FR3083086A1 - Compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable comprenant de l'amyline, un agoniste au recepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline et un co-polyaminoacide - Google Patents
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Abstract
L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins : a) de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline ; b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante : caractérisée en ce que la composition ne comprend pas d'une insuline basale dont le point isoélectrique pI est compris entre 5,8 et 8,5. Elle concerne également une composition caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une insuline prandiale.
Description
COMPOSITIONS SOUS FORME D'UNE SOLUTION AQUEUSE INJECTABLE COMPRENANT DE L'AMYLINE, UN AGONISTE AU RECEPTEUR DE L'AMYLINE OU UN ANALOGUE D'AMYLINE ET UN CO-POLYAMINOACIDE [Ό001] L'invention concerne les thérapies par injection d'amyiine, d'agoniste au récepteur de l'amyline ou d'analogue d'amyiine pour traiter le diabète.
[0002] L'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyiine et un copolyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes selon l'invention et des compositions comprenant en outre une insuline (à l'exclusion des insulines basales dont le point isoélectrique pl est compris entre 5,8 et 8,5). L'invention concerne également des formulations pharmaceutiques comprenant les compositions selon l'invention. Enfin, l'invention se rapporte également à une utilisation des copolyaminoacides porteurs de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes selon l’invention pour stabiliser des compositions d'amyiine, d'agoniste au récepteur de l'amyline ou d'analogue d'amyiine ainsi que des compositions d'amyiine, d'agoniste au récepteur de l'amyline ou d'analogue d'amyiine comprenant en outre une insuline.
[0003] Le diabète de type 1 est une maladie autoimmune conduisant à la destruction des cellules béta du pancréas. Ces cellules sont connues pour produire l'insuline dont le rôle principal est de réguler l'utilisation du glucose dans les tissus périphériques (Gerich 1993 Control of glycaemia). Par conséquent, les patients atteints de diabète de type 1 souffrent d'hyperglycémie chronique et doivent s'administrer de l'insuline exogène afin de limiter cette hyperglycémie. L'insulino-thérapie a permis de changer drastiquement l'espérance de vie de ces patients. Cependant, le contrôle de la glycémie assuré par l'insuline exogène n'est pas optimal, en particulier après la prise d'un repas. Ceci est lié au fait que ces patients produisent du glucagon après la prise d’un repas, ce qui conduit au déstockage d’une partie du glucose stocké dans le foie, ce qui n'est pas le cas chez la personne saine. Cette production de glucose médiée par ie glucagon aggrave le problème de régulation de la glycémie de ces patients.
[0004] Il a été démontré que l'amyline, une autre hormone produite par les cellules béta du pancréas et donc également déficiente chez les patients diabétiques de type 1, joue un rôle clé dans la régulation de la glycémie post-prandiale. L'amyline, aussi connu sous le nom de « islet amyloid polypeptide » ou IAPP, est un peptide de 37 amino acides qui est co-stocké et co-sécrété avec l'insuline (Schmitz 2004 Amylin Agonists). Ce peptide est décrit pour bloquer la production du glucagon par les cellules alpha du pancréas. Ainsi, l'insuline et I'amyline ont des rôles complémentaires et synergétiques, puisque l'insuline permet de réduire la concentration de glucose dans le sang alors que I'amyline permet de réduire l'entrée de glucose endogène dans le sang en inhibant la production (sécrétion) du glucagon endogène.
[0005] Cette problématique de régulation de la glycémie post-prandiale est assez similaire pour les patients atteints de diabète de type 2 traités par l’insuline dans la mesure où leur maladie a conduit à une perte très significative de leur masse de cellules béta et par conséquent, de leur capacité de production d'insuline et d'amyline.
[0006] L'amyline humaine a des propriétés qui ne sont pas compatibles avec les exigences pharmaceutiques en termes de solubilité et de stabilité (Goldsbury CS, Cooper GJ, Goldie KN, Muller SA, Saafi EL, Gruijters WT, Misur MP, Engel A, AeBIU, Kistler J : Polymorphic fibrillar assembly of human amylin. J Struct Biol 119:17-27, 1997). L'amyline est connue pour former des fibres amyloïdes qui conduisent à la formation de plaques qui sont insolubles dans l'eau. Bien qu'étant l'hormone naturelle, il a été nécessaire de développer un analogue afin de résoudre ces problèmes de solubilité.
[0007] Les propriétés physico-chimiques de l'amyline rendent ainsi son utilisation impossible : l'amyline n'est stable qu'une quinzaine de minutes à pH acide, et moins d'une minute à pH neutre.
[0008] La société Amylin a développé un analogue de i'amyline, lé pramlintide, pour pallier le manque de stabilité de l'amyline humaine. Ce produit commercialisé sous le nom de Symlin a été approuvé en 2005 par la FDA pour le traitement des diabétiques de type 1 et de type 2. Il doit être administré par voie sous cutanée trois fois par jour, dans l'heure précédant ie repas afin d'améliorer le contrôle de la glycémie postprandiale. Ce peptide est formulé à pH acide et est décrit pour fibriiler lorsque le pH de la solution est supérieur à 5,5. Des variantes d’analogues sont décrites dans le brevet US 5,686,411.
[0009] Cet analogue n'est ainsi pas satisfaisant sur ie plan de la stabilité lorsqu’une formulation à pH neutre est envisagée.
[00010] A ce jour, il n'existe aucun moyen permettant de stabiliser l'amyline humaine afin d'en faire un produit pharmaceutique. Or, il serait avantageux pour les patients d'avoir accès à la forme humaine de cette hormone physiologique. I! serait également avantageux de pouvoir formuler un analogue ou un agoniste de récepteur d'amyline à pH neutre.
[00011] De plus, il y aurait un intérêt à pouvoir mélanger en solution aqueuse i'amyline, un analogue de l'amyline, ou un agoniste de récepteur à l'amyline, avec une insuline prandiale puisque ces deux produits sont à administrer avant le repas. Cela permettrait d'ailleurs de mimer la physiologie puisque ces deux hormones sont cosécrétées par les cellules béta en réponse à un repas afin d'améliorer le contrôle de la glycémie post-prandiale.
[00012] Or, compte tenu du fait que les solutions d'insulines prandiales ont un pH proche de la neutralité pour des raisons de stabilité chimique, i! n'est pas possible d'obtenir une solution aqueuse répondant aux exigences pharmaceutiques en termes de solubilité et de stabilité.
[00013] Pour cette raison, la demande de brevet US2016/001002 de la société ROCHE décrit une pompe contenant deux réservoirs séparés afin de rendre possible la co-administration de ces deux hormones avec un seul dispositif médical. Cependant, ce brevet ne résout pas le problème du mélange de ces deux hormones en solution qui permettrait de les administrer avec les pompes conventionnelles déjà sur le marché qui ne contiennent qu'un réservoir.
[00014] La demande de brevet W02013067022 de la société XERIS apporte une solution au problème de stabilité de l'amyline et de sa compatibilité avec l'insuline en employant un solvant organique à la place de l'eau. L'absence d'eau semble résoudre les problèmes de stabilité mais l'utilisation d'un solvant organique pose des problèmes de sécurité d'utilisation chronique pour les patients diabétiques et également des problèmes de compatibilité avec les dispositifs médicaux usuels, au niveau des tubulures, des joints et des plastifiants employés.
[00015] La demande de brevet W02007104786 de la société NOVO NORDISK décrit une méthode permettant de stabiliser une solution de pramiintide, qui est un analogue de l’amyline, et d'insuline par l'ajout d'un phospholipide, dérivé de glycérophosphoglycérol, en particulier le dimyristoyl glycérophosphoglycérol (DMPG). Or, cette solution requiert l’emploi de quantités importantes de DMPG qui peuvent poser un problème de tolérance locale.
A la connaissance de la demanderesse, il n'existe pas de moyen satisfaisant qui permette de combiner en solution aqueuse une insuline prandiale et l’amyline humaine, un agoniste de récepteur d’arnyline ou un analogue de l'amyline afin de pouvoir être administrée avec des dispositifs conventionnels.
[00016] Le pH de formulation acide et la fibrillation rapide sont des freins pour obtenir une formulation pharmaceutique à pH neutre à base d'arnyline et de pramiintide, mais aussi un frein pour combiner l'amyline ou le pramiintide à d'autres ingrédients pharmaceutiques actifs, en particulier des peptides ou des protéines.
[00017] La demanderesse a remarqué que, de manière surprenante, les copolyarninoacides selon l'invention stabilisent des compositions d'arnyline, d’agoniste au récepteur de i'amyiine ou d'analogue d'amyline à un pH compris entre 6 et 8. En effet, des compositions comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un analogue d’amyline en combinaison avec un co-polyaminoacide selon l'invention présentent une stabilité accrue dans le temps, ce qui est d'un grand intérêt pour le développement pharmaceutique.
[00018] La demanderesse a également constaté que les co-polyaminoacides selon l'invention permettent en outre d'obtenir une composition comprenant de l'insuline prandiale et de I'amyiine, agoniste au récepteur de l’amyline ou analogue d'amyline, ladite composition étant limpide et ayant une stabilité à la fibrillation améliorée.
[00019] Une méthode classique pour mesurer les stabilités des protéines ou peptides consiste à mesurer ia formation de fibrilles à l'aide de Thioflavine T, encore appelée ThT. Cette méthode permet de mesurer dans des conditions de température et d'agitation qui permettent une accélération du phénomène, le temps de latence avant la formation de fibrilles par mesure de l'augmentation de la fluorescence. Les compositions selon l'invention ont un temps de latence avant la formation de fibrilles nettement supérieur à celui de I'amyiine, d'un agoniste au récepteur de l’amyline ou d’un analogue d'amyline au pH d'intérêt, [00020] Les compositions selon l'invention présentent une stabilité physique, et éventuellement chimique, satisfaisante au pH désiré.
[00021] Dans un mode de réalisation, l'invention concerne une composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont le pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :
a) de l’amyline , un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un analogue d'amyline ;
b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante :
*~f”GpR VnGpA^Gpcj r a P Formule i dans laquelle
- GpR est un radical de formules Π, ΙΓ ou Π :
HH i? H O O ~N”~R”N— tj 0LS * R”N-“”u'ou formule Π;
- GpA est un radical de formules III ou III' :
il· H
HN·—* ni ou nr.
~ GpC est un radical de formule IV ·:
- les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes;
- a est un entier égal à 0 ou à1 ;
- b est un entier égal à 0 ou à1;
p est un entier égal à 1 ou à2 et o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formule III' et, o si p est égal à 2 alors a est égal à 1, et GpA est un radical de formuleIII;
- c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égai à 1 ou à2;
- d est un entier égai à 0, à 1 ou à 2;
- r est un entier égal à 0, 1 ou à 2, et o si r est égal à 0 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminale du copolyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine en position N terminale du précurseur du co-polyaminoacide et une fonction acide portée par le précurseur du radical hydrophobe . et o si r est égal à 1 ou 2. alors le radical hydrophobe de formule 1 est lié au copolyaminoacide :
* via une liaison covalente entre un atome d'azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-polyaminoacide ou * via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du copolyaminoacide;
- R est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant une ou plusieurs fonctions -CONH2 ou un radical éther ou poiyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant un ou plusieurs cycles insaturés ou un radical éther ou poiyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;
plus précisément, R est un radical choisi dans le groupe constitué par :
o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 12 atomes de carbone, si GpR est un radicai de formule II' de 1 à 11 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule II de 0 à 10 atomes de carbone;
o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 11 atomes de carbone, si GpR est un radical de formule ΙΓ de 1 à 11 atomes de carbone ou si GpR est un radicai de formule II de 0 à 10 atomes de carbone, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONH2, et o un radical éther ou poiyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;
A est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical éther ou poiyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 8 atomes de carbone et éventuellement subsitué par un radical issu d'un cycle saturé, insaturé ou aromatique;
B est un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone;
- Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant une partie cyclique, dans lequel x indique le nombre d'atomes de carbone et :
o si p est égal à 1, x est compris entre 9 et 25 (9 < x < 25) :
o si ρ est égai à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 < x < 15), le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques étant compris entre entre 0 < i < 0,5 ;
lorsque plusieurs radicaux hydrophobes sont portés par un co-polyaminoacide alors ils sont identiques ou différents, le degré de polymérisation DP en unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 5 et 250 ;
les fonctions acides libres étant sous forme de sel de cation alkalin choisi dans le groupe constitué par Na+ et K+ ;
caractérisé en ce que la composition ne comprend pas une insuline basale dont le point isoélectrique· pl est compris entre 5,8 et 8,5.
[00022] Dans un mode de réalisation, lorsque r=2 alors le groupe GpR lié au PLG est choisi parmi les GpR de formule IL [00023] Dans un mode de réalisation, lorsque r=2 alors le groupe GpR lié au PLG est choisi parmi les GpR de formule II et le deuxième GpR est choisi parmi les GpR de formule II.
[00024] Dans un mode de réalisation, un mode de réalisation, lorsque r-2 alors le groupe GpR lié au PLG est choisi parmi les GpR de formule II.
[00025] Dans un mode de réalisation, un mode de réalisation, lorsque r=2 alors le groupe GpR Hé au PLG est choisi parmi les GpR de formule II et le deuxième GpR est choisi parmi les GpR de formule IL
Dans un mode de réalisation, GpR est un radical de formule II:
H H * —N—R —N—* n.
Dans un mode de réalisation, ledit au moins un radical hydrophobe —Hy est choisi parmi les radicaux de formule I dans laquelle r = 2 de formule Xc', telle que définie ci-dessous : *—-GpR—GpR (GpA; -(GpC) a p Formule Xc' dans laquelle GpRi est un radical de formule II.
H H — N-R””N— Formule II dans laquelle GpR, GpA, GpC, R, a, et p ont les définitions données précédemment.
Dans un mode de réalisation, ledit au moins un radical hydrophobe --Hy est choisi parmi les radicaux de formule X dans laquelle r = 2 de formule Xc', telle que définie cidessous :
*—GpR~GpR--(GpAy—(GpCj a P Formule Xc' dans laquelle GpRi est un radical de formule II.
O O *__LLR Jl_* Formule Π dans laquelle GpR, GpA, GpC, R, a, et p ont les définitions données précédemment.
[00026] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 15 et 100 atomes de carbone.
[0002.7] Dans un mode de réalisation, Hy comprend plus de 30 atomes de carbone.
[00028] Dans un mode de réalisation, la composition selon l’invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 30 et 70 atomes de carbone.
[00029] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 40 et 60 atomes de carbone.
[00030] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que Hy comprend entre 20 et 30 atomes de carbone [00031] Dans un mode de réalisation, Hy comprend plus de 15 atomes de carbone.
[00032] Dans un mode de réalisation, Hy comprend plus de 30 atomes de carbone.
[00033] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie pH est compris entre 6,6 et 7,8.
[00034] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 7,0 et 7,8.
[00035] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le pH est compris entre 6,8 et 7,4.
[00036] Les compositions sous forme d'une solution aqueuse injectable selon l'invention sont des solutions limpides. On entend par « solution limpide », des compositions qui satisfont aux critères décrits dans les pharmacopées américaine et européenne concernant les solutions injectables. Dans la pharmacopée US, les solutions sont définies dans la partie <1151> faisant référence à l'injection (<1>) (faisant référence à <788> selon USP 35 et précisé dans <788> selon USP 35 et dans <787>, <788> et <790> USP 38 (à partir du 1er août 2014), selon USP 38). Dans la pharmacopée européenne, les solutions injectables doivent remplir les critères donnés dans les sections 2,9.19 et 2.9.20.
[00037] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si ρ est égal à 1 et si x est inférieur ou égal à 14 (x < 14) alors r = Oou r = 1.
[00038] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 et si x est compris entre 15 et 16 (15 < x < 16), alors r = 1, [00039] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 et si x est supérieur à 17 (17 < x ) alors r = 1 et R est un radical éther ou polyéther.
[00040] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle si p est égal à 1 alors x est compris entre 17 et 25 (17 < x < 25).
[00041] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 12 atomes de carbone.
[00042] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R. est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[00043] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[00044] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[00045] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[00046] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant 2 atomes de carbone.
[00047] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 1 à 11 atomes de carbone.
[00048] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant de 1 à 6 atomes de carbone.
[00049] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[00050] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[00051] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| * ; 0^ xnh2 | Formule XI |
| * XV XV * 1 Vh2 | Formule X2 |
[00052] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical de formule XI.
[00053] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ïe radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical de formule X2.
[00054] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est lié au co-polyaminoacide via une fonction amide portée par le carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (-CONH2).
il [00055] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical linéaire éther ou poiyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène.
[00056] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radicai dans lequel R est un radical éther.
[00057] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radicai dans lequel R est un radical éther comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.
[00058] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant 6 atomes de carbone.
[00059] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radicai dans lequel R est un radical éther représenté par la formule [00060] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical poiyéther.
[00061] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical linéaire poiyéther comprenant de 6 à 10 atomes de carbone et de 2 à 3 atomes d'oxygène.
[00062] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical poiyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules cidessous :
| Formule X3 | ||||||
| & | Formule X4 | |||||
| * | Formule X5 | |||||
| Formule X6 |
[00063] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical de formule X3.
[00064] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical de formule X4.
[00065] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules X5 et X6 ci-dessous :
| Formule X5 | |
| * Λ /x. * | Formule X6 |
[00066] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical polyéther de formule X5.
[00067] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I est un radical dans lequel R est un radical polyéther de formule X6.
[00068] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 0 (a=0) et r est égal à 0 (r=0).
[00069] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est choisi dans le groupe constitué des radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[00070] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est un radical de formule Yl.
[00071] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radicai de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ' est un radical de formule Y2.
[00072] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule III' est un radical de formule Y3.
[00073] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est un radical de formule Y4.
[00074] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule III’ est un radical de formule Y5.
[00075] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est un radicai de formule Y6.
[00076] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est un radical de formule Y7.
[00077] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est un radical de formule Y8.
[00078] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est un radical de formule Y9.
[00079] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule
IV est choisi dans ie groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc ci-après représentées :
[00080] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC est de formule IVa.
[00081] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc dans lesquels b est égal à 0, répondant respectivement aux formules IVd, IVe, et IVf ci-après représentées :
Formule IVd
Formule IVe
Formule IVf [00082] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC répond à la formule IV ou IVa dans lesquelles b = 0, et répond à ia formule IVd.
[00083] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV dans laquelle b = 1 est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans ie groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[00084] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle ie radical GpC de formule IV ou IVa dans lesquelles b = 1, est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[00085] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles linéaires.
[00086] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles ramifiés.
[00087] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 11 et 14 atomes de carbone.
[00088] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| X==ll | ||
| * | x==13 |
[00089] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 15 et 16 atomes de carbone. [00090] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle ie radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[00091] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| X-- 16 |
[00092] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle ie radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 17 et 25 atomes de carbone.
[00093] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 1.7 et 1.8 atomes de carbone.
[00094] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans ie groupe constitué par les radicaux alkyles représentés par les formules ci-dessous :
[00095] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 18 et 25 atomes de carbone.
[00096] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles représentés par les formules ci-dessous :
[00097] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle p = 1, représentée par la formule V suivante :
‘--(GpR f+GpA V-· GpC r 'a formule V
GpR, GpA, GpC, r et a ont les définitions données précédemment, [00098] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle : r est égal à 1 (r= 1 ) et a est égal à 0 (a == 0).
[00099] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle r est égal à 1 (r= 1) et a est égal à 1 (a = l).
[000100] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 12 atomes de carbone.
[000101] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[000102] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[000103] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[000104] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[000105] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant 2 atomes de carbone.
[000106] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 1 à 11 atomes de carbone.
[000107] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant de 1 à 6 atomes de carbone.
[000108] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[000109] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2. à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2), [000110] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| i ,·.#^·· Ύ o-^ xnh2 | Formule XI |
| * Z'' zdX * Cr xnh2 | Formule X2 |
[000111] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R. est un radical de formule XI.
[000112] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical de formule X2.
[000113] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est lié au copolyaminoacide via une fonction amide portée par le carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (-CONH2).
[000114] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical linéaire éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène.
[000115] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical éther.
[000116] Dans un mode de réaiisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical éther comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.
[000117] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical alkyle divalent comprenant 6 atomes de carbone.
[000118] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical éther
O.
représenté par la formule [000119] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical polyéther, [000120] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical linéaire polyéther comprenant de 6 à 10 atomes de carbone et de 2 à 3 atomes d'oxygène.
[000121] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules cidessous :
| ,.o | ' '•’’S * | I Formule X3 | |||
| Formule X4 | |||||
| * | ,ΛΚ. | •x | Formule X5 | ||
| Formule X6 |
[000122] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical de formule X3.
[000123] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical de formule X4.
[000124] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un radical dans lequel R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules X5 et X6 ci-dessous :
| * | χ°χ/Χ | * | Formule X5 | ||
| & | s. * | Formule 116 |
[000125] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V est un, radical dans lequel R est un radical polyéther de formule X5.
[000126] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de fornuile V est un radical dans lequel R est un radical polyéther de formule X6, [000127] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule IL [000128] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ.
[000129] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule Π.
[000130] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 12 atomes de carbone.
[000131] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[000132] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[000133] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[000134] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[000135] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant 2 atomes de carbone.
[000136] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ.
[000137] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 1 à 11 atomes de carbone.
[000138] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 1 à 6 atomes de carbone.
[000139] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou Π, dans laquelle R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[000.140] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou Π, dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[000141] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radicai hydrophobe est un radicai de formule I dans iaqueiie GpR est un radical de formule Π, II' ou II dans laquelle R est un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000142] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical R est lié au co-polyaminoacide via une fonction amide portée par le carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (CONH2).
[000143] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, 11' ou II, dans laquelle R est un radical linéaire éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène.
[000144] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical éther.
[000145] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical éther comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.
[000146] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou Π dans laquelle R est un radical éther représenté par ia formule
..Cl , de Formule X7.
[000147] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical polyéther.
[000148] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule Π, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical linéaire polyéther comprenant de 6 à 10 atomes de carbone et de 2 à 3 atomes d'oxygène.
[000149] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou Π, dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| Γ0001501 | x-Qr'· ' '' | Formul e X3 | ||||
| :A' | . o . | * | Formul e X4 | |||
| * | O.^ | * | Formul e X5 | |||
| .,.. O. | 'Ό ' | XK * | Formul e X6 |
[000151] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical de formule X3.
[000152] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical de formule X4.
[000153] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical de formule X5.
[000154] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II ou ΙΓ, dans laquelle R est un radical de formule X6.
[000155] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule I dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| X A | (X . | Formule X5 | |||
| -À- | Formule X6 |
[000156] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radicai polyéther de formule X5.
[000157] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de Formule II ou H'dans laquelle R est un radical polyéther de formule X6.
[000158] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONHz).
[000159] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ, II ou Π, dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONHz).
[000160] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou Π dans laquelle R est un radicai choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000161] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical R est lié au co-polyaminoacide via une fonction amide portée par ie carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (CONH2).
[000162] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical linéaire éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène.
[000163] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule Π, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical éther.
[000164] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical éther comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.
[000165] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II dans laquelle R est un radical éther représenté par la formule
A [000166] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou H, dans laquelle R est un radical polyéther.
[000167] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical linéaire polyéther comprenant de 6 à 10 atomes de carbone et de 2 à 3 atomes d’oxygène.
[000168] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II, II’ ou Π, dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans ie groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000169] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR. est un radical de formule II, IF ou II dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000170] Dans un mode de realisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe de formule V dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000171] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle a est égal à 0 (a—0) et r est égal à 0 (r==0).
[000172] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle a est égal à 1 (a = 1) et le radical GpA de formule ΙΙΓ est choisi dans le groupe constitué des radicaux représentés
[000173] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc ci-après représentées :
[000174] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC est de formule IVa.
[000175] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc dans lesquels b est égal à 0, répondant respectivement aux formules IVd, IVe, et IVf ci-après représentées :
[000176] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC répond à la formule IV ou IVa dans lesquelles b = 0, et répond à la formule IVd.
[000177] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV dans laquelle b = 1 est choisi dans ie groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans ie groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| * ch3 : | h3c | Éh3 i | |
| * * | * | ||
| ch3 ' | i | ||
| ch3 | |||
| H3c^ . | |||
| * * | & | ||
| h3c^ | h3cx^ch3 |
[000178] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV ou IVa dans lesquelles b = 1, est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels B est un résidu d'acide aminé choisi dans ie groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000179] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles linéaires.
[000180] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles ramifiés.
[000181] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 11 et 14 atomes de carbone.
[000182] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans ie groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| * | x=ll | |
| * Λ | x=13 |
[000183] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 15 et 16 atomes de carbone.
[000184] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000185] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
| ÇH3 ' ' ''Oh3 | x=16 |
[000186] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 17 et 25 atomes de carbone.
3.1 [000187] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radicai GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 17 et 18 atomes de carbone.
[000188] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles représentés par les formules ci-dessous :
[000189] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans ie groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 18 et 25 atomes de carbone.
[000190] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule V dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans ie groupe constitué par les radicaux alkyles représentés par les formules ci-dessous :
[000191] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle a = 1 et p = 2, représentée par la formule VI suivante :
*—^GpR J—GpA—GpCy r 2 Formule VI dans laquelle
GpR, GpA, GpC, ret a ont ies définitions données précédemment.
[000192] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II.
[000193] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule Π dans lequel R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 12 atomes de carbone.
[000194] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[000195] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 6 atomes de carbone.
[000196] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle comprenant de 2 à 4 atomes de carbone. [000197] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 2 à 4 atomes de carbone.
[000198] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant 2 atomes de carbone.
[000199] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ.
[000200] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent comprenant de 1 à 11 atomes de carbone.
[000201] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule ΙΓ dans laquelle R est un radical alkyle divalent comprenant de 1 à 6 atomes de carbone, [000202] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical alkyle divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone, et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[000203] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule Vï dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou Π, dans laquelle R est un radical alkyle linéaire divalent, comprenant de 2 à 5 atomes de carbone et portant une ou plusieurs fonctions amide (-CONH2).
[000204] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II dans laquelle R est un radical choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000205] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle la fonction amine du radical GpR engagée dans la formation de la fonction amide qui lie ledit radical GpR au co-polyaminoacide est portée par un carbone en position delta ou epsilon (ou en position 4 ou 5) par rapport à la fonction amide (-CONH2).
[000206] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical linéaire éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène.
[000207] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II dans laquelle R est un radical éther.
[000208] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical éther R est un radical comprenant de 4 à 6 atomes de carbone.
[000209] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical éther est * [000210] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical polyéther.
[000211] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ou II, dans laquelle R est un radical linéaire polyéther comprenant de 6 à 10 atomes de carbone et de 2 à 3 atomes d'oxygène.
[000212] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle GpR est un radical de formule II, ΙΓ ου II dans laquelle R est un radical linéaire polyéther choisi dans le groupe constitué par les radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000213] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpA de formule III est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules Ilia et Illb ci-après représentées :
[000214] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpA de formule III est un radical de formule Illb ci-après représentée :
[000215] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb et IVc ci-après représentées :
| V-J b® | • Formule IVa |
| *x,iO o λ kJ ' b ° | Formule IVb |
| J'’y | Formule IVc |
[000216] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC est de formule IVa.
[000217] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radicai GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux de formules IVa, IVb ou IVc dans lesquels b est égal à 0, répondant respectivement aux formules IVd, IVe, et IVf ci-après représentées :
[000218] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC répond à ia formule IV ou IVa dans lesquelles b = 0, et répond à la formule IVd.
[000219] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radicai de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyies linéaires comprenant entre 9 et 15 atomes de carbone.
[000220] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyies ramifiés comprenant entre 9 et 15 atomes de carbone.
[000221] Dans un mode de réaiisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyies comprenant 9 ou 10 atomes de carbone.
[000222] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyies comprenant entre 11 et 15 atomes de carbone.
[000223] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans ie groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant entre 11 et 13 atomes de carbone.
[000224] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué .par les radicaux représentés par les formules ci-dessous c
| Λ | -^ch3 | x ~ 9 |
| ' ' ' '''CH3 | x =- 11 | |
| •fr | x = 13 : |
[000225] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule IV est choisi dans le groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par les radicaux alkyles comprenant 14 ou 15 atomes de carbone.
[000226] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe est un radical de formule VI dans laquelle le radical GpC de formule
IV est choisi dans ie groupe constitué des radicaux dans lesquels Cx est choisi dans le groupe constitué par ies radicaux représentés par les formules ci-dessous :
[000227] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII suivante :
Ο
formule VII dans laquelle, * D représente, indépendamment, soit un groupe -CH?- (unité aspartique) soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique), * Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, « Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, ou un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO. un groupe acyle ramifié en C3 à CIO, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate, « R2 est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, ou un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à CIO, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S, * X représente un H ou une entité cationique choisie dans le groupe comprenant les cations métalliques ;
® n + m représente le degré de polymérisation DP du co-polyaminoacide, c'est-à-dire le nombre moyen d’unités monomériques par chaîne de copolyaminoacide et 5 < n + m < 250 ;
[000228] Le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe de formule I peut également être appelé « co-polyaminoacide » dans la présente description.
[000229] On appelle « co-polyaminoacide statistique » un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d’au moins un radical hydrophobe, un co-polyaminoacide de formule VÏIa.
[000230] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, dans laquelle Ri ···· R'i et R2 := RA, de formule Vila suivante :
R'iJ*
dans laquelle,
- m, η, X, D et Hy ont les définitions données précédemment,
- R'i est un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à C10, un groupe acyle ramifié en C3 à C10, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate,
- RA est un radical -NR'R, R' et R identiques ou différents étant choisis dans ie groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à C10, le benzyle et iesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S.
[000231] On appelle « co-polyaminoacide défini » un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d’au moins un radical hydrophobe, un co-polyaminoacide de formule Vllb.
[000232] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n = 0 de formule Vllb suivante :
0:
OX
© r2
Formule Vllb dans laquelle m, X, D, Ri et Rz ont les définitions données précédemment et au moins Ri ou Rz est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
[000233] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VH dans laquelle n = Ode formule Vllb et Ri ou Rz est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
[000234] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule Vllb dans laquelle Ri est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
[000235] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules Vllb dans laquelle Rz est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
[000236] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que Ri est un radical choisi dans le groupe constitué par un groupe acyle linéaire en Cz à Cio, un groupe acyle ramifié en C3 à Cio, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate.
[000237] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que Ri est un radical choisi dans le groupe constitué par un groupe acyle linéaire en Cz à Cio ou un groupe acyle ramifié en C3 à Cio.
[000238] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, Vila ou Vllb dans lesquels le groupe D est un groupe -CHz- (unité aspartique).
[000239] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formules VII, Vila ou Vllb dans lesquels ie groupe D est un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique).
[000240] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,3.
[000241] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre ie nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,3.
[000242] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,2.
[000243] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe répond à la formule VI et ie ratio i entre ie nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,15.
[000244] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,1.
[000245] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,08.
[000246] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle ie radical Cx comprend entre 9 et 10 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,03 et 0,15.
[000247] Dans un mode de réalisation, la composition est. caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 11 et 12 atomes de carbone et ie ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,015 et 0,1.
[000248] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que ie radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 11 et 12 atomes de carbone et le ratio i entre ie nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,08.
[000249] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 13 et 15 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d’unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01. et 0,1.
[000250] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule VI dans laquelle le radical Cx comprend entre 13 et 15 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,06.
[000251] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,007 et 0,3.
[000252] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d’unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,3.
[000253] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,015 et 0,2.
[000254] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 11 et 14 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,1 et 0,2.
[000255] Dans un mode de réalisation, ia composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à ia formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 15 et 16 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,04 et 0,15.
[000256] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à ia formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 17 et 18 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,02 et 0,06.
[000257] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 19 et 25 atomes de carbone et le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,06.
[000258] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que le radical hydrophobe répond à la formule V dans laquelle le radical Cx comprend entre 19 et 25 atomes de carbone et le ratio I entre le nombre de radicaux hydrophobes et le nombre d'unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 0,01 et 0,05.
[000259] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 10 et 250.
[000260] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 10 et 200.
[000261] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 150.
[000252] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 100.
[000263] Dans un mode de réalisation, la composition seion l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 80.
[000264] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 15 et 65.
[000265] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 20 et 60.
[000266] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 20 et 50.
[000267] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que n + m est compris entre 20 et 40.
[000268] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que ie co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par polymérisation.
[0002.69] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que ie co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par polymérisation par ouverture de cycle d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique.
[000270] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoadde obtenu par polymérisation d’un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique comme décrit dans l’article de revue Adv, Polym. Sci. 2006, 202, 1-18 (Deming, TJ.).
[000271] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que ie co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d’acide glutamique.
[000272] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique choisi dans le groupe constitué par le N-carboxyanhydride glutamate de méthyle (GluOMe-NCA), le Ncarboxyanhydride glutamate de benzyle (GluOBzl-NCA) et le N-carboxyanhydride glutamate de t-butyle (GluOtBu-NCA).
[000273] Dans un mode de réalisation, le dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique est le N-carboxyanhydride L-glutamate de méthyle (L-GluOMe-NCA).
[000274] Dans un mode de réalisation, le dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique est le N-carboxyanhydride L-glutamate de benzyle (L-GluOBzl-NCA).
[000275] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur un complexe organométallîque d'un métal de transition comme décrit dans la publication Nature 1997, 390, 386-389 (Deming, T.J.).
[000276] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d’un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur l'ammoniaque ou une amine primaire comme décrit dans le brevet FR 2,801,226 (Touraud, F. ; et al.) et les références citées par ce brevet.
[000277] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide aspartique en utilisant comme initiateur l'hexaméthyidisilazane comme décrit dands la publication J. Am. Chem. Soc, 2007, 129, 14114-14115 (Lu H. ; et al.) ou une amine silylée comme décrit dans la publication J. Am. Chem. Soc. 2008, 130, 12562-12563 (Lu H. ; et ai.).
[000278] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le procède de synthèse du polyaminoacide obtenu par polymérisation d'un dérivé de N-carboxyanhydride d'acide glutamique ou d'un dérivé de
N-carboxyanhydride d'acide aspartique dont est issu le co-polyaminoacide comprend une étape d'hydrolyse de fonctions ester.
[000279] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de fonctions ester peut consister en une hydrolyse en milieu acide ou une hydrolyse en milieu basique ou être effectuée par hydrogénation.
[000280] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de groupements ester est une hydrolyse en milieu acide.
[000281] Dans un mode de réalisation, cette étape d'hydrolyse de groupements ester est effectuée par hydrogénation.
Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire.
fWGêWJ- Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation enzymatique d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire.
Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d’un polyaminoacide obtenu par dépolymérisation chimique d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire.
[WG2-&64 Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépoiymérisation enzymatique et chimique d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire.
Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépoiymérisation d'un polyaminoacide de plus haut poids moléculaire choisi dans le groupe constitué par le polyglutamate de sodium et le polyaspartate de sodium.
Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d’un polyaminoacide obtenu par dépoiymérisation d’un polyglutamate de sodium de plus haut poids moléculaire.
[000289] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est issu d'un polyaminoacide obtenu par dépoiymérisation d'un, polyaspartate de sodium de plus haut poids moléculaire.
[000290] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que ie co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide en utilisant les procédés de formation de liaison amide bien connus de l'homme de l'art.
[000291] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide en utilisant les procédés de formation de liaison amide utilisés pour la synthèse peptidique.
[000292] Dans un mode de réalisation, la composition selon l'invention est caractérisée en ce que le co-polyaminoacide est obtenu par greffage d'un groupe hydrophobe sur un poly-L-glutamique acide ou poly-L-aspartique acide comme décrit dans le brevet FR 2,840,614 (Chan, Y.P. ; et al.).
[000293] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 40 mg/mL. [000294] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 30 mg/mL. [000295] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 20 mg/mL [000296] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 10 mg/mL. [000297] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 5 mg/mL.
[000298] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 2,5 mg/mL. [000299] Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 1 mg/mL.
Dans un mode de réalisation, la concentration en co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est au plus de 0,5 mg/mL.
[000300] L’amyline, ou polypeptide amyloïde d'îlot (IAPP), est une hormone peptidique à 37 résidus. Elle est co-sécrétée avec de l'insuline à partir des cellules béta pancréatiques dans le rapport d'environ 100:1. L’amyline joue un rôle dans la régulation glycémique en stoppant la sécrétion du glucagon endogène et en ralentissant la vidange gastrique et en favorisant la satiété, réduisant ainsi les excursions glycémiques postprandiales dans les niveaux de glucose sanguin.
