FI99113B - Peptidialkoholien kiinteän faasin synteesi - Google Patents

Description

99113

PEPTIDIALKOHOLIEN KIINTEÄN FAASIN SYNTEESI - SYNTES AV PEPTIDALKOHOLERS FASTA FAS

Esillä oleva keksintö koskee menetelmää peptidialkoholien, jossa peptidiketjun C-terminaalipäässä 5 on kaksi alkoholiryhmää ja yksi tioliryhmä, valmistamiseksi kiinteässä faasissa.

Olemme kehittäneet erityisen sopivan menetelmän peptidialkoholien valmistamiseksi, joissa C-terminaalipää peptidiketjussa sisältää kaksi alkoholi-10 ryhmää tai yhden alkoholiryhmän ja yhden tioliryhmän. Menetelmä on erityisen sopiva peptidialkoholien valmistamiseksi, jotka sisältävät C-terminaalisen treoni-noli-, serinoli- tai kystinoliradikaalin.

Esimerkkeihin sopivista yhdisteistä kuuluvat 15 muutamat tässä kuvatut somatostatiiniyhdisteet.

Kiinteän faasin peptidisynteesi·· ovat osoittautuneet erityisen nopeiksi ja edullisiksi menetelmiksi peptidien valmistamiseksi ja ovat tämän vuoksi tulleet yleisesti konventionaalisiksi menetelmiksi.

20 Kuten on tunnettua, ensiksi aminohappo sido taan karboksyyliryhmästään, muodostaen esterin tai amidiryhmän, liukenemattoman synteettisen hartsin hyd-roksyyliryhmän tai aminoryhmän kanssa, sitten muita . .· aminohappoja lisätään tähän halutussa järjestyksessä .···. 25 ja lopuksi täydellinen polypeptidi irrotetaan kantaja- hartsista.

/1;1 Tämä synteesi toimii ilman ongelmia normaa- : leiliä polypeptideillä, joilla on C-terminaalisia ami- .1 ‘ nohappoja. Kuitenkin polypeptidialkoholit, joissa C- 30 päässä on aminoalkoholi aminohapon sijasta, eivät muodosta helposti sidosta kantajahartsien kanssa, joissa on OH- tai NHz-ryhmiä ja/tai eivät niin helposti irtoa . .·. erilleen kun synteesi on päättynyt.

• · · .1:· Seuraavat menetelmät on aikaisemmin esitetty ’· · 35 mahdollisina kiinteän faasin menetelminä peptidialko holien valmistamiseksi: • ψ • · m · • · · » · · • · · • » 2 99113 a) vastaavan polypeptidin, joka sisältää aminohapon C-päässä, tavanomainen valmistus (hartsin, jossa on 0H-ryhmiä, esterinä) ja sitä seuraava irrottaminen pelkistyksellä, käyttäen boorihydridejä, karboksyyliryh- 5 män tullessa samanaikaisesti muunnetuksi alkoholifunk-tioksi (US-patentti 4 254 023).

b) terminaalisen aminoalkoholin liittäminen eetterinä hydroksimetyylihartsiin käyttäen karbonyylidi- imidatsolia, ja lopuksi, peptidisynteesin jälkeen, 10 irrottaminen käyttäen HCl/TFA:a tai HBr/TFA:a (Kun-hwa Hsieh and G.R.Marshall, ACS National Meeting, New Orleans, 21-25.3.1977).

Nämä menetelmät vaativat kuitenkin voimakkaita olosuhteita irrottamiselle.

15 Olemme havainneet, että peptidin irrottaminen hartsista, kun C-terminaalinen peptidialkoholi muodostetaan samanaikaisesti, suoritetaan miedoissa olosuhteissa, jos C-terminaalinen aminoalkoholi on liittynyt hartsiin asetaalisidoksella.

20 Keksinnön mukaisesti peptidialkoholi, jonka peptidiketjun C-teuninaalipäässä on kaksi alkoholiryh- mää tai alkoholiryhmä ja yksi tioliryhmä, valmistetaan ... peptidialkoholin asetaalin ja formyylifenyyliryhmiä *** omaavan polymeerihartsin happohydrolyysillä. Tätä tar- • » 25 koitetaan keksinnön mukaisella synteesillä.

