HU228618B1 - Medical compositions comprising pyridylbisphosphonate compounds and their use - Google Patents

Description

A találmány tárgyát hatóanyagként pirldnbiszfoszióusav-tetraészter-szár-mazékokat tartalmazó gyógyászati készítmények képezik, amelyeket elsősorban csontmegbetegedések kezelésére használhatok,

A blszfesziónátok gyogyászatilag hatásos szerként alkalmazhatók különféle eredetű patológiás esontpnsztnlás kezelésére, ezek közül említjük meg a rosszindulatú osteoiiíikus csontbetegségeket, a Paget-féle kórt, valamint az osteoporosist. A találmány szerinti vegynletek a szervezetben előforduló fiziológiás eredetű szervetlen plrofoszfátokhoz hasonló szerkezetet mutatnak'. A biszfoszfonátban lévő P-C-P alapstruktúra teszi lehetővé, hogy a szénatomon lévő oldalláncok változtatásával vagy a foszfátokra történő addicióval igen nagy számú, egymástól eltérő vegyületet lehessen előállítani.

Általában a biszfoszfonálok gátolják a csontreszorpclóért felelős osteoclast sejteket. A csonttnatrixhoz kötődő ismert blsziőszfonátok belépnek a reszorbeálödást előidéző osteoclast sejtekbe és csökkentik ezeknek a működést. E vegyítetek gátolják a esontreszorpeíót (esontfelszivódást) in vltro és in vívó körülmények között egyaránt. Az ismert biszfbszlbnátokrs jellemző, hogy a gastmintestínáiis traktusból korlátozott mértékben szívódnak fel, a csontszövetekben gyorsan eltűnnek és változatlanul a vizeletben kiürülnek.

A találmány szerinti megoldással olyan biszfószíonát-származékokat bocsátunk a felhasználók rendelkezésére, amelyek az orális beadás után is igen nagy biológiai diszponálhatóságot mutatnak és igen kis mértékben kötődnek a csonthoz. Ennek révén a mellékhatások lecsökkenthetők anélkül, hogy az aníireszorpeiós hatást akadályoznánk.

A 4 447 2Ső számú amerikai szabadalmi leírásban, a 28 31 578 szánni német szabadalmi leírásban (Suzuki és társai), az 55089210, 55098105, 55043054 és a ί

55043055 számú japán szabadalmi leírásokban (Nissan Chemical Industries) eljárást ismertetnek pOTdil-amíno-metílén-biszfoszíónsav-tetraalkil-észtetek előállítására. B szabadalmi leírások szerint e vegyöleíek berbicidként hasznosíthatok.

337 706 számú európai szabadalmi leírásban (Isomora és munkatársai) gyűrűs vagy heterociklusos csoportúd szubsztiíuáli amíno-metilén-biszíbszfonsavtetraészter-származékok előállítását ismertetik, ahol a gyűrűn elhelyezkedő szubsztituens részben vagy teljesen telített. Az előállított tetraészterek hatását nem vizsgálták.

A 4 973 576 számú amerikai szabadalmi leírásban. (Sakamoto és munkatársai) Izoxazolll mibszdtuensí hordozó anúno-metilén-biszfoszfonsav-tetraaiküésztereket ismertetnek, de e vevőieteket csak arthritis-szél szembeni hatásra vizsgáltak. E vegyületek orális beadását követően a biológiai diszponálhatóság alacsonynak mutatkozott.

Az 186405 számú európai leírásban píndmil-aminomettlidénbiszfosztbnsavakat és ezek észtereit mint csoníbetegségek kezelésére alkalmas hatóanyagokat ismertettek. Az észtereket általánosságban említették, specifikus észtereket nem ismertettek és nem vizsgáltak. Az orálisan beadott blszfoszfonsavak és ezek sói (biszíoszfonátok) biológiai hozzáférhetősége ismert módon alacsony, 1-1Ö % tartományban van.

Az WO94ZŰ9Ö17 számú nemzetközi közzétételi iratban pirazolopírimidinilés pirimidmil(alkoxlmetúfoszíinii)alkíl~íbszíbnsav-észterket mint gyulladásgátiő- szereket ismertettek, amelyek rendellenes foszfát és kalcium .meíabolizmussal jellemezett betegségek kezelésére alkalmasak. Piridmil-aínmometilÍdénbiszfbszfonsav-tetraészíerekről nem tettek említési.

A .282 309 számú európai szabadalmi leírásban uzol-amíuo- rn e i 11 é n - b i s z fo s z fon s a v - s z á η» a z é k o k a t és ezek r ο v 1 d s z é n lánc ú

A « φ φ * *

X

».«· *·* alkil-észtereit írják le. Tetraészterefc vizsgálatára nem történik utalás,

A 325 482 számú európai szabadalmi leírásban eíkloalkii-.amino'-metilén-biszfoszfonsavakat és -észtereket ismertetnek. A tetraészter-származékok hatását nem vizsgálták..

