HUP0103262A2 - Platina-komplex vegyületeket tartalmazó gyógyszer valamint alkalmazása - Google Patents

Description

P0 1 032 B2

71.960/SZE

S.B.G. & K.

Nemzetközi Szabadalmi Iroda

H-1062 Budapest. Andrássy út 113. Telefon: 34-24-950, Fax: 34-24-323

Platina-komplex vegyületeket tartalmazó gyógyszer valamint alkalmazása

A jelen találmány tárgyát platina-komplexeket tartalmazó gyógyszerek valamint ezen gyógyszerek tumorbetegségek kezelésére történő alkalmazása képezi.

Jelenleg a rákos megbetegedéseket az operációt megelőzően és/vagy azt követően gyógyszeres terápiával vagy radioterápiával kezelik. A gyógyszeres tumorterápiánál, azaz a kemoterápiánál olyan vegyületeket alkalmaznak, amelyek a rák növekedését küI lönböző módokon befolyásolják. Ugyanakkor, a kemoterápiánál gyakran lépnek fel súlyos, a páciens számára kellemetlen mellékhatások, így például hajhullás, rosszullét, hányás, fáradtság, csontvelő- valamint fehérvérsejt-károsodás. Ez különösen igaz az eddig alkalmazott platinavegyületekre, így például a ciszplatinára vagy a karboplatinára. Gyakran lépnek fel többé-kevésbé súlyos másodlagos fertőzések is. Ezen kívül nem minden tumorfajta kezelhető kemoterápiával, így például a vesesejt-karcinóma és a gyomor-bél traktus tumorai sem.

Ennek megfelelően, a találmány feladata egy hatékony, a rákos megbetegedések kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmény előállítása. A gyógyszernek már kis dózisokban történő beadás esetén is hatásosnak, az egészséges sejtekre nézve a lehető legkevésbé toxikusnak kell lennie, és kevés mellékhatással kell rendelkeznie. Ezen túlmenően a helyi kemoterápiánál történő felhasználásra illetve az ambuláns beadásra is alkalmasnak kell lennie, csökkentenie kell a visszaesés veszélyét, és hosszabb tárolás alatt sem vesztheti el hatását.

Meglepő módon, azt tapasztaltuk, hogy a platinából és xantogenátokból álló komplexek stabil, kiváló tumorellenes hatású vegyületeknek bizonyultak.

Ennek megfelelően a találmány tárgyát olyan gyógyszerek képezik, amelyek az (I) általános képletű platina-komplexeket tartalmazzák, ahol

Rí és R₂ jelentése egymástól függetlenül egyenes vagy elágazó

I szénláncú 1-30 szénatomos alkilcsoport, egyenes vagy elágazó szénláncú 2-30 szénatomos alkenil-csoport, 3-30 szénatomos mono- vagy policiklusos alkilcsoport, 4-30 szénatomos mono- vagy policiklusos alkenil-csoport vagy 6-30 szénatomos mono- vagy policiklusos aromás csoport, ahol az előbbiekben felsorolt csoportok adott esetben egy vagy több szubsztituenssel helyettesítettek lehetnek.

Rí és R2 jelentése lehet azonos vagy különböző.

Rí és R2 jelentése előnyösen 1-14 szénatomos alkilcsoport vagy 3-14 szénatomos cikloalkil-csoport.

Rí és R2 jelentése különösen előnyösen etilcsoport.

A jelen találmány keretein belül minden egyenes vagy elágazó szénláncú 1-30 szénatomos alkilcsoport alkalmazható. Ilyenek lehetnek például a metil-, etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil, terc-butil-, η-butil-, n-hexil-, 2-metil-pentil-, 2,3-dimetil-butil-, η-heptil-, 2-metil-hexil-, 2,2-dimetil-pentil-, 3,3-dimetil-pentil-, 3-etil-pentil-, η-oktil-, 2,2-dimetil-hexil-, 3,3-dimetil-hexilvagy 3metil-3-etil-pentil-csoportok. A jobb oldhatóság miatt előnyösek a rövid alkilláncok, így például a metil-, etil-, propil vagy izopropilcsoportok.

A jelen találmány keretein belül minden egyenes vagy elágazó szénláncú 2-30 szénatomos alkiléncsoport alkalmazható. Ilyenek például a vinil-, propenil-, izopropenil-, allil-, 2-metil-allil-, butenil- vagy izobutenil-, hexenil- vagy izohexenil-, heptenil- vagy izoheptenil, vagy oktenil- vagy izooktenil-csoportok. Előnyösen vinil-, propenil vagy izopropenil-csoportokat alkalmazunk.

