FR3151200A1 - METHOD OF APPLYING A NATURAL EXTRACT TO THE SKIN TO CARRY OUT BIOSYNTHESIS OF METABOLITES OF INTEREST AT THE LEVEL OF THE SKIN MICROBIOTA - Google Patents
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Abstract
L’invention concerne un procédé d’application cosmétique et/ou dermo-cosmétique sur la peau comprenant l’application d’un extrait naturel à la surface de la peau pour induire une biosynthèse au niveau du microbiote cutané, cette biosynthèse induisant la production d’un ou plusieurs métabolites d’intérêt par le microbiote cutané, le ou les métabolites d’intérêts associés à l’extrait naturel appliqué, induisant un effet bénéfique pour la peau. FIGURE : 3 The invention relates to a method of cosmetic and/or dermo-cosmetic application to the skin comprising the application of a natural extract to the surface of the skin to induce biosynthesis at the level of the skin microbiota, this biosynthesis inducing the production of one or more metabolites of interest by the skin microbiota, the metabolite(s) of interest associated with the applied natural extract, inducing a beneficial effect for the skin. FIGURE: 3
Description
Le domaine de l’invention est celui de la cosmétologie et de la dermo-cosmétologie. Plus précisément, l’invention concerne un procédé d’application d’un extrait naturel à la surface de la peau pour réaliser une biosynthèse de métabolites d’intérêt au niveau du microbiote cutané, seul ou en association avec les cellules de la peau, l’association de l’extrait actif et des métabolites produitsin situinduisant un effet bénéfique pour la peau.The field of the invention is that of cosmetology and dermo-cosmetology. More specifically, the invention relates to a method for applying a natural extract to the surface of the skin to achieve a biosynthesis of metabolites of interest at the level of the skin microbiota, alone or in association with skin cells, the association of the active extract and the metabolites produced in situ inducing a beneficial effect for the skin.
La peau humaine est un organe qui constitue une interface avec notre environnement extérieur. Elle est composée de nombreuses molécules provenant des cellules hôtes, du microbiote et de molécules externes, appliquées délibérément ou non sur la peau. L'ensemble des métabolites, qui sont les produits finaux des processus cellulaires, constituent le métabolome. Le métabolome est ainsi composé d'un grand nombre de petits métabolites, depuis les métabolites primaires, tels que les sucres, les acides aminés, les acides gras, ou encore les lipides, jusqu'aux métabolites secondaires, tels que les polyphénols, les alcaloïdes, les médicaments, ou encore les toxines.Human skin is an organ that constitutes an interface with our external environment. It is composed of many molecules originating from host cells, microbiota and external molecules, deliberately or not applied to the skin. All the metabolites, which are the end products of cellular processes, constitute the metabolome. The metabolome is thus composed of a large number of small metabolites, from primary metabolites, such as sugars, amino acids, fatty acids, or lipids, to secondary metabolites, such as polyphenols, alkaloids, drugs, or toxins.
En particulier, la quantité et l'hétérogénéité des métabolites cutanés sont influencées par le fonctionnement du microbiote cutané, ainsi que par le mode de vie et l'environnement entourant et touchant ce microbiote cutané : l’alimentation, la consommation de médicaments et/ou de tabac, la composition de l'air extérieur, ou encore la composition des vêtements sont autant de facteurs qui peuvent interférer avec la composition de ces métabolites produits par le microbiote cutané. Les ingrédients cosmétiques appliqués sur la peau, et donc sur le microbiote cutané, font également parties de ces facteurs.In particular, the quantity and heterogeneity of skin metabolites are influenced by the functioning of the skin microbiota, as well as by the lifestyle and environment surrounding and affecting this skin microbiota: diet, consumption of medication and/or tobacco, the composition of the outside air, or the composition of clothing are all factors that can interfere with the composition of these metabolites produced by the skin microbiota. Cosmetic ingredients applied to the skin, and therefore to the skin microbiota, are also part of these factors.
L’Homme du Métier sait détecter et quantifier des métabolites cutanés produits par la peau en réponse à une agression extérieure, tel qu’une mise en contact avec des ingrédients pesticides. Ainsi, par exemple, dans le domaine médical, on est capable d’identifier des biomarqueurs signant des maladies, tel que la fibrose, le psoriasis, la maladie de Parkinson, ou encore certains cancers, et notamment en utilisant une approche métabolomique.The skilled person knows how to detect and quantify skin metabolites produced by the skin in response to an external aggression, such as contact with pesticide ingredients. Thus, for example, in the medical field, we are able to identify biomarkers indicating diseases, such as fibrosis, psoriasis, Parkinson's disease, or even certain cancers, and in particular by using a metabolomic approach.
Cependant, jusqu'à présent, l'impact des ingrédients actifs naturels appliqués sur la peau n’a jamais été exploité, ni évalué, en particulier au niveau du microbiote cutané, eta fortioripour une application cosmétique ou dermo-cosmétique.However, until now, the impact of natural active ingredients applied to the skin has never been exploited or evaluated, particularly at the level of the skin microbiota, and a fortiori for a cosmetic or dermo-cosmetic application.
La présente invention a donc pour objet un procédé d’application cosmétique et/ou dermo-cosmétique sur la peau comprenant l’application d’un extrait naturel à la surface de la peau pour réaliser une biosynthèse au niveau du microbiote cutané, cette biosynthèse induisant la production d’un ou plusieurs métabolites d’intérêt par le microbiote cutané, ce ou ces métabolites d’intérêts associés à l’extrait naturel appliqué, induisant un effet bénéfique pour la peau.The present invention therefore relates to a method of cosmetic and/or dermo-cosmetic application to the skin comprising the application of a natural extract to the surface of the skin to carry out biosynthesis at the level of the skin microbiota, this biosynthesis inducing the production of one or more metabolites of interest by the skin microbiota, this or these metabolites of interest associated with the natural extract applied, inducing a beneficial effect for the skin.