Jelen találmány tárgyát piridíl-biszfoszfonátok egy csoportja képezi, amelyek új farmakológiai és farmakö-kinetikai tulajdonságokat mutatnak. Ezen áj piridii-btszfoszfonát-származékok nem: gátolják a csoníreszorpeiot ín vitro körülmények között, de inhíbitálják a esontreszorpciot (felszívódást) in vivő körülmények között.

A piridil-híszfoszfonátok nem kötődnek a esontmalnxhoz és metabohtíkus aktiválásra sincs szúksés.

A találmány szerinti píridil-amino-metilén-biszfoszfonsavtetraalkil-észterek előnyős esetben a pirídingyűrún sz.ubsztituen.st hordoznak, a találmány szerinti vegyúleteket az. (I) általános képlettel írhatjuk le, ahol a képletben

Rí-8.4 jelentése egyenes vagy elágazó láncú telített 1-5 széna t. o m o s a 1 k i1 c s ο p o r í,

X és Y jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, egyenes vagy elágazó láncú telített 1-5 szénatomos alkilcsoport, halogénatom, hidroxil-, 1-5 szénatomos alköxi-, benzil-oxi-, aeil-oxi-, nitro-, triíluor-metil-csoport vagy NRjRé általános képletn csoport, amelyben R₅ és R« jelentése azonos vagy eltérő hidrogénatom, 1-5 szénatomos alkil- vagy aeilcsoport.

X

* * *

Az (I) általános képletei vegyületek gyógyászati készítmények hatóanyagaként nyernek alkalmazást.

Áz X és Y csoportok, valamint a metílén-bíszföszfonsavészteren lévő aminocsoport a piridilgyürűben lévő 2-6 helyzetben lévő szénatom bármelyikét helyettesíthetik. X és Y jelentése előnyösen hidrogénatom vagy hidroxi lesöpört; előnyösen egy vagy két hidroxilcsoport van jelen. A p-iri'diniícsoport célszerűen egy 2~pi ridi.mil helyzetben kötődő csoport.

Halogénatomként fhroratom, klőratosn, brómafom vagy jódaíosn lehet jelen.

Az 1-5 szénatomos alkilcsoportok lehetnek egyenes láneóak vagy elágazók, mint például metil-, etil-, η-, izopropii-, η-, ize- és tere-butií~, vagy ~penti 1csöpört, előnyös a metil- vagy etilcsoport jelenléte. Az X és Y helyében álló alkoxieseport valamely fentiekben definiált aíkilcsoportot tartalmazhatja, előnyős, ha ez metilvagy éti lesöpört,

Áz X és ¥ helyében álló acil-oxi-csoportban jelenlévő acilesoport vagy az R.$ és R« helyében álló acilesoport előnyösen egy rövidszénláneó al ki 1-karbonÍ lesöpört, ahol az alkilcsoportok

1-5 szénatomosak és a fentiekben megadott jelentésnek, előnyös, ha alkilcscportként metil- vagy etilcsoport van jelen. Az R₅~R₄ csoport jelentőse előnyösen a fentiekben megadottal azonos, célszerá, ha ezek jelentése etilcsoport.

A találmány szerinti vegyületek közül előnyösek az alábbi vegyületek:

[(2-pindínil“ami.nö)-rnetiIidén]-híszföSzfönsav~tetraetil-ész~ φ φ.φ.

φφ _ «: . ν' tér;

[ {(3 - h ΐ dr ο χ i - 2 - ρ ί rí á in i 1) - a m i η o ] - m e t s H d é a ] - b í s z £ o s z,.f ο n s a v-tetraetil-ószier;

[[ (ő~metöxi-3~pin dini l)-amina]-su éti 11 dénj-bi szföszfoasav-tetraetil-észfer;

[{4-pí.ridíníl>a«9Íno)-metÍhdén]-biszfoszfonsav-tetfaetil-észter;

[|(5”klór-2-pírí4inil)-ami«ol“»ietitidé«]~biszfO'Szfonsav-tetraetíl-eszfer;

[ [ (5 - í n e t o x i - 2 - ρ i r i d í η í 1) - a m ί η o ] - ns e t i 1 i d én} - b is z fo s z fο n s a v -1 e t raetil-észíer;

[[(ó-ami ηο-2-piridí s^iO-amiaol-metilidénj-biazfoszfoÍisav-tetraetil-észter;

[[(3-nÍtío-2~piridiníl)-amino]-metiÍidén]-biszfoszfonsav-tetra etil-észter;

n(3,5-diklór-2-piridmil)-'aí»isö}>xnetilÍáén]-bisxf<>szfonsav- létra et í i - é s z t e r;