[000301] L'IAPP est traité à partir d'une séquence codante de 89 résidus. Le polypeptide amyloïde Proislet (proIAPP, proamyiine, protéine proislet) est produit dans les cellules bêta pancréatiques (cellules béta) sous la forme d'un pra-peptide deRSO 67 acides aminés, 7404 Dalton, et subit des modifications post-traductionnelles comprenant le clivage de protéase pour produire de l'amyline.
[000302] Dans la présente demande, l'amyline telle que mentionnée fait référence aux composés décrits dans les brevets US 5,124,314 et US 5,234,906.
[000303] On entend par « analogue », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine, dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs de la séquence primaire ont été substitués par d'autres résidus d'acides aminés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été supprimés et/ou dans lequel un ou plusieurs résidus d'acides aminés constitutifs ont été ajoutés. Le pourcentage d'homologie admis pour la présente définition d'un analogue est de 50 %. Dans le cas de l'amyline, un analogue peut être par exemple dérivé de la séquence d'acide aminé primaire de l’amyline en substituant un ou plusieurs acides aminés naturels ou non naturels ou peptidomimétiques.
[000304] On entend par « dérivé », lorsqu'il est utilisé par référence à un peptide ou une protéine, un peptide ou une protéine ou un analogue chimiquement modifié par un substituant qui n’est pas présent dans le peptide ou la protéine ou l'analogue de référence, c'est-à-dire un peptide ou une protéine qui a été modifié par création de liaisons covalentes, pour introduire des substituants de type non amino-acide.
[000305] Un agoniste au récepteur de l'amyline fait référence à un composé qui imite une ou plusieurs caractéristiques de l'activité de l'amyline, [000306] Des dérivés d'amyline sont décrits dans l'article Yan et al., PNAS, vol. 103, no 7, p 2046-2051, 2006.
[000307] Dans un mode de réalisation, le substituant est choisi dans le groupe constitué des chaînes grasses.
[0003081 Des analogues d'amyline sont décrits dans les brevets US 5,686,411, US 6,114,304 ou bien encore US 6,410,511. Dans un mode de réalisation l'amyline, agoniste au récepteur de l’amyline ou analogue d'amyline est l'amyline.
[000309] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que l'analogue d'amyline est le pramlintide (Symlin®) commercialisé par la société ASTRAZENECA AB.
[000310] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d’amyline sont compris entre
1,5 et 75.
[000311] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,8 et 50.
[000312] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 35.
[000313] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
2.5 et 30.
[000314] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 30.
[000315] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre
3.5 et 30, [000316] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 30.
[000317] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre et 30.
[000318] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 7 et 30.
[000319] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 9 et 30. Dans un mode de réalisation le ratio molaire co-pelyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l’amyline ou analogue d'amyline est supérieur ou égal à 1, [000320] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 3 et 75.
[000321] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 7 et 50.
[000322] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 10 et 30.
[000323] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline sont compris entre 15 et 30.
[000324] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,5 et 75.
[000325] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 2 et 50.
[000326] Dans un mode de realisation, pramlintide sont compris entre 3 et 30.
[000327] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 4 et 30.
[000328] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 5 et 30.
[000329] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 8 et 30.
[000330] Dans un mode de réaiisation, pramlintide sont compris entre 10 et 30.
les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ les ratios molaires co-polyaminoacide/ [000331] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyiine sont compris entre
1.5 et 150.
[000332] Dans un mode de réalisation, les ratios moiaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d’amyiine sont compris entre 1,8 et 100.
[000333] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyiine sont compris entre et 70.
[000334] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline. agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyiine sont compris entre
2.5 et 60.
[000335] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyiine sont compris entre et 60.
[000336] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyiine sont compris entre
3.5 et 60.
[000337] Dans un mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyiine sont compris entre et 60.
[000338] Dans amyline, agoniste 5 et 60.
un au mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre [000339] Dans amyline, agoniste 7 et 60.
un au mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre [000340] Dans amyline, agoniste 9 et 60.
un au mode de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / récepteur de l’amyline ou analogue d'amyline sont compris entre [000341] Dans amyline sont compris un mode entre de réalisation, et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / mode [000342] Dans un amyline sont compris entre de réalisation, et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000343] Dans un mode amyline sont compris entre de réalisation, et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000344] Dans un mode pramiintide sont compris entre 1,5 et 60.
de réalisation, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000345] Dans un mode de réalisation, pramiintide sont compris entre 2 et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000346] Dans un mode de réalisation, pramiintide sont compris entre 3 et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000347] Dans un mode de réalisation, pramiintide sont compris entre 4 et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000348] Dans un mode de réalisation, pramiintide sont compris entre 5 et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000349] Dans un mode de réalisation, pramiintide sont compris entre 8 et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000350] Dans un mode de réalisation, pramiintide sont compris entre 10 et 60.
les ratios molaires radical hydrophobe Hy / [000351] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,0 et 70.
[000352] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,2 et 45.
[000353] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,3 et 30.
[000354] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,7 et 27.
[000355] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l’amyline ou analogue d’amyline sont compris entre 2,0 et 27.
[000356] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2,3 et 27.
[000357] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2,7 et 27.
[000358] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l’amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3,3 et 27.
[000359] Dans un mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d’amyline sont compris entre 4,7 et 27.
[000360] Dans uns mode de réalisation, les ratios massiques copolyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 6,0 et 27.
| [000361] Dans un mode de réalisation, | les | ratios | massiques | co- |
| polyaminoacide/amyline sont compris entre 2,0 et 67. | ||||
| [000362] Dans un mode de réalisation, polyaminoacide/amyline sont compris entre 4,7 et 27. | les | ratios | massiques | co- |
| [000363] Dans un mode de réalisation, polyaminoacide/amyline sont compris entre 6,7 et 27. | les | ratios | massiques | co- |
| [000364] Dans un mode de réalisation, polyaminoacide/amyline sont compris entre 10 et 27. | les | ratios | massiques | co- |
[000365] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 1,0 et 67.
[000366] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 1,3 et 45.
[000367] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 2,7 et 27.
[000368] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 3,3 et 27.
[000369] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 5,3 et 27.
[000370] Dans un mode de réalisation, pramlintide sont compris entre 6,7 et 27.
[000371] Dans un mode de réalisation, la comprend en outre de l'insuline.
les ratios massiques co-polyaminoacide/ les ratios massiques co-polyaminoacide/ les ratios massiques co-polyaminoacide/ les ratios massiques co-polyaminoacide/ les ratios massiques co-polyaminoacide/ les ratios massiques co-poiyaminoacide/ composition est caractérisée en ce qu'elle [000372] Dans un mode de réalisation, la composition est caractérisée en ce que l'insuline est une insuline prandiale. Les insulines prandiales sont solubles à pH 7.
[000373] On entend par insuline prandiale une insuline dite rapide ou « regular ». [000374] Les insulines prandiales dites rapides sont des insulines qui doivent répondre aux besoins provoqués par l'ingestion des protéines et des glucides durant un repas, elles doivent agir en moins de 30 minutes.
[000375] Dans un mode de réalisation, l’insuline prandiale dite « regular » est de l'insuline humaine.
[000376] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est une insuline humaine recombinante telle que décrite dans la Pharmacopée Européenne et la Pharmacopée américaine.
[000377] L'insuline humaine est par exemple commercialisée sous les marques Humulin® (ELI LILLY) et Novolin® (NOVO NORDISK).
[000378] Les insulines prandiales dites rapides (fast acting) sont des insulines qui sont obtenues par recombinaison et dont ia séquence primaire a été modifiée pour diminuer leur temps d'action.
[000379] Dans un mode de réalisation, les insulines prandiales dites rapides (fast acting) sont choisies dans le groupe comprenant l'insuline lispro (Humalog®), l'insuline glulisine (Apidra®) et l’insuline aspart (NovoLog®).
[000380] Dans un mode de réalisation, l’insuline prandiale est l'insuline lispro.
[000381] Dans un mode de réalisation, l'insuline prandiale est l'insuline glulisine.
[000382] Dans un mode de réalisation, l’insuline prandiale est l'insuline aspart.
[000383] Les unités recommandées par les pharmacopées pour les insulines sont présentées dans le tableau 40 ci-après avec leurs correspondances en mg :
[jnsuîinej......Pharmacopée.ÉP 8.,0,(2014) j Pharmacopée US - USP38 (iÔÏS)J
[.Asparti 1U - 0,0350 mgj'insuhneasp1 | [Lispro,________|...l 0..-..¾ Q3.47.mg. d 'ίn s u î i n e j i sp ro.....[,ÎÛSP,= 0,0347 fflg:dfinsuiine iispro i j Humaine i 1UI ~ 0,0347 mg d'insuline [ ï USP - 0,0347 mg d'insuline ; î.............................i humaine____________________________________________________________________[.humaine............................................................................j
Tableau 40 : Unités recommandées par les pharmacopées pour les insulines [000384] Dans le cas de l’insuline glulisine, 100U = 3,49 mg d'insuline glulisine (d'après Annex 1 - Summary of product characteristics relative à ADIPRA®).
[000385] Néanmoins dans la suite du texte U est systématiquement utilisé indifféremment pour les quantités et les concentrations en toutes les insulines, Les valeurs respectives correspondant en mg sont celles données ci-dessus pour des valeurs exprimées en U, LJI ou USP, Dans un mode de réalisation le ratio molaire copolyaminoacide/insuüne est supérieur ou égal à 1.
[000386] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 240 et 3000 pM (40 à 500 U/mL).
[000387] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 3000 μΜ (100 à 500 U/mL).
[000388] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 2400 μΜ (100 à 400 U/mL).
[000389] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 1800 μΜ (iQO à 300 U/mL).
[000390] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est comprise entre 600 et 1200 μΜ (100 à 200 U/mL).
| [000391] | Dans | un | mode | de | réalisation, | elle | concerne une | formulation |
| pharmaceutique caractérisée en | ce | que la concentration | en insuline est | 600 μΜ (100 | ||||
| U/mL). | ||||||||
| [000392] | Dans | un | mode | de | réalisation, | elle | concerne une | formulation |
pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 1200 μΜ (200 U/mL).
[000393] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 1800 μΜ (300 U/mL).
[000394] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que la concentration en insuline est 2400 μΜ (400 U/mL), [000395] Dans un mode de réalisation, elle concerne une formulation pharmaceutique caractérisée en ce que ia concentration en insuline est 3000 μΜ (500 U/mL).
[000396] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,5 et 75.
[000397] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 1,8 et 50.
[Ό00398] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2 et 35.
[000399] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d’amyline sont compris entre 2,5 et 30.
[000400] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3 et 30.
[000401] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3,5 et 30.
[000402] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 4 et 30.
[000403] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, ies ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 5 et 30.
[000404] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 7 et 30.
[000405] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyiine, agoniste au récepteur de I’amyiine ou analogue d'amyline sont compris entre 9 et 30.
[000406] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyiine sont compris entre 5 et 75.
[000407] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyiine sont compris entre 10 et 50.
[000408] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ amyiine sont compris entre 15 et 30.
[000409] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,5 et 75.
[000410] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 2 et 50.
[000411] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 3 et 30.
[000412] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 4 et 30.
[000413] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 5 et 30, [000414] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 8 et 30.
[000415] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 10 et 30.
[000416] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy/ amyiine, agoniste au récepteur de I'amyiine ou analogue d'amyline sont compris entre 1,5 et 150.
[000417] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyiine, agoniste au récepteur de I'amyiine ou analogue d'amyline sont compris entre 1,8 et 100.
[000418] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyiine, agoniste au récepteur de I'amyiine ou analogue d'amyline sont compris entre 2 et 70.
[000419] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 2,5 et 60.
[000420] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l’amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3 et 60.
[000421] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 3,5 et 60.
[000422] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l’amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 4 et 60.
[000423] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 5 et 60.
[000424] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 7 et 60.
[000425] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline sont compris entre 9 et 60.
[000426] Dans un mode de réaiisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline sont compris entre 5 et 60.
[00042.7] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radicai hydrophobe Hy / amyline sont compris entre 10 et 60.
[000428] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / amyline sont compris entre 15 et 60.
[000429] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 1,5 et 60.
[000430] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre ?.. et 60.
[000431] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 3 et 60.
[000432] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramlintide sont compris entre 4 et 60.
[000433] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramiintide sont compris entre 5 et 60.
[000434] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramiintide sont compris entre 8 et 60.
[000435] Dans un mode de réalisation comprenant de i'insuiine prandiale, les ratios molaires radical hydrophobe Hy / pramiintide sont compris entre 10 et 60.
[000436] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 1,0 et 70.
[000437] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 1,2 et 45.
[000438] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 1,3 et 30.
[000439] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 1,7 et 27.
[000440] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d’arnyline sont compris entre 2,0 et 27.
[000441] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 2,3 et 27.
[000442] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 2,7 et 27.
[000443] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 3,3 et 27.
[000444] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline sont compris entre 4,7 et 27.
[000445] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyiine sont compris entre 6,0 et 27.
[000446] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline sont compris entre 3,3 et 67.
[000447] Dans un mode de réalisation comprenant de l’insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline sont compris entre 6,6 et 27.
[000448] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/amyline sont compris entre 10 et 27.
[000449] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,0 et 67.
[000450] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,2 et 45.
[000451] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,3 et 27.
[000452] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 1,7 et 27.
[000453] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 2,0 et 27.
[000454] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 2,3 et 27.
[000455] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 2,7 et 27.
[000456] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 3,3 et 27.
[000457] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 4,7 et 27.
[000458] Dans un mode de réalisation comprenant de l'insuline prandiale, les ratios massiques co-polyaminoacide/ pramlintide sont compris entre 6,0 et 27.
[000459] Par ailleurs, il est particulièrement intéressant de combiner l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyiine, en combinaison ou non avec une insuline prandiale, avec des GLP-1, des analogues de GLP-1, des agonistes de récepteurs au GLP-1, ceux-ci sont couramment appelés GLP-1 RA. Cela permet notamment de potentialiser l'effet de l'insuline et est recommandé dans certains types de traitement du diabète.
[000460] Dans un mode de réalisation, les GLP-1, analogues de GLP-1, ou GLP-1 RA sont dits « rapides ». On entend par « rapide », des GL.P-1, analogues de GLP-1, ou GLP-1 RA, dont la demi-vie apparente d'élimination après injection sous-cutanée chez l'homme est inférieure 8 heures, en particulier inférieure à 5 heures, de préférence inférieure à 4 heures ou bien encore inférieure à 3 heures, comme par exemple l'exenatide et le lixisenatide.
[000461] Dans un mode de réalisation, les GLP-1, les analogues de GLP-1, ou les GLP-1 RA sont choisis dans ie groupe constitué par l'exenatide ou Byetta®(ASTRAZENECA), le lixisenatide ou Lyxumia® (SANOFI), leurs analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[000462] Dans un mode de réalisation, ie GLP-1, analogue de GLP-1, ou GLP-1 RA est l'exenatide ou Byetta®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[000463] Dans un mode de réalisation, GLP-1, analogue de GLP-1, ou GLP-1 RA est le lixisenatide ou Lyxumia®, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables.
[000464] Dans un mode de réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1,0 mg pour 100 U d'insuline.
[000465] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.
[000466] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.
[000467] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour 100 U d'insuline.
[000468] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,2 mg pour 100 U d'insuline.
[000469] Dans un mode réalisation, la concentration en exenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,15 mg pour 100 U d'insuline.
[000470] Dans un mode de réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est comprise dans un intervalle de 0,01 à 1 mg pour 100 U d'insuline.
[000471] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,01 à 0,5 mg pour 100 U d'insuline.
[000472] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,02 à 0,4 mg pour 100 U d'insuline.
[000473] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,03 à 0,3 mg pour 100 U d'insuline.
[000474] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de 0,04 à 0,2 mg pour 100 U d'insuline.
[000475] Dans un mode réalisation, la concentration en lixisenatide, ses analogues ou dérivés et leurs sels pharmaceutiquement acceptables est de de 0,04 à 0,15 mg pour 100 U d'insuline.
[000476] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention sont réalisées par mélange de solutions d'amyline et de solutions commerciales de GLP-1, d'analogue de GLP-1 ou de d'agoniste de récepteurs de GLP-1 RA en ratios volumiques compris dans un intervalle de 10/90 à 90/10 en présence d'un co-polyaminoacide.
[000477] L'invention concerne également des compositions qui comprennent en outre des espèces Ioniques, lesdites espèces ioniques permettant d'améliorer la stabilité des compositions.
[000478] Dans un mode de réalisation les espèces ioniques comprennent moins de 10 atomes de carbone.
[000479] Lesdites espèces ioniques sont choisies dans le groupe des anions, des cations et/ou zwitterions. Par zwitterion, on entend une espèce portant au moins une charge positive et au moins une charge négative sur deux atomes non adjacents, [000480] Lesdites espèces ioniques sont utilisées seules ou en mélange et de préférence en mélange.
[000481] Dans un mode de réalisation, les anions sont choisis parmi les anions organiques.
[000482] Dans un mode de réalisation les anions organiques comprennent moins de 1.0 atomes de carbone.
[000483] Dans un mode de réalisation, les anions organiques sont choisis dans le groupe constitué par l'acétate, le citrate et le succinate [000484] Dans un mode de réalisation, les anions sont choisis parmi les anions d'origine minérale.
[000485] Dans un mode de réalisation, les anions d'origine minérale sont choisis dans le groupe constitué par les sulfates, les phosphates et les halogénures, notamment les chlorures.
[000486] Dans un mode de réalisation, les cations sont choisis parmi les cations organiques.
[000487] Dans un mode de réalisation les cations organiques comprennent moins de 10 atomes de carbone.
[000488] Dans un mode de réalisation, les cations organiques sont choisis dans le groupe constitué par les ammoniums, par exemple le 2-Amino-2(hydroxyméthyl)propane-l,3-diol où l'amine est sous forme d'ammonium.
[000489] Dans un mode de réalisation, les cations sont choisis parmi les cations d'origine minérale.
[000490] Dans un mode de réalisation, les cations d'origine minérale sont choisis dans le groupe constitué par le zinc, en particulier Zn2+ et les métaux alcalins, en particulier Na+ et K+, [000491] Dans un mode de réalisation, les zwitterions sont choisis parmi les zwitterions d'origine organique.
[000492] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d'origine organique sont choisis parmi les aminoacides.
[000493] Dans un mode de réalisation les aminoacides sont choisis parmi les aminoacides aliphatiques dans le groupe constitué par la glycine, l'alanine, la valine, l'Isoleucine et la leucine.
[000494] Dans un mode de réalisation les aminoacides sont choisis parmi les aminoacides cycliques dans le groupe constitué par la proline.
[000495] Dans un mode de réalisation les aminoacides sont choisis parmi les aminoacides hydroxylés ou soufrés dans le groupe constitué par la cystéine, la sérine, la thréonine, et la méthionine.
[000496] Dans un mode de réalisation les aminoacides sont choisis parmi les aminoacides aromatiques dans le groupe constitue: par la phénylalanine, la tyrosine et le tryptophane.
[000497] Dans un mode de réalisation les aminoacides sont choisis parmi les aminoacides dont, la fonction carboxyle de ia chaîne latérale est amidifiée dans le groupe constitué par l'asparagine et la glutamine.
[000498] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d'origine organique sont choisis dans le groupe constitué par les aminoacides ayant une chaîne latérale non chargée.
[000499] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d'origine organique sont choisis dans le groupe constitué par les aminodiacides ou acides aminés acides.
[000500] Dans un mode de réalisation, les aminodiacides sont choisis dans le groupe constitué par l'acide glutamique et l’acide aspartique, éventuellement sous forme de sels.
[000501] Dans un mode de réalisation, les zwitterions d'origine organique sont choisis dans le groupe constitué par les acides aminés basiques ou dits « cationiques ». [000502] Dans un mode de réalisation les aminoacides dits « cationiques » sont choisis parmi l'arginine, l'histidine et la lysine, en particulier arginine et lysine.
[000503] Tout particulièrement les zwitterions comprennent autant de charges négatives que de charges positives et donc une charge globale nulle au point isoélectrique et/ou à un pH compris entre 6 et 8.
[000504] Lesdites espèces ioniques sont introduites dans les compositions sous forme de sels. L'introduction de ceux-ci peut se faire sous forme solide avant mise en solution dans les compositions, ou sous forme de solution, en particulier de solution concentrée.
[000505] Par exemple, les cations d'origine minérale sont apportés sous forme de sels choisis parmi le chlorure de sodium, le chlorure de zinc, le phosphate de sodium, le sulfate de sodium, etc.
[000506] Par exemples, les anions d'origine organique sont apportés sous forme des sels choisis parmi le citrate de sodium ou de potassium, l'acétate de sodium.
[000507] Par exemple, les acides aminés sont ajoutés sous forme de sels choisis parmi le chlorhydrate d'arginine, le chlorhydrate d'histidine ou sous forme non salifiée comme par exemple l’histidine, l’arginine.
ί
J j
ί [000508] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égaie à 10 mM.
[000509] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans ia composition est supérieure ou égaie à 20 mM.
[000510] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égaie à 30 mM.
[000511] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 50 mM.
[000512] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 75 mM.
[000513] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égaie à 100 mM.
[000514] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 200 mM.
[000515] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 300 mM.
[000516] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 500 mM.
[000517] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 600 mM.
[000518] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égaie à 700 mM.
[000519] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égaie à 800 mM.
[000520] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est supérieure ou égale à 900 mM.
[000521] Dans un mode de réalisation, ia concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est inférieure ou égale à 1000 mM.
[000522] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est inférieure ou égaie à 1500 mM.
[000523] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est inférieure ou égaie à 1200 mM.
[000524] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est inférieure ou égale à 1000 mM.
[000525] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000526] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000527] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000528] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [Ό00529] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000530] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000531] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000532] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou [000533] Dans un mode de réalisation, la ioniques dans la composition est inférieure ou concentration molaire totale en espèces égale à 900 mM.
concentration molaire totale en espèces égale à 800 mM.
concentration molaire totale en espèces égale à 700 mM.
concentration molaire totale en espèces égale à 600 mM.
concentration molaire totale en espèces égale à 500 mM, concentration molaire totale en espèces égale à 400 mM.
concentration molaire totale en espèces égale à 300 mM.
concentration molaire totale en espèces égale à 200 mM.
concentration molaire totale en espèces égale à 100 mM.
[000534] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 1000 mM.
[000535] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 1000 mM.
[000536] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 1000 mM, [000537] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 1000 mM.
[000538] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 1000 mM.
[000539] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 1000 mM.
[000540] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 1000 mM.
[000541] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 1000 mM.
[000542] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 1000 mM.
[000543] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 1000 mM.
[000544] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 1000 mM.
[000545] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 900 mM.
[000546] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 900 mM.
[000547] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 900 mM.
[000548] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 900 mM.
[000549] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 900 mM.
[000550] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 900 mM.
[Ό00551] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 900 mM.
[000552] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 900 mM.
[000553] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 900 mM.
[000554] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 900 mM.
[000555] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 900 mM.
[000556] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 900 mM.
[000557] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 800 mM.
[000558] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 800 mM.
[000559] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans ia composition est comprise entre 50 et 800 mM.
[000560] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 800 mM.
[000561] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 800 mM.
[000562] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 800 mM.
[000563] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 800 mM.
[000564] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 800 mM.
[000565] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 800 mM.
[000566] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 800 mM.
[000567] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 700 mM.
[000568] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 700 mM.
[000569] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 700 mM.
[000570] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 700 mM.
[000571] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 700 mM.
[000572] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 700 mM.
[000573] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 700 mM.
[000574] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 700 mM.
[000575] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 700 mM.
[000576] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 700 mM.
[000577] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 600 et 700 mM.
[000578] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 600 mM.
[000579] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 600 mM.
[000580] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 600 mM.
[000581] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 600 mM.
[000582] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 600 mM.
[000583] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 600 mM.
[000584] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 600 mM.
[000585] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 600 mM.
[000586] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 600 mM.
[000587] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 500 et 600 mM.
[000588] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 500 mM.
[000589] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 500 mM.
[000590] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et. 500 mM.
[000591] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 500 mM.
[000592] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 500 mM.
[000593] Dans un mode de réalisation, ia concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 500 mM.
[000594] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 500 mM.
[000595] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 500 mM.
[000596] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 400 et 500 mM.
[000597] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 400 mM.
[000598] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 400 mM.
[000599] Dans un mode de réalisation, ia concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 400 mM.
[000600] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 400 mM.
[000601] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 400 mM.
[000602] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 400 mM.
[000603] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 400 mM.
[000604] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 300 et 400 mM.
[000605] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 300 mM.
[000606] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 300 mM.
[000607] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 300 mM.
[000608] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans ia composition est comprise entre 50 et 300 mM.
[000609] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 300 mM.
[000610] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 300 mM.
[000611] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 200 et 300 mM.
[000612] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totaie en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 200 mM.
[000613] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 200 mM.
[000614] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 200 mM.
[000615] Dans un mode de réalisation, !a concentration molaire totaie en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 200 mM.
[000616] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totaie en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 200 mM.
[000617] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 100 et 200 mM.
[000618] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totaie en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 100 mM.
[000619] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totaie en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 100 mM.
[000620] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 100 mM.
[000621] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 100 mM.
[000622] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 75 et 100 mM.
[000623] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 75 mM.
[000624] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans ia composition est comprise entre 20 et 75 mM.
[000625] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 75 mM.
[000626] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 50 et 75 mM.
[000627] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces Ioniques dans la composition est comprise entre 10 et 50 mM.
[000628] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 20 et 50 mM.
[000629] Dans un mode de réalisation, la concentration molaire totale en espèces ioniques dans la composition est comprise entre 30 et 50 mM.
[000630] Dans un mode de réalisation, iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 400 mM.
[000631] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 300 mM, [000632] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 200 mM.
[000633] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 100 mM.
[000634] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 75 mM.
[000635] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 50 mM.
[000636] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 25 mM.
[000637] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 20 mM.
[000638] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 5 à 10 mM.
[000639] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 400 mM.
[000640] Dans un mode de réalisation, Iesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 300 mM.
[000641] Dans un mode de réalisation, une concentration allant de 10 à 200 mM.
[000642] Dans un mode de réalisation, une concentration allant de 10 à 100 mM, [000643] Dans un mode de réalisation, une concentration allant de 10 à 75 mM.
Iesdites espèces ioniques sont présentes en
Iesdites espèces ioniques sont présentes en
Iesdites espèces ioniques sont présentes en [000644] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 50 mM.
[000645] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 25 mM, [000646] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 10 à 20 mM.
[000647] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 300 mM.
[000648] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 200 mM.
[000649] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 100 mM.
[000650] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 75 mM.
[000651] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 50 mM.
[000652] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 20 à 25 mM.
[000653] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 50 à 300 mM.
[000654] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 50 à 200 mM.
[000655] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration aliant de 50 à 100 mM.
[000656] Dans un mode de réalisation, lesdites espèces ioniques sont présentes en une concentration allant de 50 à 75 mM.
[000657] S'agissant des cations d'origine minérale et en particulier de Zn2+, sa concentration molaire au sein de la composition peut être comprise entre 0,25 et 20 mM, en particulier entre 0,25 et 10 mM ou entre 0,25 et 5 mM.
[000658] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 500 pM pour 100 U d'insuline.
[000659] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 400 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000660] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 300 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000561] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 200 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000662] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des sels de zinc à une concentration comprise entre 0 et 100 μΜ pour 100 U d'insuline.
[000663] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des tampons.
[000664] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 0 et 100 mM.
[000665] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent des tampons à des concentrations comprises entre 15 et 50 mM.
[000666] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent un tampon choisi dans le groupe constitué par un tampon phosphate, le Tris (trishydroxyméthylaminométhane) et le citrate de sodium.
[000667] Dans un mode de réalisation, le tampon est le phosphate de sodium.
[000668] Dans un mode de réalisation, le tampon est le Tris (trishydroxyméthylaminométhane).
[000669] Dans un mode de réalisation, le tampon est le citrate de sodium.
[000670] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre des conservateurs.
[000671] Dans un mode de réalisation, les conservateurs sont choisis dans le groupe constitué par le m-crésol et le phénol, seuls ou en mélange.
[000672] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 50 mM.
[000673] Dans un mode de réalisation, la concentration des conservateurs est comprise entre 10 et 40 mM.
[000674] Dans un mode de réalisation, les compositions selon l'invention comprennent en outre un tensioactif.
[000675] Dans un mode de réalisation, le tensioactif est choisi dans ie groupe constitué par le propylène glycol et le polysorbate.
[000676] Les compositions selon l'invention peuvent en outre comprendre des additifs tels que des agents de tonicité.
[000677] Dans un mode de réalisation, les agents de tonicité sont choisis dans le groupe constitué par la glycérine, le chlorure de sodium, le mannitol et la glycine.
[000678] Les compositions selon l'invention peuvent comprendre en outre tous les excipients conformes aux pharmacopées et compatibles avec les insulines utilisées aux concentrations d'usage.
[000679] L'invention concerne également une formulation pharmaceutique selon l'invention, caractérisée en ce qu'elle est obtenue par séchage et/ou lyophilisation.
[000680] Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique ou intramusculaire. [000681] Les voles d'administration transdermique, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire sont également envisagées.
[000682] L’invention concerne également une pompe, implantable ou transportable, comprenant une composition selon l'invention.
[000683] L'invention concerne encore l'utilisation d'une composition selon l'invention destinée à être placée dans une pompe, implantable ou transportable.
[000684] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,0 et 8,0 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'arnyline et un co-polyaminoacide selon l'invention.
[000685] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,0 et 8,0 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'arnyline, un co-polyaminoacide selon l'invention et un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un GLP-1 RA, tel que définie précédemment, [000686] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'arnyline et un co-polyaminoacide selon l'invention.
[000687] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,8 comprenant de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'arnyline, un co-polyaminoacide selon l'invention et une insuline prandiale, telle que définie précédemment.
[000688] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,6 et 7,6 comprenant de l’amyline, un agoniste au récepteur de i'amyiine ou un j analogue d'amyline et un co-polyaminoacide selon l'invention.
j [000689] L'invention concerne également des formulations unidoses à pH compris entre 6,5 et 7,6 comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un [ analogue d'amyline, un co-polyaminoacide selon l'invention et une insuline prandiale, telle que définie précédemment.
[000690] Dans un mode de réalisation, les formulations unidoses comprennent en outre un co-polyaminoacide tel que défini précédemment.
i j [000691] Dans un mode de réalisation, les formulations sont sous forme d'une solution injectable.
[000692] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse de I'amyiine, d'un agoniste au récepteur de I'amyiine ou d'un analogue d'amyline, et d'un coj polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.
I [000693] La préparation d'une composition selon l'invention présente l'avantage de pouvoir être réalisée par simple mélange d'une solution aqueuse de I'amyiine, d'un t agoniste au récepteur de I'amyiine ou d'un analogue d'amyline, d'insuline prandiale, et r d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et d'au moins un radical i hydrophobe selon l'invention, en solution aqueuse ou sous forme lyophilisée. Si
I nécessaire, le pH de ia préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.
[000694] Dans un mode de réalisation, le mélange d'insuline prandiale et de copolyaminoacide est concentré par ultrafiltration.
[000695] Si nécessaire, la composition du mélange est ajustée en excipients tels que glycérine, m-crésol, chlorure de zinc, et polysorbate (Tween®) par ajout de solutions !
[ concentrées de ces excipients au sein du mélange. Si nécessaire, le pH de la préparation est ajusté à pH compris entre 6 et 8.
[000696] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que r lesdites compositions présentent une stabilité mesurée parThT supérieure à celle d'une [
composition de référence comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de i'amyiine ou un analogue d'amyline mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000697] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un analogue d'amyline en combinaison avec une insuline mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000698] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un analogue d'amyline en combinaison avec un GLP-1, un analogue de GLP1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1, mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000699] Dans un mode de réalisation, les compositions sont caractérisées en ce que lesdites compositions présentent une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle d'une composition de référence comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un analogue d'amyline en combinaison avec une insuline et un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1, mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
[000700] L'invention concerne également une utilisation d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy pour stabiliser une composition comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de i'amyiine ou un analogue d'amyline.
[000701] L'invention concerne également une utilisation d'un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy pour stabiliser une composition comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un analogue d'amyline et une insuline prandiale, et éventuellement un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP-1.
[000702] L'invention concerne une méthode de stabilisation de composition comprenant de I'amyiine, un agoniste au récepteur de I'amyiine ou un analogue d’amyline ou une méthode de stabilisation de composition comprenant de I’amyiine, un agoniste au récepteur de I’amyiine ou un analogue d’amyline et une insuline prandiale, et éventuellement un GLP-1, un analogue de GLP-1 ou un agoniste de récepteur de GLP1.
Description des figures
HQure..lj.
[000703] Sur cette figure est représentée de façon graphique la détermination du temps de latence (LT) par suivi de la fluorescence de la Thioflavine T, sur une courbe ayant en ordonnées ia valeur de la fluorescence (en u.a. unités arbitraires) et en abscisses le temps en minutes.
[000704] Sont présentés à la Figure 2 les résultats de pharmacocinétique du pramlintide obtenus avec les compositions décrites dans les exemples CA1/CA2 et CA3. L'analyse de ces profils indique que la composition de l'exemple CA3 comprenant le copolyaminoacide BB15, 100 UI/mL d’insuline et 0,6 mg/mL de pramlintide (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple CA3) permet d'obtenir une absorption du pramlintide plus lente que celle de la composition de l'exemple en double injection comprenant uniquement du pramlintide et de l'insuline (courbe tracée avec les triangles correspondant à l’exemple double injection CA1/CA2).
[000705] Sont présentés à la Figure 3 les résultats de pharmacocinétique du pramlintide obtenus avec les compositions décrites dans les exemples CA1/CA2 et CA4. L'analyse de ces profils indique que la composition de l'exemple CA4 comprenant le copolyaminoacide AB24, 100 UI/mL d'insuline et 0,6 pg/mL de pramlintide (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple CA4) permet d'obtenir une absorption du pramlintide plus lente que celle de la composition de l’exemple en double injection comprenant uniquement du pramlintide et de l'insuline (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple double injection CA1/CA2).
[000706] Les exemples suivants illustrent, de manière non-limitative, l’invention.
Partie A
AA : Synthèse des composés intermédiaires hydrophobes Hy permettant d'obtenir les radicaux -Hy dans lesquelles p = 1 [000707] Les composés intermédiaires hydrophobes sont représentés dans le tableau suivant par la molécule hydrophobe correspondante avant greffage sur le copolyaminoacide.
| AA14 | . rÎi ; “ j m p |
| AA15 : | O C’5H31 H.N, .n , χ O ,NH ,,χ A M O' ' ' 'n- Mh ’-j k i; & |
| AA16 | I ÎX ‘ 'i, ,, . <··^ i |
| AA17 | C H Ο Χ^--·Η5Π31 NH J J h2n Ί] NH V \ i 0 |
Tableau ΙΑ : liste et structures des molécules hydrophobes synthétisées selon l'invention.
Exempte AAI : molécule AAI
MoÎéey|e<Al; ; Produit obtenu par la réaction entre le chlorure de palmitoyle et la Lproline.
[000708] À une solution de L-proline (10,6 g, 92,1 mmol) dans de la soude aqueuse 1 [000709] N (230 mL ; 230 mmol) est ajoutée goutte-à-goutte pendant 90 min une solution de chlorure de palmitoyle (23,0 g, 83,7 mmol) dans l'acétone (167 mL). Après 14 h d'agitation à température ambiante, le mélange hétérogène est refroidi à 0 °C, puis filtré sur fritté pour donner un solide blanc qui est lavé avec de l'eau (2 x 100 mL) puis du diisopropyléther (100 mL). Le solide est séché sous pression réduite. Le solide est alors dissout à reflux dans 200 mL d'eau puis 8 mL d'une solution d'acide chlorhydrique à 37 % sont ajoutés pour obtenir un pH = 1. Le milieu réactionnel opalescent est alors refroidi à 0 °C. Le précipité obtenu est filtré sur fritté puis lavé avec de l'eau (5 x 50 mL) jusqu'à obtenir des filtrats de pH physiologique compris entre 6,0 et 8,0 pour être ensuite séché dans une étuve à 50 °C sous vide pendant une nuit. Le produit est purifié par recristallisation dans le diisopropyléther. Un solide blanc est obtenu.