A jelen találmány keretein belül 3-30 szénatomos cikloalkil-csoportként bármely 3-30 szénatomos cikloalkil-csoportot felhasználhatjuk. Ilyenek lehetnek például a ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil vagy ciklohexil-, cikloheptil-, ciklooktil-, ciklononilvagy ciklodecil-csoportok. Előnyösen ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil- vagy ciklohexil-csoportokat alkalmazunk.

A jelen találmány keretein belül 4-30 szénatomos cikloalkenil-csoportként bármely 4-30 szénatomos cikloalkenil-csoportot felhasználhatjuk. Ilyenek lehetnek például a ciklobutenil-, ciklopentenil- vagy ciklohexenil-, cikloheptenil-, ciklooktenil-, ciklononenil- vagy ciklodecenil-csoportok. Előnyösen ciklobutenil-, ciklopentenil- vagy ciklohexenil-csoportokat alkalmazunk.

Policiklusos alkil- illetve alkenil-csoportként például a norbornán-, adamantán- vagy benzvalén-csoportok jöhetnek számításba.

Rí és R2 jelentése ezeken kívül lehet még mono- vagy policiklusos 6-30 szénatomos arilcsoport is. Ilyenek lehetnek például a karbociklusos monociklusos csoportok, így például a fenilcsoport; vagy a heterociklusos, monociklusos csoportok, így például a tienil-, furil-, piranil-, pirrolil-, imidazolil-, pirazolil-, piridil-, pirazinil-, pirimidinil-, tiazolil, oxazolil-, furazanil-, pirrolinil-, imidazolinil-, pirazolinil-, tiazolinil-, triazolil- tetrazolil-csoport, valamint az ezen csoportokban lévő heteroatom vagy heteroatoI mok pozíciós izomerjei; karbociklusos kondenzált gyűrűkből álló csoport, így például naftilcsoport vagy fenantril-csoport; kondenzált heterociklusos gyűrűkből álló csoportok, így például benzofuranil-, benzotienil-, benzimidazolil-, benzotiazolil-, nafto[2,3-b]-tienil-, tiantrenil-, izobenzofuranil-, kromenil-, xantenil, fenoxatiinil-, indolizinil-, izoindolil-, 3H-indolil-, indolil-, indazolil-, purinil-, kinolizinil-, izokinolil-, kinolil-, ftálizinil-, naftiridinil-, kinoxalinil-, kinazolinil-, kinolinil-, pteridinil-, karbazolil-, β-karbolinil-, akridinil-, fenazinil-, fenotiazinil-, fenoxazinil-, in dolinil-, izoindolinil-, imidazo-piridil- vagy imidazo-pirimidinilcsoportok; vagy az előbbiekben felsorolt heterociklusos monociklusos csoportokból álló policiklusos rendszerek, így például furo[2,3-b]-pirrol vagy a tieno[2,3-b]-furán; de különösen fenilcsoport; furilcsoportok, így például 2-furilcsoport; imidazolilcsoportok, így például 2-imidazolil-csoport; piridil-csoportok, így például a 2-piridil-, 3-piridil-, vagy 4-piridil-csoport; pirimidinil-csoportok, így például a pirimid-2-il-csoport; a tiazolilcsoportok, így például a tiazol-2-il-csoport; triazolil-csoportok, így például triazol-2-il-csoport; tetrazolil-csoportok, így például tetrazol-2-il-csoport; benzimidazolil-csoportok, így például benzimidazol-2-il-csoport; benzotiazolil-, így például benzotiazol2-il-csoport; purinil-csoportok, így például a purin-2-il-csoport vagy a kinolil-csoportok, így például a 4-kinolil-csoport.

Előnyösen, az előbbiekben felsorolt csoportok esetlegesen jelenlévő szubsztituensei az alábbiak lehetnek:

- halogénatom: fluor-, klór-, bróm- vagy jódatom,

- amino-; alkil-amino-, így például metil-amino- vagy etil-amiI no-; dialkil-amino-, így például dimetil-amino vagy dietilamino, metil-etil-amino-csoport; ahol bármelyik dialkil-amino-csoport adott esetben oxid formájában van jelen,

- aminoalkil-csoport, így például amino-metil- vagy amino-etil-csoport,

- dialkil-amino-alkil-csoport, így például dimetil-amino-metilvagy dimetil-amino-etil-csoport,

- dialkil-amino-alkoxi-csoport, így például dimetil-amino-etiloxi-csoport,

- hidroxilcsoport,

- szabad, észterezett karboxilcsoportok, így például alkoxi-karbonil-csopotok, így például metoxi-karbonil- vagy etoxikarbonil-csoport, vagy egy nátrium- vagy káliumatom segítségével képzett só,

- 1-8 szénatomos alkilcsoport, így például metil-, etil-, propil-, izopropil-, butik, izobutil- vagy terc-butil-csoport, amelyek adott esetben egy vagy több halogénatommal, így például frluoratommal helyettesítettek lehetnek, mint például a trifluor-metil-csoport,