[ [ ( 6 - b i d r o x i - 3 - ρ ΐ r i d í η i 1) - a tn i η o ] - m e t i H d έ n ] - b i s z f o szí o a s a v -telraetíl-észter;

([(5-Ηΐ4ίθχ1~2”ρ3Γΐ4ίηί1)-ζΐηϊηο]-πϊ«ΐ5ΐ'ίόέη]-Βί8ζΓθ3ζίση8ην-1 e t r a e t i 1 - é s z i e r;

({(3”klőt~5'-trifíuor-raet'íi-pisrjdiaiS)-amino}-metiIidén]-bsszfoszfonsav-teíraetií-éazter;

[((2-klór-3~p5ridinil)-amíno]-metiiídén]-biszfoszfonsav-tetraetíl-észter, [[(ó-klőr-3~pi fid i ni I)-aminö]-.metilidén)~biszíöszfönsav-tetraar * * etil-észter;

([•{3-benziI-oxt-2-pi^:ri^:dinil)-amino3~metiHdén]-biszfoszfonsav-tetraeiil-észter;

[{(5~nitro-2-piridiníl)”amino]”metilidén]~hiszfoszfonsav~tetraetil- ész tér;

((( 5 - b e n z s 1 ~ o x i - 2 - p i r i d i n i 1) - ami η o ] - m e t í 1 i d é n ] - b i s z.f© sz fb n s a v -tetraetil-észter..

Az N - szu b szít t« á i i (am í n o- a I k i 1 i d e n) - b i s z f o s z f o « s a v - 1 e t r a -észterek előállítását ismert módon végezhetjük, például valamely aminoesoporttai szuhsztituák származékot hangyasav-alkil-észterrel reagákaienk, majd a közbenső termékkként kapott imi.no-étert úgy ahogy van vagy tisztított formában dialkii-foszfittal kezeljük.

Egy másik megoldás szerint egy megfelelő amino-ptridin-szárraazékot először hangyas-av/eeetsav el eggyel reagál tatunk. Az igy kapott formám időt ezt követően foszfor-irihalogeniddel és t r i a 1 k i 1 ~ f o s z f i 1t e 1 k ez el j ü k.

Az amino-alkkldén-biszfoszfonsav-tetraésztereket oly módon is előállíthatjuk, hogy egy amino-piridln-származékot halogén-metii-foszfonátta! reagáltatunk, majd az így kapott vegyöletet bromozásl követően trialkk-íoszíiítal kezeljük (Schrader és munkatársai·. Synthesrs 372 (1986):,

A találmány szerinti vegyületek eredményesen alkalmazhatók csontbetegségek kezelésére, ezek közül említjük meg a rosszindulatú osteofitíkus csontbetegségeket, a Faget-féle kórt, valamint a primer és szekunder esíeoporcssist. A vegyületek emlősök » *4

4> X « <» » * * ** ♦**« ♦ « *

-7gyógyítására használhatók.

A találmány szerinti vegyületek hatását állatkísérletek segítségével igazoltuk es in vitro körülmények között vizsgáltuk., a vizsgálati· módszereket az alábbiakban részletezzük. Normális .növekedést mutató patkányok esetében a ((2-piridirriI~amino)~me~ tilidén]öiszíöszfönsav~tetraetil~é$zterrel végzett kezelés eredményeként csökkent a spontán csontreszorpeió (felszívódás), az ehhez, szükséges értékelést a vizeletben kiválasztott tetraeiklin meghatározása alapján végeztük radiológiai úton tartósan elŐrejelzett patkányok felhasználásával. A fentiekben említett vegyület eredményesnek mutatkozott a kísérleti úton előidézett osteoporosis kezelésére, amennyiben a vegyület megakadályozta a csontveszteséget, ahol is az osteoporosist kísérleti úton, az ülőidegnek az ál latokból (patkányok) történő kinietszésével idéztük elő. ín vitro körülmények között nem mutatkozott reszorpció az egerek köpeny atetö csontján, amennyiben a vizsgálatot csonttenyészetben végeztük; a mérés alapjául a kalcium leadás vizsgálata szolgált. Ez a tapasztalat arra utal, hogy a fenti vegyület metabolitikus úton elbomlik mielőtt farma'kológiai hatást fejthetne ki. A vizsgált vegyület nem mutatott in vitte körülmények között kapcsolódást az ellenőrzéshez használt hidroxi-apaíit kristályokon,

A ((2-pi r I dini 1-am mo)-meti 1 idén}- bi szfoszfon .sav-tetr aeti 1-észter íarmakokinetíkai viselkedését patkányokon vizsgáltuk. Az intravénásán beadott dózis csekély mennyisége 24 óra alatt lebomlás nélkül a vizeletben választódik ki, ugyanakkor jelentős meíaböiiíikus átalakulás is végbemegy A vizsgálathoz használt *·♦ ♦ » X*»

-8vegyüíetet orális úton beadva, a dózisnak csaknem féle abszorbeálódik patkányokban.

