FR3029928A1

FR3029928A1 - Gel reticule

Info

Publication number: FR3029928A1
Application number: FR1462401A
Authority: FR
Inventors: Francois Bourdon; Stephane Meunier
Original assignee: Teoxane SA
Current assignee: Teoxane SA
Priority date: 2014-12-15
Filing date: 2014-12-15
Publication date: 2016-06-17
Anticipated expiration: 2034-12-15
Also published as: PT3233043T; FR3029928B1; WO2016096920A1; EP3233043B1; ES2767307T3; US20170354761A1; EP3233043A1; PL3233043T3; US10307512B2

Abstract

La présente invention a pour objet un procédé de préparation d'un gel réticulé d'au moins un polysaccharide ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer d'une solution formée d'un milieu aqueux comprenant au moins ledit/lesdits polysaccharide(s) ou un de ses/leurs sels sous une forme non réticulée, au moins un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et au moins un sel de phosphate ; b) réticuler la solution de l'étape a) et, le cas échéant ; c) récupérer ledit gel réticulé formé.

Description

La présente invention vise à proposer un procédé de préparation d'hydrogels à base d'un polysaccharide réticulé, et de préférence d'acide hyaluronique, ou de l'un de ses sels. Naturellement présent dans la peau, l'acide hyaluronique est connu pour ses propriétés viscoélastiques ainsi que sa très grande propension à absorber l'eau. Ses propriétés contribuent en grande partie à l'élasticité de la peau. C'est précisément au regard de ces propriétés que ce composé est mis à profit depuis désormais plus de 10 ans dans de nombreuses applications relevant des domaines médicaux et cosmétiques, tels que la chirurgie esthétique, la chirurgie dentaire, la viscosupplémentation articulaire ou encore l'ophtalmologie. Ainsi, l'acide hyaluronique est notamment utilisé pour le comblement des rides et pour amoindrir, voire effacer, un affaissement local de la structure du derme qu'est une ride, généralement via injection directe dans le derme, au niveau de la ride considérée. En fait, l'acide hyaluronique est mis en oeuvre pour l'essentiel sous la forme d'un gel réticulé compte-tenu de la résistance accrue de cette forme particulière à la dégradation et à la chaleur, et donc à la stérilisation. Ces gels réticulés d'acide hyaluronique peuvent être obtenus par différents procédés de préparation. D'une manière générale, ces procédés requièrent deux étapes principales, la première consistant à hydrater l'acide hyaluronique pour le transformer en un gel aqueux et la seconde visant à réticuler ledit gel aqueux en présence d'un agent apte à induire sa réticulation (également appelé « agent réticulant »). A titre illustratif de ces procédés, peuvent notamment être cités ceux décrits dans les documents US 2006/0105022, WO 2006/056204 ou US 2007/0036745. Pour des raisons évidentes, l'amélioration des propriétés mécaniques des hydrogels, à base d'un polysaccharide réticulé, objectif susceptible de passer par l'amélioration des procédés de préparation de ces hydrogels, relève d'un objectif constant. A ce titre, FR 2 997 085 décrit un procédé incluant la présence d'un sel d'halogénure alcalin, notamment du NaC1, lors de la réalisation de la réaction de réticulation. Ce sel d'halogénure alcalin permet d'améliorer les propriétés rhéologiques du gel réticulé. La présente invention vise à proposer un procédé permettant l'obtention de gels réticulés présentant des propriétés mécaniques encore plus avantageuses.

3029928 2 Contre toute attente, les inventeurs ont constaté que la réalisation de l'étape de réticulation du polysaccharide, notamment de l'acide hyaluronique, en présence d'un agent réticulant classique et en outre d'un composé particulier, permet d'accéder à un gel réticulé particulièrement avantageux en termes de propriétés mécaniques et de résistance à la 5 dégradation à la chaleur (stérilisation) et à un stress oxydant (par incubation au H202), comparativement aux gels obtenus via les procédés conventionnels. Ainsi, la présente invention concerne, selon un premier de ses aspects, un procédé de préparation d'un gel réticulé d'au moins un polysaccharide ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à : 10 a) disposer d'une solution (ou mélange) formée d'un milieu aqueux comprenant au moins ledit/lesdits polysaccharide(s) ou un de ses/leurs sels sous une forme non réticulée, au moins un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et au moins un sel de phosphate ; b) réticuler la solution de l'étape a) et, le cas échéant ; 15 c) récupérer ledit gel réticulé formé. De préférence, l'étape b) de réticulation est réalisée à température ambiante. Plus précisément, et comme il ressort des exemples ci-après, l'invention résulte de l'observation inattendue par les inventeurs que la présence d'un sel de phosphate, lors de la réalisation de la réaction de réticulation, permet d'améliorer significativement : 20 - les propriétés rhéologiques du gel réticulé obtenu ; et - les propriétés de résistance à la dégradation à la chaleur (stérilisation) et à un stress oxydant (incubation avec H202) du gel réticulé obtenu. Qui plus est, et de manière encore plus inattendue, les inventeurs ont observé que la présence d'un sel de phosphate conduit à une réticulation effective du 25 polysaccharide avec des quantités très faibles en agent réticulant qui, en l'absence dudit sel de phosphate, ne permettent pas la réalisation d'une réticulation effective du polysaccharide. Cela ressort notamment de l'exemple 1 ci-après. La présence d'au moins un sel de phosphate lors de la réaction de réticulation conduit même à un effet synergique puisque les propriétés rhéologiques du gel réticulé 30 obtenu ne peuvent être reproduites avec des gels réticulés dont la réticulation est réalisée séquentiellement, à savoir en présence d'un agent réticulant époxydique bi- ou multi- 3029928 3 fonctionnel puis d'un sel de phosphate, ou inversement. Cela ressort notamment de l'exemple 4 ci-après. De ces observations, il en découle qu'un procédé conforme à l'invention est avantageux en ce qu'il permet d'accéder à un gel réticulé satisfaisant, notamment pour le 5 comblement des rides, en utilisant des quantités réduites en agent(s) réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel mais en revanche doté de propriétés rhéologiques au moins équivalentes à celles manifestées par un gel réticulé obtenu avec un procédé de réticulation classique mettant en oeuvre des quantités plus importantes d'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel.

10 Un procédé conforme à l'invention permet ainsi de limiter la quantité d'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel à introduire pour la réalisation de la réaction de réticulation, et donc (1) de limiter la quantité potentielle d'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel résiduel après la réaction de réticulation dont l'homme du métier cherche aujourd'hui au maximum à s'affranchir, notamment au moyen d'étapes ultérieures 15 de purification, et (2) de diminuer le taux de modification du polysaccharide réticulé, c'est- à-dire de se rapprocher au maximum du polysaccharide sous sa forme naturelle non réticulée. Cela ressort notamment de l'exemple 1 ci-après. La mise en oeuvre d'un sel de phosphate en présence d'un polysaccharide a déjà été considérée à des fins de réticulation ou de fonctionnalisation dudit polysaccharide 20 (Lack et al., 2007, Carbohydrate Research, 342 : 943 ; Dulong et al., 2011, Springer, Polym. Bull. ; WO 2008/090583, WO 2009/047346 ou US 5,783,691). Toutefois, aucun de ces documents ne décrit l'effet inattendu d'un sel de phosphate à titre de « booster » dans le cas d'une réticulation entre un polysaccharide et un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel.