- oxo-, ciano-, nitro- vagy formilcsoport,

- acilcsoport, így például acetil-, propionil-, butiril- vagy benzoilcsoport,

- acil-oxi-coport, így például acetoxi-csoport vagy az -O-CO-(CHaJnCOaH általános képletű csoport, amelyben n értéke 1-5,

- alkoxicsoport, így például metoxi-, etoxi-, propil-oxi-, izopropil-oxi- vagy butil-oxi-csoport,

- alkíl-tio-csoport, így például metil-tio-, etil-tio-, propil-tio-, izopropil-tio- vagy butil-tio-csoport,

I

- karbamoil-csoport,

- alkenil-csoportok, így például vinil- vagy propenil-csoport,

- alkinil-csoportok, így például etinil- vagy propinil-csoport, vagy

- arilcsoportok, így például fenil-, furil- vagy tienil-csoport.

Az előbbiekben felsorolt helyettesítőkkel szubsztituált csoportok lehetnek például az egy vagy több halogénatommal helyettesített alkilcsoportok, így például a trifluor-metil-, trifluor-butil-, penta íluor-propil-, pentaíluor-butil-, pentaíluor-pentil-, heptafluor-butil vagy nonafluor-butil- illetve 2-klór-etil-csoportok.

Az (I) általános képletű vegyületeket összefoglaló néven tioplatina-vegyületekként nevezhetők.

Az (I) általános képletű vegyületeket előnyösen egy olyan eljárással állíthatjuk elő, amelynek során egy platina-komplexen, így például egy cisz-klór-diamin-platina(II)-n egy megfelelő xantogenát segítségével egy önmagában ismert ligandum-helyettesítési reakciót hajtunk végre. Ez a módszer lehet például egy olyan eljárás, amelynek során egy

S=C(OR)-SMe általános képletű vegyületet, ahol

Me jelentése alkálifém vagy alkáliföldfém és

R jelentése megegyezik az Rí és R2 jelentésénél megadottakkal, egy platina-komplexszel, így például cisz-diklór-diamin-platina(II)-vel reagáltatjuk, és a keletkező, új platina-komplexet izoláljuk.

Az (I) általános képletű vegyületek alkalmasak különböző rákos megbetegedések, így például heretumorok, petefészek-, hólyag-, vastagbél- vagy prosztatakarcinóma, kissejtes és nem kissejtes hörgőkarcinóma, a fej- és nyaki tájékon előforduló karcinómák, a mellkasi és hasi tájékon jelentkező karcinómák valamint melanoma és leukémiák kezelésére. A vegyületek előnyösen kissejtes hörgökarcinóma és vastagbél-karcinóma kezelésére alkalmasak. A vegyületekkel végzett kezelés alkalmazható radioterápia kísérőkezeléseként, vagy sebészeti beavatkozást megelőzően, illetve azt követően is.

Az (I) általános képletű vegyület jó összeférhetőséggel rendelkeznek. A vegyületek L50 értéke a tumorterápiánál ismert ciszplatinánál háromszor alacsonyabb. Olyan dózis esetén, amellyel már jó tumorellenes hatás érhető el, alig jelentkeznek mellékhatások. Különösen fontos, hogy a tioplatina-vegyületeknél eddig nem jelentkezett a ciszplatina vegyületeknél előforduló rettegett nefrotoxicitási tünet. A találmány szerinti vegyületek további előnye, hogy a tumorok széles körének kezelésénél alkalmazhatók, és különösen olyan tumoroknál is, amelyek eddig a platinavegyületes terápiával (például ciszplatinával) nem voltak gyógyíthatók. A tioplatina különösen alkalmas erős, tartós tumorok ellen.

A találmány szerinti vegyületek további előnye, hogy ezek enyhén savas közegben hatásosabbak, mint alkálikus körülmények köI zött, ami azért fontos, mert sok tumorszövet inkább savas közegben található. A találmány szerinti vegyületek vizsgálatánál kísérleteket végeztünk a bisz[O-etil-ditio-karbonáto]-platinum(II)-mal, amely egy olyan (I) általános képletű koordinációs komplex, amelyben a platina kénatomokkal képez komplexet. A protonálás után két kén ligáció reverzibilisen felhasad (amelynek eredményeképpen egy ún. „aqua-komplex” képződik), amely DNS térhálósodást válthat ki. A pH-érték emelése utána protonok a kénatomoról leválnak, és a semleges molekula újra helyreáll. Ezt a folyamatot írja le az 1. reakcióábra.

Az ábrából látható, hogy amennyiben a pH-értéket az enyhén savas tartományba állítjuk, az (I) általános képletű „prodrug”-ból a tulajdonképpeni, hatékony vegyület keletkezik. Ezt az elméletet egyébként a példák is alátámasztják.

