FR2899105A1 - Composition cosmetique et/ou pharmaceutique comprenant comme ingredient actif, au moins un hydrolysat de proteines de poacees et utilisation de cet hydrolysat - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique comprenant comme principe actif au moins une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées. L'invention concerne aussi l'utilisation dudit hydrolysat.

Description

L'invention concerne le domaine de la cosmétique et de la pharmaceutique,

notamment le domaine de la dermatologie. La présente invention a pour objet une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique comprenant comme principe actif au moins une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées. L'invention concerne aussi l'utilisation dudit hydrolysat en tant qu'actif immunostimulant de la peau, et pour traiter les manifestations du vieillissement cutané, en particulier du vieillissement photo-induit.

La peau est l'organe de recouvrement de l'organisme. A ce titre elle joue un rôle primordial 0 dans le système de défense immunitaire. Trois types de cellules épidermiques participent à ce système : les kératinocytes, les mélanocytes et les cellules de Langerhans. Les cellules de Langerhans sont des cellules dendritiques qui ont une fonction de sentinelles immunitaires dans la peau, capables d'induire et de moduler des réponses immunitaires de défense ou de tolérance vis-à-vis d'agressions environnementales chimiques ou biologique. 15 Après avoir été activées, les cellules de Langerhans quittent l'épiderme et gagnent les ganglions lymphatiques satellites où elles présentent les déterminants antigéniques aux lymphocytes T. Une peau jeune et saine est capable de se défendre vis à vis des agressions extérieures grâce à sa fonction barrière physico-chimique et à la coopération des cellules qui la compose. Néanmoins la peau est soumise à l'agression permanente de l'environnement, des produits chimiques, de la 20 pollution, de radiations, etc. Ainsi, l'exposition de la peau aux rayonnements ultraviolets (UV) provoque des réactions complexes ; un érythème, la génération de radicaux libres, des dommages cellulaires et la libération de médiateurs de l'inflammation. Ces phénomènes inflammatoires et les altérations cellulaires qui en découlent, telles que l'inhibition ou la migration des cellules de Langerhans, engendrent l'infiltration de la peau par des cellules T-suppresseurs et induisent une 25 immunosuppression et un affaiblissement de l'immunité à médiation cellulaire. Il a ainsi été montré que les cellules de Langerhans dans ces circonstances ne pouvaient plus jouer leur rôle de reconnaissance des antigènes potentiellement pathogènes. Dans les zones de la peau exposées aux rayonnements UV, les cellules de Langerhans sont moins nombreuses et présentent une morphologie atrophiée. L'immunosuppression, en entraînant l'accumulation de cellules 30 endommagées, participe au processus du vieillissement photo-induit, qui est associé à un ralentissement du système de défense immunitaire cutané. Cet affaiblissement étant particulièrement sensible au cours du vieillissement photo-induit, des produits protecteurs des cellules de Langerhans ou plus largement des cellules cutanées, ainsi que des produits de stimulation du système immunitaire cutané présentent un grand intérêt pour prévenir le vieillissement des zones exposées aux rayonnements UV (visage, cou, mains), ou restaurer les défenses naturelles de la peau. Parmi les composés actifs sur le système immunitaire cutané on peut citer les hormones peptidiques produites par le thymus, telles que la thymopoïetine, la thymuline et la thymosine. Il existe une étroite relation physiologique entre les hormones thymiques et la peau. Par exemple, les kératinocytes produisent des facteurs analogues dans leur structure et leur fonction à la thymopoïétine, capables d'induire la maturation des lymphocytes T et de prendre le relais du thymus lors du vieillissement de l'organisme. De même, les cellules de Langerhans sont activées par certains facteurs thymiques, tels que la thymopentine. Toutefois cette production endogène ne permet pas à la peau de suppléer complètement à l'atrophie du thymus qui se produit lors du vieillissement de l'organisme, et on a pu établir une corrélation entre la diminution des fonctions thymiques et le vieillissement cutané, l'alopécie et certains désordres pathologiques tels que les cancers.

On a précédemment décrits des extraits de plantes capables de stimuler le système immunitaire cutané (FR2811893), ou encore des compositions topiques contenant des dérivés peptidiques de synthèse des hormones thymiques (WO 9007933). Il subsiste néanmoins le besoin de développer des actifs cosmétiques et/ou dermatologiques immunostimulants ayant une très bonne efficacité ainsi qu'un large spectre d'action au niveau de la peau et des phanères.

