FR2507866A1 - Procede pour l'elimination totale d'acide aspartique et d'acide glutamique a partir d'hydrolysats proteiques et de melanges d'aminoacides, avec obtention consecutive de melanges d'aminoacides de haute valeur nutritionnelle - Google Patents

Abstract

PROCEDE POUR L'ELIMINATION TOTALE OU PARTIELLE DES ACIDES ASPARTIQUE ET GLUTAMIQUE A PARTIR D'HYDROLYSATS PROTEIQUES OU DE MELANGES D'AMINOACIDES OBTENUS PAR DIVERS TRAITEMENTS, CARACTERISE EN CE QU'IL CONSISTE A FAIRE ADSORBER UNE SOLUTION D'AMINOACIDES SUR UNE RESINE ECHANGEUSE D'IONS DE TYPE ANIONIQUE PUIS A EFFECTUER L'ELUTION. CE PROCEDE PERMET LA PREPARATION DE FORMULATIONS D'AMINOACIDES ADAPTEES A L'UTILISATION EN NUTRITION CLINIQUE.

Description

Procédé pour l'élimination totale d'acide aspartique et d'acide glutamique

à partir d'hydrolysats protéiques et de mélanges d'aaminoacides, avec obtention consécutive de mélanges d'aminoacides de haute valeur nutritionnelle La-présente invention concerne un procédé industriel facile et peu coûteux à mettre en oeuvre pour obtenir, à partir d'hydrolysats protéiques ou de mélanges d'aminoacides dérivés de divers procédés (hydrolyses chimique et/ou enzymatique; fermentation et autres), des produits destinés à différents usages (pharmaceutiques de façon particulière pour la nutrition par voie parentérale, orale et entérique vétérinaires, zootechniques et industriels), totalement exempts d'acide aspartique et d'acide glutamique, ou à teneur en ces deux aminoacides inférieure à celle présente dans le produit initial et propre à satisfaire les

exigences auxquelles le produit peut être destiné.

L'exigence d'éliminer l'acide aspartique et l'acide glutamique des hydrolysats protéiques ou des mélanges d'aminoacides, ou d'en diminuer la teneur, est particulièrement ressentie dans le domaine pharmaceutique, surtout dans le secteur de l'alimentation par voie parentérale et entérique chez le malade se trouvant dans des conditions critiques, des conditions post-opératoires et dans tous les cas dans lesquels se présentent des états cataboliques ou de dénutrition dans lesquels il est nécessaire d'effectuer un apport azoté par des

substances facilement assimilables.

Certains chercheurs ont attribué aux acides aspartique et glutamique, des phénomènes de nausée et vomissement qui étaient observés chez des patients auxquels ont été administrés des hydrolysats protéiques par voie intraveineuse (Levey, S, Marroun, J E et Smyth, C J, J. Lab Clin Med, 34, 1238-1249 ( 1949); Mayer-Gross, W, et

Walker, J W, Biochem J, 44, 92-97 ( 1949).

Dans des études plus récentes, on a mis en évidence des dommages cérébraux chez des nouveaux-nés de certaines espèces animales à la suite de l'administration orale et parentérale d'acide aspartique et d'acide glutamique (J W. Olney et O L Ho, Nature, 227 ( 1970) 609-611; J W Olney, J Neurophatol Exp Neurol, 30 ( 1971) 75-90; R M Burde, B. Schainker et J Kayes, Nature, 233, 58-60 ( 1971); L D. Stegink, J Tox and Envir Health, 2, 215 ( 1976); V J Perez et J W Olney, J Neurochem 19, 1777 ( 1972) Des études conduites par J E Fischer et collaborateurs ont également mis en évidence des niveaux plasmatiques élevés d'acide aspartique et d'acide glutamique chez des patients affectés d'altérations hépatiques graves (Surgery, 80, 77-91 ( 1976);

J A M A 242, 347-349 ( 1979)).

Un nombre toujours croissant de solutions d'amino-

acides à usage parentérale, commercialisées en Europe, aux Etats-Unis d'Amérique et au Japon tendent à s'aligner sur les exigences scientifiques mentionnées ci-dessus, de façon

particulière en pathologie hépatique et en néo-natologie.

Pour la préparation de telles solutions, on utilise les aminoacides individuels obtenus par des processus fermentatifs, enzymatiques, synthétiques, et extractifs, convenablement dosés. Il est évident que dans la formulation de solutions destinées à l'application par infusion, obtenues avec des aminoacides cristallisés, on a une large possibilité de choix tant en ce qui concerne le type d'aminoacides que de

leurs rapports molaires.

On observe toutefois l'apparition de plus en plus fréquente de formulations qui ne répondent seulement qu'en partie aux exigences scientifiques, tout en obéissant d'autre part aux exigences économiques, étant donné l'augmentation continue du coût des aminoacides cristallisés Ainsi, on tend fréquemment à augmenter la teneur en aminoacides bon marché, tels que la glycine, etayant une teneur en azote élevée, tels que la glycine et l'alanine, de façon à faire croître la teneur globale en azote administrée par le moyen d'une telle solution. Par contre, à partir de protéines d'oriaine naturelle, tant animalesque végétales, le type et le rapport

molaire des aminoacides individuels se trouvent prédéterminés.

A partir de telles protéines, il est possible d'obtenir par un procédé d'hydrolyse chimique (brevet italien no 904 830), un mélange d'aminoacides qui, après des purifications successives-(brevet italien ne 942 580) présente une pureté élevée Aux termes de ce procédé, on obtient un mélange d'aminoacides qui reflète la composition de la protéine de départ, excepté les pertes dues aux conditions de réaction sévères Ainsi qu'on le sait, par exemple, le tryptophane

est complètement détruit dans un tel traitement acide.

Dans les protéines d'origine naturelle, les acides aspartique et glutamique sont toujours présents en quantités diverses Dans le tableau qui suit, se trouve indiquées les concentrations en pourcentages des deux aminoacides, par rapport à la teneur totale en aminoacides, obtenues par hydrolyses chimiques classiques (c'est-à-dire par H Cl 6 N pendant 48 heures au reflux) de certaines protéines d'origine animale et végétale, choisies seulement à titre d'exemple

supplémentaire, nullement limitatif.

TABLEAU

caséine Albumine Farine de Farine de Torula poisson soja Acide aspartique* 6,8 10,8 10,4 12,7 9,7 Acide glutamique* 22,4 14,9 15,6 21,4 17,4 * en pourcentage par rapport à la teneur en aminoacides En effet, un autre objectif de l'invention est d'obtenir, par l'intermédiaire d'un procédé économique, simple et réalisable industriellement, un produit final constitué par plusieurs mélanges de L-aminoacides dans lesquels se trouvent conservés le plus possible, comme on le désire, les rapports entre les aminoacides individuels présentés par la matière protéique d'origine, à part l'élimination complète ou partielle des acides aspartique et glutamique Lesdits mélanges doivent être en mesure de satisfaire les exigences auxquelles ils peuvent être destinés, éventuellement grâce à de petites additions d'autres aminoacides (ou d'autres mélanges d'aminoacides provenant de protéines différentes, obtenus de la façon qui sera décrite ci-après) En particulier, dans le domaine de la nutrition clinique tant parentérale périphérique que centrale, orale et/ou entérique, l'objectif de l'invention est d'obtenir des mélanges de L-aminoacides qui conservent un équilibre convenable entre les différents

aminoacides essentiels et non-essentiels.

De cette façon, comme la quantité et la séquence des divers aminoacides sont prédéterminées par les protéines de départ, on a la possibilité d'obtenir différentes

formulations, thérapeutiquement valables, avec des amino-

acides de valeur nutritive élevée, et en même temps avec un coût inférieur à celui de mélanges analogues, préparés avec

des aminoacides individuels d'origine dite "synthétique".

Un autre objectif de l'invention est d'obtenir des mélanges d'aminoacides exempts d'acide aspartique et d'acide glutamique, ou à niveaux contrôlés en ces deux aminoacides, dont la teneur en ammoniaque et en électrolytes soit conforme

aux prescriptions requises pour l'utilisation de ces mélanges.

Le problème est très important dans le secteur de la nutrition

clinique, en particulier dans l'alimentation parentérale.

On a attribué à la teneur élevée en ammoniaque présente dans les hydrolysats de protéines obtenus aussi bien par hydrolyse acide que par hydrolyse enzymatique lGhadimi, H., Kumar, J, Biochem Med 5548 ( 1971)l, l'hyperammoniémie rencontrée chez les patients auxquels ces produits avaient été administrés lDudrick, S J, Mac Fady, B V, Van Buren, C.T, Ruberg, R L, et Maynard, A T, Ann Surg 176, 259 ( 1972); Ghadimi, H, Abali, F, Kumar, S et Rathi, M, Pediatrics 48,955 ( 1971); Johnson, J D Albutton, W L, et

Sunshine, P J Pediatr 81,151 ( 1972)l.

Pour abaisser la teneur en ammoniaque des hydrolysats de protéines et les rendre propres à l'usage en

alimentation parentérale, malgré les effets mentionnés ci-

dessus, on utilise normalement l'addition auxdits hydrolysats, de bases inorganiques fortes (par exemple Na OH, KOH) sous l'effet desquelles se trouve diminuée, après évaporation, la présence d'ions ammonium dans le produit En conséquence de ces additions, on observe encore dans les hydrolysats de protéines, outre une présence encore d'ammoniaque, une teneur élevée, en particulier en sodium, qui a pour effet de limiter leurs applications à l'alimentation parentérale seulement des patients chez lesquels le besoin en ce cation est augmenté lShenkin, A, Wretlind, A, Wld Rew Nut Diet, 28, 1 ( 1978); Total parenteral nutrition, Edit Josef E Fischer pag 31-32

( 1976)l.

Dans la littérature sont connues des méthodes d'isolement des acides aspartique et glutamique, et leur o 10 séparation consécutive, à partir d'hydrolysats protéiques, exploitant aussi bien des précipitations fractionnées, de valeur aujourd'hui purement historique, que des méthodes chromatographiques plus récentes En ce qui concerne les premières méthodes précitées, on peut se référer à la

description faite dans "Chemistry of the Amino Acids", J P.

Greenstein et M Winitz, vol 3, J Wiley and Sons ed,

1961, pag 1856-1865 et 1930-1940.

En ce qui concerne les méthodes chromatographiques actuellement de valeur, on peut se référer aussi bien à la méthode de Cannan (J Biol Chem 152, 401 ( 1944)) qui a utilisé l'Amberlite IR 4 en mode discontinu, qu'à celle de Martin et coll (Biochem J 42, 443 ( 1948)) qui a par contre utilisé une résine de type IRA 400, en opérant sur colonne

sur l'hydrolysat protéique, toutefois en milieu acide.

Des séparations des aminoacides sur colonne ontété décrites tant dans des travaux scientifiques (S M Partdrige et coll, Biochem J, 44, 418 ( 1949); ibidem, 44, 513 ( 1949); ibidem, 44, 521 ( 1949)) en utilisant une résine échangeuse cationique (Zeo-Karb 215) ou anionique (Wofatit M, Amberlite IR 4, De Acidite B) que dans des brevets (E G.

Donahue, cédé à Hercules Powder Co, Brevet des Etats-

Unis d'Amérique 2 937 199; A A Eisenbraun, cédé à Ogilvie Flour Mills Co, Brevet des Etats-Unis d'Amérique 3.045 026) Dans ces deux derniers cas, on a utilisé de nouveau des résines échangeuses de cations Tous ces travaux ont

toutefois porté sur la séparation d'un ou plusieurs amino-

acides ou le fractionnement en divers groupes, avec des rendements de valeur pratique douteuse, sans aboutir à l'obtention de mélanges d'aminoacides dans le but d'utiliser de tels mélanges pour matières premières convenant pour l'obtention de formulations propres par exemple, à la nutrition

clinique humaine.