A találmány szerinti gyógyszereket különböző módokon, így például orálisan, parenterálisan, kután vagy szubkután úton, intravénásán, intramuszkulárisan, rektálisan vagy intratumorális úton adhatjuk be. Előnyösen az intravénás vagy az intratumorális beadást, azaz a bizonyos, beteg szervekbe illetve testrészekbe történő beadást alkalmazzuk. Az orvosságot a páciensnek az orvos által meghatározott ideig adjuk. A szereket mind embereknél, mind emlősöknél alkalmazhatjuk.

A találmány szerinti vegyületek dózisait a kezelést végző orvos a páciens egyedi tulajdonságaitól, így például korától, súlyától, nemétől, a tünetek súlyosságától stb. függően állapítja meg. A I találmány szerinti vegyületek dózisa előnyösen 0,001-1000 mg/kg testtömeg.

A gyógyszereket a beadás módjától függően formulálhatjuk, így például készíthetünk egyszerű vagy drazsírozott tablettákat, kemény vagy lágy zselatinkapszulákat, a használat előtt gyógyszerré alakítható porokat, granulátumokat, kúpokat, ovulákat, injekciópreparátumokat, infúziós oldatokat, kenőcsöket, krémeket, géleket, mikro szférákat vagy implantátumokat, amelyek a szokásos galenikus módszerekkel állíthatók elő.

Az (I) általános képletű vegyületeket adott esetben további hatóanyagokkal illetve a gyógyászati készítményeknél szokásos segédanyagokkal, így például az előállítandó készítménytől függően talkummal, gumiarábikummal, laktózzal, keményítővel, magnézium-sztearáttal, kakaóvajjal, vizes és nem vizes hordozókkal, állati vagy növényi eredetű zsírokkal, paraffin-származékokkkal, glikolokkal (különösen poli(etilénglikol)-lal, különböző lágyítókkal, diszpergálószerekkel vagy emulgeálószerekkel illetve tartósítóanyagokkal is formulálhatók.

Folyékony készítmények előállításához adalékként például nátrium-klorid oldatot, etanolt, szorbitot, glicerint, olívaolajat, mandulaolajat, propilénglikolt vagy etilénglikolt alkalmazhatunk.

Előnyös gyógyszerkészítményként infúziós-vagy injekciós oldatokat alkalmazunk. Ezek előnyösen vizes oldatok vagy szuszpenziók, amelyeknél lehetséges ezek közvetlenül az alkalmazás előtti I előállítása, például olyan liofilizált készítményekből, amelyek a hatóanyagot valamilyen hordozóval, így például mannittal, laktózzal, glükózzal, albuminnal vagy hasonlókkal együtt tartalmazzák. A használatra kész oldatokat sterilizáljuk és adott esetben segédanyagokkal, így például konzerválóanyagokkal, stabilizátorokkal, emulgeátorokkal, oldódást elősegítő anyagokkal, pufferekkel és/vagy az ozmózisnyomás szabályozására alkalmas sókkal keverjük el. A sterilizálás történhet kis pórusú szúrón végrehajtott steril szűrés útján, ami után a készítmény adott esetben liofilizálható. A sterilitás fenntartása érdekében a készítményhez kis mennyiségű antibiotikumot is adhatunk.

Előnyös, ha a találmány szerinti készítményeket rákkezelésre szoruló emlősnek való egységadag formájában állítjuk elő.

Szintén a találmány tárgyát képezik olyan gyógyszerek, illetve gyógyászati készítmények, amelyek a hatóanyag [az (I) általános képletű vegyület valamelyike] terápiásán hatásos mennyiségét olyan szerves vagy szervetlen, inert, szilárd vagy folyékony, gyógyszerészetileg elfogadható hordozókkal illetve hígító szerekkel együtt tartalmazzák, amelyek a kívánt beadási módra alkalmasak és a hatóanyagokkal nem lépnek káros kölcsönhatásba.

A találmány tárgyát képezi továbbá egy gyógyászati készítmények előállítását célzó eljárás is, amelynek során az (I) általános képletű vegyületeket gyógyászatilag elfogadható hordozókkal keverjük el.

Találmány szerinti gyógyszerekként különösen a kísérleti részben

I ismertetett vegyületek, illetve azok az (I) általános képletű vegyületek, amelyeknél Rí és/vagy R2 jelentése, amely egymással azonos vagy egymástól eltérő lehet, metil-, etil-, propil- vagy izopropil-csoport, jöhetnek.