• · · ’ Reaktio voidaan havainnollistaa kaaviomaises- t»· ti seuraavassa: • · • · · • » · •:v k 30 _ /—v^ciTX_C\ h Φζ-<0? \ CH-NH-CO-Y --—» \_/ o-chJ" (ir)

• ·’· ^ /—\ CHR “kH

I" —\Q/ 1 1-<o-nh-ch-ch2oh '•I. 35 ctrl • · • m • · • · · · » • · · 3 99113 jossa (?) on liukenematon synteettinen hartsitähde; Z on suora sidos tai tähde, joka liittää hartsin (asetalisoituun) formyylifenyyliryhmään; X on O tai S; 5 Rx on vety tai metyyli, ja Y on peptidialkoholitähde, jossa voi olla suojaryhmiä; jolloin valinnaisesti asetalisoitu CHO-ryhmä sijaitsee m-tai p-asemassa radikaaliin Z nähden. Selvyyden vuoksi on edellä olevan kaavion kaavoissa I ja II vain 10 yksi substituutioryhmä esitetty hartsissa; on kuitenkin selvää, että lukuisia tällaisia ryhmiä on liittyneenä hartsipolymeerimolekyyliin. Peptidialkoholin irrotus hartsista asetaaliryhmär. hydrolyysillä suoritetaan, kuten edellä on mainittu, happamissa olosuh-15 teissä, esim. laimennetulla trifluoroetikkahapolla.

Hydrolyysi voidaan toteuttaa huoneenlämpötilassa.

Jos Z kaavassa Ic on suora sidos, asetaali-ryhmiä kantavat fenyyliradikaalit on sidottu suoraan sidottu polymeeritähteeseen ja kuuluvat polymeerin.

20 Esimerkkejä tällaisista kaavan Ir yhdisteistä ovat formuloidun polystyreenihartsin asetaalit (kaavassa Ir, (P) on silloin polyetyleeniketju).

... Jos Z on tähde, tällöin se sisältää ryhmän, **; joka on tulos reaktiivisen ryhmän kanssa, joka on suo- ’·” 25 raan tai epäsuoraan sidottu polymeeriin, reaktiosta » · » ’·’ toisen reaktiivisen ryhmän, joka on suoraan tai epä- « · · suoraan sidottu (asetalisoitu) formyylifenyyliryhmään.

» · ;.· ' Radikaalia Z voidaan kuvata esim. seuraavalla kaavalla :Y IIIr: 30 -(D)p-Q1-Q2-(E)q- IIIr jossa

Qx = polymeeriin sidotun reaktiivisen ryhmän tähde, • · *·’ . 35 Q2 formyylifenyyliryhmään (asetalisoitu) sidottu ··* reaktiivisen ryhmän tähde, D = ryhmän Qx polymeeriin liittävä tähde, » · · • · · IV* • · · • · 4 99113 E - ryhmän Q2 formyylifenyyliryhmään (asetalisoitu) liittävä tähde, p ja q ovat toisistaan riippumatta 0 tai 1.

Ryhmä Qi~Q2 on edullisesti esteri tai amidi-5 ryhmä, erityisesti karbonamidiryhmä. Qx on edullisesti NH ja Q2 en edullisesti CO.

D ja E ovat, toisistaan riippumatta, esim. 1 - 5 C-atomia käsittäviä alkyleeni- tai alkyleenioksi-radikaaleja. Esimerkkeinä sellaisista kaavan Ir mukai-10 sista yhdisteistä, jossa Z on kaavan Illr mukainen tähde, ovat yhdisteet, joissa (P^D-Q! on aminometyloi-dun polystyreenin tähde, ja tähde R1 ^ χ<β

15 /T^Vca ^CH-NH-CO-Y

V1-\2/ on kaavan IVr mukainen tähde 20 ^ 1'c\

-C-CH- (0)-(5¾^ CH-NH-CO-Y

öi ^ • · » .ossa • IVi 25 R 1 vety tai metyyli ja il. m = 0 tai 1, • '1·· jolloin asetaaliryhmä jälleen sijaitsee m- tai p- asemassa.

