, a nagy molekulatömegű komponensek felelősek lehetnek a komplement rendszer aktiválásáért. Ennek megfelelően, előnyös, ha a találmány szerinti blokk kopolimer legalább lényegében mentes a 15 kD-nál nagyobb molekulatömegű molekuláktól, vagyis 1 m/m %-nál, lehetőleg 0,5 vagy 0,2 m/m %-nál kisebb mennyiségben tartalmaz ilyeneket.

A polimer molekulatömeg megoszlásának standard mérőszáma a polidiszperzitás, amelyet a W092/16484 nemzetközi közzétételi számú szabadalmi leírásban írtak le (melyet hivatkozásul említünk). 1,0 értékű polidiszperzitás olyan polimert jelent, melyben valamennyi molekula egyforma molekulatömegű. Egy tipikus polimer polidiszperzitása 2-től

5-ig terjed. A találmány szerinti polioxi-propilén/polioxietilén blokk kopolimer polidiszperzitása lehetőleg 1,4-nél, előnyösen 1,3-nél vagy 1,2-nél, vagy méginkább 1,1-nél kisebb.

A felületaktív blokk kopolimer etilén-oxid és propilén-oxid magas hőmérsékleten és nyomáson, bázikus katalizátor jelenlétében végzett kondenzációjával állítható elő. Az egyes kopolimerekben polimer láncot képezve egyesülő monomer

- 7 egységek számát illetően azonban léteznek statisztikai variációk. A megadott molekulatömeg értékek az egyes készítmények kopolimer molekulái átlagos tömegének megközelítő értékei. Ezen kopolimerek előállításának részletesebb leírása a 2 674 619 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban található. A blokk kopolimerek előnyben részesített alakjai, azaz a 15 kD molekulatömegű molekuláktól jelentős mértékben mentes alakok, vagy amelyek polidiszperzitása 1,4-nél kisebb, a W092/16484 nemzetközi közzétételi számú szabadalmi leírásban leírt eljárással állíthatók elő.

Bizonyos kereskedelmileg beszerezhető blokk kopolimerek, mint a poloxamer 188, antioxidánst tartalmazó formában létezhet. A találmány szerinti felhasználást megelőzően az antioxidánst el kell távolítani a kopolimerből, például szűréssel vagy más, ismert módszerrel. A blokk kopolimer azonban előnyösen olyan formában szerezhető be, amely már mentes az antioxidánstól.

Az injektálható vizes oldatban a blokk kopolimer mennyisége lehetőleg 135-165 mg/ml, előnyösen 150 mg/ml. Az injektálható vizes oldat pH-ja előnyösen kb. 6.

Az injektálható vizes oldat kívánt pH értékét pufferrel állítjuk be. Az ilyen pufferre példa a citrát puffer (pl. nétrium-citrát/citromsav). A puffer, különösen a citrát puffer koncentrációjának lehetőleg 0,005-0,05 M-nak,

előnyösen 0,01 M-nak kell lenni.

Bár a vízen kívül tetszés szerint gyógyszerészetileg megfelelő közös oldószer is jelen lehet, előnyös, ha az injektálható vizes oldat közege teljes vagy jelentős mennyiségben víz.

Az injektálható vizes oldat a beteg vérszéruméval lehetőleg olyan tonicitást mutat, amely kiküszöböli a nem kívánatos mellékhatásokat. Ha az injektálható vizes oldat tonicitásának fokozására van szükség, az oldat tonicitásának kívánt szintre való emelésére képes, gyógyszerészetileg megfelelő szer hozzáadásával lényegében izotóniás oldat nyerhető. Ilyen szer példái jól ismertek, s közéjük tartoznak a dextróz és nátrium-klorid, valamint ezek >

elegyei.

Az injektálható vizes kezeléssel sterilezhető oldat filtrációval vagy autoklávos

Az injektálható vizes oldat elkészítését és gyógyszerészetileg megfelelő tartályokba töltését előnyösen ismert eljárások szerint végezzük, olyan körülmények között, melyekkel minimálisra csökkenthető az oxigén oldatban vagy oldat feletti térben való jelenléte.

A gyógyszerészetileg megfelelő tartályok példái közé tartoznak a műanyag és üveg tartályok, mint a fiolák,

ampullák és palackok. A tartályok az injektálható vizes oldatra ható UV fény és a lehetséges lebomlás mérséklése érdekében tetszés szerint színezhetők, például borostyánsárgára. Más lehetőség szerint, a tartályokat színtelenül hagyva átlátszatlan kartonba csomagolhatok.