A találmány szerinti gyógyszerek illetve gyógyászati készítmények legalább egy, a korábbiakban említett hatóanyagot tartalmaznak. Ugyanakkor, tartalmazhatnak további hatóanyagokat, így például immunszuppresszív anyagokat is, így például ciklosporint, ra pamicint, 15-dezoxi-spergualint, OKT3-t, vagy azatioprint; citokineket, így például TNF-t, interferont stb. Továbbá, a találmány szerinti készítmények tartalmazhatnak továbbá valamilyen szteroidot vagy további citostatikumot így például ciszplatinát, metotrexátot, aminopterint, dakarbazint, nitrozo-karbamid vegyületeket, fluoruracilt, bleomicint, daunomicint, daunorubicint, doxorubicint, mitramicint, mitomicin C-t és hasonlókat.

A találmányt az alábbiakban az ábrák segítségével mutatjuk be:

1. ábra: tumorregresszió illetve tumornövekedés kissejtes hörgőkarcinóma találmány szerinti vegyülettel, illetve kontrollvegyülettel történő kezelésénél.

2. ábra: a találmány szerinti vegyület tumorellenes hatása szörtelen egérben található emberi vastagbél-karcinómára.

3. ábra: citostátikumok hatásának pH-függése

4. ábra: a tioplatina emberi xenotranszplantátumra kifejtett tumoreilenes hatása.

5. ábra: a vese és a vékonybél tioplatina- illetve ciszplatina-kezelés utáni hisztopatológiája.

PÉLDÁK

A találmány közelebbről az alábbi példák segítségével mutatjuk be:

1. példa

Eljárás dietil-xantogenát-platina(II)-komplexek előállítására: bisz-[O-etil-ditio-karbonáto]-platina(II) (E képletű vegyület) mmól cisz-diklór-amin-platina(II)-t 600 ml desztillált vízben oldunk, majd az így kapott oldathoz kevertetés közben 10 mmól kálium-xantogenátot adunk, és a keletkező elegyet 6 órán át kevertetjük. A kiváló csapadékot leszűrjük, desztillált vízzel háromszor mossuk, és vákuumban szárítjuk. A kapott anyagot meleg acetonból kristályosítjuk át, amelynek eredményeképpen 98 %os tisztaságú sárga kristályokhoz jutunk (kitermelés: 68 %)

2. példa

Az alábbi összetételű gyógyszerkészítményt állítjuk elő:

I nj ekció szu szpenzió:

Az 1. példa szerinti vegyület	1 g
Segédanyagok (vizes diszperzió): benzil-alkohol, polia8etilénglikol) 900, karboximetil-cellulóz (nátriumsó), nátrium-klorid, egy ampullányi injekciópreparátumhoz szükséges mennyiségű víz	1 ml-ig

Legelőnyösebben, a poli(etilénglikol)-t 5 %-os oldat formájában adjuk hozzá az egész oldat készítmény stabilizálása céljából.

3. példa

Az 1. példa szerinti vegyülettel végzett farmakológiai vizsgálatok

a) az emberi kissejtes hörgőkarcinómára kifejtett hatás szőrtelen egerekben

Hörgő karcinóma sejteket (SCLC) hat hetes NMR1 törzsből származó Nu/Nu-egerek bőre alá ültetünk be (5 x 10⁶ sejt 0,1 ml konyhasóoldatban). Két hét elteltével a tumorok kb. 8 mm nagyságúra nőttek meg. Ezután öt-öt állatot kiválasztottunk, és az egyik ötös csoportnak állatonként 0,2 ml konyhasóoldat/0,1 % BSA/1% aceton elegyet (kontrollcsoport), míg a másik csoportnak állatonként 10 mg/kg testtömeg mennyiségben az 1. példa szerinti vegyület 0,2 ml konyhasóoldat/0,1 % BSA/1% aceton eleggyel készített oldatát adjuk (kezelt csoport). Ezt követően naI ponta ellenőrizzük a tumornövekedést. A kapott értékek az 1. ábrán láthatók.

Egyértelműen kitűnik, hogy az 1. példa szerinti vegyülettel kezelt állatoknál (kezelt csoport) a tumor mérete csökkent, míg a kontrollcsoportban lévő egereknél a tumornövekedés folyamatosan egyre nagyobb méreteket öltött.

b) az emberi vastagbél karcinómára kifejtett hatás szertelen egerekben

Vastagbél karcinóma sejteket (SW707) hat hetes NMRI törzsből származó Nu/Nu-egerek bőre alá ültetünk be (5 x 10⁶ sejt 0,1 ml konyhasóoldatban). Tíz nap elteltével a tumorok kb. 10 mm nagyságúra nőttek meg. Ezután az állatokból 3 hatos csoportot képeztünk és az egyes állatoknak csoportonként 0,2 ml konyhasóoldat/0,1 % BSA/1% aceton elegyet (kontrollcsoport), vagy állatonként 7,5 mg/kg testtömeg mennyiségben az 1. példa szerinti vegyület 0,2 ml konyhasóoldat/0,1 % BSA/1% aceton eleggyel készített oldatát adjuk (1. kezelt csoport) vagy állatonként 10 mg/testtömeg kg ciszplatinával kezeljük (2. kezelt csoport). Ezt követően naponta ellenőrizzük a tumornövekedést. A kapott értékek az 2. ábrán láthatók.

