FI90547B - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen 4H-antra/1,2-b/pyraanijohdannaisen valmistamiseksi - Google Patents

Description

i 90547

Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen 4H-antra[1,2-b]pyraanijohdannaisen valmistamiseksi Tämä keksintö koskee menetelmää uuden yhdisteen 5 valmistamiseksi, jolla on kasvainten kasvua ehkäisevä vaikutus ja jolla on kaava (I) t9 ?H3

°nJ

I /® io tr 0 \ CH , CH, r„ . y*£ 3 \ s 3 “ ^CH, XO 3 a *1 * p I O 0 'sh3

15 I e* Ji* l|<* -tsil I

r 3 i· i ^ p».

β r 6 ch, o Λ 3 20 jossa X ja Y ovat vetyatomi tai ryhmä RCO-, jossa R on 1 -4 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, sillä edellytyksellä, etteivät ne samanaikaisesti ole vetyatomeja.

SF2587-aine on Streptomyces-sukuun kuuluvan aktino-25 mykeettikannan viljelmästä eristetty antibiootti (JP-A-1-193265, joka patenttijulkaisu on liitetty tähän viitteeksi) ja sillä on kaava (II) (-ΓΙλ p °\ CH3X C“3 CH3U7

N CH

3 (II) Η0>γ> °? o CB^MTn '3 CH3

O

2 90547 SF2587:llä on huomattava inhiboiva vaikutus P388-kasvainsoluihin, ja sillä oli erinomaisia terapeuttisia vaikutuksia kokeissa, jotka tehtiin hiirillä, joihin oli siirretty P388-kasvainsoluja. SF2587-aine on kuitenkin 5 suhteellisen myrkyllinen (LD50 noin 5 mg/kg hiirellä i.v.).

Tämän keksinnön tarkoituksena on antaa käyttöön SF2587-aineen johdannainen, joka on vähemmän myrkyllinen ja jolla on parempi kasvainten kasvua ehkäisevä vaikutus verrattuna SF2587-aineeseen.

10 Keksijät ovat suorittaneet laajoja tutkimuksia löy tääkseen menetelmän vähentää SF2587-aineen myrkyllisyyttä ja samalla parantaa edelleen sen kasvainten kasvua ehkäisevää vaikutusta. Niinpä nyt on keksitty, että mainittu tarkoitus voidaan saavuttaa SF2587-aineen asyylijohdannai- 15 sen avulla, joka johdannainen saadaan muuttamalla kemiallisesti SF2587-aine tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävä suola, jolla asyylijohdannaisella on kaava (I) 19 CU t 20 I 3

°\J

Cli,. CH, CH,\ / , v 3 \ / 3 » 3 \ ^ (I) 25 V/.’CH3 * ?! I 0 0 ^ ?.h3 * e T7 Ύ ch,, 30 *0 a 3 jossa X ja Y molemmat ovat vetyatomi tai ryhmä RCO-, jossa R on 1 - 4 hiiliatomia sisältävä ryhmä, sillä edellytyk- 35 sellä, etteivät ne samanaikaisesti ole vetyatomeja.

3 90547

Kaavassa (I) esimerkkejä ryhmästä RCO- ovat asetyy-liryhmä, n-propionyyliryhmä, n-butyyliryhmä, isobutyyli-ryhmä ja n-valeryyliryhmä. Näistä n-propionyyliryhmä, n-butyyliryhmä, isobutyyliryhmä ja n-valeryyliryhmä ovat 5 erityisen edullisia.

SF2587-aine voidaan valmistaa esimerkiksi viljelemällä mikro-organismia, joka pystyy ainetta tuottamaan, sekä ottamalla se talteen viljelmästä.

Esimerkki SF2587-ainetta tuottavasta kannasta on 10 kanta SF2587, joka on talletettu Fermentation Research

Institute of Japan -talletuslaitokseen talletusnumerolla BP-2244 Budapestin sopimuksen mukaisesti.

Kannan SF2587 bakteriologiset ominaisuudet ovat seuraavat.

15 I. Morfologia

Vegetatiivinen sienirihmasto on laajalle ulottuvaa ja hyvin haaroittunutta eikä fragmentoidu tavallisissa olosuhteissa. Ilmasienirihmasto on runsas ja itiöintiä esiintyy runsaasti kaurajauhoagarilla, epäorgaaniset suo-20 lat - tärkkelys-agarilla, hiivauute-mallasuuteagarilla jne. Ilmasienirihmasto on yksijalkaisesti haaroittunutta, eikä siinä esiinny pyörremuodostusta. Ilmasienirihmaston loppupään itiöketju on pääosin kierteinen, mutta ajoittain aaltoileva. Elektronimikroskopia paljastaa, että itiön 25 muoto on ellipsinmuotoisesta sylinterinmuotoiseen ja koko on 0,5 - 0,9 x 0,7 - 1,3 pm. Itiön seinän ornamentaatio on sileä. Itiöpesäkkeitä, liikkuvia itiöitä, rihmastoa jne. ei havaita.

II. Viljelyominaisuudet 30 Kannan SF2587 viljelyominaisuudet eri väliaineissa on esitetty taulukossa 1. Värin kuvauksessa suluissa olevat väristandardit ovat Container Corporation of America's Color Harmony Manual -käsikirjassa käytettyjä standardeja. Havainnot tehtiin 14 - 21 päivän inkuboinnin 28 °C:ssa 35 jälkeen.