Le procédé de l'invention permet de séparer totalement l'acide aspartique et l'acide glutamique, à volonté, ou de réguler la diminution des deux aminoacides jusqu'à atteindre le pourcentage désiré dans le but d'obtenir des mélanges d'aminoacides, appelés intermédiaires, à partir desquels on peut obtenir, par addition d'aminoacides synthétiques, des mélanges adaptés à la nutrition dans des

applications variées, humaine et zootechnique.

Le procédé industriel de l'invention, décrit dans ce qui suit, utilise des résines échangeuses d'ions (de type Amberlite IRA 400, Relite, Dowex) à caractéristiques anioniques fortement basiques, sous forme OH, mises en contact d'échange ionique avec des solutions aqueuses ammoniacales d'hydrolysats protéiques ou de mélanges d'aminoacides de nature diverse, contenant de l'acide aspartique et de l'acide glutamique, provenant par exemple de fermentations Ces solutions d'aminoacides peuvent être obtenues par hydrolyse de protéines, d'origine animale ou végétale, telles que par exemple farine de soja, farine de sang, farine de poisson, plumes, gélatine, caséine, résidu protéique d'extrait hépatique, albumine, extraits d'organes, peau de bovins, torula, laine, mycélium de résidus de fermentation, oude produits, contenant des protéines obtenues par isolement ou enrichissement de la partie protéique par traitement de

matières d'origine naturelle, tant animale que végétale.

A titre d'exemples non limitatifs, on peut citer des concentrats de protéines du gluten de mais de Turquie, des

concentrais de protéines du lactosérum et autres.

Après des opérations convenables, telles qu'un passage sur colonne de résine échangeuse de cations pour éliminer des substances étrangères, et une élution consécutive, et/ou un passage sur colonnes de charbon dans lesquelles certains aminoacides (par exemple aromatiques) sont fortement adsorbés, la solution ammoniacale, dans laquelle sont

solubilisés les aminoacides de départ, doit avoir un p H non-

inférieur à 7, tandis qu'aucune limite n'est imposée aux p H supérieurs à 7 Etant donné les p K de l'acide aspartique (p K 1 2,09 p K 2 = 3,86) et de l'acide glutamique (p K 1 = 2,19 p K 2 4,25), dans les conditions opératoires précitées, les deux aminoacides présentent un équilibre d'ionisation tendant principalement à la forme anionique, tandis que les autres aminoacides peuvent avoir des équilibres d'ionisation notablement influencés par le p H de la solution ammoniacale

dans laquelle on a-dissous les substances de départ.

L'acide aspartique et l'acide glutamique sont

absorbés par la résine ensemble avec les autres aminoacides.

On peut successivement procéder à l'élution à l'aide de solutions d'ammoniaque, de tampons ammoniaque/chlorure d'ammonium et ammoniaque/acétate d'ammonium, en mettant à profit la compétition d'affinité entre l'anion contenu dans la solution ammoniacale éluante et la résine, par rapport aux aminoacides fixés sur cette dernière Le choix convenable de l'éluant est fonction du maintien des volumes d'élution en

quantités pouvant être traitées industriellement.

Le p H de la solution ammoniacale de chlorure d'ammonium ou d'acétate d'ammonium ne doit pas être inférieur

à 7, tandis qu'aucune limite n'est imposée aux p H supérieurs.

La concentration en ions Cl ou CH 3 COO peut varier de valeurs très basses à des valeurs élevées La quantité d'ions Cl ou CH 3 COO influence le volume d'éluant nécessaire pour la récupération des aminoacides et la concentration d'acides

aspartique et glutamique désirée dans le mélange final.

L'acide aspartique et l'acide glutamique présentent, parmi les aminoacides, la plus grande affinité vis-à-vis de la résine et sont par suite élués totalement,

ou en partie, à partir de la résine avec des temps de réten-

tion différents de ceux des autres aminoacides.

On chasse l'ammoniaque et une partie de l'eau à partir de l'éluat ammoniacal par évaporation sous pression réduite Les aminoacides obtenus, sous forme de suspension à 50 %, ou en poudre si on procède à leur dessiccation par utilisation d'un dessiccateur à pulvérisation "spraydrier" ou par d'autres systèmes peuvent être successivement élaborés suivant la destination à laquelle le mélange ainsi

obtenu est destiné.

Une caractéristique importante du procédé de l'invention est la récupération notable des aminoacides non acidiques dans l'éluat ammoniacal, comprise entre 85 et 90 % par rapport aux aminoacides présents dans la substance de départ Ce rendement, bien que variant en fonction des conditions opératoires, demeure assez élevé Ces produits de récupération sont destinés à servir de mélanges d'aminoacides

complètement exempts d'acide aspartique et d'acide glutamique.

Lorsque dans le mélange d'aminoacides, on désire ou tolère une présence d'acide aspartique et d'acide glutamique nettement inférieure à celle de la substance de

départ, le rendement du procédé est supérieur à 95 %.

Dans ce cas, il n'est pas nécessaire de procéder à l'élution avec un tampon d'ammoniaque-chlorure d'ammonium ou d'ammoniaque-acétate d'ammonium, mais il suffit d'effectuer une charge appropriée en aminoacides, de sorte que l'acide aspartique et glutamique déplacent euxmêmes, en raison d'une plus grande affinité ionique vis-à-vis de la résine dans les conditions opératoires adaptées, ceux des aminoacides qui sont

plus faiblement absorbés sur ladite résine.

Un autre avantage notable du procédé de l'invention est conféré par l'utilisation d'un milieu ammoniacal dilué dans toutes les phases dudit procédé Ceci entraîne l'utilisation d'installations beaucoup moins coûteuses et vulnérables vis-à-vis de l'utilisation de milieux acides En second lieu, le milieu basique à l'ammoniaque est notablement utile pour éviter des formations de charges bactériennes que l'on peut au contraire observer dans des conditions de p H modérément acide et qui sont particulièrement dommageables pour des produits utilisés dans les domaines pharmaceutique,

vétérinaire, zootechnique et diététique.

Enfin, l'utilisation de l'ammoniaque pour éluer les aminoacides de la colonne de résine permet d'obtenir, par concentrations successives sous vide, une solution ou une poudre directement utilisable dans la préparation de solution

destinée à être utilisée par infusion.

Un avantage assez positif du procédé de l'invention est le facteur coût En effet, par ce procédé qui est assez simple du point de vue technologique, rapide, dépourvu de manipulations, si bien qu'il peut être complètement automatisé, on obtient des mélanges d'aminoacides, qui, sans aucune addition ou par des petites additions d'aminoacides synthétiques pour des ajustements convenables de la composition, ont un coût beaucoup plus bas par rapport à la

même formulation établie avec des aminoacides synthétiques.

Ceci entraîne une réduction notable des dépenses hospitalières lorsque ces solutions d'aminoacides sont utilisées comme cela se produit souvent, en thérapie nutritionnelle. Les exemples qui suivent illustrent le procédé

de l'invention sans nullement avoir un caractère limitatif.

Les paramètres opératoires fondamentaux suivis dans les exemples de réalisation du procédé sont résumés dans ce qui suit et, sauf indication contraire, demeurent constants dans lesdits exemples Il convient de souligner que ces paramètres ne sont également nullement destinés à limiter le procédé revendiqué. COLONNE: diamètre intérieur = 10 cm hauteur = 250 cm résine = 11 litres

Type = IRA 400 sous forme OH-.

SOLUTION D'ALIMENTATION mélange d'aminoacides dissous dans l'ammoniaque diluée, et amené à p H d'environ 10 Les valeurs effectives de la quantité totale d'aminoacides et de leur pourcentage relatif sont indiquées dans chaque

exemple.

VITESSE DE PASSAGE la vitesse de passage de la solution d'alimentation est comprise entre 1 volume de solutionlheure/volume de résine et 2 volumes de solution/ heure/volume de résine (respectivement égales à 11 et à 1/h) pour la colonne décrite dans ce

qui précède.

Les valeurs réelles sont fournies dans l'exemple spécifique. SOLUTION ELUANTE A) Tampon ammoniaque-chlorure d'ammonium. La solution est préparée en ajoutant à 100 1 d'ammoniaque 3 N, 1,4 1 d'acide chlorhydrique concentré Le p H de la solution

est d'environ 11.

B) Tampon ammoniaque-acétate d'ammonium. La solution est préparée en ajoutant à 100 1 d'ammoniaque 3 N,

0,850 1 d'acide acétique glacial.

Le p H résultant est d'environ 11,2. C) Tampon ammoniaque acétate d'ammonium. La solution est préparée en ajoutant à 100 1 d'ammoniaque 0,3 N, 0,850 1 d'acide acétique

glacial Le p H est d'environ 9,2.

Le temps d'alimentation de la solution initiale et de récolte de la solution éluée est spécifié dans les exemples individuels. D'après le temps d'alimentation et la concentration d'aminoacides, on détermine la charge de ces derniers sur la colonne et en particulier la quantité d'acide aspartique et glutamique Les valeurs sont mentionnées dans les exemples individuels Pendant la phase de charge, il n'y à pas de présence d'aminoacides dans la solution ayant passé à travers la colonne, sauf si cela est expressément mentionné D'une manière constante, dans les exemples décrits ci-après, on concentre l'éluat ammoniacal sous pression réduite et il fournit un produit exempt de substances pyrogènes et de substances ayant une action similaire à l'histamine En même temps, la teneur en ammoniaque du mélange se trouve inférieure à 0,02 g par 100 g d'aminoacides à l'état sec et on observe une absence de cations de bases fortes dans les formulations dépourvues d'acide aspartique et d'acide glutamique Dans les formulations à présence partielle d'acides aspartique et glutamique, la teneur en cations est propre à leur utilisation dans la nutrition parentérale (voir les Exemples 12, 13, 14) et assez inférieure à celle de formulations actuellement

utilisées en thérapie, provenant d'hydrolysats protéiques.

EXEMPLE 1

La solution d'alimentation a la composition

mentionnée dans le tableau suivant.

TABLEAU I

(Exemple 1)

La vitesse de passage est (dans le cas spécifique, sans toutefois aucun caractère limitatif) de 11 l/h,

correspondant à un volume de solution/heure/volume de résine.

Après 140 minutes d'alimentation on n'observe pas, sinon en quantité négligeable, de présence d'aminoacides dans la

solution ammoniacale percolée à travers la colonne de résine.

Dans les 60 minutes suivantes d'alimentation avec la solution ammoniacale contenant des aminoacides dans les g AA/l de solution % des AA individuels ammoniacale dans 100 g de mélange Acide aspartique g 2,71 7, 08 Thréonine g 1,64 4,28 Sérine g 2,11 5,51 Acide glutamique g 9,81 25,63 Proline g 5,33 13,92 Glycine g 1,05 2,74 Alanine g 1,70 4,44 Valine g 2, 77 7,24 Méthionine g 1,02 2,66 Isoleucine g 1,79 4,59 Leucine g 3,95 10, 32 Tyrosine g Phénylalanine g Lysine g 3,54 9,25 Histidine g 0,86 2,26 Arginine g Aminoacides totaux g 38,28 concentrations mentionnées cidessus, on obtient 420 g d'aminoacides dans la solution à la sortie de la colonne de résine Dans cette fraction, la teneur en acide aspartique est presque nulle, tandis que l'acide glutamique est présent dans la proportion de 0,085 g/l de solution passée à travers la résine, correspondant à 0,935 g au total sur 420 g d'aminoacides élués en 60 minutes Le pourcentage d'acide

glutamique est de 0,22 % par rapport au mélange d'amino-

acides Lors des 160 minutes supplémentaires d'alimentation avec une solution ammoniacale contenant des aminoacides dans la proportion mentionnée ci-dessus, dans la solution percolée à travers la résine, se trouvent 52,31 g d'acide aspartique et 99,25 g d'acide glutamique sur 984 g de mélange total d'aminoacides, correspondant à 1,78 g d'acide aspartique/l et 3,38 g d'acide glutamique/l de solution passée à travers la résine. Dans cette fraction (de 160 minutes), les teneurs en pourcentages d'acide aspartique et d'acide glutamique sont

respectivement de 5,32 % et 10,09 %.

