FI83086B

FI83086B - Foerfarande foer framstaellning av komplex med tumormotverkande effekt.

Info

Publication number: FI83086B
Application number: FI863599A
Authority: FI
Inventors: Yukio Sugimura; Toshihiko Hashimoto; Yukiko Kameyama; Fusaaki Shimizu; Kouichi Kitamura
Original assignee: Sankyo Co
Priority date: 1985-09-06
Filing date: 1986-09-05
Publication date: 1991-02-15
Also published as: DK166825B1; HUT41808A; EP0214862A2; KR890004351B1; AU581101B2; NO172184B; AU6241586A; HU196606B; FI863599A; ATE61560T1; CA1281327C; NO863553L; EP0214862B1; JPH0655752B2; FI83086C; CN1016345B; ES2001669A6; JPS62149692A; KR870003129A; NO172184C

Description

83086 1 Menetelmä kasvaimia estävien kompleksien valmistamiseksi Förfarande för framställning av komplex med tumormot-verkande effekt 5

Esilläoleva keksintö koskee sarjaa uusia kvadrikoordinoidun kaksiarvoisen platinan komplekseja. Sellaisilla komplekseilla on arvokasta 10 kasvaimia estävää aktiivisuutta ja parempi liukoisuus kuin tunnetuilla kasvaimia estävillä platinayhdisteillä ja komplekseilla. Keksintö aikaansaa myös prosessin näiden kompleksien valmistamiseksi ja niitä käyttäviä menetelmiä ja seoksia.

15 Syöpäperäiset häiriöt ovat suuri lääketieteellinen ongelma ja ne ovat usein vaikeita parantaa. Tähän on pääsyynä se, että erot kasvainso-lujen ja normaalien solujen välillä ovat yleensä äärimmäisen pieniä, jonka seurauksena kasvainsoluille myrkylliset yhdisteet ovat myrkyllisiä myös normaalisoluille. Syöpäperäisten häiriöiden hoito kemial-20 lisillä aineilla on yleensä riippuvainen hyvin rajoitetuista eroista kasvainsolujen ja normaalien solujen vastaanottavuudessa kasvaimia estäville aineille.

j : Erilaisilla platinayhdisteillä on tunnetusti kasvaimia estäviä vaiku- ;· 25 tuksia. Esimerkiksi cisplatiinia [Rosenberg et ai, Nature 222. 385 (1965) ja Merck Index, 10. painos (1983) monografia 2289] on menestyksellisesti käytetty kasvaimien käsittelyssä ja malonato(l,2-diamino-sykloheksaani)platina(II):a [esim. US-patentti N:o 4 169 846 ja Kidan! £t ai, Gann, 71, 637-643 (1980)] on ehdotettu sellaiseen 30 käyttöön. Molemmilla yllämainituilla platinakomplekseilla on jonkinlaista rakenteellista samankaltaisuutta keksinnön yhdisteiden kanssa. '··· Eräs toinen äsekttäin kasvaimien käsittelyyn saataville tullut, tosin rakenteellisesti vähemmän samanlainen kuin esilläolevan keksinnön yhdisteet, on karboplatina [Drugs of the Future, Voi. 8, No. 6, s.

... 35 489-491 (1983)]. Kuitenkin useimmilla tunnetuilla platinakomplekseilla, • · mukaanlukien edellä viitatut, on korkea munuaismyrkyllisyys ja huono : liukoisuus veteen, joka tekee vaikeaksi formuloida niitä sopivaan 2 83086 ^ liukoisuus veteen, joka tekee vaikeaksi formuloida niitä sopivaan annostusmuotoon.

Olemme nyt keksineet sarjan uusia platinakomplekseja, joilla on hyvä 5 kasvaimia estävä aktiivisuus mutta suhteellisen vähän sivuvaikutuksia kuten munuaismyrkyllisyyttä ja luuydinkatoa ja joilla on hyvä liukoisuus veteen.

Esilläolevan keksinnön yhdisteet ovat kvadrikoordinoituja kaksiarvoisia 10 platinakomplekseja syklisten ureajohdannaisten kanssa kaavan (I) edustaessa mainittuja komplekseja: Γ 0 I* T® I /pk il T ΙχΡ >11/0 (I1

HN Oi L

20 L

missä: A tarkoittaa alkyleeniryhmää, jossa on 2*5 hiiliatomia; 25 0----c----N tarkoittaa O-C-N tai 0-C-N; ΐΛ ja ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tarkoittaa neutraalia ligandia tai yksiarvoista tai kaksiarvoista anionla, tai ΐΛ ja on 30 kytketty yhteen muodostamaan yksiarvoinen anioni, kaksiarvoinen anioni tai kaavan (II) ryhmä: ( <n> ; i 3 83086 ^ missä A ja O----C----N ovat kuten edellä on määritelty; XP' tarkoittaa anionia, jolla on valenssi e; ja 5 n on 0, 1, 2 tai 3.

