HUT52962A

HUT52962A - Process for production of medical compositions eliminating bone-absorption and promoting forming of bones

Info

Publication number: HUT52962A
Application number: HU89807A
Authority: HU
Inventors: Jean Honore M Feyen; Ulrich Trechsel
Original assignee: Sandoz Ag
Priority date: 1988-03-04
Filing date: 1989-02-17
Publication date: 1990-09-28
Also published as: GB8904646D0; DE3906923A1; BE1003662A4; AU3094289A; PH26238A; SE8900722L; PT89893A; DK102389A; FR2628323A1; FR2628323B1; AU621592B2; IT8947695A0; SE8900722D0; IT1230496B; GB2216412A; CA1332223C; CH680070A5; NL8900524A; GB2216412B; JPH01308234A

Description

A találmány tárgya eljárás uj, a csontielszivódást megszüntető és csontképződést elősegítő gyógyászati készítmények előállítására.

Kimutatták, hogy az interleukin-6 (röviden: IL-6) a fibroblasztok és számos más tipusu sejt által termelt citokin. Az IL-6 előállítását és - például a csontvelőre kifejtett - hatását a PCT/US 87/01611 számú PCT közrebocsátási iratban,

66180-2703-PT-tm az 1986. julius 15-én 06/885905 számon benyújtott Egyesült Államok-beli szabadalmi bejelentésben (a 88/00206 számú PCT közrebocsátási iratban) ismertették. Úgy látszik, hogy az IL-6nak több célsejtje van. Kitűnt továbbá, hogy az IL-6 az interferon béta-2 anyaggal, a B-sejtet serkentő 2. faktorral (BSF-2 faktorral), az interleukin HP-1 anyaggal és a 26K faktorral azonos. Jelenleg még nem eldöntött kérdés, vajon az IL-6 interferonnak tekinthető-e, mivel vírusok elleni hatása csekély. Közölték, hogy az IL-6 termelődése bizonyos sejtekben interleukin-1 (röviden: IL-1), valamint a daganatelhalási faktor (TNF-alfa) hatására fokozódik. Ismert továbbá, hogy mind az IL-1, mind a TNF-alfa anyagok serkentik a prosztaglandin-E£ (röviden: PGE_?) termelődését, amely a csontfelszivódás jelzője.

Az IL-6 anyaggal különösen immunológiai és hematológiai területeken végzett beható kutatás ellenére mindeddig nem ismertették az IL-6 hatásait csontok felszívódására vagy képződésére.

Felismertük, hogy az - alábbiakban meghatározott - IL-6 molekulaszerkezetü (IL-6-szerü) anyagok csontfelszivódás gátlására és csontképződés fokozására alkalmazhatók. E vegyületek felhasználhatok továbbá csontritkulás, igy az akut és/vagy krónikus, klimax utáni csontlágyulás, közöttük az elsődleges és/vagy másodlagos csontritkulás és lokalizált csontritkulás, sérülés utáni csontritkulás, Paget-féle csontbetegség (torzító csontgyulladás), valamint a rosszindulatú csontbetegségek, például a csonteredetü szarkóma következtében fellépő csontfelszivódás, hibás csontképződés - például veseeredetü hibás csontképződés -, csontlágyulás, többszörös csontmielóma, hiányos csontképződés, hiperkalcémia és csont velőgyullada's kezelésére, például antibiotikumokkal és ektopiás kalcifikálással (meszesi • ·

- 3 téssel) kombinálva.

Az alábbi eredmények azt mutatják, hogy az - alábbiakban meghatározott -IL-6-szerü anyagok

i) gátolják a PGE£ csontsejttenyészetek által történő elválasztását (1. vizsgálati módszer);

ii) gátolják a PGE£ elválasztásának például két limfokinnel, az IL-1 és a daganatelhalási faktorral előidézett serkentését csonttenyészetekben (2. vizsgálati módszer);

iii) fokozzák a csontképződést (3. vizsgálati módszer); és iv) csökkentik a csontielszivódást (4. és 5. vizsgálati módszer ) .