En conclusion, dans les deux fractions pour un total de 220 minutes de percolation, sont contenus globalement 52,31 g d'acide aspartique et 100, 18 g d'acide glutamique dans 1404 g de mélange d'aminoacides, correspondant à 3,73 % d'acide aspartique (dans 100 g d'aminoacides) et à 7,14 %

d'acide glutamique (dans 100 g d'aminoacides).

On a par suite une adsorption de quantités notables de ces deux aminoacides de nature acide sur la résine

mentionnée ci-dessus.

EXEMPLE 2

La solution d'alimentation est constituée par un mélange d'aminoacides ayant les caractéristiques mentionnées dans le Tableau II Les concentrations et les quantités relatives des aminoacides demeurent constantes dans les

exemples 3-6.

TABLEAU II

(Exemple 2)

VITESSE DE PASSAGE

TEMPS D'ALIMENTATION

QUANTITE D'AMINOACIDES

CHARGES SUR LA COLONNE

ACIDE ASPARTIQUE CHARGE

ACIDE GLUTAMIQUE CHARGE

SOLUTION ELUANTE

TEMPS D'ELUTION

VOLUME RECOLTE

= 1 volume de de résine = 120 minutes S Olution/heure/volume = 824,3 g = 58,3 g = 208,8 g = Tampon A

= 240 minutes -

= 44 litres Dans le T Ableau III, on indique les récupérations

et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne.

La récupération des aminoacides après élution est de 472,1 g sur -557,3 g (qui représente la récupération théorique, si l'on soustrait la-quantité d'acide aspartique et d'acide glutamique de la quantité d'aminoacides chargés dans la colonne), correspondant à 84,7 % de la théorie La teneur en chlore dans le mélange final, exempt d'acides aspartique et

glutamique, est de 0,7 %.

g AA/1 de % des AA indivi-

solution duels dans 100 g ammoniacale de mélange Acide aspartique g 2,65 7,07 Thréonine g 1,50 4,00 Sérine g 2,03 5,42 Acide glutamique g 9,49 25, 33 Proline g 5,57 14,87 Glycine g 0,86 2,30 Alanine g 1,58 4,22 Valine g 2,78 7,42 Méthionine g 0,93 2,48 Isoleucine g 1,76 4,70 Leucine g 3,94 10, 52 Tyrosine g Phénylalanine g Lysine g 3,61 9,63 Histidine g 0,77 2,05 Arginine g Aminoacides totaux g 37,47

TABLEAU III

(Exemple 2)

AA charges AA % de ré % des AA sur la récupérés cupérationindividuel colonne dans 100 g g g de mélange Acide aspartique 58,3 O O / Thréonine 33,0 31,1 94,2 6,6 Sérine 44,7 39,1 87,5 8,3 Acide glutamique 208,8 O O / r Proline 122,5 109,9 89,7 23,3 Glycine 18,9 17,8 94,2 3,8 Alanine 34,8 33,8 97,1 7,1 Valine 61,2 53,4 87,3 11,3 Méthionine 20,5 8,7 42,4 1,8 Isoleucine 38,7 27,7 71,6 5,8 Leucine 86,7 60,2 69,4 12,7 Tyrosine / Phénylalanine / / Lysine 79,4 80,0 100,8 17,0 Histidine 16,9 10,4 61,5 2, 2 Arginine / Total 824,4 472,1

EXEMPLE 3

La solution d'alimentation, l'écoulement de cette dernière, les temps de charge, le tampon utilisé (type A)

sont identiques à ceux de l'Exemple 2.

TEMPS D'ELUTION = 300 minutes VOLUME RECOLTE = 55 litres Dans le Tableau IV, on indique les récupérations

et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne.

Les valeurs mentionnées dans le Tableau IV montrent une récupération de tous les aminoacides supérieurs à 93 %, excepté pour la méthionine, avec laquelle on obtient une récupération de 84,4 % La quantité d'acide aspartique, en composition centésimale, est d'environ 1 de celle présente dans le mélange initial, tandis que l'acide

glutamique est d'environ î de celui présent initialement.

La teneur en chlore dans le mélange final est de 2,6 %, par

rapport aux aminoacides présents.

TABLEAU IV

(Exemple 3)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total AA chargésAA % de ré % des AA sur la récupérés cupérationindividuela colonne dans 100 g g g de mélange 58,3 33, 0 44,7

208,8.

122,5 18,9 34,8 61,2 ,5 38,7 86,7 / 79,4 16,9 / 824,4 7,7 33,9 46,0 44,8 114,7 19,4 ,4 61,2 17,3 36,1 81,0 ,6 16,1 594,2 13,2 102,7 102,9 21,5 93, 6 102,6 101,7 ,0 84,4 93,3 93,4 101,5 ,3 1,3 ,7 7,7 7,5 19,3 3,3 6,0 ,3 2, 9 6,1 13,6 13,6 2,7

EXEMPLE 4

VITESSE DE PASSAGE

TEMPS D'ALIMENTATION

QUANTITE D'AMINOACIDES

CHARGES SUR LA COLONNE

ACIDE ASPARTIQUE CHARGE

ACIDE GLUTAMIQUE CHARGE

TEMPS D'ELUTION

VOLUME RECOLTE

SOLUTION ELUANTE

= 1,74 volume de solution/heure/ volume de résine = 120 minutes = 876,8 g = 62 g = 222,1 g

=J 40 minutes -

= environ 44,6 litres = tampon A Dans le Tableau V, on indique les récupérations

et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne.

La récupération des aminoacides après élution est de 511,6 g sur 592,7 g (qui représente la récupération théorique en soustrayant l'acideaspartique et l'acide glutamique de la quantité d'aminoacides chargés dans la colonne) correspondant à 86,3 % de la théorie La teneur en chlore dans le mélange final, exempt d'acide aspartique et d'acide glutamique, est

de 1,4 % par rapport aux aminoacides.

TABLEAU V

(Exemple 4)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total

EXEMPLE 5

On procède comme dans l'Exemple 4, avec la variation unique de la durée et du temps d'élution ( 180

minutes) et en conséquence du volume récolté ( 57,5 litres).

Dans le Tableau VI sont rassemblés les récupérations et bilans AA charges AA % de ré % des AA sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g g g de mélange

62,0 O O /

,1 33,1 94,3 6,5

47,6 43,5 91,4 8,5

222,1 O O /

,5 112,4 86,1 22,0

,2 19,8 98,0 3,9

37,1 35,7 96,2 7,0

,0 56,0 86,2 10,9

21,7 12,3 56,7 2,4

41,1 32,4 78,8 6,3

92,1 69,9 75,9 13,7

/ /

84,4 85,0 100,8 16,6

17,9 11,5 64,4 2,2

876,8 511,6

par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne Les valeurs mentionnées dans le Tableau VI montrent des récupérations de tous les aminoacides supérieures à-90 %, excepté pour la méthionine et l'histidine qui présentent une récupération supérieure à 80 % La quantité d'acide aspartique, en composition centésimale, est d'environ de celle présente initialement Ces résultats sont en accord avec ceux mentionnés dans l'Exemple 3, dans lequel on utilisait des écoulements d'alimentation inférieurs La teneur en chlore

dans le mélange final est de 3,1 %.

TABLEAU VI

(Exemple 5)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total AA charges AA % de ré % des AA sur la récupérés cupérationindividuel colonne dans 100 g g g de mélange

62,0 6,7 10,8 1,1

,1 35,6 101,4 5,7

47,6 48,8 102,5 7,9

222,1 42,5 19,1 6,8

,5 124,6 95,5 20,1

,2 20,8 103,0 3,4

37,1 37,45 100,9 6,0

,0 64,8 99,7 10,4

21,7 17,45 80,4 2,8

41,1 37,7 91,7 6,1

92,2 83,0 90,0 13,4

/ / I /

84,4 86,0 101,9 13,9

17,9 15,2 84,9 2,4

/ /

876,8 620,6

EXEM 4 PLE 6

On opère comme dans les Exemples 4 et 5 en ce qui concerne les conditions de colonne, la charge d'aminoacides, les écoulements d'alimentation, le type de solution utilisée dans l 'élution La durée de la phase d'élution est de 150 minutes, correspondant à un passage d'environ 48 1 de solution ammoniacale de chlorure d'ammonium Dans le Tableau VII on montre les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne La teneur en chlore dans le mélange final est de 1,8 % Les Exemples 4-5-6 montrent qu'il est possible d'obtenir des mélanges d'aminoacides à teneur variable en acide aspartique et en acide glutamique, en faisant varier

de manière convenable la durée du temps d'êlution.

TABLEAU VII

(Exemple 6) Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total

EXEMPLE 7

On procède comme dans l'Exemple 5, avec comme

variation unique l'utilisation d'un tampon B (ammoniaque -

acétate d'ammonium) par rapport au tampon A. La quantité d'aminoacides chargés sur la colonne est de 886,5 g et les teneurs en acide aspartique et en acide l AA chargés AA % de ré % des AA sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g g g de mélange

62,0 0,20 0,3 0,04

,1 33,4 95,2 6,3

47,6 44,6 93,9 8,4

222,1 4,1 1,8 0,8

,5 118,9 91,2 22,4

,2 20,4 101,1 3,8

37,1 37,3 100,6 7,0

,0 61,2 94,2 11,5

21,7 12,4 57,20 2,3

41,1 32,1 78,1 6,0

92,2 69,6 75,5 13,1

/

84,4 85,0 100,8 16,0

17,9 11,5 64,4 2,2

/

876,8 530,7

v glutamique sont respectivement de 61,7 g et 221,4 g Les valeurs de concentrations et compositions centésimales de la solution d'alimentation dans la phase de charge, ne varient pas d'une manière notable par rapport à celles mentionnées dans les exemples précédents, de même qu'il n'y a pas de variation du p H. Dans le Tableau VIII, on mentionne les récupérations

et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne.

* La récupération des aminoacides après élution est de 539,4 g sur 603 g (qui représente la récupération théorique en soustrayant l'acide aspartique et l'acide glutamique de la quantité d'aminoacides chargés dans la colonne) correspondant à 89,4 % de la théorie La teneur en acétate dans le mélange

final, exempt d'acides aspartique et glutamique, est de 1 %.

TABLEAU-VIII

(Exemple 7)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total AA charges AA % de ré % des AA sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g g g de mélange

61,70 O /

,7 34,9 97,9 6,5

47,5 45,9 96,7 8,5

221,4 O O /

126,0 118,9 94,4 22,0

21,2 20,4 96,4 3,8

37,6 37,9 100,7 7,0

,7 60,1 91,5 11,1

23,4 13,2 56,5 2,45

43,8 34,4 78,6 6,4

96,2 73,6 76,5 13,6

/

87,1 86,2 99,0 16,0

19,2 13,9 72,6 2,6

886,5 539,4

886,5 539,4

EXEMPLE 8

On procède comme dans l'Exemple 7 avec la même solution de charge et les mêmes paramètres opératoires, en utilisant le tampon C (ammoniaqueacétate d'ammonium plus dilué) La phase d'élution avec la solution ammoniacale d'acétate d'ammonium a une durée de 195 minutes, correspondant à un passage d'environ 62 1 de solution ammoniacale

d'acétate d'ammonium.