Esilläolevan keksinnön yhdisteet voidaan valmistaa saattamalla platina-kompleksi, jolla on kaava (III): 10 „ CC X, ™" jossa: 20 XP' on kuten edellä on määritelty; n' on 0, 1 tai 2; ja Y ja Y' ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tarkoittaa vettä,

nitraatti-ionia, hydroksidi-ionia tai perkloraatti-ionia tai Y

: ja Y’ on kytketty yhteen tarkoittamaan sulfaatti- tai karbo naatti-ionia tai ryhmää, jolla on kaava (IV): 30 35 H 1 4 83086 ^ reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava (V):

H

5 0=C<( A (V) ΊΚ

H

(jossa A on kuten edellä on määritelty).

10

Keksintö aikaansaa edelleen seoksen, joka käsittää kasvaimia estävän aineen ja farmaseuttisesti hyväksyttävän kantoaineen tai laimentimen, jolloin kasvaimia estävä aine on valittu ryhmästä, joka käsittää kaavan (I) yhdisteet.

15

Keksintö aikaansaa edelleen menetelmän kasvaimesta kärsivän eläimen, edullisesti nisäkkään (ihmiset mukaanlukien) käsittelemiseksi, joka menetelmä käsittää sen, että mainitulle eläimelle annetaan tehokas määrä kasvaimia estävää ainetta, jolloin mainittu kasvaimia estävä 20 aine on valittu ryhmästä, joka käsittää kaavan (I) yhdisteet.

Esilläolevan keksinnön yhdisteissä on ainakin yksi ligandi, joka on syklinen kaavan (II) ureajohdannainen ja siinä voi riippuen Laille ja L^'.lle annetuista merkityksistä olla kaksi sellaista ligandia. Tässä 25 ligandissa tai näissä ligandeissa uskotaan kiinnittymisen yhteen platina-atomeista tapahtuvan -NH-ryhmän typpiatomin kautta ja kiinnittymisen toiseen platina-atomiin tapahtuvan ryhmän O----C----N typpi- tai happiatomin kautta.

Ryhmä Q----C----N voi tarkoittaa kaavan O-C-N" tai 0'-C-N ryhmää tai näiden kahden rakenteen resonanssihybridiä, jossa negatiivinen varaus on jakautunut koko ryhmään.

A tarkoittaa alkyleeniryhmää, jossa on 2-5 hiiliatomia, joka ryhmä voi 35 olla suoran tai haarautuneen ketjun ryhmä. Kaksi alkyleeniryhmän "vapaata" valenssia voivat olla ja edullisesti ovat kiinnittyneinä eri 5 83086 ^ hiiliatomeihin tai ne voivat olla kiinnittyneinä samaan hiiliatomiin (jossa tapauksessa ryhmää toisinaan nimitetään "alkylideeni" ryhmäksi). A:n tarkoittama ryhmä on edullisesti α,ω-alkyleeniryhmä, jossa on ainakin kahden hiiliatomin suora ketju, joka ketju on substituoimaton 5 tai siinä on ainakin yksi alkyylisubstituenttl, edellyttäen että hiiliatomien kokonaismäärä mainitussa ketjussa ja mainitussa alkyylisubstituentissa tai substituenteissa ei ylitä 5. Esimerkkejä sellaisista ryhmistä ovat: -(CH2)2-; CH3-CH<; -CH(CH3)CH2-; -CH(CH3)CH(CH3)-; -(CH2)3-; 10 -CH(CH3)CH2CH2-; -CH2CH(CH3)CH2-; -CH(CH3)CH(CH3)CH2-; -CH(CH3)CH2CH(CH3)-; -(CH2)4-; -CH(CH3)CH2CH2CH2-; ja -(CH2)5. Näistä suosittelemille kaavojen -(CH2)2- ja -(CH2)3- ryhmiä.

