HU218665B

HU218665B - Bakkatin-III származékok, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítmények és eljárás előállításukra

Info

Publication number: HU218665B
Application number: HU9300594A
Authority: HU
Inventors: Ezio Bombardelli; Bruno Gabetta
Original assignee: Indena S.P.A.
Priority date: 1992-03-06
Filing date: 1993-03-04
Publication date: 2000-10-28
Also published as: HU9300594D0; CN1076695A; HUT64317A; NO930774D0; DK0559019T3; CN1051082C; CZ284265B6; PL297940A1; DE69326369T2; FI930978A0; US5453520A; ITMI920528A0; JPH069599A; DE69326369D1; CA2091001A1; SK279257B6; ITMI920528A1; IT1254517B; EP0559019A1; GR3031280T3

Abstract

A találmány tárgyát az (1) általános képletű vegyületek képezik, aképletben R1 jelentése önmagában hidrogénatom; R14 jelentése önmagábanhidrogénatom; vagy R1 és R14 együttes jelentése karbonilcsoport vagyC1–7 alkilidéncsoport; R7 jelentése hidrogénatom, tri(C1–6 alkil)-szilil-csoport, 1–3 halogénatommal szubsztituált C2–7 alkanoilcsoportvagy 1–3 halogénatommal szubsztituált C2–7 alkoxi-karbonil-csoport;R10 jelentése hidrogénatom, adott esetben 1–3 halogénatommalszubsztituált C2–7 alkanoilcsoport vagy 1– 3 halogénatommalszubsztituált C2–7 alkoxi-karbonil-csoport; R13 jelentésehidrogénatom, CO–CHOH–CH(C6H5)–NHCOC6H5 vagy–CO–CHOH–CH(C6H5)–NHCOOC(CH3)3 és Ac jelentése acetilcsoport. Atalálmány további tárgyát képezik a fenti vegyületeket tartalmazógyógyászati készítmények, illetve a vegyületek előállítására szolgálóeljárás. ŕ

Description

A jelen találmány (1) általános képletű új bakkatin IIIszármazékokra, ezeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményekre és előállításukra vonatkozik.

Az (1) általános képletben R[ jelentése önmagában hidrogénatom;

Rj4 jelentése önmagában hidrogénatom; vagy

R, és R,4 együttes jelentése karbonilcsoport vagy C,_₇ alkilidéncsoport;

R₇ jelentése hidrogénatom, tri(C!_₆ alkil)-szilil-csoport, 1 -3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkanoilcsoport vagy 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkoxi-karbonil-csoport;

R₁₀ jelentése hidrogénatom, adott esetben 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkanoilcsoport vagy 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkoxi-karbonil-csoport;

R₁₃ jelentése hidrogénatom,

CO-CHOH-CH(C₆H₅)-NHCOC₆H₅ vagy -CO-CHOH-CH(C₆H₅)-NHCOOC(CH₃)₃ és

Ac jelentése acetilcsoport.

Az 1-7 szénatomszámú alkilcsoport meghatározás egy vegyértékű, telített, elágazó vagy egyenes szénhidrogénláncra utal. Az ilyen alkilcsoportokra példaként a metil-, etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil-, szek-butil-, terc-butil-, pentil-, izopentil-, neopentil-, terc-pentil-, hexil-, izohexil-heptil- és hasonló csoportokat említjük.

A szubsztituensdefiníciókban előforduló alkoxicsoport kifejezés olyan 1-7 szénatomszámú alkoxicsoportot jelöl, amely a molekula további részéhez egy éteres oxigénkötéssel kapcsolódik. Ilyen alkoxicsoportok a metoxi-, etoxi-, propoxi-, izopropoxi-, butoxi-, izobutoxi-, szek-butoxi-, terc-butoxi-, pentoxi-, izopentoxi-, neopentoxi-, terc-pentoxi-, hexoxi-, izohexoxi-, heptoxi- és hasonló csoportok.

Az 1-7 szénatomszámú alkilidéncsoport egy geminálisan két vegyértékű telített, egyenes vagy elágazó szénhidrogénláncot jelent. Ilyen alkilidéncsoportok például a metilidén-, etilidén-, propilidén-, izopropilidén-, butilidén-, izobutilidén-, pentilidén-, neopentilidén-, hexilidén-, heptilidén- és hasonló csoportok.