Tässä tapauksessa Z on siten 30

-CH2-NH-CO-CH-(O)m-R

. .· ja (£)on polystyreeni.

V.l Radikaali IVr on edullisesti 35 ^ Xx-c«"i -C0-Ca,-0-vO)-CH ^CH-NH-CO-Y 2 W \0-CH, • 2 • 1 • 1 • · • · · • · m 5 99113

Aminometyloidun pclystyreenin sijasta voidaan käyttää myös muita polymeerejä, erityisesti sellaisia, joissa on vapaita NH2-ryhmiä, esim. polyakryyliamide-5 ja, joissa on aminoetyyliryhmiä.

Kuten edellä on mainittu, asetalisoitu for-myylifenyyliryhmä on edullisesti sidottu polymeeriin amidisidoksella. Tämä varmistaa sen, että asetalisoi-dun formyylifenyyliradikaalin kiinnittyminen hartsiin 10 polypeptidin synteesin aikana ja irrotuksen aikana on stabiili ja että irtoaminen tapahtuu halutussa asetaa-lisidoksessa siten, että toisaalta peptidialkoholi muodostuu ja toisaalta formyylifenyyliradikaali pysyy hartsissa.

15 Haluttaessa peptidialkoholi voidaan liittää

kauemmaksi hartsista liittämällä ns. väliosia polymeerin reaktiivisten ryhmien (erityisesti aminoryhmien) ja asetalisoidun formyylifenyylijohdannaisen reaktiivisten ryhmien (erityisesti karboksyyliryhmien) vä-20 liin. Polypeptidialkoholien tietyissä reaktioissa tämä voi olla edullista ennen irrottamista (esim. kysteii--·" niradikaalien hapetus) . Tässä tapauksessa radikaali D

tai E kaavassa Hr sisältää lisäksi väliosan ja tai : Q2 on väliosan reaktiivinen radikaali.

” : 25 Väliosana voidaan käyttää esim. Ω- aminokarboksyylihappoa, kuten ε-aminokaproiinihappoa.

Erityistapauksessa, käytettäessä aminomety-loitua polystyreeniä, kaavan IVr mukaista radikaalia ja ε-aminokaproiinihappoa väliosana, Z on 30

-ch2-nh-co-(ch2)5-NH-CO-CH-(O)m-;·; R

Kaavan Ir yhdisteitä voidaan valmistaa kiin-... : teän faasin teknologiassa tunnetuilla menetelmillä 35 lähtien yhdisteestä, jolla on kaava Vr • · 99113 6

-,Χ-CH

r-vcs ^ch-mh-a ®·ι<σ) x o< 5 jossa A on aminofunktion suojaryhmä ja asetaaliryhmä on m- tai p-asemassa radikaalissa Z. Tämän vuoksi irrotetaan ensin suojaryhmä A, ja sitten vapaan amino-ryhmän annetaan reagoida seuraavan N-suojatun aminoha-10 pon kanssa jne., kunnes kaikki aminohapot on lisätty hartsiin järjestyksessä, joka vastaa haluttua peptidi-alkoholia .

Aminosuojaryhmien, jotka valitaan käytetyille aminohapoille tai aminoalkoholille, täytyy olla sel-15 laisia, jotka irtoavat ei-happamissa olosuhteissa, koska happamissa olosuhteissa tapahtuu asetaaliryhmän hydrolyysi. CF3CO- tai FMOC-ryhmää (9- fluorenyylimetyylioksikarbonyyli) voidaan käyttää esim. tällaisena aminosuojaryhmänä. Nämä suojaryhmät 20 lohkaistaan emäksisessä väliaineessa peptidikemiassa tunnetulla tavalla.

• Vain sivuketjuissa olevat suojaryhmät ja vii- - meisen lisätyn aminohapon aminosuojaryhmä voivaa olla : happolabiileja, ja sitten ne samanaikaisesti irrote- ; 25 taan hartsista peptidialkoholin regeneraation yhtey dessä.

