HU215604B

HU215604B - Eljárás biológiailag hatásos 19-nor-D-vitamin-vegyületek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására

Info

Publication number: HU215604B
Application number: HU902307A
Authority: HU
Inventors: Hector Floyd Deluca; Kato Leonard Perlman; Jean Martin Prahl; Heinrich Konstantine Schnoes; Rafal Ryszard Sicinski
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 1989-03-09
Filing date: 1990-02-16
Publication date: 1999-01-28
Also published as: KR920700200A; HU222491B1; IL93455A0; WO1990010620A1; US5587497A; KR950013636B1; ZA907119B; HU902307D0; US5633241A; AR246254A1; BR9004521A; CA1333616C; US5237110A; FI905489A0; NO904854L; JPH03505330A; RU2012558C1; US5880113A; US5710294A; AU5198890A

Abstract

A találmány tárgya eljárás új (I) általánős képletű 1a-hidrőxi-19-nőr-D-vitamin-vegyületek – ahől X1 és X2 jelentése hidrőgénatőm, R jelentése (A) általánős képletű csőpőrt, amelyben R1 hidrőxilcsőpőrtőt jelent, R2 és R3 jelentése 1–6 szénatőmős alkilcsőpőrt, R4 jelentése hidrőgénatőm, R5 jelentése hidrőgénatőm vagy 1–6 szénatőmős alkilcsőpőrt, R6 és R7 jelentése hidrőgénatőm vagy R6 és R7 együttesen szén–szén közötti kettős kötést is képezhetnek, n értéke 1, 2, 3 vagy 4, valamint ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítményekelőállítására. Az (I) általánős képletű vegyületeket tartalmazó gyógyászatikészítmények rősszindűlatú sejtek differenciálódását kiváltóbetegségek kezelésére alkalmasak. ŕ

Description

A találmány tárgya eljárás új, biológiailag hatásos 19nor-D-vitamin-vegyületek és ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására. Közelebbről a találmány Ια-hidroxilezett D-vitamin-vegyületek 19-nor-analógjaira és ezeknek általános előállítási eljárására vonatkozik.

Ismert, hogy a D-vitamin Ια-hidroxilezett metabolitjai - főként az la,25-dihidroxi-D₃-vitamin és az 1 a,25-dihidroxi-D₂-vitamin - igen hatékony szabályzói a kalcium-homeosztázisnak (kalcium-egyensúlynak) mind állatokon, mind embereken; újabban megállapították, hogy a sejtdifferenciálódást is képesek befolyásolni. Ennek következtében e metabolitok számos szerkezeti analógját - különböző oldalláncokat tartalmazó vegyületeket, különböző módon hidroxilezett, valamint különböző sztereokémiái sajátságokkal rendelkező anyagokat - állították elő és vizsgálták. Az ilyen analógok fontos példái: az la-hidroxi-D₃-vitamin, la-hidroxi-D₂-vitamin, az 1 a,25-dihidroxi-D₃-vitamin különböző, oldalláncban fluorozott származékai és homológ oldalláncot tartalmazó származékai. Számos ilyen ismert vegyület mind in vitro, mind in vivő vizsgálatok során igen hatásos, és hatásprofilja előnyös; ezeket már jelenleg is alkamazzák vagy alkalmazásukat javasolták többféle betegség - így a renális oszteodisztrófia (veseeredetű csontképzési zavar), a D-vitaminnal szemben rezisztens angolkór, oszteoporózis (csontritkulás), pszoriázis és egyéb rosszindulatú elváltozások - kezelésére.

Az Ια-hidroxilezett D-vitamin-vegyületek mindeddig ismeretlen csoportját alkotják a 19-nor-analógok, azaz olyan vegyületek, amelyek A gyűrűjén a valamennyi D-vitamin-vegyületre jellemző, 19-es helyzetű szénatomhoz kapcsolódó exociklikus (gyűrűn kívüli) metiléncsoportot két hidrogénatom helyettesíti. Ennek alapján a találmány tárgya I általános képletű, új vegyületek, ahol az I képletben

X¹ és X² jelentése hidrogénatom,

R jelentése A általános képletű csoport, amelyben R¹ hidroxilcsoportot jelent,

R² és R³ jelentése 1 -6 szénatomos alkilcsoport,

R⁴ jelentése hidrogénatom,

R⁵ jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport,

R⁶ és R⁷ jelentése hidrogénatom vagy R⁶ és R⁷ együttesen szén-szén közötti kettős kötést is képezhetnek, n értéke 1, 2, 3 vagy 4.

Konkrétan fontos példái az oldalláncoknak az „a”, „c” és „e” képletű csoportok, tehát a 25-hidroxi-D₃-vitaminban előforduló „a” képletű csoport; a 25-hidroxiD₂-vitaminban található „c” képletű csoport; valamint a 25-hidroxi-D₂-vitamin C-24-epimerjét képviselő „e” képletű csoport.

Az alábbi leírásban és az igénypontokban a megnevezéseket az alábbi meghatározások szerint használjuk.

„Alkilcsoport” 1-6 szénatomos alkilcsoportot és annak valamennyi izomer alakját jelenti; ilyen alkilcsoport például a metil-, etil-, propil-, izopropil-, butil-, izobutil- és pentilcsoport.