Dans le Tableau IX, on montre les récupérations

et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne.

La récupération des aminoacides après élution est de 526,9 g sur 603 g (qui représente la récupération théorique calculée en soustrayant la quantité d'acide

aspartique et d'acide glutamique de la quantité des amino-

acides chargés dans la colonne), correspondant à 87,4 % de la théorie. La teneur en acétate dans le mélange final est de

1:1 %.

TABLEAU IX

(Exemple 8)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total Les études conduites par Fischer et Collaborateurs ("Pathogenesis and therapy of Hepatic Coma" Progress in liver disease Volume V 1975; "The role of plasma amino acids in hepatic encephalopathy", Surgery Vol 80 n 1 pag 77-91 ( 1976); "Chronic hepatic encephalopathy Long term therapy with a branched-chain amino acids enriched elemental diet" JAMA Vol 242 N 4 pag 347-349 ( 1979)) ont mis en évidence que les patients présentant des maladies hépatiques chroniques et des cirrhoses montraient un état aminoacidémique du plasma notablement différent de celui de sujets normaux:-phénylalanine, thyrosine, acide glutamique, acide aspartique et méthionine en augmentation notable, tandis que l'isoleucine, la leucine et la valine diminuaient sensiblement. AA chargés AA % de ré 1 % des AA sur la récupérés cupération individuels colonne dans 100 g g g de mélange

61,7 O O /

,7 33,2 93,0 6,3

47,5 44,1 92,8 8,4

221,4 O O /

126,0 115,0 91,3 21,8

21,2 20,2 95,3 3,8

37,6 36,0 95,7 6,8

,7 59,3 90,3 11,3

23,4 12,9 55,1 2,4

43,8 34,0 77,6 6,5

96,2 72,8 75,7 13,8

/

87,1 86,0 98,7 16,3

19,2 13,4 69,8 2,5

/

886,5 526,9

El Val + Isoleuc + Leuc En outre, le rapport Phénylal + Tyros des aminoacides plasmatiques montre une corrélation notable avec le degré d'encéphalopathie Des améliorations de l'état général et neurologique de ces patients ont été observées en utilisant, au cours de l'alimentation parentérale desdits sujets, des solutions d'aminoacides à teneur élevée en isoleucine-leucine-valine (aminoacides à cha 1 ne ramifiée) une basse teneur en méthionine-phénylalanine-tryptophane, et

à teneur nulle en acide aspartique-acide glutamique-tyrosine.

o 10 Ce type de formulation peut être facilement obtenu avec les processus mis en évidence dans les divers exemples décrits ci-dessus, et surtout il est assez convenable économiquement

par rapport à une formulation analogue établie avec des amino-

acides d'origine "synthétique" En effet, en utilisant comme matière première la caséine, après hydrolyse acide complète, on obtient un mélange d'aminoacides qui, par des traitements convenables et par passages successifs sur une résine du type décrit dans les Exemples 2, 4, 7 et 8, présente une composition en pourcentage moyenne en amino-acides, mise en évidence dans les divers exemples décrits dans ce qui précède, du type représenté dans le Tableau X (On a indiqué entre parenthèses les limites des écarts admis dans les mélanges provenant

d'hydrolysats protéiques).

TABLEAU X

Thréonine 6,5 ( 5,8 7,1) Sérine 8,3 ( 7,5 9,1) Proline 22,3 ( 20,1 24,5) Glycine 3,8 ( 3,4 4,2) Alanine 7,0 ( 6,3 7,7) Valine 10,9 ( 9,8 12,0) Méthionine 2,2 ( 2 2,4) Isoleucine 6,2 ( 5,6 6,8) Leucine 13,2 ( 11,9 14, 5) Lysine 17,2 ( 15,5 18,9) Une telle composition peut être amenée à des valeurs Histidine 2,4 ( 2,2 2,6) optimales, dans le sens qui vient d'être souligné, par simple intégration avec des quantités relativement petites de certains aminoacides: on obtient des "mélanges élaborés", comme le démontrent les exemples suivants, eux-mêmes non limitatifs.

EXEMPLE 9

A 100 g d'un mélange ayant la composition représen-

tée dans le Tableau X, obtenu avec le procédé décrit dans les Exemples 2, 4, 7 et 8, on ajoute 1,5 g de phénylalanine, 8,5 g d'arginine et 1,0 g de tryptophane (soit par suite seulement 11 % d'aminoacides "d'intégration") On obtient un mélange élaboré ayant la composition en % d'aminoacides

mentionnée dans le Tableau XI.

TABLEAU XI

(Exemple 9) Thréonine 5,8 ( 5,2 6,4) Sérine 7,5 ( 6,7 8,2) Proline 20,0 ( 18,0 22,0) Glycine 3,4 ( 3,1 3,7) Alanine 6,3 ( 5,7 6,9) Valine 9,8 ( 8,8 10,8) Méthionine 2,0 ( 1,8 2,2) Isoleucine 5,6 ( 5,0 6,2) Leucine 11,9 ( 10,7 13,1) Phénylalanine 1,4 ( 1,3 1,5) Lysine 15,5 ( 14,0 17,0) Histidine 2,2 ( 2,0 2,4) Arginine 7,7 ( 6,9 8,5) Tryptophane 0,9 ( 0,8 1, 0) On a mentionné entre parenthèses les valeurs d'écart admises dans des formulations analogues provenant

d'hydrolysats protéiques.

L'addition de phénylalanine et de tryptophane est motivée par le fait que tous deux sont des aminoacides essentiels, manquant dans la formulation précédente L'addition doit être toutefois minimale pour répondre aux exigences mentionnées dans la littérature indiquée ci-dessus L'arginine est ajoutée pour son pouvoir détoxifiant à l'égard de

l'ammoniaque endogène se formant par désamination des amino-

acides (Meister, A "Biochemistry of the Amino Acids", 2nd Ed., Ac Press, N Y, 1965; "Arginine, Ornithine and Citrulline Urea Synthesis", pag 685707; Najarian, J S,

Harper, H A, Am J Med 21, 832 ( 1956)).

La présence d'électrolytes dans 100 g de mélange élaboré d'aminoacides est la suivante, par rapport aux mélanges obtenus dans les Exemples 2-4-7- 8 de la présente invention: Exemple 2: Cl 0,65 % enpdsde mélange élaboré Exemple 4: Cl 1,30 % enpdsde mélange élaboré

Exemple 7: CH 3 COO 0,90 % enpdsde mélange élaboré -

Exemple 8: CH 3 COO 1,00 % enpdsde mélange élaboré La composition aminoacide élaborée de même que la teneur en électrolytes (par exemple, absence de cations; NH 3 < 0,02 %) présents sont parfaitement propres à l'emploi de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ladite formulation peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier aux patients présentant des

dommages hépatiques graves.

Le Tableau XII mentionne les paramètres nutritionnels

fondamentaux du mélange d'aminoacides élaboré de l'Exemple 9.

TABLEAU XII

Comp en % après ( 1) ( 2) ( 3) ( 4) ( 5) intégrat. Acide aspartique Thréonine 5,8 0,681 5,8 381 110 Sérine 7,5 0,999 Acide glutamique Proline 20,0 2,434 Glycine 3,4 0,634 Alanine 6,3 0,990 Valine 9,8 1,173 9,8 9,8 644 185 Méthionine 2,0 0,188 2,0 131 38 Isoleucine 5,6 0,598 5,6 5,6 368 106 Leucine 11,9 1,271 11,9 11,9 782 225 Tyrosine Phénylalanine 1,4 0,093 1,4 92 26 Lysine 15,5 2,970 15,5 1018 293 Histidine 2,2 0,596 Arginine 7, 7 2,476 Tryptophane 0,9 0,123 0,9 59 17

,226 52,9 27,3 3475

( 1) = g d'azote total dans 100 g de AA ( 2) = g de AAE (aminoacides essentiels) dans 100 g de AA ( 3) = g de BCAA (aminoacides à chaîne ramifiée) dans 100 g de AA ( 4) = mg de chaque AAE/g de N total ( 5) = mg de chaque AAE/g de AAE totaux Des études récentes ont mis en évidence l'importance de la teneur en valine, isoleucine, leucine (aminoacides à chaîne ramifiée, BCAA) dans les solutions d'aminoacides

utilisées dans l'alimentation parentérale.

Les observations mentionnées par divers auteurs ont attribué à ces trois aminoacides, des effets anticataboliques spéciaux (Buse, M G, Reid, M, J Clin Invest, 58, 1251 ( 1975); Fulks, R M, Li, J B, Golberg, A L, J Biol Chem.

250, 280 ( 1975)).

Des études in vivo chez le rat ont révélé une meilleure utilisation de l'azote contenu dans les solutions d'aminoacides, pendant la période postopératoire, lorsque ces solutions étaient modifiées en augmentant leur teneur en BCAA (Freund, H Yoshimura, N, Lunetta, L, Fischer, J E, Surgery 83, 611 ( 1978); Tetsuya Kishi, Yasuo Iwasawa, Hiroshi Itoh, Ichiro Chibata, J Nutrit 110, 710 ( 1980) Erich Vinars, P Furst, S O Liljedahl, J Larson, B Schild, J Parent Enter Nutrit, Vol 4 n 2, pp 184 ( 1980)) ont démontré l'effet inadéquat de deux solutions d'aminoacides, basées l'une sur les besoins selon Rose (J Biol Chem 217, 987 ( 1955)) et l'autre sur le tableau aminoacidique chez l'homme (Energy and Protein Requirements, report of a joint

FAO-WHO Experts Group, 1973), pendant la période post-

opératoire, montrant un catabolisme notable avec augmentation notable de leucine, valine et isoleucine dans le liquide

intracellulaire du muscle.

Comme on l'a mentionné dans les exemples 2, 4, 7 et 8, on obtient un mélange d'aminoacides avec la composition centésimale indiquée dans le Tableau X. La teneur en valine + isoleucine + leucine de ce mélange est de 30,3 % par rapport aux autres aminoacides et elle est par suite propre à constituer la base voulue pour obtenir un mélange à haute teneur en BCAA La commodité économique de l'utilisation de ce mélange est analogue à celle

qui a déjà été mise en évidence dans l'Exemple 9.

On peut également dans ce cas facilement parvenir à un "mélange élaboré" par intégration avec un pourcentage relativement limité des aminoacides manquants Les Exemples et 11 qui suivent constituent une démonstration non limitative.

EXEMPLE 10

A 100 g d'un mélange ayant la composition mentionnée dans le Tableau X, obtenu selon les Exemples 2, 4, 7 et 8, on ajoute 1,0 g de méthionine, 6 g de phénylalanine, 5,0 g d'arginine et 2,0 g de tryptophane (l'intégration est par suite limitée à 14 % par rapport au mélange initial) Le mélange élaboré présente la composition en pourcentage précisée

dans le Tableau XIII.

TABLEAU XIII

(Exemple 10)

Thréonine 5,7 (-5,1 6,3) Sérine 7,3 ( 6,6 8,0) Proline 19,6 ( 17,6 21,6) Glycine 3,3 ( 3,0 3,6) Alanine 6,1 ( 5,5 6,7) Valine 9,6 ( 8,6 10,6) Méthionine 2,8 ( 2,5 3,1) Isoleucine 5,4 ( 4,9 5,9) Leucine 11,6 ( 10,4 12,8) Phénylalanine 5,3 ( 4,8 5,8) Lysine 15,1 ( 13,6 16,6) Histidine 2,1 ( 1,9 2,3) Arginine 4,4 ( 4,0 4,8) Tryptophane 1,7 ( 1,5 1,9) La présence d'électrolytes dans 100 g de mélange élaboré d'aminoacides est la suivante, par comparaison aux mélanges obtenus dans les Exemples 2-4-7-8: Exemple 2: Cl 0,6 % en Pdsde mélange élaboré Exemple 4: Cl 1,23 % enpdsde mélange élaboré Exemple 7: CH 3 COO 0,88 % enpdsde mélange élaboré Exemple 8: CH 3 COO 0,95 % enpdsde mélange élaboré La composition en aminoacides du mélange élaboré, la teneur en BCAA ( 27,3 % par rapport au total), la teneur en électrolytes (par exemple, absence de cations; NH 3 4 0,02 %) sont parfaitement adaptées aux emplois de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ce type de formule peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier chez les patients présentant des traumatismes

et des infections.

