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FR2882436A1 - Extemporaneous production of red blood cell suspensions uses drop counter flask of diluent and micro-loop to pick up calibrated volume of blood - Google Patents

Extemporaneous production of red blood cell suspensions uses drop counter flask of diluent and micro-loop to pick up calibrated volume of blood Download PDF

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Abstract

Small volume suspensions of red blood cells for medical analysis can be made extemporaneously with the aid of a drop counter flask containing a predetermined volume of a diluent liquid such as physiological water with an anti-coagulent, and a micro-loop for picking up a calibrated micro-volume of blood, e.g. from a finger prick. The flask has an aperture for inserting the micro-loop, and a stopper with a drop counter for dispensing precise volumes of the diluted blood suspension. The equipment can also include disposable pots to hold blood samples from a patient or transfusion pouch and into which the micro-loops can be dipped.

Description

Dispositif et procédé de Préparation extemporanéeDevice and method for extemporaneous preparation

de suspensions calibrées d'hématies La présente invention concerne un dispositif pour préparer des dilutions de sang de manière facile et précise hors du laboratoire spécialisé, par du personnel non spécialisé en immuno-hématologie, afin d'exécuter en particulier des tests de contrôle de groupe sanguin avant une transfusion de sang, au lit du malade.  The present invention relates to a device for preparing blood dilutions in an easy and accurate manner outside the specialized laboratory, by personnel not specialized in immuno-hematology, in order to perform in particular group control tests. blood before transfusion of blood, at the bedside.

Les techniques de groupage sanguin ont évolué au cours de ces dernières années en se miniaturisant et conséquemment en exigeant des volumes réduits et des concentrations de réactants (sérum-tests et globules rouges) plus précis que par le passé. Dans ce but, on utilise habituellement en laboratoire spécialisé, des pipettes de précision en remplacement des traditionnelles pipettes Pasteur (techniques en tube) ou même des agitateurs de verre (techniques sur plaque d'opaline). Curieusement, de nos jours, on continue à utiliser la technique rudimentaire d'agglutination sur plaque pour effectuer les contrôles ultimes de groupe sanguin au lit du malade, préalablement à la pose d'une transfusion de sang.  Blood grouping techniques have evolved in recent years by becoming miniaturized and consequently requiring reduced volumes and concentrations of reagents (serum tests and red blood cells) more accurate than in the past. For this purpose, it is customary to use precision pipettes in the specialized laboratory instead of the traditional Pasteur pipettes (tube techniques) or even glass stirrers (opaline plate techniques). Curiously, nowadays, we continue to use the rudimentary technique of agglutination plate to carry out the ultimate checks of blood group in bed of the patient, prior to the installation of a transfusion of blood.

Les réactions sur plaque nécessitent peu de matériel et donnent des résultats rapides à partir de sang total non centrifugé.  Plaque reactions require little equipment and give fast results from whole blood that is not centrifuged.

La plaque d'opaline étant ici en l'occurrence le plus souvent une carte de bristol dite P.T.U. (contrôle Pré-Transfusionnel Ultime) sur laquelle sont desséchés des 20 sérum-tests anti-A et anti-B. (Diagast, Biotest, Sifin, etc.).  The opaline plate being here in this case most often a map of cardboard P.T.U. (Ultimate Pre-Transfusion Control) on which anti-A and anti-B serum tests are dried. (Diagast, Biotest, Sifin, etc.).

Inversement, les conditions opératoires simplifiées en apparence sont difficilement standardisables et donc conduisent à des résultats peu reproductibles comme expliqué ci-dessous: Le sang du malade est prélevé par piqûre au doigt à l'aide d'un stérilet (ou lancette) suivi du dépôt d'une goutte* de sang sur le carton par compression du doigt.  Conversely, the operating conditions simplified in appearance are difficult to standardize and therefore lead to poorly reproducible results as explained below: The blood of the patient is taken by finger prick with the aid of an IUD (or lancet) followed by the deposit a drop * of blood on the cardboard by compression of the finger.

* la goutte étant un volume par définition non standardisé allant de la petite à la grosse goutte...  * the drop being a non-standardized volume by definition ranging from small to big drop ...