A szubsztituensdefiníciókban szereplő halogén-alkoxi-csoportok közül példaként a difluor-metoxi- és trifluor-metoxi-csoportokat említjük.

Az olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben

R₁=R₇=R₁₀=R₁₃=Ri₄=H, azaz az (la) vegyület egy új taxán, amelyet a Taxus nemzetség vegetatív anyagából, különösen a Taxus wallichiana föld feletti részéből, lényegében más vegyületektől mentesen lehet izolálni. Az említett faj Ázsiában igen elterjedt, különösen a Himalája szikláin. Az (la) vegyület szerkezetét ’H- és ’³C-NMR-vizsgálatokkal és röntgensugár-diffraktometriás analízissel állapítottuk meg. Az (la) vegyület a 10deacetil-bakkatin ΠΙ-hoz képest, amelyet a taxol és taxoter daganatellenes szerek szintézisénél szintenként használnak, egy további hidroxilcsoportot tartalmaz a 14béta-helyzetben. Ezen további hidroxilcsoport jelenléte a molekulát a 10-dezacetil-bakkatin III-nál hidrofilebbé teszi, amely tulajdonság előnyt jelent az ilyenfajta diterpénvázat tartalmazó daganatellenes szerek embereknek períűzió útján való adagolása szempontjából.

Az új, (la) képletű taxánt növényi részekből, előnyösen tűkből lehet elkülöníteni két különböző extrakciós eljárással.

A növényi anyagot valójában vízzel elegyedő vagy vízzel nem elegyedő oldószerekkel lehet kivonatolni. Az első esetben [A) eljárás] egy protikus oldószert, például metanolt vagy etanolt magában vagy vízzel keverve használhatunk. Közepesen poláros aprotikus oldószert, például acetont is alkalmazhatunk önmagában vagy vízzel elegyítve. Az (la) vegyület a növényi anyagból ezekkel az oldószerekkel szobahőmérsékleten kivonható. A kapott extraktumot a szerves oldószer eltávolításáig töményítjük, a képződött oldatlan anyagoktól megszüljük, és aztán vízzel nem elegyedő oldószerrel, például etil-acetáttal, vagy klórozott oldószerrel, előnyösen metilén-dikloriddal kezeljük. Az (la) vegyületet tartalmazó szerves extraktumot szárazra pároljuk, és a kapott maradékot oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. Amikor vízzel nem elegyedő oldószert használunk [B) eljárás], aromás szénhidrogént, például benzolt vagy toluolt, vagy klórozott oldószert, például metilén-dikloridot, kloroformot, 1,2-diklór-etánt, 1,1,1-triklór-etánt alkalmazhatunk. Ebben az esetben a növényi anyag extrakcióját szobahőmérsékleten vagy a választott oldószer forráspontjának hőmérsékletén végezzük.

A kapott extraktumot bepároljuk, a poláros szennyezésektől egy C| ₆ alkohol, például metil-alkohol 30%-os vizes oldatával kezelve megtisztítjuk, majd szárazra pároljuk.

A maradékot aztán, az A) eljárással kapotthoz hasonlóan, oszlopkromatográfiásan tisztítjuk tovább.

Mindkét eljárás esetében a növényi anyag két különböző módon végzett extrakciójával kapott maradékot szilikagéloszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, amelyhez eluálószerként oldószerelegyeket, például ciklohexán és aceton, metilén-diklorid és etil-acetát vagy metilén-diklorid és metanol elegyét használjuk, amelyeknek arányát úgy állítjuk be, hogy a lehető legnagyobb mennyiségű (la) vegyületet tudjunk elkülöníteni. A kiindulási növényi anyagtól függően az (la) vegyület hozama 0,1 és 0,01% között változik. Az (la) vegyületet tartalmazó kromatográfiás frakciókat egyesítjük, szárazra pároljuk, és a maradékot metanolból, etil-acetátból, acetonból vagy acetonitrilből kristályosítva tiszta (la) vegyületet kapunk.

Az (1) általános képletű vegyületeket az (la) vegyületből állíthatjuk elő ismert módszerekkel.

Részlegesen átalakított termékeket is készíthetünk az (la) képletű vegyületből, mivel a hidroxilcsoportok reakciókészsége eltérő, és az alábbi sorrendnek felel meg: 7-OH >10-OH>14-OH>13-OH.