Kimutattuk továbbá, hogy a csontképző sejtek (oszteoblasztok) IL-6 aktivitást termelnek (6. és 7. vizsgálati módszer).

Mindezek alapján a találmány olyan uj, a csontfelszivódást megszüntető és a csontképződést serkentő gyógyászati készítmények előállítására vonatkozik, amelyek hatóanyagként ismert módon előállított IL-6-szerü anyagot tartalmaznak. Az ismert módon előállított kifejezés a találmány elsőbbségi napja előtt publikált eljárásokra vonatkozik.

E gyógyászati készítményeket a találmány szerint úgy állítjuk elő, hogy az IL-6-szerü vegyületet a gyógyszerkészitésben szokásos hígító-, vivő- és egyéb segédanyagokkal összekeverjük.

Az alábbiakban az IL-6 hatóegységén (E) az IL-6-szerü anyag olyan mennyiségét értjük, amely a B-sejtek tenyésztése során a legnagyobb mértékű serkentés felét idézi elő. E tenyésztési vizsgálatban a B13.29 tiszta sejttörzset alkalmazzuk (amely szabadon beszerezhető a következő intézményből: Central Laboratory Netherlands Red Cross, Blood Transfusion Service,

Ρ.Ο.Βοχ 9406, 1006 ΑΚ Amsterdam). Ε vizsgálatot Landsdorp és munkatársai j_ Curr. Top. Microbiol. Immunoi. 132, 105 (19862/, valamint Aarden és munkatársai /_ Eur. J. Immunoi. 17, 1411 (1987)/ specifikus meghatározási módszerével hajtjuk végre.

g x 10 egység körülbelül 1 mg polipeptidnek felel meg.

E vizsgálat során a sejteket a tenyésztőközegben szuszpendáltuk (Iscove által módosított Dulbecco-táptalajt alkalmaztuk 5 térf./térf.% borjumagzatszérummal, penicillinnel és sztreptomicinnel kiegészítve), és 5 x 10^ sejt/200 ^ul közeg mennyiségben mikrotitráló lemezre oltottuk. A sejteket 48 órán át 5 % szén-dioxidot tartalmazó nedves levegőben 37 °C hőmérsékleten tenyésztettük; a 42. óra végén 1 mCi ^H-timidint adtunk hozzá, és a sejtmagvakba beépült radioaktivitást mértük. A vizsgálandó kondicionált közeget a B13.29 sejtközeggel sorozatszerüen hígítottuk.

E vizsgálati eredmények CHO sejtek által termelt, glikozilezett IL-6-ra vonatkoznak. E terméket kívánt esetben a lipopoliszaccharidok (LPS termékek) eltávolítása céljából tisztítottuk. Az IL-1 rövidítés az interleukin-l-alfa anyagra vonatkozik.

1. Vizsgálati módszer

Az IL-6-szerü anyag körülbelül 0,01 E/ml-től körülbelül

100 E/ml-ig terjedő koncentrációban gátolta patkányok ROS 17/2.8 csontszarkóma-sejttörzsének alapszintű PGE2-elválasztását. E vizsgálat során a ROS 17/2.8 patkány-csontszarkóma sejtjeit Dulbecco-féle esszenciális minimáltáptalaj és F12 közeg 1:1 arányú, 10 % borjumagzatszérumot és 2 mM L-glutamint tartalmazó elegyében, 5¾ szén-dioxidot tartalmazó nedves levegőben 37 °C hőmérsékleten tenyésztettük. Elfolyósodáskor a sejteket a fentebb meghatározott koncentrációban IL-6-szerü anyaggal kezeltük.

óra tenyésztés után a közeg alikvot részében standard radioimmun-méréssel meghatároztuk a PGE₂~t.

