FI84075C - Foerfarande foer framstaellning av nya antracykliner. - Google Patents

Description

84075

Menetelmä uusien antrasykliinien valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien antrasykliiniglykosidi-johdannaisten valmistamiseksi.

Tämän keksinnön mukaisesti saadaan antrasykliiniglykosi-deja, joilla on kaava (II)

0 OH

CH3O 6 OH

•ivj

OH

(II a ,b)

a: Rx = H b: Rx = H

jossa Rj tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyliryhmää, ja näiden farmaseuttisesti hyväksyttäviä happoadditiosuoloja.

Kun saatetaan 3'-epi-daunorubisiinin (III) [F.Arcamone, A.Bargiotti, G.Cassinelli; DE-patentti 2752115 (1. kesäkuuta 1978)] 3'-aminoryhmä reagoimaan salisyylialdehydin kanssa veden ja asetonin seoksessa huoneen lämpötilassa, saadaan vastaava 3'-epi-N-salisylideenijohdannainen (IVc), joka käsittelemällä trifluorimetaanisulfonihappoanhydri-dillä vedettämässä metyleenikloridissa ja pyridiinin läsnäollessa tuottaa vastaavan 3'-epi-N-salisylideeni-4'-0-trifluorimetaanisulfonaatin (IVd). Tämä yhdiste liuotettuna metanoliin voidaan sen jälkeen saattaa alttiiksi sali-sylideeni-suojaryhmän happohydrolyysille p-tolueenisulfo-nihapolla huoneen lämpötilassa, jolloin saadaan trifluori- 2 84075 metaanisulfonaatti-poistoryhmän korvaamisen kautta, toivottu kaavan (Ia) mukainen yhdiste.

CH30 o OH .1 ·<& 3’ (Ia) Käsittelemällä saatu 31,41-epi-imino-daunorubisiinijohdan-nainen (la) trifluorietikkahappoanhydridillä saadaan vastaava, kaavan (Vili) mukainen N-trifluoriasetyylijohdannainen. Tämän yhdisteen reaktio katalyyttisen määrän kanssa rikkihappoa asetonissa tuottaa 41-deoksi-4'-epi-N-tri-fluoriasetyyli-3'-deamino-3'-hydroksi-daunorubisiinin (VIII), josta käsittelemällä vesipitoisella natriumhydroksidilla saadaan kaavan (Ha) mukainen yhdiste. Tyypillisesti N-tri-fluoriasetyyliryhmä voidaan poistaa lievällä alkalisella hydrolyysillä lämpötilassa, joka on 0 °C 0,1 N vesipitoisella natriumhydroksidilla. Kaavan (Ha) mukainen glykosi-di voidaan eristää hydrokloridinaan käsittelemällä kloori-vedyllä metanolissa.

Kaavan (Hb) mukainen yhdiste voidaan valmistaa bromaamal-la kaavan (Ha) mukainen yhdiste, jonka jälkeen muodostunut 14-bromijohdannainen käsitellään vesipitoisella nat-riumformiaatilla huoneen lämpötilassa menetelmällä, joka on esitetty US-patenttijulkaisussa No 3,803,124. Se voidaan myös eristää hydrokloridinaan samalla tavalla kuin kaavan (Ha) mukainen glykosidi.

Keksinnön mukaiset menetelmät on koottu kaikki jäljempänä esitettyyn reaktiokaavioon.

3 84075

Erityisesti keksinnön mukaisesti valmistettavat yhdisteet ovat käyttökelpoisia kasvaimia estävinä aineina.

Reaktlokaavlo O ?H O OH O Oh

CH40 o oh ^ „ ___ CHjO O OH q CHj° o OH J

NH, I _ NR. I ~„ 9

H0 (UI) B> (ivc-d) '' (|J

O OH O OH

(ϋΛέπο

--cjY^V

^ CVOH^Z^T1

V— HO

(vui) (v#0

c R2: oOHC6H4CH= R3: OH

d R2: oOHC6H4CH= R3: 0S02CF3 i R4: COCF3

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

ESIMERKKI 1 3’-epi-N-salisylideeni-daunorubisiini (IVc)

Liuosta, jossa oli 2 g 3’-epi-daunorubisiinia (III) seoksessa, jossa oli 80 ml vettä ja 20 ml asetonia, käsiteltiin huoneen lämpötilassa 0,5 ml:11a salisyylialdehydiä pH-ar-vossa 8. 10 minuutin kuluttua lisättiin etyyliasetaattia 4 84075 ja orgaaninen faasi erotettiin, pestiin vedellä kaksi kertaa, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin tyhjössä.