Ezért, vagy megfelelő mennyiségű reagenst alkalmazva, vagy a hőmérséklet és reakcióidő beállításával részlegesen átalakított vegyületekhez juthatunk.

Az olyan vegyületeket, amelyekben R₇ és R₁₀ mindegyike vagy egyik közülük 2-7 szénatomos alkanoilcsoport, úgy állíthatjuk elő, hogy az (la) vegyületet vagy valamely származékát egy R₅-COO-CO-R₅ általános képletű karbonsavanhidriddel, a képletben R₅ 1-6 szénatomos alkilcsoport, amely a szubsztituensdefinícióban

HU 218 665 Β megadott módon helyettesítetlen vagy halogénatommal egyszeresen, kétszeresen vagy háromszorosan helyettesített, egy aminocsoportján helyettesített 4-amino-piridin jelenlétében és egy alkalmas oldószerben reagáltatjuk.

Az acilezési reakciót szobahőmérsékleten vagy adott esetben a reakcióelegy forralásával végezzük.

Eljárhatunk úgy is, hogy az (la) vegyületet vagy származékát egy R₅COOH általános képletű savval klórozott oldószerben, például metilén-dikloridban vagy kloroformban karbodiimid, például diciklohexil-karbodiimid vagy l-[3-(dimetil-amino)-propil]-3-etil-karbodiimid és egy katalizátor, például 4-(N,N-dimetil-amino)-piridin vagy 4-(pirrolidino)-piridin jelenlétében, szobahőmérsékleten vagy az oldószer forráspontján visszük reakcióba.

Olyan (1) általános képletű vegyületet, amelyben R₇tri(kis szénatomszámú)alkil-szilil-csoport, az (la) vegyületből vagy valamely származékából úgy kaphatunk, hogy egy szililezőszerrel alkalmas oldószerben és alkalmas katalizátor jelenlétében reagáltatjuk. Például (tercbutil)-dimetil-klór-szilánt használhatunk minden szililezni kívánt hidroxilcsoportra számítva 1,1 ekvivalens mennyiségben, 2,2 ekvivalens imidazol vagy 4-(N,N-dimetil-amino)-piridin jelenlétében dimetil-formamidban és szobahőmérsékleten végezve a reakciót.

Azokhoz az (1) általános képletű vegyületekhez, amelyekben R, és R₁₄ együtt karbonilcsoportot alkot, úgy juthatunk, hogy az (la) vegyületet alkalmas klórformiáttal bázikus oldószerben, például piridinben reagáltatjuk. így az (la) vegyületet triklór-etil-klór-formiát feleslegével piridinben, 80 °C-on néhány percig reagáltatva olyan terméket kapunk, amelyben a 7- és 10-helyzetű hidroxilcsoportok -COOCH₂CCl₃-csoporttal acilezettek.

Azonban a reakcióközegben egy intramolekuláris nukleofil szubsztitúció megy végbe a 14-es helyzetű szubsztituens és az 1-es helyzetben levő hidroxilcsoport között, amelynek eredményeként (lb) karbonát képződik.

Azokat az (1) általános képletű származékokat, amelyekben az Rj és R,₄ együtt kis szénatomszámú alkilidéncsoportot alkot, oly módon állíthatjuk elő, hogy az (la) vegyületet egy aldehiddel vagy ketonnal, megfelelően katalizált körülmények között reagáltatjuk. Például ha az (la) vegyületet 2,2-dimetoxi-propánnal acetonos oldatban és piridin-p-toluolszulfonát jelenlétében visszük reakcióba, (le) gyűrűs ketont kapunk, amelynek képzésében az (la) vegyület 14- és 1-helyzetű hidroxilcsoportjai vesznek részt.

A jelen találmány szerinti (1) általános képletű vegyületek antimitotikus hatásúak, amely hatás összemérhető az ismert taxánok, így a taxol vagy származékainak hatásával, és in vivő daganatellenes hatást fejtenek ki.

In vitro a vegyületek hatnak az agytubulinra (Shelanski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 70, 765, 1973) és humán tenyésztett leukocitákra. A találmány szerinti vegyületek vizsgálataink szerint kétszer akkora hatást fejtenek ki a tubulinra, mint a megfelelő bakkatin III-származékok.