Rendement : 22,7 g (77 %).
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,19-1,45 (24H) ; 1,58-1,74 (2H) ; 1,88-2,14 (3H) ; 2,15-2,54 (3H) ; 3,47 (1H) ; 3,58 (1H) ; 4,41 (O,1H) ; 4,61 (0,9H) 6,60-8,60 (1H).
Mole.r île A2 : Produit obtenu par réaction entre ia molécule Al et la W-Bocéthyiènediamine.
[000710] À une solution de molécule Al (75,1 g, 212,4 mmol) dans 1500 mL de chloroforme sont ajoutés successivement et à température ambiante de la N,N~ diisopropyléthylamine (DIPEA) (68,8 g, 532,3 mmol), du 1-hydroxybenzotriazole (HOBt) (37,1 g, 274,6 mmol) puis du /V-(3-diméthylaminopropyl)-/V'-éthylcarbodiimide (EDC) (53,1 g, 277,0 mmol). Après 15 min d'agitation à température ambiante, une solution de N-Boc-éthylènediamine (BocEDA) (37,6 g, 234,7 mmol) dans 35 mL de chloroforme est additionnée. Après 18 h d'agitation à température ambiante, une solution de HCl 0,1 N (2,1 L), puis une solution saturée de NaCI (1 L) sont ajoutées. Les phases sont séparées puis la phase organique est lavée successivement avec une solution de HCl 0,1 N / NaCI saturée (2,1 L/l L), une solution de NaCI saturée (2 L), une solution de NaHCCh saturée (2 L), puis une solution de NaCI saturée (2 L). La phase organique est séchée sur sulfate de sodium anhydre, filtrée puis concentrée sous pression réduite. Le solide obtenu est purifié par triturations dans le diisopropyléther (3 x 400 mL), pour donner un solide après séchage sous vide à 40 °C.
Rendement : 90,4 g (86 %).
RMN Ki (CDCb, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,20-1,37 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,54-1,70 (2H) ; 1,79-1,92 (1H) ; 1,92-2,04 (1H) ; 2,03-2,17 (1H) ; 2,17-2,44 (3H) ; 3,14-3,36 (4H) ; 3,43 (1H) ; 3,56 (1.H) ; 4,29 (0,1 H) ; 4,51 (0,9 H) ; 4,82 (0,lH) ; 5,02 (0,9H) ; 6,84 (0,1 H) ; 7,22 (0,9H).
Molécule AAI [000711] À une solution de molécule A2 (20,1 g, 40,5 mmol) dans 330 mL de dichlorométhane est ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C une solution d'acide chlorhydrique 4 N dans le dioxane (100 mL, 400 mmol). Après 3 h 30 d'agitation à température ambiante, la solution est concentrée sous pression réduite. Le résidu est purifié par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane) pour donner un solide blanc de molécule AAI sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 16,3 g (93 %),
RMN (CDCIa, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,07-1,40 (24H) ; 1,49-1,63 (2H) ; 1,77-2,18 (4H) ; 2,18-2,45 (2H) ; 3,14-3,32 (2H) ; 3,42-3,63 (2H) ; 3,63-3,84 (2H) ; 4,37 (0,lH) ; 4,48 (0,9H) ; 6,81-8,81 (4H).
LC/MS (EST) : 396,5 ; (calculé ([M + H]+) : 396,4).
Exemple AA2 : molécule AA2
Molécule A3 : 15-rnéthyihexadécan-l-ol.
[000712] Dans un tricol sous argon est introduit du magnésium (9,46 g, 389 mmol) en copeaux. Le magnésium est recouvert de THF (40 mL) anhydre et quelques gouttes de l-bromo-3-méthylbutane sont ajoutées à température ambiante pour initier la réaction. Après l'observation d'un exotherme et un léger trouble du milieu, ie reste du l-bromo-3-méthylbutane (53,87 g, 357 mmol) est ajouté au goutte-à-goutte en 90 min alors que la température du milieu reste stable entre 50 et 60 °C. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 70 °C pendant 2 h.
[000713] Dans un tricol sous argon, à une solution de CuCI (482 mg, 4,86 mmol) dissout dans la IMMP (62 mL) à 0 °C est ajoutée au goutte-à-goutte une solution de 12bromo-1-dodécanol (43 g, 162,1 mmol) dans le THF (60 mL). À cette solution est ensuite ajoutée au goutte-à-goutte la solution de l'organomagnésien chaude fraîchement préparée de façon à maintenir la température du milieu en dessous de 20 °C. Le mélange est ensuite agité à température ambiante pendant 16 h. Le milieu est refroidi à 0 °C et la réaction est stoppée par addition d'une solution aqueuse d'HCI 1 N jusqu'à pH 1 et le milieu est extrait à l'acétate d'éthyle. Après lavage de la phase organique avec une solution saturée en NaCI et séchage sur NazSCU, la solution est filtrée et concentrée sous vide pour donner une huile. Après purification par DCVC sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle), une huile qui cristallise à température ambiante est obtenue.
Rendement : 32,8 g (74 %)
RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,14 (2H) 1,20-1,35 (22H) ; 1,50-1,55 (3H) ; 3,64 (2H).
Molécule A4 : acide 15-méthylhexadécanoïque.
[000714] À une solution de molécule A3 (20,65 g, 80,5 mmol) et bromure de tétrabutylammonium (14,02 g, 42,5 mmol) dans un mélange d'acide acétique/dichloréthane/eau (124/400/320 mL) à température ambiante est ajouté par petites portions du permanganate de potassium (38,2 g, 241,5 mmol). Après agitation à reflux pendant 5 h et retour à température ambiante, le milieu est acidifié à pH 1 par ajout progressif de HCl 5 N. NazSCh (44,6 g, 354,3 mmol) est ensuite ajouté progressivement jusqu'à décoloration du milieu. La phase aqueuse est extraite au dichlorométhane et les phases organiques combinées sont séchées sur Na?SO4, filtrées et concentrées sous vide. Après purification par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique), un solide blanc est obtenu.
Rendement : 19,1 g (quantitatif)
RMN Ή (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,51 (1H) ; 1,63 (2H) ; 2,35 (2H).
Molécule A5 : Produit obtenu par réaction entre la molécule A4 et la L-proline. [000715] À une solution de molécule A4 (10 g, 37 mmol) dans le THF (360 mL) à 0 °C sont ajoutés successivement du dicyciohexyle carbodiimide (DCC) (8,01 g, 38,8 mmol) et du A/-hydroxysuccinimide (NHS) (4,47 g, 38,8 mmol). Après 17 h d'agitation à température ambiante, le milieu est refroidi à 0 °C pendant 20 min, filtré sur fritté. De la L-proiine (4 g, 37,7 mmol), de la triéthylamine (34 mL) et de l'eau (30 mL) sont ajoutées au filtrat. Après 20 h d'agitation à température ambiante, ie milieu est traité avec une solution aqueuse d'HCI 1 N jusqu'à pH 1. La phase aqueuse est extraite avec du dichlorométhane (2 x 125 mL). Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution aqueuse de HCl 1 N (2 x 100 mL), de l'eau (100 mL), puis une solution aqueuse saturée en NaCI (100 mL). Après séchage sur NazSCki, la phase organique est filtrée, concentrée sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique)
Rendement : 9,2 g (72 %)
RMN XH (CDCh, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,14 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,50 (1H) ; 1,67 (2H) ; 1,95-2,10 (3H) ; 2,34 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H). LC/MS (EST) : 368,3 ; (calculé ([M + H]+) : 368,6).
Molécule , A6 : Produit obtenu par réaction entre la molécule A5 et la /V-Bocéthylènediamine.
[000716] À une solution de molécule A5 (9,22 g, 25,08 mmol) dans un mélange THF/DMF (200/50 mL) sont ajoutés de la triéthylamine (TEA) (5,23 mL) et du 2-(lHbenzotriazol-l-yl)-l,l,3,3-tétraméthyluronium tétrafluoroborate (TBTU) à température ambiante. Après 10 min d'agitation, de la BocEDA (4,42 g, 27,6 mmol) est ajoutée. Après agitation à température ambiante pendant 17 h, le mélange est dilué avec de l'eau (300 mL) à 0 °C et agité à froid pendant 20 min. Le précipité formé est filtré sur fritté et le filtrat est extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution saturée de NaHCCH, séchées sur NazSOa, filtrées, concentrées sous vide et le résidu est purifié par chromatographie flash (acétate d’éthyle, méthanol). Rendement : 6,9 g (54 %)
RMN *Η (CDCh, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,15 (2H) ; 1,22-1,38 (20H) ; 1,43 (9H) ; 1,50 (1H) ; 1,64 (4H) ; 1,85 (1H) ; 1,95 (1H) ; 2,10 (1H) ; 2,31 (2H) ; 3,20-3,35 (3H) ; 3,45 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,51 (1H) ; 5,05 (1H) ; 7,24 (1H).
LC/MS (ESI) : 510,6 ; (calculé ([M + HP) : 510,8),
Molécule AA2 [000717] À une solution de ia molécule A6 (5,3 g, 10,40 mmol) dans le dichlorométhane (50 mL) à 0 °C est ajoutée une solution de HCl 4 N dans le dioxane (13 mL). Après 5 h d'agitation à 0 °C, le milieu est concentré sous vide, repris dans de l'eau et lyophilisé pour donner un solide blanc de molécule AA2 sous forme de sei de chlorhydrate.
Rendement : 4,6 g (99%)
RMN (D2O, ppm) : 0,91 (6H) ; 1,22 (2H) ; 1,22-1,50 (20H) ; 1,63 (3H) ; 1,98 (1H) ; 2,10 (2H) ; 2,26 (1H) ; 2,39 (1H) ; 2,43 (1H) ; 3,22 (2H) ; 3,45-3,60 (3H) ; 3,78 ( 1H) ; 4,42 (1H).
LC/MS (ESI) : 410,4 ; (calculé ([M + H]+) : 410,7).
Exemple AA3 : molécule AA3
Molécule A7 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule Al et la Boctri(éthylèneglycol)d lamine.
[000718] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de ia molécule A2 appliqué à la molécule Al (4,0 g, 11,3 mmol) et à la Boc-tri(éthylèneglycol)diamine (3,1 g, 12,4 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, toluène).
Rendement : 5,5 g (84 %).
RMN *Η (CDCis, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,09-1,39 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,64 (2H) ; 1,79-2,01 (2H) ; 2,06-2,43 (4H) ; 3,23-3,68 (14H) ; 4,33 (0,2H) ; 4,56 (0,8H) ; 5,25 (1H) ; 6,49 (0,2H) ; 7,13-7,50 (0,8H).
Molécule AA3 [000719] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A7 (5,5 g, 9,4 mmol), un solide blanc de molécule AA3 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 4,3 g (92 %).
RMN MH (DMS0-d6, pprn) : 0,85 (3H) ; 1,08-1,40 (24H) ; 1,40-1,52 (2H) ; 1,71-2,02 (4H) ; 2,02-2,31 (2H) ; 2,90-2,98 (2H) ; 3,15-3,47 (5H) ; 3,50-3,66 (7H) ; 4,24 (0,6H) ; 4,32 (0,4H) ; 7,83 (0,6H) ; 7,95 (3H) ; 8,17 (0,4H).
LC/MS (ESI) : 484,6 ; (calculé ([M + H]+ ) : 484,4).
Exemple AA4 : molécule AA4
Molécule A8 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule Al et la Boc-l-amino4,7,10-trïoxa-13-tridécane amine.
[000720] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule Al (4,5 g, 12,7 mmol) et à la Boc-l-amino-4,7,10-trioxa-13tridécane amine (4,5 g, 14,0 mmol), une huile jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 7,7 g (92 %).
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,22-1,37 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,59-1,67 (2H) ; 1,67-2,00 (6H) ; 2,06-2,45 (4H) ; 3,18-3,76 (18H) ; 4,28 (0,2H) ; 4,52 (0,8H) ; 4,695,04 (1H) ; 6,77 (0,2.H) ; 7,20 (0,8H).
Molécule AA4 [000721] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A8 (7,7 g, 11,8 mmol), une huile jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane). Une coévaporation avec du diisopropyléther permet d'obtenir la molécule AA4 sous forme de sel de chlorhydrate sous forme d'un solide blanc qui est séché sous vide à 50 °C.
Rendement : 5,4 g (76 %).
RMN MH (CDCb, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,08-1,40 (24H) ; 1,49-1,65 (2H) ; 1,76-2,39 (10H) ; 3,07-3,28 (3H) ; 3,34-3,80 (15H) ; 4,34 (0,05H) ; 4,64 (0,95H) ; 7,35 (0,05H) ; 7,66-8,58 (3,95H).
LC/MS (ESI) : 556,7 ; (calculé ([M + H]+) : 556,5).
Exemple AA5 : moüéculs ÂA5
Molécule A9 : Produit obtenu par réaction entre la molécule Al et l'ester méthylîque de la /V-Boc-L-lysine.
[000722] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule Al (4 g, 11,3 mmol) et à l'ester méthylîque de la ZV-Boc-Llysine (3,2 g, 12,4 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 4,9 g (73 %).
RMN (CDCh, ppm) : 0.,88 (3H) ; 0,99-1,54 (37H) ; 1,54-1,75 (3H) ; 1,75-2,04 (3H) ; 2,04-2,41 (4H) ; 2,94-3,19 (2H) ; 3,19-3,81 (5H) ; 4,28-4,64 (2H) ; 4,94 (1H) ; 6,45 (O,1H) ; 7,36 (0,9H).
LC/MS (ESI) : 596,7 ; (calculé ([M+H]+) : 596,5).
Molécule AIQ : Produit obtenu par traitement de la molécule A9 avec de l'ammoniaque. [000723] À une suspension de molécule A9 (4,9 g, 8,2 mmol) dans 10 mL de méthanol sont ajoutés 320 mL d'une solution d'ammoniaque 7 N dans le méthanol. Après 19 h d'agitation à température ambiante en atmosphère fermée, 100 mL supplémentaires de solution d'ammoniaque sont ajoutés. Après 24 h d'agitation à température ambiante en atmosphère fermée, le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite. Le résidu est purifié par trituration dans le diisopropyléther à reflux (100 mL), pour donner un solide blanc qui est séché sous vide à 50 °C.
Rendement : 4,1 g (85 %).
RMN 3H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,06-1,57 (37H) ; 1,57-1,79 (3H) ; 1,88-2,41 (7H) ; 3,09 (2H) ; 3,49 (1H) ; 3,62 (1H) ; 4,34 (1H) ; 4,51 (1H) ; 4,69-4,81 (1H) ; 5,43 (0,95H) ; 5,57 (0,05H) ; 6,25 (0,05H) ; 6,52 (0,95H) ; 6,33 (0,05H) ; 7,11 (0,95H).
Molécule AA5 [000724] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A10 (388 mg, 0,67 mmol), un solide blanc de molécule AA5 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par trituration dans le diisopropyléther.
Rendement : 292 mg (85 %).
RMN 3-H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,06-2,34 (38H) ; 2,61-2,81 (2H) ; 3,29-3,68 (2H) ; 4,05-4,17 (1,7H) ; 4,42 (0,3H) ; 7,00 (1H) ; 7,16 (0,7H) ; 7,43 (0,3H) ; 7,738,04(3,7H) ; 8,16 (0,3H).
LC/MS (ESI) : 481,6 ; (calculé ([M + H]+) : 481,4).
Exempte AA6 : molécule AA6
Molécule Ail : Produit obtenu par la réaction entre le chlorure de stéaroyle et la Lproline.
[000725] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule Al appliqué à la L-proline (5,0 g, 43,4 mmol) et au chlorure de stéaroyle (12,0 g, 39,6 mmol), un solide blanc est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 5,37 g (36 %)
RMN 1H (CDCI3, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,26-1,37 (28H) ; 1,64-1,70 (2H) ; 1,88-2,10 (3H) ;
2,36 (2H) ; 2,54-2,58 (1H) ; 3,46 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,62 (1H).
LC/MS (ESI) : 382,6 ; (calculé ([M+H]+j : 382,3).
Molécule A12 : Produit obtenu par réaction entre la molécule Ail et la Boctri(éthylèneglycol)d lamine.
[000726] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule Ail (33,81 g, 88,6 mmol) et à la Boctri(éthylèneglycol)diamine (26,4 g, 106,3 mmol) dans le THF en utilisant la DIPEA au lieu de la TEA, un solide blanc est obtenu après purification par chromatographie flash (acétate d'éthyle, méthanol).
Rendement : 43,3 g (80 %)
RMN *Η (CDCh, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,24 (30H) ; 1,43 (9H) ; 1,61 (2H) ; 1,82 (1H) ; 1,96 (1H) ; 2,25-2,45 (2H) ; 3,25-3,65 (14H) ; 4,30 (0,15H) ; 4,53 (0,85H) ; 5,25 (1H) ; 6,43 (0,15H) ; 7,25 (0,85H).
LC/MS (ESI) : 612,6 ; (calculé ([M+H]+) : 612,9),
Molécule AA6 [000727] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA2 appliqué à la molécule A12 (43 g, 70,3 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est trituré dans l'acétonitriie. La suspension est filtrée et le solide lavé avec de l'acétonitriie puis de l'acétone. Après séchage sous vide, un solide blanc de molécule AA6 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu.
Rendement : 31,2 g (81 %)
RMN 1H (DMSO-ds, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,23 (28H) ; 1,45 (2H) ; 1,70-2,05 (4H) ; 2,13 (1H) ; 2,24 (1H) ; 2,95 (2H) ; 3,1.0-3,25 (2H) ; 3,30-3,65 (10H) ; 4,20-4,45 (1H) ; 7,85-8,2.5 (4H).
LC/MS (ESI) : 512,4 ; (calculé ([M + H]+) : 512,8).
Exemple AA7 : molécule AA7
Molécule Al3 : Produit obtenu par réaction entre l'acide arachidique et la L-proline.
[000728] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A5 appliqué à l'acide arachidique (1.5,51 g, 49,63 mmol) et à la L-proline (6 g, 52,11 mmol) en utilisant ia DIPEA à la place de la TEA, un solide blanc est obtenu après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, acide acétique).
Rendement : 12,9 g (63 %)
RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (34H) ; 1,66 (2H) ; 1,95-2,1.5 (2H) ; 2,34 (2H) ; 2,45 (1H) ; 3,47 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H).
LC/MS (ESI): 410,4 ; (calculé ([M+H]+): 410,6).
frtolécute A14 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule A13 et la Boc-l-amino4,7,10-trioxa-1.3-tridécane amine.
[000729] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de îa molécule A12 appliqué à la molécule A13 (10,96 g, 26,75 mmol) et à la Boc-l-amino-4,7,10trioxa-13-tridécane (10,29 g, 32,11 mmol), un solide est obtenu après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle, méthanol). Rendement : 14,2 g (75 %)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,24 (32H) ; 1,43 (9H) ; 1,61 (2H) ; 1,80 (1H) ; 1,96 (1H) ; 2,10-2,45 (4H) ; 3,20-3,75 (18H) ; 4,30 (0,20H) ; 4,55 (0,80H) ; 5,03 (1H) ; 6,75 (0,20H) ; 7,20 (0,80H).
LC/MS (ESI): 712,8 ; (calculé ([M+HJ+): 713,1).
Moiécute AA7 [000730] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA2 appliqué à la molécule A14 (14,25 g, 20,01 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide du milieu réactionnel est dissout dans le méthanol et évaporé sous pression réduite, l'opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule AA7 sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 12,7 g (98 %)
RMN ’Ή (DMSO-de, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,23 (32H) ; 1,45 (2H) ; 1,64 (2H) ; 1,70-2,05 (6H) ; 2,10-2,30 (2H) ; 2,82 (2H) ; 3,08 (2H) ; 3,30-3,60 (15H) ; 4,15-4,30 (1H) ; 7,73-8,13 (4H).
LC/MS (ESI): 612,7 ; (calculé ([M+H]+): 612,9).
Exempte AAS : molécule AA8
Molécule A15 : Produit obtenu par la réaction entre la L-leucine et le chlorure de palmitoyle.
[000731] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule Al appliqué à de la L-leucine (15,0 g, 114,4 mmol) et au chlorure de palmitoyle (34,5 g, 125 mmol), un solide blanc est obtenu par trituration dans le diisopropyléther.
Rendement : 13,0 g (31 %)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 0,96 (6H) ; 1,16-1,35 (24H) ; 1,55-1,77 (5H) ; 2,23 (2H) ; 4,55-4,60 (1H) ; 5,88 (1H).
Moiécuie A16 : Produit obtenu par ia réaction entre la molécule A15 et l'ester méthylique de la L-proline [000732] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à ia molécule A15 (6,00 g, 16,2 mmol) et à l'ester méthylique de la Lproline (3,23 g, 19,5 mmol), une huile légèrement jaune est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 5,8 g (74 %)
RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,83-1,00 (9H) ; 1,18-1,32 (24H) ; 1,40-1,73 (5H) ; 1,84-2,33 (6H) ; 3,47-3,89 (2H) ; 3,70 (1,14H) ; 3,71 (1,21H) ; 3,74 (0,53H) ; 3,76 (0,12H) ; 4,40-4,56 ( 1H) ; 4,63-4,67 (0,04H) ; 4,84 (0,38) ; 4,90 (0,40) ; 5,06 (0,18) ; 5,99 (0,18H) ; 6,08-6,21 (0,82).
LC/MS (ESI) : 481,6 ; (calculé ([M + H]+) : 481,4).
Molécule Ai7 : Produit obtenu par ia saponification de l'ester méthylique de la molécule A16.
[000733] À une solution de molécule A16 (5,8 g, 12,06 mmol) dans 30 mL de méthanol est ajoutée de la soude 1 N (13,5 mL, 13,5 mmol). Après 20 h d’agitation à température ambiante, la solution est diluée avec de l'eau puis acidifiée par 20 mL d'acide chlorhydrique 1 N à 0 °C. Le précipité est filtré puis rincé avec de l'eau (50 mL) avant d'être solubilisé dans 50 mL de dichlorométhane. La phase organique est séchée sur NazSCh, filtrée puis concentrée sous pression réduite pour donner une huile incolore.
Rendement : 4,5 g (80 %)
RMN ’Ή (CDCh, ppm) : 0,85-0,99 (9H) ; 1,14-1,41 (24H) ; 1,43-1,72 (5H) ; 1,87-2,47 (7H) ; 3,48-3,55 (0,6H) ; 3,56-3,62 (0,4ht) ; 3,83-3,90 (0,4H) ; 3,90-3,96 (0,6H) ; 4,52-4,56 (0,6H) ; 4,56-4,59 (0,4H) ; 4,80-4,86 (0,4H) ; 4,86-4,91 (0,6H) ; 6,05 (0,4H) ; 6,11 (0,6H).
LC/MS (ESI) : 467,6 ; (calculé ([M+H]+) : 467,4).
Molécule A.18 : Produit obtenu par la réaction entre la M-Boc-éthylènediamine et ia molécule A17.
[000734] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule A17 (4,5 g, 9,64 mmol) et à la BocEDA (1,70 g, 10,61 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 2,0 g (34 %)
RMN M-i (CDCIs, ppm) : 0,83-0,99 (9H) ; 1,19-1,32 (24H) ; 1,44 (9H) ; 1,48-2,37 (14H) ; 3,09-3,99 (4H) ; 4,28-5,01 (2H) ; 5,64-6,04 (1H) ; 6,87-7,06 (1H).
LC/MS (ESI) : 609,7 ; (calculé ([M + H]+) : 609,5).
Molécule AA8 [000735] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A18 (2 g, 3,28 mmol), un solide de molécule AA8 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après purification par chromatographie flash (méthanol, dichlorométhane).
Rendement : 1,5 g (90 %)
RMN Ψ (CDCh, ppm) : 0,83-1,00 (9H) ; 1,18-1,32 (24H) ; 1,37-1,77 (5H) ; 1,93-2,41 (6H) ; 3,07-3,97 (6H) ; 4,44-4,77 (2H) ; 7,66-8,21 (2H).
LC/MS (ESI) : 509,6 ; (calculé ([M+H]+) : 509,4).
Exemple AA9 : molécule ÂA9
Molécule A1.9 : Produit obtenu par la réaction entre l'acide iaurique et la L-phényialanine. [000736] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A5 appliqué à l'acide Iaurique (8,10 g, 40,45 mmol) et à la L-phényialanine (7 g, 42,38 mmol), un solide blanc est obtenu.
Rendement : 12,7 g (98 %)
RMN (DMSO-ds, ppm) : 0,86 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,36 (2H) ; 2,02 (2H) : 2,82 (1H) ; 3,05 (1H) ; 4,42 (1H) ; 7,15-7,30 (5H) ; 8,05 (1H) ; 12,61 (1H).
LC/MS (ESI) : 348,2 ; (calculé ([M+H]+) : 348,5),
Molécule A20 : Produit obtenu par ia réaction entre la molécule A19 et ie sel de chlorhydrate de l'ester méthyiique de la L-proline.
[000737] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule A19 (9,98 g, 28,72 mmol) et au sel chlorhydrate de l'ester méthyiique de ia L-proiine (5,23 g, 31,59 mmol), une huiie incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle).
Rendement : 5,75 g (44 %)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,50-1,75 (3H) : 1,80-2,02 (3H) ; 2,17 (2H) ; 2,65 (0,5H) ; 2,95 (1H) ; 3,05-3,20 (1,5H) ; 3,50-3,65 (1H) ; 3,75 (3H) ; 4,29 (0,5H) ; 4,46 (0,5H) ; 4,70 (0,lH) ; 4,95 (0,9H) ; 6,20-6,30 (1H) ; 7,15-7,30 (5H).
LC/MS (ESI) : 459,2 ; (calculé ([M + H]+) : 459,6).
Molécule A21 : Produit obtenu par saponification de la molécule A2.0.
[000738] À une solution de molécule A20 (5,75 g, 12,54 mmol) dans un mélange THF/méthanol/eau (40/40/40 ml.) à 0 °C est ajoutée de l'hydroxyde de lithium (LiOH) (600,49 mg, 25,07 mmol) puis le mélange est agité à température ambiante pendant 20 h. Après évaporation des solvants organiques sous vide, la phase aqueuse est diluée dans l'eau, acidifiée avec une solution aqueuse de HCl 1 N jusqu'à pH 1. Le produit est alors extrait à l'acétate d'éthyle. Les phases organiques combinées sont lavées avec une solution aqueuse saturée de NaCI, séchées sur Na2SÛ4, filtrées et concentrées sous pression réduite pour donner une huile incolore.
Rendement : 5,7 g (quantitatif)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,10-1,30 (16H) ; 1,50-1,80 (3H) ; 1,67-2,02 (2H) ; 2,20 (2H) ; 2,25 (0,4H) ; 2,60 (0,6H) ; 2,85-3,10 (2,6H) ; 3,55-3,65 (1,4H) ; ; 4,35 (0,6H) ; 4,55 (0,4H) ; 4,94 (IH) ; 6,28 (0,4H) ; 6,38 (0,6H) ; 7,20-7,30 (5H).
LC/MS (ESI) : 445,2 ; (calculé ([M + H]+) : 445,6).
Molecule A22 . Produit obtenu par réaction entre la /V-Boc-éthylènediamine et la molécule A21.
[000739] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A6 appliqué à la molécule A21 (5,67 g, 12,75 mmol) et à la BocEDA (2,25 g, 14,03 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (dichlorométhane, méthanol).
Rendement : 5,7 g (76%)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,25 (16H) ; 1,43 (9H) ; 1,58 (2,6H) ; 1,75-1,95 (1,4H) ; 2,15-2,30 (3H) ; 2,64 (0,5H) ; 2,95-3,10 (2,5H) ; 3,20-3,40 (4H) ; 3,45 (0,5H) ; 3,55 (0,2H) ; 3,66 (IH) ; 4,44 (IH) ; 4,50 (0,2H) ; 4,60 (0,6H) ; 4,99 (0,7H) ; 5,54 (0,5H) ; 5,95 (0,2H) ; 6,17 (IH) ; 6,60 (0,5H) ; 7,07 (0,5H) ; 7,20-7,40 (5H). LC/MS (EST) : 587,4 ; (calculé ([M + H]+) : 587,8).
Molécule AA9 [000740] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA2 appliqué à la molécule A22 (5,66 g, 9,65 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide du milieu réactionnel est dissout dans le méthanol et évaporé sous pression réduite, l'opération étant répétée 4 fois pour donner une mousse blanche de molécule AA9 sous forme de sel de chlorhydrate.
Rendement : 4,9 g (97 %)
RMN !H (DMSO-de, 120 °C, ppm) : 0,89 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,43 (2H) ; 1,68 (0,6H) ; 1,75-2,00 (3H) ; 2,05-2,25 (2,4H) ; 2,82-3,05 (5H) ; 3,38 (2H) ; 3,50-3,70 (1,4H) ; 4,25 (0,6H) ; 4,63 (0,4H) ; 4,77 (0,6H) ; 7,25-7,50 (5H) ;7,55-8,20 (4H).
LC/MS (ESI) : 487,4 ; (calculé ([M+H]+) : 487,7).
Exempte AA10 : molécule AA10
Molécule. ...A.23 Produit obtenu par la réaction entre la molécule 87 et la W-Bocethylènediamine [000741] À une solution de molécule 87 (190,00 g, 583,73 mmol) à 0 °C dans le DCM (2,9 L) sont ajoutés successivement du HOBt (8,94 g, 58,37 mmol) puis de la BocEDA (112,20 g, 700,00 mmol) en solution dans le DCM (150 mL). De l'EDC (123,10 g, 642,00 mmol) est ajouté puis le mélange est agité 17 h entre 0 °C et température ambiante. Le mélange réactionnel est ensuite lavé avec une solution aqueuse saturée en NaHCCh (2x1,5 L), une solution aqueuse de HCl 1 N (2x1,5 L) puis une solution aqueuse saturée en NaCI (1,5 L), séché sur NazSCU, filtré et concentré sous pression réduite. Un solide blanc est obtenu après recristaliisation dans l'acétonitriie. Rendement : 256,50 g (93 %)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,16-1,38 (20H) ; 1,44 (9H) ; 1,56-1,71 (2H) ; 1,78-2,45 (6H) ; 3,11-3,72 (6H) ; 4,30 (0,lH) ; 4,51 (0,9H) ; 4,87 (0,lH) ; 5,04 (0,9H) ; 6,87 (0,lH) ; 7,23 (0,9H).
LC/MS (ESI) : 468,0 ; (calculé ([M+HJ+) : 468,4).
Molécule AA10 [000742] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A23 (256,50 g, 548,43 mmol), un solide blanc de molécule AA10 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu par trituration dans du pentane (1,6 L) et séchage sous pression réduite à 40 °C.
Rendement : 220,00 g (99 %)
RMN (MeOD-d4, ppm) : 0,90 (3H) ; 1,2.1-1,43 (20H) ; 1,54-1,66 (2H) ; 1,85-2,28 (4H) ; 2,39 (2H) ; 3,00-3,17 (2H) ; 3,30-3,40 (1H) : 3,43-3,71 (3H) ; 4,29 (0,94H) ; 4,48 (0,06H).
LC/MS (ESI) : 368,2 ; (calculé ([M + H]+) : 368,3).
Exemple AA11 ξ mslécuîe AA11
Molécule.A24 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B7 et le Boc-l-amino4,7,10-trioxa-13-tridécane amine.
[000743] Par un procédé similaire à celui utilise pour ia préparation de la molécule A23 appliqué à la molécule B7 (24,00 g, 73,73 mmol) et au Boc~l-amino-4,7,10-trioxa13-tridécane amine (28,35 g, 88,48 mmol), une huile orange de molécule A24 est obtenue.
Rendement : 44,50 g (96 %)
RMN 1H (CDCia, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,08-1,56 (20H) ; 1,43 (9H) ; 1,58-1,67 (2H) ; 1,70-2,00 (6H) ; 2,04-2,41 (4H) ; 3,16-3,77 (18H) ; 4,26-4,29 (0,2H) ; 4,50-4,54 (0,8H) ; 4,68-5,10 ( 1H) ; 6,74 (0,2H) ; 7,19 (0,8H).
LC/MS (ESI) : 628,4 ; (calculé ([M + H]+) : 628,5).
Molécule AAI 1 [000744] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A24 (43,40 g, 69,12 mmol), un solide blanc de molécule AA11 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après trituration 3 fois dans le diéthyléther, solubilisation du résidu dans l'eau et lyophilisation.
Rendement : 38,70 g (98 %)
RMN 1H (DMSO, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,38 (20H) ; 1,41-1,52 (2H) ; 1,55-1,66 (2H) ; 1,70-2,02 (6H) ; 2,08-2,30 (2H) ; 2,78-2,87 (2H) ; 3,00-3,16 (2H) ; 3,29-3,66 (14H) ; 4,16-4,22 (0,65 H) ; 4,25-4,30 (0,35H) ; 7,74 (0,65H) ; 7,86 (3H) ; 8,10 (0,35H). LC/MS (ESI) : 528,4 ; (calculé ([M + Hp) : 528,4).
Exempte AA12 : molécule AA12
Molgcule A25 : Produit obtenu par ia réaction entre la molécule B4 et la /V-Bocéthylènediamine.
[000745] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A23 appliqué à la molécule B4 (12,00 g, 40,35 mmol) et à la BocEDA (7,76 g, 48,42 mmol), une huile incolore est obtenue et utilisée sans autre purification.
Rendement : 17,40 g (94 %)
RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,86 (3H) ; 1,11-1,68 (18H) ; 1,41 (9H) ; 1,80-2,38 (6H) ; 3,06-3,35 (4H) ; 3,37-3,49 (1H) ; 3,51-3,73 (1H) ; 4,26-4,31 (0,lH) ; 4,45-4,52 (0,9H) ; 4,91-5,19 (1H) ; 6,97 (0,lH) ; 7,23 (0,9H).LC/MS (ESI) : 440,4 (calculé ([M + H]+) : 440,3).
Molécule AA12 [000746] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A25 (8,85 g, 20,13 mmol), un solide blanc de molécule AA12 est obtenu après lavage basique, concentration sous pression réduite puis recristallisation dans l'acétonitrile.
Rendement : 6,53 g (96 %)
RMN 1H (DMSO, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,56 (20H) ; 1,68-2,03 (4H) ; 2,09-2,29 (2H) ; 2,50-2,58 (2H) ; 2,96-3,11 (2H) ; 3,21-3,59 (2H) ; 4,17-4,21 (0,65H) ; 4,25-4,29 (0,35H) ; 7,68 (0,65H) ; 8,00 (0,35H)
LC/MS (ESI) : 340,3 ; (calculé ([M + H]+) : 340,3).
Exemple AA13 : molécule AA13
Moiëcuie A26 : Produit obtenu par couplage entre la molécule B1 et la /V-Bocéthylènediamine.
[000747] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A23 appliqué à la molécule B1 (30,00 g, 111,36 mmol) et à la BocEDA(21.,41 g, 133,64 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonitrile.
Rendement : 34,90 g (76 %)
RMN 1H (CDCh, ppm} : 0,88 (3H) ; 1,10-1,70 (14H) ; 1,43 (9H) ; 1,80-1,91 (1H) ; 1,92-2,01 (1H) ; 2,04-2,42 (4H) ; 3,13-3,70 (6H) ; 4,27-4,31 (0,15H) ; 4,47-4,53 (0,85H) ; 4,83 (0,15H) ; 5,02 (0,85H) ; 6,85 (0,15H) ; 7,21 (0,85H).
LC/MS (ESI) : 412,2 ; (calculé ([M + H]+) : 412,3).
Molécule AA13 [000748] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A26 (34,90 g, 84,79 mmol), un solide blanc de molécule AA13 sous forme de sel de chlorhydrate est obtenu après solubilisation dans un mélange DCM/acétonitrile et concentration sous pression réduite.
Rendement : 29,50 g (99 %}
RMN 1H (DMSO, ppm) : 0,85 (3H) ; 1,07-1,61 (14H) ; 1,70-2,06 (4H) ; 2,10-2,35 (2H) ; 2,76-2,87 (2H) ; 3,24-3,47 (3,25H) ; 3,56-3,64 (0,75H) ; 4,13-4,19 (0,75H) ; 4,314,36 (0,25H) ; 8,05-8,36 (3,75H) ; 8,50 (0,25H).
LC/MS (ESI) : 312,2 ; (calculé ([M+H]1) : 312,3).
Exempte AA14 : molécule AA14
Molécule A27 : Produit obtenu par hydrogénation du phytol.