Az IL-6 alkalmazásával az alábbi eredményeket kaptuk:

Az IL-6 koncentrációja E/ml-ben PGE₂ pg/ml-ben (pikogramm/ml-ben)

0 (kontroll)	184
0,1	151
1,0	128
10	118
Vizsgálati módszer

Az IL-6-szerü anyag körülbelül 10 E/ml-től körülbelül 100 E/ml-ig terjedő koncentrációban csökkentette egerek koponyasejtjeinek IL-1 és daganatelhalási faktor által serkentett PGE₂~ termelését.

E vizsgálat során előbb egér koponyájából sejttenyészetet állítottunk elő.

Újszülött (5-6 napos) CD-1 törzsű egerekből homlok- és falcsontokat metszettünk ki, ezeket a szagittális varrat mentén átvágtuk, majd 2 ml BGJ közegben, amely 1 mg/ml szarvasmarha-szérumalbumint, penicillint és sztreptomicint tartalmazott, 35 mm méretű szövettenyésztő üregekben tenyésztettük. 24 óra előtenyésztő időszak után a közeget olyan BGJ tenyésztőközeggel cseréltük ki, amelyet 10 egység/ml koncentrációban lL-1-vel vagy 10 ng/ml koncentrációban TNF-alfa anyaggal, valamint a fentebb meghatározott koncentrációban IL-6-szerü anyaggal egészítettünk ki, és a tenyésztést további 48 órán át folytattuk. A tenyésztés teljes időtartama alatt a több tenyésztőüreget tartalmazó lemezeket percenként 15 rezgéssel rázattuk 5¾ szén-dioxidot tartalmazó nedves levegőben 37 °C hőmérsékleten. Ezután a koponyasejteket tartalmazó közeget összegyűjtöttük, és 4 °C-on tároltuk. A közeg alikvot részében radioimmun-méréssel határoztuk meg a PGE£ termelt mennyiségét.

Az IL-6 alkalmazásával az alábbi eredményeket kaptuk.

E/ml IL-l-vel végzett stimulálás esetén:

Az IL-6 koncentrációja E/ml-ben	PGE2 pg/ml-ben
0	4800
10	4400
100	500*
^Egyenértékű a kontrollértékkel	IL-6 általi stimulálás nélkül
10 ng/ml TNF-alfa-val végzett stimulálás esetén:
Az IL-6 koncentrációja E/ml-ben	PGE₂ pg/ml-ben
0	3300
10	1200
100	800*
*Kontrollérték stimulálás nélkül	: 500 pg/ml.
Ha a PGE2 elválasztásának	stimulálását a 10 mól/liter

koncentrációban adott, nem-limfokin mellékpajzsmirigyhormonnal váltottuk ki, akkor a prosztaglandin-szintézis csekély gátlása még megfigyelhető volt.

Az IL-6 koncentrációja E/ml-ben PGE2 pg/ml-ben

0	3700
10	3450
100	3300

A fenti vizsgálati módszer alkalmazása során az IL-6 nem fejtett ki hatást nem stimulált csonttenyészetek PGE2-szintézisére.

, «

3. Vizsgálati módszer

Az IL-6-szerü anyagok fokozzák a csontképződést. Ezt kimutattuk ^H-prolinnak patkánymagzat-koponyacsont kollagén és nemkollagén fehérjéibe való fokozott beépülésével.

21-napos patkánymagzatból kimetszett homlok- és falcsontokból a szagittális varrat hosszanti átvágása után koponyacsontszervtenyészetet állítottunk elő. A tenyésztést Kream és munkatársai módszerével végeztük /_ Endocrinology 116, 296 (19852/·

Az IL-6-szerü anyagokat 2 ml térfogatú tenyészethez 1-100 egység mennyiségben adagoltuk, a tenyésztést 24-48 órán át végeztük.