25 Tous les avantages susmentionnés en lien avec un procédé selon la présente invention sont d'autant plus inattendus qu'aucune réaction d'accrochage du sel de phosphate sur le polysaccharide n'a été mise en évidence. Cela ressort plus particulièrement de l'exemple 1 ci-après. Selon un mode de réalisation particulier, un procédé de l'invention peut en 30 outre comprendre au moins une étape d) d'homogénéisation de la solution (ou du mélange) de l'étape a), cette étape étant réalisée antérieurement et/ou simultanément à l'étape de réticulation b), de préférence antérieurement à l'étape de réticulation b).

3029928 4 Avantageusement, le gel réticulé obtenu à l'issue de la mise en oeuvre d'un procédé conforme à l'invention est un gel viscoélastique majoritairement élastique, c'est-à-dire diminué, voire dénué, de la faculté de s'écouler en l'absence de contraintes autres que son propre poids.

5 Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne une composition dermatologique injectable et stérile comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention. Selon encore un autre de ses aspects, la présente invention concerne une 10 composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne un kit comportant : - un conditionnement contenant au moins une dose d'un gel réticulé obtenu par 15 mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention ou d'une composition telle que définie ci-dessus ; et - un dispositif d'injection dans ou à travers la peau ou un dispositif de micro-perforation de la peau, dédié à l'administration de ladite dose. Selon un autre de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'un 20 gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention, pour le comblement des défauts de volume de la peau, et notamment le comblement des rides. La présente invention concerne encore un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention, pour son utilisation pour le traitement des déficiences gingivales, en particulier des maladies parodontales et les désordres associés.

25 Le terme « maladie parodontale » est un nom générique utilisé pour décrire les maladies inflammatoires du parodonte, les tissus environnants et de fixation des dents à la mâchoire. Le parodonte est constitué du cément, des ligaments parodontal et de la gencive, qui comprend l'os alvéolaire et les tissus mous la recouvrant. La maladie parodontale est la principale cause de perte de dents chez la population adulte (Anderson's Pathology, p.2000, 30 John M. Kissane ed., 9ème éd. (1992)).

3029928 5 La présente invention concerne également un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention, pour son utilisation pour la vi scosuppl ém entati on articulaire. La présente invention concerne encore un gel réticulé obtenu par mise en 5 oeuvre d'un procédé selon la présente invention, pour son utilisation pour le traitement de désordres ophtalmiques, notamment pour l'extraction de la cataracte, l'insertion et le retrait de lentilles intraoculaires (L10). Au sens de la présente invention, le terme « peau » englobe la peau du visage, du cou, du décolleté, des mains, du cuir chevelu, de l'abdomen et/ou des jambes mais 10 également les lèvres. Polysaccharide Par « polysaccharide », on entend tout polymère constitué de plusieurs oses liés entre eux par des liaisons 0-osidiques et ayant pour formule générale : -[Cx(H20)y)]n-.

15 Par « non réticulé », au sens de la présente invention, on entend désigner un gel aqueux de polysaccharides non réticulé ou non transformé, c'est-à-dire une solution de polysaccharides dont les chaînes du ou des polymère(s) ne sont pas connectées entre elles par des liaisons fortes ou covalentes. Un polysaccharide conforme à l'invention est plus particulièrement sélectionné 20 au regard des propriétés que l'on souhaite voir manifester par le gel réticulé obtenu selon l'invention. Plus particulièrement, un tel polysaccharide doit présenter une bonne biocompatibilité. Egalement, un polysaccharide selon l'invention doit présenter une bonne stabilité dans le temps, notamment après réticulation, compte-tenu de sa destination, à 25 savoir notamment pour le comblement des défauts de volume de la peau, et notamment le comblement des rides. Un polysaccharide ou sel de polysaccharide selon l'invention est donc physiologiquement acceptable et peut être d'origine naturelle ou synthétique. Les polysaccharides convenant à l'invention peuvent notamment être choisis 30 parmi le sulfate de chondroïtine, le kératane, le sulfate de kératane, l'héparine, le sulfate d'héparine, le xanthane, la carraghénine, l'acide hyaluronique (HA), le chitosane, la 3029928 6 cellulose et ses dérivés, l'alginate, l'amidon, le dextrane, le pullulane, le galactomannane et leurs sels biologiquement acceptables. Les sels de polysaccharides conformes à l'invention sont plus particulièrement choisis parmi les sels physiologiquement acceptables, tels que le sel de sodium, le sel de 5 potassium, le sel de zinc, le sel d'argent, et leurs mélanges, de préférence le sel de sodium. De préférence, un polysaccharide ou sel de polysaccharide selon l'invention, voire l'acide hyaluronique (HA), présente un haut poids moléculaire, de préférence un poids moléculaire moyen supérieur ou égal à 50 000 Da, voire même supérieur à 3 MDa selon l'application considérée.

10 Avantageusement, un polysaccharide ou sel de polysaccharide selon l'invention, voire l'acide hyaluronique, peut présenter un poids moléculaire moyen allant de 50 000 à 10 000 000 Daltons, de préférence de 500 000 à 4 000 000 Daltons. Un polysaccharide particulièrement préféré est l'acide hyaluronique (HA) ou l'un de ses sels, de préférence le hyaluronate de sodium (NaHA).

15 Agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel Par « agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel », on entend tout composé capable d'induire une réticulation entre les différentes chaines de polysaccharide et comprenant au moins un groupe époxyde bi- ou multi-fonctionnel.

20 Le choix de cet agent réticulant au regard du polysaccharide à réticuler relève clairement des compétences de l'homme de l'art. A titre d'agent réticulant conforme à la présente invention, peuvent notamment être cités les agents réticulant époxydiques bi- ou multi-fonctionnels, notamment le butanediol diglycidyl éther (BDDE), le diépoxy-octane, le 1,2-bis-(2,3-époxypropy1)-2,3- 25 éthylène, et leurs mélanges. De préférence, un agent réticulant conforme à l'invention est le butanediol diglycidyl éther (BDDE). L'ajustement de la quantité en agent réticulant époxydique bi- ou multifonctionnel pour la réalisation de la réaction de réticulation relève également des 30 compétences de l'homme du métier. Avantageusement, le rapport molaire « nombre total de moles d'unités polysaccharidiques/nombre de moles d'agent(s) réticulant époxydique bi- ou multi- 3029928 7 fonctionnel » dans une solution selon l'étape a) peut être compris entre 0,005 et 1, de préférence entre 0,01 et 0,25. Le nombre total de moles d'unités polysaccharidiques peut être de préférence le nombre total de moles d'unités disaccharidiques formant le monomère de l'acide 5 hyaluronique. Sel de phosphate Comme indiqué ci-dessus, les inventeurs ont observé de manière inattendue que, outre l'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel, la présence additionnelle 10 d'au moins un sel de phosphate pour la réalisation de l'étape de réticulation conduit à une amélioration significative des propriétés, en termes de rhéologie et de résistance à la dégradation à la chaleur (stérilisation) et à un stress oxydant (par incubation au H202), manifestées par un gel réticulé obtenu à l'issu du procédé selon l'invention. Un sel de phosphate selon l'invention peut être choisi parmi les sels de sodium, 15 les sels de potassium, les sels de lithium, les sels de césium, les sels d'argent, et leurs mélanges, de préférence un sel de sodium. Avantageusement, un sel de phosphate selon l'invention peut être choisi parmi le sodium phosphate (SP), le sodium triphosphate (STPP), le sodium trimétaphosphate (STMP), et leurs mélanges, de préférence le sodium trimétaphosphate.

20 Avantageusement, le rapport molaire « nombre de moles de sel(s) de phosphate/nombre total de moles d'unités polysaccharidiques » dans une solution selon l'étape a) peut être compris entre 0,005 et 1, de préférence entre 0,01 et 0,25. Là encore, le nombre total de moles d'unités polysaccharidiques peut être de préférence le nombre total de moles d'unités disaccharidiques formant le monomère de 25 l'acide hyaluronique. Procédé selon l'invention Un procédé de l'invention requiert, dans un premier temps, de disposer d'une solution formée d'un milieu aqueux (ou gel aqueux) comprenant au moins un 30 polysaccharide, ou un de ses sels, sous une forme non réticulée.