Jäännös hierrettiin ensin heksaanin kanssa salisyylialde-hydin jäännösten poistamiseksi, sen jälkeen kerättiin ja kuivattiin tyhjössä 30 °C:ssa, saatiin kaavan (IVc) mukainen yhdiste melkein kvantitatiivisella saannolla. Ohutle-vykromatografisesti (TLC) Rf = 0,21 käytettäessä Kieselgel F 254 (Merch)-levyä ja eluointlaineena liuotinseosta CH2Cl2-asetoni (8/2, til./til.).

ESIMERKKI 2 3'-deamino-41-deoksi-3'-epi-4'-epi-3',41-epi-imino-dauno-rubisiini (Ia)

Liuokseen, jossa oli 2 g 3'-epi-N-salisylideeni-daunorubi-siinia (IVc) 20 ml:ssa vedetöntä dikloorimetaania ja 2 ml: ssa kuivaa pyridiiniä -10 °C:ssa, lisättiin liuos, jossa oli 0,8 ml trifluorimetaanisulfonihapon anhydridiä 10 ml: ssa dikloorimetaania. Yhden tunnin jälkeen -10 °C:ssa seos laimennettiin dikloorimetaanilla ja pestiin vedellä, kylmällä 0,1 M kloorivetyhapolla, kylmällä vesipitoisella, 5-prosenttisella natriumvetykarbonaatilla tai vedellä. Orgaaninen faasi kuivattiin vedetttömällä natriumsulfaatilla, suodatettiin ja liuotin poistettiin tyhjössä, saatiin kaavan (IVd) mukainen yhdiste. Ohulevykromatografisesti (TLC) Rf oli 0,50 käytettäessä Kieselgel F 254 (Merch)-levyä ja eluointiaineena liuotiseosta Cl^C^-asetoni (95/5 til./ til.).

Raakatuote liuotettiin 50 ml:aan metanolia ja lisättiin 0,2 g p-tolueenisulfonihappomonohydraattia. Liuosta pidettiin huoneen lämpötilassa 1 tunti, sen jälkeen lisättiin 100 ml vettä ja uutettiin pienellä määrällä dikloorimetaa- 5 84075 nia. Vesipitoisen faasin pH säädettiin 0,1 M natriumhyd-roksidilla arvoon 8 ja lisättiin dikloorimetaania. Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin vedellä, kuivattiin vedettömällä natriumsulfaatilla ja liuotin haihdutettiin pieneen tilavuuteen.

Seos puhdistettiin kromatografisesti piihappogeelipylvääs-sä, joka oli puskuroitu pH-arvoon 7, käyttäen eluenttina dikloorimetaani-etanolia. Tuotteen (Ia) sisältävä eluaatti pestiin vedellä, haihdutettiin tyhjössä, otettiin talteen pieneen määrään dikloorimetaania ja kiteytettiin. FD MS 509 [M+]; sul.p. 135-137 °C. Rf = 0,38 TLC:ssä Kieselgel F 254 (Merck), eluointiaineena seos CH2CI2-CH3OH-CH3COOH-H20 (30/4/1/0,5 til./til.).

1H-NMR (200 MHz, CDCI3): 8,02 (dd, J = 1,1, 7,7 Hz, 1H, H-l) 7,76 (dd, J = 7,7, 7,7 Hz, 1H, H-2) 7,37 (dd, J = 1,1, 7,7 Hz, 1H, H-3) 5.31 (dd, J = 3,0, 4,8 Hz, 1H, H-l') 5.17 (dd, J = 2,0, 3,6 Hz, 1H, H-7) 4.32 (gd, J = <1, 6,7 Hz, 1H, H-5') 4,07 (S, 3H, OCH3-4) 3.17 (dd, J = 19,2 Hz, 1H, H-lOe) 2,95 (d, J = 19,2 Hz, 1H, H-lOax) 2,46 (ddd, J = 2,0, 2,0 15,0 Hz, 1H, H-8e) 2.43 (s, 3H, COCH3) 2,30 (ddd, J = 1,5, 4,3, 6,4 Hz, 1H, H-3') 1,9-2,0 (m, 2H, H-8ax, H-2'ax) 1,87 (ddd, J = 1,5, 3,0, 14,6 Hz, H-2'e) 1.44 (d, J = 6,7 Hz, 3H, CH3-5')· 6 84075 ESIMERKKI 3 3'-deamino-4'-deoksi-3'-hydroksi-4'-epi-4'-amino-daunoru-bisiini (Ha)