Le problème technique à résoudre a donc été, pour les inventeurs, de trouver un substitut végétal, cosmétiquement et pharmaceutiquement acceptable, qui soit capable d'avoir une réelle activité immunostimulante au niveau de la peau, tout en n'ayant pas d'effets secondaires indésirables tels que, par exemple, des réactions de toxicité ou d'irritation cutanée. Les inventeurs ont notamment découvert qu'un hydrolysat de protéines de poacées avait des propriétés remarquables sur la peau et, plus particulièrement, des propriétés immunostimulantes, en agissant en particulier sur les cellules de Langerhans de la peau. Ainsi, selon un premier aspect, la présente invention a pour objet une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique contenant une quantité efficace d'hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées comme principe actif immunostimulant. L'hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées doit s'entendre comme un hydrolysat d'au moins un végétal appartenant à la famille des poacées.

Les plantes de la famille des graminées ou poacées (en latin poaceae) représentent une large famille de plantes herbacées, annuelles ou vivaces, dont le fruit s'appelle un caryopse. Parmi les poacées utilisables selon l'invention on peut citer à titre d'exemple les genres oryza, zizania, hordeum, sorghum, triticum, ou encore avena ou panicum. Plus particulièrement selon l'invention on utilise au moins une des nombreuses espèces du genre oryza et préférentiellement les espèces Oryza sativa L., (espèce la plus cultivée, originaire de l'Inde) et Oryza glaberrima Steud., (riz africain ou riz de Casamance, originaire d'Afrique Centrale). Selon l'invention le matériel végétal utilisé sera le caryopse (ou grain) et préférentiellement le grain débarrassé de son enveloppe (ou son) par une étape de décorticage.

Le terme "hydrolysat'' désigne un extrait de plantes ayant subi une hydrolyse. L'hydrolyse se définit comme le clivage enzymatique ou chimique d'une molécule par une molécule d'eau. Un hydrolysat de protéines désigne donc les produits obtenus après hydrolyse des protéines de la plantes.

Les constituants majoritaires du riz sont de nature glucidique. Ils représentent environ 80% en poids, alors que la teneur en protéine varie de 4 à 14 %. riz Contenu pour 100 grammes Lipides 0,6 protéines 6,8 glucides 77,8 fibres 1,4 minéraux 0,5 eau 12,9 Dans une étape préalable, il est donc nécessaire d'extraire la fraction protéique minoritaire du riz. Toute méthode d'extraction et/ou de purification connue de l'homme du métier peut être utilisée pour préparer l'hydrolysat selon l'invention. On peut toutefois citer à titre d'exemple la méthodologie suivante : Les grains de riz décortiqués sont broyés à l'aide d'un broyeur à plantes. La poudre ainsi obtenue peut ultérieurement être "délipidée" à l'aide d'un solvant organique classique (comme 25 par exemple un alcool, un hexane ou de l'acétone). On réalise ensuite classiquement l'extraction des protéines du riz (Osborne, 1924) ; les grains de riz broyés étant mis en suspension dans une solution alcaline. La fraction soluble est recueillie après des étapes de centrifugation et de filtration, cette solution brute constituant alors une première forme de l'extrait. Les protéines sont ensuite précipitées en faisant varier la force ionique et en acidifiant le milieu, ce qui permet d'éliminer les composants glucidiques solubles et les acides nucléiques. Le précipité est ensuit lavé à l'aide d'un solvant tel que, par exemple, l'éthanol ou le méthanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide. Le précipité riche en protéines est remis en solution dans l'eau ou un autre solvant. L'extraction peut également être réalisée en milieu neutre ou acide. L'étape de précipitation s'effectue alors à l'aide d'un agent classique de précipitation tels que les sels (chlorure de sodium, sulfate d'ammonium). Le précipité riche en protéines obtenu peut être séparé des agents de précipitation par dialyse après remise en solution dans de l'eau ou un autre solvant. A ce stade, l'extrait obtenu contient au minimum 70% de composés de nature protéique. L'extrait riche en composés de nature protéique est ensuite hydrolysé selon l'invention dans des conditions ménagées et sélectives afin de générer des polypeptides et des peptides solubles biologiquement actifs sur le système immunitaire cutané. Selon l'invention, une hydrolyse enzymatique en milieu basique peut être réalisée, ainsi qu'une hydrolyse chimique. On peut alors citer l'utilisation des endoprotéases et exopeptidases d'origine végétale (papaïne, bromelaine, ficine) et de micro-organismes (Aspergillus, Rhizopus, Bacillus, etc.). La solution obtenue constitue l'hydrolysat, qui peut être encore purifié par fractionnement, notamment par une méthode de type chromatographique ou purifié par un procédé de dialyse, permettant d'éliminer les composés de nature protéique de haut poids moléculaire. L'une quelconque des formes plus ou moins purifiées de l'hydrolysat est in fine stérilisée par ultrafiltration. Les hydrolysats de protéines de riz obtenus selon l'invention sont analysés qualitativement et quantitativement pour leur teneur en composés de nature protéique. On entend par composés de nature protéique, les fragments de protéines, les peptides et les acides aminés libres présents dans le mélange. Les peptides, acides aminés et fragments de protéines sont dosés selon les techniques classiques, bien connues de l'homme du métier. Ainsi, selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'hydrolysat contient une quantité de composés de nature protéique représentant entre 30 et 90 % du poids total de la matière sèche, plus particulièrement cette quantité est comprise entre 60 et 80 % du poids total de la matière sèche.