3029928 8 La solution considérée en étape a) d'un procédé selon la présente invention peut être au préalable obtenue par mise en présence, au sein d'un réceptacle approprié : (i) d'un milieu aqueux ; (ii) d'au moins un polysaccharide, ou un de ses sels, sous une forme non 5 réticulée ; (iii) d'au moins un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel ; et (iv) d'au moins un sel de phosphate. l'ordre d'ajout dans le réceptacle des composés (i) à (iv) étant indifférent. Selon une première variante de réalisation, la solution considérée en étape a) 10 d'un procédé selon la présente invention est au préalable obtenue par mise en présence, au sein d'un réceptacle approprié : (i) d'un milieu aqueux ; (ii) d'au moins un polysaccharide, ou un de ses sels, sous une forme non réticulée ; puis ajout 15 (iii) d'au moins un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel ; et (iv) d'au moins un sel de phosphate, l'ordre d'ajout dans le réceptacle des composés (iii) et (iv) étant indifférent, voire l'ajout dans le réceptacle des composés (iii) et (iv) étant avantageusement simultané. L'ajout simultané dans le réceptacle des composés (iii) et (iv) implique une 20 étape préalable ou parallèle de préparation d'une solution (dite solution de réticulation) comprenant au moins l'/les agent(s) réticulant époxydique(s) bi- ou multi-fonctionnel et le(s) sel(s) de phosphate. Selon une seconde variante de réalisation, la solution considérée en étape a) d'un procédé selon la présente invention est au préalable obtenue par mise en présence, au 25 sein d'un réceptacle approprié : (i) d'un milieu aqueux ; (ii) d'au moins un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel ; (iii) d'au moins un sel de phosphate ; puis ajout (iv) d'au moins un polysaccharide, ou un de ses sels, sous une forme non 30 réticulée, l'ordre d'ajout dans le réceptacle des composés (i), (ii) et (iii) étant indifférent, voire l'ajout dans le réceptacle des composés (ii) et (iii) étant avantageusement simultané.

3029928 9 L'ajout simultané dans le réceptacle des composés (ii) et (iii) implique une étape préalable ou parallèle de préparation d'une solution (dite solution de réticulation) comprenant au moins l'/les agent(s) réticulant époxydique(s) bi- ou multi-fonctionnel et le(s) sel(s) de phosphate.

5 Par « milieu aqueux », au sens de la présente invention, on entend tout milieu liquide contenant de l'eau et qui a la propriété de dissoudre un polysaccharide ou un de ses sels. La nature du milieu aqueux est plus particulièrement conditionnée au regard du type de réticulation envisagée, du type d'agent réticulant considéré, mais également du 10 type de polysaccharide utilisé. A ce titre, le milieu aqueux susceptible de convenir sera ajusté en pH selon les connaissances de l'homme du métier. De préférence, et notamment compte-tenu de l'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel, le milieu aqueux est de préférence basique. Ainsi, et de manière 15 encore plus préférée, le milieu aqueux a un pH basique, de préférence supérieur à 11, voire même supérieur à 12. Par exemple, dans le cas de la mise en oeuvre du BDDE à titre d'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel, un milieu aqueux particulièrement préféré peut être un milieu alcalin, de préférence l'hydroxyde de sodium (NaOH), plus 20 particulièrement une solution d'hydroxyde de sodium à pH supérieur à 12. Avantageusement, cette étape de formation d'une solution selon l'étape a) peut être réalisée à température ambiante, de préférence à une température inférieure à 35 °C, et mieux à une température allant de 15 à 25 °C.

25 La formation d'une solution telle que considérée en étape a) implique avantageusement au moins une homogénéisation, comme indiqué ci-dessus. Cette étape est illustrée par l'étape d) du procédé de l'invention. Cette opération a plus particulièrement pour but d'hydrater et d'homogénéiser parfaitement le polysaccharide dans le milieu aqueux, et ainsi de contribuer à 30 l'optimisation des qualités du gel réticulé attendu.

3029928 10 Cette opération a également pour but d'homogénéiser l'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et le sel de phosphate dans la solution de l'étape a), contribuant également à l'optimisation des qualités du gel réticulé attendu. L'homogénéisation est considérée comme satisfaisante lorsque la solution 5 obtenue présente une coloration homogène, sans agglomérat et une viscosité uniforme. Elle peut avantageusement être réalisée dans des conditions opératoires douces pour prévenir une dégradation des chaines du polysaccharide. Cette étape est d'autant plus importante lorsque le polysaccharide présente un haut poids moléculaire. L'hydratation d'un tel composé a alors en effet tendance à 10 engendrer la formation d'une solution de haute viscosité au sein de laquelle l'apparition d'agglomérats est couramment observée. L'étape d) d'homogénéisation de la solution obtenue selon l'étape a) est réalisée antérieurement et/ou conjointement à l'étape de réticulation b) décrite ci-après, de préférence antérieurement à l'étape de réticulation b).

15 La durée de cette étape d'homogénéisation dépend notamment de la nature du polysaccharide, et plus particulièrement de son poids moléculaire, de sa concentration, des teneurs respectives des différents composés mis en oeuvre, notamment des quantités de polysaccharide(s) engagées, des conditions opératoires au sein du milieu aqueux ainsi que du dispositif d'homogénéisation utilisé.

20 L'ajustement de la durée d'homogénéisation adéquate pour obtenir un gel aqueux de polysaccharide suffisamment homogène relève des compétences générales de l'homme du métier. L'homogénéisation peut également se décomposer en plusieurs cycles, éventuellement avec des temps d'attente entre les cycles, notamment de manière à 25 apprécier la qualité d'homogénéisation du/des polysaccharide(s) dans le milieu aqueux. De préférence, une étape d'homogénéisation selon la présente invention peut se dérouler sur une durée totale inférieure à 200 minutes, de préférence inférieure à 150 minutes, voire comprise entre 5 et 100 minutes.

30 La solution de l'étape a) est ensuite soumise à des conditions appropriées pour la réaction de réticulation. Cette étape est illustrée par l'étape b) du procédé de l'invention.

3029928 11 La réticulation a pour but la création de ponts entre les chaines de polysaccharides, et notamment d'acide hyaluronique, permettant l'obtention d'un réseau tridimensionnel solide et dense à partir d'une solution visqueuse. La première condition pour induire la réalisation de la réaction de réticulation 5 dans un procédé selon la présente invention réside dans la présence, au sein de la solution de l'étape a), d'au moins un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et d'au moins un sel de phosphate. Les conditions opératoires de la réaction de réticulation peuvent dépendre notamment de la nature du polysaccharide, de son poids moléculaire, de la nature de 10 l'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et du milieu aqueux. Selon une première variante de réalisation, l'étape b) de réticulation est réalisée à température ambiante. De préférence, et selon cette variante de réalisation, l'étape b) de réticulation peut être réalisée à une température inférieure à 35 °C, de préférence à une température 15 allant de 15 à 25 °C, et mieux de 19 à 23 °C. Une réticulation à température ambiante implique une cinétique de réticulation telle que l'étape b) de réticulation peut alors se dérouler de préférence sur une durée comprise entre 5 heures et 336 heures (soit 2 semaines), de préférence entre 20 heures et 150 heures, et mieux entre 40 heures et 100 heures.