Az injektálható vizes oldatot előnyösen inért atmoszférában, esetünkben nitrogéngázban tartjuk.

A felületaktív kopolimerek olyan keringési rendellenességek kezelésében alkalmazhatók, melyeket a vérkomponensek kóros hidrofób interakciója okoz, vagy amelyek ezen interakciókat okozzák. Az ilyen rendellenességek közé tartoznak a szívinfarktus, agyvérzés, a bél vagy más szövet infarktus, a rosszindulatú betegségek, a felnőttkori légzési fájdalom szindróma (ARDS), disszeminált intravaszkuláris véralvadás (DIC), cukorbetegség, labilis angina pectoris, érfalkő kialakulásával járó urémia szindróma, vörösvérsejt széthullásos szindróma, hőguta, visszatartott magzat, rángógörcs, rosszindulatú magas vérnyomás, sarlósejtes vérszegénység, égések, zúzódásos sérülések, törések, traumaképző sokk, nagysebészet, vérmérgezés, a véralvadási rendszer aktiválását elősegítő baktérium-, parazita-, vírusés rickettsia-fertőzés, központi idegrendszer sérülés (bármilyen nagysebészet ideje alatt vagy közvetlen utána).

A felületaktív kopolimer hatásos a veszélyeztetett vérállátású, sérülést nem szenvedett szövetek felé irányuló • · · kollaterális keringés fokozásában is. Az ilyen szövetek gyakran szomszédosak az érelzáródásos terlületekkel. Ogy tűnik, ez a mechanizmus a hajszálerekben csökkenti a kóros hidrofób interakciókat. A keringési rendellenességek (melyek esetében a felületaktív kopolimerek hatásosak) közé tartozik az agytrombózis, agy embólus, szívinfarktus, labilis angina pectoris, az agy átmeneti vérellátási hiánya (isémia), az időszakos sántítás (claudicatio intermittens), a plasztikai és helyreállító sebészet, a levegőtelítéses érplasztika, a perifériás érsebészet és az ortopéd sebészet (különösen érsajtó [tourniquet; Esmarch-pólya] alkalmazása esetén). A kopolimerek szervek transzplantációhoz történő tartósítására is alkalmazhatók.

A blokk kopolimer injektálható vizes oldata bólus injekcióval, vagy előnyösen infúzióval adható be a kezelt személynek. A perifériás véna.

beadás alkalmas helye normális esetben

A bólus injekciót rendszerint két perces időtartam alatt adjuk be. Az infúziós kezelést általában infúziós tasakban, palackban, vagy elektronikus működtetésű infúziós pumpában lévő oldat alkalmazásával végezzük. Az oldatot az infúziós tasakból vagy palackból gravitációs erővel vagy infúzós pumpa alkalmazásával juttathatjuk a betegbe.

A blokk kopolimer keringési rendellenességben szenvedő beteg kezeléséhez hatásos mennyisége természetesen számos faktortól függ, köztük például a beteg életkorától és

testtömegétől, a kezelést igénylő pontos állapottól, a beadás módjától, s végső soron a kezelőorvos megítélésétől. A hatásos dózis azonban általában 0,2 g/testtömegkilogrammtól 3,0 g/testtömeg-kilogrammig, előnyösen 1,5 g/testtömeg-kilogrammtól 2,5 g/testtömeg-kilogrammig terjed, amely mennyiséget 1-48 óra alatt adjuk be a kezelt személynek.

Az alábbi példákat a találmány szemléltetése érdekében mutatjuk be.

1. példa

5000 literes adaghoz eljárást alkalmaztuk nitrogénes védelemmel)

Poloxamer 188, NF¹

Nátrium-klorid, USP

Nátrium-citrát (dihidrát), USP Vízmentes citromsav, USP Injektálható víz, USO

ÖSSZESEN az alábbi készítményt és előállítási (az eljárás egész ideje alatt kg/adag

750,00

15,40

11,90

1,83 kellő mennyiség 5000,0 liter térfogathoz (¹ 15 kD molekulatömegű molekulákból 0,2 %-nál kevesebbet tartalmaz.)

1) Hozzávetőleg 4000 liter előmelegített (70-80 °C)

injektálható vizet alkalmas edényben összegyűjtünk (1. edény), míg a többi 1000 liter előmelegített (70-80 °C) vizet egy másik edényben (2. edény) gyűjtjük össze.