Otsikossa mainittu yhdiste valmistettiin lähtemällä kaavan (Ia) mukaisesta atsiridiinista. 1 g kaavan (Ia) mukaista yhdistettä muutettiin N-trifluoriasetyylijohdannaiseksi (Vili) käsittelemällä 1,2 ml:11a trifluorietikkahappoan-hydridiä vedettömässä metyleenidikloridissa. Jatkotyöskentelyn jälkeen raakatuote (TLCtssä Rf-arvo 0,7 käytettäessä Kieselgel F 254 (Merck)-levyä, eluointiaineena liuotinseos CH2Cl2-asetoni (4/1, til./til.)] liuotettiin 20 ml:aan asetonia ja käsiteltiin katalyyttisellä määrällä rikkihappoa 10 °C:ssa.

Seos laimennettiin 200 ml :11a metyleenidikloridia, pestiin vedellä, vesipitoisella 5-prosenttisella natriumvetykarbo-naatilla ja vedellä. Liuotin poistettiin tyhjössä ja jäännös puhdistettiin piihappogeelipylväässä käyttäen eluointiaineena metyleenidikloridia, saatiin 0,7 g puhdasta yhdistettä (Vili).

TLC:ssä Rf-arvo 0,21, käytettäessä Kieselgel F 254 (Merck)-levyä, eluointiaineena liuotinseos C^C^-asetoni (4/1, til./til.).

Kaavan (Vili) mukainen tuote liuotettiin hitaasti vesipitoiseen 0,1 N natriumhydroksidiin 0 °C:ssa N-trifluoriase-tyylisuojaryhmän hydrolyysin suorittamiseksi. Tunnin kuluttua 0 °C:ssa liuoksen pH säädettiin arvoon 8,6 käyttämällä 0,1 N kloorivetyhappoa ja uutettiin metyleenidiklo-ridilla. Liuotin haihdutettiin, saatiin 0,5 g:n jäännös, joka muutettiin käsittelemällä metanolisella kloorivedyllä 41-deoksi-4'-amino-4'-epi-3'-deamino-3'-hydroksi-daunorubi-siinin hydrokloridiksi (Ha). MS FD 527 [M+]; sul.p. 153 ° C (haj.).

7 84075 TLC:ssä Rf-arvo 0,18 käyttäessä Kieselgel F 254 (Merck)-levyä, eluointiaineena liuotinsysteemi CH2CI2-CH3OH-CH3-C00H-H20 (30/4/1/0,5 til./til.).

1H-NMR (200 MHz, CDCl3): 8,02 (dd, J = 0,9, 8,5 Hz, 1H, H-l) 7,77 (dd, J = 8,5, 8,5 Hz, 1H, H-2) 7,38 (dd, J = 0,9, 8,5 Hz, 1H, H-3) 5,52 (dd, J = <1, 4,0 Hz, 1H, H-l') 5,28 (dd, J = 1,8, 4,0 Hz, 1H, H-7) 4,07 (S, 3H, OCH3-4) 3.69 (dg, J=6,3, 9,5 Hz, 1H, H-5') 3,51 (ddd, J=4,8, 9,5, 11,6 Hz, 1H, H-3') 3,22 (dd, J = 1,9, 18,9 Hz, 1H, H-lOe) 2,94 (d, J = 18,9 HZ, 1H, H-lOax) 2,40 (s, 3H, COCH3) 2,2-2,4 (m, 1H, H-8ax) 2.30 (dd, J=9,5, 9,5 Hz, 1H, H-4’) 2,0-2,2 (m, 2H, H-8e, H-2'e) 1.70 (ddd, J = 4,0, 4,6, 13,2 Hz, 1H, H-2'ax) 1.31 (d, J= 6,3 Hz, 3H, CH3-5').