Az „acilcsoport” jelentése: 1 —5 szénatomos alifás acilcsoport, például formil-, acetil-, propionilcsoport.

Az I általános képletű la-hidroxi-19-nor-D-vitamin-vegyületeket általánosan alkalmazható eljárással, kiinduló anyagokként ismert D-vitamin-vegyületek alkalmazásával állíthatjuk elő. Célszerűen alkalmazható kiinduló anyagok például a II általános képletű D-vitamin-vegyületek, ahol a II képletben R bármilyen fentiekben definiált oldalláncot jelenthet. Ezek a D-vitaminanalóg kiinduló anyagok ismertek vagy ismert módszerekkel előállítható vegyületek.

A kiinduló anyagot DeLuca és munkatársai eljárásával (lásd a 4195 027 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírást) alakítjuk a megfelelő, III általános képletű la-hidroxi-3,5-ciklo-D-vitamin-származékká, ahol a III képletben X hidrogénatomot és Q 1-6 szénatomos alkilcsoportot, előnyösen metilcsoportot jelent.

Abból a célból, hogy a soron következő lépésekben az la-hidroxil-csoport nem kívánt reakcióját elkerüljük, a hidroxilcsoportot megfelelő acilszármazékká, tehát olyan III általános képletű vegyületté alakítjuk, ahol X jelentése 2-6 szénatomos alkanoilcsoport. E célra a szokásos acilező módszereket alkalmazhatjuk: például alkalmazhatunk valamilyen savanhidridet vagy savhalogenidet piridinben, szobahőmérsékleten vagy kissé magasabb hőmérsékleten (például 30-70 °C-on). Nyilvánvaló, hogy míg e helyen a találmány szerinti eljárást acil-védőcsoport alkalmazásával mutatjuk be, más általánosan ismert védőcsoportok - például alkil-szililvagy alkoxi-alkil-védőcsoport - is használhatók. Az ilyen csoportok - mint a trimetil-szilil-, trietil-szilil-, terc-butil-dimetil-szilil-, tetrahidroíüril- és metoxi-metil-csoport - e szakterületen jól ismertek, és alkalmazásuk a találmány oltalmi körén belül a kísérleti módszerek rutinszerű módosításával megvalósítható.

A fentiek szerint kapott származékot ezután ozmium-tetroxiddal reagáltatjuk, s így egy IV általános képletű - ahol X 2-6 szénatomos alkanoilcsoportot jelent - 10,19-dihidroxi-analóghoz jutunk. Ez utóbbit nátrium-metaperjodáttal vagy ehhez hasonló, a szomszédos helyzetű diolok hasítására alkalmas reagenssel reagáltatva [például ólom(IV)-tetraacetát alkalmazásával] diolhasításnak vetjük alá, s így egy V általános képletű 10-oxo közbenső terméket kapunk, amelyben X 2-6 szénatomos alkanoilcsoportot jelent.

A két utóbbi lépést Paaren és munkatársai eljárásával valósítjuk meg [J. Org. Chem., 48, 3819 (1983)]. Ha az R oldallánc szomszédos diolegységet tartalmaz (például 24,25-dihidroxi vagy 25,26-dihidroxi szerkezeti része van), akkor ez utóbbi hidroxilcsoportokat természetesen a hasítási reakció előtt védenünk kell, például acilezés, szililezés útján vagy izopropilidén-származék készítésével.

Amint fentebb már említettük, az la-hidroxil-csoport acilezése során az oldalláncban jelenlévő hidroxilcsoportok is acileződnek. Az acilezés körülményei természetesen úgy szabályozhatók (például a hőmérséklet emelésével, hosszabb reakcióidő útján), hogy az oldalláncban lévő szomszédos diolcsoportot az acilezés útján teljesen megvédjük.

A találmány szerinti eljárás következő lépésében a 10-oxo-csoportot a megfelelő VI általános képletű

HU 215 604 Β

10-hidroxilvegyületté alakítjuk, ahol a VI általános képletben X 2-6 szénatomos alkanoilcsoportot, Y hidroxilcsoportot jelent. Ha X jelentése alkanoilcsoport, akkor a redukciót célszerűen szerves oldószerben, 0 °C és szobahőmérséklet közötti hőmérséklet-tartományban, nátrium-(tetrahidrido-borát) vagy ezzel egyenértékű más hidrid alkalmazásával játszatjuk le. E redukció során csak a karbonilcsoport redukálódik, az észtercsoport érintetlen marad. Nyilvánvaló, hogy ha az X a redukálószerekkel szemben stabilis hidroxil-védőcsoport, akkor bármely más hidrid típusú redukálószer például lítium-(tetrahidrido-aluminát) vagy ezzel analóg reagens - alkalmazható.