Abból a célból, hogy mennyiségileg követhessük a ^H-prolin beépülését kollagenázzal emészthető fehérjékbe, másrészt nem-kollagén természetű fehérjékbe, a csonthomogenizátumokat baktérium-eredetű kollagenázzal emésztettük Diegelmann és Peterkofsky /_ Dev. Bioi. 28, 443 (197227 Kream és munkatársai által módosított módszerével [_ Endocrinology 116, 296 (19852.7·

4. Vizsgálati módszer

Az IL-6-szerü anyagok csökkentik a csontfelszivódást. Ezt a

Ca csontból történő felszabadulásának csökkenésével mutattuk ki. E vizsgálatot Raisz vizsgálati elveinek megfelelően végeztük /~J. Clin. Invest. 44_, 103 (196527Terhes patkányokat terhességük 18. napján szubkután utón

Ca-val kezeltünk. A placebot, illetve az IL-6-szerü anyagot állatonként 1-100 E mennyiségben szintén szubkután utón adagoltuk. A 19. napon az állatokat leöltük, és a magzatokat kivettük. Az orsócsontok és singcsontok mineralizált részét kimetszettük és tenyésztettük. A felszívódást a Ca csontültetvényben végbemenő felszabadulásával mennyiségileg értékeltük.

• · · ·

5. Vizsgálati módszer

Az IL-6-szerü anyagok csontielszivódást csökkentő hatását az oszteoklaszt sejtek számának a csökkenésével és a csontok sűrűségének növekvésével mutattuk ki az alábbi módon.

6-8 hetes, növekvésben lévő, körülbelül 20 g súlyú egereket alkalmaztunk. Az IL-6-szerü anyagokat körülbelül 0,1 yug-tól kö-

szubkután utón a koponya tetején, például a koponya homloki és halántéki csontjai fölött adagoltuk. Az injekciós adagolást

3-10 napon át naponta egyszer végeztük. A kezelés befejezése után 5 nappal, 7 nappal, illetve 2 héttel az állatokat leöltük, és koponyacsontjaikat szövettani vizsgálatnak vetettük alá: például a homlok- és halántékcsontokat fixáltuk, és metszeteket készítettünk, amelyeket beágyaztunk. A kontrollállatokhoz viszonyítva a csontképződés növekvését morfológiai alapon - például a csontsűrűség növekvésével és az oszteoklaszt sejtek számának a csökkenésével - értékeltük (erre a célra a savanyu foszfatázzal szemben ellenálló tartarátos festést alkalmaztuk).

A kontrollállatokhoz képest a koponyacsontok - például a homlok- és halántékcsont - képződésének fokozódását figyeltük meg morfológiai alapon, például a csontnövekedés fokozódása, valamint az oszteoblasztok számának növekedése alapján.

6. Vizsgálati módszer

A forbol-12-mirisztát-13-acetát (PMA) (amely ismert módon stimulálja IL-6 felszabadulását nem-csonteredetü sejttenyészetekben) 2-200 ng/ml koncentrációban, valamint az IL-1 1-20 egység/ml koncentrációban vagy a mellékpajzsmirigyhormon (PTH) 10~⁷-₁₀-¹⁰ M koncentrációban stimulálja az IL-6-szerü aktivitás felszabadulását az emberi oszteoblasztokhoz hasonló Saos-2 sejtekből.

E vizsgálat során oszteoblasztos emberi Saos-2 csontszarkóma-sejttörzset tenyésztettünk McCoy-féle 5A közegben - amelyet 15 térf./térf.% borjumagzatszérummal, penicillinnel, sztreptomicinnel és 2 mM L-glutaminnal egészítettünk ki - 5¾ szén-dioxidot tartalmazó nedves levegőben 37 °C hőmérsékleten. Az elfolyósodás időpontjában a sejtekhez olyan közeget adtunk, amely 2-10¾ borjumagzatszérumot tartalmazott, s amelyet a különböző vizsgálandó hatóanyagokkal egészítettünk ki. A Saos-2 sejtek közegét 48-órás, illetve 72-órás stimulálási időszak után összegyűjtöttük, és 4 °C hőmérsékleten tároltuk.