A vegyületeket orálisan vagy parenterálisan, önmagukban vagy más gyógyszerekkel, többek között neopláziaellenes szerekkel, szteroidokkal és másokkal kombinálva adagolhatjuk az ilyen kezelést igénylő emlősnek. A parenterális adagolás történhet intramuszkulárisan, intravaginálisan, intravénásán és intraartériásan. Mint ahogy az ilyen típusú gyógyszerek esetében szokásos, a dózist a kezelendő neoplazma, a beteg állapota és az adott válasz figyelembevételével kell beállítani, de általában körülbelül 10 és körülbelül 30 mg/m²/nap az adag 5 napig vagy 150-250 mg/m² háromhetenként egy alkalommal. Noha a jelenleg használatban levő más szerekhez képest a toxieitás alacsony, a toxikus választ gyakran vagy a napi dózis csökkentésével és/vagy váltakozó napokon való adagolással és/vagy hosszabb időközönként, így minden harmadik vagy ötödik napon történő beadással csökkenthetjük. Orális dózisformák például a tabletták és kapszulák, amelyek egységdózisonként 1 -10 mg hatóanyagot tartalmaznak.

A következő példák a találmány további bemutatására szolgálnak.

7. példa

14-béta-Hidroxi-10-dezacetil-bakkatin III [(la), azaz olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben R₁=R₇=Ri₀=R₁₃=Ri₄=H] elkülönítése Taxus wallichiana levelekből

A) eljárás kg Taxus wallichiana levelet, amelyet 35 °C-on vákuumban szárítottunk, finoman megőrölünk, és 6 alkalommal 3-3 liter metanollal extrahálunk keverés közben, szobahőmérsékleten. Minden extrakciót 6 órán át végzünk. Az összegyűjtött extraktumokat csökkentett nyomáson 1 liter térfogatra bepároljuk, és 24 órán át állni hagyjuk. A kivált oldhatatlan anyagot kiszűrjük. A szűrletet 6 alkalommal 500-500 ml metilén-dikloriddal extraháljuk. Az összegyűjtött szerves fázisokat vákuumban 500 ml-re bepároljuk, és a kapott oldatot 300 g szilikagélen oszlopkromatográfiásan tisztítjuk. Eluálószerként metilén-dikloridot használunk, amíg az apoláros vegyületeket teljesen eltávolítjuk, majd metilén-diklorid és etilacetát 85:15 térfogatarányú elegyével eluálva tiszta (la) vegyületet kapunk. Az összegyűjtött frakciókat vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot 7 térfogat metanolból kristályosítjuk. A kristályos szilárd anyagot szívatással szüljük, kevés metanollal mossuk, majd 40 °C-on vákuumban szárítjuk. Ily módon 800 mg (la) vegyületet kapunk, amely 215-217 °C-on olvad; M⁺ m/z=560. Elemanalízis a C₂9H₃₆O_h összegképlet alapján: számított: C: 62,13%; H: 6,47%;

talált: C: 62,07%; H: 6,53%.

2. példa

14-béta-Hidroxi-10-dezacetil-bakkatin III [(la), azaz olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben R₁=R₇=R₁₀=R₁₃=R₁₄=H] elkülönítése Taxus wallichiana levelekből

B) eljárás kg Taxus wallichiana levelet, amelyet 35 °C-on vákuumban szárítottunk, finoman megőrlünk, és 6 x 3 liter toluollal extrahálunk szobahőmérsékleten, keverés közben, 6-6 órán át. Az összegyűjtött extraktumokat csök3

HU 218 665 Β kentett nyomáson 500 ml-re bepároljuk, és 3x70 ml 20%-os vizes metanollal kezeljük. A toluolos fázist vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot 500 ml metilén-dikloridban oldjuk. A kapott oldatot az 1. példában leírt módon oszlopkromatográfiásan tisztítjuk, így tiszta (la) vegyületet kapunk, amely 215-217 °C-on olvad.