Le Tableau XIV rassemble les paramètres nutritionnels fondamentaux de la formulation mentionnée dans le Tableau XIII.

TABLEAU XIV

(Exemple 10)

Pour les significations de ( 1) ( 2) ( 3) ( 4) et ( 5) voir le Tableau XII

EXEMPLE 11

En ajoutant par exemple, mais non limitativement, à 100 g du mélange ayant la composition mentionnée dans le Tableau X, 1 g de méthionine, 0,8 g de tyrosine, 3,4 g de phénylalanine, 5 g d'arginine et 1,9 g de tryptophane, on

obtient la composition suivante en aminoacides du mélange ré-

élaboré.

TABLEAU XV

(Exemple 11)

Comp en % après ( 1) ( 2) ( 3) ( 4) ( 5) intégrat. Acide aspartique Thréonine 5,7 0,600 5,7 401 98 Sérine 7 t 3 0,858 Acide glutamique Proline 19,6 2,385 Glycine 3,3 0,616 Alanine 6,1 0,959 Valine 9,6 1,148 9, 6 9,6 676 166 Méthionine 2,8 0,263 2,8 197 48 Isoleucine 5,4 0,577 5,4 5, 4 380 93 Leucine 11,6 1,239 11,6 11,6 817 200 Tyrosine -Phénylalanine 5,3 0,449 6,0 422 104 Lysine 15,1 2,893 15,1 1063 261 Histidine 2,1 0,569 Arginine 4,4 1,415 Tryptophane 1,7 0,233 1,7 120 29

14,200 57,9 27,6 4076

Thréonine 5,8 % ( 5,2 6,4) Sérine 7,4 % ( 6,6 8,2) Proline 19,9 % ( 17,9 21,9) Glycine 3,4 % ( 3,0 3,7) Alanine 6,2 % ( 5,5 6,9) Valine 9,7 % ( 8, 7 10,7) Méthionine 2,8 % ( 2,5 3,1) Isoleucine 5,5 % ( 4,9 6,1) Leucine 11,8 % ( 10,6 13,0) Tyrosine 0,7 % ( 0,6 0,8) La présence d'électrolytes dans 100 g de mélange élaboré d'aminoacides est la suivante, par comparaison aux mélanges obtenus dans les Exemples 2, 4, 7 et 8: Exemple 2: Cl X 0,6 % enpdsde mélange élaboré Exemple 4: Cl X 1,2 % enpdsde mélange élaboré Exemple 7: CH 3 COO u 0,9 % enpdsde mélange élaboré Exemple 8: CH 3 COO 1,0 % enpdsde mélange élaboré La composition en aminoacides du mélange élaboré, la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée ( 27,0 % par rapport au total), la teneur en aminoacides essentiels ( 55,6 % par rapport au total), et la basse teneur en anions, rendent cette formulation propre à tous les cas dans lesquels elle peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier aux patients présentant des traumatismes et

des infections.

Le tableau suivant résume les paramètres fondamentaux de cette formulation: Phénylalanine 3,0 % ( 2,7 3,3) Tryptophane 1,7 % ( 1,5 1,9) Lysine 15,3 % ( 13,7 16,9) Histidine 2,1 % ( 1,8 2,3) Arginine 4,5 % ( 4, 0 5,0)

TABLEAU XVI

(Exemple 11)

Pour les significations de ( 1), ( 2), ( 3), ( 4) et ( 5), voir le Tableau XII

EXEMPLE 12

On emploie une colonne ayant les mêmes

caractéristiques que celles mentionnées avant les exemples.

La vitesse de passage ou percolation est, dans le cas spécifique mais non limitatif, de 1,74 volume de solution par heure, et par volume de résine La solution d'alimentation est constituée par un mélange d'aminoacides ayant les caractéristiques indiquées ci-dessous, dissous dans

l'ammoniaque diluée avec un p H final d'environ 10.

Comp en % après ( 1) ( 2) ( 3) ( 4) ( 5) intégrat. Acide aspartique / Thréonine 5,8 0,682 5,8 401 104 Sérine 7,4 0,986 Acide glutamique / Proline 19,9 2,422 Glycine 3,4 0,634 Alanine 6,2 0,975 Valine 9,7 1,160 9, 7 9,7 671 174 Méthionine 2,8 0,263 2,8 194 50 Isoleucine 5,5 0,587 5,5 5, 5 380 99 Leucine 11,8 1,260 11,8 11,8 816 212 Tyrosine 0,7 0,054 Phénylalanine 3,0 0,254 3,0 208 54 Tryptophane 1,7 0,233 1,7 118 31 Lysine 15,3 2,931 15,3 1058 275 Histidine 2,1 0,569 Arginine 4,5 1,447

14,457 55,6 27,0 3846

2507866 -

TABLEAU XVII

(Exemple 12)

On alimente pendant 210 minutes la colonne avec la solution ammoniacale ayant les caractéristiques mentionnées ci-dessus A la fin de l'alimentation avec la solution ammoniacale d'aminoacides on fait percoler H 20 pendant 60 minutes. Pendant les 90 premières minutes, la solution

passée à travers la colonne ne contient pas d'aminoacides.

Après ce temps, on commence la phase de récolte qui se poursuit jusqu'à la fin du passage de H 20 La phase de collecte

a par la suite une durée de 180 minutes.

Dans le Tableau XVIII, on a mis en évidence les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne La récupération des aminoacides est de 1,869 g sur 2,009 g (qui représente la récupération théorique en soustrayant de la quantité d'aminoacides chargés dans la colonne, 142 g d'acide aspartique et 455 g d'acide glutamique qui sont adsorbés par la résine), correspondant à 93 % par

rapport à la théorie.

Le mélange d'aminoacides obtenu présente un équilibre entre des aminoacides ayant des caractéristiques g de AA/1 1 g de AA/100 g de solution de mélange d'aminoacides Acide aspartique 2,92 7,29 Thréonine 1, 63 4,07 Sérine 2,09 5,22 Acide glutamique 10,29 25,71 Proline 5,17 12,92 Glycine 0,93 2,32 Alanine 1,61 4,02 Valine 2,97 7,42 Méthionine 1,17 2,92 Isoleucine 1,91 4,77 Leucine 4,01 10,02 Tyrosine 0,10 0,25 Phénylalanine 0,06 0,15 Lysine 3,98 9,94 Histidine 1,10 2,75 Arginine 0,09 0,22 Aminoacides totaux g 40,03 acides et des aminoacides ayant des caractéristiques basiques, presque parfait, si bien que l'addition de petites quantités de bases inorganiques ou organiques permet d'obtenir, après concentration sous pression réduite, un produit dont la teneur en ammoniaque est inférieure à 0,02 % enpdsd'amino- acides, et à basse quantité de cations présents, si l'on utilise une base inorganique, ou tout simplement exempt de

cations et d'anions lorsqu'on utilise une base organique.

Le choix des bases inorganiques ou organiques est dicté par

le type d'application auquel le produit est destiné.

Pour un mélange destiné à l'application parentérale ou entérique, les bases inorganiques utilisées peuvent contenir des cations en quantités physiologiquement utiles ou non dommageables vis-à-vis des états pathologiques auxquels le produit est destiné, comme par exemple, mais non

limitativement, Na OH-KOH-Mg(OH)2-Ca(OH)2 et autres.

En ce qui concerne les bases organiques, on peut

citer, mais de façon non limitative, l'arginine qui est lui-

même un aminoacide et dont la présence dans les mélanges d'aminoacides destinés aux utilisations mentionnées ci-dessus, est utile, en ce qu'il rentre dans le cycle de Krebs-Henseleit de la formation de l'urée (Meister, A "Biochemistry of the amino acids" 2nd Ed, Ac press, N Y, 1965 "Arginine, Ornithine and Citrulline; Urea Synthesis", pg 685-707; Najaran, J S, Harpey, H A, Am J Med 21, 832 ( 1956) A titre d'exemple, on indique que l'addition de 5 méq de Na OH ou de 5 mmoles d'arginine par litre d'éluat collecté après passage sur résine, suivant le procédé décrit cidessus, permet d'obtenir, après concentration sous pression réduite, un produit dans lequel l'ammoniaque est inférieur à 0,02 % enpdsd'aminoacides et à teneur respective en sodium d'environ 0,3 % enpdsd'aminoacides de caractère acide (par l'utilisation de Na OH) ou en argininederv 3 % enpdsd'aminoacides (en utilisant

comme base organique, l'arginine).

TABLEAU XVIII

(Exemple 12)

AA chargés AA récu Récu Comp %

sur la pérés pérat.

colonne % AA en g g g dans 100 g de mélange Acide aspartique 190 48 25,3 2,6 Thréonine 106 98 92,5 5,3 Sérine 136 126 92,6 6,7 Acide glutamique 670 215 32,1 11,5 Proline 337 327 97,0 17,5 Glycine 61 56 91,8 3,0 Alanine 105 102 97,1 5,5 Valine 193 177 91,7 9,5 Méthionine 76 56 73,7 3, 0 Isoleucine 124 114 91,9 6,1 Leucine 261 234 89,7 12,5 Tyrosine 6 / Phénylalanine 4 / Lysine 259 252 97,3 13,5 Histidine 72 58 80,6 3,1 Arginine 6 6 100,0 0,3 Total 2606 1869

EXEMPLE 13

D'après l'Exemple 12, on peut obtenir un mélange d'aminoacides ayant la composition centésimale suivante après passage sur IRA 400:

TABLEAU XIX

(Exemple 13)

La teneur en valine + isoleucine + leucine de ces mélanges est de 28,15 % par rapport aux autres aminoacides et Acide aspartique 2,55 % ( 2,2 2,8) Thréonine 5,26 % ( 4,7 5,8) Sérine 6,72 % ( 6,0 7,4) Acide glutamique 11, 50 % ( 10,3 12,7) Proline 17,50 % ( 15,7 19,3) Glycine 2,99 % ( 2,6 3,3) Alanine 5,48 % ( 4,9 6,1) Valine 9,49 % ( 8,5 10,5) Méthionine 3,01 % ( 2, 7 3,3) Isoleucine 6,11 % ( 5,4 6,7) Leucine 12,55 % ( 11,2 13,8) Lysine 13,49 % ( 12,1 14,8) Histidine 3,10 % ( 2,7 3,4) Arginine ( O 8,3) elle est par suite propre à constituer la base pour obtenir des mélanges à teneur élevée an aminoacides à chaîne ramifiée, suivant les études et les expériences déjà signalées dans les Exemples 10-11 La commodité économique d'utilisation de ce mélange est analogue à celle qui a déjà

été signalée dans l'Exemple 9.