20 Une cinétique de réticulation plus rapide, c'est-à-dire inférieure à 5 heures, peut quand à elle être acquise par mise en présence d'une solution de l'étape a) avec au moins un élément stimulant, différent de l'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et du sel de phosphate. L'élément stimulant peut par exemple être figuré par le chauffage, l'exposition sous UV, l'exposition sous micro-ondes, voire la mise en contact de la 25 solution de l'étape a) avec un matériau de type catalyseur. Le choix d'un tel élément stimulant relève des connaissances générales de l'homme du métier. Ainsi, un élément stimulant peut consister en : - l'immersion du réceptacle comprenant la solution de l'étape a) dans un bain 30 contenant un fluide chaud, par exemple dont la température est supérieure à 40 °C, de préférence comprise entre 45 et 60 °C ; 3029928 12 - l'exposition de celui-ci à des rayonnements de certaines longueurs d'ondes de type UV, par exemple, à des rayonnements micro-ondes ou encore à infrarouge ; - l'irradiation de celui-ci au moyen de rayons ionisants, à l'image du procédé décrit dans le document US 2008/0139796 ; et 5 - la réticulation enzymatique ; - l'ajout d'un catalyseur et/ou d'un intermédiaire de réaction, voire - les combinaisons entre les différents éléments susmentionnés. De préférence, et selon la variante de réalisation où l'étape b) de réticulation est réalisée en présence d'un élément stimulant, ledit élément stimulant consiste en une 10 élévation de la température de la solution de l'étape a). Avantageusement, et selon cette variante de réalisation, l'étape b) de réticulation est réalisée à une température supérieure à 40 °C, de préférence supérieure à 50 °C, et plus particulièrement comprise entre 45 et 60 °C, et mieux entre 50 et 55 °C. Le degré de réticulation dépend également de la durée de réticulation imposée 15 aux gels. Plus le temps sera long, plus il sera important, avec toutefois un optimum à ne pas dépasser. Ainsi, dans le cas d'une réticulation réalisée en présence d'un élément stimulant, notamment d'une élévation de la température comme décrite ci-dessus, l'étape b) de réticulation peut avantageusement être réalisée sur une durée allant de 30 à 20 300 minutes, préférentiellement de 100 à 240 minutes. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré considérant l'emploi d'un élément stimulant, notamment figuré par une élévation de la température comme décrite ci-dessus, l'étape b) de réticulation est réalisée à une température de l'ordre de 50 à 55 °C, pendant une durée de 100 à 240 minutes.

25 Avantageusement, les conditions de réticulation sont ajustées pour obtenir un degré de réticulation tel que le gel formé soit un gel viscoélastique, voire même majoritairement élastique. L'arrêt de la réticulation peut intervenir antérieurement, conjointement ou 30 postérieurement à l'étape de récupération du gel c). Par exemple, l'arrêt de la réticulation peut être réalisé par ou résulter de : - la neutralisation du pH ; 3029928 13 - la dilution du gel réticulé ; - l'arrêt des conditions opératoires, par exemple l'arrêt du rayonnement ou du chauffage ; et/ou - l'épuisement en agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel.

5 Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, le procédé selon l'invention met en oeuvre (i) du hyaluronate de sodium à titre de polysaccharide en un milieu alcalin, (ii) du butanediol diglycidyl éther (BDDE) à titre d'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et (iii) du sodium trimétaphosphate (STMP) à titre de 10 sel de phosphate. Comme indiqué ci-dessus, l'effet avantageux attaché à la présence du sel de phosphate autorise la mise en oeuvre de quantité réduite en agent réticulant époxydique biou multi-fonctionnel, comparativement aux procédés conventionnels, tout en maintenant 15 des propriétés mécaniques et de résistance à la dégradation à la chaleur et à un stress oxydant satisfaisantes des gels réticulés obtenus à l'issu de la mise en oeuvre du procédé selon l'invention. Ainsi, selon ce mode de réalisation particulier, le(s) polysaccharide(s) réticulé(s) compris dans un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon 20 l'invention peu(ven)t présenter un taux de modification inférieur à 10 %, de préférence compris entre 0,1 % et 5 %, mieux entre 0,4 % et 2,5 %, voire même entre 0,7 % et 1,6 %, tout en demeurant satisfaisant sur le plan des propriétés mécaniques et de résistance à la dégradation à la chaleur et à un stress oxydant. Au sens de la présente invention, par « taux de modification », on entend 25 désigner le rapport entre le nombre de moles d'agent réticulant fixées sur le polysaccharide, et le nombre de moles de polysaccharide formant ledit gel réticulé. Cette grandeur peut notamment être mesurée par une analyse en RMN 1H du gel réticulé, comme décrit en exemple 1 ci-après. Par « nombre de moles d'acide hyaluronique », on entend le nombre de moles 30 de motifs disaccharides répétitifs de l'acide hyaluronique, le motif disaccharide étant composé d'acide D-glucuronique et de D-N-acétylglucosamine liés entre eux par des liaisons glycosidiques alternées beta-1,4 et beta-1,3.

3029928 14 En outre, et comme il ressort de l'exemple 1 ci-dessous, le sel de phosphate dans un procédé selon l'invention est également avantageux en ce qu'il n'a pas été identifié de modification additionnelle du polysaccharide liée à ce sel de phosphate.

5 Egalement, un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention peut présenter un module élastique (G') compris entre 20 et 1000 Pa, de préférence entre 35 Pa et 400 Pa, associé à un angle de déphasage (Ô) inférieur à 45°. Ces paramètres peuvent notamment être mesurés au moyen des protocoles décrits ci-après.

10 Selon un mode de réalisation particulier, et afin d'améliorer encore les qualités de l'implant, un procédé selon la présente invention peut en outre comprendre une étape e) consistant à ajouter au moins un polysaccharide non réticulé, de préférence de l'acide hyaluronique non-réticulé, cette étape e) étant réalisée antérieurement, conjointement ou 15 postérieurement à l'étape de récupération c) mais nécessairement après l'étape b) de réticulation. Ainsi, un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé selon la présente invention peut en outre comprendre un polysaccharide non réticulé, de préférence de l'acide hyaluronique non-réticulé.

20 De préférence, l'étape e) lorsqu'elle est présente dans un procédé selon l'invention est réalisée postérieurement à l'étape de récupération c). Le polysaccharide non réticulé, de préférence l'acide hyaluronique non réticulé, peut présenter les caractéristiques susmentionnées.

25 Selon encore un autre mode de réalisation particulier, un procédé selon la présente invention peut en outre comprendre une étape f) consistant à ajouter au moins un agent anesthésique, cette étape f) étant réalisée de préférence postérieurement à l'étape b) de réticulation, voire même postérieurement à l'étape de purification définie ci-après lorsque cette dernière est réalisée.