3. példa (lb) vegyület [azaz olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben R₇=R₁₀=-COOCH₂CC1₃, R, és R₁₄együtt -CO-csoport és R₁₃ hidrogénatom] előállítása

300 mg (0,53 mmol) (la) vegyületet 6 ml vízmentes piridinben oldunk, és 5 percig 80 °C-on 0,49 ml (3,41 mmol) 2,2,2-(triklór-etil)-klór-formiáttal reagáltatunk. A reakcióelegyet ezután szobahőmérsékletre hűtjük, és a reagens feleslegének elbontására néhány csepp metanolt adunk hozzá. A reakcióelegyet vízzel hígítjuk, majd metilén-dikloriddal extraháljuk. A szerves fázist elválasztjuk, híg sósavval mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és aztán szárazra pároljuk. A maradékot 7 g szilikagélből készült oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként hexán és etil-acetát 1:1 térfogatarányú elegyét használjuk. 295 mg (59%) (lb) vegyületet kapunk. M+ (C.I.MS) m/z=955 (937+NH₄).

Elemanalízis a C₃₆H₃₅Oi₆Ci₆ összegképlet alapján: számított: C: 46,10%; H: 3,84%;. Cl: 22,73%; talált: C: 45,98%; H: 3,91%; Cl: 22,67%.

4. példa (le) vegyület [azaz olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben R₇=R₁₀=R₁₃=H; R₁₄ és R! együtt -C(CH₃)₂-csoport] előállítása

100 mg (la) vegyületet 17 ml acetonban oldunk, amelyet előzőleg réz-szulfátról desztilláltunk, és keverés közben, szobahőmérsékleten 7 ml 2,2-dimetoxi-propánnal és 150 mg piridin-p-toluolszulfonáttal reagáltatunk. A reakcióelegyet ezután szárazra pároljuk, és a maradékot metilén-dikloridban felvesszük. A szerves oldatot a piridiniumsó eltávolítására vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és az oldószert csökkentett nyomáson ledesztilláljuk. A maradékot 5 g szilikagélből készült oszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként dietilétert használunk. Ily módon 82 mg (76%) (le) vegyületet kapunk, amely 166-170 °C-on olvad.

M⁺ (C.I.MS) m/z=618 (600+NH₄).

Elemanalízis a C₃₂H₄₀O_h összegképlet alapján: számított: C: 63,89%; H; 6,71%; talált: C: 64,00%; H: 6,67%.

5. példa

14-béta-Hidroxi-10-dezacetil-7,10-(diklór-acetát)bakkatin III [azaz olyan (1) általános képletű vegyület, amelyben Ri=Ri₃=Ri4=H; R₇=R₁₀=-COCHC1₂] előállítása

200 mg (la) vegyületet 3 ml vízmentes piridinben oldunk, és szobahőmérsékleten 24 órán át 160 mikroliter diklór-ecetsavanhidriddel és 10 mg 4-(N,N-dimetil-amino)-piridinnel reagáltatunk.

A reakcióelegyet jeges vízzel hígítjuk, és kloroformmal extraháljuk. A szerves fázist híg sósavval, majd vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk és végül szárazra pároljuk.

A maradékot szilikagéloszlopon kromatográfiásan tisztítjuk, eluálószerként hexán és etil-acetát 3:7 térfogatarányú elegyét használjuk. 217 mg 7,10-(diklór-acetát)-vegyületet kapunk, amelyet kloroformból kristályosítunk.

M+=792.

Elemanalízis a C₃₃H₃₆O₁₃C₁₄ összegképlet alapján: számított: C: 50,00%; H: 4,54%; Cl: 17,93%; talált: C: 49,86%; H: 4,71%; Cl: 17,01%.

6. példa

10-Dezacetil-14p-hidroxi-(bakkatin 111)-1,14-karbonát (Rj és R₁₄ együttesen -CO-; R₇=R₁₀=R₁₃=H)

10-Dezacetil-14p-hidroxi-(bakkatin III) (2,8 g, 5,14 mmol) vízmentes metilén-kloridban (25 ml) készült szuszpenziójához vízmentes piridint (8,3 ml, 8,1 g, 20 mólekvivalens) adagolunk. Egy tiszta oldatot kapunk, melyet -10 °C-ra hűtünk. 26,6 ml 1,9 mol/literes toluolban készült foszgénoldatot adagolunk keverés közben. Az adagolás végét követően, 15 perc múlva a keveréket először telített NaHCO₃oldattal, majd vízzel (20 ml) hígítjuk. A vegyületet metilén-kloriddal extraháljuk, majd a szerves fázist híg vizes HCl-oldattal mossuk. MgSO₄-tal végzett szárítást követően az oldószert flash oszlopkromatográfiásan eltávolítjuk (10 g szilikagél, eluens: etil-acetát/hexán=3:7), és így 2,8 g (93%) cím szerinti vegyületet kapunk (M⁺=568).