[000749] À une solution de phytol (30,00 g, 101,20 mmol) dans le THF (450 mL.) sous argon est ajouté de l'oxyde de platine (PtO?_, 1,15 g, 6,61 mmol) et le milieu est placé sous 1 bar de dihydrogène puis agité pendant 4 h à température ambiante. Après filtration sur célite en rinçant au THF, une huile noire de molécule A27 est obtenue après concentration sous pression réduite.
Rendement : 29,00 g (96 %)
RMN XH (CDCh, ppm) : 0,84 (6H) ; 0,86 (6H) ; 0,89 (3H) ; 1,00-1,46 (22H) ; 1,46-1,68 (3H) ; 3,61-3,73 (2H).
Molécule A28: Produit obtenu par oxydation de la molécule A27 [000750] À une solution de molécule A27 (29,0 g, 97,13 mmol) dans un mélange dichloroéthane/eau (485 mL/388 mL) sont ajoutés successivement du bromure de tétrabutylammonium (16,90 g, 52,45 mmol), de l'acétide acétique (150 mL, 2,62 moi) puis du KMnCh (46,05 g, 291,40 mmol) par petites fractions en maintenant la température entre 16 et 19 °C. Le milieu réactionnel est ensuite agité pendant 4 h 30 au reflux, refroidi à 10 °C puis acidifié jusqu’à pH 1 avec une soluition de HCl 6 N (20 mL). Du NazSCh (53,90 g) est ajouté progressivement en maintenant ia température à 10 °C et le milieu est agité jusqu'à décoloration complète. De l'eau (200 mL) est ajoutée, les phases sont séparées et la phase aqueuse est extraite au DCM (2 x 400 mL). Les phases organiques combinées sont lavées par une solution aqueuse de HCl à 10 % (20 mmL), de l'eau (2 x 200 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (200 mL), séchées sur NazSCh, filtrées et concentrées sous pression réduite. Une huile jaune de molécule A28 est obtenue après purification par chromatographie flash (éluant : cyclohexane, AcOEt).
Rendement : 28,70 g (94 %)
RMN M (CDCh, ppm) : 0,84 (6H) ; 0,86 (6H) ; 0,97 (3H) ; 1,00-1,41 (20H) ; 1,52 (1H) ; 1,96 (1H) ; 2,14 (1 H) ; 2,35 (1H) ; 11,31 (1H).
LC/MS (ESI) : 311,1 (calculé ([M-H] ) : 311,3).
Mo|écul:e=A29:.:Î Produit obtenu par couplage entre la molécule A28 et la L-prolinate de méthyle.
[000751] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule A2 appliqué à la molécule A28 (18,00 g, 57,59 mmol) et au chlorhydrate de L-prolinate de méthyle (14,31 g, 86,39 mmol), une huile jaune de molécule A29 est obtenue après lavage de la phase organique par une solution aqueuse saturée en NaHCOa (2 x 150 mL), une solution aqueuse de HCl à 10 % (2 x 150 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (2 x 150 mL), puis séchage sur NazSO4, filtration et concentration sous pression réduite.
Rendement : 23,20 g (95 %)
RMN (DMSO-de, ppm) : 0,78-0,89 (15H) ; 0,97-1,43 (20H) ; 1,43-1,56 (1H) ; 1,701,96 (4H) ; 1,96-2,32 (3H) ; 3,33-3,56 (2H) ; 3,59 (0,6H) ; 3,67 (2,4H) ; 4,27 (0,8H) ; 4,57 (0,2H).
LC/MS (ESI) : 424,4 (calculé ([M +H]+) : 424,4).
Molécule.. A3 Q ; Produit obtenu par la saponification de la molécule A29.
[000752] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule A21 appliqué à la molécule A29 (21,05 g, 49,68 mmol), une huile jaune de molécule A30 est obtenue.
Rendement : 20,40 g (99 %)
RMN Tl (DMSO-de, ppm) : 0,77-0,91 (15H) ; 0,97-1,43 (20H) ; 1,43-1,56 (1H) ; 1,671,96 (4H) ; 1,96-2,29 (3H) ; 3,26-3,56 (2H) ; 4,20 (0,8H) ; 4,41 (0,2H).
LC/MS (ESI) : 410,3 (calculé ([M + H]+): 410,4).
Molécule A31 : Produit obtenu par le couplage entre ia molécule A30 et le Boc-l-amino4,7,10-tr!oxa-13-tridécane amine.
[000753] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule A23 appliqué à la molécule A30 (8,95 g, 21,85 mmol) et au Boc-l-amlno-4,7,10-trioxa13-tridécane amine (8,40 g, 26,21 mmol), une huile incolore de molécule A31 est obtenue après purification par chromatographie flash (éluant : DCM, AcOEt, méthanol). Rendement : 10,08 g (65 %)
RMN 1H (DMSO-de, ppm) : 0,78-0,89 (15H) ; 0,97-1,43 (29H) ; 1,43-1,55 (1H) ; 1,551,66 (4H) ; 1,71-2,30 (7H) ; 2,95 (2H) ; 3,00-3,19 (2H) ; 3,34-3,58 (14H) ; 4,17-4,29 (1H) ; 6,30-6,79 ( 1H) ; 7,67 (0,65H) ; 8,00 (0,35H).
LC/MS (ESI) : 712,6 (calculé (,[M + H]+): 712,6).
Meîécute AA14 [000754] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AAI appliqué à la molécule A31 (10,08 g, 1.4,16 mmol), le résidu obtenu après concentration sous pression réduite est solubilisé dans le DCM (200 mL), la phase organique est lavée par une solution aqueuse de NaOH 2 N (2 x 100 mL), séchée sur NazSCh, filtrée et concentrée sous pression réduite. Une huile incolore de molécule AA14 sous forme d'amine neutre est obtenue,
Rendement : 8,23 g (95 %)
RMN (DMSO-de, ppm) : 0,78-0,89 (15H) ; 0,97-1,43 (20H) ; 1,43-1,69 (6H) ; 1,692,30 (8H) ; 2,56 (2H) ; 2,99-3,19 (2H) ; 3,31-3,58 (14H) ; 4,15-4,29 (1H) ; 7,70 (0,65H) ; 8,04 (0,35H).
LC/MS (ESI) : 612,5 (calculé ([M-i-H]+): 612,5).
Exemple AA15 : molécule AA15 [000755] La molécule AA15 est obtenue par la méthode conventionnelle de synthèse peptidique en phase solide (SPPS) sur résine 2-chlorotrityle.
[000756] À une solution de 4,7,10-trioxa-l,13-tridécanediamine (TOTA, 10,87 mL, 49,60 mmol) dans du DCM (50 mL) est ajoutée de la DIPEA (8,64 mL, 49,60 mmol). Cette solution est ensuite versée sur de la résine 2-chlorotrityle (4,00 g, 1,24 mmol/g) préalablement lavée au DCM dans un réacteur adapté à ia SPPS. Après 2 h d'agitation à température ambiante, du méthanol (0,8 mL/g, 3,2 mL) est ajouté et le milieu est agité pendant 15 min. La résine est filtrée, lavée successivement avec du DCM (3 x 50 mL), du DMF (2 x 50 mL), du DCM (2 x 50 mL), de l'isopropanol (1 x 50 mL) et du DCM (3 x 50 mL). Les acides aminés protégés /V-Fmoc-L-giycine et N-Fmoc-L-proline puis l'acide palmitique (3 équivalents) sont couplés successivement en utilisant le 1[bis(diméthylamino)methylène]-lH-l,2,3-triazolo[4,5-b] pyridinium 3-oxîde hexafluorophosphate (HATU, 3 équivalents) comme agent de couplage en présence de DIPEA (6 équivalents) dans un mélange DCM/DMF 1 : 1. Une solution de pipéridine à 20 % dans le DMF est utilisée pour les étapes de clivage du groupe protecteur Fmoc. La résine est lavée par du DCM, du DMF et de l'isopropanol après chaque étape de couplage et de déprotection. Le clivage du produit de la résine est effectué en utilisant un mélange TFA/DCM 1:1. Les solvants sont évaporés sous pression réduite, le résidu est solubilisé dans du DCM (50 mL) et ia phase organique est lavée avec une solution aqueuse de NaOH 1 N (1 x 50 mL) puis une solution saturée de NaCI (2 x 50 mL). Après séchage sur NazSCk, la phase organique est filtrée, concentrée sous pression réduite et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (dichlorométhane, méthanol, NH-iOH). Rendement : 1,65 g (54 % global sur 7 étapes).
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,18-2,39 (38H) ; 2,79 (2H) ; 3,23-3,44 (2H) ; 3,47-3,69 (14H) ; 3,76 (0,92H) ; 3,82 (0,08H) ; 3,98 (0,08H) ; 4,03 (0,92H) ; 4,34 (0,08H) ; 4,39 (0,92H) ; 7,00-7,40 (2H).
LC/MS (ESI) : 613,7 ; (calculé ([M-t-H]+) : 613,5).
Exemple AA16 : molécule ΑΑΙδ [000757] Par un procédé de SPPS similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule AA15 et en utilisant de la A/-Fmoc-L-phénylalanine (3 équivalents) à ia place de la N-Fmoc-L-glycine, la molécule AA16 est obtenue sous forme d'une huile jaune. Rendement : 14,07 g (69 %)
RMN 1H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,19-1,34 (24H) ; 1,41-1,61 (2H) ; 1,68-2,28 (12H) ; 2,84 (2H) ; 3,14 (2H) ; 3,23-3,67 (16H) ; 4,19-4,25 (0,lH) ; 4,38-4,45 (0,9H) ; 4,59-4,69 (1H) ; 6,86 ( 1H) ; 7,03 (1H) ; 7,12-7,30 (5H).
LC/MS (ESI) : 703,5 ; (calculé ([M+H]+) : 703,5).
Exemple AA17 : molécule AA17 [000758] Par un procédé de SPPS similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule AA15 et en utilisant du EDA (30.48g, 0,456mol)à la place du TOTA, la molécule AA17 est obtenue sous forme d'un solide blanc.
Rendement : 9,19 g (89 %)
RMN (MeOD-d4, ppm) : 0,90 (3H) ; 1,22-1,43 (24H) ; 1,55-1,67 (2H) ; 1,91-2,04 (2H) ; 2,04-2,15 (1H) ; 2,17-2,29 (1H) ; 2,39 (2H) ; 2,69-2,82 (2H) ; 3,25-3,36 (2H) ; 3,58-3,70 (2H) ; 3,70-3,97 (2H) ; 4,25-4,34 (0,9H) ; 4,44-4,50 (0,lH).
LC/MS (ESI) : 453,3 ; (calculé ([M + H]+) : 453,4).
AB : Synthèse des co-polyaminoaddes modifiés par des molécules hydrophobes dans lesquelles p = 1
Co-polyaminoacides statistiques de formule VII ou Vila
CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET DE RADICAUX HYDROPHOBES
N· ——————— - - * _____
i = 0,05, DP (m + n) ~ 23
Ri = H ou pyroglutamate
Hy' ' i 0,05, DP (m + n) = 35
Ri = H ou pyroglutamate
100
Ri = H ou pyroglutamate
101
102
103 abii
ONa
H
N
Ri
I 'N H
NH2 o
N
H n
AB 12 ·©
Hy i = 0,05, DP (m + n) = .nh2
NH
Ri
Nl
H
Hy =
Ri = H ou pyrogiutamate a 5^··“
O
H3C i ™ 0,04, DP (m 4- n) ~
NH /C«h31
Hy =
Ri = H ou pyrogkitamate
Ch,
105
AB22
,.OMa
R·,
Ην' ''Ο ί = 0,16, DP (m + η) - 38 'ΝΗ
ΝΗ ''Μ
I ΑΒ23
Ο
Hy = Ο'
R.· = CH3CO ou pyroglutamate ©»
13π27 ί = 0,10, DP (m +
Hy
η) —
Γ
ΝΗ
ΝΗ
Ο /'ÿ ρ Μ q>' ^13Π27
106
107
XO i = 0,15, DP (m + n) = 39 Hy
Rt= H ou pyrogliitamate
108
AB28
AB29
Ο .NH
NH
O
C11H23
Ri n ) 40 'C9H19
Hy =
Ri = pyrogSutamate i = 0,15, DP (m + n) = 39
Hy =
Ri = H ou pyroglutamate <Qs. “©Me i = 0,15, DP (m
109
110
Tableau IB Liste des co-polyaminoacides de formule VII ou Vila synthétisés selon l'invention
Ill
i = 0,045, DP (m) = 22 Bj „p.y„.Ryi9.g.Ly.t? tnate .Ohia
Ri = H o u pyrog I uta m ate i = 0,038, DP (m) = 26 Ri H ou pyroglutamate
I = 0,015, DP (m) 65
Ri - H ou pyroglutamate __
ON,.
i
C, H|.
t K·- -γτ v v' v v 'y\ 1 h1··’ /
O
I i = 0,017, DP (m) = 60 i R1=CH3-CO-, H ou pyrogiutamate _ __________________________________
112
113
Tableau IC : Liste des co-polyaminoacides de formule VII ou Vllb synthétisés selon l'invention.
Partie AB : Synthèse des co-po!yammoacides modifiés par des moiécules hydrophobes dans lesquelles p ™ 1
Co-polyaminoacides de formule VII ou Vila
Exemple AB1 : Co-polyaminoacide ABî - poly-L-giutamate de sodium modifié par la molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2908 g/mol £0J20[ïâiaLn02£hisLABlc.L^ acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3861 g/mol issu de la polymérisation du y-benzyl-L-glutamate M-carboxyanhydrlde initiée par l'hexylamine [000759] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (89,9 g, 341 mmol) pendant 30 min, puis du DMF anhydre (200 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu’à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l’hexylamine (2,05 mL 15,5 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 2 h, refroidi à température ambiante puis coulé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (3 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (2 x 200 mL.) puis séché sous vide à 30 CC pour donner un acide poly(gamma-benzyl-Lglutamique) (PBLG).
[000760] A une solution de PBLG (74,8 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 340 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (240 mL, 1,37 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par
114 filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL) puis avec de l'eau (340 mL).
[000761] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N, Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L.
[000762] La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 %, puis de l’eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L.
[000763] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau (2 x 340 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3861 g/rnol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG).
Cs-pGÎyaminoacide AB1 [000764] Le co-polyaminoacide AB1-1 (10,0 g) est solubilisé dans le DMF (700 mL) à 30-40 °C puis refroidi à 0 °C. La molécule AAI sous forme de sel de chlorhydrate (1,64 g, 3,8 mmol) est mise en suspension dans du DMF (23 mL) et de la triéthylamine (0,39 g, 3,8 mmol) est ensuite ajoutée et le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À la solution de co-polyaminoacide à 0 °C, de la W-méthylrnorpholine (NMM, 7,6 g. 75 mmol) dans le DMF (14 mL) et du chloroformate d'éthyle (ECF, 8,2 g, 75 mmol) sont ajoutés. Après 10 min à 0 °C, la solution contenant la molécule AAI est ajoutée et le milieu maintenu à 30 °C durant 2 h. Le milieu réactionnel est coulé goutte-à-goutte sur 5,5 L d’eau contenant du NaCi à 15 % massique et du HCl (pH 2), puis laissé reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration et séché sous vide pendant environ 30 min. Le solide blanc obtenu est repris dans de l'eau (500 mL) et le pH est ajusté à 7 par ajout lent d’une solution aqueuse de NaOH 1 N, Après filtration sur filtre 0,45 pm, la solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 % puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. Après déchargement, la solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 24,9 mg/g [000765] Un degré de polymérisation moyen (DP) de 23 est estimé par RMN iH dans DzO en comparant l’intégration des signaux provenant de l'hydrophobe greffé à celle des signaux provenant de la chaîne principale.
115
D'après la RMN : i = 0,05 [000766] La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB1 est calculée sur la base des masses molaires des radicaux Ri et R2, des résidus aspartate et/ou glutamate (y compris une liaison amide), du radical hydrophobe, du DS et du DP.
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB1 est de 3945 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn -- 2900 g/mol.
Exemple AB2 : Co-polyaminoacide AB2 - poiy-L-glutamate de sodium modifié par ia moiêcule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3700 g/mol [000767] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AAI (1,64 g, 3,8 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de Mn relative 5200 g/mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AAI est obtenu.
Extrait sec : 14,1 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 35
D'après ia RMN = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB2 est de 5972 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3700 g/mol.
Exemple AB3 : Co-polyaminoacide AB3 - poly-L-gîutamate de sodium modifié par ia molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4900 g/mol [000768] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AAI (3,30 g, 7,6 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre (Mn) relative 5200 g/mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide ABl-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule AAI est obtenu.
Extrait sec : 23,4 mg/g
DP (estimé d’après la RMN 1H) : 35
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB3 est de 6594 g/mol.
D'après la RMN XH : i = 0,10
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4900 g/mol.
116
Exemple AB4 : Co-polyaminoacide AB4 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 1800 g/mol [000769] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA2 (1,09 g, 2,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne Mn = 5600 g/mol (6,3 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 mais avec une étape de déprotection des esters benzyliques utilisant l’iodure de triméthylsiiane selon le protocole décrit dans la publication J. Am. Chem. Soc. 2000, 122, 26-34 (Subramanian G., et al.), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA2 est obtenu.
Extrait sec : 21,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ’Ή) : 35
D'après la RMN ^:1 = 0,052
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB4 est de 6022 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1800 g/mol.
Exemple AB5 : Co-polyaminoacsde AB5 - pely-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol [000770] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,06 g, 3,8 mmol) et à un acide poly-L-glutamique (9,8 g) obtenu par un procédé similaire à celui utiiisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA6 est obtenu.
Extrait sec : 20,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN : 23
D'après la RMN : i = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB5 est de 4079 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.
Exemple AB6 : €@-pellyamm©acide AB6 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/mol [000771] Un acide poly-L-glutamique de masse moyenne Mrs = 3500 g/mol et de degré de polymérisation 22 (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 est solubilisé dans le DMF (420 mL) à 30
117 °C puis maintenu à cette température. En parallèle, le sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (1,47 g, 2,3 mmol) est mis en suspension dans du DMF (12 mL) et de la triéthylamine (0,23 g, 2,3 mmol) est ajoutée, puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À la solution de co-polyaminoacide dans le DMF, de la NMM (7,6 g, 75 mmol), la solution de AA7 puis de la /V-oxyde de 2hydroxypyridine (HOPO, 0,84 g, 7,5 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 °C, puis du EDC (1,44 g, 7,5 mmol) est ajouté et le milieu est remonté à température ambiante durant 2 h. Le miiieu réactionnel est fiitré sur filtre tissé 0,2 mm et coulé au goutte-à-goutte sur 3,5 L. d'eau contenant du NaCi à 15 % massique et du HCl (pH 2) sous agitation. À la fin de l’ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCl 37 %, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis rincé par 100 rnL d’eau. Le solide blanc obtenu est solubilisé dans 500 mL d’eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation, puis la solution est filtrée sur filtre 0,45 pm. La solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 % puis de l'eau, jusqu'à ce que la conductirnétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 21,6 mg/g
DP (estimé d’après la RMN : 20
D'après la RMN 41 : i = 0,025 [000772] La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB6 est de 3369 g/mol.
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.
Exemple AB7 : C©~po8yammoacide AB7 - poîy-L-gîutamaie de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par ia molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/moi [000773] acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3600 g/mol et de DP 21 issu de la polymérisation du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par i'hexyiamine et cappé à l'une de ses extrémités par un groupement acétyle [000774] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (Glu(OBn)-NCA, 100,0 g, 380 mmol) pendant 30 min puis du DMF anhydre (225 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu’à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de i'hexyiamine (1,78 g, 17 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours puis précipité dans du diisopropyiéther (3,4 L). Le précipité
118 est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (225 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissout dans 450 mL de THF. À cette solution sont ajoutés successivement de la DIPEA, (31 mL, 176 mmol) puis de l'anhydride acétique (17 mL, 176 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (3 L.) sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (250 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide polvigamma-benzyl-L-glutarnique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle.
[000775] À une solution du co-polyaminoacide ci-dessus (72 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 335 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (235 mL). Le mélange est agité à température ambiante pendant 3 h 30, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 rnL) puis avec de l'eau (340 mL).
[000776] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1,5 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la solution est diluée par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L, La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu’à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L.
[000777] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, iavé avec de l'eau (330 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3600 g/mol par rapport à un standard de polyoxyethylene (PEG), et de degré moyen de polymérisation 21.
Co-polyaminoacide AB7 :
[000778] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (1,43 g, 2,2 mmol) et au co-polyaminoacide AB7-1 (10,0 g), un acide poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.
Extrait sec : 24,3 mg/g
119
DP (estimé d'après la RMN Ή) : 21
D'après la RMN : i = 0,03
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB7 est de 3677 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Μη = 3300 g/mol.
Exemple ÂB8 : Co-polyamirseacide ABS - poiy-L-giutamate de sodium modifié par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3600 g/moî
Co-polyaminoacide ABS -1 acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3800 g / mol et de degré de polymérisation 24 issu de la polymérisation du y-méthyl-L-glutarnate A'-carboxyanhydride initiée par l'ammoniac [000779] Par un procédé similaire à celui décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226 appliqué au γ-méthyl-L-acide glutamique M-carboxyanhydride (25,0 g, 133,6 mmol) et à une solution d'ammoniaque 0,5 N dans le dioxane (12,1 mL, 6,05 mmol), un acide poly-L-glutamique est obtenu.
Co-polyaminoacide AB8 :
[000780] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,1 g, 3,24 mmol) et au co-polyaminoacide AB8-1 (14,3 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA7 est obtenu.
Extrait sec : 25,2 mg/g
DP (estimé d'après la RMN : 24
D’après la RMN 1H : i = 0,03
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB8 est de 4099 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn == 3600 g/mol.
Exemple ÀB9 : Co-polyaminoacide AB9 - psiiy-L-giutamate de sodium modifié par la molécuie AA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3200 g/mol [000781] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA3 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA3 est obtenu.
Extrait sec : 14,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN '“H) : 30
D'après la RMN ^:1 = 0,12
120
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB9 est de 6192 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Μη - 3200 g/mol.
Exemple AB1O : Co-polyaminoacide AB1O - poly-L-gtetamate de sodium modifié par la molécule ÂA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol [000782] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du copolyaminoacide AB7 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA4 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA4 est obtenu,
Extrait sec : 18,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 1H) : 25
D'après la RMN Tl : i = 0,08
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB10 est de 4870 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.
Exemple ABU : Co-polyaminoacide ABU ~ poiy-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA5 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2700 g/mol [000783] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de ia molécule AA5 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA5 est obtenu.
Extrait sec : 20,2 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 1H) : 23
D'après la RMN : i = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyarninoacide ABU est de 4072 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~ 2700 g/moï.
Exempte ÂBS.2 : Co-polyaminoacide AB12 - poly-L-gtetamate de sodium modifié par la molécule AA8 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3000 g/moi [000784] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB1 appliqué au sei de chlorhydrate de la molécule AA8 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du
121 co-polyaminoacide ABl-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA8 est obtenu.
Extrait sec : 19,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 26
D’après la RMN 1H : i = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB12 est de 4477 g/moi. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Μη == 3000 g/moi.
Exemple AB13 : Co-polyaminoacide AB13 - poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule AA9 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000785] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA9 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide ABl-1 en utilisant l'isoamylamine comme initiateur en place de l'hexyiamine, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA9 est obtenu.
Extrait sec : 22,3 mg/g
DP (estimé d’après la RMN 1H) : 35
D'après ia RMN ^:1 = 0,12
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB13 est de 7226 g/moi. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.
Exemple AB21 : Co-polyaminoacide AB21 - poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3400 g/maî [000786] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB6 appliqué au sel de chlorhydrate de ia molécule AA7 (2,44 g, 2,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du co-polyaminoacide ABl-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule AA7 est obtenu.
Extrait sec : 22,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 41) : 22
D'après la RMN '41 : i = 0,056
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB21 est de 4090 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3400 g/mol.
122
Exemple AB22 : Co-polyaminoacide AB22 - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyie et modifié par Sa molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/mol [000787] Le sel de chlorhydrate de la molécule AA10 (4,56 g, 11,29 mmol) est mis en solution dans du chloroforme (60 mL) et de la triéthylarnine (1,14 g, 11,29 mmol) est ajoutée. À une solution de co-polyaminoacide (10,0 g, 75,3 mmol) obtenu selon un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide B7-1 dans le DMF (420 mL), de la NMM (7,6 g, 75,26 mmol), puis de la HOPO (2,51 g, 22,58 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 °C, puis du EDC (4,33 g, 22,58 mmol) est ajouté, le milieu est agité 1 h à 0 °C puis la solution de molécule AA10 est ajoutée. Le mélange réactionnel est agité durant 2 h entre 0 °C et température ambiante. Le milieu réactionnel est filtré sur filtre tissé 0,2 mm et coulé au goutte-à-goutte sur 3,95 L d'eau contenant du NaCi à 15 % massique et du HCl (pH 2) sous agitation. À la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCI 37 %, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis solubilisé dans 780 mL d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu'à pH 7 sous agitation. Après filtration sur filtre 0,45 pm, ia solution est diluée par addition d’eau puis de l'acétone est ajoutée pour obtenir une solution contenant 30 % massique d'acétone. Cette solution est filtrée sur filtre de charbon actif puis l'acétone est distillée (40 °C, 100 mbar). Après filtration sur filtre 0,45 pm, le produit est purifié par ultrafiltration contre une solution aqueuse de NaCi à 0,9 %, une solution de tampon carbonate (150 mM), une solution aqueuse de NaCi à 0,9 %, une solution de tampon phosphate (150 mM), une solution aqueuse de NaCi à 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution est ensuite concentrée, filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 19,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN T-l) : 38
D'après ia RMN ]H : i = 0,16
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB22 est de 7877 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.
Exempte AB23 ·. Co-polyaminoacide AB23 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 7608 g/mol acide poly-L-glutamique issu de la polymérisation du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par i'hexylamine et cappé à l'une de ses extrémités par un groupement pyroglutamate
123 [000788] Un acide poly-L-glutamique (20,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB1-1 est solubilisé dans le DMF à 80 °C puis maintenu à cette température. Après 24 h, le milieu réactionnel est coulé dans une solution de NaCI à 15 % et à pH 2. Après 4 h, le solide blanc est collecté par filtration, rincé à l'eau, puis séché sous vide à 30 °C.
Co-polyamînoamide AB23 [000789] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB22 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 (2,742 g, 6,79 mmol) et au co-polyaminoacide AB23-1 (9,0 g), un acide poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu.
Extrait sec : 21,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN SH) : 60
D'après la RMN 1H : i == 0,1
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB23 est de 11034 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 7600 g/mol.
Exempte AB24 : Co-polyaminoacide AB24 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par !a molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4300 g/mol [000790] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu.
Extrait sec : 22,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ΧΗ) : 39
D’après la RMN : i = 0,15
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB24 est de 7870 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn 4300 g/rnol.
Exemple AB25 : Co-polyaminoacide AB25 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule ÂA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000791] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du
124 co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-giutamate de sodium modifié par ia molécule AA10 est obtenu.
Extrait sec : 25,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 1-H) : 39
D'après la RMN iH : i = 0,2
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB25 est de 8509 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn ~ 4200 g/mol.
Exempte AB26 : Cs-poiyammoacide AB26 - poiy-L-gtetamate de sodium et modifié par ia molécule AÂ10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2700 g/m©!
[000792] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA 10 est obtenu.
Extrait sec : 23,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ·ιΗ) : 22
D'après la RMN ^:1 = 0,21
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB26 est de 4899 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2700 g/mol.
Exemple AB27 : Co-polyaminoacide AB27 - poiy-L-gÎutamate de sodium et modifié par te molécule AA11 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4500 g/moi [000793] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de ia molécule AA11 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA11 est obtenu.
Extrait sec : 26,8 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 3Ή) : 39
D'après la RMN = 0,15
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB27 est de 8808 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4500 g/mol.
125
Exemple AB28 : Co-polyaminoacide AB28 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule AA12 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4000 g/mol [000794] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA12 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule AA12 est obtenu.
Extrait sec : 22,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ’Ή) : 39
D'après la RMN ^:1 = 0,15
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB28 est de 7706 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4000 g/mol.
Exemple AB29 : Co-poSyaminoacide AB29 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule AA13 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4008 g/mol <^cuojy.âmmoadde_AB29:.l : acide poly-L-glutamique issu de la polymérisation du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine [000795] Dans un réacteur à double enveloppe, du y-benzyl-L-glutamate /Vcarboxyanhydride (500 g, 1,90 mol) est solubilisé dans du DMF anhydre (1100 mL). Le mélange est alors agité jusqu'à complète dissolution, refroidi à 0 °C, puis de l'hexylamine (6,27 mL, 47,5 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité à 0 °C pendant 5 h, entre 0 °C et 20 °C pendant 7 h, puis à 20 °C pendant 7 h. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 65 °C pendant 2 h, refroidi à 55 °C et du méthanol (3300 rnL) est introduit en 1 h 30. Le mélange réactionnel est alors refroidi à 0 ’Cet laissé sous agitation pendant 18 h. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé au diisopropyléther (2 x 800 ml.) puis séché sous pression réduite à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-giutamique) (PBLG).
[000796] À une solution de PBL.G (180 g) dans du /V,/V-diméthylacétamide (DMAc, 450 mL) est ajouté du Pd/AbOs (36 g) sous atmosphère d'argon. Le mélange est placé sous atmosphère d'hydrogène (10 bar) et agité à 60 °C pendant 24 h. Après refroidissement à température ambiante et filtration du catalyseur sur fritté P4 puis sur membrane Omnipore 0,2 pm PTFE hydrophile, une solution d'eau à pH 2 (2700 mL) est coulée goutte-à-goutte sur la solution de DMAc, sur une période de 45 min et sous agitation. Après 18 h sous agitation, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec de l’eau puis séché sous pression réduite à 30 °C
126
Co-pelyaminsaeide AB29 [000797] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA13 et au copolyaminoacide AB29-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA13 est obtenu.
Extrait sec : 16,1 mg/g
DP (estimé d'après la RMN '41) : 40
D’après la RMN !H : i = 0,15
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB29 est de 7734 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Μη = 4000 g/mol.
Exemple AB30 : Co-polyaminoacide AB30 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par la molécule AA10 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4300 g/msl [000798] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB29 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB29-1 en utilisant la molécule AA10 comme initiateur en place de l'hexylamine, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu. Extrait sec : 29,2 mg/g
DP (estimé d’après la RMN : 40
D'après la RMN *H : i = 0,125
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB30 est de 7682 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn ~ 4300 g/mol.
Exemple AB31 : Co-polyaminoacide AB30 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par Îa molécule AA1Q et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 6300 g/mol [000799] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB29 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA10 et à un acide poly-L-glutamique obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide AB29-1 en utilisant la molécule AA10 comme initiateur en place de l'hexylamine, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA10 est obtenu. Extrait sec : 23,1 mg/g
DP (estimé d'après ia RMN : 40
D'après la RMN '!H : i = 0,175
127
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB31 est de 8337 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn == 6300 g/mol.
Exemple AB32 : Co-polyaminoacide AB32 - poly-L-gHirtamate de sodium et modifié par la molécule AA14 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4700 g/mol [000800] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB29 appliqué à la molécule AA14 et à l’acide poly-L-glutamique AB29-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule AA14 est obtenu.
Extrait sec : 13,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN *H) : 40
D'après la RMN ^:1 = 0,109
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB32 est de 8599 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 4700 g/mol.
Co-polyamînoacides définis de formule VII ou Vllb
Exempte AB14 : Co-polyaminoacide AB14 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3400 g/moi [000801] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule AAI (2,03 g, 4,70 mmol), du chloroforme (5 mL), du tamis moléculaire 4 Â (1,3 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite ÏRN 150 (1,3 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (30 mL) pour être utilisé directement dans ia réaction de polymérisation.
[000802] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du γ-benzyi-L-giutamate /Vcarboxyanhydride (25,59 g, 97,2 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (140 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule AAI préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte-àgoutte dans du diisopropyléther (1,7 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (140 mL.) puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (160 mL), et une
128 solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (62 mL, 354 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther/eau et sous agitation (1,9 L), Après 2. h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1 : 1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (280 mL) puis avec de l'eau (140 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (530 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 800 mL. Le mélange est fiitré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.
Extrait sec : 24,1 mg/g
DP (estimé par RMN 'Ή) = 25 donc i = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB14 est de 3378 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3400 g/mol.
Exemple AB15 : Co-polyaminoacide AB15 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) 4100 g/mol [000803] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,16 g, 3,94 mmol) et à 25,58 g (97,2 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu. Extrait sec : 45,5 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 30 donc i ----- 0,033
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB15 est de 5005 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4100 g/mol.
Exemple AB16 : Co-palyaminoacide AB16 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 6500 g/moi [000804] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (2,39 g, 4,36
129 mmol) et à 50,0 g (189,9 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu. Extrait sec : 28,5 mg/g
DP (estimé par RMN :H) = 48 donc i == 0,021
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB16 est de 7725 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn == 6500 g/mol.
Exempte AB17 : Co-polyammoacsde AB17 - poiy-L-gtetamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3500 g/mol [000805] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA7 (2,80 g, 4,32 mmol) et à 25,0 g (94,9 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule AA7 est obtenu. Extrait sec : 25,2 mg/g
DP (estimé par RMN rH) = 26 donc i = 0,038
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB17 est de 4500 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3500 g/mol.
Exempte AB18 : Co-polyaminoacide ABiS - poiy-L-giutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par te molécule AA7 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3700 g/mol [000806] Un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA7 est obtenu par polymérisation du γ-méthyl /V-carboxyanhydride d’acide glutamique (25,0 g, 133,6 mmol) en utilisant le sel chlorhydrate de la molécule AA7 (2,80 g, 4,32 mmol) comme initiateur et en effectuant une déprotection des esters méthyliques par utilisation d'une solution d'acide chlorhydrique à 37 % selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226,
Extrait sec : 44,3 mg/g
DP (estimé par RMN :Η) = 22 donc i = 0,045
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB18 est de 3896 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3700 g/mol.
130
Exempte AB19 : Co-polyaminoacide AB19 - poiy-L-gtetamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10500 g/mol [000807] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (1,64 g, 2,99 mmol) et au y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (49,3 g, 187 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 est obtenu. Extrait sec : 23,4 mg/g
DP (estimé par RMN *Η) = 65 donc i == 0,015
La masse molaire moyenne calculée du co-poiyaminoadde AB19 est de 10293 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 10500 g/mol.
Exemple AB20 : Co-polyaminoacide AB20 - poiy-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié à une de ses extrémités par la molécule AA6 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10400 g/mol [000808] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule AA6 (0,545 g, 1,00 mmol), du chloroforme (10 mL), du tamis moléculaire 4 Â (3 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 (3 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (10 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.
[000809] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate Ncarboxyanhydride (17,0 g, 64,6 rnrnoi) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (30 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule AA6 préparée comme décrit précédemment est Introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis précipité dans du diisopropyléther (0,6 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (40 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissout dans 80 mL de THF. À cette solution sont ajoutés successivement de la DIPEA, (1,7 mL, 9,8 mmol) puis de l'anhydride acétique (0,9 mL, 9,5 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (480 mL) sur une durée de 30 min et sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (80 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(gamma-benzyl-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement
131 acétyle et modifié à l’autre de ses extrémités par la molécule AA6 sous ia forme d'un solide blanc.
[000810] Le solide est dilué dans du TFA (65 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (45 mL, 257,0 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 4 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther/eau et sous agitation (780 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (70 mL) puis avec de l'eau (70 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (300 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 440 mL. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.
Extrait sec : 21,5 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 60 donc i = 0,017
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB20 est de 9619 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10400 g/mol.
Exemple AB33 : Co-polyaminoacide AB33 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA1S et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 1800 g/moi [000811] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB14 appliqué à la molécule AA15 (0,82 g, 1,34 mmol) et à 7,75 g (29,4 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, une solution de poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA15 est obtenu. Extrait sec : 16,8 mg/g
DP (estimé par RMN :H) - 22 donc i = 0,045
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB33 est de 3897 g/moi. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1800 g/mol.