4 90547

Taulukko 1 Väliaine Kasvu limasieni- Liukoinen (käänteisväri) rihmasto pigmentti

Sakkaroosi- Hyvä, topaasi Runsas, Ei lainkaan nitraalti-agar (3ne) harmaa (2fe)

Glukoosi-aspa- lluono-kohtalaincn, Ei lainkaan Ei lainkaan rogiini-ogar vanleankcltaihen (2ec)

Glysoroii-aspa- Kohtalainen^ Kohtalainen, Ei lainkaan ragiini-ogar väritön harmaa (3fe)

Kalsium- Kohtalainen, Runsas, Ei lainkaan malaatti-agar harmaan keltainen harmaa (3fe) (2nc)

Epäorgaaniset Hyvä, ruusun- Runsas, Ei lainkaan suolat-tärkkelys - punainen - beige- harmaa (3fe) agar värinen (4ge)

Kaurajauho- Hyvä, ruusun- Runsas, Ei lainkaan agar punainen, beige- harmaa (3fe) värinen (4ge) lliivauute- Hyvä, vaalean- Runsas, llaaleankeltainen malJasuuto- ruskea (31g) harmaa (3fe) agar

Tyrosiini- Kohtalainen, Runsas, Ei lainkaan agar kullanruskea harmaa (3fe) (3 ie)

KavinLoagar Kohtalainen, Niukka, Ei lainkaan

Lopaasi (3ne) valkoinen

RcnneLtin agar Kohtalainen, Kohtalainen. Ei lainkaan harmaankellaincn harmaa (3fe) (2gc) 5 90547 III. Fysiologiset ominaisuudet 1) Kasvun lämpötila-alue: Hiivauute-mallasuute-agarilla kasvua esiintyy lämpötila-alueella 15 - 45 °C ja kasvu on hyvä 26 - 37 °C:ssa 5 2) Gelatiinin nesteytys: positiivinen 3) Tärkkelyksen hydrolysointi: positiivinen 4) Nitraatin pelkistys: negatiivinen 5) Rasvattoman maidon peptonisointi: positiivinen Rasvattoman maidon sakkautus: positiivinen 10 6) Resistenssi suoloille: Kasvua esiintyy väliai neissa, jotka sisältävät 10 % NaCl:a, mutta kasvua ei esiinny väliaineissa, jotka sisältävät 12 % tai enemmän NaCl:a 7) Melanoidipigmentin tuotto: negatiivinen 15 IV. Hiililähteiden käyttö (ISP nro 9 -väliaine)

Sekä D-glukoosia, glyserolia, D-ksyloosia, L-arabi-noosia, L-ramnoosia, D-mannitolia, D-fruktoosia, raffinoo-sia, myoinositolia että sakkaroosia assimiloidaan hyvin. 20 V. Soluseinän koostumus

Becker et ai.'n menetelmällä [Appi. Microbiol. 13 (1965) 236] analysoituna soluseinäfraktio sisältää LL-di-aminopimeliinihappoa.

Niinpä SF2587-kannan katsotaan kuuluvan Strepto-25 myces-sukuun, joka kuuluu aktinomykeetteihin, ja sen il-masienirihmaston väri kuuluu harmaan värin sarjaan, ilma-sienirihmaston loppupää on pääasiassa kierteistä, itiön pinta on sileä ja sen käänteisväri on punaiseen vivahtava harmaankeltäinen, eikä se muodosta melanoidipigmenttejä. 30 Kuten muut aktinomykeetit, kannassa SF2587 tapahtuu helposti muutoksia ominaisuuksissa. Esimerkiksi kannan SF2587 tai siitä saatuja mutanttikantoja (spontaaneja tai aiheutettuja) samoin kuin transduktantteja ja transfor-mantteja (geenitekniikalla valmistettuja) voidaan myös 35 käyttää tämän keksinnön tarkoituksiin, jos ne vain pysty- 6 90547 vät tuottamaan SF2587-ainetta. Tämän keksinnön mukaisessa menetelmässä edellä mainittua kantaa viljellään väliaineessa, joka sisältää tavanomaisia ravintoaineita, joita mikro-organismit voivat käyttää. Niinpä ravintolähteinä 5 voidaan käyttää niitä tunnettuja lähteitä, joita tavanomaisesti käytetään aktinomykeettien viljelyssä. Hiililäh-teinä voidaan esimerkiksi käyttää glukoosia, glukoosi- tai maltoosisiirappia, dekstriiniä, tärkkelystä, sakkaroosia, melasseja ja eläin- tai kasviöljyjä, edullisesti maltoosi-10 siirappia, tärkkelystä, glukoosia, soijapapuöljyä ja sakkaroosia. Typpilähteinä voidaan käyttää soijapapujauhoa, vehnänalkioita, maissin liuotusnestettä, puuvillansiemen-jauhoa, lihauutetta, peptonia, hiivauutetta, ammoniumsul-faattia, natriumnitraattia, ureaa ja niin edelleen, edul-15 lisesti soijapapujauhoa ja Pharmamedia-tuotetta (Troders Oil Mill Co'n, Texas, tuottaman puuvillansiemenjauhon kauppanimi). Lisäksi on joskus edullista sisällyttää väliaineeseen erilaisia epäorgaanisia suoloja, jotka pystyvät antamaan natrium-, kalsium-, magnesium-, koboltti-, kloo-20 ri-, fosfaatti-, sulfaatti- ja muita ioneja. Edullisia esimerkkejä epäorgaanisista suoloista ovat CaC03,

FeS04*7H20 ja CoC12*6H20. On myös edullista lisätä sopivia määriä orgaanisia ja/tai epäorgaanisia aineita, jotka auttavat mikro-organismin kasvua ja edistävät SF2587-aineen 25 tuottoa. Edullinen esimerkki näistä on tislausjätteen liukoiset aineet (distiller's solubles).

Väliaineen pH-arvo on edullisesti 5,0 - 7,5.

Kannan kasvattamiseksi suoritetaan aerobinen viljely ja submerssi aerobinen viljely on erityisen edulli-30 nen. Vaikka inkubointilämpötila-alue voi olla 26 - 37 °C, monissa tapauksissa on edullista suorittaa viljely noin 28 °C:ssa. Vaikka SF2587-aineen keräytyminen riippuu käytetyistä väliaineesta ja viljelyolosuhteista, se saavuttaa huippunsa yleensä 2-7 päivässä olipa kyseessä ravistus-35 viljely tai tankkiviljely (edullisesti tankkiviljely). Kun i 7 90547 SF2587-aineen keräytyminen on saavuttanut maksiminsa, in-kubointi lopetetaan ja haluttu aine eristetään ja puhdistetaan saadusta viljelmästä.