' Edullisia suojaryhmiä ovat Boc-ryhmät.

Emäksinä käytetään edullisesti KOH tai pipe-ridiiniä tai NaBH*.

30 Peptidiketjun muodostaminen voidaan toteuttaa konventionaaliseen tapaan peptidiyksiköstä, jossa on vapaita aminoryhmiä, ja aminohaposta, jossa on vapaita tai aktivoituja karboksyyliryhmiä.

Reaktio voidaan toteuttaa esim. hydroksibent-35 sotriatsolin ja disykloheksyylikarbodi-imidin lisäyk- | sellä. Kaavan Vr mukaisia yhdisteitä voidaan valmistaa .. esim.

• » · 7 99113 a) antamalla aldehydiryhmää kantavan hartsin, jolla on kaava IIr 5 Θ-ζ-φο» "r jossa CHO-ryhmä on m- tai p-asemassa Z-substituenttiin nähden, reagoida N-suojatun aminoalkoholin kanssa, jolla on kaava

10 HX-CHRj-CH (NHA) -CH2OH

valinnaisesti aktivoidussa muodossa, tai b) antamalla hartsin, jolla on kaava

@-(0)-SL

15 P

reagoida yhdisteen kanssa, jolla on kaava VIr R, 20 / 1 x-CH VIr CH^ ^ CH—ΝΗ-Λ 7: ο;-(Ζ.·φ ^ o-cef M» • · * • 25 jossa asetaaliryhmä on m- tai p-asemassa Q'i -(E)q-ryhmään nähden ja 9 9 · ·.·. Q'x ja Q'2 ovat kaksi reaktiivista ryhmää, jotka rea goivat yhdessä Qx - Q2-sillan muodostamiseksi.

Menetelmän a) asetalisaatio voidaan toteuttaa 30 katalyyttinä olevan hapon läsnäollessa. Sopiviin happoihin kuuluu p-tolueenisulfonihappo ja p-trif luorometyylisulf onihappo.

• · ·

Haluttaessa trimetyylisilyyliryhmää voidaan .. · käyttää suojaryhmänä vapaalle alkoholille.

mmmZ 35 Esterointimenetelmä b) voidaan toteuttaa hy- . . vin miedoissa olosuhteissa esim. karboksyylihappojoh- , · • dannaisen ja OH- tai NH2-ryhmää kantavan polymeerin • · · * • · • · 8 99113 reaktiolla.

Kaavan VIr mukaiset yhdisteet voidaan valmistaa yhdisteen, jolla on kaava 5 <,2‘(0)qH(i)' CH°

ja yhdisteen, jolla on kaava HX-CHRi-CH (NHA) -CH2OH

asetylaation avulla. Asetalisaatio voidaan toteuttaa 10 kuten menetelmässä a).

Kokoamisen ja peptidialkoholin hartsista irrottamisen aikana voidaan toteuttaa muita reaktioita, esim. poistaa suojaryhmiä, esim. S-suojaryhmiä, tai hapettaa kysteiiniradikaaleja.

15 Täilais' . reaktiot voidaan toteuttaa peptidi alkoholin irrottamisen jälkeen nestefaasissa.

Keksinnön mukaisen synteesin mukaisesti voidaan helposti valmistaa farmakologisesti aktiivisia ja muita peptidejä, joiden C-pää sisältää kaksi alkoholi-20 ryhmää tai alkoholi- ja tioliryhmän.

Seuraavissa esimerkeissä kaikki lämpötilat on ··· annettu Celsius-asteina ja [a]20° arvot ovat korjaamat- tornia. Seuraavia lyhennyksiä käytetään: ‘ AcOH = etikkahappo 25 Boc - tert.butyylioksikarbonyyli

Bu* - tert. butyyli • · *.·- DCCI * disykloheksyylikarbodi-imidi DMF = dimetyyliformamidi

Fmoc = 9-fluorenyylimetoksikarbonyyli 30 MeOH = metanoli NEt3 ** trietyyliamiini ·'· Thr-ol * treoninoliradikaali *· CH3-CH0H-CH (CH2OH) -NH- .: TFA « trifl loroetikkahappo .. · HOBT = N-hydroksibentsotriatsoli ...· 35 hpGRF * ihmisen pankreatti kasvuhormoneja vapautta- . . va tekijä HOSu =» N-hydroksisukkiini-imidi.