A találmány szerinti megoldást a korlátozás szándéka, nélkül az alábbi példák szemléltetik.

-észter előállítása

0,2 mól 2-amíno-piridint 0,8 mól hangyasav-trietil-észíerfel és bór-trifluorid-éteráítal elegyítünk, majd az elegyet 150 °C hőmérsékleten 4 óra hosszat bőfcezeljük, ezután a reakció során képződött etanolt ledeszti Hálj uk. Á hangyasav-trietil-észtert vákuumban tedesztiHáljuk. A reakcióelegyhez 0,4 mól dietil-foszfitot adunk, majd az el egy bői ISO °C hőmérsékleten a képződött etanolt ledesztílláljuk. Az elegyet lehűtjük, majd a kapott nyersterméket .kromatográfiás úton tisztítjuk (eluálószerként di'klór-metán/meíanol 1.1 arányú elegyét alkalmazva). Hozam: 29 g (37 %).

A kapott termék íizikekemiai jellemzőt az alábbiak: ^3!P-NNÍR (CDCb) 15,52 ppm 'Ή-NMR (CDCb):

*4 $· * *' Φ * * * β«

V. X

4* ** * Φ « 44>

»·»♦ » * • # **

Tömegspektrtím (El tömeg);

3S0 Μ

334 Μ- ΕΐΟΗ

243 Μ- P{ÖMÖC₂H_s)₂

1|( 5 - Κ! ő r - 2 - ρ ί r ί d 1 η. ί I) - a m ί a e | ~ m e t. í 1 i dé a f - h í § z f ο $ z f o » saviéira etil-észter előállítása

5-K.lór~2-pirá<lint (0,2 mól) 0,8 mól hangyasav-tríetil-észtérrel és bór-trifinorid-éíerátfal elegyítünk, az elegye! 150 °C hőmérsékleten 4 óra ho-sszat hő kezelj ük. A reakció során képződő etanolt az «légyből folyamatosan íedesziiiláljuk. A hangyasav-trietíl-észtert az elegy bői vákuumban íedeszti Háljuk. A reakcióeiegyhez 0,4 mól diettl-íoszírtet adunk, majd a képződő etanolt 150 °C hőmérsékleten folyamatosan ledesztilláljuk. A reakcióelegyot lehűtjük, a keletkezett nyers terméket kromafográfia segítségével tisztítjuk (eluálószerként dikiór-metán/metanol .1:1 arányú «legyét alkalmazva). Hozam 26,5 g (32 %). (31-P-NME 15,20 ppm; CDCh)

4ι V « # * ♦ · ♦ * « « * * „ ψ # V * * « « * » ♦ X * * » ·» ·

Fentiek szerint eljárva állíthatjuk elő az alábbi vegyüíetekei:

([(3,5~diklór~2~piridíníl)-amíö0]~sneíihdén]~bísz£öszfonsav~ -tetraettl-észter (31-P-NMR 14,59 ppm; CDCh) [{(3-klór- 5~ír ifluor-meti I~pí rí dl ni! )-amí no]~meítl idén]-hiszfoszfonsav-tetraetihészter (3-l-P-NMR 14,15 ppm; CDCh) [ [(5~h í drcxi-S-plri din J)-ami nö]~meiií idén j-biszföszfonsav-tetraeíil-észter, (tömegspektrum (EJ tömeg): 39ő M, 350 MEtOH, 259 M- P(O)(OC>H₅)₂;

{((5-nitro-2-plrídíniÍ)~amdno]-ínetilídénl--biszfoszfonsav~ -tetraetihészier (31-P-NMR 13,97 ppm; CDCh);

[[(5-ben zi 1- o x i - 2 - p i r i d i η ί 1)- a miηo J ~ m e t ί 1 i d é π ] - b i szfosz.fonsav-íetfaetii-észter;

{{{5-metoxi-2-piridini()-amino'j~merihdén]-bíszfO'Szfonsav-ietraetíl-észter;

[{(3,5-4imetoxj-2-ptri.dinil)-atnino]-metíli4énj-biszfoszfonsav-íetraetil-észter.