Un tel procédé permet ainsi avantageusement d’analyser le fonctionnement du microbiote cutané, et a permis de déterminer que l’application d’un ingrédient cosmétique ou dermo-cosmétique actif naturel sur la peau permet aux bactéries du microbiote de produire un autre ingrédient naturel actif, distinct de l’ingrédient appliqué, afin de combler de façon optimale un besoin cosmétique au niveau de la peau. Les bactéries du microbiote cutané reconnaissent l’ingrédient actif appliqué, elles sont en quelque sorte « activées » par cet ingrédient, qui a pour fonction d’envoyer un signal aux bactéries. En réponse à ce signal, les bactéries du microbiote cutané reconnaissent les besoins de la peau et produisent en conséquence,in situ, au moins un métabolite actif naturel, ce métabolite étant bénéfique pour la peau. Le microbiote cutané est donc une cible pour les ingrédients cosmétiques et dermo-cosmétiques : il permet la mise en œuvre d’une biosynthèse, qui correspond à la production au niveau du microbiote cutané d’un ingrédient naturel actif en réponse à l’application topique d’un ingrédient naturel actif distinct. La présence au niveau de la peau de ces deux ingrédients naturels actifs, l’un appliqué et l’autre produit, permet de produire un effet cosmétique de meilleure qualité/plus efficace qu’en présence de l’un ou l’autre seulement de ces ingrédients. L’ingrédient naturel actif agit directement sur le microbiote cutané mais également sur la peau, car il permet au microbiote de produire un métabolite d’intérêt pour engendrer un effet cosmétique directement mesurable sur la peau.Such a method thus advantageously makes it possible to analyze the functioning of the skin microbiota, and has made it possible to determine that the application of a natural active cosmetic or dermo-cosmetic ingredient to the skin allows the bacteria of the microbiota to produce another active natural ingredient, distinct from the applied ingredient, in order to optimally meet a cosmetic need at the skin level. The bacteria of the skin microbiota recognize the applied active ingredient, they are in a way "activated" by this ingredient, which has the function of sending a signal to the bacteria. In response to this signal, the bacteria of the skin microbiota recognize the needs of the skin and consequently produce, in situ , at least one natural active metabolite, this metabolite being beneficial for the skin. The skin microbiota is therefore a target for cosmetic and dermo-cosmetic ingredients: it allows the implementation of a biosynthesis, which corresponds to the production at the level of the skin microbiota of an active natural ingredient in response to the topical application of a distinct active natural ingredient. The presence at the level of the skin of these two active natural ingredients, one applied and the other produced, makes it possible to produce a cosmetic effect of better quality/more effective than in the presence of only one or the other of these ingredients. The active natural ingredient acts directly on the skin microbiota but also on the skin, because it allows the microbiota to produce a metabolite of interest to generate a directly measurable cosmetic effect on the skin.
Par peau, on entend, au sens de la présente invention, non seulement la peau humaine, mais aussi le cuir chevelu et les lèvres. Le procédé selon l’invention peut également produire des effets cosmétiques et dermo-cosmétiques au niveau des phanères, et par exemple au niveau des ongles et des cheveux.For the purposes of the present invention, skin means not only human skin, but also the scalp and lips. The method according to the invention can also produce cosmetic and dermo-cosmetic effects on the appendages, for example on the nails and hair.
Par métabolite, on entend, au sens de la présente invention, tout composé qui peut être produit par un microbiote cutané et qui peut avoir un effet bénéfique sur la peau (tant qualitatif, qu’au niveau de l’aspect), par exemple un peptide ou une vitamine.For the purposes of the present invention, metabolite means any compound which can be produced by a skin microbiota and which can have a beneficial effect on the skin (both qualitatively and in terms of appearance), for example a peptide or a vitamin.
Un tel procédé permet également d’obtenir un effet cosmétique ou dermo-cosmétique bénéfique pour la peau de façon naturelle, économique et positive pour l’environnement : le ou les métabolites actifs sont produitsin situpar le microbiote cutané, il n’est donc pas nécessaire d’appliquer sur la peau des ingrédients de synthèse, qui sont coûteux, potentiellement irritants pour la peau et nocifs pour l’environnement. De plus, c’est la combinaison de l’ingrédient naturel appliqué initialement et du métabolite produit naturellement par le microbiote cutané qui va produire l’effet bénéfique pour la peau : il n’est donc pas nécessaire d’appliquer sur la peau l’ingrédient initial dans des proportions élevées, qui dépasseraient les doses cosmétiquement acceptables.Such a process also makes it possible to obtain a cosmetic or dermo-cosmetic effect that is beneficial for the skin in a natural, economical and environmentally friendly way: the active metabolite(s) are produced in situ by the skin microbiota, so there is no need to apply synthetic ingredients to the skin, which are expensive, potentially irritating to the skin and harmful to the environment. In addition, it is the combination of the natural ingredient applied initially and the metabolite produced naturally by the skin microbiota that will produce the beneficial effect for the skin: there is therefore no need to apply the initial ingredient to the skin in high proportions, which would exceed the cosmetically acceptable doses.
Un tel procédé est en outre avantageusement non-invasif et facile à mettre en œuvre.Such a method is also advantageously non-invasive and easy to implement.
De manière avantageuse, la biosynthèse mise en œuvre dans ce procédé selon l’invention est analysée et quantifiée selon les étapes suivantes :Advantageously, the biosynthesis implemented in this method according to the invention is analyzed and quantified according to the following steps:
- A) une analyse qualitative pour identifier le métabolite d’intérêt produit par le microbiote cutané en réponse à l’application topique de l’extrait naturel ;- A) a qualitative analysis to identify the metabolite of interest produced by the skin microbiota in response to the topical application of the natural extract;
- B) un dosage de la production du métabolite d’intérêt identifié à l’étape A par le microbiote cutané, comprenant le prélèvement d’au moins un échantillon de microbiote cutané ; puis sa mise en contact avec l’extrait naturel et la quantification du métabolite d’intérêt dans l’échantillon de microbiote cutané.- B) an assay of the production of the metabolite of interest identified in step A by the skin microbiota, comprising the collection of at least one sample of skin microbiota; then its contact with the natural extract and the quantification of the metabolite of interest in the sample of skin microbiota.
Un tel procédé selon l’invention permet donc de caractériser de façon fiable les métabolites d’intérêt qui sont biosynthétisés par le microbiote cutané en réponse à l’application topique d’un extrait naturel actif, car dans un premier temps, ce procédé se base sur l’identification du ou des métabolites, et dans un second temps, il vient confirmer cette identification en étant capable de doser quantitativement ce ou ces métabolites identifiés.Such a method according to the invention therefore makes it possible to reliably characterize the metabolites of interest which are biosynthesized by the skin microbiota in response to the topical application of an active natural extract, because firstly, this method is based on the identification of the metabolite(s), and secondly, it confirms this identification by being able to quantitatively measure this or these identified metabolites.
Selon un mode de réalisation, l’analyse qualitative A) d’identification du métabolite d’intérêt est une analyse métabolomique.According to one embodiment, the qualitative analysis A) for identifying the metabolite of interest is a metabolomic analysis.
La métabolomique permet d’évaluer efficacement l'efficacité des ingrédients cosmétiques actifs sur la peau. Elle permet de caractériser de la façon la plus large possible le métabolome cutané. Les études métabolomiques sont actuellement réalisées en combinant la chromatographie liquide, la spectrométrie de masse et/ou la résonance magnétique nucléaire. C’est donc une méthode simple à mettre en œuvre, qui implémente des techniques analytiques bien connues de l’Homme de l’art.Metabolomics makes it possible to effectively assess the efficacy of active cosmetic ingredients on the skin. It allows the skin metabolome to be characterized as broadly as possible. Metabolomic studies are currently carried out by combining liquid chromatography, mass spectrometry and/or nuclear magnetic resonance. It is therefore a simple method to implement, which implements analytical techniques well known to those skilled in the art.
Il est entendu que l’identification et la quantification de métabolites d’intérêt au niveau du microbiote cutané ne sont pas limitées à une étude par la métabolomique, et que tout autre technique d’analyse permettant de réaliser une telle identification/quantification peut être utilisée.It is understood that the identification and quantification of metabolites of interest at the level of the skin microbiota are not limited to a study by metabolomics, and that any other analysis technique allowing such identification/quantification to be carried out can be used.