Kun ΐΛ tai L2 tarkoittaa neutraalia ligandia, tämä on edullisesti 15 vesimolekyyli H20. Kun tai L2 kumpikin tarkoittavat yksiarvoista tai kaksiarvoista anionia, tämän anionin luonne ei ole kriitillinen keksinnön kannalta edellyttäen että tuloksena oleva yhdiste on farmaseuttisesti hyväksyttävä eli sillä ei ole vähentynyttä aktiivisuutta (tai epäsuotavasti vähentynyttä aktiivisuutta) tai li-20 sääntynyttä myrkyllisyyttä (tai epäsuotavasti lisääntynyttä myrkyllisyyttä) verrattuna emäyhdisteeseen veden ollessa ligandina. Esimerkkeihin sellaisista anioneista kuuluvat epäorgaaniset anionit kuten nitraatti-, halidi- (esim. kloridi-, bromidi- tai jodidi-), perkloraatti-, sulfaatti-, karbonaatti- tai hydroksidianionit ja . 25 sellaiset orgaaniset anionit kuten metoksidi- tai etoksidianionit.

Erityisesti suosittelemme että ΐΛ:η ja L2:n, jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tulisi kummankin tarkoittaa nitraatti-, kloridi, hydroksidi-, metoksidi- tai etoksidianionia tai vettä. Vaihtoehtoisesti L*· ja L2 voivat yhdessä tarkoittaa edellämainituista anioneista 30 yksittäistä anionia ja esimerkit sellaisista anioneista ovat samoja kuin ne, jotka on annettu kun L1 ja L2 erikseen tarkoittavat sellaisia anioneja. Suositeltaviin anioneihin, joita ΐΛ ja L2 yhdessä voivat edustaa ovat nitraatti-, kloridi-, sulfaatti-, hydroksidi-, metoksidi-ja etoksidianionit; suositeltavia ovat myös yhdisteet, joissa ja L2 35 yhdessä tarkoittavat edellämainittua kaavan (II) ryhmää.

6 83086 ^ Kun keksinnön mukainen yhdiste sisältöä anionin XP‘, tämän anionin laatu ei ole kriitillinen keksinnön kannalta edellyttäen, kuten edellä ΐΛ:η ja L^:n yhteydessä on selitetty, että se on farmaseuttisesti hyväksyttävä. Esimerkkejä sellaisista anioneista, joita XP” voi edustaa, 5 ovat nitraatti-, perkloraatti-, sulfaatti- ja karbonaattianionit, edullisesti nitraatti- ja sulfaattianionit.

Arvo, jota edustaa u on kokonaan riippuvainen llgandien ja laadusta, koska neljä positiivista varausta antavat kaksi kaksiar-10 voista platina-atomia ja yksittäisen negatiivisen varauksen antaa kaavassa (I) esitetyn kaavan (II) ryhmä, mikä jättää siten kaikkiaan kolme positiivista varausta jaettavaksi tasan lA:n, L^:n ja XP':n kesken. Kun esimerkiksi ΐΛ ja kumpikin tarkoittavat yksiarvoisia anioneja, q on 1; kun lA tarkoittaa neutraalia ligandia ja iA tarkoittaa 15 yksiarvoista anionia, n on kaksi; kun iA ja lA molemmat tarkoittavat neutraaleja ligandeja, q on kolme; ja kun toinen lA:stä ja Luista tarkoittaa kaksiarvoista anionia ja toinen tarkoittaa yksiarvoista anionia, q on 0.

20 On huomattava, että valikoima keksinnön yhdisteiden Isomeerejä on mahdollista riippuen kahden sykloheksaanidiamiinimolekyylln kon-figuraatiosta kompleksin sisällä. Esimerkiksi kukin sykloheksaanidi-amiiniligandi voi olla cis-isomeeri, trans-isomeeri tai niiden seos ja kaksi sykloheksaanidiamiinlligandia molekyylissä voivat olla sama 25 isomeeri tai eri isomeerejä. Trans- isomeerien tapauksessa optinen aktiivisuus on mahdollista ja ne voivat olla jJ-enantiomeeri, 1-enantiomeeri tai rasemaattl.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan syntetisoida saattamalla 50 kaavan (III) yhdiste, nimittäin yhdiste, jolla on kaava (lila): r V® (XP in'/p (IHil 35 L Jv /

M

7 83086 Ί (jossa n' ja χΡ" ovat kuten edellä on määritelty Ja Z ja Z' ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tarkoittaa neutraalia ligandia (esimerkiksi vesi) tai anionia (esimerkiksi nitraatti-, hydroksidi-tai perkloraatti-anioni) tai Z ja Z' on kytketty yhteen tarkoittamaan anionia (edulli-5 sesti sulfaatti- tai karbonaattianionia), tai yhdistettä, jolla on kaava (IIIb): H "12© 10 ΓΥ*>0<""!ΥΊ

H

15 (III b) (jossa XP~ on kuten edellä on määritelty) reagoimaan edellämainitun kaavan (V) yhdisteen kanssa.