L'hydrolysat selon l'invention présente également la propriété remarquable de contenir 10 et 200 mg/1 de composés peptidiques biologiquement actifs. Ces composés peptidiques sont analogues par leur séquence aux dérivés de thymopoïetine humaine et en particulier au pentapeptide nommé thyrnopentine, de séquence Arg-Lys-Asp-Val-Tyr. Ainsi un des objets de la présente invention est une composition cosmétique et/ou dermatologique contenant une quantité efficace d'un hydrolysat de poacées, riche en composés 5 peptidiques comprenant la séquence (AA)n-Arg-Lys-Asp-Val-Tyr-(AA)ä dans laquelle n est un nombre entier compris entre 0 et 3. Selon un autre aspect, l'invention concerne une composition cosmétique et/ou dermatologique caractérisée en ce qu'elle contient, dans un milieu acceptable, comme principe actif, au moins l'hydrolysat tel que défini précédemment. Il est bien entendu que l'hydrolysat 10 selon l'invention peut être utilisé seul ou en association avec au moins un autre agent actif. La présente invention concerne également l'utilisation d'un hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées, tel que défini précédemment, dans ou pour la préparation d'une composition capable d'immunostimuler la peau. L'hydrolysat selon l'invention possède également une activité sur la stimulation du 15 métabolisme des cellules de l'épiderme, en particulier des kératinocytes. On a pu montrer qu'il stimule la production de molécules de structure telles que les kératines, la filaggrine et les intégrines. Par ses activités particulières, l'hydrolysat selon l'invention pourra être utilisé avantageusement dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou 20 pharmaceutique destinée à lutter de manière préventive et/ou curative contre les manifestations du vieillissement cutané et, tout particulièrement, afin de lutter contre et/ou de prévenir le vieillissement photo-induit. Par manifestations cutanées du vieillissement on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, la peau flétrie, la peau molle, la peau amincie, le manque d'élasticité et/ou de 25 tonus de la peau, la peau terne et sans éclat ou les taches de pigmentation de la peau, mais également toute modification interne de la peau qui ne se traduit pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, toute dégradation interne de la peau consécutive à une exposition aux rayonnements ultraviolets (UV). L'hydrolysat selon l'invention ou la composition le contenant permettra de lutter, en particulier, contre la perte d'élasticité et de 30 fermeté de la peau. L'hydrolysat selon l'invention permet de protéger la peau et les phanères contre tous types d'agressions extérieures. L'utilisation de l'extrait, ou d'une composition le contenant, va permettre à la peau et aux phanères d'être protégés et de mieux résister au stress environnementaux.

On entend, par le terme "agression extérieure", les agressions que peut produire l'environnement. A titre d'exemple, on peut citer des agressions telles que la pollution, les UV, ou encore les produits à caractère irritant tels que les tensioactifs, les conservateurs ou les parfums. Par pollution, on entend aussi bien la pollution extérieure , due par exemple aux particules de diesel, à l'ozone ou aux métaux lourds, que la pollution intérieure qui peut être due notamment aux émissions de solvants de peintures, de colles, ou de papier-peints (tels que toluène, styrène, xylène ou benzaldehydes), ou bien encore la fumée de cigarette. L'hydrolysat selon l'invention peut être avantageusement utilisé dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique, en tant qu'agent photo-protecteur et, plus particulièrement, en tant qu'agent photo-protecteur dit secondaire . On distingue, en effet, les agents photo-protecteurs primaires des agents photo-protecteurs secondaires. Les agents photo-protecteurs primaires sont des substances qui exercent un pouvoir physique : ils sont en mesure d'absorber les rayonnements UV et de les restituer sous forme de chaleur afin de protéger la peau. Les agents photo-protecteurs secondaires sont des substances qui ont généralement un effet biologique ; ce sont, par exemple, les agents capables de limiter les processus d'immunosuppression qui sont déclenchés lorsque le rayonnement UV pénètre dans la peau.