132
Exemple AB34 : Co-polyaminoacide AB34 - po!y-L-giutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2600 g/mol [000812] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate /Vcarboxyanhydride (70.9 g, 269,3 mmol) est solubilisé dans du DMF anhydre (125 mL). Le mélange est refroidi à 4 °C, puis une solution de molécule AA4 sous forme d'amine neutre (6,80 g, 12,23 mmol) dans le DMF (35 mL) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 18 h, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le milieu réactionnel est alors refroidi à température ambiante et versé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (2,4 L) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (2 x 125 mL) puis séché sous pression réduite à 30 °C pour donner un solide blanc. Le solide est solubilisé dans du /V,/V-dîméthylacétamide (DMAc, 150 mL) puis du Pd/AhCh (6 g) est ajouté sous atmosphère d'argon. Le mélange est placé sous atmosphère d'hydrogène (10 bar) et agité à 60 °C pendant 24 h. Après refroidissement à température ambiante et filtration du catalyseur sur fritté P4 puis sur membrane Omnipore 0,2 pm PTFE hydrophile, une solution d'eau à pH 2 (900 mL) est coulée goutte-à-goutte sur la solution de DMAc, sur une période de 45 min et sous agitation. Après 18 h sous agitation, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec de l'eau puis séché sous pression réduite à 30 °C. Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (1,25 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 1 N. Le pH est ensuite ajusté à pH 12 et la solution est maintenue sous agitation pendant 1 h. Après neutralisation à pH 7, la solution est filtrée sur 0,2 pm, diluée avec de l'éthanol afin d’obtenir une solution contenant 30 % massique d’éthanol, puis filtrée sur filtre de charbon actif (3M R53SLP). La solution obtenue est filtrée sur 0,45 pm et purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que ia conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et ie pH est ajusté à 7. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.
Extrait sec : 38,1 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 23 donc i = 0,043
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB34 est de 3991 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.
133
Exemple AB35 : Co-polyaminoacide AB35 - poiy-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA14 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2S00 g/mol [000813] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA14 (0,4 g, 0,65 mmol) en solution dans le chloroforme (6,5 mL) et à 3,79 g (14,4 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate Ncarboxyanhydride en solution dans le DMF (6,5 mL), et en omettant l'étape de filtration sur charbon actif, une solution de poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA14 est obtenu.Extrait sec : 21,0 mg/g
DP (estimé par RMN Ή) = 22 donc i = 0,045
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB35 est de 3896 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2600 g/mol.
Exemple AB36 : Co-poiyaminoacide AB36 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA16 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000814] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA16 (3,28 g, 4,67 mmol) et à 27,02 g (102,6 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, une solution de poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA16 est obtenu. Extrait sec : 23,9 mg/g
DP (estimé par RMN Hi) = 22 donc i = 0,045
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB36 est de 3987 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/moi.
Exemple AB37 : Co-polyaminoacide AB37 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule AA17 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000815] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB34 appliqué à la molécule AA17 (4,50 g, 9,73 mmol) et à 56,33 g (214,0 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, une solution de poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule AA17 est obtenu. Extrait sec : 26,8 mg/g
DP (estimé par RMN XH) - 24 donc i = 0,042
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide AB37 est de 4049 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol.
134
BB : Synthèse des des composés intermédiaires hydrophobes Hy permettant d'obtenir Ses radicaux -Hy dans lesquelles p = 2 [000816] Les composés intermédiaires hydrophobes sont représentés dans ie tableau suivant par le composé intermédiaire hydrophobe correspondante avant greffage sur le co-polyaminoacide.
135 /C13H27 ! I’ °
XNH CZZ
ΗΛ
L
NH
BAS
NH
BA6
C |5H31
NH nq
N., /C’^· h ô
NH
NH C15H31 _,NH
HH <'g
BA7
Z^'o
N h2i
O
MN
Tableau ID : Liste des composés intermédiaires hydrophobes synthétisés selon l'invention.
136
BA : synthèse des composés intermédiares hydrophobes Hy permettant d'obtenir les radicaux -Hy dans lesquelles p = 2
Exemple BAI : molécule BAI
Molécule B,1 : Produit obtenu par la réaction entre l'acide décanoïque et ia L-proline. [000817] À une solution d'acide décanoïque (14,28 g, 82,91 mmol) dans le THF (520 mL) à 0 °C sont ajoutés successivement du dicydohexyle carbodiimide (DCC) (16,29 g, 78,96 mmol) et du /V-hydroxysuccinimide (NHS) (9,09 g, 78,96 mmol). Après 60 h d'agitation à température ambiante, le milieu est refroidi à 0 °C pendant 20 min, filtré sur fritté. De ia L-proline (10 g, 86,86 mmol), de la diisopropyléthylamine (DIPEA) (68,8 mL) et de l’eau (60 mL) sont ajoutés au filtrat. Après 24 h d'agitation à température ambiante, le milieu est dilué avec de l'eau (300 mL). La phase aqueuse est lavée avec de l'acétate d'éthyle (2 x 250 mL), acidifiée jusqu'à pH ~1 avec une solution aqueuse d'HCI 1 N puis extraite avec du dichlorométhane (3 x 150 mL). Les phases organiques combinées sont séchées sur Na2SO<s, filtrées, concentrées sous vide et le résidu est purifié par chromatographie sur gel de silice (cyclohexane, acétate d'éthyle).
Rendement : 14,6 g (69 %)
RMN Ψ (CDCh, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (12H) ; 1,65 (2H) ; 2,02 (3H) ; 2,34 (2H) ; 2,41 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,58 (1H).
LC/MS (ESI) : 270,2; (calculé ([M + H]+) : 270,4).
Molgij.j.le_B2._ Produit obtenu par ia réaction entre la molécule B1 et la L-lysine. [000818] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule Bl. appliqué à la molécule B1 (14,57 g, 54,07 mmol) et à la L-lysine (4,15 g, 28,39 mmol), une huile jaune est obtenue.
Rendement : 16,4 g (93 %)
RMN !H (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,2.6 (24H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (12H) ; 2,53 (0,2H) ; 2,90 (0,8H) ; 3,45-3,75 (5H) ; 4,50-4,70 (3H) ; 7,82 ( 1H).
LC/MS (ESI) : 649,6; (calculé ([M + H]+) : 649,9).
Molécule B3 : Produit obtenu par réaction entre la molécule B2 et la N-Bocéthyiènediamine.
[000819] À une solution de molécule B2 (16,4 g, 25,27 mmol) dans le THF (170 mL) sont ajoutés de la DIPEA (8,80 mL) et du 2-(lH-benzotriazoi-l~yl)-l, 1,3,3tétraméthyluronium tétratluoroborate (TBTU, 8,52 g, 26,54 mmol) à température ambiante. Après 30 min d'agitation, de la BocEDA (4,45 g, 27,8 mmol) est ajoutée.
137
Après agitation à température ambiante pendant 2 h, Je solvant est évaporé sous pression réduite et le résidu est dilué avec de l'acétate d'éthyle (400 mL). La phase organique est lavée avec de l'eau (250 mL), une solution aqueuse saturée de NaHCOs (250 ml), une solution aqueuse de 1 N HCI (250 mL), une solution aqueuse saturée en NaCI (250 mL.) et est séchée sur NazSCh. Après filtration et concentration sous vide, le résidu obtenu est purifié par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol) pour donner une huile incolore.
Rendement : 12,8 g (64 %)
RMN 'Ή (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,25-1,60 (42H) ; 1,80-2,05 (4H) ; 2,15-2,45 (9H) ; 3,10-3,75 (10H) ; 4,30 (1H) ; 4,50 (2H) ; 5,50 (0,6H) ; 5,89 (0,2H) ; 6,15 (0,2H) ; 7,03 (1H) ; 7,47 (1H).
LC/MS (EST) : 791,8; (calculé ([M + H]+) : 792,1).
Molécule BAI [000820] À une solution de la molécule B3 (12,78 g, 16,15 mmol) dans le dichlorométhane (110 mL) à 5 °C est ajoutée une solution de HCl 4 N dans le dioxane (20,2 mL}. Après 20 h d'agitation à 5 °C, le milieu est concentré sous vide. Le résidu obtenu est dissout dans ie méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BAI sous forme de sei de chlorhydrate. Rendement. : 11,4 g (97 %)
RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-1,50 (33H) ; 1,57 (1H) ; 1,70-2,40 (12H) ; 2,82 (2H) ; 3,00 (2H) ; 3,25-3,70 (6H) ; 4,05-4,50 (3H) ; 7,75-8,45 (6H).
LC/MS (ESI) : 691,6 ; (calculé ([M+H]+) : 692,0).
Exemple BA2 : molécule BA2
Molécule B4 : Produit obtenu par la réaction entre l'acide laurique et la L-proline. [000821] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à l'acide laurique (31,83 g, 157,9 mmol) et à la L-proline (20 g, 173,7 mmol), une huile jaune est obtenue.
Rendement : 34,3 g (73 %)
RMN 4-1 (CDCh, ppm) : 0,87 (3H) ; 1,26 (16H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,35 (2H) ; 2,49 (1H) ; 3,48 (1H) ; 3,56 (1H) ; 4,60 (1H).
LC/MS (ESI) : 298,2 ; (calculé ([M + H]+) : 298,4).
138
Molécule B 5 : Produit obtenu par la réaction entre la molécule B4 et la L-lysine. [000822] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B4 (33,72 g, 113,36 mmol) et à ia L-lysine (8,70 g, 59,51 mmol), un solide blanc est obtenu.
Rendement : 26,2 g (66 %)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,26 (32H) ; 1,35-1,65 (8H) ; 1,85-2,35 (15H) ; 2,87 (1H) ; 3,40-3,75 (5H) ; 4,50-4,75 (3H) ; 7,87 (1H).
LC/MS (ESI) : 705,6 ; (calculé ([M + H]+) : 706,0).
Molécule B6......; produit obtenu par réaction entre la N-Boc-éthylènedïamïne et la molécule
B5.
[000823] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B5 (25,74 g, 36,51 mmol) et à la BocEDA (6,43 g, 40,16 mmol), une huile incolore est obtenue.
Rendement : 30,9 g (quantitatif)
RMN 1-H (CDG;, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,35-1,65 (50H) ; 1,85-2,35 (13H) ; 3,05-3,75 (10H) ; 4,25-4,65 (3H) ; 5,50 (0,4H) ; 5,88 (0,2H) ; 6,16 (0,2H) ; 7,08 (1H) ; 7,26 (1H) ; 7,49 (0,2H).
LC/MS (ESI) : 847,8 ; (calculé ([M + H]+) : 848,2).
Molécule BA2 [000824] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à ia molécule B6 (30,9 g, 36,47 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissout dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA2 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.
Rendement : 27,65 g (97 %)
RMN (DMSO-de, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-2,40 (54H) ; 2,75-3,1.5 (4H) ; 3,25-3,60 (6H) ; 4,05-4,50 (3H) ; 7,50-8,50 (6H).
LC/MS (ESI) : 747,6 ; (calculé ([M + H]+) : 748,1).
Exempte BA3 : molécule BAS
Molécule B7 : Produit obtenu par la réaction entre l'acide myristique et ia L-proline. [000825] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de ia molécule B1 appliqué à l'acide myristique (18,93 g, 82,91 mmol) et à ia L-proline (10 g, 86,86 mmol), une huile jaunâtre est obtenue.
Rendement : 20 g (78 %)
139
RMN ‘H (CDCh, ppm) : 0,88 (3H) ; 1,28 (20H) ; 1,70 (2H) ; 1,90-2,10 (3H) ; 2,36 (2H) ; 2,51 (1H) ; 3,47 (1 H) ; 3,56 (1H) ; 4,61 (1H).
LC/MS (ESI) : 326,2; (calculé ([M+H]+) : 326,6).
Moiêçule.BS,: Produit obtenu par la réaction entre la molécule B7 et la L-lysine [000826] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B7 (20,02 g, 61,5 mmol) et à la L-lysine (4,72 g, 32,29 mmol), un solide blanc est obtenu.
Rendement : 12,3 g (53 %)
RMN 1H (DMSO-dô, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,26 (40H) ; 1,35-1,50 (6H) ; 1,50-2,10 (10H) ; 2,10-2,25 (4H) ; 3,01 (2H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 7,68 (0,6H) ; 7,97 (1H) ; 8,27 (0,4H) ; 12,50 (1H).
LC/MS (ESI) : 761,8 ; (calculé ([M+ H]+) : 762,1).
Molécule B9 : Produit obtenu par la réaction entre la W-Boc-éthylènediamine et la molécule B8.
[00082.7] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B8 (12 g, 15,77 mmol) et à la BocEDA (3,03 g, 18,92 mmol), une huile incoiore est obtenue après purification par colonne chromatographique sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol).
Rendement : 12,5 g [88 %)
RMN ‘H (DMSO-dô, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,20-1,55 (55H) : 1,50-2,25 (14H) ; 2,95-3,10 (6H) ; 3,31-3,55 (4H) ; 4,10-4,40 (3H) ; 6,74 (1H) ; 7,60-8,25 (3H).
LC/MS (ESI) : 904,1 ; (calculé ([M + H]+) : 904,3).
Moiécuie BA3 [000828] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B9 (12,5 g, 13,84 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est dissout dans le méthanol et évaporé sous vide, cette opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA3 sous forme de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.
Rendement : 9,2 g (79 %)
RMN ’H (DMSO-de, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-1,65 (48H) ; 1,70-2,35 (12H) ; 2,85 (2H) ; 3,01 (2H) ; 3,25-3,65 (6H) ; 4,10-4,50 (3H) ; 7,70-8,40 (6H).
LC/MS (ESI) : 803,9 ; (calculé ([M+H]+) : 804,2).
J 140 ΐ
ri
Exemple BA4 : molécule BA4
Molécule B1.0 ; Produit obtenu par la réaction entre la molécule B8 et le Boc-l-amino4,7,10-trioxa-13-tridecane amine.
j [000829] Par un procédé similaire à ceiui utilisé pour la préparation de ia molécule
I B3 appliqué à la molécule B8 (29,80 g, 39,15 mmol) et au Boc-l-amino-4,7,10-trioxa13-tridécane amine (15,05 g, 46,96 mmol), une huile épaisse incolore est obtenue. Rendement : 25,3 g (61 %) { RMN 1H (DMSO-de, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,25-2,35 (75H) ; 2,85-3,20 (6H) ; 3,25-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 6,38 (0,lH) ; 6,72 (0,9H) ; 7,50-8,25 (3H).
LC/MS (ESI) : 1064,2 ; (calculé ([M + H]+) : 1064,5).
ΐ
Molécule BA4 [000830] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule j BAI appliqué à la molécule B10 (25,3 g, 23,8 mmol), le résidu obtenu après j concentration sous vide est dissout dans ie méthanol et évaporé sous vide, cette j opération étant répétée 4 fois pour donner un solide blanc de molécule BA4 sous forme j de sel de chlorhydrate après séchage sous pression réduite.
[ Rendement : 20,02 g (84 %)
I' RMN XH (DMSO-de, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,15-2,35 (66H) ; 2,80-3,20 (6H) ; 3,30-3,65 (16H) ; 4,10-4,45 (3H) ; 7,55-8,60 (6H).
LC/MS (ESI) : 964,9 ; (calculé ([M+H]+) : 964,6).
I
Exemple BA5 : molécule SA5 j
Molécule Ml, : Produit obtenu par réaction entre la molécule Al et ia L-Lysine [000831] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule Al (19,10 g, 54,02 mmol) et à la L-lysine (4,15 g, 28,36 ί mmol), un résidu huileux est obtenu apres concentration du milieu réactionnel sous pression réduite. Ce résidu est dilué dans de l'eau (150 mL), lavé à l'acétate d'éthyle (2 x 75 mL) puis ia ohase aqueuse est acidifiée jusqu'à pH 1 par addition lente de HCI 6 N. Le produit est extrait 3 fois au dichlorométhane, la phase organique est séchée sur j NazSOi puis filtrée et concentrée sous pression réduite pour donner 11,2 g de résidu i
huileux jaune. Parallèlement, la phase organique d'acetate d'éthyle précédente est lavée avec une solution aqueuse de HCl 2 N (2 x 75 mL), une solution aqueuse saturée en • NaCI (75 mL), séchée sur NazSCU, filtrée et concentrée pour donner 10,2 g de résidu huileux jaune. Un solide blanc est obtenu après recristallisation de chacun de ces résidus dans l'acétone.
Rendement : 11,83 g (54 %)
141
RMN :H (CDCh, ppm) : 0,87 (6H) ; 1,06-2,44 (70H) ; 2,78-2,96 (IH) ; 3,35-3,75 (5H) ; 4,28-4,43 (O,1H) ; 4,43-4,52 (0,2H) ; 4,52-4,61 (1,8H) ; 4,61-4,75 (0,9H) ; 7,748,02 (2H).
LC/MS (ESI) : 818,0 ; (calculé ([M + H]+) : 818,7).
Molécule B12 : Produit obtenu par couplage entre la molécule Bll et la N-Bocéthylènediamïne [000832] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule Bll (18,00 g, 22,02 mmol) en solution dans le THF et à la BocEDA (4,23 g, 26,43 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation deux fois dans l’acétonitrile.
Rendement : 17,5 g (83 %)
RMN Ή (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,15-2,29 (79H) ; 2,92-3,12 (6H) ; 3,30-3,59 (4H) ; 4,06-4,13 (0,65H) ; 4,16-4,29 (2H) 4,38-4,42 (0,35H) ; 6,71-6,76 (IH) ; 7,607,69 (1,3H) ; 7,76-7,81 (0,65H) ; 7,93-7,97 (0,35H) ; 8,00-8,04 (0,35H) ; 8,10-8,17 (0,35H).
LC/MS (ESI) : 960,4 ; (calculé ([M + H]+) : 960,8).
Moiéeuie BAS [000833] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B12 (24,4 g, 25,43 mmol), le résidu obtenu après concentration sous vide est solubilisé dans du dichlorométhane (150 mL), la phase organique est lavée 2 fois avec une solution aqueuse de soude 2 N (90 mL). De l'acétonitrile (120 mL) est ajouté et le dichlorométhane est éliminé par concentration sous pression réduite. Le milieu est ensuite laissé au repos pendant 72 h et un solide blanc est obtenu après filtration et rinçage à l'acétonitrile puis séchage sous pression réduite. Cette opération est répétée 4 fois.
Rendement : 1.4,28 g (65 %)
RMN !H (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,06-2,32 (70H) ; 2,53-2,63 (2H) ; 2,89-3,61 (10H) ; 4,04-4,43 (3H) ; 7,55-7,62 (0,65H) ; 7,65-7,72 (0,65H) ; 7,80 (0,65H) ; 7,91 (0,35H) 8,03 (0,35H) ; 8,14-8,23 (0,35H).
LC/MS (ESI) : 860,0 ; (calculé ([M + H]+) : 860,8).
142
Exemple BA6 : molécule BA6
Molécule B13 : Produit obtenu par la réaction entre le /V-(tert-butoxycarbonyl)-l,6diaminohexane et ia molécule B8.
[000834] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B8 (10 g, 13,14 mmol) et au /V-(tert-butoxycarbonyl)-l,6diaminohexane (3,41 g, 15,77 mmol) dans le dichlorométhane, un solide bianc est obtenu après recristallisation dans l’acétonîtrile.
Rendement : 10,7 g (85 %)
RMN 41 (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,17-2,40 (79H) ; 3,00-3,71 (10H) ; 4,26-4,58 (3H) ; 4,67 (1H) ; 6,74 (1H) ; 7,34-7,49 (2H).
LC/MS (ESI) : 959,9 ; (calculé ([M + H]+) : 959,8).
Molécule BAS [000835] Après un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B13 (10,5 g, 10,94 mmol), une solution aqueuse de NaOH 2 N est ajoutée goutte-à-goutte au milieu réactionnel refroidi à 0 °C. La phase aqueuse est extraite au dichlorométhane puis la phase organique est lavée 3 fois avec une solution aqueuse de NaCI 5 %. Après séchage sur NazSCU, la phase organique est filtrée, concentrée sous vide et le résidu est recristallisé dans l'acétonîtrile.
Rendement : 5,4 g (58 %)
RMN (CDCh, ppm) : 0,88 (6H) ; 1,19-2,40 (72H) ; 2,67 (2H) ; 3,03-3,70 (8H) ; 4,26-4,57 (3H) ; 6,71 (1H) ; 7,39-7,49 (2H).
LC/MS (ESI) : 859,8 ; (calculé ([M+H]+) : 859,7).
Exemple BA7 : molécule BA7
Molécule B14 : Produit obtenu par couplage entre la molécule B7 et l'acide 2,3diaminopropionique [000836] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B1 appliqué à la molécule B7 (80,00 g, 245,78 mmol) et au dichlorhydrate de l'acide 2,3-diaminopropionique (22,84 g, 129,04 mmol), un solide blanc est obtenu après recristallisation dans l'acétonîtrile.
Rendement : 69 g (78 %)
RMN JH (DMSO-Ù6, ppm) : 0,86 (6H) ; 1,08-1,38 (40H) ; 1,40-1,55 (4H) ; 1,68-2,30 (12H) ; 3,16-3,66 (6H) ; 4,20-4,39 (3H) ; 7,67-8,31 (2H) ; 12,70 (1H).
LC/MS (ESI) : 719,4 ; 741,5 ; (calculé ([M + H]+) : 719,6 ; ([M + Na]+) : 741,6).
143
Molecule.........Bl5 : produit obtenu par couplage entre la molécule B14 et la N-Bocethylènediamine [000837] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation de la molécule B3 appliqué à la molécule B14 (32,00 g, 44,50 mmol) en solution dans le dichlorométhane et à la BocEDA (8,56 g, 53,40 mmol), une huile incolore est obtenue après purification par chromatographie sur gel de silice (acétate d'éthyle, méthanol). Rendement : 24,5 g (64 %)
RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,16-2,42 (65H) ; 2,89-3,14 (4H) ; 3,17-3,66 (6H) ; 4,11-4,43 (3H) ; 6,77 (1H) ; 7,38-8,23 (3H).
LC/MS (ESI) : 861,7 ; (calculé ([M + H]+) : 861,7).
MoiécuSe BA7 [000838] Après un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de la molécule BAI appliqué à la molécule B15 (24,50 g, 28,45 mmol), le milieu réactionnel est concentré sous pression réduite, le résidu est solubilisé dans le dichlorométhane, la phase organique est lavée par une solution aqueuse de NaOH 2 N), séchée sur NazS04, filtrée et concentrée sous pression réduite. Un solide blanc est obtenu après recristailisation dans I'acétonitrile.
Rendement : 19,7 g (91 %)
RMN (DMSO-d6, ppm) : 0,85 (6H) ; 1,10-2,40 (58H) ; 2,51-2,62 (2H) ; 2,90-3,16 (2H) ; 3,16-3,67 (6H) ; 4,04-4,47 (3H) ; 7,33-8,27 (3H).
LC/MS (ESI) : 761,5 ; (calculé ([M + H]+) : 761,6).
144
BB : Synthèse des œ-polyammoacides modifiés par des molécules hydrophobes dans lesquelles p ™ 2
Co-polyamînoacides de formule VIÏ ou Vila
CO-POLYAMÏSMOACIDES PORTEURS DE CHARGES CARBOXYLATES ΕτΊ DE RADICAUX HYDROPHOBES I
Ri = H ou pyroglutamate
145
BB2
j = 0,047, DP (m + n) = / 5 /
0 C11H23
X N H .-¾.
«Π V MMH % π
Hy = O
Ri = H ou pyroglutamate _ ____
146
147
148
149
RI- CH3-C0-, H ou pyrogkitamate
150
151
152
153
154
155
156
Tableau IE Liste des co-polyaminoacides de formule VII ou Vlïa synthétisés selon l'invention dans lesquelles p=2
157
Co-poiyamineacsdes de formate VII su Vllb
N’ CO-POLYAMINOACIDES PORTEUR DE CHARGES CARBOXYLATES ET
DE RADICAUX HYDROPHOBES
BB15 i = 0,034, DP (m) = 29
Ri H ou pyroqlutamate cua
i = 0,045, DP (m) = 22
Ri = H ou pyroglutamate
158
BB15
r { t r J f i = 0,043, DP (m) = 23 | Ri = H ou pyroglutamate
BB18
BB17
i = 0,015, DP (m) = 65 Ri ~ H ou pyrogjutamate
i = 0,025, DP (m) - 40 Rl= H ou pyroglutamate
159
Fbbis ft .Ofc
R,
Hy·* i ~ 0,045, DP (m + n) - 60 /—-·<
l H C13H27
O ο'' NH j BB20 ' ,.0'
N-.. Z
Hy =
Ri = pyrogiutamate
Γνη
ΓΝΗ ’m
NH
C15H31 o
”NH
Ο,NH
NaO' x0 i = 0,043, DP (m) = 23
Rl~Houpyrogiutamate
160
BB21
! v
Ο c13h27 i = 0,11, DP (m) = 9 4,R1= H ou pyroglutamate BB22 ..................................................
NaO 'O i = 0,04, DP (m) = 25 _____4 Rl = H ou pyroglutamate
BB23T ” ~ ’ HJXT
HH
c13h27
Ο
RÎ
c13h27
NaO Ό i = 0,048, DP (m) = 21
R.l = H ou pyroglutamate
161
162
Tableau IF : Liste des co-polyaminoacides de formule VII ou Vllb synthétisés selon l'invention.
BB : Synthèse des co-poiyaminoacides modifiés par des molécules hydrophobes dans lesquelles p = 2.
Exemple BB1 : Co-poHyaminoacide BB1 - poly-L-gïutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2400 g/mol
Cmeolyâmii^^ acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) relative 3860 g/mol issu de la polymérisation du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine [000839] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du ybenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (90,0 g, 342 mmol) pendant 30 min, puis du
163
DMF anhydre (465 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexyiam.ine (1,8 mL 14 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours. Le milieu réactionnel est ensuite chauffé à 55 °C pendant 4 h, refroidi à température ambiante puis coulé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther froid (6 L.) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (500 mL puis 250 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide polyCy-benzyl-L-glutamique) (PBLG).
[000840] À une solution de PBLG (42,1 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 325 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide brornhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (135 mL, 0,77 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (1,6 L). Après .1 h 30 d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (200 mL).
[000841] Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l’eau (1 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 25 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 1,5 L.
[000842] La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu’à ce que la conductimétrie du perrnéat soit inférieure à 50 pS/cm.
[000843] La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu'à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3860 g/mol par rapport à un standard de polyoxyéthylène (PEG).
Co-polyaminoacide BBÎ [000844] Le co-polyaminoacide BBl-l (10,0 g) est solubilisé dans le DMF (700 mL) à 30-40 °C puis refroidi à 0 °C. Le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (2,95 g, 3,8 mmol) est mis en suspension dans du DMF (45 mL} et de la triéthylamine (0,39 g, 3,8 mmol) est ensuite ajoutée à cette suspension puis le mélange est légèrement chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À la solution de co-polyaminoacide à 0 °C, de la /V-méthylmorpholine (NMM, 7,6 g, 75 mmol) dans le DMF (14 mL) et du chloroformate d'éthyle (ECF, 8,1 g, 75 mmol) sont ajoutés. Après 10 min à 0 °C, la solution de molécule BA2 est ajoutée et le milieu maintenu à 30 °C durant 1 h. Le milieu
164 réactionnel est coulé goutte-à-goutte sur 6 L d'eau contenant du NaCI à 15 % massique et du HCl (pH 2), puis laissé reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, lavé par la solution de chlorure de sodium à pH 2 (1 L) et séché sous vide pendant environ 1 h. Le solide blanc obtenu est repris dans de l'eau (600 mL) et le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N. Le volume est ajusté à 700 mL par ajout d'eau. Après filtration sur filtre 0,45 pm, la solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau, jusqu’à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. Après déchargement, la solution est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 19,7 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 1H) : 23
D'après la RMN 1H : i = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB1 est de 4350 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2400 g/mol.
Exemple BB2 : co-polyaminoacide BB2 - poly-L-glutamate de sodium modifié par Îa molécule BA2 et ayant une mase molaire moyenne en nombre (Mn) de 4900 g/moï [000845] Un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 4100 g/mol (5,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1 est solubilisé dans le DMF (205 mL) à 30-40 °C puis maintenu à cette température, En parallèle, le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (1,44 g, 1,84 mmol) est mis en suspension dans du DMF (10 mL) et de la triéthylamine (0,19 g, 1,84 mmol) est ajoutée, puis le mélange est légèrement, chauffé sous agitation jusqu'à complète dissolution. À la solution de co-polyaminoacide dans ie DMF, de la NMM (3,7 g, 36,7 mmol), la solution de molécule BA2 puis de la /V-oxyde de 2hydroxypyridine (HOPO, 0,31 g, 2,76 mmol) sont ajoutées successivement. Le milieu réactionnel est alors refroidi à 0 °C, puis du EDC (0,53 g, 2,76 mmol) est ajouté et ie milieu est remonté à température ambiante durant 3 h. Le milieu réactionnel est coulé au goutte-à-goutte sur 1,55 L d'eau contenant du NaCI à 15 % massique et du HCl (pH 2) sous agitation. A la fin de l'ajout, le pH est réajusté à 2 avec une solution de HCl 1 N, et la suspension est laissée reposer une nuit. Le précipité est collecté par filtration, puis rincé par 100 mL d'eau. Le solide blanc obtenu est solubilisé dans 200 mL d'eau par ajout lent d'une solution aqueuse de NaOH 1 N jusqu’à pH 7 sous agitation, puis la solution est filtrée sur filtre 0,45 pm. La solution limpide obtenue est purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau, jusqu'à ce que la
165 conductimétrie du perrnéat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution obtenue est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8 °C.
Extrait sec : 16,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ’Ή) : 21
D’après la RMN !H : i = 0,047
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB2 est de 3932 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4900 g/mol.
Exemple BB3 : Co-polyaminoacîde BB3 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de S400 g/mol
Co-oolvaminoacMg SB3-1 ; acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 17500 g/mol issu de la polymérisation du y-méthyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par la L-leucinamide [000846] Un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre (Mn) 17500 g/mol relative à un standard polymétacrylate de méthyle (PMMA) est obtenu par polymérisation du γ-méthyl /V-carboxyanhydride d'acide glutamique en utilisant la Lieucinamide comme initiateur et en effectuant une déprotection des esters rnéthyliques par utilisation d'une solution d'acide chlorhydrique à 37 % selon le procédé décrit dans la demande de brevet FR-A-2 801 226.
[000847] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (3,23 g, 4,1 mmol) et au co-poiyaminoacie BB3-1 (11 g), un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 27,5 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ]H) : 34
D'après la RMN : li = 0,049
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB3 est de 6405 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 6400 g/mol.
Exemple BB4 : co-polyaminoacide BB4 - poSy-L-giutamate de sodium modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 10500 g/mol [000848] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sei de chlorhydrate de la molécule BA2 (5 g, 6,35 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 10800 g / mol (21,7 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation
166 du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 28,2 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 5-H) : 65
D'après la RMN Ή : i = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB4 est de 11721 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10500 g/mol.
Exemple BBS : Co-polyaminoacide BBS ~ poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3600 g/mol ÇûU2SiMân;dilQaclde...BB5.J...:. acide poly-L-glutamique de Mn 3700 g/mol issu de la polymérisation du γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride initiée par l'hexylamine et cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle [000849] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve est placé sous vide du γbenzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (100,0 g, 380 mmol) pendant 30 min puis du DMF anhydre (250 mL) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 4 °C, puis de l'hexylamine (2,3 mL, 17 mmol) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours puis précipité dans du diisopropyléther (3,4 L). Le précipité est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (225 mL) puis séché pour donner un solide blanc qui est dissout dans 450 mL de THF. À cette solution sont ajoutés successivement de la /V,/V-diisopropyléthylamine (DIPEA, 31 mL, 176 mmol) puis de l'anhydride acétique (17 mL, 176 mmol). Après une nuit d'agitation à température ambiante, la solution est versée lentement dans du diisopropyléther (3 L) sur une durée de 30 min et sous agitation. Après 1 h d'agitation, le précipité est filtré, lavé deux fois avec du diisopropyléther (200 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly(Y-benzyi-L-glutamique) cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle. [000850] À une solution du co-polyaminoacide cappé (72 g) dans l'acide trifluoroacétique (TFA, 335 mL) à 4 °C est ajoutée goutte-à-goutte une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans l'acide acétique (235 mL, 1,34 mol). Le mélange est agité à température ambiante pendant 3 h 30, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (4 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (340 mL.) puis avec de l'eau (340 mL). Le solide obtenu est alors solubilisé dans de l'eau (1,5 L) en ajustant ie pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10
167
Npuis une solution aqueuse de soude 1 N. Après solubilisation, la concentration théorique est ajustée à 20 g/L théorique par addition d'eau pour obtenir un volume final de 2,1 L. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée jusqu'à obtenir un volume final de 1,8 L. La solution aqueuse est alors acidifiée par ajout de solution d'acide chlorhydrique 37 % jusqu’à atteindre un pH de 2. Après 4 h d'agitation, le précipité obtenu est filtré, lavé avec de l'eau (330 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un acide poly-L-giutamique de masse molaire moyenne en nombre (Mn) 3700 g/mol par rapport à un standard de polyoxyethylene (PEG).
Co-polyaminoacide BBS [000851] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (6,92 g, 8,8 mmol) et au co-polyaminoacide BB5-1 (30,0 g), un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 est obtenu. Extrait sec : 29,4 mg/g
DP (estimé d'après la RMN JH) : 23
D'après la RMN Ή : i = 0,042
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB5 est de 4302 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3600 g/mol.
Exempte BB6 : Co-polyaminoacide BBë - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4100 g/mol [000852] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (5,8 g, 7,4 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 3800 g / mol (25 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation du copolyaminoacide BB5-1 en utilisant l'ammoniac à ia place de i'hexylamine, un poly-Lglutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 27,6 mg/g
DP (estimé d'après la RMN : 24
D'après la RMN ^:1 = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB6 est de 4387 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4100 g/moi.
168
Exemple BB7 : Co-polyaminoacide BB7 - poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule BA2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000853] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (7,07 g, 9,0 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 3600 g / moi (30,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par ia molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 28,3 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 22
D'après la RMN XH : i = 0,042
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB7 est de 4039 g/mol.
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn - 4200 g/mol.
Exemple BB8 : co-polyaminoacide BB8 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BÀ2 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mrs) de 5200 g/m©!
[000854] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA2 (0,85 g, 1,1 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 4100 g / mol (5,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA2 est obtenu.
Extrait sec : 28,6 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ]Ή) : 21
D'après la RMN XH : i = 0,026
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB8 est de 3620 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) ; Mn = 5200 g/mol.
Exemple BB9 : co-polyaminoacide BB9 - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BAS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4700 g/mol [000855] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (3,05 g, 3,6 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 4100 g / mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide ΒΒ1-Ί, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 28,6 mg/g
DP (estimé d’après la RMN XH) : 26
D'après la RMN XH : i = 0,05
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB9 est de 4982 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4700 g/moi.
Exemple BB1O : co-polyaminoacide BB1G - poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 4200 g/mol [000856] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au se! chlorhydrate de la molécule BA3 (1,90 g, 2,3 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 3500 g / mol (10,0 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 25,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN XH) : 22
D'après la RMN 1H : i = 0,029
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB10 est de 3872 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 4200 g/mol.
Exemple BBîl : co-polyaminoacide BBÎÎ - poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyte et modifié par la molécule BA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 39ΘΘ g/mol [000857] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA4 (2,21 g, 2,2 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre Mn = 3700 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB5-1, un poly-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA4 est obtenu.
Extrait sec : 28,1 mg/g
DP (estimé d'après la RMN 3H) : 22
D'après la RMN XH : i = 0,032
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB11 est de 4118 g/mol.
170
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3900 g/mol.
Exemple BB12 : co-polyaminoacide BB12 - poiy-L-glutamate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par ia molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3900 g/mol [000858] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué au se! chlorhydrate de la molécule BA3 (1,9 g, 2,3 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse moyenne en nombre Mn = 3600 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB5-1, un poly-L-glutarnate de sodium cappé à une de ses extrémités par un groupement acétyle et modifié par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 26,7 mg/g
DP (estimé d'après ia RMN Ή) : 23
D'après la RMN ^:1 = 0,03
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB12 est de 4145 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~ 3900 g/mol.
Exemple BB13 : co-polyaminoacide BB13 - p©ïy-L-giutamate de sodium modifié par la moiécule BAI et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000859] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB1 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule BAI (3,65 g, 5 mmol) et à un acide poly-L-glutamique de masse molaire moyenne en nombre Mn = 3600 g / mol (10 g) obtenu par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du co-polyaminoacide BB1-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BAI est obtenu.