De manière avantageuse, l’extrait naturel est un extrait de plante ou un extrait d’un produit issu d’une bactérie.Advantageously, the natural extract is a plant extract or an extract of a product derived from a bacteria.
Le procédé selon l’invention s’applique ainsi à de nombreux extraits cosmétiques ou dermo-cosmétiques, comprenant des ingrédients actifs issus de sources très variées.The process according to the invention thus applies to numerous cosmetic or dermo-cosmetic extracts, comprising active ingredients from very varied sources.
Selon un mode de réalisation, le métabolite d’intérêt produit par le microbiote cutané est une petite molécule organique choisi parmi les vitamines, les caroténoïdes, les acides aminés, les peptides, les glycopeptides, les lipides, les glycolipides, les acides nucléiques, les métabolites de type phénol comme les flavonoïdes, ou de type azoté comme les glycosinolates, ou de type terpènes comme les monoterpènes, diterpènes et triterpènes, les indolamines comme la sérotonine et les catécholamines comme la dopamine.According to one embodiment, the metabolite of interest produced by the skin microbiota is a small organic molecule chosen from vitamins, carotenoids, amino acids, peptides, glycopeptides, lipids, glycolipids, nucleic acids, phenol-type metabolites such as flavonoids, or nitrogen-type metabolites such as glycosinolates, or terpene-type metabolites such as monoterpenes, diterpenes and triterpenes, indolamines such as serotonin and catecholamines such as dopamine.
Selon un mode de réalisation préféré, le métabolite d’intérêt produit par le microbiote cutané est une vitamine et/ou un intermédiaire de production d’une vitamine, une telle vitamine appartenant préférentiellement au groupe des vitamines B.According to a preferred embodiment, the metabolite of interest produced by the skin microbiota is a vitamin and/or an intermediate in the production of a vitamin, such a vitamin preferably belonging to the group of B vitamins.
Avec l'âge, le corps humain a de plus en plus de mal à absorber et à métaboliser les vitamines. En particulier, les vitamines B sont importantes pour lutter contre le déclin cognitif, l'ostéoporose et pour protéger le système cardiovasculaire. Le procédé selon l’invention permet donc la biosynthèse de métabolites d’intérêt pour le corps humain, qui sont particulièrement recherchés par les utilisateurs de produits cosmétiques et dermo-cosmétiques.With age, the human body has more and more difficulty absorbing and metabolizing vitamins. In particular, B vitamins are important for combating cognitive decline, osteoporosis and for protecting the cardiovascular system. The method according to the invention therefore allows the biosynthesis of metabolites of interest to the human body, which are particularly sought after by users of cosmetic and dermo-cosmetic products.
Selon un mode de réalisation préféré, cette vitamine est choisie parmi la vitamine B3 et la vitamine B5.According to a preferred embodiment, this vitamin is chosen from vitamin B3 and vitamin B5.
La vitamine B3 présente avantageusement des effets anti-inflammatoires, anti-oxydants, anti-microbiens, éclaircissant, photoprotecteur, et protecteur de la barrière cutanée.Vitamin B3 has beneficial anti-inflammatory, anti-oxidant, anti-microbial, lightening, photoprotective, and skin barrier protective effects.
La vitamine B5, quant à elle, est un ingrédient actif cosmétique qui produit des effets bénéfiques au niveau de l’apaisement de la peau, du remodelage dermique et du rétablissement de la fonction barrière. Elle présente en effet des propriétés hydratante, apaisante et régénérante. Elle est également efficace dans la lutte contre la chute des cheveux. De plus, la vitamine B5 étant instable, elle n’est généralement pas utilisée en tant que telle dans les formulations cosmétiques connues, mais sous sa forme stabilisée, qui correspond au panthénol. Les concentrations de cet ingrédient stabilisé et dérivant de la vitamine B5 sont donc très souvent élevées dans ces formulations, au-delà des doses cosmétiquement acceptables, ce qui peut induire des irritations de la peau. L’invention, au contraire, permet la productionin situde la vitamine B5 en tant que telle, ce qui permet de l’utiliser ensuite en concentration physiologique et cosmétiquement acceptable dans des formulations cosmétiques, c’est-à-dire dans des concentrations substantiellement plus faibles par rapport aux formulations connues et actuellement commercialisées.Vitamin B5, for its part, is a cosmetic active ingredient that produces beneficial effects in terms of skin soothing, dermal remodeling and barrier function restoration. It has moisturizing, soothing and regenerating properties. It is also effective in combating hair loss. In addition, since vitamin B5 is unstable, it is generally not used as such in known cosmetic formulations, but in its stabilized form, which corresponds to panthenol. The concentrations of this stabilized ingredient derived from vitamin B5 are therefore very often high in these formulations, beyond cosmetically acceptable doses, which can cause skin irritation. The invention, on the contrary, allows the in situ production of vitamin B5 as such, which allows it to be used subsequently in physiological and cosmetically acceptable concentrations in cosmetic formulations, i.e. in substantially lower concentrations compared to the known and currently marketed formulations.
Selon un premier mode de réalisation avantageux, l’extrait de plante est un extrait d’une plante terrestre, cette plante terrestre étant obtenue par récolte, par culture ou par biotechnologie comme les cellules végétales dédifférenciées.According to a first advantageous embodiment, the plant extract is an extract of a terrestrial plant, this terrestrial plant being obtained by harvesting, by cultivation or by biotechnology such as dedifferentiated plant cells.
Selon un deuxième mode de réalisation avantageux, l’extrait de plante est un extrait d’une plante marine, cette plante marine étant choisie parmi les macroalgues et les microalgues. De préférence, l’extrait de plante marine est un extrait de la macroalgueCodium tomentosum, cet extrait étant fermenté en présence de la bactérieExiguobacterium marinumdans de l’eau de mer et stimulant la production de vitamine B5 par le microbiote cutané.According to a second advantageous embodiment, the plant extract is an extract of a marine plant, this marine plant being chosen from macroalgae and microalgae. Preferably, the marine plant extract is an extract of the macroalga Codium tomentosum , this extract being fermented in the presence of the bacterium Exiguobacterium marinum in seawater and stimulating the production of vitamin B5 by the skin microbiota.
Selon un troisième mode de réalisation avantageux, l’extrait de produit issu d’une bactérie est un extrait d’un produit issu d’une bactérie marine, cette bactérie marine étant choisie parmi les cyanobactéries et les bactéries produisant des polyhydroxyalcanoates et des exopolysaccharides.According to a third advantageous embodiment, the extract of product derived from a bacterium is an extract of a product derived from a marine bacterium, this marine bacterium being chosen from cyanobacteria and bacteria producing polyhydroxyalkanoates and exopolysaccharides.
Selon un quatrième mode de réalisation avantageux, l’extrait de produit issu d’une bactérie marine est un extrait de polyhydroxyalcanoate produit par la bactérie CNCM I-5658 et stimule la production d’un intermédiaire de production de la vitamine B3 par le microbiote cutané.According to a fourth advantageous embodiment, the product extract from a marine bacterium is an extract of polyhydroxyalkanoate produced by the bacterium CNCM I-5658 and stimulates the production of an intermediate for the production of vitamin B3 by the skin microbiota.