30 La choix et la quantité en agent anesthésique sont ajustés de manière à ne pas soulever de risque d'incompatibilité avec les autres composés mis en oeuvre dans un gel 3029928 15 réticulé selon l'invention, et notamment avec le polysaccharide et plus particulièrement avec l'acide hyaluronique, et à être compatible avec les utilisations considérées. Ces ajustements relèvent des compétences générales de l'homme de l'art. Un agent anesthésique utilisable dans la présente invention peut ainsi être 5 choisi parmi l'ambucaïne, l'amolanone, l'amylocaïne, l'articaïne, la benoxinate, la benzocaïne, la betoxycaïne, le biphénamine, la bupivacaïne, la butacaïne, le butamben, la butanilicaïne, le butéthamine, la butoxycaïne, la carticaïne, la chloroprocaïne, le cocaéthylène, la cocaïne, la cyclométhycaïne, la dibucaïne, la diméthysoquine, la diméthocaïne, le dipérodone, la dycyclonine, l'ecgonidine, l'ecgonine, le chlorure d'éthyle, 10 la étidocaïne, la beta-eucaïne, l'euprocine, la fénalcomine, la formocaïne, l'hexylcaïne, l'hydroxytétracaïne, l'isobutyl p- aminobenzoate, la leucinocaïne mésylate, le lévoxadrol, la lidocaïne, la mépivacaïne, la méprylcaïne, la métabutoxycaïne, le chlorure de méthyle, la myrtécaïne, la naépaïne, l'octacaïne, l'orthocaïne, l'oxéthazaïne, la paréthoxycaïne, la phénacaïne, le phénol, la pipérocaïne, la piridocaïne, le polidocanol, la pramoxine, la 15 prilocaïne, la procaïne, la propanocaïne, la proparacaïne, la propipocaïne, la propoxycaïne, la pseudococaïne, la pyrrocaïne, la ropivacaïne, l'alcool salicylique, la tétracaïne, la tolycaïne, la trimécaïne, la zolamine, ou un de leurs sels. De préférence, l'agent anesthésique peut être la lidocaïne et/ou la mépivacaïne, et mieux le chlorhydrate de lidocaïne.

20 Selon encore un autre mode de réalisation particulier, un procédé selon la présente invention peut en outre comprendre une étape g) consistant à ajouter au moins un actif additionnel différent des composés décrits précédemment, cette étape g) étant réalisée antérieurement, conjointement et/ou postérieurement à l'étape de réticulation b), de 25 préférence postérieurement à l'étape b). La choix et la quantité en actif additionnel sont ajustés de manière à ne pas soulever de risque d'incompatibilité avec les autres composés mis en oeuvre dans un gel réticulé selon l'invention, et notamment avec le polysaccharide et plus particulièrement avec l'acide hyaluronique, et à être compatible avec les utilisations considérées.

30 Ces ajustements relèvent des compétences générales de l'homme de l'art. Parmi les actifs additionnels utilisables dans la présente invention, on peut mentionner les antioxydants, les acides aminés, les vitamines, les minéraux, les acides 3029928 16 nucléiques, les co-enzymes, les dérivés adrénalinés, et leur mélange, lesdits composés additionnels considérés étant distincts de ceux indiqués précédemment. Selon encore un autre mode de réalisation particulier, un procédé de l'invention 5 peut être réalisé au moins en partie au sein d'un réceptacle spécifique à paroi déformable, tel que par exemple au sein d'une poche, notamment celle définie dans le document FR 2 945 293. Le gel réticulé obtenu à l'issu du procédé de l'invention tel que décrit 10 précédemment peut ne pas être directement injectable, au regard notamment de sa trop forte concentration en polysaccharide et/ou de la présence éventuelle de résidus d'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel, ou encore de ses conditions physiologiques et/ou de pH incompatibles avec une utilisation dans les domaines d'applications considérés ci-dessus.

15 En outre, le gel obtenu à l'issue du procédé de l'invention peut notamment présenter une rigidité trop élevée pour être injecté en l'état chez un patient. Par conséquent, plusieurs étapes additionnelles, connues de l'homme du métier, sont susceptibles d'être mis en oeuvre pour l'obtention d'un hydrogel injectable. Plus particulièrement, une étape de neutralisation et de dilution de ce gel peut 20 être requise pour lui conférer ses qualités d'implant. Ces étapes permettent de ramener le gel réticulé à une concentration en sels et à un pH physiologiquement acceptables. Les chaines du réseau de polysaccharide sont alors étirées, hydratées, tandis que le pH est ramené à une valeur proche de la neutralité. Ces étapes relèvent clairement des compétences générales de l'homme du 25 métier. Pour une pureté encore améliorée, notamment pour éliminer les résidus d'agent(s) réticulant non fixés au(x) polysaccharide(s), au moins une étape de purification peut également être réalisée. Avantageusement, cette étape de purification peut-être réalisée par un ou 30 plusieurs bains de dialyse.

3029928 17 Au final, l'hydrogel ainsi obtenu peut être rempli en seringues dans des conditions d'atmosphère contrôlées, lesdites seringues pouvant ensuite subir une étape de stérilisation, de préférence par voie thermique.

5 Dans toute la description, y compris les revendications, l'expression « comportant un » doit être comprise comme étant synonyme de « comportant au moins un », sauf si le contraire est spécifié. Les expressions « compris entre... et ... » et « allant de ... » doivent se comprendre bornes incluses, sauf si le contraire est spécifié.

10 Les exemples qui suivent sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention. Pour chacun des exemples ci-après, sauf indication contraire, les % exprimés sont des % massiques.

15 PROTOCOLES 1) Mode opératoire de préparation d'un gel réticulé d'acide hyaluronique Le mode opératoire de préparation de tous les gels décrits dans les exemples ci-après est comme suit : a) 10 g de NaHA sont introduits dans une solution aqueuse de soude 1 %, de 20 façon à obtenir une solution finale homogène (i.e. à l'issu de l'étape c) ci-après) à 12 % en NaHA, b) La solution de réticulation (= BDDE dilué 20 % dans solution aqueuse de soude 1 %, le cas échéant en présence d'un composé A dont la nature et la quantité sont précisées dans chacun des exemples) est ajoutée au mélange de l'étape a). La quantité 25 incorporée de cette solution est ajustée selon les ratios molaires souhaités RBDDE = nBDDE/nHA, et RA = nA/nHA, tels qu'indiqués dans chacun des exemples. c) Le mélange ainsi formé (i.e. obtenu à l'issue de l'étape b)) est homogénéisé jusqu'à dissolution totale de l'HA (i.e. jusqu'à l'absence d'agglomérat et l'obtention d'une couleur uniforme), 30 d) Le mélange homogène obtenu à l'issu de l'étape c) est mis à réticuler selon les conditions décrites dans chacun des exemples, 3029928 18 e) Après réaction de réticulation, le matériau obtenu est neutralisé par adjonction de HC1 et dilué dans une solution de Tampon Phosphate salin pH 7,3, de façon à obtenir un hydrogel à la concentration désirée en HA (= [HA] en mg/g, tel que précisé dans chacun des exemples), 5 f) L'hydrogel obtenu est alors purifié par dialyse, selon les connaissances de l'homme de l'art, g) Selon les exemples, une solution d'HA non réticulé est éventuellement incorporée et homogénéisée à l'hydrogel purifié d'HA réticulé obtenu à l'issu de l'étape f) (exprimée en % HA non réticulé / HA non réticulé + réticulé , tel que précisé dans chacun des 10 exemples), et h) L'hydrogel est alors introduit en seringues qui sont ensuite stérilisées en autoclave (chaleur humide) à T° > 121 °C, de manière à obtenir un FO > 15 (valeur stérilisatrice). 15 2) Propriétés viscoélastiques des gels testés (i.e. module élastique G', angle de déphasage 8, résistance à la compression, force d'injection et résistance à la dégradation) Les propriétés viscoélastiques des gels sont caractérisées en rhéologie oscillatoire avec balayage en déformation, via la mesure de leur module élastique G' (en 20 Pa) et de leur angle de déphasage 8 (°), mesurés à 1Hz pour une contrainte de 5 Pa. Plus précisément, ces mesures sont effectuées à 25 °C à une fréquence de 1 Hz, avec balayage en contrainte à l'aide d'un rhéomètre Thermo Haake RS6000 avec une géométrie cône-plan 1 °/diamètre 35mm. G' et ô sont relevés à une contrainte de déformation appliquée de 5 Pa, c'est-à-dire dans le domaine de viscoélasticité où G' et ô 25 restent stables (c'est-à-dire dans le domaine de viscoélasticité linéaire). Le module élastique G', ou module de conservation, mesure l'énergie restituée par le gel lorsqu'il est soumis à une faible déformation. Cette grandeur peut être imagée par la raideur d'un ressort.