7. példa

10-Dezacetil-14p-hidroxi-7-O-(trietil-szilil)-(bakkatin III)-l,14-karbonát (Rí és R₁₄ együttesen -CO-; R₁₀=R₁₃=H; R₇=trietil-szilil) g 10-dezacetil-14p-hidroxi-(bakkatin 111)-1,14karbonátot 50 ml dimetil-formamiddal hígítunk, majd 5 ml trietil-szilil-klorid/imidazol elegyet adagolunk. A reakciókeveréket 2 órán át szobahőmérsékleten tartjuk. A reakció teljessé válását vékonyréteg-kromatográfiásan ellenőrizzük, majd ezt követően 500 g jégre öntjük, majd a szuszpenziót metil-kloriddal extraháljuk. A szerves fázist MgSO₄ felett vízmentesítjük, majd szárazra töményítjük. A maradékot (11,8 g) aceton/hexán elegyből átkristályosítjuk. így 10 g cím szerinti vegyületet kapunk (M+=702).

8. példa

14p-Hidroxi-7-O-(tnetil-szilil)-(bakkatin III)-1,14karbonát (R[ és R₁₄ együttesen -CO-; R₁₀=Ac; R₇=trietil-szilil; R₁₃=H;) g 10-dezacetil-14p-hidroxi-7-O-(trietil-szilil)(bakkatin 111)-1,14-karbonátot metil-kloridban oldunk, majd 12 órán át 2 ekvivalensnyi acetil-kloriddal extraháljuk, vízzel mossuk, majd a szerves fázist vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot metanolban felvesszük, majd a kivált szilárd anyagot szüljük és aceton/hexán eleggyel kristályosítjuk. így 10 g cím szerinti vegyületet kapunk (M⁺ =744).

HU 218 665 Β

9. példa

13-[(2R,3S)-3-(Benzoil-amino)-2-hidroxi-3-fenilpropanoil]-14p-hidroxi-(bakkatin 111)-1,14-karbonát

0,5 g 7-O-(trietil-szilil)-14p-hidroxi-(bakkatin III)1,14-karbonátot 60 ml toluollal hígítunk. Az elegyhez 800 mg (A) képletű (4S,5R)-N-(benzoil)-2,2-dimetil-4fenil-5-oxazolidin-karbonsavat, 400 g ciklohexil-karbodiimidet és 40 mg Ν,Ν-dimetil-amino-piridint adagolunk.

A reakciókeveréket 80 °C-on tartjuk 2 órán át, majd szűrjük és vízzel mossuk. A szerves fázist ezt követően szá- 10 razra pároljuk. A maradékot 10 °C-on 0,1% H₂SO₄-ot tartalmazó metanollal kezeljük. A metanolos oldatot vízzel hígítjuk, majd a terméket etil-acetáttal extraháljuk.

A szerves fázist szárazra töményítjük, majd a maradékot szilikagélen kromatográfiásan tisztítjuk eluensként aceton/hexán 4:6 arányú elegyét alkalmazva. így 580 mg cím szerinti vegyületet kapunk (M⁺ m/z=897).

10. példa

13-[(2R,3S)-3-(terc-Butoxi-karbonil-amino)-2-hid- 20 roxi-3-fenil-propanoil]-14p-hidroxi-(bakkatin 111)-1,14karbonát

0,5 g 7-O-(trietil-szilil)-14p-hidroxi-(bakkatin III)1,14-karbonátot 60 ml toluollal hígítunk. Az oldathoz 800 mg (B) képletű (4S,5R)-N-(terc-butoxi-karbonil)2,2-dimetil-4-fenil-5-oxazolidin-karbonsavat, 400 g 5 ciklohexil-karbodiimidet és 40 mg Ν,Ν-dimetil-aminopiridint adagolunk. A reakciókeveréket 80 °C-on tartjuk 2 órán át, majd ezt követően szűrjük és vízzel mossuk. Ezután a szerves fázist szárazra pároljuk. A maradékot 10 °C-on 0,1% H₂SO₄-ot tartalmazó metanollal kezeljük. A metanolos oldatot vízzel hígítjuk, majd a terméket etil-acetáttal extraháljuk. A szerves fázist szárazra töményítjük, majd a maradékot szilikagélen kromatográfiásan tisztítjuk eluensként aceton/hexán 4:6 arányú elegyét alkalmazva. így 580 mg cím szerinti vegyületet ka15 púnk (M+m/z=851).