Selon un mode de réalisation préféré, cet intermédiaire de production de la vitamine B3 est le métabolite kynurénine.According to a preferred embodiment, this vitamin B3 production intermediate is the metabolite kynurenine.
L’extrait mis en œuvre dans le procédé selon l’invention peut être de nature diverse, par exemple un extrait aqueux, hydroglycolique, glycolique, huileux. Il peut être obtenu par diverses types d’extraction, telle qu’une extraction au CO2supercritique ou encore une extraction à froid. Il peut également être fermenté en présence de bactéries, à l’image de l’extrait de la macroalgueCodium tomentosum, fermenté en présence de la bactérieExiguobacterium marinum.The extract used in the method according to the invention may be of various types, for example an aqueous, hydroglycolic, glycolic or oily extract. It may be obtained by various types of extraction, such as supercritical CO2 extraction or cold extraction. It may also be fermented in the presence of bacteria, such as the extract of the macroalga Codium tomentosum , fermented in the presence of the bacterium Exiguobacterium marinum .
Selon un mode de réalisation, le ou les métabolites d’intérêts associés à l’extrait naturel appliqué présentent l’un au moins des effets suivants : l’hydratation, et/ou la cicatrisation, et/ou un effet anti-tâche, et/ou un effet apaisant, et/ou un effet éclaircissant, et/ou un effet sur le teint, et/ou un effet sur l’aspect de la peau, et/ou un effet anti-ride.According to one embodiment, the metabolite(s) of interest associated with the applied natural extract exhibit at least one of the following effects: hydration, and/or healing, and/or an anti-blemish effect, and/or a soothing effect, and/or a lightening effect, and/or an effect on the complexion, and/or an effect on the appearance of the skin, and/or an anti-wrinkle effect.
Le procédé selon l’invention permet ainsi de comprendre comment sont obtenus certains effets cosmétiques au niveau de la peau avec des ingrédients cosmétiques actifs, et quels sont les mécanismes d’action au niveau de la peau qui permettent l’obtention de tels effets.The method according to the invention thus makes it possible to understand how certain cosmetic effects are obtained on the skin with active cosmetic ingredients, and what are the mechanisms of action on the skin which make it possible to obtain such effects.
D’autres avantages et particularités de la présente invention résulteront de la description qui va suivre, donnée à titre d’exemple non limitatif et faite en référence aux figures et aux exemples.Other advantages and particularities of the present invention will result from the description which follows, given as a non-limiting example and with reference to the figures and examples.
EXEMPLE 1 : application d’un extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosum EXAMPLE 1: application of a natural fermented extract of the macroalgae Codium tomentosum
Préparation de l’extraitPreparation of the extract
Une macroalgueCodium tomentosuma été mise en contact avec la bactérieExiguobacterium marinum, qui a été isolée à partir de la surface de l’algueCodium tomentosum. Cette bactérie présente des propriétés d’halotolérance (adaptabilité à des milieux présentant de fortes concentrations en sel), de résistance à de fortes variations de pH et de température, de résistance aux UV, et comprend de fortes teneurs en métaux lourd, tel que l’arsenic : elle peut donc avantageusement s’adapter à des conditions environnementales extrêmes. Le mélange macroalgue/bactérie a été fermenté dans de l’eau de mer. Le milieu de culture a ensuite été filtré, et le rétentat a été mélangé avec du pentylène glycol dans une teneur de 10%, par rapport au poids total du mélange.A macroalga Codium tomentosum was brought into contact with the bacterium Exiguobacterium marinum , which was isolated from the surface of the alga Codium tomentosum . This bacterium has halotolerance properties (adaptability to environments with high salt concentrations), resistance to strong variations in pH and temperature, resistance to UV, and includes high levels of heavy metals, such as arsenic: it can therefore advantageously adapt to extreme environmental conditions. The macroalga/bacteria mixture was fermented in seawater. The culture medium was then filtered, and the retentate was mixed with pentylene glycol in a content of 10%, relative to the total weight of the mixture.
Étude non ciblée sur la peauNon-skin-targeted study
L’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosumdécrit ci-avant a été appliqué sur la joue de plusieurs volontaires dans une concentration de 5% en poids, sur une surface de peau de 9 cm2, deux fois par jour, pendant 28 jours. Un placébo a été appliqué sur l’autre joue des volontaires dans les mêmes conditions. Au bout des 28 jours, des échantillons de peau au niveau des deux joues des volontaires ont été prélevés par des écouvillons, sur une surface de peau de 2 cm2. Ces échantillons ont été ensuite congelés à -80°C.The natural fermented extract of the macroalga Codium tomentosum described above was applied to the cheek of several volunteers in a concentration of 5% by weight, on a skin surface of 9 cm 2 , twice a day, for 28 days. A placebo was applied to the other cheek of the volunteers under the same conditions. After 28 days, skin samples from both cheeks of the volunteers were taken by swabs, on a skin surface of 2 cm 2 . These samples were then frozen at -80°C.
Ces échantillons ont ensuite été décongelés et préparés pour une analyse chromatographique et spectrométrique. Pour cela, ils ont été rincés plusieurs fois avec un mélange eau/éthanol 50/50 en volume, sous agitation, à une température de 4°C. Après une étape de centrifugation, le surnageant de l’échantillon centrifugé a été récupéré et analysé en chromatographie liquide ultraperformante couplée à un spectromètre de masse à haute résolution (UHPLC-MS/MS).These samples were then thawed and prepared for chromatographic and spectrometric analysis. For this, they were rinsed several times with a 50/50 water/ethanol mixture by volume, under agitation, at a temperature of 4°C. After a centrifugation step, the supernatant of the centrifuged sample was recovered and analyzed by ultra-performance liquid chromatography coupled with a high-resolution mass spectrometer (UHPLC-MS/MS).
Cette étude a permis d’identifier la production et l’inhibition de divers métabolites au niveau de la peau par l’application de l’extrait naturel fermenté de lamacroalgue Codium tomentosum. Parmi ces métabolites, il a en particulier été déterminé que la vitamine B5 était produite en réponse à l’application de cet extrait d’algue, et que cette production est multipliée par deux par rapport à l’application topique du placébo.This study identified the production and inhibition of various metabolites in the skin by the application of the natural fermented extract of the macroalgae Codium tomentosum . Among these metabolites, it was determined in particular that vitamin B5 was produced in response to the application of this algae extract, and that this production is multiplied by two compared to the topical application of the placebo.
Il a ensuite été conduit une étude ciblée de l’application de l’extrait naturel fermenté de lamacroalgue Codium tomentosumsur la peau, afin de confirmer que la vitamine B5 est bien produite en réponse à l’application topique de cet extrait, et le cas échéant, de la quantifier.A targeted study was then conducted on the application of the natural fermented extract of the macroalgae Codium tomentosum to the skin, in order to confirm that vitamin B5 is indeed produced in response to the topical application of this extract, and if necessary, to quantify it.