Koska SF2587-aine on rasvaliukoinen, tätä ominai-5 suutta voidaan käyttää hyväksi sen eristyksessä ja puhdistuksessa viljelykäymisliemestä. Niinpä voidaan edullisesti käyttää pyiväskromatografisiä menetelmiä käyttäen synteettisiä adsorbentteja, kuten Amberlite XAD-2:ta (Rhom & Haas Co.), Diaion HP-20:tä (Mitsubishi Kasei Corporation), 10 geelisuodatusmateriaaleja, kuten SephadexR LH-20:tä (Pharmacia Fine Chemicals), Toyoperal HW-40:tä (Tosoh Corporation), silikageeliä, alumiinioksidia tai liuotinuuttomene-telmiä etyyliasetaattia, kloroformia ja niin edelleen käyttäen.

15 Millä tahansa näistä menetelmistä tai niiden sopi valla yhdistelmällä SF2587-aine voidaan eristää erittäin puhtaana.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi, on tunnusomaista, että kaa- CH-, 20 van (II) mukaisen yhdisteen I -> pj °\ CH3 CH3 CH,\,/ 25 N CH3 (II) H0T ° ° 1 cH^°j 30 P CH3

O

annetaan reagoida asyloivan aineen kanssa emäksen läsnäollessa.

Asyloiva aine, jota voidaan käyttää tässä keksinnössä, voi olla etikkahappoanhydridi, asetyylikloridi, 35 propaanihappoanhydridi, propionyylikloridi, n-butaanihap- 8 90547 poanhydridi, n-butyryylikloridi, isobutyryylikloridi, iso-butaanihappoanhydridi, n-valeryylikloridi ja n-valeerihap-poanhydridi. Reaktio suoritetaan -10 - 100 °C:ssa 5-50 tunnin ajan, edullisesti 5-50 °C:ssa 24 - 48 tuntia.

5 Monoasyloidun yhdisteen valmistamiseksi käytettävä emäs voi olla natriumasetaatti ja diasyloidun yhdisteen valmistamiseksi käytettävä emäs voi olla pyridiini, dimetyyli-aminopyridiini tai trietyyliamiini. Asyloivan aineen ja emäksen moolisuhde SF2587-aineeseen on 30:70 ja 140:160, 10 vastaavasti.

Kaavan (I) mukainen yhdiste voidaan puhdistaa reak-tioseoksesta silikageelipylväskromatografisesti ja tarvittaessa sen jälkeen uudelleenkiteyttämällä.

Esimerkkejä tämän keksinnön mukaisen yhdisteen, 15 jolla on kaava (I), farmaseuttisesti hyväksyttävästä suolasta ovat hydrokloridi, sulfaatti, fosfaatti, asetaatti, sitraatti, malonaatti, salisylaatti, maleaatti, fumaraat-ti, sukkinaatti, askorbaatti, malaatti, metaanisulfonaat-ti, laktaatti, glukonaatti, glukronaatti, amidosulfonaat-20 ti, bentsoaatti ja tartraatti.

Kaavan (I) mukaista yhdistettä sisältävä syöpälääke annetaan suun kautta tai ruuansulatuskanavan ulkopuolisesta. Ruuansulatuskanavan ulkopuoliseen antoon yhdiste liuotetaan fysiologiseen suolaliuokseen tai sopivaan puskuri-25 liuokseen ja formuloidaan liuokseksi tai suspensioksi käytettäväksi injektiossa, infuusiona peräaukon kautta tai paikallisesti. Suun kautta antoon kaavan (I) mukainen yhdiste sekoitetaan farmaseuttisesti hyväksyttäviin vehik-keleihin ja vastaaviin aineisiin ja haluttaessa formuloi-30 daan gelatiinikapseleiksi, tableteiksi jne., joista kukin sisältää 1 - 200 mg aktiivista ainetta. Sopiva annos imet täväisille ihminen mukaan lukien on 0,5 - 40 mg/painokilo-/päivä yhdestä kolmeen kertaa päivässä.

g 90547

Koe-esimerkki 1

Sytotoksisuus P388-soluille Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden sytotoksisuus määritettiin MTT-määrityksellä seuraavalla tavalla.

5 Hiiren leukemia P388 -solut suspendoitiin RPMI-vä- liaineeseen, jota oli täydennetty 10 % vasikan sikiön seerumilla, ja tätä suspensiota siirrettiin 96-kuoppaiselle mikrotiitterilevylle, jolloin saatiin solupitoisuus 2 x 103 solua/kuoppa. Taulukossa 2 esitetty yhdiste liuo-10 tettiin RPMI-väliaineeseen ja lisättiin jokaiseen koeryhmän kuoppaan, kun taas kontrolliryhmän kuoppiin ei lisätty yhdistettä. Inkubointi suoritettiin 37 °C:ssa 72 tuntia 5 %:n C02-pitoisuudessa. Sitten MTTrtä ( 3-( 4,5-dimetyylitiat-sol-2-yyli)-2,5-difenyylitetratsoliumbromidi) lisättiin 15 jokaiseen kuoppaan formatsaanin muodostumisen aikaansaami seksi. Syntynyt formatsaani liuotettiin lisäämällä natriu-mdodekyylisulfaattia. Kunkin kuopan absorbanssi aallonpituudella 577 - 630 nm mitattiin ELISA-analysaattorilla ja jokaisen yhdisteen 50-%:isesti inhiboiva pitoisuus (IC50) 20 laskettiin koeryhmän absorbanssisuhteesta kontrolliryh mään. Tulokset on esitetty taulukossa 2.

Taulukko 2 25 Yhdiste nro IC50 (ng/ml) 1 19,4 2 23,1 3 19,9 4 18,1 30 5 17,8 6 23,1 7 55,2 8 23,1 9 34,3 35 10 16,0 10 90547

Koe-esimerkki 2

Kasvainten kasvua ehkäisevä vaikutus Tämän keksinnön mukaisten yhdisteiden hydroklori-dien kasvainten kasvua ehkäisevä vaikutus määritettiin 5 seuraavalla tavalla.

Hiiren leukemia P388 -solut, joita oli ylläpidetty BDF1-hiiren vatsaontelossa, otettiin pois ja suspendoitiin fysiologiseen suolaliuokseen, jolloin saatiin solupitoi-suus 1 x 106 solua/0,2 ml. Solususpensio (0,2 ml) siirret-10 tiin 5-viikkoisten BDF^uroshiirien vatsaonteloihin. Tau lukossa 3 esitetyt tämän keksinnön mukaiset yhdisteet liuotettiin 0,2 ml:aan fysiologista suolaliuosta ja annettiin ruuansulatuskanavan ulkopuolisesti hiirelle 24 tuntia P-388-solujen siirron jälkeen. Kontrolliryhmän hiirille ei 15 annettu mitään yhdistettä. T/C-%-arvo laskettiin seuraavan kaavan mukaisesti.