1. farmakológiai példa - in vitro vizsgálat

A találmány szerinti vegyületek közül a 9. és 10. példa szerintieket ismert vegyületekkel együtt vizsgáltuk Alley M. C. és társai Cancer Rés. 48, 589,1988 műben leírt módszer szerint. Az eredményeket az alábbi 1. táblázatban foglaljuk össze.

1. táblázat

Vegyületek	A 121	A 549	HT 29	MCF 7	MCF 7-ADR	MCF 7ADR/MCF 7
Cephalo-mannine	20	6,8	12	4	>10 000	>2500
Baccatin III	5 1O³	2,1-10³	2,1-10³	3-10³	nem aktív
Paclitaxel	10,3	3,6	3,6	2,1	513,7	244,6
Docetaxel	3,0	1,0	1,2	1,0	235	235
1. példa	8,2	2,4	3,0	1,6	23	14,3
10. példa	2,6	1,2	0,8	1,4	26	18,6

Jelmagyarázat

A 121: humán petefészek-karcinóma.

A 549 (CCL70) : humán tüdőkarcinóma.

HT 29 (HT B-38): humán vastagbcl-adenokarcinóma. MCF 7: humán cmlő-adenokarcinóma.

MCF 7-ADR: adriamicinrezisztens emlő-adenokarcinóma.

2. farmakológiai példa - in vitro vizsgálat Hathetes Balb/C^nu/^nu athymiás nőstény egereket (Harlan/Sprague-Dawley-tól beszerezve) alkalmaztünk humán emlőtumorok (MCF 7) gazdáiként kéthetes karanténban tartást követően. Az egerekbe körülbelül 50 mg nem nekrotikus tumorfragmenseket vittünk be szubkután egy szokásos punkciós kanüllel (12-es méretű) transzplantációs technikát alkalmazva. A kemoterá- $5 piát az implantációt követően 4-10 nappal kezdtük el, amikor már a tumor tapinthatóvá vált (100 mm³-es méretű).

A tumomövekedést hetente kétszer vizsgáltuk kétirányú tapintókörző segítségével. A tumomövekedés-gát- θθ lást (T/C arány) határoztuk meg a paclitaxelanalógok tumorellenes aktivitásának jellemzésére. A kontrollcsoport tumortömege (C) elérte az 1-1,5 g tömeget; a kezelt csoport tumortömegeit (T) is meghatároztuk, a látható tumort nem hordozó állatokat is figyelembe véve. A T/C értéket úgy határoztuk meg, hogy a kezelt csoport tumortömegét elosztottuk a kontrollcsoport tumortömegével. A tumorok tömegét a tumor mérete alapján becsültük meg, azon feltételezés alapján, hogy 1 mm³ tumor tömege 1 mg. A 0,4-nél nagyobb T/C értéket tekintjük az aktivitás minimális értékének (NCI standard).

Az eredményeket az alábbi 2. táblázatban foglaljuk össze.

HU 218 665 Β

Vegyület	Dózis mg/kg iv.	A tumor tömege 15 nappal az implantációt követően (tömeg+standard hiba)	A kezelt csoport/ kontrollcsoport arány (T/C arány)
Cephalomannin	80	1850+216	0,92
Paclitaxel	80	713+121*	0,35
Docetaxel	30	461+96*	0,23
9. példa	50	230+78**	0,11
10. példa	30	200+56**	0,10
Kontroll	-	2000+312	-

n=6; *p<0,05; **p<0,001

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. (1) általános képletű vegyületek, ahol a képletben Rj jelentése önmagában hidrogénatom;

R₁₄ jelentése önmagában hidrogénatom; vagy

R, és R₁₄ együttes jelentése karbonilcsoport vagy C₁₇ alkilidéncsoport;

R₇ jelentése hidrogénatom, tri(C[_₆ alkil)-szilil-csoport, 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkanoilcsoport vagy 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkoxi-karbonil-csoport;

Rio jelentése hidrogénatom, adott esetben 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkanoilcsoport vagy

1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkoxi-karbonil-csoport;