Extrait sec : 25,6 mg/g
DP (estimé d'après la RMN ΤΗ) : 25
D'après la RMN 1H : i == 0,08
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB13 est de 5253 g/mol.
HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn == 2800 g/mol.
Exempte BB14 : co-polyaminoacide BB14 - poly-L-gtetamate de sodium modifié à une de ses extrémités par îa molécute BAS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 402© g/mol [000860] Dans un contenant adapté sont introduits successivement le sel de chlorhydrate de la molécule BA2 (2,12 g, 2,70 mmol), du chloroforme (40 mL), du tamis
171 moléculaire 4 Â (1,5 g), ainsi que de la résine échangeuse d'ion Amberlite IRN 150 (1,5 g). Après 1 h d'agitation sur rouleaux, le milieu est filtré et la résine est. rincée avec du chloroforme. Le mélange est évaporé puis co-évaporé avec du toluène. Le résidu est solubilisé dans du DMF anhydre (20 mL) pour être utilisé directement dans la réaction de polymérisation.
[000861] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate Ncarboxyanhydride (18 g, 68,42 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (100 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à 4 °C, puis la solution de molécule BA2 préparée comme décrit précédemment est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 4 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 2 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à température ambiante puis versé goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (1,2 L.) sous agitation. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec du diisopropyléther (100 ml.) puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (105 mL), et une solution d'acide bromhydrique (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (38 mL, 220 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther/eau et sous agitation (600 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (200 mL.) puis avec de l'eau (100 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (450 mL) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 % puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 uS/cm. La solution de co-polyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique et le pH est ajusté à 7,0. La solution aqueuse est filtrée sur 0,2 pm et conservée à 4 °C.
Extrait sec : 22,3 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 29 donc i = 0,034
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB14 est de 5089 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~ 4020 g/mol.
172
Exemple BB15 : co-polyaminoacide BB15 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3389 g/mol [000862] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (3,62 g, 4,32 mmol) et à 25,0 g (94,97 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. Extrait sec : 30,4 mg/g
DP (estimé par RMN ’Ή) = 24 donc i - 0,042
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB15 est de 4390 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn == 3389 g/mol.
Exemple BB16 : co-polyaminoacide BB16 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA4 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000863] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ïa préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué au se! chlorhydrate de la molécule BA4 (5,70 g, 5,70 mmol) et à 29,99 g (113,9 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA4 est obtenu.
Extrait sec : 32,3 mg/g
DP (estimé par RMN M) = 23 donc i ~ 0,043
La masse molaire moyenne calculée du co-poiyaminoadde BB16 est de 4399 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/moL
Exemple BB17 : co-polyaminoacide BB17 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre de 10700 g/mol [000864] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué au sel chlorhydrate de la molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à 52,7 g (200 mmol) de γ-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu. Extrait sec : 24,5 mg/g
DP (estimé par RMN XH) = 65 donc i = 0,015
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB17 est de 10585 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 10700 g/mol.
173
Exemple BB18 : co-polyaminoacide BB18 - poSy-L-giutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre de 6600 g/mol [000865] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoadde BB14 appliqué au sel chlorhydrate de ia molécule BA3 (2,51 g, 3 mmol) et à 31,6 g (120 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un poly-Lglutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 27,3 mg/g
DP (estimé par RMN 41) = 40 donc i = 0,025
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB18 est de 6889 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 6600 g/mol.
Exempte BB19 : Co-polyaminoacide BB19 - poly-L-glutamate de sodium et modifié par ia molécule BA3 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 7700 g/mol [000866] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide AB23 appliqué au sel de chlorhydrate de la molécule BA3 et au copolyaminoacide AB23-1, un poly-L-glutamate de sodium modifié par la molécule BA3 est obtenu,
Extrait sec : 25,3 mg/g
DP (estimé d'après ia RMN 1H) : 60
D’après la RMN 1H : i = 0,045
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB19 est de 11188 g/mol. HPLC-SEC organique (calibrant PEG) : Mn == 7700 g/mol.
Exemple BB20 : co-polyaminoacide BB20 - pely-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA5 et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2800 g/mol [000867] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA5 sous forme d'amine libre (1,70 g, 1,98 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (11,46 g, 43,5 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA5 est obtenu. Extrait sec : 20,7 mg/g
DP (estimé par RMN 1H) = 23 donc i = 0,043
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB20 est de 4295 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2800 g/mol.
174
Exemple BB21 : co-polyaminoacide BB21 - poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par ia molécule BAS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 1100 g/mol [000868] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA3 sous forme d'amine libre (3,814 g, 4,75 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (10,0 g, 38,0 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 16,1 mg/g
DP (estimé par RMN Ή) = 9 donc i - 0,11
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB21 est de 2123 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 1100 g/mol.
Exempte BB22 : co-polyaminoacid® BB22 ~ poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule ΒΑδ et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 3300 g/mol [000869] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA6 sous forme d'arnine libre (4,45 g, 5,18 mmol) et à 30,0 g (113,96 mmol) de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride, un poly-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA6 est obtenu.
Extrait sec : 29,0 mg/g
DP (estimé par RMN Ψ) = 25 donc i = 0,04
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB22 est de 4597 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 3300 g/mol.
Exemple BB23 : co-polyaminoacide BB23 - psIy-L-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA7 et ayant une masse molaire moyenne ers nombre (Mn) de 2900 g/mol [000870] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB14 appliqué à la molécule BA7 sous forme d'amine libre (3,05 g, 4,01 mmol) et de y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (22,78 g, 86,5 mmol), un polyL-glutamate de sodium modifié à une de ses extrémités par la molécule BA7 est obtenu. Extrait sec : 16,9 mg/g
DP (estimé par RMN ‘H) = 21 donc i = 0,048
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB23 est de 3894 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2900 g/mol.
175
Exemple BB24 : cs-polyaminoacide BB24 - poly-L-giytamate de sodium modifié à l'une de ses extrémités par la molécule BA3 et modifié par la molécule BAS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2300 g/moi [000871] Co-polyaminoacide BB24-1 ; acide poly-L-glutamique modifié à une de ses extrémités par la molécule BA3 et cappé à l'autre extrémité par l'acide pidolique.
[000872] Dans un ballon préalablement séché à l'étuve, du y-benzyl-L-glutamate /V-carboxyanhydride (122,58 g, 466 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (220 mL) est introduit. Le mélange est agité sous argon jusqu'à solubilisation complète, refroidi à -10 °C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre (17,08 g, 21,3 mmol) dans le chloroforme (40 mL) est introduite rapidement. Le mélange est agité entre 0 °C et température ambiante pendant 2 jours, puis chauffé à 65 °C pendant 4 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à 25 °C puis est ajouté de l’acide pidolique (13,66 g, 105,8 mmol), du HOBt (2,35 g, 15,3 mmol) et de i'EDC (20,28 g, 105,8 mmol). Après 24 h d'agitation à 25 °C, la solution est concentrée sous vide pour éliminer ie chloroforme et 50 % du DMF. Le mélange réactionnel est alors chauffé à 55 °C et 1150 mL de méthanol sont introduit en 1 h. Le mélange réactionnel est alors refroidi à 0 °C. Après 18 h, le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé trois fois avec 270 ml. de diisopropyl éther puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc, Le solide est dilué dans du TFA (390 mL), et une solution d'acide bromhydrlque (HBr) à 33 % dans de l'acide acétique (271 mL, 1547 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte et à 0 °C. La solution est agitée pendant 2 h à température ambiante puis est coulée goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther / eau et sous agitation (970 mL). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit. Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé successivement avec du diisopropyl éther (380 mL) puis deux fois avec de l'eau (380 mL). Le solide obtenu est solubilisé dans de l'eau (3,6 L) en ajustant le pH à 7 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Le mélange est filtré sur filtre 0,45 pm puis est purifié par ultrafiltration contre une solution de NaCI 0,9 %, une solution de NaOH 0,1 N, une solution de NaCI 0,9 %, une solution de tampon phosphate (150 mM), une solution de NaCI 0,9 % puis de i'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution de copolyaminoacide est ensuite concentrée à environ 30 g/L théorique, filtrée sur 0,2 pm puis acidifié à pH 2 sous agitation par addition d’une solution de HCI à 37 %. Le précipité est alors récupéré par filtration, lavé deux fois avec de l'eau puis séché sous vide à 30 °C pour obtenir un solide blanc.
176
Co-polyaminoacide BB24 [000873] Par un procédé similaire à celui utilisé pour la préparation du copolyaminoacide BB2 appliqué à la molécule BA3 sous forme d'amine libre (1,206 g, 1,50 mmol) et au co-polyaminoacide BB24-1 (5,5 g, 33,4 mmol), un poly-L-glutamate de sodium modifié à l'une de ses extrémités par la molécule BA3 et modifié par la molécule BA3 est obtenu.
Extrait sec : 19,0 mg/g
DP (estimé d'après la RMN Ti) : 22
D'après la RMN 1H : i = 0,089
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB24 est de 4826 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn = 2300 g/mol.
Exemple BB25 : œ-poiyaminoacide BB25 - poiy-L-gfetamate de sodium modifié à un de ses extrémités par Îa molécute BA3 et à l'autre extrémité par te moiécute BS et ayant une masse molaire moyenne en nombre (Mn) de 2000 g/mol [000874] À une solution de molécule B8 (0,946 g, 1,24 mmol) dans ie DMF (8 mL) sont introduits du DCC (0,257 g, 1,24 mmol) et du NHS (0,143 g, 1,24 mmol). Après 16 h d'agitation à température ambiante, la solution est filtrée pour être utilisée directement dans la réaction suivante.
[000875] Dans un ballon préalablement séché à l’étuve, du y-benzyl-L-glutamate AAcarboxyanhydride (6,0 g, 22,8 mmol) est placé sous vide pendant 30 min puis du DMF anhydre (14 ml.) est introduit. Le mélange est alors agité sous argon jusqu'à complète dissolution, refroidi à 0 °C, puis une solution de molécule BA3 sous forme d'amine libre (0,832 g, 1,04 mmol) dans le chloroforme (2,0 mL) est introduit rapidement. Après 18 h d'agitation à 0 °C, la solution de molécule B8 préparée précédemment est additionnée. La solution est agitée entre 0 °C et température ambiante pendant 22 h puis coulée goutte-à-goutte dans du diisopropyléther (0,34 L) sous agitation. Le précipité est récupéré par filtration, lavé avec du diisopropyléther (7 rois 15 mL) puis séché sous vide à 30 °C pour donner un solide blanc. Le solide est dilué dans du TFA (23 mL), puis la solution est refroidie à 4 °C. Une solution de HBr à 33 % dans l'acide acétique (15 mL, 85,7 mmol) est alors ajoutée goutte-à-goutte. Le mélange est agité à température ambiante pendant 2 h, puis coulé goutte-à-goutte sur un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau sous agitation (0,28 L). Après 2 h d'agitation, le mélange hétérogène est laissé au repos pendant une nuit, Le précipité blanc est récupéré par filtration, lavé deux fois avec un mélange 1:1 (v/v) de diisopropyléther et d'eau (24 mL) puis deux fois avec de l'eau (24 mL). Le solide obtenu
177 est alors solubilisé dans de l'eau (0,16 L) en ajustant le pH à 12 par ajout d'une solution aqueuse de soude 10 N puis une solution aqueuse de soude 1 N. Après 30 min le pH est ajusté à 7 par ajout lent d'une solution aqueuse de HO 1 N. La solution est filtrée sur filtre 0,45 pm puis purifiée par ultrafiltration contre une solution de NaCi 0,9 %, puis de l'eau jusqu'à ce que la conductimétrie du perméat soit inférieure à 50 pS/cm. La solution obtenue est filtrée sur filtre 0,2 pm et stockée à 2-8°C.
Extrait sec : 18,9 mg/g
DP (estimé d'après la RMN Ψ) : 22
D'après la RMN ΧΗ : k == 0,09
La masse molaire moyenne calculée du co-polyaminoacide BB25 est de 4871 g/mol. HPLC-SEC aqueuse (calibrant PEG) : Mn ~ 2000 g/mol.
C. COMPOSITIONS
Exemple CV1 : Préparation d'une solution d'arnyline humaine à 0,6 mg/mL contenant du m-crésoi (29 mM), de la glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000876] Une solution d'arnyline humaine concentrée à 3 mg/mL est préparée par dissolution d'arnyline humaine sous forme de poudre achetée chez AmbioPharm. Cette solution est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCi.
Exemple CV2 : Préparation d'une solution d'arnyline humaine à 0,6 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000877] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000878] La solution d'arnyline humaine concentrée à 3 mg/mL telle que décrite à l'exemple CV1 est ajoutée à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir les compositions finales CV5 à CV11 (tableau 1g). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCi.
178
| ; Solution | Ratio BB15/amyline humaine | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Aspect visuel de la solution | |
| mol/mol | i mg/mL | mM | ||
| CVÏ | : | Limpide | ||
| CV5 | 5 | 7 3 ' | 0,73 | Limpide |
| CV6 | 6 | 3.6 | 0.S8 | Limpide |
| CV7 | 7 | 1,03 | Limpide | |
| CV8 | 8 | ....... .......... 4.8 | .1.17 | Limpide |
| CV9 | 9 | ..............M............... | 1,32 | Limpide |
| CV.1.0 | 10 | 6 | 1,47 | Limpide |
| CV11 | 17 | 10.5 | 2,57 | Limpide |
Tableau lg : Compositions et aspect visuel des solutions d'amyline humaine à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
Exemple CY1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant du m-crésoi (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000879] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est préparée par dissolution de pramlintide sous forme de poudre achetée chez Hybio. Cette solution est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple CW1 : Préparation d’une solution de pramlintide à û,4 mg/mL contenant du phénol (30 mM), de ia glycérine (174 mM) et de ia glycylglycine (8 mM) à pH 7,4.
[000880] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple CY1, une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL. contenant du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM) et de la glycylglycine (8 mM) à pH 7,4 est obtenue.
Exemple C¥0 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant du co-polyaminoacide SB15, du m-crésol (29 mM) et de ia glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000881] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15, [000882] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est ajoutée à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir les compositions finales CY2 à CY7 (tableau 3). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
179
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Aspect visuel de ia r solution i | |
| mol/mol | mg/mL | mM | ||
| CY1 | 7 | - | Limpide | |
| CY2 | 2 | i ........................U..................................... | 0,44 | Limpide |
| CY3 | 3 | i............ 2,7...........................f | 0,66 | Limpide |
| CY4 | 4 ' J | 3,6 | 0,88 | Limpide |
| CY5 | 5 | .............4,5 | 1,10 | Limpide |
| CY6 | 6 | i 5,4 , | 1.32 | Limpide |
| CY7 | 10 · | 9 | 2,20 | Limpide |
Tableau 3 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
Exemple CWO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM) et de la glycylgiycine (S mM) à pH 7,4.
[000883] Par un protocole similaire à celui utilisé à l'exemple CY0, à partir d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL CW1, des solutions de pramlintide à 0,4 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM) et de la glycylglycine (8 mM) à pH 7,4 CW2 et CW3 sont obtenues.
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintide | Aspect visuel de la solution | |
| mg/rnL | mM | mol/mol | ||
| CW2 | 2,4 | 0,59 | 6 | Limpide |
| CW 3 | 4 | 0,98 | 10 | Limpide |
Tableau 4 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à 0,4 mg/ml à pH
7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
Exemple CPO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant différents co-polyamlnoacides de l'invention, du m-crésol (29 mM) et de ia glycérine (174 mM) à pH 7,4.
[000884] Par un protocole similaire à celui décrit à l'exemple CY0, des solutions de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant différents co-polyaminoaddes de l'invention, du mcrésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 7,4 CP2 à CP12 sont obtenues.
180
| Solution | Co- i poly · ami : noac ide | Concentration en copolyaminoacide | Ratio co- i polyaminoacide/pra mlintide | Aspect visuel de la solution | |
| mg/m L | mM | mol/mol | |||
| CP2 | BB1 5 | 5 10 | 1,22 2,45 | 5,4 10,8 | Limpide i Limpide |
| CP3 | BB1 4 | 5 10 | 0,98 1,96 | 4,3 8,6 | Limpide Limpide |
| CP4 | AB1 7 | 5 10 | 1,11 ........................1,22 | 4,9 9,8 | Limpide Limpide |
| CP5 | AB1 5 | 5 10 | 0,99 1,99 | 4,4 i 8,8 | Limpide Limpide |
| CP6 | AB1 4 | 5 10 | 1,48 2,96 | 6,5 13 | Limpide Limpide |
| CP10 | BB1 8 : | 5 10 | 0,72 1,44 | 3.2 6.3 | Limpide Limpide |
| CP11 | BB9 | 5 10 | 1 2,01 | 4,4 i 8,8 | Limpide Limpide |
| CP12 | BB2 | 5 10 | 1,27 2,54 | 5,6 11,2 | Limpide Limpide |
Tableau 8 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml à pH
7,4 en présence de différents co-polyaminoacides.
Exemple CH1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL contenant du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000885] Une solution de pramlintide concentrée à 5 rng/rnL est préparée par dissolution de pramlintide sous forme de poudre achetée chez Ambiopharm. Cette solution est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine) de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCL
Exemple CHO : Préparation d’une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000886] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000887] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/ml. à pH 4 est ajoutée à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à
181 obtenir ies compositions finales CH2 à CH8 (tableau 9). Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCi.
| Solution | Ratio BB15/pramiintide | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Aspect visuel de la solution i | |
| mol/rnoi | ; mg/mL | mM | ||
| CH1 | ) “ ; | - | Limpide | |
| CH2 | 2 | 1,3 | 0,29 | Limpide |
| CH3 | 3 | 2 | 0,45 | Limpide |
| CH4 | 4 | 2,7 ; | | 0,61. | Limpide |
| CH5 | 6 | 4 | 0,90 | Limpide |
| CH6 | 8 | 5,3 | 1,19 | Limpide |
| CH7 | 10 | 6,7 | < 1,50 | Limpide |
| 1 CH8 | 15 | 10 | 2,24 | Limpide |
Tableau 9 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à pH 6,6 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15,
Exemple CIO : Préparation d’une solution de pramlmtide à 0,6 mg/mL contenant différents œ-po!yamin©acides de l'invention, du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000888] Par un protocole similaire à celui décrit à l'exemple CHO, des solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL contenant différents co-polyaminoacide de l'invention, du mcrésol (29 mM) et de ia glycérine (174 mM) à pH 6,6, Cil à CI.14 et CI15 sont obtenues.
182
| Solution | Copolyaminoacide | Concentration • en co- . polyaminoacide | Ratio co- polyaminoacide/pramlintide | Aspect visuel < de la 1 solution | |
| mg/mL | mM | mol/moi | |||
| CH | BB20 | 1,3 I 1 2,6 | 0,3 0,6 | 2 4 | Limpide i Limpide |
| CI2. | BB21 | 1,3 | 0,6 | 4 | Limpide |
| CI3 | AB22 | 2,4 | 0,3 | 2 | Limpide |
| CI4 | BB24 | 2,9 | 0,6 J | 4 | Limpide |
| CI5 | BB25 | • 1,5 ' 3 | 0,3 0,6 | 2 4 | Limpide Limpide |
| CI6 | AB23 | 3,4 | 0,23 | 2 | Limpide |
| CI7 | AB28 | 2,3 • 4,7 | 0,3 0,6 :· | 2 4 | Limpide Limpide |
| CI8 | AB24 | 1,2 2,4 : | 0,15 0,3 ·' | 1 2 | Limpide Limpide |
| CI9 | AB25 | 1,3 2,6 | 0,15 ; 0,3 : | 1 2 | Limpide Limpide |
| CÏ10 | AB26 | 0,7 1,5 i | 0,15 · 0,3 | 1 i 2 | | Limpide Limpide |
| cm | AB27 | 1,3 2,7 : | 0,15 0,3 | 1 2 | Limpide Limpide |
| CI12 | AB31 | 1,3 ; 2,5 1 | 0,15 0,3 | 1 2 | Limpide Limpide |
| CI13 | AB29 | 8,9 | 1,15 | 7,6 | Limpide |
| Cïi4 | AB32 | 1,3 1 2,5 | 0,15 : 0,3 | 1 : 2 i | Limpide Limpide |
| CI15 | AB17 | : 5,3 | 1,2 | 8 | Limpide |
Tableau 10 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides.
183
Exemple CTO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL contenant du co-polyammoacîde AB14, du m-crésoî (29 mM), de la glycérine (174 mM) du NaCI et du chlorure de zinc à pH 6,6 [000889] Une solution concentrée de co-polyaminoacide AB14 et d’excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (rn-crésol, glycérine, NaCI, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide AB14.
[000890] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL à pH 4 est ajoutée à cette solution concentrée de co-polyaminoacide AB14 et d'excipients de manière à obtenir les compositions finales CTI à CT5 (tableau 11). Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCI.
| Solution : | Co- polyaminoacide | Concentration en co-polyaminoacide | [NaCI] | [ZnCbJ | Aspect : visuel : r de la : solution : | |
| mg/mL : | mM .................................................... | (mM) | (mM) | |||
| CTI | AB 14 | 6,3 : | 1,87 | ; | 0,75 | Limpide |
| CT2 | AB14 | 6,3 | : 1,87 | 50 | Limpide | |
| CT3 | AB14 | 6,3 | | 1,87 | 100 | Limpide | |
| CT4 | AB 14 | 6,3 | 1,87 | 50 | 0,75 | Limpide |
| CT5 | AB14 | 6,3 | 1,87 | 100 | 0,75 | Limpide |
Tableau 11 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à pH 6,6 en présence du co-polyamnioacide AB14 et de différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc.
Exempte CSG : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL contenant différents œ-polyaminoacides de l’invention, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) du NaCI et du chlorure de zinc à pH 6,6 [000891] Par un protocole similaire à celui décrit à l'exemple CTO, des solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL contenant différents co-polyaminoacides de l'invention, du rncrésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM), du chlorure de sodium et du chlorure de zinc à pH 6,6 CS1 à CS11 et CS12 à CS24 sont obtenues.
184
| Solution | Co- polyaminoacide | Concentration en co-polyaminoacide | [NaCI] | [ZnCI2] | Aspect visuel de la solution | |
| mg/mL | mM | (mM) i | (mM) | |||
| CS1 | AB15 | 7,8 | 1,6 | : | Limpide | |
| CS? | A.B15 | 11..7 | 2,3 | - | • Limpide i | |
| CS3 | AB15 | 3,9 | 0,8 | 50 | : | : Limpide |
| CS4 | AB 15 | 6,3 | 1,3 | 50 | i | Limpide |
| CS5 | AB15 | ; 7,8 : | : 1,6 J | 50 | i | Limpide |
| CS6 | AB.1.5 | 3,9 | : 0,8 | 100 | i “ | Limpide |
| CS7 | AB16 | 12,4 | : lf5 ; | * | l - Ç | Limpide |
| CS8 | AB 16 | 16,7 | 2,1 | ·“ | Limpide | |
| CS9 | ABÏ6 : | ; 7,4 : | : 0,9 i | 50 | : Limpide i | |
| CS10 | AB16 | 12,4 | 1,5 | 50 | Limpide | |
| CSU | AB16 | 7,4 | 0,9 | 50 | 1 | Limpide |
Tableau 12 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à pH 6,6 en présence de diiférents co-polyaminoacides et de différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc.
| Soi uti on | Co- polyaminoac ide | Concentratio n en co- polyaminoac ide | Ratio co- poiyaminoacide/prarnl intide | [NaC n | [ZnCI 2] | Aspec t visuel : de la : soluti i on ; | |
| mg/ j mL | mM | moi/mol | (mM ’ ) | (mM) | |||
| CS12 | AB16 | 12,4 | 1,6 : | 10,5 | : 25 | « | . Limpi i de J |
| CS13 | AB 16 | ; 12,4 | 1,6 | 10,5 | 25 | 1 | Limpi j de : |
| CS14 | AB16 | 10 | 1,3 | 8,4 | 50 | Limpi : de i |
185
| Soluti on | Copoiyaminoac ide | Concentratio n en copolyaminoac ide | Ratio co- : polyaminoacide/praml i intide : | [NaC 1] | [ZnCI 2] | Aspec t visuel de la . soluti ' on | |
| mg/ mL | mM | mol/mol i | • (mM ) | (mM) | |||
| CS15 | AB16 | 10 | 1,3 | 8,4 | 100 | Limpi de | |
| CS16 | AB34 | 6,1 | 1,5 | 10 : | > Limpi de | ||
| CS17 | 1 AB34 | 6,1 | 1,5 | io : | . 100 | : Limpi de ' | |
| CS18 | AB34 | 6,1 | 1,5 | 10 : | 100 | 1 | ? Limpi de |
| CS 119 | AB33 | 5,7 | 1,5 | 10 | Limpi de | ||
| CS20 | AB33 | 5,7 | 1,5 | 10 | 50 | ||
| CS21 | ' ÂB33 | 5,7 | 1,5 | 10 | 50 | : 1 | Limpi de : |
| CS22 | : AB33 | 5,7 | 1,5 | 10 | 100 | Limpi . de | |
| CS23 | AB33 | 5,7 | 1,5 | 10 | i 100 | 1 | Limpi de |
| CS24 | AB36 | 9,5 | 2,4 | 15,7 | Limpi de | ||
| CS25 | AB36 | 5,1 | 1,3 | 8 | : 50 | Limpi de | |
| CS 2 6 | AB35 | 5,9 | 1,5 | 10 | : | Limpi de | |
| CS 2 7 | AB35 ' | 3,6 ' | 0,91 | 6 | 25 | Limpi i de |
Tableau 12a : Compositions et aspect visuel des solutions de pramiintide à pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides et de différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc.
186
Exemple CXI : Préparation d'une solution d'amyline humaine à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UÏ/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000892] La solution d'amyline humaine concentrée à 3 mg/mL CV1 est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine). Une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL est préparée par dissolution d'insuline humaine sous forme de poudre achetée chez Arnphastar. Cette solution est ajoutée à la solution concentrée d'amyline humaine et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple CX2 : Préparation d'une solution d'amyline humaine à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UÏ/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du mcrésoi (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000893] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000894] Une solution d'amyline humaine concentrée à 3 mg/mL puis une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL sont ajoutées à la solution concentrée de copolyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée (tableau 13). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
[000895] Les solutions CXI, CX6, CX10 et CX11 sont préparées selon le protocole cidessus.
| Solution | Ratio BB15/amyline humaine | Concentration en co- i polyaminoacide BB15 | Aspect visuel de la solution | |
| mol/mol | mg/Ml | mM | ||
| CX1 | ï | — | Turbide | |
| CX6 | 6 | 3,6 | 0,88 | Limpide |
| CX10 | 10 | 6 | , 1,47 | Limpide |
| CX11 | ' 17 | : 10,5 | 2.57..... | Limpide |
Tableau 13 : Compositions et aspect visuel de solutions d'amyline humaine et d’insuline humaine à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
[000896] En présence du co-polyaminoacide BB15, une solution limpide d'amyline humaine (0,6 mg/mL) et d'insuline humaine (100 UI/mL) est obtenue à pH 7,4.
187
Exempte CHI : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM), de la glycylglycine (8 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4. [000897] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine, glycylgiycine, chlorure de zinc). Une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL est ajoutée à cette solution concentrée de pramlintide et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple CRI : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4.
[000898] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple CN1, une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4 est obtenue.
Exemple CNO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,4 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du phénol (30 mM), de la glycérine (174 mM), de 8a glycylgiycine (8 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000899] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, glycylgiycine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15. [000900] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL puis une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL sont ajoutées à cette solution concentrée de copolyaminoacide BB15 et. d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée (tableau 14). Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
[000901] Les solutions CN2 et CN3 sont préparées selon le protocole ci-dessus.
| Solution | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintide | Aspect visuel du mélange | |
| mg/mL | mM | mol/mol | ||
| CN1 | Turbide | |||
| CN2 | .......U* | 0,59 | 6 | Limpide |
| CN3 | 4 | 0,98 | 10 | Limpide |
Tableau 14 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à 0,4 mg/ml et d'insuline humaine à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en copolyarninoadde BB15.
188 [000902] En présence du co-polyaminoacide BBlb, une solution limpide de pramlintide (0,4 mg/mL) et d'insuline humaine (100 UI/mL) est obtenue à pH 7,4.
Exempte CRO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du mcrésoî (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4.
[000903] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple CN0, une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d’insuline humaine à 100 UI/mL contenant du copolyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4 est obtenue.
[000904] Les solutions CR2 à CR4 et CU2 à CU8 sont préparées selon le protocole cidessus.
| Solution | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Ratio BB15/pramlintide mol/mol | Aspect visuel de la solution | |
| mg/mL | mM | |||
| CRI | Turbide | |||
| CR2 | 2,7 | 0,66 | | 3 | Limpide |
| CR3 | 3,6 | r 0,88 ; | 4 | Limpide |
| CR4 | 4,5 | 1,10 | 5 | Limp:de |
| CU2 | 0,9 | 0,22 | 1 | Limpide |
| CU 3 | 1,8 | 0,44 | 2 | Limpide |
| CU7 | 5,4 | 1,32 | 6 | Limpide |
| CU8 | 9 | 2,20 | 1.0 | Limpide |
Tableau 15 : Compositions et aspect des solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en copolyaminoacide BB15.
[000905] En présence de co-polyaminoacide BB15, une solution limpide de pramlintide (0,9 mg/mL) et d'insuline humaine (100 UI/mL) à pH 7,4 est obtenue.
189
Exempte CGO : Préparatten d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant différents co-polyaminoacides de l'invention, du m-créso! (29 mM), de te glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 7,4.
[000906] Par un procédé similaire à l'exemple CNO, une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant un co-polyaminoacide de l'invention, du m-crésoi (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 7,4 est obtenue.
[000907] Les solutions CG2 à CG12 sont préparées selon le protocole décrit cidessus.
| Solution | Copolyaminoacide | Concentration en co- polyaminoacide | Ratio Co- polyaminoacide/prarnlintide | Aspect visuel de la solution | |
| mg/mL | mM | mol/mol | |||
| CG2 | BB15 | 5 10 | 1,22 2,45 | 5,4 10,8 | Limpide Limpide |
| CG3 | BB14 | 5 10 | 0,98 1,96 | 4,3 8,6 | Limpide |
| CG4 | AB17 | 5 10 | 1,11 1,22 | 4,9 9,8 | Limpide Limpide |
| CG5 | AB 15 | 5 10 | 0,99 1,99 | 4,4 8,8 | Limpide |
| CG6 | AB14 | 5 10 | 1,48 2,96 | Gf5 13 | Limpide· |
| CG 10 | BB18 | 5 10 | 0,72 1,44 | 3.2 1 6.3 | Limpide Limpide |
| CG 11 | BB9 | I 5 10 | 1 2,01 | 4,4 1 8,8 | Limpide Limpide |
| CG12 | BB2 | 5 10 | 1,27 2,54 | 5,6 11,2 | Limpide Limpide |
Tableau 16 : Compositions et aspect visuel de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en co polyaminoacides.
190
Exempte CD1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline lispro à 100 UI/mL contenant du m-crésoi (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH 7,4.
[000908] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc). Une solution d'insuline lispro à 500 UI/mL est ajoutée à cette solution concentrée de pramlintide et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
Exemple CD0 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL et d'insuline lispro à 100 UI/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (300 μΜ) à pH 7,4.
[000909] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000910] Une solution concentrée de pramlintide à 5 mg/mL puis une solution d'insuline lispro à 500 UI/mL sont ajoutées à la solution concentrée de copolyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à pH 7,4 par ajout de NaOH/HCI.
[000911] Les solutions CD3 à CD9 sont préparées selon le protocole décrit ci-dessus.
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en copolyaminoacide BB15 / | Aspect visuel de la solution | |
| mol/mol | mg/ml | mM | ||
| CD1 | i Turbide | |||
| CD3 | 2 | 1,8 | 0.44 | Limpide |
| CD4 | 3 | 2,7 | 0,66 | Limpide |
| CD5 | 4 | 3.6 | 0,88 | Limpide |
| CD6 | 5 | 4Æ | L-AiL-l | Limpide |
| CD7 | 6 | 5,4 | 1,32 | Limpide |
| CD8 | 10 i | 9 | 2,20 | Limpide |
| CD9 | 15 | 13,5 | 1330, | Limpide |
Tableau 17 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline Iispro à 100 Ul/ml à pH 7,4 à différentes concentrations en co-polyaminoacide BB15.
[000912] En présence du co-polyaminoacide BB15, une solution limpide de pramlintide (0,9 mg/ml.) et d'insuline Iispro (100 UI/mL) à pH 7,4 est obtenue.
191
Exemple CK1 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 6,6.
[000913] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple CRI, une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du m-crésol (29 mM), de ia glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 6,6 est obtenue.
Exemple CK0 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/ml et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du co-polyaminoacide BB15, du mcrésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 6,6.
[000914] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple CR0, une solution de pramlintide à 0,6 rng/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL contenant du copolyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 6,6 est obtenue.
[000915] Les solutions CK2 à CK8 sont préparées selon ie protocole ci-dessus.
| • Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en co- . polyaminoacide BB15 | Aspect visuel de la solution | |
| moi/mol | ; mg/ml | mM | ||
| CK1 | - i | Turbide | ||
| CK2 | 2 | 1.3 | 0,29 | Limpide |
| CK3 | 3 | 2 | 0,45 | Limpide |
| 1 CK4 | 4 | 2,7 | 0,61 | Limpide |
| CK5 | 6 | 4 | ; 0,90 | Limpide |
| CK6 | 8 | 5,3 | 1,19 | Limpide |
| CK7 | 10 | 6,7 | 1,50 | Limpide |
| CK8 | 15 | 10 | ^24 | Limpide |
Tableau 18 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à 0,6 mg/ml et d’insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 à différentes concentrations en copolyaminoacide BB15.
[000916] En présence de co-polyaminoacide BB15, une solution limpide de pramlintide (0,6 mg/ml) et d'insuline humaine (100 UI/mL) à pH 6,6 est obtenue.
Exemple CFI : Préparation de compositions contenant des concentrations variables de pramlintide, d'insuline humaine à 100 UI/mL, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 6,6.
[000917] Par un procédé similaire à celui utilisé à l’exemple CRI, des solutions contenant différentes concentrations de pramlintide, de I'insuline humaine à 100 UI/mL,
192 du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH
6,6 sont obtenues.
| Solution | Concentration en pramlintide (mg/ml.) ; | Aspect visuel de la solution |
| CFI A | 03 | turbide |
| CF1B | 0,8 | turbide |
| CF1C | < 0,6 | turbide |
| CFI D | 0,3 | turbide |
| CF1Ë | 03 | turbide i |
Tableau 18a : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à différentes concentrations et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6.
Exemple CFO : Préparation de compositions contenant des concentrations variables de pramlintide et d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence de co-polyaminoacide AB24, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) et de chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 6,6. [000918] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple CR0, des solutions contenant différentes concentrations de pramlintide, de l'insuline humaine à 100 UI/mL, du co-polyaminoacide AB24, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 6,6 sont obtenues.
| Solution | • Concentration en pramlintide | Concentration en co- : polyaminoacide i ' AB24 | Ratio copolyaminoacide/ pramlintide | Aspect visuel de la solution · | |
| (mg/ml.) | mg/ml | mM | mol/mol | ||
| CF2 | 0,9 | 5,4 | 0,67 | 3 | limpide |
| CF 3 | i 0,8 | 4,8 | 0.6 | 3 | limpide |
| CF4 | 0,6 | 3.6 | 0,45 | 3 | limpide |
| CF5 | l 0,3 | 1,8 | 0.22 | 3 | limpide |
| CF6 | 0,2 | 1 | 0,125 | 35................... | limpide |
Tableau 18b : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à différentes concentrations et d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence de co-polyaminoacide AB24 à pH 6,6.
193
Exempte CMO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d’insuline humaine à 100 UI/mL contenant différents co-poîyaminoacides de l'invention, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 6,6.
[000919] Par un procédé similaire à l'exemple CGO, des solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d’insuline humaine à 100 UI/mL contenant différents co-polyaminoacide de l'invention, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 6,6 sont obtenues.