2) Δ vizet mindkét edényben szűrt nitrogéngázzal fúvatjuk át, majd a folyamatos nitrogéngázos átfúvatás közben szobahőmérsékletre hűtjük.

3) A citromsavat, nátrium-citrátot és nátrium-kloridot az 1. edényben lévő, nitrogéngázzal átfúvatott vízben oldjuk, s az átfúvatást szűrt nitrogéngázzal folytatjuk.

4) Az oldat feletti teret szűrt nitrogéngázzal töltjük ki, s befejezzük a nitrogéngázos átfúvatást. Az oldathoz lassan hozzáadjuk a blokk kopolimert, s feloldódásig keverjük (az oldat feletti tér szűrt nitrogéngázzal való lefedését a keverés közben folytatjuk).

5) Az adag végtérfogatra való kiegészítéséhez korábban nitrogéngázzal átfúvatott, megfelelő mennyiségű injektálható vizet (a 2. tartályból) adunk az oldathoz.

6) Az oldatot 0,45 mikrométeres membránfilteren keresztül megfelelő, tiszta, nitrogénnel átfúvatott tartályba szűrjük.

7) Az oldat hozzávetőleg 500 ml-ét tiszta körülmények között előzetesen kimosott, 650 ml-es, 1-es típusú, kvarcüveg palackba töltjük.

8) A palackokra tiszta körülmények között megfelelő zárókupakot teszünk, anélkül, hogy azt a palackba nyomnánk.

9) Az oldat feletti térben vákuumot létesítünk, s a zárókupakot a megtöltött palackokba nyomjuk.

10) A palackok tetejét lepecsételjük.

11) A terméket sterilizáljuk.

12) A terméket szobahőmérsékletre hűtjük, majd egyenletes állományúvá keverjük.

13) A palackokat a készítmény fénytől való megóvása érdekében kartondobozokban tároljuk.

A készítmény fenti komponenseinek mennyisége 1 ml-es adagban a következő:

mg/ml

Poloxamer 188, NF¹ 150,0

Nátrium-klorid, USP 3,08

Nátrium-citrát (dihidrát), USP 2,38

Vízmentes citromsav, USP 0,366

Injektálható víz, USO kellő mennyiség

ÖSSZESEN 1,0 ml térfogathoz

Az így előállított injektálható vizes oldat szemcsés anyagtól, homályosságtól vagy zavarosságtól mentes, tiszta, • · · · ·· · · · • · · « · · · • · · · színtelen, stabil oldat, amint azt az alábbi adatok bizonyítják:

Po'loxamer 188 Bomlási termékek (ppm)

Tárolás pH D Mr* M_n j.t.% ach act pro met form

Elraktározáskor

		5,8	1,21	5718,0	4713,0	99,3	25	<1	21	<1	2
UV; 7	nap	5,8	—	NR	—	98,4	25	3	24	<1	2
14 nap	5,8	—	NR	—	99,1	20	3	20	<1	2
F. 7	nap	5,8	—	NR		100,3	24	7	25	<1	1
14	nap	5,8	—	NR	—	99,0	19	7	19	<1	1
50°C	1 h.	5,8	1,24	5438,0	4408,0	101,6	22	<1	19	<1	4
	4 h.	5,8	1,24	5418,0	4369,0	98,3	33	1	29	<1	6
40°C	4 h.	5,7	1,26	5437,0	4326,0	98,6	36	<1	33	<1	5
30°C	4 h.	5,6	1,25	5429,0	4354,0	99,2	35	1	33	<1	5

ppm:	milliomod rész	ach:	acetaldehid
D:	polidiszperzitás (Mr/Mn)	act:	aceton
NR:	nem áll rendelkezésre	pro:	propion-aldehid
F. :	fluoreszcens	met:	metanol
j . t.	: jelzett tartósság	form	: formaldehid

h.: hónap

- 15 2. példa

Az 1. példában leírt eljárást 200 literes adag előállításhoz ismételtük meg, melynek során az alábbi készítményeket alkalmaztuk, s az 1. edényben 160 liter, a 2. edényben 40 liter vizet gyűjtöttünk.

Poloxamer 188, NF¹

Nátrium-klorid, USP

ÖSSZESEN

30,00 kg

0,616 kg 0,476 kg 0,0732 kg kellő mennyiség 200,0 liter térfogathoz

A kapott injektálható, vizes oldat fizikai jellemzőit tekintve hasonló volt az 1. példában előállítotthoz. Az alábbi stabilitási adatokat kaptuk.