Koeryhmän hiirien hengissä pysymispäivät T/C-% = __ x 100 20 Kontrolliryhmän hiirien hengissä pysymis päivät

Tulokset on esitetty taulukossa 3.

11 90547

Taulukko 3

Annos Anti-P388

Yhdiste nro (mg/kg) -aktiivisuus _ _ (T/C %)_ 1 1,0 144 1 0 ,5 134 1 0;25 124 2 14 70 2 7 >200 2 3,5 163 4 25 71 4 12,5 >449 4 6,25 217 4 3,13 133 4 1,56 130 5 5 72 5 2r5 106 5 1;2 5 150 6 20 >405 6 10 106 6 5 144 6 2,5 113 6 1,25 96 0 40 69 8 20 >408 8 10 175 8 5 144 8 2.5 113 9 40 227 9 20 189 9 10 147 9 5 117 9 2,5 96 i2 90547

Koe-esimerkki 3

Akuutti myrkyllisyys

Taulukossa 4 esitetyt tämän keksinnön mukaiset yhdisteet annettiin vatsaonteloon tai suoneen hiirille, ja 5 kunkin yhdisteen akuutti myrkyllisyys (LD50) mitattiin. Tulokset on esitetty taulukossa 4.

Taulukko 4 10 Yhdiste nro Injektioreitti LD50 (mg/kg) 2 i.p. 16 4 i.p. 40 6 i.p. 120 2 i.V. 23,5 15

Kuten edellä on osoitettu, tämän keksinnön mukainen SF2587-aineen johdannainen on vähemmän akuutisti myrkyllinen ja sillä on parempi kasvainten kasvua ehkäisevä vaikutus verrattuna SF2587-lähtöaineeseen ja siten se on lupaa-20 va syöpälääke.

Tätä keksintöä valaistaan nyt yksityiskohtaisemmin seuraavien esimerkkien avulla.

Referenssiesimerkki

Ymppiviljelyväliaineena käytettiin väliainetta, 25 joka sisälsi 2,0 % tärkkelystä, 1,0 % glukoosia, 0,6 % vehnänalkioita, 0,5 % polypeptonia, 0,3 % hiivauutetta, 0,2 % soijapapujauhoa ja 0,2 % kalsiumkarbonaattia.

Tuotantoväliaineena käytettiin väliainetta, joka sisälsi 2,0 % maltoosisiirappia, 0,15 % soijapapuöljyä, 30 1,0 % soijapapujauhoa, 0,5 % Pharmamedia-tuotetta, 0,25 % tislausjätteen liukoisia aineita, 0,1 % kalsiumkarbonaattia, 0,0005 % rauta (II)-sulfaattia (7H20) , 0,00005 % ko- bolttikloridia (6H20) ja 0,00005 % nikkelikloridia (6H20) . Molempien väliaineiden pH säädettiin arvoon 7,0 ennen ste-35 rilointia.

13 9 0 5 4 7 100 ml:n Erlenmeyer-pullo, joka sisälsi 20 ml yllä olevaa ymppiviljelyväliainetta, steriloitiin 120 °C:ssa 30 minuuttia, jonka jälkeen se siirrostettiin 2-3 luupilli-sella Streptomyces -kantaa SF2587 (FERM BP-2244), jota oli 5 kasvatettu agar-vinopinnalla. Inkubointi suoritettiin ravistuksessa 28 °C:ssa kolmen päivän ajan, jolloin saatiin ensimmäinen ymppiviljelmä.

Sitten 500 ml:n Erlenmeyer-pullo, joka sisälsi 80ml samaa ymppiviljelyväliainetta kuin edellä, steriloitiin 10 120 °C:ssa 30 minuuttia ja sen jäähdyttyä siirrostettiin 2,4 ml:lla edellä valmistettua ensimmäistä ymppiviljelmää. Inkubointi suoritettiin sekoituksessa 28 °C:ssa yhden päivän ajan, jolloin saatiin toinen ymppiviljelmä.

Neljä 50 litran tankkifermenttoria, jotka kukin 15 sisälsivät 35 litraa tuotantoväliainetta, joka oli etukäteen steriloitu 120 °C:ssa 30 minuuttia, siirrostettiin 300 ml:n annoksilla mainittua toista ymppiviljelmää. Inkubointi suoritettiin 28 °C:ssa neljän päivän ajan hapetuksessa (20 1/min) ja sekoittaen (250 rpm).

20 Kun inkubointi oli suoritettu, viljelykäymisliemi suodatettiin piimään avulla, jolloin saatiin solut sisältävä kiinteä fraktio.

Tämä kiinteä fraktio uutettiin 60 1:11a 67-%:ista asetoni/vesi-seosta 20 °C:ssa sekoittaen, jonka jälkeen 25 seos suodatettiin kiinteän aineen poistamiseksi. Tämä uute tislattiin asetonin poistamiseksi alennetussa paineessa ja 10 1 saatua konsentraattia uutettiin 15 1:11a etyyliasetaattia. Etyyliasetaattikerroksesta poistettiin vesi vedettömän natriumsulfaatin päällä ja liuos konsentroitiin 30 alennetussa paineessa, jolloin saatiin 8,98 g öljyä. Tämä öljy sekoitettiin tasaiseksi 9 g:aan piimaata ja kuivattiin alennetussa paineessa 16 tunnin ajan. Sen jälkeen seos vietiin pylvääseen, joka sisälsi 400 ml silikageeli C—200 -geeliä (Wako Pure Chemical Industries) pakattuna 35 kloroformin avulla. Pylväs pestiin kloroformilla ja kloro- 14 90547 formi/metanoli-seoksilla (100:1, 50:1, 20:1 ja 10:1) mainitussa järjestyksessä ja eluoitiin lopuksi kloroformi/-metanoli-seoksella (5:1). Eluaatilla suoritettiin sytotok-sisuusmääritys (MTT-määritys) hiiren leukemiasoluilla 5 (P-388), kuten edellä olevassa koe-esimerkissä on kuvattu, ja sytotoksiset fraktiot, jotka inhiboivat 50-%:isesti P-388-solujen kasvua laimennuksena 1:200, yhdistettiin ja konsentroitiin kuiviin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 235 mg öljyä. Tämä öljy liuotettiin pieneen määrään 10 metanolia ja vietiin pylvääseen, joka sisälsi 300 ml