En ajoutant par exemple, mais non limitativement, à 100 g du mélange mentionné ci-dessus, 3 g de méthionine, 6 g de phénylalanine, 9 g d'arginine et 1,8 g de tryptophane, on obtient la composition suivante en aminoacides du mélange réélabré:

TABLEAU XX

(Exemple 13)

Acide aspartique 2,1 % ( 1,8 2,3) Thréonine 4,4 % ( 3,9 4,9) Sérine 5,6 % ( 5,0 6,2) Acide glutamique 9,6 % ( 8,6 10,6) Proline 14,6 % ( 13,1 16,1) Glycine 2,5 % ( 2,2 2,8) Alanine 4,6 % ( 4,1 5,1) Valine 7,9 % ( 7,1 8,7) Méthionine 5,0 % ( 4,5 5,5) Isoleucine 5,1 % ( 4,5 5,6) Leucine 10,5 % ( 9,4 11,6) Phénylalanine 5,0 % ( 4,5 5,5) Lysine 11,3 % ( 10,1 12,5) Histidine 2,6 % ( 2,3 2,9) Arginine 7,5 % ( 6,7 8,2) Tryptophane 1,5 % ( 1,3 1,6) La teneur en électrolytes dans 100 g du mélange élaboré peut être nulle, lorsque dans la préparation du mélange de base, on se trouve en présence de quantités d'arginine supérieures à 3 % en compositions centésimales dbminoacides ou inférieures à 15 méq de cations/g d'aminoacides si dans le mélange il y a absence d'arginine La composition en aminoacides du mélange élaboré, la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée ( 23,5 % par rapport au total), la présence éventuelle de petites quantités de cations sont parfaitement propres aux applications de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ce type de formule peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier aux patients présentant des

traumatismes et des infections.

Le tableau suivant résume les paramètres fondamentaux de cette formulation:

TABLEAU XXI

(Exemple 13)

Pour les significations XII de ( 1), ( 2), ( 3), ( 4) et ( 5), voir le Tableau

EXEMPLE 14

D'après l'Exemple 12, on peut obtenir un mélange d'aminoacides ayant la composition centésimale suivante après passage sur IRA 400: Comp en % après ( 1) ( 2) ( 3) ( 4) ( 5) intégrat. Acide aspartique 2,1 0,221 Thréonine 4,4 0,517 4,4 307 87 Sérine 5,6 0,746 Acide glutamique 9,6 0, 914 Proline 14,6 1,777 Glycine 2,5 0,466 Alanine -4,6 0,723 Valine 7,9 0, 945 7,9 7,9 550 156 Méthionine 5,0 0,469 5,0 348 99 Isoleucine 5,1 0,545 5,1 5,1 355 101 Leucine 10,5 1,121 10,5 10,5 -731 207 Tyrosine Phénylalanine 5,0 0,424 5,0 348 99 Tryptophane 1,5 0,206 1,5 104 29 Lysine 11,3 2,165 11,3 787 223 Histidine 2,6 0,704 Arginine 7,5 2,412

14,355 50,7 23,5 3530

TABLEAU XXII

(Exemple 14)

En ce qui concerne la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée et àcommodité économique, s'appliquent les mêmes considérations que celles qui sont mentionnées dans l'Exemple 13. En ajoutant, par exemple, mais non limitativement, à 100 g du mélange mentionné ci-dessus, 1 g de méthionine, 0,8 g de tyrosine, 3,4 g de phénylalanine, 5 g d'arginine et 1,9 g de tryptophane, on obtient la composition suivante en aminoacides du mélange réélaboré: Acide aspartique 2,55 % ( 2,2 2,8) Thréonine 5,26 % ( 4,7 5,8) Sérine 6,72 % ( 6,0 7,4) Acide glutamique 11,50 % ( 10,3 12,7) Proline 17,50 % ( 15,7 19,3) Glycine 2,99 % ( 2,6 3,3) Alanine 5,48 % ( 4, 9 6,1) Valine 9,49 % ( 8,5 10,5) Méthionine 3,01 % ( 2,7 3,3) Isoleucine 6,11 % ( 5,4 6,7) Leucine 12,55 % ( 11,2 13,8) Lysine 13,49 % ( 12,1 14,8) Histidine 3,10 % ( 2,7 3,4) Arginine ( O 5,0)

TABLEAU XXIII

(Exemple 14)

Acide aspartique 2,3 % ( 2,0 2,5) Thréonine 4,7 % ( 4,2 5,2) Sérine 6,0 % ( 5,4 6,6) Acide glutamique 10,3 % ( 9,2 11,4) Proline 15,6 % ( 14,0 17,2) Glycine 2,7 % ( 2,4 3,0) Alanine 4,9 % ( 4,4 5,4) Valine 8,5 % ( 7,6 9,4) Méthionine 3,6 % ( 3,2 4,0) Isoleucine 5,5 % ( 4,9 6,1) Leucine 11,2 % ( 10,0 12,3) Tyrosine 0,7 % ( 0,6 0,8) Phénylalanine 3,0 % ( 2,7 3,3) Lysine 12,0 % ( 10,8 13,2) Histidine 2,8 % ( 2,5 3,1) Arginine 4,5 % ( 4, 0 5,0) Tryptophane 1,7 % ( 1,5 1,9) La teneur en électrolytes dans 100 g du mélange élaboré peut être nulle, lorsque dans la préparation du mélange de base on se trouve en présence de quantités d'arginine supérieures à 3 % en composition centésimale

d'aminoacides, ou inférieures à 15 méq de cations/g d'amino-

acides si, dans le mélange final, on note une absence d'arginine La composition en aminoacides du mélange élaboré, la teneur en aminoacides à chaîne ramifiée ( 25,2 % par rapport au total), la présence éventuelle de petites quantités de cations sont parfaitement propres aux applications de cette formulation dans tous les cas dans lesquels ce type de formule peut apporter des améliorations à l'état général des patients, en particulier aux patients présentant des traumatismes et des infections Le Tableau XXIV rassemble les paramètres fondamentaux de cette formulation:

TABLEAU XXIV

(Exemple 14)

Comp en % après ( 1) ( 2) ( 3) ( 4) ( 5) intégrat. Acide aspartique2,3 0, 242 Thréonine 4,7 0,552 4,7 337 94 Sérine 6,0 0,799 Acide glutamique 10,3 0,981 Proline 15,6 1,899 Glycine 2,7 0,504 Alanine 4,9 0,770 Valine 8,5 1, 017 8,5 8,5 610 169 Méthionine 3,6 0,338 3,6 258 72 Isoleucine 5,5 0,587 5,5 5,5 395 110 Leucine 11,2 1,196 11,2 11,2 804 223 Tyrosine 0,7 0,054 Phénylalanine 3,0 0,254 3,0 215 60 Tryptophane 1,7 0,233 1,7 122 34 Lysine 12,0 2,299 12,0 861 239 Histidine 2,8 0,759 Arginine 4,5 1,447

13,931 50,2 25,2 3702

Pour les significations XII de ( 1), ( 2), ( 3), ( 4) et ( 5) voir le Tableau

EXEMPLE 15

Les conditions opératoires sont identiques à celles mentionnées dans l'Exemple 8, à la seule exception de la concentration et de la composition des-aminoacides de la

solution de charge (voir Tableau N XXV).

La quantité d'aminoacides chargée dans la colonne est de 1271,3 g et les teneurs enacide aspartique et en

acide glutamique sont respectivement de 79,4 g et 275,0 g.

Comme on peut le remarquer dans le Tableau XXV, dans cet exemple la solution d'alimentation, bien qu'elle soit toujours dérivée de la purification d'aminoacides provenant de la caséine, contient de la tyrosine, phénylalanine, arginine qui ne sont pas présentes dans les solutions utilisées dans les autres exemples, si bien qu'il est possible de procéder à l'élimination de ces trois aminoacides par

d'autres systèmes.

Dans le Tableau XXVI, on mentionne les récupérations et les bilans par rapport aux aminoacides chargés dans la colonne Dans les conditions opératoires utilisées dans l'Exemple 15, la tyrosine et la phénylalanine sont complètement adsorbées à l'égalité de l'acide aspartique et de l'acide glutamique, tandis que l'arginine est élué à partir de la résine conjointement avec d'autres aminoacides De la même façon que celle suivie dans les Exemples 9, 10, 11, 13 et 14, on peut obtenir des formulations adaptées à la nutrition

parentérale et entérique.

TABLEAU XXV

(Exemple 15)

g de AA/l de g de AA/100 g solution de mélange ammoniacale d'aminoacides Acide aspartique 3,2 g 6,24 Thréonine 1,74 g 3,39 Sérine 2,06 g 4,02 Acide glutamique 11,09 g 21,63 Proline 6,12 g 11,94 Glycine 1,20 g 2,34 Alanine 2,05 g 4,00 Valine 3,66 g 7,14 Méthionine 1,46 g 2,85 Isoleucine 2,67 g 5,21 Leucine 5,22 g 10,18 Tyrosine 1,5 g 2,93 Phénylalanine 1,5 g 2,93 Lysine 5,03 g 9,81 Histidine 1,51 g 2,95 Arginine 1,25 g 2,44 Aminoacides totaux 51,26 g

TABLEAU XXVI

(Exemple 15)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total

EXEMPLE 16

La colonne, le type de résine, le volume et la forme ionique sont identiques à ceux mentionnés dans l'Exemple 1 La vitesse de passage est maintenue à 1 volume de solution/ heure/volume de résine La solution d'alimentation est

constituée par un mélange d'aminoacides ayant les caractéris-

tiques mentionnées dans le Tableau XXVII, provenant d'une hydrolyse de farine de soja après des traitements de

-purification convenables.

AA chargés AA récu Récupé % des AA sur la pérés ration individuel colonne % dans 100 g g g de mélange

79,4 O 0 -

43,2 41,6 96,2 5,6

51,1 48,8 95,5 6,5

275,0 O O -

151,8 144,2 95,0 19,4

29,8 28,5 95,7 3,8

,8 50,4 99,2 6,8

,8 81,7 90,0 11,0

36,2 20,5 56,5 2,7

66,2 49,8 75,2 6,7

129,5 96,9 74,8 13,0

37,2 0 O -

37,2 O O -

124,7 123,8 99,3 16,6

37,4 27,7 74 3,7

31,0 30,7 99,0 4,1

1271,3 744,6

TABLEAU XXVII

(Exemple 16))

g de AA/1 de g de AA/100 g solution de mélange ammoniacale d'aminoacides Acide aspartique 5,25 g 13,8 Thréonine 1,43 g 3,76 Sérine 2,15 g 5,65 Acide glutamique 9,31 g 24,48 Proline 2,75 g 7,23 Glycine 2,35 g 6,1 Alanine 2,73 g 7,81 Valine 2,51 g 6,6 Méthionine 0,38 g 0,99 Isoleucine 1, 76 g 4,63 Leucine 3,12 g 8,2 Tyrosine Phénylalanine Lysine 3,51 g 9,23 Histidine 0,77 g 2,02 Arginine Aminoacldes totaux 38,02-g On alimente pendant 120 minutes la colonne avec la solution ammoniacale ayant les caractéristiques mentionnées ci-dessus La quantité d'aminoacides chargée sur la colonne est de 836,44 g et les teneurs en acide aspartique et en

acide glutamique sont respectivement de 115,4 g et 204,7 g.

A la fin de la phase de charge commence la phase d'élution en utilisant une solution diluée de tampon ammoniacal-chlorure

d'ammonium (tampon A).

La phase d'élution est de 240 minutes, correspondant à un passage de 44 1 de solution ammoniacale de chlorure d'ammonium On réunit tout l'éluat Dans le Tableau XXVIII, on montre les récupérations et les bilans par rapport aux

aminoacides charges dans la colonne.

La récupération des aminoacides après élution est de 460,2 g sur 516,14 g (cette dernière valeur étant la récupération théorique calculée en soustrayant la quantité

des acides aspartique et glutamique de la quantité des amino-

acides chargée dans la colonne), correspondant à 89,2 % de la théorie La teneur en chlore dans le mélange final, exempt d'acides aspartique et glutamique, est de 0,7 % De la même façon que dans les Exemples 9, 10, 11, 13 et 14, décrits dans ce qui précède, on peut obtenir des formulations adaptées à l'application à la nutrition clinique ou également à l'application zootechnique ou vétérinaire, par des additions convenables d'aminoacides manquants, dans intermédiaire.