ESIMERKKI 4 3'-deamino-3'-hydroksi-4'-deoksi-4'-epi-4'-amino-doksoru-bisiini (Hb) 0,5 kaavan (Ha) mukaista yhditettä liuotettiin metanolin ja dioksaanin seokseen. Liuos käsiteltiin kuten US-paten-tissa No 3,803,124 on kuvattu, ensin bromilla 14-bromijoh-dannaisen valmistamiseksi ja sen jälkeen vesipitoisella natriumformiaatilla otsikossa mainitun yhdisteen valmistamiseksi .

Tämä muutettiin hydrokloridikseen käsittelemällä metanoli-sella kloorivedyllä.

8 84075 FD MS 543 [M+], TCL Kieselgel F 254 (Merck)-levy, liuotin-systeeminä CH2Cl2-CH30H-CH3-C00H-H20 (30/4/1/0,5 til./ til.), Rf-arvo 0,10.

BIOLOGINEN AKTIIVISUUS

Keksinnön mukaisesti valmistettavien, kaavan Ha mukaisten uusien antrasykliiniglykosidien sytotoksinen aktiivisuus testattiin "in vitro" HeLa-soluja, P388-, P388/DX-, LoVo-ja LoVo/DX-soluja vastaan.

Altistusaika yhdisteelle: 24 tuntia/vertailu daunorubisii-niin.

Tulokset esitetty taulukossa l.

Yhdisteet, testattaessa "in vivo" P388-askiittileukemiaa ja Gross-leukemiaa vastaan, osoittivat hyvää kasvaimia estävää aktiivisuutta verrattuna daunorubisiiniin, erityisesti annostettaessa oraalisesti.

Tulokset on annettu taulukoissa 2 ja 3.

9 84075

<*- X I

o :o — o o 4-> o cnj ro +j > oo cg :<o o ε —I qj f— c QJ o +-> r— p» +j o <u o ·ι- o > n ix ιλ o «a· ro :ro e _· X to e ^ (O 3 3 .—. e rc ·— — Ό X 3 '— o to O 4J «Ί x, o m +-> +-> :<o oo ro ro ίο 3 cl c: ·—. co γ-l <vi i_ r— :o •r· r— ro ^ o C ε O- O) m m •r- x > :«j m •I- σ> Cl ro ιλ c :ro :o -n r— w 1/1 >,3 _q ^—. en l/ι ro 3ου :to co *— S- m 00 mm s- <0 00 00 » *> :ro -e e ci-iro o «o- :ro 3 <u 3 Cl. *- CVJ ε +J rO >— <0 3 3 s- o το zk; ·— 3

1 3 O e M

0 1— in QJ e: C +-> ro I— 3 •1- e: 3-r-o 1/1 ε qj r- ε 3

rö p» "t-j O <U m <tJ

1 .o 3 vt .x e a.

o m <n«— 1— ro 3 3 X «J- _l L— V- o 4-» n— <u on e: xi ai m 3 ε >— x <u 3) v- C 3C p QJ ro ‘Λ _J Q. IrO e O -X CO ex ·-“

3) <D :tö QJ on 3 CO E

«C » · · 1/1 :to QJ ro e -e J— - Oi -r- Q. r— CC QJ ··“ «o- Z E :o in 10 aj >> co 4-> V-

•f- C l/> 00 ·!- E

tn 10 qj 1 ro +-> -e +-*

X C 1— = Q-C-r-C

0 3 <0 Ό <U <U

J_ +J -1- 4-> +j +j +-1 -o +j e o :<o «n :ro m >,10 ·«- -* ·Γ- X -r-

JZ S- m r- l. ITI l. nn W

IL. O QJ OJ OJ QJ M Q> - qj m jz -Sz u sz 1— u ro > e +j ·—

1 ro ··-·<- QJ QJ OJ QJ QJ

•f- I/) rO J= Q. 1—· 1— 1— O1— m 3 +j T- QJ p· 1— I— r- X 3 e QJ *r- *r— 't— «o *“ ow iopXccc:ec QJ τ- P- >r ·«-* T- ·— O "r· Ό > ai 10 ο > ·ι- ·»- ·- e ,r- I f- +J χν.$-ΙΛΙΛιΛ·ΡΜ - *τ— in o +* Q 'n 'r- 'n U *r