• · 9 99113

Kaikki peptidit saadaan polyasetaatti-polyhydraatteina, joiden peptidipitoisuus on 70 - 90 %.

HPLC-analyysit osoittavat, että peptidit si-5 säItävät vähemmän kuin 5 % muita peptidejä.

Tekijä "F", joka mainitaan seuraavissa esimerkeissä, osoittaa saatujen tuotteiden peptidipitoi-suuden (F 1 tarkoittaa 100 % peptidipitoisuutta) .

Ero 100 % [ (1-F) x 100] koostuu etikkahaposta ja ve-10 destä.

Kaikki sokerit ovat α-konfiguraatiossa ellei toisin mainita. Deoksi on desoksi.

Keksinnön mukainen synteesi voidaan toteuttaa seuraavasti: 15 Esimerkki SI: Oktreotidin valmistus { = SMS) 1) Asetaaliankkurin valmistus (p-formylifenoksi-etikkahapon N-CF3CO-treoninoliasetaali) 105 g (1.0 mmol) L-treoninolia lisätään 200 ml metanoliin, jota sekoitetaan typpivirralla. Saadaan 20 kirkas liuos. 200 ml trifluorietikkahapon metyylieste-riä 250 ml metanolissa lisätään seokseen 0 °C lämpöti-··· lassa. Seosta pidetään noin 10 °C lämpötilassa jääh- dyttämällä jäähauteella.

· · : 1,5 h jälkeen ei ole enää vapaata treoninolia ’m\’ 25 havaittavissa seoksessa. Konsentrointi 40 °C lämpöti- :’· lassa tuottaa valkean kiteisen jäännöksen.

• · *·* Jäännös liuotetaan 200 ml etyyliasetaattiin 70 °C lämpötilassa ja saostetaan lisäämällä heksaania. Seos jäähdytetään 0 °C lämpötilaan, pestään heksaanil-30 la ja kuivataan huoneenlämpötilassa. Saadaan N-trifluoriasetyylitreoninoli.

-ϊ· 50,3 g (0,25 mol) saatua tuotetta liuotetaan • · · .* 1,25 litraan tetrahydrofuraania ja 75 ml trimetyy- • * .. likloorisilaania lisätään tipoittain. Välittömästi ..... 35 tämän jälkeen 70 ml trietyyliaminin ja 250 ml tetra- . · hydrofuraanin seos lisätään. Saadaan valkoinen suspen- • t : '· sio, jota sekoitetaan 4 h ajan. Seos suodatetaan ja • · · • · · • · 10 99113 suodos haihdutetaan 40 °C lämpötilassa, jolloin saadaan öljyä.

C.jy liuotetaan 1,5 litraan metyleenikloridia ja käsitellään 90,4 g p-formyyli-fenoksi-etikkahapolla 5 pienissä erissä huoneenlämpötilassa. Trifluorimetaani-sulfonihapon trimetyylisilyyliesterin 9 ml annoksia lisätään. Seosta sekoitetaan 24 h ajan huoneenlämpötilassa, sitten se suodatetaan ja jäännös pestään hyvin metyleenikioridillä.

10 Suodos konsentroidaan 40 eC lämpötilassa, jolloin saadaan oranssinpunaista hartsimaista tuotetta. Tämä tuote kromatografoidaan silikageelillä. Eluonti toteutetaan etyyliasetaatilla. Konsentroimalla relevantit fraktiot saadaan otsikon yhdiste puhtausas-15 teella 97 % (HPLC).

2) Suojatun oktapeptidin muodostus.