TABLEAU XXVIII

(Exemple 16)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total la formulation

EXEMPLE 17

Les conditions de colonne sont identiques à celles utilisées dans les exemples précédents La phase de charge des aminoacides est effectuée avec une solution de-concentration

et composition mentionnées dans le Tableau XXIX.

AA chargésAA récu Récupé % des AA sur la pérés ration individuels colonne % dans 100 g g g de mélange

,5 0 O -

31,5 31,1 98,7 6,75

47,3 42 88,8 9,13

204,8 O O -

,5 55 90,9 1195

51,7 49,2 95,1 10,7

,1 58,6 97,5 12,7

,2 50,3 91,1 10,9

8,3 3,6 43,3 0,78

*38,72 31,2 80,6 6,78

68,6 52,3 76,2 11,4

77,2 76,5 99,1 16,6

16,9 10,4 61,5 2,26

836,44 460,2

TABLEAU XXIX

(Exemple 17)

Le mélange d'aminoacides est obtenu par hydrolyses de farine de poisson, après les passages habituels de

purification et décoloration.

La quantité d'aminoacides chargée sur la colonne est de 883,6 g et les teneurs en acide aspartique et en acide glutamique sont respectivement de 73,7 g et 143,2 g La vitesse de percolation au passage est augmentée à 1, 74 volume de solution/heure/volume de résine Pendant la phase de charge, onn'observe pas la présence d'aminoacides dans la

solution passée à travers la colonne.

L'élution est effectuée avec une solution ammoniacale de chlorure d'ammonium (tampon A) La phase d'élution a une durée de 140 minutes, correspondant à

environ 44,6 1 de solution ammoniacale de chlorure d'ammonium.

On réunit tout l'éluat.

Dans le Tableau XXX, on met en évidence les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés sur la colonne La récupération des aminoacides après élution est de 585 g sur 666,7 g (qui représente la récupération

théorique calculée en soustrayant, de la quantité d'amino-

g de AA/1 de g de AA/100 g solution de mélange ammoniacale d'aminoacides Acide aspartique 3,15 g 8,34 Thréonine 1,47 g 3,89 Sérine 1,33 g 3,52 Acide glutamique 6,12 g 16,2 Proline 2,71 g 7,17 Glycine 3,56 g 9,43 Alanine 3,40 g 9,00 Valine 2,72 g 7,2 Méthionine 1,46 g 3,86 Isoleucine 1, 76 g 4,66 Leucine 3,88 g 10,27 Tyrosine Phénylalanine Lysine 5,43 g 14,3 Histidine 0,77 g 2,04 Arginine Aminoacides totaux 37,76 g acides chargés dans la colonne, les acides aspartique et glutamique), correspondant à 87, 7 % de la théorie La teneur en chlore dans le mélange final exempt d'acide aspartique

et d'acide glutamique, est de 1,4 %.

De la même façon que dans les Exemples 9, 10, 11, 13 et 14 décrits cidessus, on peut obtenir des formulations adaptées à l'application zootechnique vétérinaire et en

nutrition clinique, par des additions convenables d'amino-

acides manquants dans la formulation intermédiaire.

TABLEAU XXX

(Exemple 17)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total

EXEMPLE 18

Les conditions de colonne sont identiques à celles utilisées dans les exemples précédents La vitesse de percolation est de 1,74 volume de solution/heure/volume de résine La quantité d'aminoacides chargée sur la colonne est de 871,0 g et les teneurs en acide aspartique et en acide glutamique respectivement de 107,6 g et 147,2 g Les valeurs de concentration et de composition centésimale de la solution d'alimentation dans la phase de charge sont AA chargésAA récu Récupé % des AA sur la pérés ration individuels colonne % dans 100 g g g de mélange

73,7 O O -

34,4 32,2 93,6 5,5

31,1 28,3 90,9 4,83

143,2 0 0 -

63,4 55,1 86,9 9,41

83,3 80,2 96,2 13,7

79,6 77,3 97,1 13,2

63,6 56 88 9,57

34,2 15,9 46,5 2,72

41,2 32,4 78,6 5,54

,8 69,9 76,9 11,9

127,1 125,8 98,9 21,5

18,0 11,9 66,1 2,03

883,6 585,0

mentionnées dans le Tableau XXXI ci-après La solution utilisée pour l'élution est le tampon C. La phase d'élution par-la solution ammoniacale d'acétate d'ammonium a une durée de 195 minutes, correspondant à un passage d'environ 60 1 de solution ammoniacale d'acétate d'ammonium. Dans le Tableau XXXII, on montre les récupérations et les bilans par rapport aux aminoacides chargés sur la colonne La composition en aminoacides mentionnée dans le Tableau XXXI dérive de l'hydrolyse complète, et de la purification consécutive, d'albumen d'oeuf De la même façon que dans les Exemples décrits dans ce qui précède, 9, 10, 11, 13 et 14, on peut obtenir des formulations adaptées à la

nutrition clinique.

TABLEAU XXXI

(Exemple 18)

g de AA/1 de g de AA/100 g solution, de mélange ammoniacale d'aminoacides Acide aspartique 4,60 g 12,36 Thréonine 1,87 g 5,02 Sérine 2,69 g 7,23 Acide glutamique 6,29 g 16,90 Proline 1,69 g 4,54 Glycine 1,78 g 4,78 Alanine 3,06 g 8,22 Valine 2,83 g 7,60 Méthionine 1,87 g 5,02 isoleucine 2,28 g 6,13 Leucine 3,83 g 10,29 Tyrosine Phénylalanine Lysine 3,29 g 8, 84 g Histidine 1,14 g 3,06 Arginine Aminoacides totaux 37,22 g

250 ? 866

TABLEAU XXXII

(Exemple 18)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique Proline 1 O Glycine Alanine Valine M 6thionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total

EXEMPLE 19

Les conditions de colonne sont identiques à celles utilisées dans les Exemples précédents, bien qu'elles ne soient pas limitatives La phase de charge est effectuée avec une solution ammoniacale d'aminoacides de concentration et

composition indiquées dans ce qui suit.

AA chargés AA récu Récupé % des AA sur la pérés ration individuels colonne % dans 100 g g g de mélange

107,6 O O -

43,8 42,1 96,1 7,8

62,9 59,6 94,8 11,0

147,2 O O -

39,5 37,7 95,5 6,9

41,7 40,9 95,9 7,4

71,6 71,0 99,1 13,1

66,2 60,9 92,0 11,2

43,8 23,8 54,3 4,4

53,4 41,6 77,9 -7,7

89,6 69,7 77,8 12,8

77,0 76,6 99,5 14,1

26,7 19,6 73,4 3,6

871,0 542,6

TABLEAU XXXIII

(Exemple 19)

g de AA/1 de g de AAJ 100 g solution de mélange ammoniacale d'aminoacides Acide aspartique 5,56 13,9 Thréonine 2,44 6,1 Sérine 1,96 4,9 Acide glutamique 5,52 13,8 Proline 2,76 6,9 Glycine 2,68 6,7 Alanine 2,88 7,2 Valine 3,32 8,3 Méthionine 1,12 2,8 Isoleucine 2,28 5,7 Leucine 4,08 10,2 Tyrosine 0,04 0,1 Phénylalanine 0,04 0,1 Lysine 4,32 10,8 Histidine 0,92 2,3 Arginine 0,08 0,2 Lminoacides totaux 40,00 Le mélange d'aminoacides est obtenu par hydrolyses d'un concentrat de protéines dérivé de pommes de terre après les passages habituels de purification et décoloration Les valeurs mentionnées dans le Tableau XXXIII sont indicatives et non limitatives, et peuvent présenter des écarts qui, de toute façon, permettent toujours l'identification de la source

protéique d'origine.

La vitesse de passage ou percolation, le temps de charge de la solution, les temps de traitements et la solution

éluante sont similaires à ceux mentionnés dans l'Exemple 8.

Dans le Tableau XXXIV, on indique les récupérations et bilans par rapport aux aminoacides chargés

sur la colonne.

De la même façon que dans les Exemples décrits dans ce qui précède, on peut obtenir des formulations adaptées à la nutrition clinique ou à d'autres applications, par des additions appropriées d'autres aminoacides <arginine,

tryptophane, phénylalanine, tyrosine).

TABLEAU XXXIV

(Exemple 19)

Acide aspartique Thréonine Sérine Acide glutamique 1 O Proline Glycine Alanine Valine Méthionine Isoleucine Leucine Tyrosine Phénylalanine Lysine Histidine Arginine Total

EXEMPLE 20

Les conditions de traitement sont identiques à celles

correspondant à l'Exemple 12, bien que n'étant pas limitatives.

La phase de charge est effectuée avec une solution ammoniacale d'aminoacides de concentration et composition identiques à celles de l'exemple précédent Le mélange d'aminoacides est obtenu par hydrolyse d'un concentrat de protéines dérivées de pommes de terre après les passages habituels de purification et décoloration Les valeurs indiquées dans le Tableau XXXV sont indicatives et non limitatives, et peuvent présenter des écarts qui, de toute façon, permettent toujours

l'identification de la source protéique d'origine.

La vitesse de passage ou percolation, le temps de charge de la solution, les temps de traitement sont similaires

à ceux mentionnés dans l'Exemple 12.

Dans le Tableau XXXV, on indique les récupérations

et bilans par rapport aux aminoacides chargés sur la colonne.

De la même façon que dans les exemples décrits AA chargésAA récu Récupé Comp % sur la pérés ration g de AA colonne % dans 100 g gg de mélange

139 O

61 56,7 93,0 8,9

49 45,6 93,0 7,2

138 O O

69 63,5 92,0 10,0

67 64,2 95,8 10,1

72 69,2 96,1 10,9

83 74,8 90,1 11,7

28 15,4 54,9 2,4

57 44,6 78,2 7,0

102 78,6 77,1 12,3

108 107 99,0 16,7

23 16,1 70,1 2,5

2 1,9 95,0 0,3

1000 637,6

dans ce qui précède, on peut obtenir des formulations adaptées à la nutrition clinique ou à d'autres applications, par des additions appropriées d'autres aminoacides (arginine,

tryptophane, phénylalanine, tyrosine).

TABLEAU XXXV

(Exemple 20)

AA chargés AA récu Récupé Comp % sur la pérés ration g de AA colonne % dans 100 g g g de mélange Acide aspartique 417 108,8 26,1 4,8 Thréonine 183 170,7 93,0 7,5 Sérine 147 162,0 93,1 7,1 Acide glutamique 414 137,4 33,2 6,0 Proline 207 202,8 98,0 8,9 Glycine 201 185,0 92,1 8,1 Alanine 216 209,7 97,1 9,2 Valine 249 228,8 91,9 10,1 Méthionine 84 61,1 72,8 2,7 Isoleucine 171 159 93,0 7,0 Leucine 306 281,8 92,1 12,3 Tyrosine 0,3 Phénylalanine 0,3 Lysine 324 314,3 97,0 13,8 Histidine 69 54,5 79,1 2,4 Arginine 6 6 100,0 0,03 Total 3000 2282,5

Claims (15)

REVENDICATIONS

1 Procédé pour l'élimination totale ou partielle des acides aspartique et glutamique à partir d'hydrolysats protéiques ou de mélanges d'aminoacides obtenus par divers traitements, caractériséen ce qu'il consiste à faire adsorber une solution d'aminoacides sur une résine échangeuse d'ions

de type anionique puis à effectuer l'élution.

2 Procédé selon la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on dissout la solution d'aminoacides dans un milieu ammoniacal présentant une valeur de p H supérieure à 7. 3 Procédé selon la revendication 1 ou 2, caractérisé par le fait que la résine échangeuse d'ions utilisée pour l'adsorption est une résine de type anionique

fort.