AZ IL-6-szerü aktivitást a szokásos ^H-timidin-beépülési vizsgálattal végeztük az alábbi módon.

Saos-2 sejtek kondiciált tenyésztőközegében az IL-6 aktivitás jelenlétét a fentiekben kifejtett B-sejt-tenyésztő vizsgálattal (B13.29 törzs alkalmazásával) mértük. 48 órán belül jelentős mennyiségű IL-6 aktivitást mutattunk ki.

Példaként alábbi eredményeinket említjük.

Borjumagzatszérum: 2 a kondiciált közeget tízszeresére hígítottuk.

x

Stimulálószer A beépült H-timidin cpm-ben

Nincs	874
PMA (20 mg/ml)	61015
IL-1 (10 egység/ml)	23189
PTH (10~⁸ M)	1287

Háttérzaj: 400 cpm; a maximális beépülés 66 000 cpm.

x

Kontrollkisérletben, stimulálás nélkül, kimutatható mennyiségű IL-6-szerü aktivitást nem figyeltünk meg.

7. Vizsgálati módszer

A 2. vizsgálati módszer kivitelezése során alkalmazott egér-koponyasejtek kontrolikörülmények közötti 48-órás tenyésztése jelentős IL-6 aktivitást (20 000 cpm) eredményezett. Ezt stimulálta 1-100 ng/ml koncentrációban jelenlévő PMA vagy 10 ⁷-10 M koncentrációban jelenlévő mellékpajzsmirigyhormon (ΗΡΤΗ^_-^^).

A ^H-timidin beépülésén mért eredményeink (cpm-ben) az alábbiak:

	Hígítás	Kontroll	PMA 100 ng/ml	PMA 10' ng/ml	PMA 1 ng/ml
1	10	39919	47510	37679	48150
2	100	9075	48239	36162	18145
3	1000	680	27694	17687	1370
4	10000	346	5885	2545	580
5	100000	305	595	572	411

	PTH	PTH	PTH	PTH
	10-⁷ M	10^-8 M	10⁹ M	10^_1° M
1	12326	14638	16252	35897
2	23222	26885	30172	13073
3	22816	18503	9059	827
4	1935	1279	1095	531
5	336	452	682	678

A fentiek alapján a találmány révén az alábbi lehetőségek adódnak:

i) Módszer csontielszivódás megakadályozására, csontképződés fokozására, csontritkulás vagy csontizületi gyulladás vagy bármilyen más, fentebb említett kóros állapot kezelésére; e módszer abban áll, hogy egy ilyen kezelésre szoruló egyén számára IL-6-szerü anyag terápiásán hatásos mennyiségét adagoljuk.

ii) IL-6-szerü anyag alkalmazása olyan gyógyszer gyártásában, amely csontfelszivódás megakadályozására, csontképződés fokozására, csontritkulás, csontizületi gyulladás vagy bármilyen más, íentebb említett kóros állapot kezelésére alkalmas.

iii) IL-6-szerü anyag alkalmazása csontfelszivódás megakadályozására, csontképződés fokozására, csontritkulás, csontizületi gyulladás vagy bármilyen más, fentebb említett kóros állapot kezelésére.

ív) IL-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyszer előállítása csontfelszívódás megakadályozására, csontképződés fokozására, csontritkulás, csontizületi gyulladás vagy bármilyen más, fentebb említett kóros állapot kezelésére.