Toyopearl HW-40 -geeliä (Tosoh Corporation) pakattuna me-tanolin avulla, ja eluointi suoritettiin metanolilla. Eluaatilla suoritettiin sytotoksisuusmääritys käyttäen hiiren leukemia P-388 -soluja ja aktiiviset fraktiot, jotka inhi-15 boivat 100-%:isesti P-388 -solujen kasvua laimennettuna 1:122 000, yhdistettiin, konsentroitiin alennetussa paineessa ja annettiin seistä 5 °C:ssa 16 tuntia. Näin SF2587-aine erottui keltaisena sakkana. Tämä sakka otettiin talteen suodattamalla ja kuivattiin alennetussa pai-20 neessa 40 °C:ssa 16 tuntia, jolloin saatiin 3,0 mg puhdistettua SF2587-ainetta keltaisena jauheena.

Esimerkki 1 SF2587-aineen 3·-O-asetyylijohdannaisen (yhdiste 1) synteesi 25 3 ml:aan etikkahappoanhydridiä liuotettiin 40 mg SF2587-ainetta ja liuokseen lisättiin 24,9 mg natriumase-taattia sekoittaen 20 °C:ssa. Sekoitusta 20 °C:ssa jatkettiin vielä kahden tunnin ajan. Reaktioseos kaadettiin 50 ml:aan jäävettä, neutraloitiin 0,1 mol/1 natriumhydrok-30 sidin vesiliuoksella ja uutettiin kahdest 20 ml:n annoksilla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Kun natriumsul-faatti oli poistettu suodattamalla, saatu kloroformiliuos konsentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 35 oranssinvärinen kiinteä aine. Tämä raakatuote puhdistet- is 90 5 47 tiin käyttäen silikageelipylväskromatografiaa ja klorofor-mi/metanoli-seosta 50:1 (tilavuusosuuksina) eluointiliuok-sena, jolloin saatiin 29,7 mg oranssinväristä SF2587-aine-en 31-O-asetyylijohdannaista (yhdiste 1: kaavan (I) mukai-5 nen yhdiste, jossa X = CH3CO-; Y = H) .

Sulamispiste 125 - 129 °C.

[a]D20 = +172,2° (c = 0,1, kloroformi) EI-MS: m/z 631 (M+) UV Λ max MeOH nm (e ): 243 (44550), 260 (sh., 27760), 10 422 (9020) IR Vna* KBr cm'1: 3450, 1740, 1660, 1635, 1590 1H-NMR (CDClj, ppm) : 13,32 s, 8,07 s, 7,94 d, 7,83 d, 6,47 s, 5,53 dd, 5,16 d, 4,32 dq, 3,36 d, 3,12 dq, 2,99 s, 2,89 dd, 2,50 d, 2,38 d, 2,20 s, 1,95 s, 1,74 s, 1,51 d, 15 1,45 d, 0,98 s 13C-NMR (CDC13, ppm) : 187,6, 181,5, 178,8, 170,5, 166,2, 159,2, 156,3, 149,9, 140,7, 136,3, 133,3, 130,6, 126,5, 126,0, 119,8, 119,5, 115,9, 110,1, 76,7, 70,4, 64,2, 63,9, 57,7, 57,6, 55,5, 51,9, 42,3, 39,5, 24,2, 21,3, 17,3, 20 14,7, 14,5 13,9

Esimerkki 2 SF2587-aineen 3',11-O-diasetyylijohdannaisen (yhdiste 2) synteesi 25 4 ml:aan pyridiiniä suspendoitiin 100 mg SF2587- ainetta ja 2 ml etikkahappoanhydridiä lisättiin tipoit-tain suspensioon sekoittaen ja jäähdyttäen jäähauteessa. Seosta sekoitettiin 30 minuuttia jäähauteessa jäähdyttäen ja sen jälkeen kolme tuntia 20 °C:ssa. Reaktioseos kaadet-30 tiin 20 ml:aan jäävettä, jonka jälkeen seos uutettiin kah desti 20 ml:n annoksilla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin, pestiin 20 ml:11a kyllästettyä natriumklori-din vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Kun natriumsulfaatti oli poistettu suodattamalla, 35 saatu kloroformiliuos konsentroitiin alennetussa painees- ie 90547 sa, jolloin saatiin keltainen, öljymäinen aine. Öljymäinen aine kuivattiin alennetussa paineessa yli yön ja puhdistettiin käyttäen silikageelipylväskromatografiaa ja kloro-formi/metanoli-seosta 100:1 (tilavuusosuuksina) eluointi-5 liuoksena, jolloin saatiin 64,3 mg keltaista SF2587-aineen 3',11-O-diasetyylijohdannaista (yhdiste 2: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X = CHjCO-, Y = CHjCO-) .

Sulamispiste 128 - 132 °C.