L'hydrolysat pourra être utilisé dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou pharmaceutique destinée à prévenir ou traiter les dommages cellulaires provoqués par les 20 polluants atmosphériques et/ou par le rayonnement ultraviolet (UV). Par ailleurs, selon un autre aspect, l'hydrolysat selon l'invention, ou la composition le contenant, permettra avantageusement de lutter contre les manifestations de l'inflammation résultant de ces agressions ; il permettra notamment de lutter contre les manifestations cutanées de l'inflammation. 25 Par ailleurs, selon un autre aspect, l'invention est relative à l'utilisation d'un hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées, tel que défini précédemment, dans ou pour la préparation d'une composition capable de protéger la peau du vieillissement photo-induit.

30 L'actif selon l'invention est un agent actif immunostimulant efficace qui agit, entre autres, en inhibant la migration des cellules de Langerhans hors de l'épiderme. Ainsi, selon un autre aspect, l'invention est relative à l'utilisation d'un hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées, tel que défini précédemment, dans ou pour la préparation d'une composition destinée à protéger et renforcer les cellules de Langerhans et le système de défense immunitaire cutané.

La composition selon l'invention est préférentiellement une composition cosmétique et/ou dermatologique adaptée à l'administration par voie topique cutanée comprenant un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable. Il est bien évident que l'invention s'adresse aux mammifères en général et plus particulièrement aux êtres humains. La quantité efficace de principe actif correspond à la quantité nécessaire afin d'obtenir le résultat désiré. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'hydrolysat de protéines selon l'invention est présent, dans les compositions de l'invention, à une concentration comprise entre 0,0001 % et 20 % environ et préférentiellement à une concentration comprise entre 0,01 % et 10 % environ, et encore préférentiellement à une concentration comprise entre 0,05 % et 5 % environ en poids par rapport au poids total de la composition finale. Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, l'hydrolysat précité est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables comme l'eau, l'éthanol, le propanol ou l'isopropanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés ou tout mélange de ces solvants. Selon encore un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'hydrolysat précité est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharrnaceutiquement acceptable. Quelle que soit la forme de l'invention, la composition selon l'invention peut être ingérée, injectée ou appliquée sur la peau (sur toute zone cutanée du corps), les cheveux, les ongles ou les muqueuses. Selon le mode d'administration, la composition selon l'invention peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées. Préférentiellement, les compositions selon la présente invention se présenteront sous une forme galénique adaptée à l'administration par voie topique cutanée. Elles couvrent toutes les formes cosmétiques ou dermatologiques. Ces compositions doivent donc contenir un milieu cosmétiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau, les poils ou les cheveux. Ces compositions peuvent notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ; d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de crèmes, de suspensions ou encore de poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les cheveux. Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un shampooing, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol. Elles peuvent être utilisées comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage de la peau. Ces compositions comprennent, en outre, tout additif usuellement utilisé dans le domaine d'application envisagé ainsi que les adjuvants nécessaires à leur formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des anti-oxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents autobronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des actifs cosmétiques ou pharmaceutiques, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc. Dans tous les cas, l'homme du métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre de 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition de l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition seront choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 % en poids, par rapport au poids total de la composition. Bien entendu, l'homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et/ou leurs quantités, de telle sorte que les propriétés avantageuses du mélange ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l'adjonction envisagée. Les compositions selon l'invention trouvent une application notamment comme composition cosmétique ou pharmaceutique pour la peau, mais aussi comme composition cosmétique pour les cheveux et/ou les poils. Selon l'invention, on peut ajouter, entre autres, à la composition divers agents actifs destinés, notamment, à la prévention et/ou au traitement des désordres liés au photo-vieillissement. Par ailleurs, la composition selon l'invention peut associer à l'hydrolysat de protéines, tel que défini précédemment, d'autres agents actifs favorisant son action. Ainsi, il peut être ajouté des agents actifs ayant une action antioxydante ou des agents actifs stimulant les synthèses de collagènes. Selon un autre aspect, la composition selon l'invention peut être une composition solaire, c'est-à-dire une composition aidant à la protection contre le rayonnement solaire. Ainsi, il peut être avantageusement ajouté, à la composition selon l'invention, des actifs aidant à la protection solaire tel que, par exemple, des filtres solaires.

Les compositions, objet de l'invention, trouvent leur application dans grand nombre de traitements notamment cosmétiques ou dermatologiques. Elles peuvent constituer une composition cosmétique, notamment pour le traitement, la protection, le soin, le démaquillage et/ou le nettoyage de la peau et/ou des cheveux, et/ou pour le maquillage de la peau, des lèvres, des cils et/ou du corps. La composition selon l'invention peut également consister en des préparations solides comprenant également des savons ou des pains de nettoyage. La composition peut être aussi conditionnée sous forme d'une composition pour aérosol comprenant également un agent propulseur sous pression.

Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de traitement cosmétique destiné à immunostimuler la peau et/ou les poils. L'invention concerne aussi un procédé de traitement cosmétique destiné à traiter les désordres liés au photo-vieillissement de la peau. Préférentiellement, le procédé de traitement cosmétique de la peau et/ou des cheveux, consiste à appliquer sur la surface de la peau, les poils ou les cheveux, une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes de la famille des poacées tel que défini précédemment, afin d'obtenir l'action désirée. Des modes de réalisation particuliers de ce procédé de traitement cosmétique résultent également de la description précédente. Le procédé de traitement cosmétique de l'invention peut être, notamment, mis en oeuvre en appliquant les compositions cosmétiques telles que définies ci- dessus, selon la technique d'utilisation habituelle de ces compositions, par exemple : application de crèmes, de gels, de sérums, de lotions, de laits, de shampooings ou de compositions antisolaires, sur la peau ou sur les cheveux, ou encore, application de dentifrice sur les gencives. D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples donnés à titre illustratif et non limitatif.

Exemple 1 : Préparation d'un hydrolysat de protéines de riz. Dans une première étape, 1 kg de grains de riz sont délipidés par l'action d'un solvant organique : l'hexane. Les grains de riz sont ensuite broyés dans un broyeur à couteau puis sont mis en suspension dans une solution aqueuse alcaline (dilution au 1/10). Ce mélange est maintenu sous agitation pendant un temps suffisamment long pour permettre la solubilisation des fractions solubles. La température d'extraction est variable (comprise entre 4 et 80 C) ; préférentiellement l'opération sera réalisée à froid. Après cette phase d'extraction le milieu est clarifié par centrifugation puis filtré sur filtre à plaque. Ce filtrat qui contient les fractions solubles du riz est ensuite soumis à une précipitation des protéines en faisant varier la force ionique en milieu neutre ou acide, ce qui permet d'éliminer les composants glucidiques solubles, les lipides et les acides nucléiques. Le surnageant est éliminé et le précipité est ensuite lavé à l'aide d'un solvant tel que, par exemple, l'éthanol ou le méthanol puis le solvant est évaporé par séchage sous vide.

A ce stade, on obtient environ 50 grammes de poudre de couleur jaune clair d'extrait protéique brut contenant : - Protéines : 75 % - Glucides : 20 % - Lipides : 5 % Le précipité riche en protéines est remis en solution dans l'eau ou un autre solvant. L'extraction peut également être réalisée en milieu neutre ou acide.

L'extrait protéique brut est alors soumis à une série d'hydrolyses ménagées et sélectives consistant en des hydrolyses chimiques et enzymatiques. A titre d'exemple on peut citer l'hydrolyse en présence d'exopeptidases (papaïne, ficine). L'hydrolysat est ensuite purifié puis dialysé sur membrane pour éliminer les composés de haut poids moléculaires. On obtient alors une hydrolysat de couleur claire titrant entre 0,5 et 2 g/1 et contenant une quantité de composés de nature protéique représentant environ 70 % du poids total de la matière 20 sèche (poids total de matière sèche 5 grammes). D'autre part, l'analyse par HPLC montre que l'hydrolysat selon l'invention contient au minimum 20 mg/1 de composés peptidiques biologiquement actifs, contenant la séquence Arg-Lys-Asp-Val-Tyr, analogue au dérivé de thymopïetine nommé thymopentine,

25 Exemple 2 : Mise en évidence de l'effet immunostimulant de l'hydrolysat selon l'invention par des tests ex vivo. L'activité immunostimulante de l'hydrolysat selon l'invention a été mise en évidence par l'analyse de la migration des cellules de Langerhans après irradiation UV, sur un échantillon de :30 peau.

Méthode Des biopsies de 6 mm de diamètre sont prélevées sur des échantillons de peau humaine. Ces biopsies sont maintenues en survie ex vivo par culture en présence d'un milieu spécifique (DMEM lg/1, HAMF12, SVF et antibiotiques) sur des inserts déposés dans des plaques 6 puits. Les biopsies sont traitées avec l'hydrolysat selon l'exemple 1 à la concentration de 1 % pendant 24 heures à raison de 2 applications par jour. Les biopsies sont ensuite irradiées à 100 mJ/cm2 et l'hydrolysat selon l'exemple 1 est de nouveau appliqué pendant 24 heures dans les mêmes conditions qu'avant irradiation. - Biopsies contrôle non irradiées, non traitées. - Biopsies irradiées, non traitées. - Biopsies irradiées et traitées avec l'hydrolysat selon l'exemple 1 à 1% Les biopsies de peau sont incluses dans la paraffine et des coupes histologiques de 3 m d'épaisseur sont effectuées. Les lames sont déparaffinées, hydratées puis soumises à un immunomarquage par un anticorps dirigé contre la molécule CD1a (marqueur spécifique des cellules de Langerhans).. Le marquage est révélé par la DAB (diamino benzindine). Une évaluation semi-quantitative du nombre de cellules de Langerhans présentes dans l'épiderme des biopsiesde peau est réalisée au microscope optique.