Az így kapott 10-hidroxil-csoportos közbenső terméket alkil- vagy aril-szulfonil-halogeniddel (például metánszulfonil-kloriddal) kezeljük megfelelő oldószerben (például piridinben), s így a megfelelő 10-O-(alkilvagy aril-szulfonil)-származékhoz, tehát olyan VI általános képletű származékhoz jutunk, amelyben Y jelentése alkil-SO₂O- vagy aril-SO₂O-csoport. E közbenső szulfonát-terméket lítium-(tetrahidrido-aluminát)-tal vagy más ismert, analóg lítium-(alkil-hidrido-aluminát)-tal éter típusú oldószerben, 0 °C és az oldószer forráspontja közötti hőmérsékleten közvetlenül redukáljuk, s így a szulfonátcsoport lehasításával 10-dezoxiszármazékot, tehát olyan VI általános képletű vegyületet kapunk, amelyben X és Y egyaránt hidrogénatomot jelent. Látható, hogy az eljárásnak ebben a lépésében az V általános képletű prekurzor vegyület 1-O-acilcsoportja is lehasad, s így szabad la-hidroxil-csoport alakul ki. Ugyanígy bármely más, az oldalláncban lévő O-acil-védőcsoport is a megfelelő szabad hidroxilcsoporttá (alkoholvegyületté) redukálható; ez a területen jártas szakember számára nyilvánvaló. Adott esetben az 1-es szénatomhoz kapcsolódó hidroxilcsoport (vagy az oldalláncban lévő hidroxilcsoportok) acilezéssel, szililezéssel vagy más éter kialakításával a megfelelő acil-, alkil-szilil- vagy alkoxi-alkil-származékká alakítva ismét védhetők, ez a védelem azonban nem szükséges. A fenti redukciós lépés során más hidroxilvédőcsoportok - így az alkil-szilil- vagy alkoxi-alkilvédőcsoportok - érintetlenül maradnak, azonban az eljárásnak ezen a helyén vagy további lépéseiben ismert módszerekkel eltávolíthatók.

Az így kapott la-hidroxi-10-dezoxi-ciklo-D-vitamin közbenső terméket kis molekulatömegű szerves sav jelenlétében DeLuca és munkatársai által leírt körülmények között (lásd a 4195 027 és 4260 549 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásokat) szolvolízisnek vetjük alá. Ha a szolvolízist például ecetsav jelenlétében hajtjuk végre, akkor a VII általános képletű lahidroxi-19-nor-D-vitamin-3-acetát és a Vili általános képletű la-hidroxi-19-nor-D-vitamin-1-acetát keverékét kapjuk; ha a szolvolízishez más savakat használunk, akkor az ezeknek megfelelő, analóg 1- és 3-acilát keverékét nyeljük.

Az így kapott keveréket standard körülmények között közvetlenül, bázisosan hidrolizáljuk, s így a kívánt I általános képletű la-hidroxi-19-nor-D-vegyülethez jutunk, amelyben X¹ és X² jelentése hidrogénatom. Eljárhatunk azonban úgy is, hogy a fenti monoacetát-keveréket - például túlnyomásos folyadékkromatográfíával - elválasztjuk, és az így kapott 1-acetát és 3-acetát izomereket külön-külön hidrolizálva, mindkettőből azonos végtermékhez - azaz a megfelelő I általános képletű la-hidroxi-19-nor-D-vitaminhoz - jutunk.

Az I általános képletű la-hidroxi-19-nor-D-vitamin-vegyületek biológiai hatása

Az I általános képletű új vegyületeknek (a találmány szerinti vegyületeknek) váratlan biológiai hatása van: erélyesen elősegítik rosszindulatú sejtek differenciálódását, viszont alig (vagy egyáltalán nem) hatnak a csontszövetek kalcifikálására. Ezt igazolják az I általános képletű vegyületek szűkebb csoportjához tartozó la képletű la,25-dihidroxi-l 9-nor-D₃-vitamin-vegyülettel végzett vizsgálataink, amelyeket az 1. és 2. táblázatokban összegezünk. Az 1. táblázatban összehasonlítjuk az 1 a,25-dihidroxi-D₃-vitamin, azaz egy ismert, hatásos metabolit és az la jelű 19-nor-analóg hatását emberi leukémiasejtek (HL-60 sejtek) differenciálódásának kiváltásában, sejttenyészetben (a leukémiasejtek normális sejtekké, azaz monocitákká differenciálódnak). A differenciálódás indukciójában mutatott hatékonyságot három standard differenciálódási meghatározással értékeltük ki, ezeket az 1. táblázatban az alábbiak szerint rövidítettük: NBT nitrokék-tetrazólium-redukciót, NSE nem specifikus észteráz-hatékonyságot és PHAGO fagocitáló hatást jelent. E meghatározásokat ismert módon, például DeLuca és munkatársai módszerével (lásd a 4717 721 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírást) vagy Ostrem és munkatársai eljárásával [J. Bioi. Chem., 262, 14164 (1987)] végeztük. Minden egyes meghatározás során a vizsgált vegyületek differenciáló hatását a vizsgált vegyület egy bizonyos adott koncentrációjának hatására normál sejtekké differenciálódott HL-60 sejtek százalékos arányával fejeztük ki.