-biszfonsav

-észter .2-.Amino-3-h.idroxí~pridint ö-beuzilezünk, e művelethez benzíl-kloridot alkalmazunk, a reakciót két fázisú rendszerben fázis transzfer katalizátor jelenlétében {Bristol és munkatársai: Synthesís, 971, (1981)] végezzük. 0,1 mól 2-amíno~3-benzil-oxí~ -pináim áiklór-nxetánban feloldunk, majd az oldatot ö °C hőmérsékletre lehűtjük, 50 ml hangyasav/eceísav-anhidrid 5:3 arányú

elegyét adjuk az oldathoz, majd az elegyet egy éjszakán át szobahőmérsékleten keverjük. Á reakeioelegyet betömény'itjük, a maradékot di-izopropd-éterrel mossuk, Így 11,4 g 6~metoxi~3~förma~ midet kapunk. 10 ml feszfor-trifklorídot és 1,5 ml trietil-foszfitot 1 óra hosszat 60-70 °C hőmérsékleten tartunk. Az oldathoz 0,01 mól 3~benzil-oxi~piridil~2~förmamídot adunk, majd az elegyet 5 óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A reukeióelegyeí betűmenyi tjük, kromatográfiás úton tisztítjuk (eluálószerként diklór-metánZmetanol 2:1 arányú, ©.legyét alkalmazva), Így 0,8 g [[(3-ben~ zil-öxí-2-pírídÍoil)“amino]~metllÍdénj~hiszfoszfonsaV“tetraetlí-észtért kapunk. A vegyületben lévő benzilesoportot hidrogénezve 0,4 g (((3-bidroxi-2-piridtn3l)-amíno}-metilidén]-hiszfoszfonsav-tetraetil-észtert kapunk (tömegspektrum (El tömeg): 396 M, 350 M-ElOH, 259 M- P(O)(OC₂Hj)₂

Fentiek szerint eljárva állíthatjuk elő az alábbi vegyül eteket;

([(ó~benzíl-oxí~3-piridinii)-anuno]metiiiden]~hiszíöszfon~ sav-1 ólra e t i 1 - é s zte r;

( [ (6 - h i d r © x i ~ 3 - p 1 r i d i n í 1) - a m i η o ] - m e t i 1 í d é n j~ b í s z f o s z f ο n s a v -tetraetil-észter.

4. példa f ((6-Klór-3~ plrid toll)~ amin o|-metindénj~bíszfoszfonsav-t e t r a e t II - észterei o á 11 i t á s a

Dietil-jód-mettl-foszfonátöt állítunk elő az irodalomból ismert módszer szerint. [Ca.de, 3, Chem. Sec. 2266 (1959)}.

6~K.lőr-3-amíno~piridint dietfl-jód-metíl-foszfonátíal alkile12 zunk, a művelethez bázisként nátrium-amidot használunk, az alkilezést ismert módon végezzük, Áz így kapott ó-kiór~3~pírí~ dínií-amíno-meíil-foszfonsav-dietit-észtert (0,5 mól) és ö,5 mól N-brám-szakenrimid «legyét vízmentes szénteírakloridban 2 óra hosszat 2öö W-os lámpa segítségével besugározzuk. A keletkezett szilárd anyagot szűréssel elkülönítjük, széntetrakloriddal átmossuk, az oldatot vákuumban helöményítjük. Áz Így kapott 6-klőr-3~ ~pírídinil~nmino~(bró.m~metil)-foszfonsav-diettl-észtert (0,1 mól) lelrahidroíuránban Feloldjuk, majd 0,1 möl Inetii-íoszíii hozzáadása után 50 hőmérsékleten 4 óra hosszat hőkezeljük, A reakeíoelegyet vákuumban betöményhjük. A kapott terméket kromatográfiás úton tisztítják (eluálószerként diklór-metán/metanol 9.1 arányú elegyét alkalmazzuk). Hozam 5.1 g.

Fentiek szerint eljárva állíthatjuk elő az alábbi vegyületeket:

oszfonsav-tet{[(24riör~3-pír idinílj-aminoj-melil idén}-hiszi raetil-észter;

f[(ó-metoxi-3“píridinil)“aminoj-metílidén]~bíszfoszfonsav»

-teíraetil-észter;

[(4-piridintl-amino)-metilídénj-biszfoszfonsav-tetraetíl-észter;

[ [( 6 - am i ηo - 2 - p í r i d i η i I) - am i η o ] - m et í 1 $ dón ] -b i szfos zf ο n s a v -tetraetil-észter;

[[(3-nitro-2-pÍridiniÍ}~amino]~meídidén]-bíszfoszfonsav-tetraetil-észter;

[[(2~kiőr~3~pindinil)-aminoj-metilidén}~hiszföszfonsav-teí-

raeti í-észter;

({(5~acílo-xt”2“piridinil)-amíno]-met.iiídén]-biszfoszfonsav-telraetil-észter.