IL-6-szerü anyagon értünk minden olyan vegyületet, amelynek szerkezete lényegében az ismert interleukin-6 szerkezetével azonos, és hatásspektruma az ismert interleukin-6 hatásspektrumával azonos (lásd a bevezetőben említett PCT bejelentést vagy Landsdorp és Aarden idézett közleményeit a specifikus tenyésztéssel végzett mérés vonatkozásában), vagy a fentebb említett faktorokéval azonos, amilyen például az interferon-béta-2 (lásd például a • «

220 574 A számú európai közrebocsátási iratot, a 88/00206 számú PCT közrebocsátási iratot és a 257 406 számú európai szabadalmi leírást). E közlemények tartalmát (amelyeket az alábbiakban interleukin-6 közlemények-nek nevezünk) e leírásunkba hivatkozásként beépítjük.

Az IL-6-szerü anyag glikozilezett lehet - például az arginincsoportokban és például E. coli vagy CHO sejtekből állítható elő.

Amint leírták, az IL-6-szerü anyag 212 aminosavból álló polipeptid, amelyben kívánt esetben az első vagy utolsó metionin-aminosavcsoport, sőt az egész nem kódoló rész - azaz az első 28 aminosav - a Met-Asn-tól a Phe-Pro-Ala-egységig bezárólag mellőzhető .

Az IL-6-molekulából két vagy három vagy még több aminosav hiányozhat, hozzátehető vagy más aminosavakkal cserélhető úgy, hogy az IL-6 hatékonysága megmarad, és a fentebb említett kezelési módszerek alkalmazása során hatásos.

Az IL-6-szerü anyag megjelölés ezeket az analógokat és bármely olyan vegyületet is magában foglal, amely az IL-6 aktivitását csontkulturákban szelektíven stimulálja, különösen, ha a vegyület szelektív olyan értelemben, hogy más faktorokra vagy a csontielszivódás más utón való befolyásolására csak lényegtelen hatást fejt ki.

Az IL-6-szerü anyag fenti fogalma tehát magában foglalja az (I) képletű vegyületet, valamint olyan (I) képletű vegyületeket is, amelyek például az N-terminális csoporton további aminosavakat, például Ala vagy Met egységet tartalmaznak; az IL-6-szerü anyag fenti fogalma magában foglalja továbbá a (II) képletű ve13 gyületet is, amelyben X az (I) képletű aminosavszekvenciát jelenti.

Az IL-6-szerü anyag fenti fogalma olyan vegyületeket is magában foglal, amelyekből az IL-6 egy vagy több aminosavcsoportja hiányzik, vagy amelyekben egy vagy több aminosavat helyettesítünk, például a

PRO VAL PRO PRO GLY GLU ASP SER LYS

ASP VAL ALA ALA szekvencia beépítésével N-terminális szekvenciaként úgy, hogy ennek során a fennmaradó rész szekvenciája lényegében azonos marad.

Ezen alkalmazási területeken a megfelelő dózis természetesen az alkalmazott IL-6-szerü anyagtól, a hatóanyag befogadójától, az adagolás módjától, valamint a kezelendő kóros állapot jellegétől és súlyosságától függ; állatokon általában kielégítő eredményeket érhetünk el körülbelül 0,5 yug/kg-tól körülbelül 20 /ug/kg-ig terjedő mennyiségű hatóanyag adagolásával. Nagyobb emlős állatok, különösen emberek esetében a javasolt napi adag körülbelül 25 /Ug-tól körülbelül 1000 yug IL-6-szerü hatóanyag, amelyet célszerűen naponta 2-4 részdózisra elosztva adagolunk.

Az IL-6-szerü anyagok bármilyen szokásos módon, különösen enterálisan, például tabletták vagy kapszulák alakjában, vagy előnyösen parenterálisan - például befecskendezhető oldatok vagy szuszpenziók alakjában - adagolhatok.

AZ IL-6 adagolására alkalmas módszerek és galenikus készítmények leírása megtalálható például a fentebb említett IL-6 közleményekben.