20 Suositeltavia tapoja näiden reaktioiden suorittamiseksi on annettu menetelmissä A, B ja C.

Menetelmä A

25 Cis-dikloori-(1.2-diaminosvkloheksaani)platlna(II) saatetaan reagoimaan kahden hopeanitraattlekvlvalentin tai yhden hopeasulfaattiekvivalentin kanssa saaden kaavan (lila) yhdistettä, jossa Z ja Z' molemmat tarkoittavat veslmolekyylejä Ja XP" tarkoittaa nitraatti- tai sulfaattianionia, nimittäin cis-diaquo-(1.2-dlaminosvkloheksaani)platina(II)nitraattia tai -sulfaattia. Vastaavia kaavan (lila) yhdisteitä, joissa XP* tarkoittaa muita anioneja, voidaan tuottaa käyttämällä muuta vastaavaa hopea-suolaa. Reaktio suoritetaan edullisesti vesiliuoksessa. Reaktiolämpötila ei ole erityisen kriitillinen ja siksi katsomme sopivaksi suorittaa reaktio huoneenlämpötilassa.

35 • Tuloksena oleva kaavan (lila) yhdiste saatetaan sitten reagoimaan 8 83086 ^ kaavan (V) alkyleeniureajohdannaisen kanssa. Suosittelemme käytettäväksi 0,5-4 ekvivalenttia mainittua kaavan (V) yhdistettä mainitun kaavan (lila) yhdisteen ekvivalenttia kohti. Reaktio suoritetaan edullisesti neutraalipisteessä ja tämä voidaan saada lisäämällä sopivaa 5 alkalia. Alkalin laatu ei ole kriitillinen edellyttäen että se ei häiritse reaktiota. Sopiva alkali on aikaiimetai1ihydroksidi, esimerkiksi natriumhydroksidi, jota käytetään edullisesti likimain IN vesi-liuoksena. Reaktio tapahtuu laajalla lämpötila-alueella ja valittu tarkka lämpötila ei ole erikoisen kriitillinen. Suosittelemme reaktion 10 suorittamista alueellla 0-100 °C olevassa lämpötilassa, mieluummin huoneenlämpötilasta 60 °C:een, ja edullisesti sekoittaen. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, varsinkin reagenssien laadusta ja reaktiolämpötilasta. Annetulla laajemmalla alueella olevassa lämpötilassa riittää kuitenkin normaalisti 15 aika, joka on 1 tunnista 40 päivään, kun taas suosteltavammalla alueella olevassa lämpötilassa riittää normaalisti aika, joka on 10 tunnista 30 päivään.

Täten saatu tuloksena oleva kaavan (I) yhdiste voidaan erottaa reaktio-20 seoksesta millä tahansa sopivalla prosessilla. Reaktioseos voidaan esimerkiksi väkevöidä haihduttamalla alipaineessa ja sitten lisätä orgaanista liuotinta halutun kaavan (1) yhdisteen saamiseksi. Orgaanisen liuottimen laatu ei ole kriitillinen, vaikkakin suosittelemme käytettäväksi veteen sekoittuvaa orgaanista liuotinta, kuten alkoholia 25 (esimerkiksi metanoli, etanoli tai isopropanoli) tai eetteriä (kuten dietyylieetteri). Tuloksena oleva sakka voidaan kerätä, esimerkiksi suodattamalla, saaden haluttua kaavan (I) yhdistettä. Tarvittaessa tämä sakka voidaan puhdistaa edelleen kromatografiällä, käyttäen esimerkiksi ioninvaihtohartsia, kuten Diaion (kauppanimi) CHP 20P tai Sephadex (kauppanimi).