zetí tetracikha mérése

A kísérletekhez Sprague-Bawley fajtájú hím patkányokat használunk.· Az állatoknak életük első hetében fiziológiás sóoldatban feloldott 18 gCi/rnl (7-*H(N))-tetracikhat adunk he sxubkután kc.ió formájában. Az injekció beadását hetente kétszer hat béig megismételjük. Minden egyes állat összesen 20 pCi radiológiailag jelzett tetraelkiirst kap. Á fejlődd állatoknak járó normális étrenden tartjuk az állatokat, tetszés szerinti mennyiségű vizet biztosítva számukra. Bgy héttel a jelzett tetraciklín beadása után az állatokat lemérjük, ezt követően a felnőtt állatoknak szánt tápanyaggal tápláljuk tovább őket. Az 5. napon a patkányokat találomra csoportokra osztják és a metabolitikus vizsgálathoz különkülön ketrecekbe helyezzük őket, 18 napig gyűjtjük a 24 óra alatt í PÓM'a -ű- n tó d képződő vizeletet, A 2. naptól kezdődően az Gj-fei-to-f-án-o-s-deépée-t-elé—fcaHeaó^v [ { 2 - ρ i r i d i n i 1 - a m i η o)- m e t i 1 i d é n 1 - b i s z f o s z f o n s a v ~ t e t r a etil-észtert adjuk naponta, az állatoknak fiziológiás sóoídathan feloldva; a vizsgálati oldatot szuhkután injekció formájában adjak különböző dózis értékben; a kezelést 6 napig folytatjuk. A kontroll állatoknak fiziológiás sóoldatot adunk be. A vizelet térfogatát mérjük, a vizeletben mérhető radioaktivitás nagyságát folyadék szcintilláeiós módszerrel határozzuk meg. Á kapott adatokat a »w ♦** X ♦ * * kontroll állatoknál mért értékekhez viszonyítjuk, minden egyes napon az adatokat külön értékelve, ily módon megállapítjuk a t et r aci k Π n - ki v á1 ászt ás maximális in h i b i t á I á s át,

A vizeletben mérhető, metaboiitíkns lebomlást nem szenvedett tetraciklin meghatározásával e vegyöletnek. a csontból való kiürülését nyomon követhetjük a reszotpciós folyamat során, ily módon a esontreszorpelő folyamatába folyamatosan betekintést nyerőn^, Az I. táblázatban feltűntetett adatok [a vizsgálatokhoz oz- t. j/f iíőy οχ Γ<·ί k.

vegyöletet alkalmaznak] mutatják be a radioiógiailag jelzett tetraciklin kiválasztódás dózistól függő inhibítálását, ami jól szemlélteti a csontreszorpció gátlását.

1. táblázat

Spontán esöntreszurpelúra kifejtett hatás patkányoknál

Osteoporosis által előidézett mozgásesökkenésre kifejtett hatás vizsgálata patkányoknál

2ŐÖ+2S g testtömegé hím Sprague-Dawley fajtájú patkányokat testtömegük alapján találomra csoportokra osztunk, majd az állatokat Hypnorm/Mebunaí és Temgesíc alkalmazásával anesztetizáljuk. Dorsolateralis bevágást végzünk az állatok, jobb vagy bal csípőjén, ezen keresztül az ölőideget hozzáférhetővé tesszük, ebből 0,5 cm-es részt kivágunk. Az izmot és bort összevarrjuk, majd az állatot ketrecébe visszahelyezzük. A másik lábat érintetlenül hagyjuk.. A vizsgálathoz alkalmazott Ajk)—áMaMn-o-s A sv'Ma &·«Άΐν > ? X S a Ϊ ' i . ..Λ .

>zó· vegyületet fiziológiás sóoldatban feloldjuk és ezt az oldatot szubkntán injekció formájában naponta adjuk különböző dózisértékben. 2 nappal a sebészeti beavatkozást megelőzően kezdjük a kezelést és folytatjuk azt az ideg kimetszést követő 20. napig. A kontroll állatoknak fiziológiás sóoldatot adunk. A meghatározott időpontokban kröm-fluoriddal duplán jelzett állatokat 21 nappal az idegkímetszést követően leüljük és a eombcsontot eltávolítjuk. A eombcsontot metil-metakrilátba helyezzük, ebből metszeteket készítünk és ezeket megfestjük. Á femora szivacsos esontáilományát és a diaphysishez tartozó kéreg csontot hlstomorfometriai analízisnek vetjük alá. A kontroll állatokba a femora teljes esontterülete lecsökken a lerögzített lábban, A 2. táblázat adatai szerint azAU-~aRa44«^s---k-ép'l-ef---a-fá“far-kozó vegyület alkalmazása esetében a dózistól függően növekszik a femorális csontterölet a lerögzített lábban, A kéregcsont ásványi anyagokkal való ellátása vonatkozásában nem mutatkozott káros hatás (erre vonatkozóan adatokat nem csatolunk).