3029928 19 L'angle de déphasage 8 caractérise le degré de viscoélasticité d'un matériau : il varie entre 0° pour un matériau 100 % élastique (toute l'énergie de déformation est restituée par le matériau, c'est-à-dire qu'il retrouve sa forme initiale) et 90° pour un matériau 100 % visqueux (toute l'énergie de déformation est perdue par le matériau, c'est- 5 à-dire qu'il s'écoule et perd totalement sa forme initiale). Un gel de comblement cutané doit être majoritairement élastique pour assurer ses propriétés de comblement, c'est-à-dire que b doit être < 45°. On mesure également la résistance à la compression, qui correspond à la résistance moyenne d'un gel lorsqu'il est compressé entre 2 plateaux. Cette grandeur est 10 mesurée à 25 °C, avec 2,5 g du gel placé entre 2 plateaux circulaires de diamètre 35 mm, avec un entrefer initial de lOmm. Une compression de 70 % de la hauteur de l'entrefer est appliquée à la vitesse de 0,1 mm/s. La résistance à la compression est l'intégration dans le temps de la force de résistance du gel, elle est donc exprimée en N.s.. Enfin, la force d'injection des gels est mesurée en seringue (format lmL long) 15 avec des aiguilles 27G1/2 à paroi mince, à l'aide d'un banc de compression à la vitesse de descente de 12,5mm/min. La résistance à la dégradation est évaluée par la perte de module élastique G' : - entre avant et après la stérilisation : cette perte traduit une dégradation à la 20 chaleur ; et - après stérilisation, via une dégradation par incubation avec H202 : cette perte traduit une dégradation au stress oxydant (ajout de 67 uL de solution d'H202 à 10 % dans 2 g de gel suivi d'une homogénéisation du milieu puis d'une incubation de 24 h à 37 °C). On effectue une mesure du G' avant dégradation et après l'incubation de 24 h à 37 °C en 25 présence de la solution d'H202. Le G' est mesuré selon le protocole susmentionné. Ce G' résultant de l'écart observé entre deux moments différents, il est exprimé en pourcentage (%).

3029928 20 EXEMPLES Exemple 1 : effet d'un sel de phosphate (STMP) Trois gels d'acide hyaluronique réticulé lb, lc et ld, réticulés en présence de concentrations différentes en sodium trimétaphosphate (STMP) à titre de composé A, sont 5 préparés selon le mode opératoire susmentionné. Le gel la est dénué de STMP et est donc le témoin. Il est également préparé selon le mode opératoire susmentionné. Le tableau 1 ci-après détaille la nature et les quantités des composés mis en oeuvre.

10 Tableau 1 Paramètres RA RBDDE Réticulation [HA] (mg/g) HA il on t...tLculé (en heure et en °C) H.A t- n rétLeuté -.- rétLcu [4 la (comparatif) 0 lb (invention) 0,03 72 H à 21±2 °C 0.02 23 10 % lc (invention) 0,06 (BDDE + STMP) ld (invention) 0,09 Les propriétés viscoélastiques des gels la, lb, lc et ld, mesurées selon les protocoles susmentionnés, sont présentées dans le tableau 2 ci-après. Tableau 2 G' (en Pa) 8 (en .) Résistance compression (en N.s.) Force d'injection (en N) la (comparatif) 14 50,9 3,1 10,3 lb (invention) 36 37,9 6,4 12,5 lc (invention) 49 33,9 10,3 14,0 ld (invention) 54 31,8 14,8 14,8 3029928 21 Le gel la (témoin) n'est pas propice à des propriétés de comblement des rides, puisque son angle de déphasage b est supérieur à 45°. En d'autres termes, la quantité d'agent réticulant utilisée est trop faible pour obtenir un gel réticulé satisfaisant sur le plan du comblement des rides.

5 Par contre, les gels lb, lc et ld selon la présente invention, bien que fabriqués avec la même quantité en BDDE, ont un angle b inférieur à 45° et sont donc satisfaisant sur le plan du comblement des rides. Cet effet est lié à la présence de STMP dans le système de réticulation. Qui plus est, on observe que plus la quantité de STMP augmente, plus la part d'élasticité du gel 10 augmente (i.e. diminution de Ô), et plus le module élastique augmente. L'augmentation de la quantité de STMP entre les gels lb, lc et ld selon l'invention s'accompagne aussi d'une augmentation de la résistance à la compression, révélant ainsi des gels de plus en plus consistant et résistant à la déformation. Les propriétés de résistance à la dégradation des gels la, lb, lc et ld, mesurées 15 selon les protocoles susmentionnés, sont présentées dans le tableau 3 ci-après. Tableau 3 Perte de G' après stérilisation (%) Perte de G' après stress oxydant (%) la (comparatif) 43 89 lb (invention) 14 65 lc (invention) 9 65 ld (invention) 19 48 Taux de modification Les gels la et ld sont ensuite évalués sur le plan du taux de modification de 20 l'acide hyaluronique. A cet effet, les gels la et ld gels sont lavés/précipités à l'aide 3029928 22 d'isopropanol. Les solides obtenus sont séchés puis solubilisés dans D20, et traités en présence de hyaluronidase (type VI-S, Sigma, 3kU) dans 1 ml de D20 pour dégradation du gel, afin d'obtenir une matrice liquide pour analyse. Chaque mélange homogène obtenu est ensuite analysé en RMN 1H.

5 Protocole de mesure du taux de modification La caractérisation du taux de modification se fait par spectroscopie par RMN. Le degré de modification est obtenu en appliquant la méthode développée par L. Nord et al. sur des échantillons de HA réticulés au BDDE. Le degré de modification est obtenu en 10 intégrant le signal RMN 1H du groupement N-acétyle (8,2ppm) présent dans les HA et un signal présent dans l'agent de réticulation (deux groupements -CH2-, 51,6 ppm). Le rapport des intégrales de ces deux signaux (agent de réticulation/NAc HA) correspond au degré de modification, après correction du nombre de protons liés à chaque signal. Integral 8H1.6 4 Integral 81-12.0 3 MoD = L'analyse RMN est réalisée sur spectromètre Bruker Avance 1 opérant à 400 MHz ('H).

20 Les degrés de modification mesurés selon le protocole ci-dessus pour les gels la et ld sont présentées dans le tableau ci-après. GEL Degré de modification la (comparatif) 1,4 % ld (invention) 1,4 % Le même type d'analyse RMN, mais effectué en RMN du Phosphore (RMN 3113) a été réalisée. A ce titre, la référence primaire en RMN 3113 est l'acide phosphorique 58 % aqueux (8=0 ppm). Cette analyse RMN a été réalisée sur spectromètre Bruker 25 Avance 1 opérant à 400 MHz ('H) et 161,97 MHz (3113).

15 3029928 23 Cette analyse n'a pas permis de mettre en évidence un accrochage entre l'acide hyaluronique et une espèce phosphorylée issue du STMP. L'utilisation de STMP en présence du BDDE pour la réalisation de la réaction de réticulation permet donc d'obtenir des gels réticulés aux propriétés de comblement 5 satisfaisantes (propriétés mécaniques et de résistance à la dégradation), de telles propriétés n'étant pourtant pas atteignables au ratio molaire (nBDDE / nHA) considéré. Qui plus est, cet effet du STMP se fait sans augmentation du taux de modification de l'acide hyaluronique (HA).