[a]020 = +42,1° (c = 0,1, kloroformi) 10 EI-MS: m/z 673 (M+) UV Me0H nin (>'): 241 /32740), 258 (30860), 363 (7370) IR vmax KBr cm 1; 3450, 1770, 1750, 1680, 1650, 1590 ^-NMR (CDClj, ppm) : 8,21 d, 8,04 d, 7,99 s, 6,48 s, 5,32 m, 5,24 d, 4,32 d, 3,49 d, 3,14 dd, 2,97 s, 2,87 dd, 15 2,56 s, 2,38 m, 2,30 s, 2,20 s, 1,90 s, 1,57 m, 1,43 d, 1,38 d, 1,07 d 13C-NMR (CDClj, ppm): 181,9, 180,5, 179,0, 174,2, 170,4, 165,6, 155,7, 148,6, 146,1, 144,8, 135,3, 132,6, 132,3, 126,4, 125,7, 125,4, 125,2, 121,6, 110,8, 75,3, 70,6, 20 64,5, 63,5, 58,2, 57,3, 55,6, 51,7, 42,4, 38,7, 23,9, 21,2, 21,1, 17,2, 14,7, 14,4, 14,2

Esimerkki 3 SF2587-aineen 3' -O-propionyylijohdannaisen (yhdiste 25 3) synteesi 2 ml:aan propaanihappoanhydridiä suspendoitiin 22,3 mg SF2587-ainetta ja suspensioon lisättiin 15,5 mg vedetöntä natriumasetaattia 20 °C:ssa sekoittaen. Sekoitusta 20 °C:ssa jatkettiin vielä neljä tuntia. Reaktioseos kaa-30 dettiin 15 ml:aan jäävettä, neutraloitiin 0,1 mol/1 nat-riumhydroksidin vesiliuoksella ja uutettiin kahdesti 10 ml:n annoksilla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Kun nat-riumsulfaatti oli poistettu suodattamalla, saatu klorofor-35 miliuos konsentroitiin alennetussa paineessa, jonka jäi- 17 9 0 5 47 keen se puhdistettiin käyttäen silikageelipylväskromato-grafiaa ja kloroformi/metanoli-seosta (tilavuussuhteessa 50:1) eluointiliuoksena, jolloin saatiin 21,9 mg kellertävänruskeaa SF2587-aineen 31-O-propionyylijohdannaista (yh-5 diste 3: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X = CH3CH2CO-, Y = H) .

EI-MS: m/z 645 (M+) .

Esimerkki 4 SF2587-aineen 3',11-O-dipropionyylijohdannaisen 10 (yhdiste 4) synteesi 10 ml:aan pyridiiniä suspendoitiin 500 mg SF2587-ainetta ja 5 ml propionihappoanhydridiä lisättiin tipoitta in suspensioon sekoittaen ja jäähdyttäen jäähauteessa. Seosta sekoitettiin jäähauteessa jäähdyttäen 30 minuuttia 15 ja sitten 36 tuntia 20 °C:ssa. Reaktioseos kaadettiin 80 ml:aan jäävettä ja uutettiin kahdesti 50 ml: n annoksilla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin, pestiin kolmesti 100 ml:n annoksilla vettä ja sitten 100 ml:11a kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän 20 natriumsulfaatin päällä. Natriumsulfaatti poistettiin suo dattamalla ja saatu kloroformiliuos konsentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin keltainen, öljymäinen aine. Öljymäinen aine kuivattiin alennetussa paineessa yli yön ja puhdistettiin käyttäen silikageelipylväskromatogra-25 fiaa ja tolueeni/asetoni-seosta (tilavuussuhteessa 20:1, sitten 10:1 ja lopuksi 5:1) eluointiliuossysteeminä, jolloin saatiin 460 mg raakatuotetta. Raakatuotteen uudel-leenkiteytys kloroformi/metanoli-seoksesta (20:1) tuotti 355 mg SF2587-aineen 3',11,O-dipropionyylijohdannaista 30 (yhdiste 4: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X on CH3CH2CO-, Y = CH3CH2CO-) keltaisina, neulamaisina kiteinä. Sulamispiste 209 - 212 °C.

[a]D20 = +56,0° (c = 0,1, kloroformi) EI-MS: m/z 701 (M+) 35 UV ληΒχ MeOH nm (f ): 240 (31230), 261 (29790), 362 (7470) is 90 5 47 IR vmax KBr cm1; 342°/ 1760, 1730, 1670, 1650, 1580 1H-NMR (CDClj, ppm): 8,21 d, 8,05 d, 7,99 s, 6,47 s, 5,32 m, 5,25 d, 4,32 dq, 3,53 d, 3,13 dd, 2,97 s, 2,86 dd, 2,48 q, 2,46 q, 2,33 dd, 2,28 s, 1,90 s, 1,56 dd, 1,43 d, 5 1,40 d, 1,39 t, 1,23 t, 1,05 s 13C-NMR (CDClj, ppm): 181,9, 180,5, 178,9, 173,7, 172,6, 65,6, 155,7, 148,5, 146,3, 145,0, 135,3, 132,6, 132,4, 126,4, 125,7, 125,3, 125,2, 121,5, 110,7, 75,1, 70,6, 64,3, 63,4, 58,1, 57,3, 55,6, 51,6, 42,6, 38,8, 27,9, 10 27,9, 23,9, 23,9, 17,2, 14,7, 14,2, 14,1, 9,3, 8,7

Esimerkki 5 SF2587-aineen 3'-O-butyryylijohdannaisen (yhdiste 5) synteesi 15 5 ml:aan n-butaanihappoanhydridiä suspendoitiin 100 mg SF2587-ainetta ja suspensioon lisättiin 70,6 mg vedetöntä natriumasetaattia 20 °C:ssa sekoittaen, jonka jälkeen seosta sekoitettiin 20 °C:ssa 27 tuntia. Reaktioseos kaadettiin 50 ml:aan jäävettä, neutraloitiin 0,1 mol/1 20 natriumhydroksidin vesiliuoksella ja uutettiin kahdesti 25 ml:n annoksilla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Natrium-sulfaatti poistettiin suodattamalla ja saatu kloroformi-liuos konsentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saa-25 tiin 3,8 g öljymäistä ainetta. Tuotteeseen lisättiin 20 ml n-heksaania ja supernatantti poistettiin suodattamalla, jolloin saatiin 129,6 mg oranssinväristä sakkaa. Sitten sakasta ajettiin silikageelipylväskromatografia käyttäen kloroformi/metanoli-seosta (tilavuussuhteessa 10:1) elu-30 ointiliuoksena, jolloin saatiin 78,8 mg raakatuotetta.

Raakatuote puhdistettiin geelikromatografisesti käyttäen SephadexR LH-20 -geeliä ja kloroformi/metanoli-seosta (tilavuussuhteessa 1:9) eluointiliuoksena. Saatu fraktio kiteytettiin kloroformi/metanoli-seoksesta (20:1), jolloin 35 saatiin 58,7 mg SF2587-aineen 3'-O-butyryylijohdannaista (yhdiste 5: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X = 19 90547 CH3CH2CH2CO-, Y = H) oranssinvärisinä, liuskamaisina kiteinä .