A 2. ábrából látható, hogy az 1. kezelt csoportban a tumornövekedést sikerült lefékezni, míg a kontrollcsoportban illetve a 2. kezelt csoportban erősödő tumornövekedés figyelhető meg. Ebből kitűnik, hogy a találmány szerinti vegyületek a ciszplatinánál jóI val hatásosabbak, és olyan tumorok esetén is képesek hatásukat kifejteni, amelyek eddig platinavegyületekkel (ciszplatina) szemben ellenállóknak bizonyultak. Ez alátámasztja azt a tényt, hogy a tioplatinavegyületek az eddigi citostatikumoknál lényegesen szélesebb hatásspekrtummal rendelkeznek.

4. példa

A citostatikumok hatásának pH-függése

Hela-sejeteket Linbro-lemezeken tenyésztettünk (10⁵), majd 6 óra elteltével különböző koncentrációjú ciszplatina-oldattal, illetve az 1. példa szerint előállított vegyület oldatával kezeltük, amely oldatokat az említett vegyületekböl Eagle-féle Basal-közeggel, amely vagy 2,2 g (pH=7,4) vagy 0,85 g (pH=6,8) nátrium-bikarbonátot és 10 %-os ökör magzati szérumot tartalmazott, 24 órás, 5 %-os CO₂ atmoszférában 37 °C-on történő inkubálással készítettük. Az élő sejtek számát tripánkékkel történő vitálfestéssel, Neubauer-számlálókamrában állapítottuk meg. Az eredményeket a 3. ábrán szemléltetjük.

Meglepő módon, az 1. általános képletú vegyület a legerősebb hatást enyhén savas közeg esetén fejti ki, míg a hagyományos citostatikum, a ciszplatina, lúgos közegben teszi ugyanezt. Mivel a tumorszövetek gyakran enyhén savas pH-júak, egyértelmű, hogy az 1. példa szerinti vegyület ennél az előbb említett tulajdonságánál fogva a hagyományos citostatikumoknál nagyobb I hatás kifejtésére képes.

5. példa

A platina-beépülés pH-függése

Hela-sejeteket (10⁷) Petri-csészékben szélesztünk, majd 4 óra elteltével olyan oldatokkal tápláltuk őket, amelyek vagy 2,2 g (pH=7,4) vagy 0,85 g (pH=6,8) nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmaznak. Ezután 5 %-os CO2 atmoszférát állítunk be, és a ciszplatinából illetve a tioplatinából 0,33 pmólos végkoncentrációjú oldatokat készítünk. A platina hozzáadása után négy órával mindegyik kezelési csoportból 1 csészét 5 x 50 ml hideg PBS-sel mosunk. A sejteket a csészékből eltávolítjuk, majd a platinatartalmat neutron-aktiválásos módszerrel állapítjuk meg. Ehhez a mintákat illetve a platina-standardokat a fagyasztva szárítás után 30 percig neutronokkal sugározzuk be (5 x 10¹² n/cm²/sec). Egy hét elteltével 158,4 keV-os és 208,2 keV-os γ-sugárzást mértünk, amelyből a platinakoncentrációt a standardok segítségével állapítottuk meg. A detektálási határ 2 ng volt.

Másik lemezekről az inkubációt követő 16 óra elteltével a DNS-t 1 fenol/kloroform elegyes extrakcióval, majd egy ezt követő etanolos kicsapással izoláljuk. Az egyenkénti 100 pg-os platinatartalmat a korábban leírtak szerinti neutron-aktiválásos módszerrel állapítottuk meg.

Kezelés	Platinatartalom az összes sejtnél (ng/ 107sejt)	Platinatartalom a DNS-nél (ng/mg)
kezeletlen, pH=6,8	<1	<10
kezeletlen, pH=7,4	<1	<10
Ciszplatina, pH=6,8	140	14,6
Ciszplatina, pH=7,4	156	140
Tioplatina, pH=6,8	4780	13870
Tioplatina, pH=7,4 -	3680	1760

A táblázatokban kapott eredményekből kitűnik, hogy a tioplatinával enyhén savas, pH=6,8-as közegben történő inkubáció során a DNS-re közel nyolcszoros mennyiségű platina kötődött, mint a pH77,4-es közegben történő inkubációnál. A ciszplatina esetében pontosan fordított hatás volt tapasztalható, azaz a 7,4-es pH-nál tízszer több platina kötődött a DNS-hez, mint a 6,8-as pH-nál. A sejtek platinafelvétele pH-független volt. Mégis, az összes platinafelvétel tioplatina esetén 30-100 szorosa volt a ciszplatinánál tapasztalt értékeknek.