Az 1. táblázatban összegezett eredmények világosan mutatják, hogy az Iajelű la,25-dihidroxi-19-nor-D₃-vitamin analóg leukémiasejtek differenciálódására gyakorolt hatása ugyanolyan erős, mint az la,25-dihidroxiD₃-vitaminé. Ezt mutatja, hogy mindhárom meghatározás (kiértékelés) során az la,25-dihidroxi-D₃-vitamin 1x10 ⁷ mólos koncentrációban váltja ki a leukémiasejtek közel 90%-ának a differenciálódását; ugyanilyen mértékű differenciálódás (azaz 90, 84, illetve 90%) érhető el az Iajelű 19-nor-analóggal.

1. táblázat

HL-60 sejtek differenciálódása

1 a,25-dihidroxi-Dj-vitamin (mól/liter)	Differenciálódott sejtek % (átlag±S.E.M.)
	NBT	NSE	PHAGO
1 x KE⁷	86±2	89±1	87±3
lxlO-⁸	60±2	60±3	64±2
1 x 10 ⁹	33±2	31±2	34±1

HU 215 604 Β

1. táblázat (folytatás)

1 a,25-dihidroxi-D₃-vitamin (mól'litcr)	Differenciálódott sejtek % (átlag±S.E.M.)
	NBT	NSE	PHAGO
1 a,25 -dihidroxi-19-nor-D₃vitamin (la) (mól/liter)
2xl0-⁷	94±2	95 ±3	94±2
1x10-7	90 ±4	84±4	90±4
5xl0-⁸	72±3	73±3	74±3
lxlO-⁸	61±3	60±3	56±1
1x10’	32±1	31±1	33±1

Az előző eredményekkel ellentétben az új, la jelű 19-nor-analóg a csontkalcifikálási vizsgálat során nem mutat hatást, jóllehet ez az ismert D-vitamin-vegyületek által kiváltott tipikus válasz. A 2. táblázatban tüntettük fel azokat a mérési eredményeinket, amelyeket az la,25-dihidroxi-D₃-vitamin és az la jelű la,25dihidroxi-19-nor-D₃-vitamin csontkalcifíkáló hatásának vizsgálata során kaptunk. E vizsgálatunkat Tanaka és munkatársai módszerével végeztük [Endocrinology, 92,417 (1973)].

A 2. táblázatban összefoglalt eredmények igazolják az la,25-dihidroxi-D₃-vitamin várt csontkalcifikáló hatását : ez a csont hamutartalmának százalékos növekvésében, valamint a teljes hamutartalom százalékos növekvésében minden adagolási szint mellett észlelhető. Ezzel ellentétben az la képletű 19-nor-analóg az alkalmazott három dózisszint egyikén sem mutat hatást a Dvitamin-hiányos (-D) kontrollcsoporttal végzett összehasonlítás alapján.

2. táblázat Kalcifikáló hatás

Vegyület	Adagolt mennyiség* (pikomól/nap /7 napon át)	Hamu % (átlag ± S.E.M.)	Összes hamu (mg) (átlag ± S.E.M.)
-D (kontrollcsoport)	0	19±0,8	23±1,2
la,25-dihidroxi- D₃-vitamin	32,5	23±0,5	34±1,6
65,0	26±0,7	36±1,1
325,0	28±0,9	40±l,9
lcc,25-dihidroxi19-nor-D₃-vitamin (la)	32,5	22 ±0,9	28±1,6
65,0	19±1,5	28±3,4
325,0	19±1,2	30±2,4

* Minden egyes vizsgálati csoport 6 patkányból állt; az állatoknak a vizsgálati vegyület fentebb megadott mennyiségét intraperitoneális befecskendezéssel naponta adagoltuk, 7 napon át.

Az új 19-nor-analóg vegyület tehát szelektív hatással rendelkezik, amennyiben igen hatásosan kiváltja rosszindulatú sejtek differenciálódását, csontkalcifikáló hatása viszont igen csekély. Az új szerkezeti típusú vegyületek tehát hasznos terápiás hatóanyagok lehetnek rosszindulatú betegségek kezelésében. Mivel a D-vitamin-vegyületeknek a bőr keratinocita-sejtjeire gyakorolt differenciáló hatását a pszoriázis sikeres kezelése jelének tartják [Smith és munkatársai: J. Invest. Dermatol, 86, 709 (1986); J. Am. Acad. Dermatol, 19, 516 (1988); valamint Takamoto és munkatársai: Calc. Tissue Int., 39, 360 (1986)], ezek a találmány szerinti új vegyületek használhatóknak bizonyulhatnak a pszoriázis és más olyan bőrbetegségek kezelésében, amelyeket differenciálatlan bőrsejtek burjánzása jellemez. E vegyületek továbbá alkalmazást nyerhetnek a mellékpajzsmirigy szöveteinek fékezésében, például vesebetegségekben megfigyelt másodlagos mellékpajzsmirigy-túltengés kezelésében [Slatopolsky és munkatársai: J. Clin. Invest., 74, 2136 (1984)].