162. táblázat

Mozgáskorlátozással előidézett osleopo-rosis-ra kifejtett hatás patkányok eset ében

	mozdulatlanná csontjában a ti let	tett láb comb- | sijes csontfelü% 1
n	átlag (SE) j
kontroll	| 20		5,3 (0,6)
1, példa sze-	1 mg /kg	4		6,0(1,3)
rinti vegy ül el	37,3 mg/kg	5		17,3 (2,0)
dózisa	75 mg/kg	5		24,5 (2,5)
	200 mg./ka	5 7 l Z		35,5 (1,7) 1

A tibla prnxtoábs része teljes ásványi anyag sörőségének (BMP) vizsgálata patkányokon

A 3. példa szerinti vegyületet mozgáskorlátozott patkányoknak beadva a tíbia proshnálís részének ásványi anyag sűrűsége jelentősen növekedett mind a mozgáskorlátozott, mind az ellenoldali ép lábban összehasonlítva a sóoldattal kezelt kontroll patkányokéval..

Eredményeinket az 1, ábrán mutatjuk be (Átlag és SE n^::::3/Na€l, n~6Z3. példa szerinti vegyidet)

Csontra kifejtett hatás in vltro körülmények között Újszülött egereket ^4>Ca~val jelzünk, a ^4>Ca-t szub.kuián injekció formájában adjuk be 4 nappal az állatok leölése előtt, A koponyaíetobői, a koponysíalcsonfi részekből csonireszekel veszünk,, ezeket előinkubáljnk, a tápoldathoz Indometacínt adunk; ezótán a csontokat mossuk, majd 3 napig tovább tenyésztjük a találmány szerinti vegyüld jelenlétében vagy anélkül, A csontreszorpeiót paratiroid hormonnal (PTH, 10 mol/1) segítségével stimuláljuk, majd mérjük a stimulált reszorpeióra kifejtett gátló hatást, A 3, táblázatból kitűnik, hogy in vltro körülmények között a reszorpció gátlása nem észlelhető,, kivéve az igen magas, fiziológiás szempontból nem figyelembejövő koncentráció értékeknél, A találmány szerinti vegyületnek a csont ásványi anyagaihoz való kötődését oly módon vizsgáljuk, hogy ^HC-di nátrium -klód ront-tetrahidráíot és hídroxi-apatit .kristályokat szobahőmérsékleten inkubálunk barbhursav puffer tartalmú oldatban, (fiziológiás pH4- ps .ázwcM?

n) az vegy ölet jelenlétében vagy anélkül; a vizsgák vegyüíetet különböző koncentrációban használjuk. Két óra eltelte után az elegvet centrifugáljuk, a felölúszóból meghatározzuk az összes specifikusan kötött radioaktivitás %-át. Azt tapasztaltuk, hogy 5ÖÖ pmol/lrter koncentráció értékig az fk)4Ual4aea—képied—alá—karáo-z-ó vegyület nem mutat kötődést. Az eredményeket a 3, táblázat mutatja be,

3. táblázat

A csontra kifejtett hatás in vitro körülmények között

pmei/i áááaAe-': 100 umól/l zó ve- : 200 pmol/l gyület : 500 pmól/l löööpmol/l a PTH által sünre- a csont ásványi

Iáit reszorpció anyagaihoz való gátlása 1 kötődés

100 <PTH-x)/PTH I gátlás % ί nem észlelhető gátlás | nem lett meghatározva nem lett meghatározva i nincs- kötődés nem lett meghatározva <i nincs kötődés nem észlelhető gátlás nem észlelhető gátlás nem lett meghatározva nincs kötődés nem lett meghatározva i roncs Kötődés

12,9(1,3)

I nem lett meghatározva

Farmakokinetikai vizsgálatok

A vizsgálathoz használt vegyüld biológiai hozzáférhetőségét oly módon határozzuk meg, hogy vizsgáljuk a vizeletben 24 óra alatt kiürülő vegy-ület mennyiségét vagy pedig különböző időpontokban meghatározzuk, a szérum-koncentrációt az orális vagy í *« - ,. » ^si - 0<í A Λ-Χ&4Α **·-í\ intravénás beadást követően. Az vegyül et kon centrácxój át n agy nyomású fo lyadék-1 i k ví ökröm atográfiás módszerrel határozzuk meg a vizeletben és a szérummii bán. 24 óra alatt az orálisan beadott dózisnak kevesebb mint 10 %a, az intravénásán beadott dózisnak kevesebb mint 14 %-a ürül kí; az eredményeket a 4. táblázat mutatja be, a biológiai hasznosíthatóság 58 %-nak adódott. Az vegyületnek a szérum-koneentáreió alapján mért biológiai hasznosíthatósága 44· %-nak mutatkozott.