6. példa

A citotoxicitás pH-függetlensége

A sejteket Linbro-csészében szélesztettük, és 4 órával később olyan oldatokkal tápláltuk őket, amelyek vagy 2,2 g (pH=7,4) vagy 0,85 g (pH=6,8) nátrium-hidrogén-karbonátot tartalmaznak. Ezután 5 %-os CO2 atmoszférában a ciszplatinából illetve a tioplatinából 5 és 150 μτηόΐ közötti végkoncentrációkat állítunk be. Az élő sejtek számát 24 óra elteltével megállapítjuk, és a dózis-hatás görbékből kiszámoljuk az IC50 illetve IC99 értékeket (a standard szórás minden esetben 10 % alatt volt)

Sejtvonal	sejttípus	IC50 pH 6,8/7,4 ciszplatina (μΜ)	IC99 pH 6,8/7,4 ciszplatina (μΜ)	IC50 pH 6,8/7,4 tioplatina (μΜ)	IC99 pH 6,8/7,4 tioplatina (μΜ)
HeLa	emberi Zervix-rák	86/25	111/54	5/51	16,3/>55
H10	emberi kissejtes tüdőrák	72/42	>150/90	5,1/15,4	13,2/30,8
SW707	emberi vastagbélrák	9,6/<4,8	90/38,4	3,7/13,2	7,5/26,4
CV1	egér veserák	>150/>150	>150/>150	3,9/23	13,2/1*06
Capan2	emberi hasnyálmirigyrák	143/139	>150/>150	17,3/50,6	40,9/99
Dan-G	emberi hasnyálmirigyrák	45/36	78/72	15,4/52,8	20,9/64,5
Jurkat	emberi T-sejtes limfóma	52,5/54	120/126	6,8/21,1	13,6/132
S180	egérszarkóma	63/24	>150/114	16,5/63,8	37,5/>110

A táblázatból kitűnik, hogy a citotoxicitás a tioplatinánál 6,8-as pH mellett majdnem minden sejtvonalnál jobb értékeket mutat, mint 7,4-es pH-nál, míg a ciszplatina esetében pont fordított eredményeket kaptunk, azaz az erősebb hatás a pH=7,4-es értéknél jelentkezik. Az IC50 értékek a tioplatina esetében minden sejtvonalnál 2-8-szor alacsonyabbak voltak 6,8-as pH-nál, mint 7,4-esnél. A ciszplatinánál a 6,8-as pH melletti IC50 érték roszszabbnak mutatkozott, mint a 7,4-es pH-nál mért érték, vagy semmilyen bizonyítható pH-hatás nem volt megfigyelhető.

7. példa

A tioplatina emberi xenotranszplantátumra kifejtett tumorellenes hatása

Egy kissejtes tüdőkarcinóma (A) emberi H10-es sejtjeit vagy egy SW707 vastagbél karcinóma (B) sejtjeit szubkután úton Nu/Nu-Swiss egerekbe juttattuk be, majd 12 nap elteltével, amikor a tumorok átmérője 8-10 mm-esre növekedett, öt-öt egérnek intraperitoneális injekció formájában 10 %-os Tween oldatot (*, I “kontroll), 10 mg/testtömeg kg ciszplatinát (Δ) vagy 10 mg/testtömeg kg, 10 5-os Tween 80-ban 1 mg/ml koncentrációjúra hígított tioplatinát adtunk be. A tumorok nagyságát két irányban meghatároztuk, és kiszámítottuk a relatív tumomövekedést. A középértékeket a 4. ábrán szemléltetjük.

(C): a kissejtes túdőkarcinómával rendelkező csoport átlagos testtömege. A standard szórás 3 %-nál alacsonyabb volt.

A 4. ábrából kitűnik, hogy bár a H-10 sejteknél a ciszplatina hatásos, az SW707 sejteknél még lOmg/testtömeg kg-os dózisnál sem figyelhettünk meg hatást. Ugyanebben a dózisban a tioplatina mindkét rákfajtánál hatásosnak bizonyult. A közepes tumornagyság kisebb volt, mint a ciszplatinával kezelt csoport esetén. A tumornagyság a kissejtes tüdőkarcinóma esetén a kontrollcsoportnál tapasztalható méret 23 %-ára (kb. %-ére) zsugorodott össze, míg ciszplatinánál csak a felére (4A ábra). A vastagbélrák esetén a ciszplatinánál nem tapasztaltunk hatást, míg a tioplatinával sikerült a tumornövekedést megállítani (4B ábra).