Le sang de la poche du donneur est prélevé à partir d'un segment de tubulure et déposé sur la carte par simple pression sur la tubulure préalablement percée ou 30 coupée.  Blood from the donor bag is taken from a segment of tubing and deposited on the card by simply pressing on the tubing previously pierced or cut.

Ces dépôts d'échantillons de sang, on le comprend aisément, sont dénués de toute calibration volumétrique et peuvent également couler, voire contaminer les zones réservées aux tests d'agglutination.  These deposits of blood samples, it is easy to understand, are devoid of any volumetric calibration and can also flow or contaminate the areas reserved for agglutination tests.

Après avoir déposé du sang comme indiqué ci-dessus sur la carte P. T.U., 5 l'opérateur en charge du contrôle ultime doit procéder à : - la réhydratation des sérum-tests pré-desséchés sur la carte par addition de gouttes* de sérum physiologique et par frottement à l'aide d'un agitateur de la zone à réactif pour faciliter la solubilisation des sérum- tests. Un essuyage insuffisant peut conduire à la contamination croisée des réactifs sur la carte si l'on conserve le même agitateur.  After having deposited blood as indicated above on the PTU card, the operator in charge of the ultimate control must carry out: the rehydration of the pre-dried test sera on the card by adding drops of physiological saline and by rubbing with a reagent zone stirrer to facilitate the solubilization of the test sera. Insufficient wiping can lead to cross-contamination of the reagents on the board if the same agitator is kept.

Le transfert d'échantillons de sang depuis les plages de recueil vers les plages à réaction et ce, à l'aide d'un bâtonnet ou souvent d'un fond de tube à hémolyse trempé dans le sang tel que déposé ci-dessus puis mélangé aux réactifs.  The transfer of blood samples from the collection ranges to the reaction beaches and this, using a stick or often a hemolysis tube bottom dipped in blood as deposited above and then mixed to the reagents.

On comprendra ici encore que ces opérations sont assez aléatoires et qu'aucune possibilité de maîtriser les quantités transférées ni la concentration des échantillons n'existe.  It will again be understood that these operations are rather random and that there is no possibility of controlling the quantities transferred or the concentration of the samples.

L'ensemble de ces imperfections traduit une fiabilité toute relative, voire médiocre de cette technologie conduisant à des erreurs de transfusion (65 cas rapportés en 3 ans en France; Congrès National de Transfusion de St Etienne, juin 2003).  All these imperfections reflect a relative reliability, even mediocre of this technology leading to transfusion errors (65 cases reported in 3 years in France, National Transfusion Congress of St Etienne, June 2003).

A l'évidence, beaucoup de ces erreurs sont dues aux conditions opératoires mal maîtrisées et difficilement maîtrisables, à des interprétations erronées en raison soit d'un excès de sang déposé soit d'une quantité insuffisante de globules.  Obviously, many of these errors are due to operating conditions poorly controlled and difficult to control, to misinterpretation due to either an excess of blood deposited or an insufficient amount of blood cells.

Le but de la présente invention est de proposer un dispositif et une procédure de préparation de suspension d'hématies, facile à réaliser et qui conduit à des volumes et des concentrations maîtrisées pour pouvoir être utilisées dans des technologies impliquant une telle précision.  The object of the present invention is to provide a device and a procedure for the preparation of suspension of red blood cells, easy to achieve and which leads to volumes and controlled concentrations for use in technologies involving such precision.

La préparation des suspensions d'hématies du malade comme celles du donneur met en oeuvre: a- dispositif le dispositif selon l'invention comprend trois éléments: i. un flacon compte-gouttes pré-rempli d'une solution d'eau physiologique additionnée d'un anti-coagulant, (héparine par exemple). Il comporte une ouverture pouvant laisser passer la boucle de l'ôse. Il peut être doté d'un bouchon compte-gouttes intégré ou adaptable permettant la distribution de gouttes calibrées.  The preparation of the suspensions of red blood cells of the patient as those of the donor implements: a- device the device according to the invention comprises three elements: i. a dropper bottle pre-filled with a physiological saline solution supplemented with an anticoagulant, (heparin for example). It has an opening that can pass the loop of the Ose. It can be equipped with an integrated or adaptable dropper plug allowing the distribution of calibrated drops.

ii. une ôse (inséminateur habituellement utilisé en bactériologie), encore appelée Micro.-Loop.  ii. an ose (inseminator usually used in bacteriology), also called Micro.-Loop.