- 16 ν'

Poloxamer 188 Bomlási termékek (ppm)

Tárolás pH D Mn j.t.% ach act pro met form

Elraktározáskor

	5,8 1,24 5550,0	4482,0	99,8	32	<1	11,0	<1	<1
UV; 7 nap	5,7 1,28 5764,5	4509,5	99,7	23	4	24	1	3
14 nap	5,9 1,29 5789,0	4498,0	98,8	22	7	23	1	1
F. 7 nap	5,8 1,29 5852,0	4535,5	99,2	24	9	23	2	3
14 nap	5,9 1,29 5873,0	4545,5	98,1	25	12	25	2	4
50°C 1 h.	5,8 1,26 5591,5	4428,0	104,8	33	1	29	<1	7
2 h.	5,7 1,35 5411,0	3996,0	101,7	35	1	28	2	10
40°C 3 h.	5,8 1,25 5414,0	4327,0	99,6	30	<1	22	<1	8
30°C 3 h.	5,9 1,26 5328,0	4228,0	98,6	22	<1	19	<1	4

ppm: milliomod rész	ach:	acetaldehid
D: polidiszperzitás	act:	aceton
F.: fluoreszcens	pro:	propion-aldehid
j.t.: jelzett tartósság	met:	metanol

h.: hónap form: formaldehid

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Lezárt, gyógyszerészetileg megfelelő tartály, amely vákuumban vagy inért atmoszférában az I. képlet szerinti

H0(CzH40)b(C3He0)_a(C₂H40)ioH (I) blokk kopolimer (melyben a jelentése olyan egész szám, mellyel a (ΟβΗβΟ) hidrofób rész molekulatömege 950-4000 Dalton, és b jelentése olyan egész szám, mellyel a (CzH-iO) hidrofil rész a kopolimer 50-95 m/m %-át teszi ki) steril, injektálható, vizes oldatát tartalmazza.
2. Az 1. igénypont szerinti tartály, melyben a hidrofób rész molekulatömege 1200-3500 Dalton.
3. A 2. igénypont szerinti tartály, melyben a hidrofób rész molekulatömege hozzávetőleg 1750 Dalton, a blokk kopolimer teljes molekulatömege pedig hozzávetőleg 8400

Dalton.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti tartály, melyben a blokk kopolimer lényegében mentes minden olyan molekulától, melynek molekulatömege 15000 Daltonnál nagyobb.
5. A 4. igénypont szerinti tartály, melyben a 15000 Daltonnái nagyobb molekulatömegű molekulák mennyisége 1 %-nál kevesebb.
6. Az 5. igénypont szerinti tartály, melyben a 15000 Daltonnái nagyobb molekulatömegű molekulák mennyisége 0,5 %-nál kevesebb.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti tartály, melyben a blokk kopolimer polidiszperzitási értéke 1,4-nél kisebb.
8. A 7. igénypont szerinti tartály, melyben a blokk kopolimer polidiszperzitási értéke 1,3-nél kisebb.
9. A 8. igénypont szerinti tartály, melyben a blokk kopolimer polidiszperzitási értéke 1,2-nél kisebb.
10. A 9. igénypont szerinti tartály, melyben a blokk kopolimer polidiszperzitási értéke 1,1-nél kisebb.
11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti tartály, melyben a blokk kopolimer az oldat tértfogatára vonatkoztatva 135-165 mg/ml mennyiségben van jelen.
12. A 11. igénypont szerinti tartály, melyben a blokk kopolimer mennyisége az oldat tértfogatára vonatkoztatva körülbelül 150 mg/ml.
13. Az 1-12. igénypontok bármelyike szerinti tartály, melyben az oldat pH-ja körülbelül 6.

te
14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti tartály, melyben az oldat citrát pufferrel puffereit.
15. A 14. igénypont szerinti tartály, melyben a citrát puffer koncentrációja 0,005 M-tól 0,05 M-ig terjed.
16. A 15. igénypont szerinti tartály, melyben a citrát puffer koncentrációja körülbelül 0,01 M.
17. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti tartály, melyben az oldat gyakorlatilag izotóniás a humán vérszérummal.
18. Az 1-17. igénypontok bármelyike szerinti tartály, melyben az inért atmoszféra nitrogéngáz.