Étude ciblée sur la peauTargeted study on the skin
Une composition comprenant 5% en poids de l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosuma été appliquée sur la joue de cinq volontaires, sur une surface de peau de 9 cm2, deux fois par jour, pendant 28 jours. Un placébo a été appliqué sur l’autre joue des volontaires dans les mêmes conditions. Au bout des 28 jours, des échantillons de peau au niveau des deux joues des volontaires ont été prélevés par des écouvillons, sur une surface de peau de 4 cm2. Ces écouvillons ont ensuite été rincés avec un mélange eau/éthanol 50/50 en volume, et congelés à -80°C.A composition comprising 5% by weight of the natural fermented extract of the macroalga Codium tomentosum was applied to the cheek of five volunteers, on a skin surface of 9 cm 2 , twice a day, for 28 days. A placebo was applied to the other cheek of the volunteers under the same conditions. After 28 days, skin samples from both cheeks of the volunteers were taken by swabs, on a skin surface of 4 cm 2 . These swabs were then rinsed with a 50/50 water/ethanol mixture by volume, and frozen at -80°C.
Ces échantillons ont ensuite été décongelés et préparés pour une analyse chromatographique et spectrométrique. Pour cela, les écouvillons ont été soumis à des ultra-sons dans 1 mL du mélange eau/éthanol 50/50 en volume, pendant 20 min. Après une étape de centrifugation, le surnageant de l’échantillon centrifugé a été récupéré et analysé en chromatographie liquide haute performance couplée à un spectromètre de masse à haute résolution (HPLC-MS/MS).These samples were then thawed and prepared for chromatographic and spectrometric analysis. For this, the swabs were subjected to ultrasound in 1 mL of the 50/50 water/ethanol mixture by volume, for 20 min. After a centrifugation step, the supernatant of the centrifuged sample was recovered and analyzed by high-performance liquid chromatography coupled with a high-resolution mass spectrometer (HPLC-MS/MS).
Cette étude a permis de confirmer que la vitamine B5 est bien produitein situpar la peau en réponse à l’application de l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosum. Cette étude a également permis de quantifier la vitamine B5.This study confirmed that vitamin B5 is indeed produced in situ by the skin in response to the application of the natural fermented extract of the macroalgae Codium tomentosum . This study also allowed the quantification of vitamin B5.
Des études ciblées sur le microbiote de la peau ont ensuite été menées, afin de vérifier que la production de la vitamine B5 se fait bien spécifiquement par les bactéries du microbiote cutané.Targeted studies on the skin microbiota were then carried out to verify that the production of vitamin B5 is indeed done specifically by the bacteria of the skin microbiota.
Étude ciblée sur le microbiote précultivé de la peauTargeted study on precultured skin microbiota
Un écouvillon a été rincé par une solution comprenant 9 g/L de chlorure de sodium (NaCl) et 0,1% de monolaurate de polyoxyéthylène sorbitane (Tween20®). Un échantillon de microbiote cutané a été prélevé par contact de cet écouvillon rincé sur la peau de la joue d’un volontaire. Cet écouvillon a ensuite été mis en contact avec un milieu de culture comprenant de l'eau, 7g/L de NaCl, 1g/L d'extrait de levure, 1g/L de peptone de blé et 1g/L de saccharose, pendant une durée de 24 heures, à une température de 35°C et sous agitation, pour permettre la croissance d'un consortium de micro-organismes de microbiote cutané. Cette culture a ensuite été mise en contact avec de l’eau déminéralisée stérile pour certains échantillons, et avec de l’eau déminéralisée stérile comprenant soit 2% en poids, soit 5% en poids de l’extrait naturel fermenté de la macroalgue Codium tomentosumpour d’autres échantillons. Ces mélanges ont ensuite été incubés à une température de 35°C sous agitation, pendant une durée de 144 heures. La croissance des micro-organismes de la peau a été évaluée en mesurant la densité optique (DO) à une longueur d’onde de 750 nm. Des échantillons de ces cultures ont été prélevés à différents moments et congelées à -20°C, afin de suivre l'évolution de la teneur en vitamine B5 dans le temps.A swab was rinsed with a solution comprising 9 g/L sodium chloride (NaCl) and 0.1% polyoxyethylene sorbitan monolaurate (Tween20®). A skin microbiota sample was collected by contact of this rinsed swab with the skin of a volunteer's cheek. This swab was then placed in contact with a culture medium comprising water, 7 g/L NaCl, 1 g/L yeast extract, 1 g/L wheat peptone and 1 g/L sucrose, for a period of 24 hours, at a temperature of 35°C and with shaking, to allow the growth of a consortium of skin microbiota microorganisms. This culture was then put in contact with sterile demineralized water for some samples, and with sterile demineralized water comprising either 2% by weight or 5% by weight of the fermented natural extract of the macroalga Codium tomentosum for other samples. These mixtures were then incubated at a temperature of 35°C with stirring, for a period of 144 hours. The growth of the skin microorganisms was assessed by measuring the optical density (OD) at a wavelength of 750 nm. Samples of these cultures were taken at different times and frozen at -20°C, in order to monitor the evolution of the vitamin B5 content over time.
Ces échantillons ont ensuite été préparés pour une analyse chromatographique et spectrométrique. Pour cela, ils ont été décongelés et filtrés à 0,2 μm, puis analysés en chromatographie liquide ultraperformante couplée à un spectromètre de masse à haute résolution (UPLC-MS).These samples were then prepared for chromatographic and spectrometric analysis. For this, they were thawed and filtered at 0.2 μm, then analyzed by ultra-performance liquid chromatography coupled with a high-resolution mass spectrometer (UPLC-MS).
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Ainsi, il est clairement observable que les échantillons de microbiote cutané en contact avec l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosumproduisent de la vitamine B5 en quantité supérieure par rapport à l’échantillon qui n’a pas été mis en contact avec cet extrait. Cette production s’observe sur toute la durée de l’étude, c’est-à-dire dès la mise en contact du microbiote avec l’extrait d’algue, jusqu’à la fin de l’observation.Thus, it is clearly observable that the skin microbiota samples in contact with the fermented natural extract of the macroalga Codium tomentosum produce vitamin B5 in greater quantities compared to the sample that was not put in contact with this extract. This production is observed throughout the duration of the study, that is to say from the time the microbiota is put in contact with the algae extract, until the end of the observation.