[000920] Les solutions CM1 à CM 18 sont préparées selon le- protocole décrit cidessus.
| Solution | Co- polyaminoacide | Concentration en copolyaminoacide I | Ratio : co~ polyaminoacide/pramlintide | Aspect visuel ] de la solution | |
| mg/MI | ? mM i | mol/mol | |||
| CM1 | BB20 | 2,6 i 5,3 | : 0,61 : 1,22 | 4 8 | Limpide Limpide |
| CM2 | BB2.1 | 0,6 | 4 | Limpide | |
| CM3 | AB22 | 2,4 | 0,3 | 2 | Limpide |
| CM4 | BB24 | .....AA... | 0,6 | : 4 | Limpide |
| CM 5 | BB23 | 3 | 0,76 : | 5 | Limpide |
| CM6 | BB25 | 1,5 | : 0t3 : | 2 | Limoide |
| CM7 | BB22 | 2,7 | 0.6 | 4 | Limpide |
| CM8 | AB23 | ...AA | 0,69 | <5 | Limpide |
| CM9 | BB19 | 4,7 | 0,4 | 2,8 | Limpide |
| CM10 | AB28 | ..A? | 0,3 | 2 | Limoide |
| CM11 | AB24 | 1,2 2,4 i 3,6 | 0.15 0,3 0.45 | 1 2 i- 3 | Limpide Limpide : |
| CM 12 | AB25 | aa | 0,3 | 2 | Limpide |
| CM13 | AB26 | 1,5 2,3 | 0,3 i 0,5 i | 2 i 3 | Limpide Limpide |
| CM14 | AB27 | 1,3 2,7 1 | 0,15 0,3 | : 1 2 | Limpide Limpide i |
| CM 15 | AB30 | 1,2 „ AL | 0,15 0,3 | : 1 > 2 | Limpide : Limpide |
| CM16 | AB31 | 1,3 ' 2,5 | 0,15 i 0,3 J | : 1 : 2 | Limpide Limpide |
| CM17 | AB29 | 5,9 . 8,9 J | 0,8 1,15 | : 5 7..6 | Limpide Limpide |
| CM18 | AB 3 2 | AA. | .„„„p,3 : | 2 | Limpide |
Tableau 19 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides.
194
Exempte CQ1 : Préparation d’une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuiine humaine à 100 lü/mL à pH 6,6 contenant du co-polyaminoacide AB14, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM), du chlorure de sodium (100 mM) et du chlorure de zinc (1 mM) [000921] Une solution concentrée de co-polyaminoacide AB14 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (rn-crésol, glycérine, chlorure de sodium, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide AB14.
[000922] Une solution de pramlintide concentrée à 5 mg/mL à pH 4 puis une solution d'insuline humaine à 500 lU/mL sont ajoutées à cette solution concentrée de copolyaminoacide AB14 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCL [000923] La solution CQ1 est préparée selon le protocole ci-dessus.
Exemple CQQ : Préparation d’une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 lü/mL contenant différents co-polyaminoacides de l'invention, du rncrésol (29 mM), de la glycérine (174 mM), et différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc [000924] Par un procédé similaire à l'exemple CQO, des solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 IU/mL contenant différents co-polyaminoacide de l'invention, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM), du chlorure de sodium et du chlorure de zinc à pH 6,6 sont obtenues.
[000925] Les solutions CQ2 à CQ12 sont préparées selon le protocole ci-dessus.
195
| Solution | Co- polyaminoacide | Concentration en co-polyaminoacide | [NaCI] | • [ZnClz] : | Aspect visuel | de la : solution | |
| mg/mL | mM | (mM) | i (mM) : | |||
| CQ1 | AB 14 | 6,3 1 | 1,87 | 100 | : 1 | Limpide |
| CQ2 | AB15 | 7,8 | 1,6 | - | 0,23 | Limpide |
| CQ3 | ABÏ5 | J V | : 2,3.......... | -* | 0,23 | Limpide |
| AB.15 | 3,9 | L 0,8 | 50 | 0,23 | Limpide | |
| ÇQ5 | AB 15 | < 6,3 i | 1,3 | 50 | 0,23 | Limpide |
| CQ6 | AB15 | ,............................7 J j | L 1,6 | 50 | 0,73 | Limpide |
| C27 q | AB15 | . 3,9.......... | i 0,8 | 100 | 0,23 | Limpide |
| CQ8 | AB15 | 6,3 | 1.3 | 100 | 0,23 | Limpide |
| ÇQLi | AB15 | 7,8 | 1,6 | 100 | 0,23 | Limpide |
| CQ10 | AB16 | . 7-4 | 0,9 | 50 | 0,23 | Limpide |
| CQ11 | AB16 | 12,4 | 1,5 | 50 | 0,23 | Limpide |
| CQ12 | AB16 | 7 4 „ | δ·~..... | : 50 | 1 > | Limpide |
Tableau 20 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 ILJ/mL pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides et de différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc.
Exemple CZO : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL contenant du DMPG, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000926] Une solution concentrée de DMPG et d’excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d’excipients (m-crésoi, glycérine) à une solution concentrée de DMPG.
[000927] Une solution de pramlintide concentrée à 10 mg/mL est ajoutée à cette solution concentrée de DMPG et d’excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCI.
196
Exemple CZ1 : Préparation d'une solution de pramiintide à 0,6 mg/mL contenant du DMPG (4,5 mM), du phénol (30 mM), de Sa glycérine (174 mM) et de la glycylglycine (8 mM) à pH 7,4.
| Solution | DMPG (mM) | Concentration pramiintide ..ÏTJ/rnU | pH | Excipients | Aspect visuel de la • solution i |
| CZ0 | 4,5 | 0,6 | 6,6 | m-crésoi 29 mM Glycérine 174 mM | Limpide |
| CZ1 | 4,5 | 0 6 | 7,4 | phénol 30 mM glycylgiycine 8m M glycérine 174 mM | Limpide |
Tableau 21 : Compositions et aspect visuel des solutions de pramiintide à 0,6 mg/mL en présence de DM PG.
Exemple CAI : Préparation d'une solution de pramiintide à 1 mg/mL contenant du m-crésol (20 mM), du mannitol (43 mg/mL), et un tampon acétate de sodium, à pH 4.
[000928] Une solution concentrée de pramiintide à 10 mg/mL est ajoutée à une solution concentrée d'excipients (m-crésol, mannitol, acétate de sodium) de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 4 par ajout de NaOH/HCI. La solution limpide est filtrée (0,22 pm) et introduite dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo injecteur.
Exemple CA2 : Mise en cartouches d'une solution commerciale d'insuline humaine à 100 UI/mL (Humulin*) contenant du m-crésol (23 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (230 μΜ).
[000929] Une solution commerciale d'Humulin® en vial de 10 mL est prélevée et introduite dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo injecteur.
Exemple CA3 : Préparation d'une solution de pramiintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UÏ/mL contenant du co-polyaminoacide BB15 (3,1 mg/mL), du m-crésol (20 mM), de la glycérine (35 mM), du mannitol (2,6 % % w/v) , du tris (18,75 mM), de l’acétate de sodium (18 mM), et du chlorure de zinc (260 pM) à pH 6,2.
[000930] Des vials en verre de 3 mL sont remplis avec 0,5 mL d'une solution contenant 10 mg/mL de co-polyaminoacide BB15 et 60 mM de tris à pH 8,3. La solution
197 est lyophilisée de manière à obtenir des vials de 3 mL contenant 5 mg de copolyaminoacide BB15 et 30 pmol de tris.
[000931] Une solution d'insuline humaine à 500 UI/mL contenant 23 mM de mcresol, 174 mM de glycérine et 260 μΜ de chlorure de zinc à pH 7,4 est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée d'insuline humaine concentrée à 760 UI/mL.
[000932] Dans le vial contenant 5 mg de co-polyaminoacide BB15 et 30 pmol de tris sont introduits succesivement :
0,96 mL de la solution de Pramiintide à 1 mg/mL à pH 4 décrite à l'exemple CAI ;
0,32 mL d’eau stérile pour injection ;
0,32 ml. d'insuline humaine concentrée à 500 UI/mL contenant 23 mM de mcresol, 174 mM de glycérine et 260 μΜ de chlorure de zinc à pH 7,4.
[000933] La solution limpide est filtrée (0,22 pm) et introduite dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo injecteur.
Exemple CA4 : Mise en cartouches d'une solution de pramiintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence de co-polyaminoacide AB24 à 2,4 mg/mL, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) et de chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 6,6.
[000934] La solution de pramiintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL en présence de co-polyaminoacide AB24 à 2,4 mg/mL, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) et de chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 6,6 décrite à l'exemple CM11 est filtrée (0,22 μΜ) et introduite dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo injecteur.
Exemple CA5 (stabilité en pompe) : Préparation d'une solution de pramiintide à 0,6 mg/mL et d'insuline lispro à 100 UI/mL à pH 6,6 contenant du copolyaminoacide AB24, du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (300 pM).
[000935] Une solution concentrée de co-polyaminoacide AB24 et d’excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide AB24.
[000936] Une solution de pramiintide concentrée à 10 mg/mL puis une solution d'insuline lispro à 200 UI/mL sont ajoutées à cette solution concentrée de copolyaminoacide AB24 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCI.
198
Exemple CAS : Préparation d’une solution d'insuline humaine à 100 ÏU/mL contenant du co-polyaminoacide BB15 (10 mg/mL), du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 6,6 [000937] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000938] Une solution d'insuline humaine à 800 HJ/mL est ajoutée à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCi. La solution limpide est filtrée (0,22 μΜ) et introduite dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo injecteur.
Exemple CA7 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d’insuline humaine à 100 XU/mL contenant du co-polyaminoacide BB15 (10 mg/mL), du m-crésol (29 mM), de la glycérine (174 mM) et du chlorure de zinc (229 pM) à pH 6,6 [000939] Une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients est préparée en ajoutant des solutions concentrées d'excipients (m-crésol, glycérine, chlorure de zinc) à une solution concentrée de co-polyaminoacide BB15.
[000940] Une solution concentrée de pramlintide à 10 mg/mL puis une solution concentrée d'insuline humaine à 500 ÏU/mL sont ajoutées à cette solution concentrée de co-polyaminoacide BB15 et d'excipients de manière à obtenir la composition finale visée. Le pH final est ajusté à 6,6 par ajout de NaOH/HCI. La solution limpide est filtrée (0,22 pM) et introduite dans des cartouches en verre de 3 mL
D. PHYSICO-CHIMIE
D I : Résultats des observations visuelles au mélange et des mesures de fibrillation per ThT
Principe [000941] La mauvaise stabilité d'un peptide peut conduire à la formation de fibrilles amyloïdes, définies comme des structures macromoîéculaires ordonnées. Celles-ci peuvent éventuellement résulter à la formation de gel au sein de l'échantillon.
[000942] L'essai de suivi de la fluorescence de la Thioflavine T (ThT) est utilisé pour analyser la stabilité physique des solutions. La Thioflavine est une petite molécule sonde
199 ayant une signature de fluorescence caractéristique lorsque se lie à des fibrilles de type amyloïdes (Naiki et ai. (1989) Anal. BioChem. 177, 244-249 ; LeVine (1999) Methods. Enzymol. 309, 2.74-284).
[000943] Cette méthode permet de suivre la formation de fibrilles pour de faibles concentrations de ThT au sein de solutions non diluées. Ce suivi est réalisé dans des conditions de stabilité accélérées : sous agitation et à 37 °C.
Conditions expérimentales [000944] Les échantillons ont été préparés juste avant le début de la mesure. La préparation de chaque composition est décrite dans l'exemple associé. La Thioflavine T a été ajoutée dans la composition à partir d'une solution mère concentrée de manière à induire une dilution négligeable de la composition. La concentration de Thioflavine T dans la composition est de 1, 2 ou 40 μΜ selon le type de composition : 40 uM dans le cas des compositions d’amyline humaine à 0,5 mg/mL, 2 μΜ dans le cas des compositions de pramlintide à 0,9 mg/mL et 0,6 mg/mL et 1 μΜ dans les compositions de pramlintide à 0,4 mg/mL. Cette concentration est rappelée dans la légende relative au tableau de résultats des temps de latence pour chaque type de composition.
[000945] Un volume de 150 pL de ia composition a été introduit au sein d'un puit d’une plaque 96 puits. Chaque composition a été analysée en trois essais (triplicat) au sein d'une même plaque. La plaque a été scellée par du film transparent afin d'éviter l'évaporation de la composition.
[000946] Cette plaque a ensuite été placée dans l'enceinte d'un lecteur de plaques (EnVision 2104 Multilabel, Perkin Elmer ou Xenius XM, Safas). La température est réglée à 37 °C, et une agitation latérale de 960 rpm avec 1 mm d'amplitude est imposée.
[000947] Une lecture de l'intensité de fluorescence dans chaque puit est réalisée avec une longueur d’onde d'excitation de 442 nm, et une longueur d’onde d'émission de 482 nm au cours du temps.
[000948] Le processus de fibrillation se manifeste par une forte augmentation de la fluorescence après un délai appelé temps de latence.
[000949] Pour chaque puit, ce délai a été déterminé graphiquement comme l’intersection entre la ligne de base du signal de fluorescence et la pente de la courbe de fluorescence en fonction du temps déterminée pendant la forte augmentation initiale de fluorescence. La valeur de temps de latence reportée correspond à la moyenne des mesures de temps de latence faites sur trois puits.
200 [000950] Un exemple de détermination graphique est représenté à la Figure 1.
Exempte DI : Stabilité de solutions d'amyline humaine à 0,6 mg/mL à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide 8815 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/amyline : humaine i | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Temps de latence (h) | |
| mol/mol | mg/ ml ; | mM | ||
| CV1 | - | - | < 0,02 | |
| CV5 | 5 | 3 | 0,73 | > 1 |
| CV6 | 6 | 3,6 | 0,88 | > 5 |
| CV7 | 7 | 4,2 | 1,03 | > 30 |
| CV8 | 8 | ...Æ8..... | .......1.4Z...... | > 54 |
| CV9 | 9 | 5.4 | 1,32 | > 54 |
| CV10 | 10 | 6 | >72 |
Tableau 22 : Mesure du temps de latence par ThT (40 pM) des solutions CV1 à CV10.
[000951] Le temps de latence d'une solution d'amyline humaine à pH 7,4 (CV1), dépourvue de co-polyaminoacide, est inférieur à 0,02 h ; les solutions CV5 à CV10 selon l'invention, contenant des ratios molaires BB15 / amyline humaine supérieurs à 5 permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à une heure, un ratio molaire de 10 permettant d'obtenir des temps de latence supérieurs à 72 h.
201
Exemple D2 : Stabilité de solutions d'amyline humaine à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine 100 UI à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/amyline humaine ' | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | Temps de latence (h) | |
| mol/mol | mg/mL | rn M | ||
| CX1 | * | |||
| CX6 | 6 | 3,6 | 0.38 | > 0,1 |
| CX10 | 10 | 6 Z | 1,47 | > 0,5 |
| CX11 | 17,5 | 10,5 | 2,57 | > 5 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide
Tableau 23 : Mesure du temps de latence par ThT (40 μΜ) des solutions, CX6, CX10 et
CX11.
[000952] La solution d'amyline humaine et d'insuline humaine à pH 7,4 (CX1) est turbide. Le co-polyaminoacide BB15 permet d'obtenir une solution limpide contenant de I'amyiine humaine en présence d'insuline humaine à pH 7,4 avec des temps de latence supérieurs à 0,1 heure à partir d'un ratio molaire BB15 / amyiine humaine de 6, et supérieurs à 5 h pour un ratio molaire BB15 / amyiine humaine de 17,5.
Exemple D3 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,4 mg/ml à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution i | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Z Ratio 1 BBlS/pramlintide | Temps de latence (h) | |
| mg/rnL | mM | mo!/mol | ||
| cwï | - | : | 0,7 | |
| CW2 | 2,4 | 0,59 | 6 | > 40 |
| CW3 | • 4 | 0,98 | 10 | > 63 |
Tableau 24 : Mesure du temps de latence par ThT (1 μΜ) des solutions CW1 à CW3.
[000953] La solution de pramlintide à pH 7,4 (CW1) dépourvu de co-polyaminoacide a un temps de latence court. Le co-polyaminoacide BB15 permet d'obtenir une solution contenant du pramlintide à pH 7,4 avec des temps de latence supérieurs à 40 h à partir d'un ratio molaire BB15 / pramlintide de 6,
202
Exemple D4 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml. à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en BB15 | Temps de latence (h) | |
| mol/mol | ;. mg/ml............... | mM | ||
| CY1 | ........ ......0,7 .....: | |||
| CY2 | 2 | 1,8 | 0,44 | ................. > 0,8 ........... |
| CY3 | 3 | 2J......... | 0,66 | > 4 |
| CY4 | 4 | 3,6 | 0.88 | > 30 |
| CY5 | 5 | 4,5 | 1.10 | >63 |
| CY6 | 6 | 1,22 | >63 | |
| CY7 | 10 | ____________ 9 | 1,32 | >63 |
Tableau 25 : Mesure du temps de latence parThT (2 μΜ) des solutions CY1 à CY7 [000954] La solution de pramlintide à pH 7,4 (CY1) dépourvue de co-polyaminoacide présente un temps de latence court ; les temps de latence des solutions contenant un co-poiyaminoacide sont supérieurs ou égaux aux temps de latence de la composition sans co-polyaminoacide à un ratio molaire de co-polyaminoacide BB15 / pramlintide de 2:1.
Exemple D5 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,9 mg/mï à pH 7,4 en présence de différents co-polyaminoacides.
| Soiutio π | Copolyaminoacid e | Concentration en co- 1 polyaminoacide | Ratio co- polyaminoacide/pramlintid e | Temps de 1 latenc : e (h) ; | |
| mg/m L. | mM | mol/mol | |||
| CY1 | ; | - | : 0,7 i | ||
| CP2 | BB15 | 5 10 | 1,22 2,45 | : 5,4 10,8 | m r) Λ Λ |
| CP3 | BB14 | 10 | 1,96 | 8,6 | > 15 |
| CP4 | AB17 | 10 | 1,22 | 9,8 | > 63 |
| CP10 | BB18 | • 10 | 0,72 1,44 | 3.2 6.3 | > 63 > 63 1 |
| CP11 | BB9 | 5 10 i | 1 2,01 | 4,4 8,8 | > 50 > 63 |
| CP12 | BB2 | 5 1 10 i | 1,27 2,54 | 5,6 1........ -............ 1Χ2 | > 10 > 63 |
Tableau 26 : Mesure du temps de latence parThT (2 μΜ) des compositions CY1, CP2 à
CP12.
203 [000955] La solution de pramlintide à pH 7,4 (CY1) dépourvue de co-polyaminoacide présente un temps de latence court. Les co-polyaminoacides de l'invention permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 10 h dans les conditions testées.
Exemple D6 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,6 mg/ml. à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BBlS/pramlintide | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Temps de latence (h) | |
| moi/moi | . mg/mL | m M | ||
| CH1 | - | 1 | ||
| CH 2 | 2 | . IA . | ........ .Q3? | >4 ; |
| CH 3 | 3 | 2 | 0,45 | >10 |
| CH4 | 4 | 2,7 | 0,61 | >50 |
| CH 5 | 6 | 4 | 0,90 | >50 |
| CH 6 | 8 | 5,3 | 1,19 | >50 |
| CH7 | 10 | 6,7 | 1,50 | >50 |
| CH 8 | 15 | 10 | 2J4„ | >50 |
Tableau 27 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solutions CH1 et CH2 à
CH8.
[000956] La solution de pramlintide à pH 6,6 (CH1) dépourvue de co-polyaminoacide présente un temps de latence court ; les temps de latence des solutions contenant un co-polyaminoacide sont supérieurs aux temps de latence de la composition sans copolyaminoacide.
Exemple D7 : Stabilité de solutions de pramiintide à 0,6 mg/mi à pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides.
| Solution | Copolyaminoacide | Concentration en co- i polyaminoacide | Ratio co- polyaminoacide/pramlintide | Temps de latence (h) | |
| mg/mL | : mM | mol/mol | |||
| Cil | BB20 | 1,3 / 2,6 il | 0,3 0,6 | 2 4 | >10 >20 |
| CI2 | BB21 | . .13.. | 0,6 | 4 | >10 |
| Cl 3 | AB22 | 2,4 | 0,3 | 2 | >10 |
| CI4 | BB24 | 2,9 | 0,6 | 4 | >10 |
| CI5 | BB25 | 1,5 3 | 0,3 0,6 | 2 4 | >50 >50 |
| CI 6 | AB23 | 3,4 | 0,23 | 2 | >10 |
| CI7 | AB28 | 2,3 I............1.7.................... | 0,3 0,6 | 2 4 | >10 >10 |
| CI8 | AB24 | 1,2 2,4 ...... | 0,15 i 0,3 | 1 2 | >10 >50 |
| CI9 | AB25 | 1,3 2,6 | 0,15 0,3 | 1 2 | >10 >10 |
204
| ' Solution | Co- / polyaminoacide | Concentration en copolyaminoacide | Ratio co- > polvaminoacide/pramlintide 1 | Temps • de latence i (h) ; | |
| mg/mL | mM · | mol/mol i | |||
| CI10 | AB26 | 1,5 . | 0,3 | 2 | >10 |
| cm | AB27 | 1,3 2,7. . | 0,15 0,3 ' | 1 2 | >5 >10 |
| CI12 | AB31 | 1,3 2,5 | 0,15 0,3 | 1 2 | >10 >10 |
| : CI 13 | AB29 | 8,9 | 1,15 | 7,6 | >5 |
| 1 CI14 | AB32 | 1,3 | 0,15 0,3 | 1 i 2 i | >10 ' >10 |
Tableau 28 : Mesure du temps de latence parThT (2 μΜ) des compositions Cil à CI14, [000957] La solution de pramlintide à pH 6,6 (CH1) dépourvue de co-polyaminoacide présente un temps de latence court. Les co-polyaminoacides de l'invention permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 5 h dans les conditions testées.
Exemple D7A : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,6 mg/ml à pH 6,6 en présence du co-polyaminoacide AB14 et de différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc.
| Solution | Copolyaminoacide | Concentration en co-polyaminoacide | [NaCI] | [ZnCb] | Temps de latence (h) | |
| mg/mL | mM | 1 (mM) / | (mM) | |||
| CP6 | AB14 | 10 | 2,96 | - | ... | <2 |
| CTI | AB14 | 6,3 | 1,87 | “ i | 0,75 | 0,6 |
| CT2 | AB14 | 6,3 | 1,87 | 50 | : | >2 |
| CT3 1 | AB14 | 6,3 | 1,87 | 100 | >5 | |
| CT4 | AB14 | 6.3 | 1,87 | 50 | 0,75 | >5 |
| CT5 | AB14 | 6,3 | 1,87 | 100 | 0,75 | >20 |
Tableau 29 : Mesure du temps de latence parThT (2 μΜ) des compositions CTI à CT5 [000958] La solution de pramlintide à pH 6,6 et de co-polyaminoacide AB14 présente un temps de latence plus important en présence de chlorure de sodium ou de chlorure de sodium et de zinc.
20.5
Exemple D7B : Stabilité de solutions de pramiintide à 0,6 mg/ml à pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides et de différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc.
| Solution | Copolyaminoacide i | Concentration en co-polyaminoacide | [NaCI] | [ZnCi2] | Temps de latence (h) | |
| mg/mL | mM | (mM) | (mM) | |||
| CS1 | i AB15 | | 7,8 | 1,6 | j·* | — | 3,5 |
| CS 2 | 1 AB15 | 11,7 1 | 2,3 | “ | - | >30 |
| CS3 | AB15 | 3,9 . | 0,8 | 50 | >10 | |
| CS4 | AB 15 | ...........6,3.......... | AL· | 50 | >50 | |
| CS5 | AB 15 | 7,8 | 1,6 | 50 | : ~ | >30 |
| CS6 | AB15 | 3,9 | 0,8 | 100 | >50 | |
| CS7 | AB 16 | 12,4 | 1,5 | - | 8 | |
| CS8 | AB16 | 16,7 | ...2,1. | : | >50 | |
| CS9 | ÀB16 | 7,4 : | 0.9 | 50 | >20 | |
| CS10 | AB16 | .............................12,4.....................: | .........1,5......; | 50 | >50 | |
| CS11 | AB 16 | ..0-5 . | 50 : | >30 |
Tableau 30 : Mesure du temps de latence par Th i (2 μΜ) des compositions CS1 à
CS11 [000959] Les solutions de pramiintide à pH 6,6 et de co-polyaminoacide AB15 et AB16 présentent un temps de latence plus important en présence de chlorure de sodium ou de chlorure de sodium et de zinc.
| Solutio n | Cm polyaminoaci de I | Concentration en co- ! polyaminoacid ' e | Ratio co- polyaminoacide/pramlint ide | [NaCI 1 i | [ZnCb ] | Temp s de latenc e (h) : | |
| mg/m L | mM | mol/mol | (mM) | (mM) | |||
| CS7 | AB16 | 12,4 | 1,5 | 10,5 | <10 | ||
| CS12 | AB16 | 12,4 | 1,6 | 10,5 | 25 | >30 i | |
| CS14 | AB16 | 10 · | 1,3 | 8,4 | 50 | >30 : | |
| CS 15 | AB1.6 | | 10 | 1,3 | 8,4 | 100 | ·* 1 | >60 |
| CS16 | AB34 | 6,1 | 1,5 | 10 | - | - | : <5 . |
| CS17 | AB34 | 6,1 | 1,5 | 10 | 100 | - | >40 |
| CS19 | AB33 | i 5,7 | 1,5 | 10 | - | · | <5 |
| CS20 | AB33 | ; 5,7 | 1,5 | 10 | 50 | >10 | |
| CS21 | AB33 | 5,7 | 1,5 i | 10 | 50 | T : | • >35 |
206
| Solutio n | Co- polyaminoaci de | Concentration en copolyaminoacid e | Ratio co- polyaminoacide/pramlint ide i | [Naci ] | [ZnCb ] | Temp s de latenc e (h) | |
| mg/m L i | mM | mol/mol | (mM) | (mM) | |||
| CS22 | AB33 | 5,7 | 1,5 | 10 | 100 | >35 | |
| CS23 | AB33 | 5,7 : | 1,5 | 10 | 100 | 1 | >40 |
| CS24 | AB35 | 6,3 | 1,6 | 10,4 | “ | - | <2 |
| CS25 | AB36 ............. | 5,1 | i 1,3 | 8 | 50 | >60 | |
| CS26 | AB35 | 5,9 | 1,5 | 10 | <10 | ||
| CS27 | AB35 | 3,6 r | 0,91 | 6 | 25 | >43 |
Tableau 30a : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des compositions CS7 et CS12, CS14 à CS17 et CS19 à CS27 [000960] L'ajout de sel seul ou en présence de zinc permet d'une part d'atteindre des temps de latence très satisafaisants et de réduire de façon appréciable les concentrations en co-polyaminoacide dans les compositions.
Exempte D8 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,4 mg/ml et d’insuline humaine 100 üï/m! à pH 7,4 contenant du co-polyaminoacide BB15.
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide 1 BB15 | Ratio i i BB15/pramlintide i | Temps de latence (h) | |
| mg/mL : | mM < | mol/mol | ||
| CN1 | : ( | * | ||
| CN2 | 2,4 | 0,59 | 6 | > 1.9 |
| CN3 | 4 | 0,98 | 10 | >19 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 31 : Mesure du temps de latence par ThT (1 μΜ) des compositions CN1 à CN3.
[000961] La solution de pramlintide et d'insuline humaine à pH 7.4 (CN1) dépourvue de co-polyaminoacide est turbide.
[000962] Le co-polyaminoacide BB15 permet d'obtenir une solution limpide de pramlintide à 0,4 mg/ml et d'insuline humaine 100 Ul/mi à pH 7,4 avec des temps de latence supérieurs à 19 h pour des ratios molaires BB15/pramlintide supérieurs à 6.
207
Exemple D9 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0.9 mg/ml et d'insuline humaine 100 Ul/ml à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BBlS/pramlintide | Concentration en co- 1 polyaminoadde BB15 | Temps de latence (h) | |
| mol/mol | mq/ml | mM | ||
| CRI | - | - | * | |
| CU3 | 2 | 1,8 | 0,44 | :> 0,5 |
| CR2 | 3 | 2,7 | 0,66 | > 2 |
| CR3 | 4 | 3,6 | 0,88 | > 6 |
| CR4 | 5 | rAA | 1,10 | > 9 |
| CU7 | 6 | μ .Μ | 1/32 | > 9 |
| CU8 | 10 | 9 | 2,20 | > 9 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 32 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solution CRI à CR4 et CU3 à CU8.
[000963] Une solution de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine 100 Ul/ml à pH 7,4 (CRI) dépourvue de co-polyaminoacide est turbide. Les solutions limpides de pramlintide à 0,9 mg/ml et d’insuline humaine 100 Ul/ml à pH 7,4 en présence de copolyaminoacide BB15 présentent des temps de latence supérieurs à 0,5 heure à ratio molaire BB15/pramlintide de 2, pouvant être supérieurs à 9 h pour des ratios molaires BB15/pramlintide supérieurs à 5.
Exemple D10 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline humaine
100 Ul/ml à pH 7,4 en présence de différents co-polyaminoacides.
| Solution | Copolyaminoacide | Concentration en co- 1 polyaminoadde i | : Ratio i co- i polyaminoacide/pramlintide | Temps I de ; ? latence i (h) i | |
| 1 mg/mL | m Μ 1 | i mol/mol · | |||
| CRI | ; - / | ||||
| CG2 | BB15 | 5 10 | 1,22 2,45 ; | 5,4 10,8 | > 9 > 7 |
| CG3 | BB14 | 10 | 1,96 | 8,6 | > 9 |
| CG4 | AB17 | 5 i 10 | 1,11 i 1,22 ; | 4,9 9,8 | > 2 > 5 |
208
| Solution | Co- polyaminoacide | Concentration en co- polyaminoacide | Ratio co- polyaminoacide/pramlintide | Temps de latence (h) | |
| mg/mL | m M | mol/mol | |||
| CG5 | AB15 | 10 | 1,99 | 8,8 | > 2 |
| CG10 | BB18 | 5 i io ; | 0,72 1,44 | 3.2 6.3 | iA A j |
| CG 11 | BB9 | 5 10 I | 1 i 2,01 | 4,4 8,8 | > 4 ' > 3 |
| CG12 | BB2 | 5 1 1.0 | 1,27 2,54 j | 5,6 11,2 | > 5 < > 6 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 33 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solutions CG2 à CG12.
[000954] La solution de pramlintide et d'insuline humaine à pH 7,4 (CRI) est turbide.
Les co-polyaminoacides permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 1 heure dans les conditions testées.
Exemple DU : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et d'insuline lispro 100 UI/mi à pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations.
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Temps de latence (h) · | |
| mol/mol | mg/ml | mM | ||
| CD1 | * | |||
| CD3 | 2 | ......... 13............. | 0,44 | 0,8 |
| CD4 | 3 | . .. 2,7 | 0.66 | > 2 |
| CD 5 | 4 | 3,6 | 0,88 | > 7 |
| CD 6 ' | 5 | 4,5 | 1,10 | > 9 |
| CD 7 | 6 | 5,4 | 1,22 | > 9 1 |
| CD8 | 10 | 9 | 1,32 | > 9 : |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 34 : Mesure du temps de latence par ThT (2 pM) des solutions CD1 et CD3 à CD8.
[000965] La solution de pramlintide et d'insuline lispro à pH 7,4 (CD1) est turbide. Les co-polyaminoacides permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 0,8 heure dans les conditions testées.
209
Exemple D12 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,6 mg/ml et d'insuline humaine 100 Ul/ml à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 à différentes concentrations,.,
| Solution | Ratio BB15/pramlintide | Concentration en copolyaminoacide BB15 | Temps de latence (h) | |
| mol/moi | mg/mL | mM | ||
| CK1 | - | * : | ||
| CK3 | 3 | .2 | 0,45 | >0,5 |
| CK4 | 4 | 2,7 | 0.61 | >5 |
| CK5 | 6 | 4 | 0,90 | >5 |
| CK6 | 3 | 5,3 | .1.,19 . | >5 |
| CK7 | 10 | 6,7 | 1.50 | >5 |
| CK8 | 15 | 10 | ^Λ24 | >5 |
*Temps de latence non mesuré car solution turbide.
Tableau 35 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solutions CK1 et CK3 à CK8.
[000966] La solution de pramlintide et d'insuline humaine à pH 6,6 (CK1) est turbide. Les solutions limpides de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine 100 Ul/ml à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 présentent des temps de latence supérieurs à 0,5 h à ratio molaire BB15/pramlintide de 3, pouvant être supérieurs à 5 h à partir d'un ratio BB15/pramlintide de 4.
Exemple D13 : Stabilité de solutions de pramlintide à 0,6 mg/ml et d'insuline humaine
100 Ul/ml à pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides.
| Solution | Copolyaminoacide | Concentration en co- • polyaminoadde | Ratio co- polyaminoacide/pramlintide | Temps de latence (h) .. | |
| mg/mL | mM | mol/moi | |||
| CM1 | BB20 | 2,6 i 5,3 i | 0,61 1,22 | 4 L 8 | >1 >1 |
| CM2 | BB21 | .. V | 0,6 | 4 | >10 |
| CM3 | AB22 | 2,4 | 0.3 | 2 | >5 |
| CM4 | BB24 | 2,9 | 0,6 | 4 | >10 |
| CM5 | BB23 | 3 | 0,76 | i 5 | >10 |
| CM6 | BB25 | 1,5 | 0,3 | 2 | >10 |
| CM 7 | 8822 | 2,7 | 0,6 | 4 | >5 |
| CM8 | AB23 | 7,7 | 0,69 | 4,6 | >15 |
| CM 9 | B819 | 4,7 | 0,4 | 2,8 | >1 : |
| CM 10 | AB28 | 2,3 | 0,3 | : 2 | >10 |
| CM 11 | AB24 | 2,4 | 0,3 | 2 | >5 |
| CM 12 | AB25 | 2,6 | 0,3 | 2 | >5 |
| CM 13 | AB26 | .... | 0,3 | 2 | >1 |
210
| Solution | Co- polyaminoacide | Concentration en copolyaminoacide | Ratio co- polyaminoacide/pramlintide | Temps i de : latence · ) (h) : | |
| mg/mL | mM | mol/mol ; | |||
| 2,3 | 0,5 : | 3 | >10 | ||
| CM 14 | AB27 | 1,3 ..........................2,7 | 0,15 0,3 ; | 1 : 2 i | >1 >5 |
| CM15 | AB30 | 1,2 | 0,15 0,3 | 1 2 | >1 >10 |
| CM 16 | A.B.31 | 1,3 2,5 | 0,15 0,3 : | 1 2 | >1 >10 |
| CM17 | AB29 | 5.9 8.9 | 0,8 1J5 ... | 5 7,6 | >1 >5 |
| CM 18 | AB32 | 0,3 | 2 | > 1 |
Tableau 36 : Mesure du temps de latence parThT (2 μΜ) des solutions et CM1 à CM 18.
[000967] La solution de pramiintide et d'insuline humaine à pH 6,6 (CK1) est turbide.
Les co-polyaminoacides permettent d'obtenir des temps de latence supérieurs à 1 h dans les conditions testées.
Exemple D13A : Stabilité de solutions de pramiintide à 0,6 mg/ml et d'insuline humaine 100 XU/ml à pH 6,6 en présence de différents co-polyaminoacides et de différentes teneurs en chlorure de sodium et en chlorure de zinc.
| Solution | Co- polyaminoacide | Concentration en co-polyaminoacide | [NaCi] | i [ZnCh] | Temps de < latence ' (h) i | |
| mg/mL | mM | (mM) | (mM) | |||
| CQ1 | AB14 | 6,3 | 1,87 | 100 | 1 | >5 i |
| CQ2 | AB15 | 7,8 | 1,6 | « | 0,23 | >2 |
| CQ3 | AB15 | 11,7 | 2,3 | - | 0.23 | >2 |
| AB15 | 6,3 | 1.3 | 50 | 0,23 | >2 | |
| ..........CQ6 | AB 15 | .........7,3 | .....L.6..... | 50 | 0,23 | >5 |
| CQ7 | AB15 | 3,9 | 0,8 ; | 100 | 0,23 | >2 |
| CQ8 | AB15 | ; 6,3 | 1,3 | 100 | 0,23 | >2 |
| CQ9 | AB 15 | 7,8 | 1,6 | : too | ' 0,23' 'L | >5 |
| CQ10 | AB16 | 7,4 | ..... 0,9 .. | 50 | 0,23 | >1 |
| ^..cgii | AB16 | 12,4 | 1,5 | 50 | 0,23 | >2 |
| CQ12 | AB16 | . 7Λ | 0,9 | 50 | ; i | >2 |
Tableau 37 : Mesure du temps de latence parThT (2 μΜ) des solutions CQ1 à CQ12 [000968] Les solutions de pramiintide et d'insuline humaine à pH 6,6 en présence des co-polyaminoacides de AB14, AB15 et AB16, de chlorure de sodium et de zinc présentent des temps de latence supérieurs à 1 h dans les conditions testées. L'ajout
211 de chlorure de sodium ou de chlorure de sodium et de zinc permet d'augmenter les temps de latence.