Kezelés céljára a találmány szerinti új vegyületek ártalmatlan oldószerekkel vagy vivőanyagokkal oldatokká, emulziókká, szuszpenziókká vagy diszperziókká, például pilulákká, tablettákká vagy kapszulákká alakíthatók, amelyek ismert módon szilárd vivőanyagokat tartalmazhatnak. Helyi alkalmazás céljára a találmány szerinti vegyületeket előnyösen krémekké vagy kenőcsökké alakítjuk vagy más, helyi alkalmazás céljára alkalmas vivőanyaggal alakítjuk készítményekké. Az így kialakított gyógyszerformák más, gyógyászati szempontból elfogadható, nemtoxikus segédanyagokat, például stabilizálószereket, antioxidánsokat, kötőanyagokat, színezőszereket, valamint emulgeálószereket és ízjavító anyagokat is tartalmazhatnak.

A találmány szerinti vegyületeket előnyösen steril oldatok alakjában, befecskendezéssel vagy intravénás infúzióval vagy orálisan, az emésztőcsatorna útján, vagy helyileg (topikusan) kenőcsök, lemosóoldatok (öblítőoldatok) alakjában, vagy bőrön keresztül (transzdermálisan) tapaszok segítségével adagolhatjuk. Rosszindulatú betegségek kezelése esetén a találmány szerinti 19-nor-D-vitamin-vegyületeket a betegek számára olyan adagokban alkalmazzuk, amelyek a rosszindulatú sejtek burjánzásának gátlására, valamint normál monocitamakrofágokká végbemenő differenciálódásukhoz elegendők. Ugyanígy a pszoriázis kezelése során a találmány szerinti vegyületeket orálisan vagy topikusan adagolhatjuk olyan mennyiségben, amely elegendő a nem differenciálódott keratinociták buijánzásának megszüntetésére; továbbá mellékpajzsmirigy-túltengés kezelése során a találmány szerinti vegyületeket olyan adagokban alkalmazzuk, amelyek elégségesek a mellékpajzsmirigy aktivitásának csökkentésére, és normális mellékpajzsmirigy-hormonkoncentráció (hormonszint) beállítására. E célokra a megfelelő adag naponta 1-500 pg találmány szerinti hatóanyag: ez a kezelendő betegségtől, annak súlyosságától, valamint a kezelésre szoruló egyén válaszától és állapotától függ.

A találmány szerinti eljárást az alábbi, nem korlátozó jellegű kiviteli példákban részletesen ismertetjük. E példákban a konkrétan előállított termékeket római számokkal és betűkkel jelöljük, például: la, Ib és így tovább; valamint Ha, Ilb és így tovább; a római számok a

HU 215 604 Β fenti leírásban meghatározott alapszerkezetre, a betűk a megfelelő oldalláncra vonatkoznak.

1. példa ltt,25-Dihidroxi-19-nor-DT,-vitamin (la jelű vegyület — olyan I általános képletü vegyület, ahol R = ,,a” képletü csoport) előállítása (a) lct,,25-Dihidroxi-3,5-ciklo-D_rvitamin-l-acetát6-metil-éter előállítása = Illa jelű vegyület

Kiinduló anyagként olyan Ha jelű 25-hidroxi-D₃vitamint alkalmazunk, ahol R jelentése „a” képletü csoport a II általános képletben. Ebből a Illa jelű vegyületet (ahol R=„a” képletü csoport, X hidrogénatom és Q=CH₃-) ismert módon állítjuk elő [DeLuca és munkatársai: 4195 027 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírás; J. Org. Chem., 45, 3252 (1980)]. Az így kapott terméket standard körülmények között acetilezve jutunk a Illa jelű 1-acetát termékhez, amelyben X acetilcsoportot jelent és R=„a” képletü csoport, Q=CH₃-.

(b) 10,19-Dihidro-la,10,19-25-tetrahidroxi-3,5ciklo-D_vvitamin-l-acetát-6-metil-éter (IVa jelű vegyület) előállítása (R jelentése „a képletü csoport)

A Illa jelű közbenső terméket (amelyben R=„a” képletü csoportot és X acetilcsoportot jelent) kis mólfeleslegben vett ozmium-tetroxiddal kezeljük piridinben Paaren és munkatársai általános eljárása szerint [J. Org. Chem., 48, 3819 (1983)], s így a fenti IVa jelű 10,19dihidroxilezett származékhoz jutunk.

Tömegspektrum (m/z viszonylagos intenzitás): 506 (M+, 1), 488 (2), 474 (40), 425 (45), 396 (15), 285 (5), 229 (30), 133 (45), 59 (80), 43 (100).

Ή-NMR (CDClj, δ ppm): 0,52 (3H, s, 18-CH₃),

0,58 (1H, m, 3-H), 0,93 (3H, d, J=6,l Hz,

21-CH₃), 1,22 (6H, s, 26-CH₃ és 27-CH₃),

2,10 (3H, s, COCH₃), 3,25 (3H, s, 6-OCH₃),

3,63 (2H, m, 19-CH₂), 4,60 (1H, d, J=9,2 Hz,

6- H), 4,63 (1H, dd, 1β-Η), 4,78 (1H, d, J=9,2 Hz,

7- H).