De plus, l’échantillon mis en contact avec l’extrait d’algue à une concentration de 5% en poids produisent plus de vitamine B5 que l’échantillon mis en contact avec cet extrait à une concentration de 2% en poids : au bout de 50 heures, l’échantillon en présence de 5% en poids d’extrait comprend environ 930 ppb de vitamine B5, tandis que l’échantillon en présence de 2% en poids d’extrait comprend environ 900 ppb de vitamine B5 ; et au bout de 150 heures, l’échantillon en présence de 5% en poids d’extrait comprend environ 1000 ppb de vitamine B5, tandis que l’échantillon en présence de 2% en poids d’extrait comprend environ 950 ppb de vitamine B5. La production de vitamine B5 est donc dépendante de la concentration de l’extrait d’algue appliquée sur la peau.Furthermore, the sample contacted with the algae extract at a concentration of 5% by weight produces more vitamin B5 than the sample contacted with this extract at a concentration of 2% by weight: after 50 hours, the sample in the presence of 5% by weight of extract comprises approximately 930 ppb of vitamin B5, while the sample in the presence of 2% by weight of extract comprises approximately 900 ppb of vitamin B5; and after 150 hours, the sample in the presence of 5% by weight of extract comprises approximately 1000 ppb of vitamin B5, while the sample in the presence of 2% by weight of extract comprises approximately 950 ppb of vitamin B5. The production of vitamin B5 is therefore dependent on the concentration of the algae extract applied to the skin.
De surcroit, la production de vitamine B5 par l’échantillon en présence de 5% en poids d’extrait augmente dans le temps, avec une augmentation de 42% au bout de 144 heures. Ce résultat tend donc à démontrer que l’extrait naturel fermenté de la macroalgue Codium tomentosum, lorsqu’il est appliqué sur la peau, agit de façon continue dans le temps, permettant la biosynthèse de vitamine B5 par le microbiote cutané de façon également continue dans le temps.In addition, the production of vitamin B5 by the sample in the presence of 5% by weight of extract increases over time, with an increase of 42% after 144 hours. This result therefore tends to demonstrate that the natural fermented extract of the macroalga Codium tomentosum , when applied to the skin, acts continuously over time, allowing the biosynthesis of vitamin B5 by the skin microbiota also continuously over time.
Étude ciblée sur le microbiote sauvage de la peauTargeted study on the wild microbiota of the skin
Un échantillon de microbiote cutané a été prélevé sur la peau de la joue de cinq volontaires dans les mêmes conditions que pour l’étude précédente relative au microbiote cutané précultivé. Ces échantillons, qui ne comprennent pas de cellules de peau, n’ont pas été mis en culture, mais directement mis en contact avec de l’eau déminéralisée stérile comprenant 5% en poids de l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosum. Ces mélanges ont ensuite été incubés à une température de 35°C, sous agitation, pendant une durée de 72 heures. La croissance des micro-organismes de la peau a été évaluée en mesurant la densité optique (DO) à une longueur d’onde de 750 nm. Des échantillons de ces cultures ont été prélevés à différents moments et congelées à -20°C, afin de suivre l'évolution de la teneur en vitamine B5 dans le temps.A skin microbiota sample was taken from the cheek skin of five volunteers under the same conditions as for the previous study on precultured skin microbiota. These samples, which do not include skin cells, were not cultured, but directly placed in contact with sterile demineralized water containing 5% by weight of the fermented natural extract of the macroalga Codium tomentosum . These mixtures were then incubated at a temperature of 35°C, with shaking, for a period of 72 hours. The growth of skin microorganisms was assessed by measuring the optical density (OD) at a wavelength of 750 nm. Samples of these cultures were taken at different times and frozen at -20°C, in order to monitor the evolution of vitamin B5 content over time.
Ces échantillons ont ensuite été préparés pour une analyse chromatographique et spectrométrique dans les mêmes conditions que pour l’étude précédente relative au microbiote cutané précultivé.These samples were then prepared for chromatographic and spectrometric analysis under the same conditions as for the previous study on precultured skin microbiota.
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Ainsi, il est clairement observable que l’échantillon de microbiote cutané sauvage en contact avec l’extrait d’algue produit également de la vitamine B5. Il peut notamment être observé un pic de production à environ 300 ppb au bout d’environ 30 heures.Thus, it is clearly observable that the wild skin microbiota sample in contact with the algae extract also produces vitamin B5. In particular, a production peak of around 300 ppb can be observed after around 30 hours.
Dès lors, ces deux études ciblées sur le microbiote cutané (précultivé et sauvage) ont donc permis de démontrer dans un premier temps que le microbiote est capable de se développer en présence de l’extrait naturel fermenté de la macroalgue Codium tomentosum.Therefore, these two studies targeting the skin microbiota (pre-cultured and wild) have made it possible to demonstrate initially that the microbiota is capable of developing in the presence of the natural fermented extract of the macroalgae Codium tomentosum .
Elles ont également permis de démontrer que la vitamine B5, identifiée comme étant produitein situpar la peau en réponse à l’application topique de l’extrait deCodium tomentosum, est spécifiquement produite par les bactéries du microbiote cutané, puisque ces études sont relatives à des échantillons de microbiote ne comprenant pas de cellules de peau. Une biosynthèse de ce métabolite a donc bien été mise en œuvre au niveau du microbiote cutané, qui a reconnu l’extrait actif appliqué sur la peau, et qui a répondu en produisant la vitamine B5, nécessaire à la peau pour combler certains besoins.They also demonstrated that vitamin B5, identified as being produced in situ by the skin in response to topical application of Codium tomentosum extract, is specifically produced by bacteria in the skin microbiota, since these studies relate to microbiota samples that do not include skin cells. Biosynthesis of this metabolite was therefore indeed implemented at the level of the skin microbiota, which recognized the active extract applied to the skin, and responded by producing vitamin B5, which is necessary for the skin to meet certain needs.
Étude in vitro sur les effets anti-inflammatoires de l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosum.In vitro study on the anti-inflammatory effects of the natural fermented extract of the macroalgae Codium tomentosum .
Des fibroblastes dermiques humains normaux (désignés usuellement par l’acronyme NHDF) ont été obtenus dans le service de chirurgie plastique d'un hôpital local à la suite de procédures chirurgicales de type "abdominoplastie". Ces NHDF sont en particulier issus d’une femme de 38 ans. Pour l’invention, ils ont été utilisés au passage 4, pour reproduire une peau normale. Ces NHDF ont été ensemencés dans un milieu de culture basal, usuellement désigné par les termes «Dulbecco's Modified Eagle Medium» en langue anglaise (connu sous l’acronyme DMEM), comprenant 10% de sérum de veau fœtal inactivé par la chaleur (désigné usuellement par l’acronyme FCS), pendant une durée de 3 jours, dans une plaque de 24 multipuits. A la suite de cette période de culture, les cellules ont été soit non traitées (échantillon contrôle), soit traitées (échantillon test) par l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosumà une concentration de 1%, en poids pendant une durée de 16 heures. Les échantillons ont ensuite été mélangés avec du phorbol 12-myristate 13-acétate (désigné usuellement par l’acronyme PMA) et incubés pendant une durée de 24 heures. Après cette période d’incubation, les milieux de culture ont été prélevés et congelés à -80°C.Normal human dermal fibroblasts (commonly referred to as NHDFs) were obtained from the plastic surgery department of a local hospital following "abdominoplasty" type surgical procedures. These NHDFs were in particular obtained from a 38-year-old woman. For the invention, they were used in passage 4, to reproduce normal skin. These NHDFs were seeded in a basal culture medium, commonly referred to as "Dulbecco's Modified Eagle Medium» in English (known by the acronym DMEM), comprising 10% heat-inactivated fetal calf serum (usually referred to by the acronym FCS), for a period of 3 days, in a 24-well plate. Following this culture period, the cells were either untreated (control sample) or treated (test sample) with the natural fermented extract of the macroalgaeCodium tomentosumat a concentration of 1%, by weight for a period of 16 hours. The samples were then mixed with phorbol 12-myristate 13-acetate (commonly referred to as PMA) and incubated for 24 hours. After this incubation period, the culture media were collected and frozen at -80°C.