Les ôses n'ont jamais été proposées à l'emploi pour des tests de groupage sanguin. Ce sont des bâtonnets en plastique (ou en métal) se terminant par une boucle dont le diamètre détermine la quantité de liquide qui est piégée par simple trempage dans le liquide à prélever.  Oses have never been offered for use for blood grouping tests. These are plastic rods (or metal) ending in a loop whose diameter determines the amount of liquid that is trapped by simply soaking in the liquid to be taken.

(Pour illustrer le mode de fonctionnement de l'ôse, on se remémorera les dispositifs utilisés par les enfants pour faire des bulles de savon).  (To illustrate the mode of operation of the Ose, we will remember the devices used by children to make soap bubbles).

iii. une mini-cupule (ou casserole) jetable permettant de recueillir le sang du malade et / ou du donneur et d'y immerger la boucle de l'ôse.  iii. a mini-cup (or pan) disposable to collect the blood of the patient and / or the donor and to immerse the loop of ôse.

b- procédure i. Malade Il suffit donc de recueillir un échantillon de sang du malade en appliquant directement l'ôse sur le doigt à partir de la goutte qui perle après piqûre au stérilet.  b- procedure i. Patient It is therefore sufficient to collect a blood sample of the patient by directly applying the ose on the finger from the drop that pearls after stinging with the IUD.

Cette quantité est calibrée car elle est fonction du diamètre de la boucle.  This quantity is calibrated because it depends on the diameter of the loop.

On ouvre le flacon d'eau physiologique. On y trempe l'ôse et on la fait tourner entre les doigts pour faciliter la diffusion du sang dans le liquide de dilution. On met en place le bouchon compte-gouttes sur le flacon. On peut alors distribuer des gouttes calibrée de cette suspension dans chacune des cupules ou des plages du dispositif utilisé pour le groupage sanguin.  We open the bottle of physiological water. The dip is soaked and rotated between the fingers to facilitate the diffusion of blood into the dilution fluid. We put in place the dropper cap on the bottle. Calibrated drops of this suspension can then be dispensed into each of the wells or pads of the device used for blood grouping.

ii. Poche de sang On recueille du sang sur la boucle de l'ôse à partir d'un segment de tubulure de la poche à transfuser, préalablement sectionnée ou percée à l'aide d'un dispositif adapté du commerce, ou on dépose du sang dans une cupule (casserole) prévue à cet effet puis on trempe I"ôse dans cette cupule pour en prélever la quantité requise. La suite de la manipulation est identique au point b.i. .  ii. Blood bag Blood is collected on the loop of the eye from a tubing segment of the transfusion bag, previously sectioned or pierced by means of a suitable device of the trade, or blood is deposited in a cup (pan) provided for this purpose and then soaked I "ose in this cup to take the required amount.The following handling is identical to the point bi.

En procédant de la sorte, on prépare des suspensions de globules rouges calibrées et on distribue des quantités de sang diluées calibrées dans le dispositif qui va dérouler le test.  By proceeding in this way, calibrated red blood cell suspensions are prepared and calibrated diluted quantities of blood are dispensed into the device which will carry out the test.

Toutes les insuffisances et imprécisions rapportées ci-dessus dans le cadre de l'utilisation de la carte PTU sont ainsi éliminées.  Any deficiencies and inaccuracies reported above in connection with the use of the PTU card are thus eliminated.

Après déroulement et interprétation du test, les ôses, les flacons sont envoyés à l'incinérateur. Il n'y a donc plus de risque de contamination de l'opérateur comme celui-ci existe avec les cartes PTU où le sang est étalé sur la carte sans protection.  After the test has been run and interpreted, the dishes and flasks are sent to the incinerator. There is no longer any risk of contamination of the operator as it exists with the PTU cards where the blood is spread on the card without protection.