10 Exemple 2 : confirmation de l'effet d'un sel de phosphate (STMP) sur des gels plus réticulés (i.e. rBDDE supérieur à celui de l'exemple 1) Trois gels d'acide hyaluronique réticulé 3b, 3c et 3d comprenant l'utilisation de concentrations différentes en STMP à titre de composé A, sont préparés selon le mode opératoire susmentionné.

15 Le gel 3a est dénué de STMP et est donc le témoin. Il est également préparé selon le mode opératoire susmentionné. Le tableau 4 ci-après détaille la nature et les quantités des composés mis en oeuvre. Tableau 4 Paramètres RA RBDDE Réticulation [HA] (en mg/g) H Ano:, rencute IIA nar réu CL, L é - rétLcut4 3a (comparatif) 0 3b (invention) 0,02 72 H à 21±2 °C 0,04 18 10 % 3c (invention) 0,04 (BDDE + STMP) 3d (invention) 0,06 3029928 24 Les propriétés viscoélastiques des gels 3a, 3b, 3c et 3d, mesurées selon les protocoles susmentionnés, sont présentées dans le tableau 5 ci-après. Tableau 5 G' (en Pa) 8 (en .) Résistance compression (en N.s.) Force d'injection (en N) 3a (comparatif) 96 16,2 16,4 12,4 3b (invention) 107 15,3 17,4 11,3 3c (invention) 117 14,0 18,0 10,8 3d (invention) 197 10,8 20,2 9,5 Malgré une concentration d'HA inférieure à celle utilisée en exemple 1, le gel 5 3a présente des propriétés satisfaisantes pour une fonction de comblement des rides, avec un angle de déphasage b inférieur à 45° et des propriétés mécaniques bien supérieures. Cette augmentation des propriétés mécaniques est liée à la quantité de BDDE utilisée (RBDDE = 0,04) supérieure à celle de l'exemple 1. La quantité d'agent réticulant BDDE utilisée dans ce gel 3a est donc satisfaisante pour obtenir un gel efficace sur le plan du 10 comblement des rides. Les gels 3b, 3c et 3d selon la présente invention ont des propriétés mécaniques supérieures à celles du gel 3a témoin. Cet effet est lié à la présence de STMP en association avec le BDDE. Plus la quantité de STMP augmente, plus un accroissement des propriétés mécaniques est important. Ainsi, le gel 3d présente un module élastique G' plus 15 de 2 fois supérieur à celui du gel 3a témoin. La résistance à la compression augmente aussi avec la quantité de STMP utilisée. Enfin, il est intéressant de remarquer que la force d'injection a tendance à diminuer avec les gels 3b, 3c et 3d selon la présente invention ; la force d'injection est dans 20 tous les cas inférieure à celle obtenue en exemple 1, grâce à l'utilisation d'une concentration d'HA inférieure. L'amélioration des propriétés mécaniques d'un gel réticulé 3029928 25 selon un procédé selon l'invention ne se fait donc pas au détriment de la force d'injection pour un taux de réticulation usuel. Les propriétés de résistance à la dégradation des gels 3a, 3b, 3c et 3d, mesurées selon les protocoles susmentionnés, sont présentées dans le tableau 6 ci-après.

5 Tableau 6 Perte de G' après stérilisation (%) Perte de G' après stress oxydant (%) 3a (comparatif) 40 73 3b (invention) 15 47 3c (invention) 18 45 3d (invention) 15 30 Les gels 3b, 3c et 3d réticulés en présence de STMP montrent une résistance à la dégradation bien supérieure à celle du gel 3a réticulé sans STMP. Le gel 3d est le plus résistant, avec une perte relative de module élastique G' minimale.

10 Exemple 3 : effet de différents sels de phosphate Contrairement au sodium trimétaphosphate (STMP) qui est cyclique, le sodium triphosphate (STPP) est un sel de phosphate linéaire. STMP et STPP sont tous les deux des triphosphate, la quantité testée est donc RA=0,06, pour comparaison avec le gel 3d de l'exemple 2, identique mais avec STMP.

15 Contrairement aux STMP et STPP qui sont des triphosphates, le sodium phosphate (SP) est un monophosphate. La quantité testée est toujours RA=0,06 pour le gel 4c. Ainsi, trois gels d'acide hyaluronique réticulé 3d, 4b et 4c comprenant l'utilisation de sodium trimétaphosphate (STMP), sodium triphosphate (STPP) ou sodium 20 phosphate (SP) à titre de composé A, sont préparés selon le mode opératoire susmentionné.

3029928 26 Le gel 3a, dénué de sel de phosphate est donc le témoin. Il est également préparé selon le mode opératoire susmentionné. Les gels 3a et 3d sont ceux de l'exemple 2. Le tableau 7 ci-après détaille la nature et les quantités des composés mis en oeuvre.

5 Tableau 7 Paramètres A RA RBDDE Réticulation MAI (mg/g) H A t: C11 r-ticiaté HA . , r=eculé - étLeef. 3a (comparatif) / 0 0,04 72H à 21±2 °C 18 10 % (BDDE + STMP) 3d (invention) STMP 0,06 4b (invention) STPP 0,06 4c (invention) SP 0,06 Les propriétés viscoélastiques des gels 3a, 3d, 4b et 4c mesurées selon les protocoles susmentionnés, sont présentées dans le tableau 8 ci-après. Tableau 8 G' (Pa) 8 (0) Résistance compression Force d'injection (en N.s.) (en N) 3a (comparatif) 96 16,2 16,4 12,4 3d (invention) 197 10,8 20,2 9,5 4b (invention) 123 12,0 16,8 10,6 4c (invention) 106 16,4 16,6 9,3 Les propriétés mécaniques des gels 4b et 4c demeurent meilleures que celles du 10 gel témoin 3a sans sel de phosphate. Le STPP et le SP ont donc également un effet avantageux sur le plan des propriétés viscoélastiques. Les propriétés de résistance à la dégradation des gels 3a, 3d, 4b et 4c, mesurées selon les protocoles susmentionnés, sont présentées dans le tableau 9 ci-après.

3029928 27 Tableau 9 Perte de G' après stérilisation (%) Perte de G' après stress oxydant (%) 3a (comparatif) 40 73 3d (invention) 15 30 4b (invention) 16 29 4c (invention) 31 62 Comme pour le gel 3d réticulé en présence de STMP, la résistance à la dégradation est améliorée pour les gels 4b réticulé en présence de STPP, et pour le gel 4c réticulé en présence de SP.

5 L'utilisation de STPP ou de SP en présence du BDDE dans le milieu de réticulation permet également d'obtenir un effet avantageux sur les propriétés mécaniques. La résistance à la dégradation est également améliorée avec l'utilisation de ces sels de phosphate STPP et SP.

10 Exemple 4 : démonstration d'un effet synergique d'un sel de phosphate (STMP) utilisé pendant la réticulation au BDDE Quatre gels d'acide hyaluronique réticulé 5a, 51), 5c et 5d comprenant l'utilisation de BDDE et de STMP à titre de composé A, sont préparés selon le mode opératoire susmentionné.

15 Le gel 5a est conforme à la présente invention car obtenu après une étape de réticulation en présence simultanée de BDDE et de STMP. Les gels 51), 5c et5d sont non conformes à la présente invention car obtenus après une étape de réticulation dissociée. En effet, le BDDE et le STMP ont été intégrés de manière séquentielle et avec un intervalle de temps significatif au regard de la réticulation.