La prostaglandine-E2 (désigné usuellement par l’acronyme PGE2) a été dosée dans ces échantillons. En effet, cet acide gras joue un rôle important dans les phénomènes immunitaires et inflammatoires du corps humain. Son étude permet donc d’analyser les effets anti-inflammatoires de l’extrait deCodium tomentosumsur la peau. Les dosages de PGE2 ont été réalisés à l'aide d'un kit de dosage ELISA, en suivant les procédures recommandées par le fabricant (Enzo Lifescience, ref ADI-901-001). La densité optique a été mesurée à une longueur d’onde de 450 nm, avec une correction à 540 nm à l'aide d'une plaque de spectrophotomètre.Prostaglandin-E2 (usually referred to as PGE2) was measured in these samples. Indeed, this fatty acid plays an important role in the immune and inflammatory phenomena of the human body. Its study therefore makes it possible to analyze the anti-inflammatory effects of Codium tomentosum extract on the skin. PGE2 assays were carried out using an ELISA assay kit, following the procedures recommended by the manufacturer (Enzo Lifescience, ref ADI-901-001). The optical density was measured at a wavelength of 450 nm, with a correction at 540 nm using a spectrophotometer plate.
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Ainsi, il est clairement observable que la vitamine B5 agit dans la réduction de l’inflammation de la peau : les échantillons comprenant de la vitamine B5, qu’elle soit de synthèse ou produitein situen réponse à la présence de l’extrait deCodium tomentosum, présentent tous une concentration en PGE2 moins importante que les échantillons stressés par du PMA et non traités par l’extrait ou par de la vitamine B5 de synthèse. En effet, la concentration en PGE2 est d’environ 38 000 pg/mL pour l’échantillon uniquement stressé par du PMA, tandis que cette concentration est d’environ 32 000 pg/mL pour l’échantillon stressé par du PMA et mis en contact avec l’extrait d’algue à 1% en poids, d’environ 27 000 pg/mL pour l’échantillon stressé par du PMA et mis en contact avec de la vitamine B5 de synthèse, et d’environ 22 000 pg/mL pour l’échantillon stressé par du PMA et mis en contact avec l’extrait d’algue à 1% en poids et de la vitamine B5 de synthèse.Thus, it is clearly observable that vitamin B5 acts in reducing skin inflammation: samples containing vitamin B5, whether synthetic or produced in situ in response to the presence of Codium tomentosum extract, all have a lower PGE2 concentration than samples stressed by PMA and not treated with the extract or with synthetic vitamin B5. Indeed, the PGE2 concentration is approximately 38,000 pg/mL for the sample stressed only by PMA, while this concentration is approximately 32,000 pg/mL for the sample stressed by PMA and contacted with the 1% by weight algae extract, approximately 27,000 pg/mL for the sample stressed by PMA and contacted with synthetic vitamin B5, and approximately 22,000 pg/mL for the sample stressed by PMA and contacted with the 1% by weight algae extract and synthetic vitamin B5.
De plus, il peut être observé que l’échantillon ayant été mis en contact avec de la vitamine B5 de synthèse et de l’extrait d’algue présente une concentration nettement moins importante en PGE2 par rapport aux échantillons ayant été traités soit par l’extrait d’algue seul, soit par de la vitamine B5 de synthèse seule : ce résultat démontre clairement que l’application de l’extrait d’algue associé à la vitamine B5 biosynthétisée par le microbiote cutané engendre une synergie qui produit un effet cosmétique, ici anti-inflammatoire, amélioré sur la peau.Furthermore, it can be observed that the sample that was put in contact with synthetic vitamin B5 and algae extract has a significantly lower concentration of PGE2 compared to the samples that were treated either with algae extract alone or with synthetic vitamin B5 alone: this result clearly demonstrates that the application of algae extract associated with vitamin B5 biosynthesized by the skin microbiota generates a synergy that produces a cosmetic effect, here anti-inflammatory, improved on the skin.
Étude in vitro sur les effets de différenciation et de prolifération cellulaire de l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosum.In vitro study on the effects of cellular differentiation and proliferation of the natural fermented extract of the macroalga Codium tomentosum .
Des kératinocytes épidermiques humains normaux (désignés usuellement par l’acronyme NHEK) ont été obtenus dans le service de chirurgie plastique d'un hôpital local à la suite d'interventions chirurgicales de type "abdominoplastie". Ces NHEK sont en particulier issus d’une femme de 27 ans. Pour l’invention, ils ont été utilisés au passage 3. Ils ont été ensemencés dans du milieu EpiLife™ (Gibco™) pendant une durée de 4 jours, dans une plaque de 24 multipuits. A la suite de cette période de culture, les cellules ont été soit non traitées (échantillon contrôle), soit traitées par l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosumà une concentration de 0,5%, en poids pendant une durée de 72 heures.Normal human epidermal keratinocytes (usually referred to by the acronym NHEK) were obtained in the plastic surgery department of a local hospital following "abdominoplasty" type surgical procedures. These NHEK are in particular from a 27-year-old woman. For the invention, they were used in passage 3. They were seeded in EpiLife™ medium (Gibco™) for a period of 4 days, in a 24-well plate. Following this culture period, the cells were either untreated (control sample) or treated with the fermented natural extract of the macroalga Codium tomentosum at a concentration of 0.5%, by weight for a period of 72 hours.
Après extraction et quantification d’ARN, des réactions en chaîne par polymérase (désignées usuellement par l’acronyme PCR, désignant «Polymerase Chain Reaction» en langue anglaise), ont été réalisées.After RNA extraction and quantification, polymerase chain reactions (usually referred to as PCR) were performed.
Les figures 4 et 5 illustrent les résultats de cette étude sur les effets de l’extrait de la macroalgueCodium tomentosumau niveau de l’expression de gènes codant pour la différentiation cellulaire et pour des marqueurs de prolifération cellulaire.Figures 4 and 5 illustrate the results of this study on the effects of the extract of the macroalga Codium tomentosum on the expression of genes coding for cell differentiation and for cell proliferation markers.