R₁₃ jelentése hidrogénatom,

-CO-CHOH-CH(C₆H₅)-NHCOC₆H₅ vagy -CO-CHOH-CH(C₆H₅)-NHCOOC(CH₃)₃ és

Ac jelentése acetilcsoport.
2. Az 1. igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben R_b R₇, R₁₀, R₁₃ és R₁₄ egyidejűleg hidrogénatom.
3. Az 1. igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben R₇ jelentése 2-7 szénatomos alkanoilcsoport, amely halogénatommal egyszeresen, kétszeresen vagy háromszorosan helyettesített.
4. Az 1. igénypont szerinti olyan vegyületek, amelyekben R₁₀ jelentése 2-7 szénatomos alkanoilcsoport, amely adott esetben halogénatommal egyszeresen, kétszeresen vagy háromszorosan helyettesített.
5. Eljárás az (1) általános képletű vegyületek előállítására - ahol a képletben szereplő szubsztituensek jelentése az 1. igénypontban megadott azzal jellemezve, hogy az R_b R₇, Ri₀, Rj₃ és R₁₄ jelentésében hidrogénatomot hordozó (1) általános képletű vegyület előállítására

- Taxus wallichiana föld feletti részéből származó növényi anyagot vízzel elegyedő oldószerrel vagy vízzel elegyedő oldószer és víz elegyével extrahálunk; majd

- az oldószert lepároljuk; majd

- az oldhatatlan maradék kiszűrését követően a kapott anyagot vízzel nem elegyedő oldószerrel kezeljük, vagy a kapott anyagot C,_₆ alkohol vizes oldatával kezeljük; majd

-a kapott oldatot bepároljuk; és

- a kapott végterméket oszlopkromatográfiásan tisztítjuk és kristályosítjuk; és kívánt esetben

i) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítása esetén, melyekben R_t és R_l4 együttes jelentése karbonilcsoport, egy Rj és R₁₄ helyén hidrogénatomot hordozó (1) általános képletű vegyületet foszgénnel reagáltatunk; vagy ii) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítása esetén, melyekben Rj és R₁₄ együttes jelentése karbonilcsoport és R₇ és R₁₀ jelentése 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkoxi-karbonil-csoport, egy R_b R₇, R₁₀ és R₁₄ jelentésében hidrogénatomot hordozó (1) általános képletű vegyületet a megfelelő klór-formiátszármazékkal reagáltatunk; vagy iii) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítása esetén, melyekben Rj és R₁₄ együttes jelentése Cj_₇alkilidéncsoport, egy R, és R₁₄ jelentésében hidrogénatomot hordozó (1) általános képletű vegyületet C| ₄alkoxicsoporttal diszubsztituált C_b7 alkánnal reagáltatunk; és/vagy iv) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítása esetén, melyekben R₇ és R₁₀ jelentése 1-3 halogénatommal szubsztituált C₂_₇ alkanoilcsoport, egy R₇ és R₁₀ jelentésében hidrogénatomot hordozó (1) általános képletű vegyületet a megfelelő halogén-szubsztituált alkánkarbonsav aktivált formájával reagáltatjuk; és/vagy

v) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítása esetén, melyekben R₁₀ jelentése C_{2 7} alkanoilcsoport, egy R₁₀ jelentésében hidrogénatomot hordozó (1) általános képletű vegyületet a megfelelő alkán-karbonsav aktivált formájával reagáltatjuk; és/vagy vi) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítása esetén, melyekben R₇ jelentése tri(C!_₆ alkil)-szililcsoport, egy R₇ jelentésében hidrogénatomot hordozó

HU 218 665 Β (1) általános képletű vegyületet a megfelelő tri(C!_₆alkilj-szilil-halogeniddel reagáltatjuk; és/vagy vii) olyan (1) általános képletű vegyületek előállítása esetén, melyekben

R,3 jelentése CO-CHOH-CH(C₆H₅)-NHCOC₆H₅vagy

-CO-CHOH-CH(C₆H₅)-NHCOOC(CH₃)₃ csoport, egy R₁₃ jelentésében hidrogénatomot hordozó (1) általános képletű vegyületet az (A) vagy (B) képletű oxa zolidinkarbonsav-származékkal reagáltatjuk.
6. Gyógyászati készítmények, amelyek hatóanyag ként egy 1 -4. igénypontok bármelyike szerinti vegyüle 5 tét tartalmaznak megfelelő vivőanyaggal alkotott keve rék formájában.