4 Procédé selon l'une quelconque des

revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la solution

d'élution des aminoacides est constituée par une solution ammoniacale. 5 Procédé selon l'une quelconque des

revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la solution

éluante est constituée par un tampon ammoniaque-chlorure d'ammonium.

6 Procédé selon l'une quelconque des revendications

1 à 3, caractérisé par le fait que la solution éluante est

constituée par un tampon ammoniaque-acétate d'ammonium.

7 Procédé pour l'élimination partielle des acides aspartique et glutamique à partir d'hydrolysats protéiques ou de mélanges d'aminoacides obtenus par divers traitements, caractériséen ce qu'il consiste à faire adsorber une solution d'aminoacides sur une résine échangeuse d'ions de type anionique et à la déplacer ensuite par de l'eau. 8 Procédé selon l'une quelconque des

revendications 1 à 7, caractérisé par le fait que l'on

concentre la solution éluée contenant les aminoacides jusqu'à obtention d'une suspension par évaporation de la solution aqueuse ou jusqu'à siccité au moyen d'un dessiccateur à pulvérisation ou par

d'autres systèmes.

9 Procédé selon l'une quelconque des

revendications 1-8, caractérisé par le fait que la substance

de départ est constituée par un mélange d'aminoacides obtenus par hydrolyse chimique et/ou enzymatique, de protéines d'origine naturelle, animale ou végétale. Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que la protéine d'origine naturelle est la caséine. 11 Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que la protéine d'origine naturelle est choisie parmi la farine de poisson, la farine de soja, la farine de sang, les plumes, la gélatine, la peau des bovins, torula, la laine, un résidu protéique d'extrait hépatique, l'albumine, des extraits d'organes, des produits contenant des protéines obtenus par isolement ou enrichissement de la partie protéique par traitement de substances d'origine naturelle tant animale que végétale, tels que des concentrats de protéines de pommes de terre, des concentrats de protéines de gluten, de mais ou blé de Turquie, des concentrais de

protéines du lactosérum et analogues.

12 Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que la protéine utilisée est -constituée par des rebuts ou déchets d'origine industrielle et/ou agricole

présentant une teneur appropriée en protéines.

13 Procédé selon la revendication 9, caractérisé par le fait que le mélange d'aminoacides provient de

fermentations industrielles.

14 Formulations d'aminoacides exemptes d'acide aspartique et d'acide glutamique, obtenues par le procédé

selon l'une quelconque des revendications précédentes.

Formulations d'aminoacides à teneur en acides aspartique et glutamique inférieure à la teneur-correspondante dans les protéines de départ, obtenues par le procédé selon

l'une quelconque des revendications précédentes.

16 Formulations d'aminoacides adaptées à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisées par le fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon la revendication 14 ou 15, auxquelles sont additionnés

d'autres aminoacides.

17 Formulations d'aminoacides adaptées à l'utilisation en nutrition clinique de patients souffrant d'hépatopathies et d'enfants prématurés, caractérisées par le fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon la revendication 14 ou 15, auxquelles ont été additionnés

d'autres aminoacides.

18 Procédé pour l'élimination ou la diminution de l'acide aspartique, l'acide glutamique, la tyrosine, la phénylalanine, dans des hydrolysats protéiques ou d 6 smélanges d'aminoacides provenant de traitements divers, caractérisé par le fait que l'on opère conformément à l'une quelconque des

revendications 1 à 13.

19 Formulations d'aminoacides exemptes de, ou à teneur réduite en, acide aspartique, acide glutamique, phénylalanine et tyrosine, obtenues par le procédé selon la

revendication 18.

Formulations d'aminoacides adaptées à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisées par le fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon la

revendication 18 auxquelles ont été additionnés d'autres amino-

acides. 21 Formulations d'aminoacides adaptées à l'utilisation en nutrition clinique de patients souffrant d'hépatopathies et d'enfants prématurés, caractérisées par le fait qu'elles sont obtenues à partir des formulations selon la revendication 18 auxquelles ont été ajoutés d'autres aminoacides. 22 Formulation d'aminoacides exempte d'acide aspartique et d'acide glutamique, obtenue par le procédé selon

l'une quelconque des revendications précédentes, en utilisant

la caséine comme substance de départ, et ayant la composition moyenne suivante Thréonine 6,5 % ( 5,8 7,1)

Sérine 8,3 % ( 7,5 9,1) -

Proline 22,3 % ( 20,1 24,5) Glycine 3,8 % ( 3,4 4,2) Alanine 7,0 % ( 6,3 7,7) Valine 10,9 % ( 9,8 12,0) Méthionine 2,2 % ( 2 2,4) Isoleucine 6,2 % ( 5,6 6,8) Leucine 13,2 % ( 11,9 14,5) Lysine 17,2 % ( 15,5 18,9) Histidine 2,4 % ( 2,2 2,6) 23 Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique de patients souffrant d'hépatopathie, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la revendication 22 par addition d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante: Thréonine 5,8 % ( 5,2 6,4) Sérine 7,5 % ( 6, 7 8,2) Proline 20,0 % ( 18,0 22,0) Glycine 3,4 % ( 3,1 3,7) Alanine 6,3 % ( 5,7 6,9) Valine 9,8 % ( 8,8 10,8) Méthionine 2,0 % ( 1,8 2,2) Isoleucine 5,6 % ( 5,0 6,2) Leucine 11,9 % ( 10,7 13,1) Phénylalanine 1,4 % ( 1,3 1,5) Lysine 15,5 % ( 14,0 17,0) Histidine -2,2 % ( 2,0 2,4) Arginine 7,7 % ( 6,9 8,5) Tryptophane 0,9 % ( 0,8 1,0) 24 Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la revendication 22 par addition d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante Thréonine 5,7 % ( 5,1 6,3) Sérine 7,3 % ( 6, 6 8,0) Proline 19,6 % ( 17,6 21,6) Glycine 3,3 % ( 3,0 3,6) Alanine 6,1 % ( 5,5 6,7) Valine 9,6 % ( 8,6 10,6) Méthionine 2,8 % ( 2,5 3,1) Isoleucine 5,4 % ( 4,9 5,9) Leucine 11,6 % ( 10,4 12,8) Phénylalanine 5,3 % ( 4,8 5,8) Lysine 15,1 % ( 13,6 16,6) Histidine 2,1 % ( 1,9 2,3) Arginine 4,4 % ( 4,0 4,8) Tryptophane 1,7 % ( 1,5 1,9) Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la revendication 22, par addition d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante: Thréonine 5,8 % ( 5,2 6,4) Sérine 7,4 % ( 6, 6 8,2) Proline 19,9 % ( 17,9 21,9) Glycine 3,4 % ( 3,0 2,7) Alanine 6,2 % ( 5,5 6,9) Valine 9,7 % ( 8,7 10,7) Méthionine 2,8 % ( 2,5 3,1) Isoleucine 5,5 % ( 4,9 6,1) Leucine 11,8 % ( 10,6 13,0) Tyrosine 0,7 % ( 0,6 0,8) Phénylalanine 3,0 % ( 2,7 3,3) Tryptophane 1,7 % ( 1,5 1,9) Lysine 15,3 % ( 13,7 16,9) Histidine 2,1 % ( 1,8 2,3) Arginine 4,5 % ( 4, 0 5,0) 26 Formulation d'aminoacides à teneur en acide aspartique et en acide glutamique inférieure à celle présente dans la protéine de départ, obtenue par le procédé selon l'une

quelconque des revendications précédentes, à partir de la

caséine, et ayant la composition moyenne suivante: Acide aspartique 2,55 % ( 2,2 2,8) Thréonine 5,26 % ( 4,7 5,8) Sérine 6,72 % ( 6,0 7,4) Acide glutamique 11,50 % ( 10,3 12,7) Proline 17,50 % ( 15,7 19,3) Glycine 2,99 % ( 2,6 3,3) Alanine 5,48 % ( 4,9 6,1) / Valine 9,49 % ( 8,5 10,5) Méthionine 3,01 % ( 2,7 3,3) Isoleucine 6,11 % ( 5,4 6,7) Leucine 12,55 % ( 11,2 13,8) Lysine 13,49 % ( 12,1 14,8) Histidine 3,10 % ( 2,7 3,4) Arginine -( O 8,3) 27 Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation suivant la revendication 26 par addition d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante Acide aspartique 2,1 % ( 1,8 2,3) Thréonine 4,4 % ( 3,9 4,9) Sérine 5,6 % ( 5,0 6,2) Acide glutamique 9,6 % ( 8,6 10,6) Proline 14,6 % ( 13,1 16,1) Glycine 2,5 % ( 2,2 2,8) Alanine 4,6 % ( 4,1 5,1) Valine 7,9 % ( 7,1 8,7) Méthionine 5,0 % ( 4,5 5,5) Isoleucine 5,1 % ( 4,5 5,6) Leucine 10,5 % ( 9,4 11,6) Phénylalanine 5,0 % ( 4,5 5,5) Lysine 11,3 % ( 10,1 12,5) Histidine 2,6 % ( 2,3 2,9) Arginine 7,5 % ( 6,7 8,2) Tryptophane 1,5 % ( 1,3 1,6) 28 Formulation d'aminoacides adaptée à l'utilisation en nutrition clinique, caractérisée par le fait qu'elle est obtenue à partir de la formulation selon la revendication 26 additionnée d'autres aminoacides, et ayant la composition moyenne suivante Acide aspartique 2, 3 % ( 2,0 2,5) Thréonine 4,7 % ( 4,2 5,2) Sérine 6,0 % ( 5,4 6,6) Acide glutamique 10,3 % ( 9,2 11,4) Proline 15,6 % ( 14,0 17,2) Glycine 2,7 % ( 2,4 3,0) Alanine 4,9 % ( 4,4 5,4) Valine 8,5 % ( 7,6 9,4) Méthionine 3,6 % ( 3,2 4,0) Isoleucine 5,5 % ( 4,9 6,1) Leucine 11,2 % ( 10,0 12,3) Tyrosine 0,7 % ( 0,6 0,8) Phénylalanine 3,0 % ( 2,

7 3,3) Lysine 12,0 % ( 10,8 13,2) Histidine 2,8 % ( 2,5 3,1) Arginine 4,5 % ( 4,0 5,0) Tryptophane 1,7 % ( 1,5 1,9) 29 Formulation d'aminoacides exempte d'acide aspartique et d'acide glutamique, obtenue par le procédé selon

l'une quelconque des revendications précédentes, à partir d'un

concentrat de protéines de pommes de terre, et ayant la composition en pourcentage moyenne suivante: Thréonine 7,12 10,68 Sérine 5,76 8,64 Proline 8,0 12,0 Glycine 8,1 12,1 Alanine 8,72 13,1 Valine 9,36 14,04 Méthionine 1,92 2,88 Isoleucine 5,6 8,4 Leucine 9,84 14,76 Lysine 13,36 20,04 Histidine 2,0 3 Arginine O 0,4 30 Formulation d'aminoacides à teneur réduite en acide aspartique et en acide glutamique, obtenue par le

procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes,

à partir d'un concentrat de protéines de pommes de terre, et ayant la composition en pourcentage moyenne suivante: Acide aspartique 3,84 5,76 Thréonine 6,0 9,0 Sérine 5,7 8,52 Acide glutamique 4,8 7,2 Proline 7,12 10,7 Glycine 6,5 9,72 Alanine 7,36 11,0 Valine 8,1 12,1 Méthionine 2,16 3, 24 Isoleucine 5,6 8,4 Leucine 9,84 14,8 Lysine 11,04 16,6 Histidine 1,92 2,88 Arginine O 0,4