Menetelmä B

Valmistetaan cis-diaquo-(1.2-diaminosykloheksaani)platina(II)-nitraatin vesiliuos kuten menetelmässä A on kuvattu Ja sitten vesi haihdutetaan pois alipaineessa saaden cls-dlnltrato-(1.2-diamino-svkloheksaani)- 9 83086 ^ platina(II):ta, nimittäin kaavan (lila) yhdistettä, missä Z ja Z' molemmat tarkoittavat nitraattianioneja. Yhdisteitä, joissa Z ja Z' tarkoittavat muita anioneja voidaan valmistaa vastaavasti muista kuin nitraattianioneista. Tuloksena oleva yhdiste suspendoidaan veteen ja 5 sitten se saatetaan reagoimaan syklisen alkyleeniurean (V) kanssa alkalin (edullisesti natriumhydroksidin) läsnäollessa samalla tavalla kuin menetelmässä A on kuvattu. Yhdistettä (V) käytetään edullisesti määrä, joka on 0,5-4 ekvivalenttia ja alkalia käytetään edullisesti määrä, joka on noin 1 ekvivalentti cis-dinitrato-(1.2-diaminosyklo-10 heksaani)-platina(II):n ekvivalenttia kohti.

Menetelmä C

Valmistetaan cis-diaquo-(1,2-diaminosykloheksaani)platina(II)-nitraatin 15 tai -sulfaatin vesiliuos kuten menetelmässä A on kuvattu. Tähän vesi- liuokseen lisätään alkalihydroksidia (edullisesti alkalimetallihydroksi-dia kuten natriumhydroksidia) edullisesti määrä, joka on 1 ekvivalentti nitraatin tai sulfaatin ekvivalenttia kohti. Tuloksena olevan seoksen annetaan sitten reagoida saaden vastaavaa kaavan (Illb) yhdistettä, 20 nimittäin bis[hydroxo-cis-(1,2-diaminosykloheksaani)platina(II)]nitraat-tia tai -sulfaattia. Reaktiolämpötila ei ole erikoisen kriitillinen ja yleisesti suosittelemme reaktion suorittamista noin huoneenlämpötilassa. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella laajasti, mutta normaalisti riittää aika 1 tunnista 14 tuntiin. Kaavan (Illb) haluttu yhdiste 25 saaden sitten haihduttamalla vesi reaktioseoksesta. Saadaan tuotteen vesiliuos (joko poistamalla vesi epätäydellisestl tai lisäämällä vettä) ja tämä saatetaan sitten reagoimaan kaavan (V) syklisen alkyleeniurea-johdannaisen kanssa, edullisesti määränä, joka on 0,5-4 ekvivalenttia platinakompleksin ekvivalenttia kohti. Reaktio tapahtuu laajalla 30 lämpötila-alueella, mutta yleisesti katsomme sopivaksi käyttää lämpötilaa, joka on alueella huoneenlämpötilasta 50 °C:een. Reaktioon tarvittava aika voi vaihdella laajasti riippuen monista tekijöistä, mutta varsinkin reaktiolämpötilasta. Normaalisti riittää aika 1-20 päivää. Senjälkeen reaktioseosta voidaan käsitellä kuten 35 menetelmässä A on kuvattu halutun yhdisteen saamiseksi.

10 83086 ^ Esilläolevan keksinnön yhdisteillä on osoitettu olevan erinomainen kasvaimia estävä aktiivisuus, joka on verrattavissa cisplatinan ja karboplatinan aktiivisuuteen tai on parempi. Lisäksi aivan odottamatta on havaittu, että keksinnön yhdisteet ovat tehokkaita jopa 5 hiirileukemian L^210 cisplatinalle vastustuskykyistä kantaa vastaan. Lisäksi keksinnön mukaisilla yhdisteillä näyttää olevan hämmästyttävän rajoitetusti sivuvaikutuksia, kuten munuaismyrkyllisyyttä ja luuydinkatoa ja niillä on hyvin korkea liukoisuus veteen, joka tekee ne hyvin helpoiksi annostella.

10

Nauttimistavan suhteen el ole mitään erityistä rajoitusta, mutta karslnostaattisena aineena esilläolevan keksinnön platinakomplekseja nautitaan edulliset! ruoansulatuskanavan ulkopuolitse, esimerkiksi ruiskeena. Annostus voi vaihdella riippuen potilaan iästä, ruumlin-15 painosta ja kunnosta samoinkuin tumorin laadusta ja vakavuudesta, mutta yleisesti suosittelemme yhdisteen nauttimista määränä, joka on 10 mg:sta useaan grammaan päivässä aikuisille ihmispotilaille, yleensä jaettuina annoksina.

20 Keksintöä havainnollistetaan edelleen seuraavilla ei-rajoittavilla esimerkeillä. Yhden näistä esimerkeissä käytettyjen lähtöaineiden valmistusta kuvataan seuraavassa valmistuksessa.