17.2 g aminometyloitua polystyreeniä (Brand Dow 0,7 p-% N vastaten 0,5 mmol aminometyyliryhmiä per g hartsia) suspendoidaan 80 ml metyleenikloridi/DMF 20 4:1. Perätysten lisätään 4,17 g vaiheen 1 lopputuotet ta, 1,6 HOBT ja 4,0 g DCCI. Kun seosta on sekoitettu 2 • » · ^ ... h ajan huoneenlämpötilassa, Kaiser-koe on negatiivi- .·. nen. Seos suodatetaan ja pestään. Pesty hartsi suspen- • · · m' ' doidaan 100 ml tetrahydrofuraaniin ja metanoliin 3:1 25 ja käsitellään pienissä erissä 10,4 g natriumborohyd- ridillä. Seosta sekoitetaan 6 h ajan huoneenlämpöti- • · ·.· lassa, suodatetaan ja hartsi pestään. Hartsi suspen doidaan metyleenikloridi/DMF 4.1. 5,5 g Fmoc-Cys (S-t-Bu)OH, 1,74 HOBT ja 3,6 g DCCI lisätään. Fmoc suoja-30 ryhmä poistetaan piperidiinillä (2 x 20 min vaikutus-ajalla).

Analogiseen tapaan peräkkäisissä sarjoissa «·· yhdistetään seuraavat N-Fmoc suojatut aminohapot käyt- .’ · täen HOBT/DCCI-ThrOH; Lys (BOC)-OH: D-TrpOH, Phe-OH, 35 Cys(S-tBu)OH ja D-Phe-OH, jolloin saadaan Fmoc suojat- .. tu oktapeptidihartsi. Lopullinen pitoisuus 0.26 : ’* mmol/g.

• · • ♦ m 11 99113 3) Hapetus ja lohkaisu

Saatu hartsi suspendoidaan 100 ml trifluorie-tanoli/metyleenikloridiin 1:1 ja käsitellään 50 ml tributyylifos?iinilla. Seosta sekoitetaan 70 h ajan 5 huoneenlämpötilassa. Seos suodatetaan, pestään ja käsitellään 100 ml tetrahydrofuraanin ja IN aminoase-taattiliuoksen seoksella 1:1. 1,1 ml 30 % vetyperoksidin vesiliuosta lisätään. Seosta sekoitetaan 24 h ajan huoneenlämpötilassa. Hartsi pestään. Seosta käsitel-10 lään 20 ml trifluorietikkahapolla, 80 ml metyleeniklo-ridilla ja 10 ml vedellä ja 2 ml tioanisolilla. Seosta sekoitetaan 2 h ajan, sitten se suodatetaan ja pestään trifluorietikkanapolla ja metyleenikloridilla. 200 ml dietyylieetteriä lisätään suodokseen. Saatu sakka suo-15 datetaan pois. Jäännös liuotetaan vesipitoiseen puskuriin ja demineralisoidaan, esim. käyttäen Duoliittia.

Liuos pakastekuivataan asetaattina, jolloin saadaan otsikon yhdiste asetaattina.

Kaikki edellä olevat esimerkit esim. esimerk-20 kien 1 ja 2 yhdisteet, voidaan valmistaa analogisen tapaan.

.. Esimerkki S2:Na-[g-qlukosyyli(1-4)-deoksifruktosyyli)- •. DPhe-Cys-Phe-DTrp-Lys-Thr-Cys-Thr-olin valmistus • · :' 393 g hartsiin sidottua oktapeptidiä valmis- 25 tetaan yllä olevan esimerkin S2 mukaisesti. Kysteiini suojaryhmät poistetaan pelkistäen. Hartsin peptidisi- I 9 dos hapetetaan sykliseksi oktapeptidiksi vetyperoksidilla tetrahydrofuraani/vesi-seoksessa.

Tertahydrofuraanilla ja sitten DMF pesun jäl-30 keen peptidihartsia ravistetaan 3600 ml DMF/AcOH-seoksessa. (8:1). Suspensiota käsitellään 526 g i +)maltoosi monohydraatilla. Seosta lämmitetään 60 °C

• ti lämpötilaan ja sitä sekoitetaan 18 h ajan tässä lämpö- • 9 .. tilassa.

35 Seos jäähdytetään ja peptidihartsi suodate- .. taan pois, ja pestään peräkkäin DMF ja metanolilla.

Tämän jälkeen se pestään metyleenikloridilla. Peptidi • · • · • · • 12 99113 irrotetaan sitten yli 1 h aikana hartsista 2300 ml metyleenikloridin ja 716 ml tirfluorietikkahapon seoksella sekä pienellä määrällä vettä.