Résultats L'analyse par microscopie optique montre que les biopsies non-irradiées présentent une structure épidermique normale avec des cellules de Langerhans localisées dans les couches épidermiques germinatives et spineuses.

Les biopsies irradiées et non-traitées montrent des signes d'immunosuppression dus à la migration des cellules de Langerhans hors de l'épiderme. Au contraire, les biopsies irradiées et traitées avec l'hydrolysat selon l'invention présentent une densité épidermique en cellules de Langerhans comparable aux biopsies non-irradiées. Le dénombrement des cellules de Langerhans dans l'épiderme donnent les résultats reproduits dans le tableau ci-dessous : Biopsies contrôle non Biopsies irradiées, Biopsies irradiées et irradiées, non traitées non traitées traitées avec l'hydrolysat selon l'exemple 1, à 1% Score +++ + I I I Ces résultats nous permettent de conclure que l'hydrolysat selon l'invention protège efficacement les cellules de Langerhans des effets néfastes des irradiations UV.

Exemple 3 : Mise en évidence de l'effet protecteur de l'hydrolysat selon l'invention par des tests ex vivo. L'activité protectrice de l'hydrolysat selon l'invention a été mise en évidence par l'analyse histologique après irradiation UV des biopsies de peau.

Méthode Les biopsies de peau sont cultivées et traitées comme dans l'exemple 2. Les biopsies de peau sont incluses dans la paraffine et des coupes histologiques de 3 m d'épaisseur sont effectuées. Les lames sont déparaffinées, hydratées, soumises à une coloration à l'Hématoxyline/Eosine puis 10 observées au microscope optique.

Résultats Les biopsies irradiées et non-traitées montrent un épiderme totalement désorganisé et présentant de nombreux oedèmes et cellules mortes. [5 Les biopsies irradiées et traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1 montrent un épiderme beaucoup moins endommagé, dont la structure se rapproche plus de celle des biopsies non irradiées. Ces résultats nous permettent de conclure que l'hydrolysat selon l'invention protège l'épiderme des rayonnements UV. 20 Exemple 4 : Mise en évidence de l'effet de l'hydrolysat selon l'exemple 1 sur la différenciation des cellules épidermiques par des tests ex vivo. L'activité de l'hydrolysat selon l'invention sur la différenciation des cellules épidermiques a été mise en évidence par l'étude de la synthèse de filaggrine et de kératine sur coupes de peau 25 cultivées ex vivo. Méthode Des biopsies de 6 mm de diamètre sont prélevées sur des échantillons de peau humaine. Ces biopsies sont maintenues en survie ex vivo par culture en présence d'un milieu spécifique (DMEM lg/1, HAMF12, SVF et antibiotiques) sur des inserts déposés dans des plaques 6 puits. 30 Les biopsies sont traitées avec l'hydrolysat selon l'exemple 1 à la concentration de 1 % pendant 4 jours à raison de 2 applications par jour. Les biopsies de peau ensuite sont incluses dans la paraffine et des coupes histologiques de 3 m d'épaisseur sont effectuées. Les lames sont déparaffinées, hydratées puis soumises à un immunomarquage par un anticorps dirigé contre les kératines épidermiques (anti-kératine Pan cK), ou contre la filaggrine, une molécule produite par les kératinocytes suprabasaux différenciés. Des observations ont ensuite été réalisées sous microscope, la fluorescence étant proportionnelle à la quantité de kératine ou de filaggrine présente dans les cellules.

Résultats sur la production des kératines Il a été observé une nette augmentation de la fluorescence dans les coupes traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1. L'hydrolysat selon l'invention augmente de façon importante la synthèse des kératines dans l'épiderme, donc la différenciation des cellules épidermiques.

Résultats sur la production de filaggrine Il a été observé une nette augmentation de la fluorescence dans les coupes traitées par 1'hydrolysat selon l'exemple 1. L'hydrolysat selon l'invention augmente de façon importante la synthèse de la filaggrine dans l'épiderme, donc la différenciation des cellules épidermiques. Exemple 5 : Mise en évidence de l'effet de l'hydrolysat selon l'invention sur la production d'intégrines par des tests ex vivo.

L'activité de l'hydrolysat selon l'invention sur la production d'intégrine bêta 1 par les cellules épidermiques a été mise en évidence par immunomarquage sur coupes de peau cultivées ex vivo. Méthode Des biopsies sont mises en culture, puis des coupes histologiques sont réalisées selon la même méthode que dans l'exemple 4. Un immunomarquage est réalisé à l'aide d'un anticorps dirigé contre la molécule intégrine bêta 1, une protéine transmembranaire d'adhésion.