»Q-+J <1- •'-jCOjOJO-QU -Q

I X TO O 3 3 3 ro 3

OSJ JC. «XCUUUuU

C >· M 10 O Ο O O O

•r- o οοειηι/iinc: m

EU C *r- 3 χ X X QJ

ro -P CT-3ZOOOO O

QJ *r- rO E — TO Ό VJ fO "O

Ό > OC ro

I Z M " · ' ' PL ' L PL PL

-C Opi ra JO O TD QJ >4- ΓΟ <r- 10 84075 TAULUKKO 2

Vaikutus P388 askiittileukemiaa5 vastaan b c d

Yhdiste annos T/C% myrkytys kuolemat DNR 2,9 155 0/10 4.4 170 8/10 FCE 24782/ XOO-0333 1,96 155 0/10 2,9 150 0/10 4.4 140 9/10 6,6 100 10/10 aKokeet suoritettiin CDF^-hiirillä, joihin siirrostettiin 106 leukemiasolua i.p.

bKäsittely i.p. yksi päivä kasvainsiirrostuksen jälkeen cKäsiteltyjen hiirien keskimääräinen elinaika/kontrollien keskimääräinen elinaika x 100 ^Arvioitu ruumiinavaushavaintojen perusteella.

11 84075 TAULUKKO 3

Vaikutus Gross-leukemiaaa vastaan bed Yhdiste annos T/C% myrkytys- mg/kg kuolemat DNR 10 165 0/20 15 192 2/20

Ila 8,2 175 0/20 11.5 230 0/10 16,1 240 0/10 22.5 130 0/10 aKokeet suoritettiin CH3~hiirillä, joihin siirrostettiin 2 x 10® 1eukemiasolua i.v.

käsittely i.v. yksi päivä kasvainsiirrostuksen jälkeen käsiteltyjen hiirien keskimääräinen elinaika/kontroll 1-hiirien keskimääräinen elinaika x 100 ^Arvioitu ruumiinavaushavaintojen perusteella.

Claims (6)

1. Menetelmä yleisen kaavan II mukaisten antrasykliinigly-kosidien valmistamiseksi

0 OH CH-0 0 OH 1 'φ OH (II) jossa kaavassa tarkoittaa vetyatomia tai hydroksyyli-ryhmää, ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävien happoad-ditiosuolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) 3'-amino-3’-epi-daunorubisiini, liuotettuna veden ja asetonin seokseen, saatetaan reagoimaan salisyylialdehydin kanssa, b) näin saatu vastaava 3'-epi-N-salisylideenijohdannainen saatetaan reagoimaan trifluorimetaani-sulfonihappoanhydri-din kanssa vedettömässä dikloorimetaanissa ja kuivan pyri-diinin läsnäollessa, c) näin saadulle 3'-epi-N-salisylideeni-4'-O-trifluorime-taanisulfonaatille, liuotettuna metanoliin, suoritetaan salisylideenisuojaryhmän happohydrolyysi huoneenlämmössä p-tolueenisulfonihapolla, d) näin saatu 3'-deamino-4'-deoksi-3'-epi-4'-epi-3',4'-epi-imino-daunorubisiini muutetaan käsittelemällä trifluo-rietikkahappoanhydridillä, i3 84075 e) näin saatu vastaava N-trifluoriasetyylijohdannainen saatetaan reagoimaan katalyyttisen määrän kanssa rikkihappoa, f) näin saadulle 4'-deoksi-4'-epi-N-trifluoriasetyyli-31 -deamino-3'-hydroksi-daunorubisiinille suoritetaan 0 eC:ssa N-suojaryhmän lievä alkalinen hydrolyysi.

2. Patenttivaatimuksen l mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että saatu kaavan II mukainen yhdiste, jossa R-L tarkoittaa vetyatomia, edelleen käsitellään metanoli-sella kloorivedyllä ja tuote eristetään vastaavana hydro-kloridina.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että saatu hydrokloridi muutetaan 14-bromijoh-dannaiseksi saattamalla se reagoimaan bromiliuoksen kanssa, ja saatu 14-bromijohdannainen hydrolysoidaan käyttäen natriumformiaatin vesiliuosta.

4. Patenttivaatimuksen 3 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että kaavan II mukainen yhdiste, jossa Rj^ on hydroksyyliryhmä, saadaan vapaana emäksenä.

5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, tunnet-t u siitä, että lisäksi suoritetaan vaihe, jossa saatu vapaa emäs muutetaan vastaavaksi hydrokloridiksi.

6. 3'-deamino-4'-deoksi-3'-epi-4'-epi-3',4'-epi-imino-dau-norubisiini. i4 84075