25 30 35 U 83036

1 VALMISTUS

bis f Hvdroxo-cis - (trans-(1)-1.2-dlaminosykloheksaani)-platina(II)lnitraatti Γ · H l2© I ^pr pt cP 2N03® ""'Ml o

H

15 10 g £jL£*dikloori-(££flQ£-(1)-1,2*diaminosykloheksaani)platina(II) :ta suspendoitiin 200 mlraan vettä ja sitten suspensioon llsätiin 8,55 g hopeanitraattia. Seosta sekoitettiin huoneenlämpötilassa 5 päivää ja sitten liukenemattomat suodatettiin pois Celite (kauppanimi)-suodatus-aineen avulla. Suodos, jonka pH oli 2,18, säädettiin pH-arvoon 7,00 20 lisäämällä natriumhydroksldin IN vesiliuosta. Sitten seosta sekoitettiin yli yön huoneenlämpötilassa, jonka jälkeen vesi haihdutettiin pois alipaineessa, kunnes otsikkoyhdisteen kiteitä saostui. Ensimmäinen saostus antoi 7,28 g kiteitä; nämä erotettiin ja veden haihduttamista jatkettiin saaden saaliiksi lisää 2,38 g kiteitä.

25

Ydinmagneettiresonanssispektri (400 HHz, D2O) 6 ppm: 0,91 (4H, multipletti); 1,03 (4H, multipletti); 30 1,33 (4H, multipletti); 1,78 (4H, multipletti); : . : 2,0-2,16 (4H, multipletti).

35 i2 83 086 1 ESIMERKKI 1

Hydroxo(etvleenlurea-N.Q)-blsfcls-(trans-(l>-1.2-diaminosvkloheksaanl)platina(II) 1 nitraatti 5 f H Ί 2® 10 2(03 H*-* ^5 0,871 g etyleeniureaa lisättiin 270 ml:aan vesiliuosta, joka sisälsi 5,5 g blsihvdroxo-cis - (trans (i)-1.2-dlamlnosvkloheksaani')platina( II) ] -nitraattia, joka oli valmistettu kuten valmistuksessa on kuvattu ja tuloksena olevaa liuosta sekoitettiin 28 °C:ssa 10 päivää typpivir-ran alla. Tämän ajan kuluttua reaktioseoksessa olevat liukenemattomat 20 aineet suodatettiin pois ja sitten vesi haihdutettiin pois alipaineessa vesiliuoksen väkeväimiseksi noin 10 ml:n tilavuuteen. Väke-vöityyn vesiliuokseen lisättiin 100 ml etanolia ja tuloksena oleva sakka kerättiin suodattamalla. Koko tämä sakka (1,8 g) syötettiin kromatografiapylväSseen, joka sisälsi noin 500 ml Diaion CHP 20P hartsia 25 ja pylväs eluoitiin vedellä. Eluaatti jäädytyskuivattiin saaden 0,6 g otsikkoyhdistettä värittömänä jauheena.

Noin 400 ml dietyylieetteriä lisättiin suodokseen, joka oli saatu senjälkeen kun edellä viitattu otsikkoyhdisteen sakka oli poistettu.

^0 Tuloksena oleva sakka (2,4 g) syötettin samaan Diaion CHP 20P hartsia sisältävään pylvääseen ja eluoitiin vedellä. Eluaatti jäädytyskuivattiin saaden lisää 0,8 g otsikkoyhdistettä värittömänä jauheena.

Ydinmagneettiresonanssispektri (400 MHz, D2O) 6 ppm: 0,93 (4H, tripletti); 35 i3 83 086 ^ 1,02 (2H, kvartetti); 1.06 (2H, kvartetti); 1,36 (4H, dupletti); 1,77-1,83 (4H, multipletti); 5 2,01 (2H, tripletti); 2.07 (1H, duplettien tripletti); 2,10 (1H, duplettien tripletti); 3,17 (2H, multipletti); 3,73 (2H, multipletti).

10

Infrapuna-absorptiospektri (KBr) %axcm"*: 3430, 3200, 3100, 2940, 1693, 1615.

Massaspektri (m/z): 780 (M-N03), 717 (780-HN03).