Az előnyös vegyűlet az interleukin-6 (IL-6). E vegyűlet adagolása naponta 25-125 ug mennyiségben szubkután utón javasolt ·«·· ···· • · · · · · ·· ·4 » · • · · · · · • · · · · ·

- 14 “ nagyobb emlősállatok, például emberek esetében.

A gyógyászati készítmények az IL-6-szerü anyagot legalább egy, gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyaggal vagy higitószerrel összekeverve tartalmazhatják. Ezeket a készítményeket a szokásos módon állíthatjuk elő. Az adagolási egységek az IL-6szerü anyagot például körülbelül 4 yug-tól körülbelül 500 yug-ig terjedő mennyiségben tartalmazzák.

A jelen találmány révén lehetővé válik végül olyan csomagolás kialakítása, amely az IL-6-szerü hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítményt és a fentebb meghatározott kezelési módszerre vonatkozó használati utasítást tartalmazza.

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás hatóanyagként interleukin-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve , hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógyszerkész i tésben szokásos hígító-, vivő- és segédanyagokkal összekeverve csontfelszivódást megszüntető hatású gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
2. Eljárás hatóanyagként interleukin-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve , hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógyszerkészitésben szokásos hígító-, vivő- és segédanyagokkal összekeverve csontképződést elősegítő gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
3. Eljárás hatóanyagként interleukin-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve , hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógyszerkészitésben szokásos hígító-, vivő- és segédanyagokkal összekeverve csontritkulás kezelésére alkalmas gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
4. Eljárás hatóanyagként interleukin-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve , hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógyszerkészitésben szokásos hígító-, vivő- és segédanyagokkal összekeverve csontizületi gyulladás kezelésére alkalmas gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
5. Eljárás hatóanyagként interleukin-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal j e 1 1 e mezve, hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógy«· ·· ···· ··»· • · · · · · ·· ·· · · * · · · · · ·· ·♦ · · szerkészitésben szokásos higitó-, vivő és segédanyagokkal összekeverve Paget-féle csontbetegség és/vagy rosszindulatú csontbetegségek okozta csontielszivódás és/vagy csontlágyulás és/vagy többszörös csontmielóma és/vagy hiányos csontképződés és/vagy csontvelőgyulladás kezelésére alkalmas gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
6. Eljárás hatóanyagként interleukin-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve , hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógyszerkészitésben szokásos hígító-, vivő- és segédanyagokkal összekeverve többszörös csontmielóma kezelésére alkalmas gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
7. Eljárás hatóanyagként interleukin-6-szerü anyagot tartalmazó gyógyászati készítmény előállítására, azzal jellemezve , hogy az ismert módon előállított hatóanyagot a gyógyszerkészitésben szokásos hígító-, vivő- és segédayangokkal összekeverve hiperkalcémia kezelésére alkalmas gyógyászati készítménnyé alakítjuk.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy interleukin-6-szerü hatóanyagként interleukin-6-ot alkalmazunk.
9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy interleukin-6-szerü hatóanyagként az (I) képletű polipeptidet alkalmazzuk.
10. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy interleukin-6-szerü hatóanyagként Ala-X képletű polipeptidet alkalmazunk, ahol X az (I) képletű aminosavszekvenciát jelenti.
11. A 8. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , • · · · · · ·· ·· · · * · · · « · ·· ·· · · hogy interleukin-6-szerü hatóanyagként Met-Ala-X képletű polipeptidet alkalmazunk, ahol X az (I) képletű aminosavszekvenciát jelenti.
12. A 9. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy interleukin-6-szerü hatóanyagként a

PRO VAL PRO PRO GLY GLU ASP SER LYS

ASP VAL ALA ALA aminosavszekvenciát tartalmazó, interleukin-ó-szerü polipeptidet alkalmazunk.
13. Gyógyszercsomag, azzal jellemezve , hogy interleukin-6-szerü hatóanyagot tartalmazó gyógyászati készítményt és a kezelési módszerre vonatkozó használati utasítást foglal magában.