(c) Icí,25-Dihidroxi-10-oxo-3,5-ciklo-19-nor-D₃vitamin-l-acetát-6-metil-éter (Va jelű vegyület) előállítása (aholR jelentése „a”képletü csoport az Váltalános képletben, Q=CH-_i—, X=CH₃C0-)

A IVa jelű 10,19-dihidroxilezett közbenső terméket Paaren és munkatársai módszere szerint [J. Org. Chem., 48, 3819 (1983)] nátrium-metapeijodát oldatával kezelve 10-oxo-ciklo-D-vitamin-származékhoz jutunk (Va jelű vegyület, ahol Q=CH₃-, R=„a” képletü csoport, X jelentése acetilcsoport).

Tömegspektrum (m/z viszonylagos intenzitás): 442 (M+ -MeOH) (18), 424 (8), 382 (15), 364 (35), 253 (55), 225 (25), 197 (53), 155 (85), 137 (100). Ή-NMR (CDC1₃, δ ppm): 0,58 (3H, s, 18-CH₃),

0,93 (3H, d, J=6,6 Hz, 21-CH₃), 1,22 (6H, s,

26-CH₃ és 27-CH₃), 2,15 (s, 3-OCOCH₃),

3,30 (3H, s, 6-OCH₃), 4,61 (1H, d, J=9,l Hz,

6-H), 4,71 (1H, d, J=9,6 Hz, 7-H), 5,18 (1H, m,

1β-Η).

Úgy találtuk, hogy ez a diolhasító reakció nem igényel magasabb hőmérsékletet, és valóban általánosan előnyös a reakció végrehajtása megközelítőleg szobahőmérsékleten.

(d) lo-Acetoxi-10,25-dihidroxi-3,5-ciklo-I9-norDyVÍtamin-6-metil-éter (Via jelű vegyület, ahol R = „a” képletü csoportot, X acetilcsoportot,

Y hidroxilcsoportot és Q Clf-csoportot jelent) előállítása

Az Va jelű 10-oxoszármazékot (ahol X jelentése acetilcsoport) 2,2 mg (4,6 μπιοί) mennyiségben 0,5 ml etanolban oldjuk, és 50 μΐ (5,3 μπιοί) nátrium(tetrahidrido-borát)-oldatot adunk hozzá. Ezt az oldatot úgy készítjük, hogy nátrium-(tetrahidrido-borát)-ot 4,5 ml víz és 0,5 ml 0,01 n nátronlúgoldat elegyében oldunk. Az így kapott elegyet mintegy 90 percig 0 °Con keverjük, majd további 16 órán át 0 °C-on tartjuk. Ez után az elegyhez étert adunk, a szerves fázist konyhasóoldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, szüljük, és bepároljuk. Az így kapott nyers terméket 15x1 cm méretű szilikagéloszlopon kromatografáljuk, és a Via jelű alkoholt (amelyben X acetilcsoportot és Y hidroxilcsoportot jelent) etil-acetát és hexán elegyei vei eluáljuk. így 1,4 mg (3 μπιοί) hozammal kapjuk a (d) lépés cím szerinti termékét. Tömegspektrum (m/z viszonylagos intenzitás): 476 (M+) (1), 444 (85), 426 (18), 384 (30), 366 (48),

351 (21), 255 (35), 237 (48), 199 (100), 139 (51), (58).

(e) lü.,25-Dihidroxi-19-nor-DyVÍtamin (la jelű vegyület, aholX és X² hidrogénatomot és R „a ” képletü csoportot jelent) előállítása

1,4 mg Via jelű 10-alkohol-származékot (ahol X acetilcsoportot és Y hidroxilcsoportot jelent) 100 μΐ vízmentes diklór-metánban oldunk, és 10 μΐ (14 μπιοί) trietil-amin oldatát adjuk hozzá [amelyet 12 μg (16 μΐ) trietil-aminból és 100 μΐ vízmentes diklór-metánból állítunk elő], majd 7 μΐ (5,6 μπιοί) mezil-klorid-oldatot teszünk hozzá (amelyet 9 μg mezil-kloridból és 100 μΐ vízmentes diklór-metánból készítünk), 0 °C hőmérsékleten. A reakcióelegyet 0 °C-on 2 órán át keveijük, utána az oldószereket argongáz átáramoltatásával eltávolítjuk, és a maradékot (amely olyan Via jelű vegyületet tartalmaz, amelyben X acetilcsoportot és Y metánszulfonil-oxi-csoportot jelent és Q=CH₃-) 0,5 ml vízmentes tetrahidrofuránban oldjuk. Ez utóbbi oldathoz 0 °Con 5 mg lítium-(tetrahidro-aluminát)-ot adunk, és a reakcióelegyet 16 órán át 0 °C-on tartjuk. Ezután a hidrid feleslegét nedves éterrel elbontjuk, az éteres fázist vízzel mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, szüljük, bepároljuk. így a Via jelű 19-nor-származékhoz jutunk (amelyben X és Y hidrogénatomot jelent).

E terméket 0,5 ml ecetsavban oldjuk, 20 percig 55 °C hőmérsékleten keverjük, utána lehűtjük, jeges vizet adunk hozzá, és éterrel extraháljuk. Az éteres fázist előbb hideg 10%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd konyhasóoldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, bepároljuk. így a 3-acetoxi-la-hidroxi és la-acetoxi-3-hidroxi-izomerekhez jutunk, amelyeket HPLC-eljárással különítünk

HU 215 604 Β el, és tisztítunk. (Ehhez 6,4 χ 25 cm méretű Zorbax Sil oszlopot és eluálószerként hexános 2-propanolt alkalmazunk.) így körülbelül 70 μg Vlla jelű és körülbelül ugyanannyi Villa jelű vegyületet kapunk.