Résutats : Il a été observé une nette augmentation de la fluorescence dans les coupes traitées par l'hydrolysat selon l'exemple 1. L'hydrolysat selon l'invention augmente donc de façon importante la synthèse des intégrines Bêta 1 dans l'épiderme et stimule ainsi l'adhésion des cellules basales. Exemple 6 : Mise en évidence du rôle positif de l'effet de l'hydrolysat selon l'invention sur la viabilité cellulaire.

La viabilité cellulaire est évaluée à l'aide de l'essai de réduction du MTT (Methyl Thiazolyl Tetrazolium) Méthode Des fibroblastes primaires sont ensemencés sur une plaque 96 puits (à 20000 cellules par puits environ). Une fois que les cellules ont atteint 70 % de confluence, l'hydrolysat selon l'invention à 1 %, est appliqué sur la plaque durant 48 heures, à raison d'une fois par jour. La viabilité cellulaire est ensuite évaluée à l'aide du colorant supravital MTT (Methyl Thiazolyl Tetrazolium) jaune, 1:ransformé en cristaux de formazan violet par les déshydrogénases mithochondriales des cellules vivantes. La lecture de la densité optique est réalisée par spectrophotométrie à 540 nm.

Résultats Les résultats obtenus, représentés dans le tableau ci-dessous, représentent le pourcentage de viabilité cellulaire en fonction des différentes conditions étudiées, par rapport à la condition contrôle, c'est-à-dire non traitée. Conditions d'étude % de viabilité cellulaire Contrôle 100 % - Hydrolysat 1 % 134 % Ces résultats permettent de conclure que l'hydrolysat selon l'invention n'est pas toxique pour les cellules, mais au contraire qu'il les protège. On observe en effet une augmentation de la viabilité cellulaire de 34 % par rapport aux conditions contrôle non traité. Exemple 7 : Préparation de compositions cosmétiques.

Les quantités indiquées sont données en pourcentage de poids.

1 - Crème de soin anti-rides : Noms commerciaux Noms INCI % massique PHASE A Montanov 68 Cetearyl Alcohol (and) Cetearyl 6,00 Glucoside Squalane Squalane 3,00 Cetiol SB 45 Butyrospermum Parkii ( Shea Butter) 2,00 Waglinol 250 Cetearyl Ethylhexanoate 3,00 Amerchol L- 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 Abil 350 Dimethicone 1,50 BHT BHT 0,01 PHASE B Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp 100 Butylene Glycol Butylene Glycol 2,00 Glucam E10 Methyl Gluceth-10 1,00 Allantoin Allantoin 0,15 Carbopol Ultrez 10 Carbomer 0,20 PHASE C Huile d'Avocat Persea Gratissima (Avocado) Oil 1,25 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben 0,75 (and) Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben PHASE D TEA I Triethanolamine I 0,18 PHASE E Hydrolysat selon l'invention 3,00 Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément à une température comprise entre 65 C et 70 C, la phase C est incorporée, puis la phase A est émulsionnée dans la phase B. Le Carbomer est neutralisé avec la phase D à une température aux alentours de 45 C.

La phase E est ensuite additionnée sous agitation et le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25 C. - Lait corporel anti-âge : Noms commerciaux I Noms INCI I % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp 100 Carbopol EDT 2020 Acrylates/C 10-30 Alkylacrylate 0,10 Crosspolymer Glycerine Glycerin 1,20 EDTA Trisodium EDTA 0,65 Propylene Glycol Propylene Glycol 1,50 PHASE B Miglyol 812 Caprylic/Capric Triglyceride 2,50 Amerchol L 101 Minerai Oil (and) Lanolin Alcohol 2,00 Squalane Squalane 1,50 Cetiol SN Cetearyl Isononanoate 2,00 Stearine TP Stearic Acid 2,00 Tegin Glyceryl Stearate SE 3,00 Lanette 16 Cetyl Alcohol 0,20 Dow Corning 200 Fluid Dimethicone 0,50 Phenonip Phenoxyethanol (and ) Methylparaben 0,70 (and) Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben PHASE C TEA I Triethanolamine 0,08 PHASE D Hydrolysat selon l'invention 1,00 Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant qsp Les constituants de la phase A et de la phase B sont chauffés séparément à une température comprise entre 70 C et 75 C. La phase B est émulsionnée dans A sous agitation Staro . Après un refroidissement jusqu'à 50 C, le mélange est neutralisé avec la phase C. La phase D est ensuite additionnée lorsque la température se situe en dessous de 40 C. Le refroidissement est poursuivi jusqu'à 25 C sous agitation lente. 1610 ù Gel visage anti-âge: Noms commerciaux I Noms INCI I % massique PHASE A Eau déminéralisée Aqua (Water) qsp 100 Glycerine Glycerin 3,00 Butylene Glycol Butylene Glycol 1,50 Germall 115 Imidazolidinyl Urea 0,30 Allantoïne Allantoïn 0,20 Sepigel 305 Polyacrylamide (and) C13-14 Isoparaffin (and) 3,00 Laureth-7 PHASE B Dow Corning 345 Fluid Cyclomethicone I 5,00 Phenonip Phenoxyethanol (and) Methylparaben (and) 0,50 Ethylparaben (and) Butylparaben (and) Propylparaben (and) Isobutylparaben PHASE C Dry Flo Pure Aluminium Starch Octenylsuccinate I 4,00 PHASE D Hydrolysat selon l'invention I I 0,50 PHASE E Parfum Parfum (Fragrance) qsp Colorant Dye qsp Préparer la phase A en mélangeant les différentes matières premières à 30 C sous agitation. Ajouter la phase B à la phase A sous agitation. Saupoudrer la phase C dans le gel. Incorporer l'hydrolysat selon l'invention.