A tömegcsökkenésböl a toxikus mellékhatásokra lehet durva következtetést levonni. Míg a ciszplatinával kezelt állatoknál a kezelés utáni 3. illetve 6. nap után rendre 12 illetve 13 %-os testtömeg-veszteség volt tapasztalható, a tioplatinával kezelt állatok testtömegüket teljes egészében megőrizték (4C ábra).

8. példa

A vesére és vékonybélre kifejtett toxicitás vizsgálata I

A vizsgálatok során kapott eredményeket az 5. ábra szemlélteti.

Swiss-egereknek vagy 15 mg/testtömeg kg ciszplatinát (A,C) vagy 20 mg/testtömeg kg tioplatinát (B,D) adunk. A beadás után 4 nappal hisztológiai metszeteket készítünk a vékonybelekből (A,B) és a vesékből (C,D), majd a mintákat hematoxilinnal és eozinnal színezzük.

A ciszplatinával kezelt állatoknál a vesében súlyos elváltozások és a vesecsatornák vakuolizációja volt megfigyelhető (5C ábra). A vékonybél szerkezete számottevő részen elroncsolódott, és a lamina propria-ban nagy kiterjedésű beszivárgások láthatók. Ezzel szemben, amennyiben a kezelést magas, 10 mg/testtömeg kgos tioplatina dózisokkal végeztük, a vese (5D ábra) és a vékonybél (5B ábra) szerkezete érintetlen maradt.

Claims (13)

1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK

   1. Az (I) általános képletű platina-komplexeket tartalmazó, gyógyszerkészítmények ahol

   Rí és R2 jelentése egymástól függetlenül egyenes vagy elágazó szénláncú 1-30 szénatomos alkilcsoport, egyenes vagy elágazó szénláncú 2-30 szénatomos alkenil-csoport, 3-30 szénatomos mono- vagy policiklusos alkilcsoport, 4-30 szénatomos monovagy policiklusos alkenil-csoport vagy 6-30 szénatomos monovagy policiklusos aromás csoport, ahol az előbbiekben felsorolt csoportok adott esetben egy vagy több szubsztituenssel helyettesítettek lehetnek.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti gyógyszerkészítmények, amelyekben az (I) általános képletű vegyűletekben Rí és R2 jelentése egyaránt 1-14 szénatomos alkilcsoport vagy 3-14 szénatomos cikloalkil-csoport.
3. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti gyógyszerkészítmények, amelyekben az (I) általános képletű vegyűletekben Rí és R₂ jelentése egyaránt etilcsoport.
4. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amelynél (I) általános képletű vegyületként dimetil-xantogenátplatina(II) komplexet vagy dimetil-xantogenát-platina(II) komplexet alkalmazunk.
5. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszer, amely továbbá egy immunszupresszív vegyületet tartalmaz, amely ciklosporin, rapamicin, 15-dezoxi-spergualin, OKT3 vagy azatioprin lehet.
6. 6. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely továbbá citokineket, interferont vagy további citosztatikumot tartalmaz.
7. 7. . A 6. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely további citosztatikumként ciszplatint, metotrexátot, dakarbacint, valamely nitrozo-karbamid-vegyületet, fluor-uracilt, bleomicint, daunomicint, daunorubicint, doxorubicint, mitramicint vagy mitomicin C-t tartalmaz.
8. 8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely rákellenes szerrel történő kezelésre szoruló emlősnek alkalmas egységadag formájában tartalmazza a hatóanyagot.
9. 9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény, amely továbbá egy gyógyászatilag elfogadható inert hordozót vagy hígítószert is tartalmaz.
10. 10. Az 1-9 igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény alkalmazása rákos megbetegedések kezelésére.
11. 11. A 10. igénypont szerinti alkalmazás, ahol a rákos betegség heretumor, petefészekkarcinóma, hólyagkarcinóma, vastagbél karcinóma, prosztatakarcinóma, kissejtes és nem-kissejtes hörgőkarcinóma, fej- és nyaki részek karcinómája, mellkas- és hasüregi karcinóma, nyaki- és méhnyálkahártya karcinómái, szarkóma, melanoma vagy leukémia.
12. 12. A 10. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a rákos megbetegedés kissejtes hörgőkarcinóma vagy vastagbélkarcinóma.
13. 13. Eljárás az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti gyógyszerkészítmény előállítására, amelynek során az (I) általános képletű vegyületeket egy gyógyászatilag elfogadható hordozó- vagy hígítószerrel keverjük össze.

    A meghatalmazott iQ. Szentpéteri Ádám \ szabadalmiftteyviydK az S.B.G.« K.'dzabadslJni Ügyvivői

    H-1062 Budapest, Andrássy út 113. Iblefon: 461-1000 Fax: 461-1099