UV (etanolban, Á_max cm·): 242,5 (OD 0,72),

251,5 (OD 0,86), 260 (OD 0,57). (OD az optikai sűrűséget rövidíti)

Mind a Vlla jelű l,25-dihidroxi-19-nor-D₃-acetátot, mind a Villa jelű izomer acetátot azonos módon hidrolizáljuk. A monoacetátot 0,5 ml éterben oldjuk, 0,5 ml 0,1 n metanolos kálilúgoldatot adunk hozzá, és a reakcióelegyet argonatmoszférában 2 órán át keveijük, majd további mennyiségű étert adunk hozzá, a szerves fázist konyhasóoldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, szüljük és bepároljuk. A maradékot hexán és 2-propanol 1:1 arányú elegyében oldjuk, Sep Pák oszlopon vezetjük át, és ugyanazzal az oldószerkeverékkel eluáljuk. Az oldószerek lepárlása után kapott maradékot HPLC-elj árással tisztítjuk (ehhez 6,4x25 cm méretű Zorbax Sil oszlopot használunk, és 10% 2-propanolt tartalmazó hexánnal eluáljuk). A Vlla és Villa jelű vegyületek hidrolízisterméke azonos, és a fenti eljárással 65 μg hozammal kapjuk az la jelű kívánt terméket (amelyben X¹ és X² jelentése hidrogénatom). Tömegspektrum (m/z viszonylagos intenzitás): 404 (M+) (100), 386 (42), 371 (20), 275 (53), 245 (51),

180 (43), 135 (72), 133 (72), 95 (82), 59 (18); a

C₂₆H₄₄O₃ összegképletre számított relatív molekulatömeg 404,3290, talált értéke 404,3272.

H-NMR (CDClj, δ ppm): 0,52 (3H, s, 18-CH₃),

0,92 (3H, d, J=6,9 Hz, 21-CH₃), 1,21 (6H, s,

26-CH₃ és 27-CH₃), 4,02 (1H, m, 3a-H),

4,06 (1H, m, 1 β-Η), 5,83 (1H, d, J= 11,6 Hz, 7-H),

6,29 (1H, d, J= 10,7 Hz, 6-H).

UV (etanol, X_max cm-·): 243 (OD 0,725), 251,5 (OD

0,823), 261 (OD 0,598).

2. példa lü.,25-Dihidroxi-19-nor-D₂-vitamin előállítása (a)

Kiinduló anyagként a IIc jelű 25-hidroxi-D₂-vitamint alkalmazva és az 1. példa (a) lépésében megadottak szerint eljárva a lile jelű (ahol a III általános képletben X jelentése acetilcsoport és R „c” képletű csoport és Q=CH₃-) la,25-dihidroxi-3,5-diciklo-D₂-vitaminl-acetát-6-metil-éterhez jutunk.

(b)

Az előbbi (a) lépésben kapott lile jelű közbenső terméket (amelyben X jelentése acetilcsoport) az 1. példa (b) lépésében megadott módon reagáltatva, a IVc jelű (ahol a IV általános képletben R=„c” képletű csoportot és X acetilcsoportot jelent) 10,19-dihidro-la,10,19,25-tetrahidroxi-3,5-ciklo-E>j-vitamin-l-acetát-6-metil-étert kapjuk.

(c)

A IVc jelű közbenső terméket (amelyben X jelentése acetilcsoport) az 1. példa (c) lépésében megadott eljárás útján nátrium-metapeijodáttal kezelve kapjuk az Ve jelű (ahol az V általános képletben X acetilcsoportot és R „c” képletű csoportot jelent) la,25-dihidroxi-10-oxo-3,5ciklo-19-nor-D₂-vitamin-1 -acetát-6-metil-étert.

Az Ve jelű 10-oxo közbenső terméket (amelyben X jelentése acetilcsoport) az 1. példa (d) lépésében leírt körülmények között redukálval, a VIc jelű (a VI általános képletben X acetilcsoportot, R „c” képletű csoportot és Y hidroxilcsoportot jelent, Q=CH₃-) la-acetoxi10,25-dihidroxi-3,5-ciklo-l 9-nor-D₂-vitamin-6-metiléterhez jutunk.

(e)

A VIc jelű közbenső terméket (amelyben X acetilcsoportot és Y hidroxilcsoportot jelent) az 1. példa (e) lépése szerint feldolgozva állítjuk elő az Ic jelű vegyületet (ahol X¹ és X² hidrogénatomot és R „c” képletű csoportot jelent az I általános képletben), az la,25-dihidroxi-19nor-D₂-vitamint. Olvadáspont: 165-166 °C, tisztaság: 99%.

3. példa

A A²²-24-dihomo-26,27-dihomo-19-nor-1 a,25-dihidroxi-D₃-vitamin vegyületet hasonlóan kapjuk (15 képletű vegyület).