15 ESIMERKKI 2

Hvdroxo(etvleeniurea-N.O)-blsicis-(trans-(d)-1.2-diaminosvkloheksaanilplatina(11)1nitraatti 20 Γ H Ί 2© 25 ] 2Κ03Θ HN- 170 ml vesiliuosta, joka sisälsi 3,43 g bisίhvdroxo-cls-(trans-(dl- 1,2-diaminosykloheksaani)platina(II)]nitraattia (valmistettu samalla tavalla kuin valmistuksessa on kuvattu) ja 0,547 g etyleeniureaa saatettiin reagoimaan ja tuote käsiteltiin kuten esimerkissä 1 on kuvattu, saaden 0,9 g otsikkoyhdistettä värittömänä jauheena.

OE

Ydinmagneettiresonanssi- ja infrapunaspektrit olivat identtisiä esimerkissä 1 kuvatulla tavalla saatuun tuotteeseen verrattuna.

i4 83036 1 ESIMERKKI .3 HYdrokflo(etvleenlurea-N.O)-bis f cls-(cis-1.2-dlamlnosvkloheksaanl)-platinatII) lnitwm 5 _ H Ί 2© /°\ Γ T xPt ] | 2lln Θ kv^/JNlH2/ °'^N\ HN-' 0,39 g etyleeniureaa lisättiin 200 ml:aan vesiliuosta, joka sisälsi 2,79 g biafhvdroxo-cis-(cis-1.2-diaminosykloheksaani')platinatII]- nitraattia (valmistettu samalla tavalla kuin valmistuksessa on kuvattu) ja tuloksena olevaa seosta sekoitettiin 28 °C:ssa 13 päivää typpivirran alla. Reaktioseoksessa olevat liukenemattomat suodatettiin pois ja on sitten vesi haihdutettiin pois alipaineessa vesiliuoksen väkevöimiseksi noin 100 ml:n tilavuuteen. Tämä väkevöity liuos jäädytyskuivattiin saaden jauhetta. Jauheeseen lisättiin 4 ml vettä ja 100 ml etanolia ja sitten liukenemattomat kerättiin suodattamalla. Suodokseen lisättiin 600 ml dietyylleetteriä ja tuloksena oleva sakka kerättiin suodat-tantalla ja yhdistettiin aikaisemmin kerättyihin liukenemattomiin. Tuloksena oleva yhdistetty jauhe syötettin pylvääseen, joka sisälsi noin 500 ml Dlaion CHP 20P hartsia ja pylvästä eluoitiin vedellä. Tuloksena oleva eluaatti jäädytyskuivattiin saaden 1 g otsikkoyhdis-tettä värittömänä Jauheena.

30

Infrapuna-absorptiospektri (Kfir) vmaxcm*^: 3430, 3200, 1690, 1615.

35 is 83036 1 ESIMERKKI, .4

Hvdroxo(etvleenlurea-N.O)-bisfcls-(trans-(1)-1.2-dlamlnosvkloheksaanDplatlnadl) 1 nitraatti 5 1,2 g etyleeniureaa lisättiin 150 ml:aan vesiliuosta, joka sisälsi 10 mmol cis-(trans-(1)-1,2-diaminosykloheksaani)diaquoplatina(II)nitraat-tia ja sitten lisättiin riittävästi natriumhydroksidln IN vesiliuosta liuoksen pH:n säätämiseksi arvoon 7. Sitten liuosta sekoitettiin 10 28 °C:ssa 10 päivää, jonka jälkeen sitä käsiteltiin samalla tavalla kuin esimerkissä 1 on kuvattu saaden 0,8 g otsikkoyhdistettä. Tuloksena olevan tuotteen ydinmagneettiresonanssispektri ja infrapunaspektrit olivat identtisiä esimerkissä 1 kuvatulla tavalla valmistetun tuotteen spektreihin verrattuna.

15 ESIMERKKI 5

Head-to-head bls(etvleeniurea-N.O)-blsfcls-(trans-m-1.2-dlamlnosvkloheksaani)platlna(II1lnitraatti la head-to-tall 20 bis(etvleeniurea-N.0)-bisfcis-(trans-(i)-1.2-diaminosvkloheksaani)platlna(II)lnitraatti Γ HN-, 1 2© 25 Π CT X X j3 L HM- 35 ie 83086 HN-1 Ί 2 © » /·!γ> 0 P,C J 2Η03υ