20 Le tableau 10 ci-après détaille la nature et les quantités des composés mis en oeuvre.

3029928 28 Tableau 10 Paramètres RA RBDDE Réticulation à 21±2 °C [IIAI, HA no, ,,kicut. mg/g HA ,,,,, ,-.-,c,-1,,. - ni.tÉciat. 5a (invention) 0,06 0,04 72H STMP+BDDE 18 0 5b (comparatif) 72H STMP puis 72H BDDE 5c (comparatif) 24H STMP puis 72H BDDE 5d (comparatif) 72H BDDE puis STMP ajouté postréticulation Les propriétés viscoélastiques des gels 5a, 5b, 5c et 5d mesurées selon les protocoles susmentionnés, sont présentées dans le tableau 11 ci-après. Tableau 11 G' (Pa) ô (°) Résistance compression (N.s.) Force d'injection (N) 5a (invention) 136 9,6 22,6 38,0 5b (comparatif) 17 18,5 3,2 11,5 5c (comparatif) 87 13,5 17,7 31,8 5d (comparatif) 76 13,7 17,8 34,9 5 Le gel 5a conforme à l'invention présente les propriétés rhéologiques optimales, grâce à une réticulation effectuée au BDDE en présence de STMP. Si la même quantité de STMP est incorporée après réticulation au BDDE, l'effet sur les propriétés mécaniques n'est plus observé : ainsi le gel 5d présente des propriétés mécaniques significativement plus faibles.

10 Egalement, il n'y a pas amélioration des propriétés mécaniques du gel si le STMP est incorporé à l'HA 24H avant l'ajout du BDDE (gel 5c), et il y a même 3029928 29 dégradation des propriétés mécaniques du gel si le STMP est ajouté 72H avant l'ajout du BDDE (gel 5b). En d'autres termes, ces résultats démontrent que l'effet de la réaction {STMP + BDDE} n'est pas équivalent à {STMP} + {BDDE} ; il y a donc un effet synergique 5 lorsque la réaction de réticulation de l'HA est réalisée par une combinaison non dissociée entre le BDDE et le STMP. Exemple 5: Effet du STMP avec des conditions de réticulation plus rapides 10 Trois gels d'acide hyaluronique réticulé 6a, 6b et 6c comprenant l'utilisation de BDDE seul (i.e. 6a) ou avec du STMP à titre de composé A (i.e. 6b et 6c), sont préparés selon le mode opératoire susmentionné. Le tableau 12 ci-après détaille la nature et les quantités des composés mis en oeuvre.

15 Tableau 12 Paramètres RA RBDDE Réticulation IRAI, HA non réticuté mg/g r - HA ®.mea réticulé + réticulé 6a (comparatif) 0 3H à 52±2 °C 6b (invention) 0,06 0,15 (BDDE + 20 10 % STMP) 6c (invention) 0,15 Ce mode de réticulation à la chaleur (52 °C) est intéressant en ce qu'il est plus rapide qu'à température ambiante. Les propriétés viscoélastiques des gels 6a, 6b et 6c mesurées selon les 20 protocoles susmentionnés, sont présentées dans les tableaux 13 ci-après.

3029928 30 Tableau 13 G' (Pa) ô (°) Résistance compression (N.s.) Force d'injection (N) 6a (comparatif) 217 10,5 18,1 10,1 6b (invention) 299 10,2 19,0 11,1 6c (invention) 426 9,5 18,9 10,2 Là encore, on observe une augmentation du module élastique G' lorsque la réticulation est effectuée en présence du sel de phosphate (STMP).

Claims

REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'un gel réticulé d'au moins un polysaccharide ou un de ses sels, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer d'une solution formée d'un milieu aqueux comprenant au moins ledit/lesdits polysaccharide(s) ou un de ses/leurs sels sous une forme non réticulée, au moins un agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel et au moins un sel de phosphate ; b) réticuler la solution de l'étape a) et, le cas échéant ; e) récupérer ledit gel réticulé formé.
2. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce qu'il comprend en outre au moins une étape d) d'homogénéisation de la solution de l'étape a), cette étape étant réalisée antérieurement et/ou simultanément à l'étape de réticulation b), de préférence antérieurement à l'étape de réticulation b).
3. Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'étape b) de réticulation est réalisée à une température inférieure à 35 °C, de préférence à une température allant de 15 à 25 °C, et mieux de 19 à 23 °C.
4. Procédé selon la revendication précédente, caractérisé en ce que l'étape b) de réticulation est réalisée sur une durée comprise entre 5 heures et 336 heures, de préférence entre 20 heures et 150 heures, et mieux entre 40 heures et 100 heures.
5. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le sel de phosphate est choisi parmi les sels de sodium, les sels de potassium, les sels de lithium, les sels de césium, les sels d'argent, et leurs mélanges, de préférence un sel de sodium.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le sel de phosphate est choisi parmi le sodium phosphate, le sodium triphosphate, le sodium trimétaphosphate, et leurs mélanges, de préférence le sodium trimétaphosphate.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que l'agent réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel est/sont choisi(s) parmi le butanediol diglycidyl éther, le diépoxy-octane ou le 1,2-bis-(2,3-époxypropy1)-2,3-éthylène, et leurs mélanges, de préférence le butanediol diglycidyl éther. 3029928 32
8. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le polysaccharide est l'acide liyaluronique ou l'un de ses sels, de préférence le hyaluronate de sodium.
9. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le sel d'acide hyaluronique est choisi parmi le sel de sodium, le sel de potassium, le sel de zinc, le sel d'argent, et leurs mélanges, de préférence le sel de sodium.
10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la solution de l'étape a) comprend un rapport molaire « nombre de moles de sel(s) de phosphate/nombre total de moles d'unités polysaccharidiques » compris entre 0,005 et 1, de préférence entre 0,01 et 0,25.
11. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que la solution de l'étape a) comprend un rapport molaire « nombre total de moles d'unités polysaccharidiques/nombre de moles d' agent(s) réticulant époxydique bi- ou multi-fonctionnel » entre 0,005 et 1, de préférence entre 0,01 et 0,25.
12. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit procédé comprend en outre une étape e) consistant à ajouter au moins un polysaccharide non réticulé, de préférence de l'acide hyaluronique non-réticulé, cette étape e) étant réalisée antérieurement, conjointement ou postérieurement à l'étape de récupération c), mais nécessairement après l'étape b).
13. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le(s) polysaccharide(s) réticulé(s) compris dans le gel réticulé présente(nt) un taux de modification inférieur à 10 %, de préférence compris entre 0,1 % et 5 %, et mieux entre 0,4 % et 2,5 %, voire même entre 0,7 % et 1,6 %.
14. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le gel réticulé présente un module élastique (G') compris entre 20 et 1000 Pa, de préférence entre 35 Pa et 400 Pa, associé à un angle de déphasage (Ô) inférieur à 45°.
15. Composition dermatologique injectable et stérile comprenant, dans un milieu physiologiquement acceptable, au moins un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 14.
16. Composition cosmétique ou dermatologique comprenant au moins un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 14.
17. Kit comportant : 3029928 33 - un conditionnement contenant au moins une dose d'un gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 14 ou d'une composition telle que définie en revendication 14 ou 15; et - un dispositif d'injection dans ou à travers la peau ou un dispositif de micro- perforation de la peau; dédié à l'administration de ladite dose.
18. Gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à. 14, pour son utilisation pour le comblement des défauts de volume de la peau, et notamment le comblement des rides.
19. Gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour son utilisation pour le traitement des déficiences gingivales, en particulier des maladies parodontales et les désordres associés.
20. Gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour son utilisation pour là viscosupplémentation articulaire.
21. Gel réticulé obtenu par mise en oeuvre d'un procédé tel que défini selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, pour son utilisation pour le traitement de désordres ophtalmiques, notamment pour l'extraction de la cataracte, l'insertion et le retrait de lentilles intraoculaires (LIO).