Parfumer et colorer si souhaité. 17

Claims (5)

REVENDICATIONS

1. Composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique, à activité immunostimulante pour la peau, caractérisée en ce qu'elle contient, dans un milieu cosmétiquement ou dermatologiquement acceptable, au moins une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes appartenant à la famille des poacées.

2. Composition selon la revendication 1 caractérisée en ce que l'hydrolysat est obtenu à partir de la fraction essentiellement protéique issue des caryopses de plantes appartenant à la famille des poacées.

3. Composition selon les revendications 1 ou 2, caractérisée en ce que l'hydrolysat est obtenu à partir des caryopses décortiqués de plantes appartenant à la famille des poacées.

4. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que la plante de la famille des poacées utilisée est le riz (Oryza saliva L.).

5. Compositon selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que 20 l'hydrolysat peut être obtenu par un procédé comprenant les étapes suivantes : - Préparation d'un broyat de grains délipidés Extraction des fractions solubles protéiques, glucidiques et lipidiques - Précipitation des protéines - Hydrolyse enzymatiques et chimiques de la fraction essentiellement protéique 25 - Purification par dialyse permettant d'éliminer les composés de nature protéique de haut poids moléculaire. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous la forme d'une composition cosmétique et/ou dermatologique 30 adaptée à l'administration par voie topique cutanée comprenant un milieu cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que l'hydrolysat de protéine est présent en une quantité représentant de 0,0001 % à 20 %15du poids total de la composition, et préférentiellement en une quantité représentant de 0,05 % à 5 % du poids total de la composition. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'hydrolysat est préalablement solubilisé dans un ou plusieurs solvants cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptables comme l'eau, l'éthanol, le propanol ou l'isopropanol, le propylène glycol, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés ou tout mélange de ces solvants. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes caractérisée en ce que l'hydrolysat est préalablement solubilisé dans un vecteur cosmétique ou pharmaceutique comme les liposomes ou adsorbés sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites, et plus généralement solubilisés dans, ou fixés sur, tout vecteur cosmétiquement ou pharmaceutiquement acceptable. 10. Composition selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle se présente sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse ou sous la forme d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ou sous forme de crèmes, de suspensions ou encore de poudres; ces compositions pouvant être plus ou moins fluides ou solides et avoir l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte, d'une mousse ou d'un stick. 11 Utilisation d'une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes tel que défini dans les revendications 1 à 10, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique, la composition étant destinée à protéger et renforcer les cellules de Langerhans et le système de défense immunitaire cutané. 12. Utilisation d'une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes tel que défini dans les revendications 1 à 10, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique, la composition étant destinée à protéger la peau des agressions extérieures, en particulier des rayons UV.13. Utilisation d'une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes tel que défini dans les revendications 1 à 10, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique, la composition étant destinée à lutter de manière préventive et/ou curative contre les manifestations du vieillissement cutané, et tout particulièrement le vieillissement photo-induit. 14. Utilisation d'une quantité efficace d'un hydrolysat de protéines de plantes tel que défini dans les revendications 1 à 10, dans ou pour la préparation d'une composition cosmétique et/ou dermatologique et/ou pharmaceutique la composition étant destinée à stimuler le métabolisme des cellules cutanées. 15. Procédé de traitement cosmétique de la peau destiné à lutter de manière préventive et/ou curative contre les manifestations du vieillissement cutané, et tout particulièrement le vieillissement photo-induit, caractérisé par le fait que l'on applique sur la peau, les poils ou les cheveux une composition cosmétique définie selon l'une quelconque des revendications 1 à 10.