Tämän jälkeen suodosta sekoitetaan ja käsi-5 tellään pienissä erissä 597 g natriumkarbonaatilla, sekoitetaan 30 min ajan ja suodatetaan. Jäännös pestään metyleenikloridilla ja metanolilla.

Suodos konsentroidaan kuiviin.

Se demineralisoidaan käyttäen ei-10 funktionalisoitua polystyreenipylvästä, kuten Duoliit-tia, tai käänteisfaasi HPLC materiaalia, kuten silika-geeliä, jota on käsitelty silikonilla ja jossa on pit-käketjuisia rasva-alkoholiryhmiä (esim. Labomatic, Sveitsi, Brand HB-SIL-18-20-100). Saadaan puhdas otsi-15 kon yhdiste.

·· · • · · » 999 » · » • 9 9 999 *·· • · • 9 •99 9 9 9 • 9 9 9 » · · ··· 999 • · • 9 9 9 9 99 9 9 99 9 9 9 9 9 9 9 • ·· 1 · • «

Claims (11)

1. 99113 PATENTTIVAATIMUKS ET
2. 1. Menetelmä peptidialkoholin valmistamiseksi, jossa peptidiketjun C-terminaalipäässä on kaksi 5 alkoholiryhmää tai yksi alkcholiryhmä ja yksi tioli-ryhmä, tunnectu siitä, että peptidialkoholi valmistetaan suorittamalla peptidialkoholin ja formyy-lifenyylitähteitä sisältävän hartsin asetaalin happo-hydrolyysi.
3. 2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä peptidialkoholin valmistamiseksi, jolla on kaava CHR^XH / Y-CO-NH-CH 15 \ CH2OH jossa Y on peptidialkoholitähde, jossa on valinnaisesti suo-jaryhmiä;
4. 20 Ri on vety tai metyyli; ja « X on O tai S; tunnettu siitä, että kaavan Ir mukainen hart- :: si, » « ..25 |L .· —' X-CH !· ©1 ^ V-/ o-ch2 [r 30 johon peptidialkoholi on liittynyt; ja jossa (F)on liukenematon synteettinen hartsitähde; ja I , Z on suora sidos tai tähde, joka liittää hartsin ase- ’ talisoituun formyylifenyyliryhmään; • 35 jolloin asetalisoitu CHO-ryhmä sijaitsee m- tai p- ’ 1 asemassa radikaaliin Z nähden, m 99113 ja hartsipolymeerimolekyyliin on liittynyt lukuisia asetalisoituja formyylifenyyliryhmiä; hydrolysoidaan happamissa olosuhteissa.
5. 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, 5 tunnettu siitä, että Θ' on polystyreeniradikaali.
6. 4. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen mene telmä, tunnettu siitä, että Z on ryhmä, jolla on kaava -(D)p-Q:-Q2-(E)q- 15 jossa Qi = hartsiin sidotun reaktiivisen ryhmän tähde, Q2 ** formyylifenyyliryhmään (asetalisoitu) sidottu reaktiivisen ryhmän tähde,
7. 20 D 1 ryhmän Q: polymeeriin liittävä tähde, E ryhmän Q2 formyylifenyyliryhmään (asetalisoitu) liittävä tähde, ; p ja q ovat toisistaan riippumatta 0 tai 1.
8. 5. Jonkin patenttivaatimuksista 2-4 mukai- • · 25 nen menetelmä, tunnettu siitä, että Z on ryhmä · · • « » · · -CH2-NH-C0-CH-(0)m- • · · ^ R jossa
9. 30 R = H tai CH3 m » 0 tai 1 ja : (F)on polystyreenitähde.
10. 6. Jonkin patenttivaatimuksista 2-5 mukai- * ; nen menetelmä, tunnettu siitä, että X on O ja
11. 35 Rx on CH3. ’·** 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä oktreotidin valmistamiseksi. • ·· * · · * ·» • · 99113