Sulamispiste 194 - 196 °C.

EI-MS: m/z 659 (M+) 5 1H-NMR (CDClj, ppm) : 8,03 s, 7,92 d, 7,82 d, 6,45 s, 5,52 d, 5,20 d, 4,30 dd, 3,37 d, 3,14 dq, 2,97 s, 2,91 dd, 2.45 dd, 2,40 s, 2,31 t, 1,94 s, 1,75 tq, 1,67 dd, 1,47 d, 1.46 d, 1,04 S, 1,02 t 10 Esimerkki 6 SF2587-aineen 3li-o-dibutyryylijohdannaisen (yhdiste 6) synteesi 4 mlraan pyridiiniä suspendoitiin 100 mg SF2587-ainetta ja suspensioon lisättiin tipoittain 2 ml n-butyy-15 rihappoannydridiä sekoittaen ja jäähdyttäen jäähauteessa. Kun lisäys oli tehty, sekoitusta jäähauteessa jäähdyttäen jatkettiin 30 minuuttia ja seosta sekoitettiin vielä 20 °C:ssa 40 tuntia. Reaktioseos kaadettiin 20 ml:aan jäävet-tä, jonka jälkeen seos uutettiin kahdesti 20 ml:n annok-20 silla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin, pestiin peräkkäin 20 ml:n annoksilla vettä (kolmesti) ja sitten 20 ml:11a kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Natriumsulfaatti poistettiin suodattamalla ja saatu kloroformiliuos kon-25 sentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin keltainen, öljymäinen aine. Kun ainetta oli kuivatettu alennetussa paineessa yli yön, jäännös vietiin silikageelipyl-vään läpi, pylväs pestiin tolueenilla ja eluoitiin peräkkäin tolueeni/asetoni-seoksilla (suhteessa 20:1, 10:1 ja 30 5:1), jolloin saatiin 105 mg keltaista SF2587-aineen 31,ll-O-dibutyryylijohdannaista (yhdiste 6: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X = CH3CH2CH2CO-, Y = CH3CH2CH2CO-) . [ot]D20 = +56,7° (c = 0,1, kloroformi) EI—MS: m/z 729 (M*) 35 UV MeOH nm (; ) : 240 (44430), 263 (42170), 362 (10570) !R v max KBr cm'1: 3430, 1760, 1730, 1670, 1650, 1590 20 90 547 1H-NMR (CDClj, ppm): 8,21 d, 8,05 d, 7,98 s, 6,45 s, 5,32 m, 5,23 d, 4,30 dq, 3,47 d, 3,13 dq, 2,96 s, 2,86 dd, 2,42 t, 2,41 t, 2,38 dd, 2,27 s, 1,92 tq, 1,91 s, 1,74 tq, 1,56 dd, 1,44 d, 1,41 d, 1,15 t, 1,02 s, 1,01 t 5 13C-NMR (CDClj, ppm): 181,9, 180,5, 178,9, 172,8, 172,0, 165,7, 155,7, 148,5, 146,4, 145,1, 135,3, 132,6, 132,6, 126,4, 125,7, 125,4, 125,2, 121,5, 110,5, 75,4, 70,5, 64.2, 63,6, 57,9, 57,4, 55,6, 51,6, 42,9, 39,2, 36,6, 36.3, 23,9, 18,6, 18,0, 17,2, 14,7, 141,1, 14,0, 13,9, 10 13,7

Esimerkki 7 SF2587-aineen 3'-O-isobutyryylijohdannaisen (yhdiste 7) synteesi 15 2 ml:aan isobutaanihappoanhydridiä suspendoitiin 20.7 mg SF2587-ainetta ja suspensioon lisättiin 14,4 mg vedetöntä natriumasetaattia sekoittaen 20 °C:ssa, jonka jälkeen suspensiota sekoitettiin tuossa lämpötilassa 43 tuntia. Reaktioseos kaadettiin 20 ml:aan jäävettä, neutra- 20 loitiin 0,1 mol/1 natriumhydroksidin vesiliuoksella ja uu tettiin kahdesti 10 ml:n annoksilla kloroformia. Klorofor-mikerros pestiin peräkkäin 20 ml:11a vettä ja 20 ml:11a kyllästettyä natriumsulfaattia. Kun natriumsulfaatti oli poistettu suodattamalla, saatu kloroformiliuos konsentroi-25 tiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 659,6 mg öljy-mäistä ainetta. Tuotteeseen lisättiin 20 ml n-heksaania ja supernatantti erotettiin suodattamalla, jolloin saatiin 19.7 mg oranssinväristä sakkaa. Sakasta ajettiin silika-geelipylväskromatografia käyttäen kloroformi/metanoli- 30 seosta (tilavuussuhteessa 10:1) eluointiliuoksena, jolloin saatiin 5,1 mg oranssinväristä SF2587-aineen 3-O-isobuty-ryylijohdannaista (yhdiste 7: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X = (CH3)2CHCO-, Y = H) .

EI-MS: m/z 659 (M+) 2i 90547

Esimerkki 8 SF2587-aineen 3',ll-O-di-isobutyryylijohdannaisen (yhdiste 8) synteesi 4 mlraan pyridiiniä suspendoitiin 200 mg SF2587-5 ainetta ja suspensioon lisättiin tipoittain 2 ml isobutaa-nihappoanhydridiä sekoittaen ja jäähdyttäen jäähauteessa. Tämän jälkeen sekoitusta jäähauteessa jäähdyttäen jatkettiin 30 minuuttia ja seosta sekoitettiin 20 °C:ssa vielä 43 tuntia. Seokseen lisättiin 10 mg dimetyyliaminopyridii-10 niä ja sekoitettiin 20 °C:ssa 6,5 tuntia. Reaktioseos kaadettiin 20 mliaan jäävettä ja seos uutettiin kahdesti 25 ml:n annoksilla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin, pestiin peräkkäin 30 ml:n annoksilla vettä (kolmesti) ja 30 ml:11a kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta ja kui-15 vattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Kun natrium-sulfaatti oli poistettu suodattamalla, saatu kloroformi-liuos konsentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin keltainen, öljymäinen aine. Raakatuote kuivattiin alennetussa paineessa yli yön, jonka jälkeen se puhdistet-20 tiin käyttäen silikageelipylväskromatografiaa ja ensin kloroformia ja sitten kloroformi/metanoli-seosta 100:1 (tilavuussuhteena) eluointiliuoksena, jolloin saatiin 182,6 mg keltaista SF2587-aineen 3' , 11-O-di-isobutyryyli-johdannaista (yhdiste 8: kaavan (I) mukainen yhdiste, jos-25 sa X = (CH3)2CHCO-, Y = (CH3) 2CHCO-) .