Pour éviter des confusions entre le sang du malade et le sang du donneur, on peut valablement proposer des ôses de couleur et des flacons de couleur identique: blanc pour le malade et rouge pour le donneur (par exemple).  To avoid confusion between the blood of the patient and the blood of the donor, it is valid to propose color drops and flasks of the same color: white for the patient and red for the donor (for example).

Exemple d'utilisation de l'invention: La société SCIBIEX, propriétaire des brevets référencés en France sous le numéro FR 94 05123 a développé une technologie d'adhérence en phase solide humide qui peut être valablement utilisée dans le cadre des contrôles ultimes au lit du malade. Un dispositif BilOba à 6 cupules est proposé avec pour le malade et la poche une cupule anti-A, une anti-E3 et un témoin.  Example of use of the invention: The company SCIBIEX, owner of the patents referenced in France under the number FR 94 05123 has developed a wet solid phase adhesion technology that can be validly used in the context of the ultimate controls in the bed of sick. A 6-well BilOba device is available with an anti-A cup, an anti-E3 and a control for the patient and the bag.

Pour dérouler l'analyse, on doit disposer de suspensions d'hématies à 0, 2%. L'opérateur dispose donc de deux flacons compte-gouttes, prêts à l'emploi contenant 3,5 ml d'eau physiologique (ou tout autre liquide isotonique) additionné d'anticoagulant (héparine par exemple), de deux ôses de 10pl, et deux casseroles pour recueillir les sangs du malade et de la poche.  To carry out the analysis, one must have suspensions of red blood cells at 0, 2%. The operator therefore has two dropper bottles, ready to use, containing 3.5 ml of physiological saline (or any other isotonic liquid) supplemented with anticoagulant (heparin for example), two dishes of 10 μl, and two pans to collect the blood of the patient and the pocket.

On procède comme indiqué plus haut pour le recueil des échantillons de sang. En transportant 10p1 de sang de malade (à +1- 50% de globules rouges) dans 3,5 ml de diluant, on aboutit à une suspension finale de globules rouges à 0,2%, ce qui est exactement la concentration requise par la technologie BilOba.  The procedure is as indicated above for the collection of blood samples. Carrying 10 μl of patient's blood (at + 1-50% red blood cells) in 3.5 ml of diluent results in a final suspension of 0.2% red blood cells, which is exactly the concentration required by the BilOba technology.

A l'aide du bouchon compte-gouttes positionné sur chaque flacon, on distribue dans chacune des cupules du dispositif BilOba 60pl de suspension globulaire, ce qui est requis par la technologie BilOba.  Using the dropper plug positioned on each vial, BilOba 60pl of globular suspension is dispensed into each of the cups, which is required by BilOba technology.

On peut alors lancer la procédure analytique.  We can then start the analytical procedure.

La cupule témoin va confirmer que l'ensemble des opérations de préparation des sangs s'est déroulée de façon conforme et permettre de lire et d'interpréter les résultats des tests sans artefact. (ce qui n'est pas possible sur les cartes PTU puisqu'il n'y a aucune reproductibilité entre chaque plage de réaction d'agglutination).  The control cup will confirm that all the blood preparation operations were conducted in a proper manner and allow reading and interpretation of the test results without artifact. (which is not possible on PTU cards since there is no reproducibility between each agglutination reaction range).

Si l'on souhaite adapter l'invention à une technique de gel-test en micro- colonnes qui utilise des suspensions d'hématies à 0,8%, il est suffisant d'adapter les volumes du dispositif comme, par exemple, utiliser des oses de 25pl et les diluer dans des flacons contenant 1,5m1 de solution.  If it is desired to adapt the invention to a micro-column gel-gel technique which uses 0.8% red cell suspensions, it is sufficient to adapt the volumes of the device such as, for example, using 25 μl and dilute them in vials containing 1.5 ml of solution.