Exemple D14 : Stabilité de compositions présentant des concentrations pramlintide variables et de l'insuline humaine à 100 UI/mL en présence de co-polyaminoacide AB24, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) et de chlorure de zinc (229 μΜ) à pH 6,6.
| Solution | Concentration en pramlintide | Concentration en copolyaminoacide AB24 | Ratio CO- : polyaminoacide/ pramlintide | Temps de latence (h) i | |
| (mg/mL) | mg/mL | : mM | mol/mol | ||
| CF2 | 0,9 .... | 5,4 | 0,67 | 3 | : >10 (12) |
| CF3 | ..............0.8................. | ........4,8........ | 0,6 | 3 | >10 (14,1) |
| CF4 | 0,6 | 3·δ | 0.45 | 3 | >5 (5.51 |
| CF5 | 0.3 | .........1,8........ | i 0,22 | : 3 | >5 (5,6) |
| CF6 | 0,2 | 1 | 0,125 | 225 | ..........................>5.....(5,4)........................ |
Tableau 38 : Mesure du temps de latence par ThT (2 μΜ) des solutions CF2 à CF6.
[000969] Les solutions de pramlintide de concentration variables et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 sont turbides (exemples CF1A-E), Les solutions de pramlintide de concentration variables et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence du co-polyaminoacide AB24 présentent des temps de latence supérieurs à 5 h dans les conditions testées.
D Π : Etude de la stabilité des compositions selon l'invention
DU A: Préparation des compositions
Composition DI : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000970] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple CH1 une solution de pramlintide à 0,9 mg/mL contenant du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 6,6 est obtenue. La solution est limpide.
212
Composition D2 : Préparation d'une solution de pramlintide à 0,9 mg/ml. contenant du co-polyaminoacide BB15, du m-crésol (29 mM) et de la glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000971] Par un procédé similaire à celui utilisé à l'exemple BHQ une solution de pramlintide à 0,9 rng/mL et de co-polyaminoacide BB15 à 10 mg/mL contenant du rncrésol (29 mM) et de ia glycérine (174 mM) à pH 6,6 est obtenue. La solution est limpide.
D IÏ B : Procédure d'inspection visuelle :
[000972] Les vials ou cartouches de 3 mL remplis avec 1 mL de formulation sont inspectés visuellement afin de détecter l'apparition de particules visibles ou d'une turbidité. Cette inspection est réalisée selon les recommandations de la Pharmacopée Européenne (EP 2.9.20) : les vials sont soumises à un éclairage d'au moins 2000 Lux et sont observées face à un fond blanc et un fond noir. Le nombre de semaine ou de mois de stabilité correspond à la durée à partir de laquelle les solutions contiennent des particules visibles ou sont turbides.
[000973] Ces résultats sont en accord avec la pharmacopée US (USP <790>).
DUC: Procédure de dosage des formulations :
[000974] La quantification de la pureté de pramlintide et d'insuline et du recouvrement en peptide natif est réalisée par HPLC en phase inverse équipée d'une colonne CA18 de dimension 4,6 x 150 mm avec une taille de particules de 3,5 pm. Le pramlintide est détecté à une longueur d'onde de 214 nm et l'insuline est détectée à une longueur d'onde de 2.76 nm. L'éiution est réalisée dans une phase mobile aqueuse avec un gradient linéaire d'acétonitrile.
[000975] Le recouvrement de pramlintide ou d'insuline (%) à un temps t représente le rapport entre l'aire du pic de pramlintide ou l'aire du pic d'insuline au temps t et l’aire du pic de pramlintide initial.
[000976] La pureté de pramlintide et d'insuline (%) représente le rapport entre l'aire du pic d'absorbance du pramlintide ou d'isuline et l'aire totale de l'ensemble des pics incluant pramlintide et ses impuretés.
213
D II D : Stabilité physique en cartouches à 37 °C de solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml en présence du co-polyaminoacide BB15f de m-crésol (29 mM) et de glycérine (174 mM) à pH 6,6 ou pH 7,4.
[000977] Les solutions DI, CY1, D2 et CY7 sont filtrées (0,22 pm). 1 mL de solution est introduit dans une cartouche en verre de 3 mL pour stylo auto-injecteur. Les cartouches sont placées dans une étuve à 37 °Cen statique. Les cartouches sont observées avec une fréquence hebdomadaire.
| Solution | Concentration en copolyaminoacide BB15 | pH | Stabilité : physique : 37 °Cen cartouches (semaines) |
| mg/mL | |||
| DI | - | 6,6 | < 1 |
| CY1 | : | . 7,4 | · < 1 : |
| D2 | 10 | .... . 6,6 | > 4 |
| C'Y 7 | .10 | > 4 |
Tableau 39 : Résultats des stabilités physiques à 37 °Cen cartouche des compositions de pramlinitide à 0,9 mg/mL en présence de co-polyaminoacide BB15.
[000978] Les solutions de pramlintide à 0,9 mg/mL à pH 6,6 et pH 7,4 présente une stabilité physique à 37 °C en cartouche inférieure à une semaine.
[000979] Les solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml à pH 6,6 et pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 présentent une stabilité physique à 37 °C en cartouches d'au moins 4 semaines.
Exemple DUC: Stabilité chimique en eartouches à 37 °C de solutions de pramlintide à 0,9 mg/mL en présence du co-polyaminoacide BB15, de m-crésol (29 mM) et de glycérine (174 mM) à pH 6,6 et 7,4.
Les solutions décrites à l'exemple D II D sont analysées par chromatographie RP-HPLC.
| Solution | Concentration en co-polyaminoacide BB15 | pH | Recouvrement pramlintide (%) i 32 jours- 37 °C | Pureté pramlintide (%) | |
| mg/mL. | T0 | 32 jours 37 °C | |||
| DI | - | 6,6 | <60 | 97,2 | <50 |
| CY1 | 7,4 | <20 | 94,7 | <50 | |
| D2 | 10 | 6,6 | >90 | 97.3 | >85 |
| CY7 | 10 | Z.,4 | : >60 i | 98,6 | >60 |
Tableau 40 : Résultats des stabilités chimiques des compositions en pramlintide à 0,9 mg/mL en présence de co-polyaminoacide BB15.
214 [000980] Les solutions de pramlintide à 0,9 mg/mL à pH 6,6 et pH 7,4 présentent un recouvrement en pramlintide inférieur à 60 % % et la pureté de pramlintide est inférieure à 50 % % après 32 jours à 37 °Cen cartouche.
[000981] Les solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml à pH 6,6 et pH 7,4 en présence de co-polyaminoacide BB15 présentent un recouvrement supérieur à 65 % et pouvant être supérieur à 90 % à pH 6,6 après 32 jours à 37 °C en cartouches. En présence de co-polyaminoacide BB15, ia pureté de pramlintide est supérieure à 65 °/o et peut être supérieure à 85 % à pH 6,6.
Exemple D ÏI E : Stabilité physique en vial et cartouche à 30 °C de seiutions de pramlintide à 0,9 mg/mL et à 0,6 mg/mL en présence du co-polyaminoacide BB15, de m-crésol (29 mM) et de glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000982] Les solutions Dl, CHI, D2 et CH8 sont filtrées (0,22 pm). 1 mL de solution est introduit dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo auto-injecteur et dans des vials en verre de 3 mL. Les cartouches et les vials sont placées dans une étuve à 30 °C en statique puis sont observées toutes les 2 semaines.
| Solution | Concentration copolyaminoacide BB15 | Concentration pramlintide | p H | Stabilité physique 30 °C en vial (semaine) | Stabilité physique 30 °C en < cartouche < i (semaine) |
| mg/mL | (mg/ml.) | ||||
| Dl | - | 0,9 | 6,6 | < 7 | < 2 |
| CH1 | 0,6 | 6,6 | < 7 | ||
| D2 | 10 | .0,9. | 6,6 | > 12 | >12 |
| CH8 | 10 | . . 03 | > 12 | >12 |
Tableau 41 : Résultats des stabilités physiques en vial et en cartouche à 30 °C des compositions en pramlintide à 0,9 et 0,6 mg/mL en présence de co-polyaminoacide
BB.15.
[000983] Les solutions de pramlintide à 0,9 mg/mL et 0,6 mg/mL à pH 6,6 présentent une stabilité physique en vial inférieure à 7 semaines à 30 °C. La stabilité physique en cartouche de la solution de pramlintide à 0,9 mg/rnL pH 6,6 est inférieure à 2 semaines. [000984] Les solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et 0,6 mg/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 présentent une stabilité physique à 30 °C supérieure à 12 semaines en vial et en cartouche.
215
Exemple D II F : Stabilité chimique en vsai à 30 °C de solutions de pramlintide à 0,9 mg/mL et à 0,6 mg/mL en présence du co-poiyaminoacide BB15, de mcrésoi (29 mM) et de glycérine (174 mM) à pH 6,6.
Les solutions décrites à l’exemple DUE sont analysées par chromatographie RP-HPLC.
| Solution | Concentration copolyaminoacide BB15 | Concentration pramlintide | Recouvrement pramlintide (%) | Pureté pramlintide (%) | |
| mg/mL | (mg/mL) | 5 semaines 30 °C | T0 | 5 semaines 30 °C | |
| DI ' | - | ......................................0,9............................................... | Γ <70 | 97,2 | <60 |
| D2 | 10 | 0.9 | >95 | 97,8 | >90 |
| CH 8 | 10 | 0,6 | >95 | 94,6 | >90 |
Tableau 42 : Résultats des stabilités chimiques en via! à 30 °Cdes compositions en pramlintide à 0,9 et 0,6 mg/mL en présence de co-polyaminoacide BB15 à pH 6,6.
[000985] La solution de pramlintide à 0,9 mg/mL à pH 6,6 présente un recouvrement en pramlintide inférieur à 70 % et la pureté de pramlintide est inférieure à 60 % après 5 semaines à 30 °C en vial.
[000986] Les solutions de pramlintide à 0,9 mg/ml et 0,6 mg/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 présentent un recouvrement en pramlintide supérieur à 95 % et la pureté de pramlintide est supérieure à 90 % après 5 semaines à 30 °C.
Exemple D M F : Stabilité physique ers vial et cartouches à 30 °C de solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline 100 UI/mL à pH 6,6 ©r présence du co-polyaminoacide BB15, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) et de zinc à pH 6,6.
[000987] La solution CK8 est filtrée (0,22 μΜ). 1 mL de solution est introduit dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo auto-injecteur et dans des vials en verre de 3 mL. Les cartouches et les vials sont placées dans une étuve à 30 °C en statique puis sont observées toutes les 2 semaines.
216
| Solution | Concentration copolyaminoacide BB15 | Concentration pramlintide | Concentration Insuline | i Stabilité ·· physique i 30 °C en i vial (semaine) | Stabilité physique 30 °C en cartouche (semaine) |
| mg/mL | 1 ..... (mg/mL) ................ | (UI/mL) | |||
| CK1 | 0,6 | 100 | : * | ||
| CK8 | 10 | i 0,6 | 100 | > 3 | > 12 |
*solution turbide dès sa préparation.
Tableau 43 : Résultats des stabilités physiques en via! et en cartouche à 30 °Cdes compositions de pramlintide à 0,6 mg/mL, d'insuline 100 UI/mL et en présence de copolyaminoacide BB15 à pH 6,6.
[000988] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline à 100 UI/mL à pH 6,6 est turbide.
[000989] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 présente une stabilité physique à 30 °C supérieure à 3 semaines en vial et supérieure à 12 semaines en cartouche.
Exemple D Π G : Stabilité chimique en via! à 30 °C d’une solution de pramlintide à 0,6 mg/mi et d'insuline 1QO UI/mL à pH 6,6 en présence du copolyaminoacide BB15, de m-crésoî (29 mM), de glycérine (174 mM) et de zinc. La solution décrite à l'exemple D II F est analysée par chromatographie RP-HPLC.
| Solution | Recouvrement pramlintide : (%) : | Pureté ; pramlintide (%) | Recouvrement Insuline (%) | | ? Pureté l L Insuline ! i (%) i | ||
| 5 semaines 30 °C i | T0 | 5 semaines 30 °C | 5 semaines 30 °C i | T0 | 5 semaines 30 °C : | |
| CK8 | >90 | 96,8 | > 90 | > 90 | 97,9 1 | > 90 |
Tableau 44 : Résultats de stabilité chimique en vial à 30 °C d'une composition de pramlintide à 0,6 mg/mL, d’insuline 100 UI en présence de co-polyaminoacide BB15 à pH 6,6.
[000990] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline à 100 UI/mL à pH 6,6 est turbide.
[000991] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 présente un recouvrement en pramlintide supérieur à 90 % et la pureté de pramlintide est supérieure à 90 % après 5 semaines à
217 ° Cen vial· Le recouvrement en insuline est supérieur à 90 % et la pureté de l'insuline est supérieure à 90 % après 5 semaines à 30 °C en vial.
Exemple D II H : Stabilité physique en vial à 30 ®C et cartouche à 30 °C/37 °C de solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline 100 UI/mL à pH 6,6 en présence du co-polyaminoacide AB24 à 2,4 mg/mL, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) et de zinc à pH 6,6.
[000992] La solution CM11 est filtrée (0,22 μΜ). 1 mL de solution est introduit dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo auto-injecteur et dans des vials en verre de 3 mL. Les cartouches et les vials sont placées dans une étuve à 30 °C en statique puis sont observées toutes les 2 semaines. Des cartouches sont également placées dans une étuve à 37 °C en statique puis sont observées toutes les semaines.
| Solu Lion | Concentration copolyaminoacid e AB24 | Concentra tion pramlintid e | Concentra tion Insuline | Stabilité physique 30 °Cen vial (semaines ) | Stabilité physique 30 °Cen cartouche (semaines ) | Stabilité • physique 37 °Cen ' cartouche (semaines ) i |
| mg/mL | (mg/mL) | • (UI/mL) : | ||||
| CK1 | -V | 0,6 | 100 | * | * | * |
| CM1 1 | 2,4 | 0,6 | 100 | > 9 | > 12 | > 9 |
♦solution turbide dès sa préparation.
Tableau 45 : Résultats des stabilités physiques en vial à 30 °C et en cartouche à 30 et 37 °C des compositions de pramlintide à 0,6 mg/mL, d'insuline 100 UI/mL et en présence de co-polyaminoacide AB24 à pH 6,6.
[000993] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline à 100 UI/mL à pH 6,6 est turbide.
[000994] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide AB24 présente une stabilité physique à 30 °C supérieure à 9 semaines en vial et supérieure à 12 semaines en cartouche. La stabilité physique à 37 °C en cartouche est supérieure à 9 semaines.
Exemple D Π I : Stabilité chimique en vial et cartouche à 30 °C de solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline 100 UI/mL à pH 6,6 en présence du copolyaminoacide AB24 à 2,4 mg/mL, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) et de zinc à pH 6,6.
[000995] La solution décrite à l'exemple D II H est analysée par chromatographie RP-HPLC.
218
| Solution CM11 | Recouvrement I pramlintide ; (%) | Pu reté pramlintide (%) | Recouvrement Insuline (%) | Pureté Insuline 1 (%) | ||
| 9 semaines 30 °C | T0 | 9 semaines 30 °C | 9 semaines 30 °C | T0 | 9 semaines 30 °C | |
| Vial | >88 | 96,7 | >90 | >90 | 97,4 | >90 |
| Cartouche | >88 | 96,9 | >85 | >90 | 97,7 | >90 |
Tableau 46 : Résultats des stabilités chimiques en vial et cartouche à 30 °Cdes compositions de pramlintide à 0,6 mg/mL, d'insuline 100 UI en présence de copolyaminoacide AB24 à pH 6,6.
[000996] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide AB24 présente un recouvrement en pramlintide supérieur à 88 % et une pureté supérieure à respectivement 90 et 85 % après 9 semaines de stockage à 30 °C en via! et en cartouche. Dans ces conditions le recouvrement en insuline est supérieur à 90 % et la pureté de l'insuline supérieure à 90 % en vial et en cartouche.
Exemple D II J : Stabilité physique en cartouche à 4°C de solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL à pH 6,6 en présence du co-polyaminoacide 8815, de m-crésol (29 mM), de glycérine (174 mM) à pH 6,6.
[000997] La solution CH8 est filtrée (0,22 pm). 1 mL de solution est introduit dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo auto-injecteur. Les cartouches sont placées dans un réfrigérateur à 4 °C.
| Solution | Concentration copolyaminoacide BB15 | Concentration pramlintide | pH | Stabilité > physique < i 4 °Cen i cartouche i : (mois) : |
| mg/mL | (mg/mL.) | |||
| CH8 | / 10 | 0,6 | > 6 |
Tableau 47 : Résultats de la stabilité physique en cartouche à 4 °C dd'une composition de pramlintide à 0,6 mg/mL et en présence de co-polyaminoacide BB15 à pH 6,6.
[000998] La solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide BB15 présente une stabilité physique en cartouche supérieure à 6 mois.
219
Exemple D II K : Stabilité physique en cartouche à 4 °C de solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL à pH 6,6 et pH 7,4 en présence de DMPG à 4,5 mM.
[000999] Les solutions CZO et CZ1 sont filtrées (0,22 μΜ). 1 mL de solution est introduit dans des cartouches en verre de 3 mL pour stylo auto-injecteur. Les cartouches sont placées dans un réfrigérateur à 4 °C.
| Solution | DMPG (mM) | Concentration pramlintide i (mg/mL) | pH | Excipients | Stabilité ' physique i à 4 °C en cartouche (mois) |
| CZO | 4,5 | 0,6 | 6,6 | m-crésol 29 mM Glycérine 174 mM | < 1,5 |
| CZ1 | 4,5 | 0,6 | ; 7,4 | phénol 30 mM > Glycylglycine 8mM pH 7,4 Glycérine 174 mM | < 1,5 |
Tableau 48 : Résultats des stabilités physiques en cartouche à 4 °C des compositions de pramlintide à 0,6 mg/mL et en présence de DMPG à pH 6,6 et 7,4.
[0001000] Les solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL à pH 6,6 et à pH 7,4 présentent une stabilité physique à 4 °C et en cartouche inférieure à 1,5 mois (solutions turbides).
Exemple DHL: Stabilité en pompe de solutions de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence du co-polyaminoacide ÂB24 à 3,6 mg/MI.
[0001001] La solution CF4 composée de 0,6 mg/mL de pramlintide et de 100 UI/mL d'insuline humaine à pH 6,6 en présence du co-polyaminoacide AB24 à 3,6 mg/mL est filtrée (0,22 pm) et introduite dans un réservoir de 3 mL. pour pompe à Insuline (Minimed 530G system fabriqué par Medtronic). La pompe est équipée d'un set d'infusion (Quick set Paradigm 9/110 fabriqué par Medtronic).
[0001002] La pompe à insuline est placée dans une étuve à 37 °C sur un agitateur orbtalaire réglé à une vitesse de 100 rpm. La pompe est réglée avec un débit basal de 0,8 Ul/h. Des injections bolus de 6 UI sont réalisées 3 fois par jour pendant une durée totale de 8 jours.
[0001003] Le tableau 49 présente les résultats des mesures de MFI (Micro-Flow Imaging) et les dosages réalisés par RP-HPLC sur les fractions collectées entre le 7ème et le 8ems jour de mise en stabilité.
220
| Solution | Particules < subvisible i (Micro Flow Imaging, MFI) | Recouvre ment pramlintid e (%) | Pureté pramlintide i (%) | Recouvreme nt j Insuline ' humaine (%) | Pureté Insuline . (%) | ||
| 1 semaine 37 °C | 1 semaine 37 °C | T0 | 1 sema in i e 37 °C | 1 semaine 37 °C | T0 ; | î 1 I semaine 37 oc | |
| CM 11 | 0artLCuies>10 μ Μ < 6000 particules par i contenant* · | >95 | 97 : ·3 i | >95 | >95 | 97. 4 | >95 |
| particuless^ZS. îjM < 600 particules par contenant* |
* Norme USP <788> sur le nombre de particules sub-visibles dans les produits pour injections parentérales.
Tableau 49 : Résultats de la stabilité chimique en pompe à 37 °C des compositions de pramlintide à 0,6 mg/mL, d'insuline 100 UI/mL et en présence de co-polyaminoacide AB24 à pH 6,6.
[0001004] Après une semaine de stabilté en pompe à 37 °C, la solution de pramlintide à 0,6 mg/mL et d'insuline humaine à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de copolyaminoacide AB24 est limpide et présente un nombre de particules subvisibles conforme à la norme USP <788>. Dans ces conditions les recouvrement et les puretés de pramlintide et d'insuline sont supérieurs à 95 %.
Exemple D II M : Stabilité en pompe de solutions de pramlintide à 0f6 mg/mL et d'insuline lispro à 100 UI/mL à pH S,6 en présence du co-polyaminoacide AB24 à 3,6 mg/mL.
[0001005] La solution CA5 composée de 0,6 mg/mL de pramlintide et de 100 UI/mL d'insuline Iîspro à pH 6,6 en présence du co-polyaminoacide AB24 à 3,6 mg/mL est filtrée (0,22 pm) et soumise à un test de stabilité en pompe par un protocole identique à celui décrit à l'exemple D II L.
221
| Solution· | Particules ; subvisible < 1 (Micro Flow i Imaging, i MFI) i | Recouvre ment pramlintid e (%) | Pureté pramiintide (%) ; | Recouvrem ent lispro (%) | Pureté Insuline (%) · | ||
| 1 semaine i • 37 °C | 1 semaine 37 °C | T0 | 1 semain e 37 °C | 1 semaine 37 °C | T0 | 1 semain e 37 °C | |
| CA5 | < 6000 particules par contenant* | >95 | 97, 2 | >95 | >95 | 99,3 | >95 ; |
| saiioil˧> 25 uM < 600 particules i par i contenant* ·' |
* Critère USP <788> sur ie nombre de particules sub-visibles dans les produits pour injections parentérales.
Tableau 50 : Résultats de la stabilité chimique en pompe à 37 °C des compositions de pramiintide à 0,6 mg/mL, d'insuline lispro à 100 UI/mL et en présence de copolyaminoacide AB24 à pH 6,6.
[0001006] Après une semaine de stabiité en pompe à 37 °C, la solution de pramiintide à 0,6 mg/mL et d'insuline lispro à 100 UI/mL à pH 6,6 en présence de co-polyaminoacide AB24 est limpide et présente un nombre de particules subvisibles conforme à la norme USP <788>. Dans ces conditions les recouvrement et les puretés de pramiintide et d'insuline lispro sont supérieurs à 95 %.
E. PHARMACODYNAMIE ET PHARMACOCINETIQUE
El: Protocole de mesure de la pharmacocinétique de formulations de pramiintide et d'insuline, [0001007] Des porcs domestiques d'environ 50 kg, préalablement cathétérisés au niveau de la jugulaire, sont mis à jeun 2,5 heures avant le début de l'expérience. Dans l'heure précédant l'injection des formulations de pramiintide et d'insuline, 3 prélèvements sanguins sont réalisés afin de déterminer ie niveau basal de pramiintide.
222 [0001008] L'injection des formulations à la dose de 1,125 pg/kg pour le pramlintide et 0,1875 Ul/kg pour l'insuline est réalisée en sous-cutané au niveau du flanc de l'animal à l’aide d'un stylo à insuline (Novo, Sanofi ou Lilly) équipé d'une aiguille 31 G.
[0001009] Des prélèvements sanguins sont ensuite réalisés toutes les 4 minutes pendant 20 minutes puis toutes les 10 à 60 minutes jusqu'à 3 heures. Après chaque prélèvement, le cathéter est rincé avec une solution diluée d'héparine.
[0001010] Le sang ainsi prélevé est collecté dans un tube K2EDTA et est centrifugé pour isoler le plasma. Les taux de pramlintide dans les échantillons de plasma sont mesurés par la méthode immuno-enzymatique ELISA en sandwich pour chaque animal. [0001011] Les courbes de pharmacocinétique exprimées en delta du niveau basa! sont ensuite tracées.
[0001012] Les paramètres pharmacocinétiques suivants ont ensuite été déterminés par analyse non-compartimentale avec le logiciel Phoenix WinNonlin :
- tmax pramlintide correspondant au temps nécessaire pour atteindre la concentration maximale de pramlintide dans le plasma ;
AUCpram o-3omin correspondant à la surface sous la courbe des concentrations de pramlintide en fonction du temps entre 0 et 30 minutes post-administration ;
AUCpram 6o-i8omir> correspondant à la surface sous la courbe des concentrations de pramlintide en fonction du temps entre 60 et 180 minutes postadministration ;
Ciast correspondant à la dernière concentration de pramlintide quantifiable dans le plasma ;
- tiast correspondant au temps auquel Ciast est observée.
[0001013] Le tmax est couramment utilisé pour évaluer le démarrage de l’absorption. L.'AUCpram o-30min est couramment utilisé pour évaluer l'exposition précoce au pramlintide dans le plasma. L'AUCpram eo-isomin permet quant à elle d'évaluer l'exposition tardive au pramlintide dans le plasma. Ciast et hast permettent d'étudier les niveaux de concentration tardifs.
223
E2: Résultats de pharmacocinétique du pramlintide des formulations de pramlintide et d'insuline des exemples CA2 et CA3
| Exemp! e | Rh- Insulin e | co- polyaminoacide | Pramlintid a i (mg/mL) i | Nombre de i porcs i |
| CA1/CA2 (double injection) | 100 | : 1 i | i 8 | |
| CA3 | 100 · | BB15 | 0.6 | 10 |
[0001014] Les résultats de pharmacocinétique du pramlintide obtenus avec les compositions décrites dans les exemples CA1/CA2 et CA3 sont présentés à la Figure. 2. L'analyse de ces profils indique que la composition de l'exemple CA3 comprenant le copolyaminoacide BB15, 100 UI/mL. d'insuline et 0,6 mg/mL de pramlintide (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple CA3) permet d'obtenir une absorption du pramlintide plus lente que celle de la composition de l'exemple en double injection comprenant uniquement du pramlintide et de l'insuline (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple double injection CA1/CA2). Les paramètres de pharmacocinétique du pramlintide sont reportés dans le tableau suivant :
| Exemple | tmax pramlintide (min) | AUCpram 0- 30min (min*pmoi/L ) | AUCpram 6Q- ISOrn-n i ) l | Clast pramlintide (min) | tiasl pramlin- ï tide (min) i |
| CA1/CA2 | 20 ± 10 | 2076 ± 1596 | 3286 ± 1951 | 12 -h 5 | 153 ± 40 : |
| CA3 | 77 ± 44 | 1006 ± 885 | 5989 ± 3146 | 28 ± 24 | 168 ± 25 |
224
E3: Résultats de pharmacocinétique du pramiintide des formulations de pramiintide et d'insuline des exemples CA1/CA2 et CA4.
| Exempl e | Rh- Insulin e | co- polyaminoacide | Pramlintid e (pg/mL) | Nombre de porcs |
| CA1/CA2 | i 100 | - | 8 | |
| CA4 | 100 | AB24 | 0.6 | 12 |
[0001015] Les résultats de pharmacocinétique du pramiintide obtenus avec les compositions décrites dans les exemples CA1/CA2 et CA4 sont présentés à la Figure 3. L'analyse de ces profils indique que la composition de l'exemple CA4 comprenant le copolyaminoacide AB24, 100 UI/mL d'insuline et 0,6 pg/mL. de pramiintide (courbe tracée avec les carrés correspondant à l'exemple CA4) permet d'obtenir une absorption du pramiintide plus lente que celle de la composition de l’exemple en double injection comprenant uniquement du pramiintide et de l'insuline (courbe tracée avec les triangles correspondant à l'exemple double injection CA1/CA2). Les paramètres de pharmacocinétique du pramiintide sont reportés dans le tableau suivant :
| Exemple | tmax prarnlinti de (min) | AUCprsm 0- 30rnïn ' (mm*prnol/L ) | AUCpram 60- 180mln ; i (min*pmoi/L ; | Clast pramlintid e (min) | tlast pramlintid e ; • (min) i |
| CA1/CA2 | 20 ± 10 _____ | 2076 ± 1596 | 3286 ± 1951 | 12 ± 5 | 153 ± 40 |
| CA4 | 68 ± 23 | 749 ± 316 | 8064 ± 2963 | 34 ± 22 | 175 ± 17 i |
REVENDICATIONS
Claims (12)
1. Composition sous forme d'une solution aqueuse injectable, dont ie pH est compris entre 6,0 et 8,0, comprenant au moins :
a) de l'amyline, un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyline ;
b) un co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy, ledit co-polyaminoacide étant constitué d'unités glutamiques ou aspartiques et lesdits radicaux hydrophobes Hy étant de formule I suivante :
*“^GpR -^-GpA^—F GpCj r a Formule I dans laquelle
GpR est un radical de formules II, II' ou II :
HH HH R fi π 0!J ^R-N-^n'ou Formub ir;
- GpA est un radical de formules III ou ΠΓ :
ΠΙ ou
ΠΓ;
GpC est un radical de formule IV :
- les * indiquent les sites de rattachement des différents groupes;
- a est un entier égal à 0 ou à 1 ;
b est un entier égal à 0 ou à 1 ;
p est un entier égal à 1 ou à 2 et
226 o si p est égal à 1 alors a est égal à 0 ou à 1 et GpA est un radical de formule ΙΙΓ et, o si p est égai à 2 alors a est égai à 1, et GpA est un radical de formule HT;
c est un entier égal à 0 ou à 1, et si c est égal à 0 alors d est égal à 1 ou à 2;
· d est un entier égai à 0, à 1 ou à 2;
- r est un entier égai à 0, 1 ou à 2, et o si r est égai à 0 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d’azote en position N terminale du copolyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de ia réaction d'une fonction amine en position N terminale du précurseur du co-polyaminoacide et une fonction acide portée par le précurseur du radical hydrophobe , et o si r est égal à 1 ou 2 alors le radical hydrophobe de formule I est lié au copolyaminoacide :
* via une liaison covalente entre un atome d’azote du radical hydrophobe et un carbonyl du co-polyaminoacide, formant ainsi une fonction amide issue de la réaction d'une fonction amine du précurseur du radical hydrophobe et une fonction acide portée par le précurseur du co-polyaminoacide ou * via une liaison covalente entre un carbonyl du radical hydrophobe et un atome d'azote en position N terminal du co-polyaminoacide, formant, ainsi une fonction amide issue de ia réaction d'une fonction acide du précurseur du radical hydrophobe et une fonction amine en position N terminale portée par le précurseur du copolyaminoacide;
- R est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant une ou plusieurs fonctions -CQNH2 ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène, un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 12 atomes de carbone portant un ou plusieurs cycles insaturés ou un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;
plus précisément, R est un radical choisi dans le groupe constitué par :
o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 12 atomes de carbone, si GpR est un radical de formule ΙΓ de 1 à 11 atomes de carbone ou si GpR. est un radical de formule II de 0 à 10 atomes de carbone;
o un radical alkyle divalent, linéaire ou ramifié, comprenant si GpR est un radical de formule II de 2 à 11 atomes de carbone, si GpR est un radical de formule ΙΓ de 1 à 11 atomes de carbone ou si GpR est un radical de formule II de 0 à 10 atomes de carbone, ledit radical alkyle portant une ou plusieurs fonctions -CONHz, et o un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ;
- A est un radical choisi dans le groupe constitué par un radical éther ou polyéther non substitué comprenant de 4 à 14 atomes de carbone et de 1 à 5 atomes d'oxygène ou un radical alkyle linéaire ou ramifié comprenant de 1 à 8 atomes de carbone et éventuellement subsitué par un radical issu d'un cycle saturé, insaturé ou aromatique;
B est un radical alkyle linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant un noyau aromatique, comprenant de 1 à 9 atomes de carbone;
- Cx est un radical alkyl monovalent linéaire ou ramifié, éventuellement comprenant une partie cyclique, dans lequel x indique le nombre d'atomes de carbone et :
o si p est égal à 1, x est compris entre 9 et 25 (9 < x < 25) :
o si p est égal à 2, x est compris entre 9 et 15 (9 < x < 15), le ratio i entre le nombre de radicaux hydrophobes et ie nombre d'unités glutamiques ou aspartiques étant compris entre entre 0 < i < 0,5 ;
lorsque plusieurs radicaux hydrophobes sont portés par un co-polyaminoacide alors ils sont identiques ou différents, le degré de polymérisation DP en unités glutamiques ou aspartiques est compris entre 5 et 250 ;
les fonctions acides libres étant sous forme de sel de cation alkalin choisi dans le groupe constitué par Na+ et K+ ;
caractérisé en ce que la composition ne comprend pas une insuline basale dont le point isoélectrique pi est compris entre 5,8 et 8,5.
2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle p ~ 1, représentée par la formule V suivante :
formule V
228
GpR, GpA, GpC, r et a tels que définis dans ia revendication 1.
3. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que lesdits radicaux hydrophobes sont choisis parmi les radicaux hydrophobes de formule I dans laquelle a = 1 et p = 2, représentée par la formule VI suivante :
-(GpR VgpA-4 GpCy r 2 Formule VI dans laquelle GpR, GpA, GpC, r et a tels que définis dans ia revendication 1.
4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que le co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-poiyaminoacides de formule VH suivante :
formule VII dans laquelle, « D représente, indépendamment, soit un groupe -CH2- (unité aspartique) soit un groupe -CH2-CH2- (unité glutamique), « Hy est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, ® Ri est un radical hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, ou un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à CIO, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyrogiutamate, * R? est un radicai hydrophobe choisi parmi les radicaux hydrophobes de formules I, V ou VI, ou un radical -NR’R, R.' et R identiques ou différents
229 étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à CIO, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hêtéroatomes, choisis dans le groupe constitué par O, N et S, ® X représente un H ou une entité cationique choisie dans ie groupe comprenant les cations métalliques ;
® n + m représente le degré de polymérisation DP du co-polyaminoacide, c'est-à-dire le nombre moyen d'unités monomériques par chaîne de copolyamînoacide et 5 < n + m < 250.
5. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le copolyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les copoiyaminoacides de formules VII, dans laquelle Ri = R'-; et R2 = R'2, de formule Vila suivante :
O
Formule Vila dans laquelle,
- m, η, X, D et Hy tels que définis dans ia revendication 4,
R'i est un radical choisi dans le groupe constitué par un H, un groupe acyle linéaire en C2 à CIO, un groupe acyle ramifié en C3 à CIO, un benzyle, une unité « acide aminé » terminale et un pyroglutamate,
- R'j est un radical -NR'R, R' et R. identiques ou différents étant choisis dans le groupe constitué par H, les alkyles linéaires ou ramifiés ou cycliques en C2 à CIO, le benzyle et lesdits R' et R alkyles pouvant former ensemble un ou des cycles carbonés saturés, insaturés et/ou aromatiques et/ou pouvant comporter des hétéroatomes, choisis dans ie groupe constitué par O, N et S.
230
6. Composition selon la revendication 4, caractérisée en ce que le copolyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes est choisi parmi les co-polyaminoacides de formule VII dans laquelle n 0 de formule Vllb suivante :
θ Formule Vllb dans laquelle m, X, D; Ri et R? tels que définis dans la revendication 4 et au moins Ri ou Rz est un radical hydrophobe de formule I, V ou VI.
7. Composition selon l'une quelconque des revendications précédente, caractérisée en ce que ratio molaire co-poîyaminoacide/amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est supérieur ou égal à 1.
8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédente, caractérisée en ce que l'amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est l'amyline.
9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédente, caractérisée en ce que l'amyline, agoniste au récepteur de l'amyline ou analogue d'amyline est le pramlintide.
10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédente, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre une insuline prandiale.
11. Composition selon l'une quelconque des revendications précédente, caractérisée en ce que ratio molaire co-polyamlnoacide/insuline est supérieur ou égal S 1 n
12. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que ladite composition présente une stabilité mesurée par ThT supérieure à celle
231 d’une composition de référence comprenant de l'amyline , un agoniste au récepteur de l'amyline ou un analogue d'amyiine mais ne comprenant pas de co-polyaminoacide porteur de charges carboxylates et de radicaux hydrophobes Hy.
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
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