EI-MS: m/z 729 (M+) .

Esimerkki 9 SF2587-aineen 311-0-divaleryylijohdannaisen (yhdiste 9) synteesi 30 8 ml:aan pyridiiniä suspendoitiin 200 mg SF2587- ainetta ja suspensioon lisättiin tipoittain 4 ml n-valee-rihappoanhydridiä sekoittaen ja jäähdyttäen jäähauteessa. Tämän jälkeen sekoitusta jäähauteessa jäähdyttäen jatkettiin 30 minuuttia ja seosta sekoitettiin vielä 20 °C:ssa 35 47 tuntia. Reaktioseos kaadettiin 30 ml:aan jäävettä, jon- 22 9 0 5 4 7 ka jälkeen se uutettiin kahdesti 30 ml:n annoksilla kloroformia. Kloroformikerros erotettiin, pestiin kolmesti 30 ml:n annoksilla vettä ja sitten 30 ml:11a kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän nat-5 riumsulfaatin päällä. Kun natriumsulfaatti oli poistettu suodattamalla, saatu kloroformiliuos konsentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin 2,40 g öljymäistä ainetta. Tuotteeseen lisättiin 30 ml n-heksaania ja superna-tantti erotettiin suodattamalla, jolloin saatiin 301,8 mg 10 oranssinväristä sakkaa. Sakka puhdistettiin käyttäen sili-kageelipylväskromatografiaa ja kloroformia eluointiliuok-sena, jolloin saatiin 154,5 mg keltaista SF2587-aineen 3',11-0-divaleryylijohdannaista (yhdiste 9: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X = CH3(CH2)3CO- ja Y = CH3 (CH2)3CO-) . 15 EI-MS: m/z 757 (M+) .

Esimerkki 10 SF2587-aineen ll-O-butyryylijohdannaisen (yhdiste 10) synteesi 2 ml pyridiiniä lisättiin liuokseen, joka sisälsi 20 102 mg SF2587-ainetta 5 ml:ssa dikloorimetaania, ja liuok seen lisättiin 5 ml n-butyryylikloridin dikloorimetaani-liuosta huoneen lämpötilassa sekoittaen. Seokseen lisättiin vielä 8 mg dimetyyliaminopyridiiniä, jonka jälkeen seosta sekoitettiin 25 °C:ssa 24 tuntia. Reaktioseos kaa-25 dettiin 20 ml:aan jäävettä ja uutettiin kahdesti 10 ml:n annoksilla dikloorimetaania. Dikloorimetaanikerros erotettiin, pestiin kahdesti 10 ml:n annoksilla vettä ja sitten 20 ml:11a kyllästettyä natriumkloridin vesiliuosta ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaatin päällä. Natriumsul-30 faatti poistettiin suodattamalla ja saatu dikloorimetaani- liuos konsentroitiin alennetussa paineessa, jolloin saatiin kellertävänruskea, öljymäinen aine. Aine kuivattiin alennetussa paineessa yli yön ja puhdistettiin silikagee-lipylväskromatografisesti käyttäen ensin kloroformia ja 35 sitten kloroformi/metanoli-seosta 20:1 (tilavuussuhteessa) I.

23 90547 eluointiliuoksina, jolloin saatiin 35,9 mg keltaista SF2587-aineen 11-O-butyryylijohdannaista (yhdiste 10: kaavan (I) mukainen yhdiste, jossa X = H ja Y = CH3CH2CH2CO). EI-MS: m/z 659 (M+) 5 ’h-NMR (CDCIj, ppm) : 8,18 d, 7,96 s, 7,95 d, 6,42 s, 5.37 m, 4,19 m, 3,75 d, 3,37 d, 3,10 tq, 2,93 s, 2,84 dd, 2,40 s, 2,28 t, 1,94 m, 1,89 s, 1,87 m, 1,64 tq, 1,41 d, 1.37 d, 1,12 s, 0,95 t

Claims (4)

1. 24 90547 Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisen 4H-antra-[1,2-b]-pyraanijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaa-
2. 5 Va CH, C* V °nJw CHn /CH3 CH3\LX 1,1 10 3\ / -> is J N ru
3. 3 U (I) 'τη ΐ 0 0 ί’ 5h3 15 ’Wfc»3 o “ 3 jossa X ja Y ovat vetyatomi tai ryhmä RCO-, jossa R on 1 -4 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, sillä edellytyksel-20 lä, etteivät ne samanaikaisesti ole vetyatomeja, tunnettu siitä, että kaavan (II) mukaisen yhdisteen CH- pj 25 0\ ch, cH-, y 3\ / 3 CH3\/^ N ΓΗ (II) HOyS °H o 30 ch3^ °VrY>r ° CH3 0 annetaan reagoida asyloivan aineen kanssa emäksen läsnäol-35 lessa. I. 25 90547
4. 1. Förfarande för framstälining av ett terapeutiskt användbart 4H-antra[1,2-b]-pyranderivat med formeln (I) 5 19 CH. & n °\ 10 CH CH CH \ / J\ / j 15 J ίί (I) N ^ CH, XO ''Xf*' nv 1 >| I o o "Cp 15 ?H3 ? A. JL /X ch, "o “ 3 väri X och Y är en väteatom eller en grupp RCO-, väri R är 20 en alkylgrupp med 1-4 kolatomer, förutsatt att de inte samtidigt är väteatomer, kännetecknat därav, att man liter föreningen med formeln (II) CH o>| 25 0\ ch. ch, y / TT \ 3 \ / 3 CH3\/^ 11 3° xi°\ CU3^° J CH 0 35 reagera med ett acyleringsmedel i närvaro av en bas.