Analitikai adatok:

Ή-NMR δ: 0,56 (3H, s, 18-CH₃), 0,98 (3H, d,

J=6,6 Hz, 21-CH₃), 4,03 (1H, m, 3-H), 4,09 (1H, m, 1β—H), 5,29 (2H, m, 22 & 23-H-s), 5,83 (1H, d, J=11,2 Hz, 7-H), 6,29 (1H, d, J= 11,5 Hz, 6-H).

MS m/z (rel. int.) 458 (M+, 25), 440 (16), 422 (3),

275 (44), 257 (23), 239 (33), 211 (20), 147 (35),

135 (65), 133 (78), 95 (70), 81 (100).

C₃₀H₄₀O₃ képlet alapján számított relatív molekulatömeg: 458,375 talált: 458,3755 UV (EtOH).

a_max: 243,251,5,261 nm.

4. példa

További vegyületként előállítottuk még a 19-norla,25-dihidroxi-24-homokolekalciferolt (16 képlet),

Olvadáspont: 71-73 °C és a

5. példa

19-nor-1 a,25-dihidroxi-24-bisz-homo-kolekalciferolt,

Olvadáspont: 96-97 °C (17 képlet) és a

6. példa

19-nor-1 a,25-dihidroxi-24-trihomo-D₂-vitamint

Olvadáspont: 98-100 °C (18 képlet) és a

7. példa

19-nor-1 a,25-dihidroxi-22(E)-dehidro-26,27dihomo-kalciferolt

Olvadáspont: 105-107 °C (19 képlet).

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás az (I) általános képletű Ια-hidroxi-19nor-D-vitamin-vegyületek előállítására, ahol az (I) képletben

X¹ és X² jelentése hidrogénatom,

HU 215 604 Β

R jelentése (A) általános képletű csoport, amelyben R¹ hidroxilcsoportot jelent,

R² és R³ jelentése 1 -6 szénatomos alkilcsoport,

R⁴ jelentése hidrogénatom,

R⁵ jelentése hidrogénatom vagy 1-6 szénatomos alkilcsoport,

R⁶ és R⁷ jelentése hidrogénatom vagy

R⁶és R⁷ együttesen szén-szén közötti kettős kötést is képezhetnek, n értéke 1, 2, 3 vagy 4, azzal jellemezve, hogy egy (II) általános képletű D-vitamin-származékot - ahol R jelentése a fenti - savkatalizált szolvolízissel, rövid szénláncú szerves sav jelenlétében egy (III) általános képletű l-hidroxi-védett-3,5ciklovitamin-D-származékká alakítunk - ahol R jelentése a fenti és Q jelentése 1 -6 szénatomos alkil-, előnyösen metilcsoport, X jelentése hidrogénatom vagy 2-6 szénatomos alkanoilcsoport - ez utóbbit ozmiumtetroxiddal reagáltatva (IV) általános képletű 10,19dihidroxi-analóggá alakítjuk - ahol R, X és Q jelentése a fenti -, melyet ismert módon diolhasítási reakciónak vetünk alá, és a kapott (V) általános képletű 10-oxo-intermediert redukáljuk - ahol R, X és Q jelentése a fenti

- és a kapott (VI) általános képletű 10-alkoholt - ahol R, X, és Q jelentése a fenti és Y jelentése hidroxilcsoport

- a megfelelő 10-szulfonil-származékká alakítjuk, melyet redukálunk, és a kapott la-hidroxi-10-dezoxi-ciklovitamin-D-intermediert szolvolízisnek vetjük alá, és a kapott (VII) és (VIII) általános képletű 19-nor-vegyületek elegyét hidrolizáljuk, ahol Ac jelentése 2-6 szénatomos alkanoilcsoport és R jelentése a fenti.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás olyan (I) általános képletű vegyületek előállítására, ahol

X¹ és X² jelentése hidrogénatom,

R jelentése (A) általános képletű csoport, amelyben R¹ jelentése hidroxilcsoport,

R² és R³ jelentése metil-, etil- vagy propilcsoport,

R⁶ és R⁷ hidrogénatomot jelent vagy R⁶ és R⁷ együttesen szén-szén kettős kötést jelent,

R⁴ és R⁵ jelentése hidrogénatom, és n értéke 1,2 vagy 3, azzaljellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás la,25-dihidroxi19-nor-Dj-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás la,25-dihidroxi19-nor-D₂-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás la,25-dihidroxi19-nor-24-epi-D₂-vitamin előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő kiindulási anyagokat alkalmazzuk.
6. Eljárás rosszindulatú sejtek differenciálódását kiváltó pszoriázis, burjánzással járó bőrbetegségek, daganatbuijánzás és mellékpajzsmirigy-túltengés kezelésére alkalmazható gyógyászati készítmények előállítására, azzal jellemezve, hogy valamilyen, az 1. igénypont szerint előállított (I) általános képletű vegyületet - ahol az (I) általános képletben R, X¹ és X² jelentése ugyanaz, mint az 1. igénypontban - a gyógyszergyártásban szokásos hordozó-, vivő- és segédanyagokkal összekeverve gyógyászati készítménnyé alakítunk.