Applications industrielles: L'invention s'inscrit ici dans la préparation industrielle de trousses prêtes à l'emploi dans lesquelles l'utilisateur trouve l'ensemble des éléments lui permettant de réaliser le contrôle ultime de groupe sanguin au lit du malade, de façon simple et précise, et en plus hygiénique car on a, avec cette trousse, diminué les risques de contamination au contact du sang. La précision et la reproductibilité inhérentes à ce concept permettent de s'affranchir de causes d'erreurs qui sont source d'accidents graves par incompatibilité transfusionnelle.  Industrial applications: The invention is part of the industrial preparation of ready-to-use kits in which the user finds all the elements enabling him to perform the ultimate control of blood group in the patient's bed, in a simple manner. and accurate, and more hygienic because it has, with this kit, reduced the risk of contamination in contact with blood. The precision and reproducibility inherent in this concept make it possible to overcome the causes of errors that are the source of serious accidents due to transfusion incompatibility.

Claims (8)

Revendications:claims: 1- Dispositif pour réaliser extemporanément des suspensions d'hématies à concentration maîtrisée caractérisé en ce qu'il comporte un flacon comptegoutte contenant un volume déterminé de liquide de dilution et une Lise permettant le prélèvement d'un micro-volume calibré de sang.  1- Device for making extemporaneously suspensions of red blood cells at controlled concentration characterized in that it comprises a countdown vial containing a determined volume of dilution fluid and a Lise allowing the removal of a calibrated micro-volume of blood. 2- Dispositif selon la revendication 1 caractérisé en ce qu'il comporte un orifice permettant d'y introduire l'extrémité d'une ôse chargée d'un micro-volume de sang piégé .  2- Device according to claim 1 characterized in that it comprises an orifice for inserting the end of an ose charged with a micro-volume of trapped blood. 3- Dispositif selon la revendication 1 comportant un bouchon compte-gouttes permettant, après réalisation de la suspension diluée de sang, de distribuer des volumes précis.3- Device according to claim 1 comprising a dropper cap allowing, after completion of the diluted blood suspension, to distribute precise volumes. 4- Dispositif selon la revendication 1 où les flacons de dilution et les ôses peuvent être colorées de façon distincte afin de bien différentier l'origine des préparations de sang de donneur ou de malade.  The device of claim 1 wherein the dilution vials and dishes may be stained separately to differentiate the origin of the donor or patient blood preparations. 5- Dispositif selon la revendication1 où le liquide de dilution peut contenir un anticoagulant pour éviter la formation de caillot.  5. The device of claim 1, wherein the diluting liquid may contain an anticoagulant to prevent clot formation. 6- Dispositif selon la revendication 1 qui comporte des cupules jetables (casseroles) indépendantes pour recueillir le sang du donneur et / ou du malade permettant le trempage de la boucle de l'ôse et donc le prélèvement calibré d'échantillon.  6. Device according to claim 1 which comprises disposable cups (pans) independent to collect the blood of the donor and / or the patient allowing the dipping of the loop of the eye and thus the calibrated sampling sample. 7- Procédé pour la préparation extemporanée de suspension calibrée d'hématies caractérisé en ce que l'on trempe la boucle d'une ôse dans du sang recueilli dans une micro-cupule (casserole) et transfère une petite quantité déterminée (10pl par exemple) de sang dans une quantité donnée de liquide de dilution, avec rotation entre les doigts de l'ose pour une bonne diffusion de l'échantillon prélevé dans le liquide de dilution.  7. A method for the extemporaneous preparation of calibrated suspension of red blood cells, characterized in that the loop of an eye is immersed in blood collected in a micro-cup (pan) and transfers a small determined quantity (10 p for example) of blood in a given amount of dilution fluid, with rotation between the fingers of the ose for a good diffusion of the sample taken from the dilution liquid. 8- Procédé selon la revendication 7 caractérisé en ce que l'on distribue des quantités calibrées de suspension d'hématies par adjonction d'un bouchon 2882436 7 compte-gouttes sur le flacon de dilution, après avoir effectué le transfert de sang et réalisé une dilution calibrée.  8- A method according to claim 7 characterized in that one distributes calibrated amounts of suspension of red blood cells by adding a dropper cap 2882436 7 on the dilution vial, after carrying out the blood transfer and performed a calibrated dilution.
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