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Ainsi, il est clairement observable que la vitamine B5 agit dans la stimulation de la différenciation cellulaire au niveau de la peau : les échantillons comprenant de la vitamine B5, qu’elle soit de synthèse ou produitein situen réponse à la présence de l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosum, stimulent presque tous l’expression des gènes FLG et IVL. Concernant le gène FLG, il est observé une augmentation respective de son expression de 201% pour l’échantillon en contact avec l’extrait d’algue seul, de 61% pour l’échantillon en contact avec la vitamine B5 de synthèse seule, et de 300% pour l’échantillon en contact avec l’extrait d’algue et la vitamine B5 de synthèse, par rapport à l’échantillon n’ayant pas été traité. Concernant le gène IVL, il est observé une augmentation respective de son expression de 836% pour l’échantillon en contact avec l’extrait d’algue seul, et de 1045% pour l’échantillon en contact avec l’extrait d’algue et la vitamine B5 de synthèse, par rapport à l’échantillon n’ayant pas été traité.Thus, it is clearly observable that vitamin B5 acts in stimulating cell differentiation in the skin: samples containing vitamin B5, whether synthetic or produced in situ in response to the presence of the natural fermented extract of the macroalga Codium tomentosum , almost all stimulate the expression of the FLG and IVL genes. Concerning the FLG gene, a respective increase in its expression of 201% is observed for the sample in contact with the algae extract alone, 61% for the sample in contact with synthetic vitamin B5 alone, and 300% for the sample in contact with the algae extract and synthetic vitamin B5, compared to the sample that was not treated. Concerning the IVL gene, a respective increase in its expression of 836% was observed for the sample in contact with the algae extract alone, and of 1045% for the sample in contact with the algae extract and synthetic vitamin B5, compared to the sample that had not been treated.
De plus, il peut être observé que l’échantillon ayant été mis en contact avec de la vitamine B5 de synthèse et de l’extrait d’algue stimule de façon nettement plus importante l’expression des gènes FLG et IVL par rapport aux échantillons ayant été traités soit par l’extrait d’algue seul, soit par de la vitamine B5 de synthèse seule : ce résultat démontre clairement que l’application de l’extrait d’algue associé à la vitamine B5 biosynthétisée par le microbiote cutané engendre une synergie qui produit un effet cosmétique, ici stimulation de la différenciation cellulaire, amélioré sur la peau.In addition, it can be observed that the sample that was put in contact with synthetic vitamin B5 and algae extract stimulates the expression of the FLG and IVL genes to a significantly greater extent compared to the samples that were treated either with algae extract alone or with synthetic vitamin B5 alone: this result clearly demonstrates that the application of algae extract associated with vitamin B5 biosynthesized by the skin microbiota generates a synergy that produces a cosmetic effect, here stimulation of cell differentiation, improved on the skin.
L’ensemble de ces études relatives à l’application topique de l’extrait naturel fermenté de la macroalgueCodium tomentosumont permis de démontrer que celui-ci induit avantageusement la biosynthèse de vitamine B5 spécifiquement au niveau du microbiote cutané, et que l’association de cet extrait naturel actif avec la vitamine B5 naturelle produitein situpermet de produire sur la peau un effet cosmétique amélioré, par rapport à la présence sur la peau de l’extrait seul, ou du métabolite seul.All of these studies relating to the topical application of the fermented natural extract of the macroalgae Codium tomentosum have demonstrated that it advantageously induces the biosynthesis of vitamin B5 specifically at the level of the skin microbiota, and that the association of this active natural extract with the natural vitamin B5 produced in situ makes it possible to produce an improved cosmetic effect on the skin, compared to the presence on the skin of the extract alone, or of the metabolite alone.
EXEMPLE 2 : application d’un extrait naturel de poly(3-hydroxyoctanoate) (PHO) issu de la bactérie marine CNCM-I 5658EXAMPLE 2: application of a natural extract of poly(3-hydroxyoctanoate) (PHO) from the marine bacteria CNCM-I 5658
Un poly(3-hydroxyoctanoate) (désigné usuellement par l’acronyme PHO) a été obtenu par fermentation de la bactérie CNCM I-5658 dans un milieu de culture approprié. Après isolation et purification, il a été dilué dans du triheptanoate de glycérol (désigné usuellement par l’acronyme THG), selon une teneur de 5% en poids, pour obtenir un extrait naturel de PHO.A poly(3-hydroxyoctanoate) (usually referred to as PHO) was obtained by fermentation of the bacterium CNCM I-5658 in an appropriate culture medium. After isolation and purification, it was diluted in glycerol triheptanoate (usually referred to as THG), at a content of 5% by weight, to obtain a natural extract of PHO.
La souche bactérienne CNCM I-5658, vivant dans les eaux bordant le département du Finistère (France), a fait l’objet d’un dépôt selon le Traité de Budapest, à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (désignée usuellement par l’acronyme CNCM), par la société Polymaris Biotechnology.The bacterial strain CNCM I-5658, living in the waters bordering the department of Finistère (France), was deposited according to the Budapest Treaty, at the National Collection of Cultures of Microorganisms (usually designated by the acronym CNCM), by the company Polymaris Biotechnology.
Ce PHO a déjà été utilisé dans le domaine de la cosmétique. Ainsi, FR3121353A1 propose des compositions de maquillage, tel que du fond de teint, intégrant ce polyhydroxyalcanoate pour ses propriétés filmogènes. FR31213525A1 divulgue également son utilisation pour améliorer la fonction barrière de la peau, pour hydrater la peau, ou encore pour son effet anti-bactérien pour la peau.This PHO has already been used in the field of cosmetics. Thus, FR3121353A1 proposes makeup compositions, such as foundation, incorporating this polyhydroxyalkanoate for its film-forming properties. FR31213525A1 also discloses its use to improve the skin's barrier function, to moisturize the skin, or for its antibacterial effect on the skin.
Un tel extrait a ensuite été appliqué sur la joue de plusieurs volontaires, sur une surface de 9 cm2de peau, deux fois par jour, pendant 28 jours. Un placébo a été appliqué sur l’autre joue des volontaires dans les mêmes conditions.Such an extract was then applied to the cheek of several volunteers, on an area of 9 cm2 of skin, twice a day, for 28 days. A placebo was applied to the other cheek of the volunteers under the same conditions.
Une analyse basée sur la métabolomique a permis d’identifier que l’application d’un tel extrait de PHO conduit à la biosynthèse de kynurenine, qui est un intermédiaire de la production de vitamine B3. Cette production est multipliée par deux par rapport à l’application topique du placébo.A metabolomics-based analysis identified that the application of such a PHO extract leads to the biosynthesis of kynurenine, which is an intermediate in the production of vitamin B3. This production is increased twofold compared to the topical application of the placebo.
Claims (14)
- A) une analyse qualitative pour identifier ledit métabolite d’intérêt produit par le microbiote cutané en réponse à l’application topique dudit extrait naturel ;
- B) un dosage de la production dudit métabolite d’intérêt identifié à l’étape A par le microbiote cutané, comprenant le prélèvement d’au moins un échantillon de microbiote cutané ; puis sa mise en contact avec ledit extrait naturel et la quantification dudit métabolite d’intérêt dans ledit échantillon de microbiote cutané.Application method according to claim 1, wherein said biosynthesis is analyzed and quantified according to the following steps:
- A) a qualitative analysis to identify said metabolite of interest produced by the skin microbiota in response to the topical application of said natural extract;
- B) an assay of the production of said metabolite of interest identified in step A by the skin microbiota, comprising the collection of at least one sample of skin microbiota; then its contact with said natural extract and the quantification of said metabolite of interest in said sample of skin microbiota.
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