4. táblázat

Vizeletben történő kiválasztódás AU biológiai diszponálhatóság egyetlen intravénás vagy orális dózist követően *

114 mg/kg dózis

F ™ biológiai diszponálhatóság

AÜCö ->® ~ a vérszint/iáő görbe alatti terület

Claims (8)

1. Az (ί) általános képletü pírídinil-aaimo-metílidén-biszfoszfonsav-tefraészter-szánnazékok, ahol a képletben

R.j-M jelentése egyenes vagy elágazó láncú telített 1-5 szénatomos alkilesoport, X és Y jelentése egymástól függetlenül hidrogénatom, egyenes vagy elágazó láncú telített 1-5 szénatomos slkiiesoport, halogénatom, hidroxll-, 1-5 szénatomos alkotó-, benzll-oxi-, aeil-oxi-, nitro-, trifíuor-metil-esoport vagy' NR5R0 általános képleté csoport, amelyben Rs és R«.azonos vagy eltérő és jelentése hidrogénatom, i-5 szénatomos alkil- vagy acilesoport; gyógyszerhatóanyagként való alkalmazásra.

2. Az 1. igénypont szerinti (1) általános képletn vegyüíetek gyógyászati hatóanyagként való alkalmazásra, ahol az 1-5 szénatomos alkilesoport jelentése, ide értve az alkoxt- és az ad 1-csoportban lévő alkil-csoportokat is, metil- vagy etilcsoport és a. halogénatom jelentése klőraíom.

3. Az 1. vagy 2, igénypont szerinti vegyüíetek gyógyászati hatóanyagként való alkalmazásra, ahol az Rj-^4 szabsztitnensek jelentése azonos, mégpedig előnyösen etilcsoport.

4. A 3. igénypont szerinti vegyüíetek gyógyászati hatónyagként való alkalmazásra, ahol a piridiniícsoport jelentése 2-piridiniícsoport.

5. Az 1. igénypont szerinti vegyüíetek gyógyászati hatóanyagként való alkalmazásra, amelyek:

[(2~pirídinii-amino)~metilidén]-biszfósz.fbrssav-t.etraetil-észter;

([(3-hidroxi-2-piridini l)-amino]-meti lldénj-hisztószfonsav-tetraeíil -észter; ([(6-metoxi-3-pirtdinil)-amtnoj-meíillden]-bÍszfoszfonsav~ieíraetil-észter;

[(4-piridini Í~ammo)~meti!idén]-hl szioszíónsav-tetraeti 1 -észter;

- 20 [[(5~klőr~2-piridiml>anúno]-metilidén]-híszfoszfonsav-tetraetil-észler;

{[(5-m^oxt-2-pmdíniÍ)-aHHno]-metHidén]-biszfoszfonsav-tefeaetil-észter;

[[(ő-ammo-2-piridinil)-amino]-metilitóiJ-biszfos-zfofísav-tettaetil-észter;

l[(3-mtro--2-piriáinil)-^nin.o]-metilidénJ-btszfoszfonsav-tetraí4ií-észter;

li(3,5~diklőr-2~píridinií>-anunoj-meíílidén}-biszfoszlónsav-tetraetii~észter;

[[(6-hidroxi-3-piridinli)-ami.no]-metiÍíílén']-feiszfoszfonsav-tetraetil-észter;

[[(5-hidfoxí-2-piridtnlÍ)-amino]-metilídén)~bíszfoszíónsav-tctraetil-észter;

[((3-klőr-5-íritluQ-r-metil--piridÍml)-aminoj-metiiidénj-bíszfoszfonsav-tefraeíil-észter;

[[(2-klőr-3-piridimI)-ánwn<o]-metilldénj-biszfoszfonsav-tetraetiÍ-észter;

([(6-kl-ár-3-piridmil)-aminoJ-metiíidén)-btszfoszfo»sav-teíraetÍi-észteri |[(3^benzÍl-oxi-2-piridiníl)-amtnoj-metílídénj-biszfos5db-nsav4eíraetil-észter;

[[(5-nÍtro-2-piridinil)~amino]-metilidénl:-biszfoszfbnsav-tetraedbésAer; vagy ([(5~benzíl-oxi~2-piridimiyamino]-mettlidénj-biszfbszíorísav-teíraeiil-észter.

6. Az 1-5. igénypont szerinti vegyítetek -csontbetegségek, így például rosszindulaté osteölitíkus esontbetegségek, Paget-íéle kór és- primer vagy -szekunder osteoporosts kezelésére való alkalmazásra.

7. Gyógyászati készítmény csontmegbetegedések, így rosszínduíató osteollíi.kus csontbetegségek, Paget-féle kór, valamint pimer vagy szekunder osteoporosis kezelésére, azzal jellemezve, hogy a készítmény gyógyászatit ag megfelelő segéd- és vivőanyagot és valamely egy, az 1-5. igénypontok bármelyike-szerinti vegyítlet hatásos mennyiségét tartalmazza.

8. Az 1-5. igénypont szerinti vegyületek. alkalmazása hatóanyagként olyan gyógyászati készítmény előállítására, amely csontbetegségek, így például rosszindulatú osteoíitíkas csontmegbetegedések., Paget-tele kór, valamint primer és szekunder osteoporosis kezelésére alkalmas.