10 L ‘-KH

(i) 6,8 g etyleeniureaa lisättiin 400 ml:aan vesiliuosta, joka sisälsi 7,51 g bisfhvdroxo-cls- (trans- (LL1) -1.2-dlaminosvkloheksaani)platina-(II)]nitraattia (valmistettu kuten valmistuksessa on kuvattu) ja 15 tuloksena olevaa seosta sekoitettiin lämmittäen samalla 50 °C:ssa 16 tuntia. Tämän ajan kuluttua reaktioseoksessa olevat liukenemattomat suodatettiin pois ja sitten suodoksessa oleva vesi haihdutettiin pois alipaineessa saaden noin 15 ml väkevöityä liuosta. Tähän väkevöityyn liuokseen lisättiin noin 100 ml etanolia ja noin 500 ml dietyylieetteriä 20 ja muodostunut saostuma kerättiin suodattamalla. Saostuma syötettiin kromatografiapylvääseen, joka sisälsi noin 1 1 Diaion CHP 20P hartsia ja kolonnia eluoitlin vedellä. Otsikkoyhdisteen kaksi isomeeriä (head-to-head ja head-to-tail isomeerit) eluoitiin erikseen ja erilliset eluentit jäädytyskuivattiin. Ensimmäisestä eluoinnista saatiin 0,9 g 25 isomeeriä (1), kun taas toisesta eluoinnista saatiin 1,3 g isomeeriä; toistaiseksi emme ole identifioineet kumpi isomeeri on kumpi.

Isomeeri (1) on ^ Ydinmagneettiresonanssispektri (400MHz, DjO) υ ppm: 0,93 (4H, tripletti); 1,03 (2H, kvartetti); 1,06 (2H, kvartetti); 35 1,37 (4H, dupletti); 1,80 (4H, dupletti); i7 83086 ^ 2,05 (4H, multipletti); 3,13 (4H, multipletti); 3,62 (4H, multipletti).

5 Isomeeri (2)

Ydinmagneettiresonanssispektri (400MHz, D2O) v ppm; 0,95 (4H, tripletti); 10 1,05 (4H, multipletti); 1,35 (4H, dupletti); 1,80 (4H, multipletti); 1,99 (1H, multipletti); 2,20 (3H, multipletti); 15 3,23 (4H, multipletti); 3,90 (4H, multipletti).

(il) 0,34 g etyleeniureaa lisättiin 10 ml:aan vesiliuosta, joka sisälsi 1 mmol els-(trans-(a)-diaminosvkloheksaanl)dlaauoplatina(II)nitraattia 20 ja sitten lisättiin riittävä määrä natriumhydroksidin IN vesiliuosta liuoksen pH:n säätämiseksi arvoon 7. Tuloksena olevaa liuosta sekoitettiin 28 °C:ssa 1 päivä ja sen jälkeen sekoitettiin 50 °C;ssa 16 tuntia. Sitten reaktioseos käsiteltiin samalla tavalla kuin edellä esimerkissä 5(i) saaden 0,8 g isomeeriä (1) ja 0,12 g isomeeriä (2), joilla oli : 25 samanlaiset ominaisuudet kuin esimerkin 5 (i) tuotteilla.

ESIMERKKI $

Head-to-head bis(etvleeniurea-N.0)-bis f cis- trans -(d)-1.2-30 diaminosvkloheksaani)platina(II)1nitraatti la head -to-tail bis(etvleenlurea-N.O)-bisfcis-(trans-(d)-1.2-diftmtnmkl9heKgaflni)piatln3.(I.I)„.lnl£r.fifltti 35 18 83036 HN-- I 2© C X >C >C Tl no,® 10 _ HN-1 15 Γ HN-1 Ί 2©

/°^N\ /,ll!vx ^ CT /Pt\ /T T J 2103O

20 \^SNH^ Tl <T XHH2"""V

*-MH

25 (i) Esimerkissä 5(i) kuvattu proseduuri toistettiin, mutta käyttäen bis[hydroxo-fiia-(trans-(1)-1,2-diaminosykloheksaani)platina(II)]- nitraattia lähtöaineena saaden saaliiksi otsikkoyhdisteen kahta isomeeriä, joiden ydinmagneettlresonansslspektrit olivat identtisiä verrattuina esimerkissä 5(i) kuvatulla tavalla saatujen vastaavien on ^ isomeerien spektrien.

(ii) Esimerkissä 5(ii) kuvattu proseduuri toistettiin, mutta käyttäen vesiliuosta, joka sisälsi 1 mmol cis-(trans-(d)-1.2-diaminosyklohek- saani)dlaquoplatina(II)nitraattia lähtöaineena saaden samat kaksi qe ^ isomeeriä, joihin on viitattu edellä esimerkissä 6(i).

i9 83086 1 ESIMERKKI 7 680 mg hopeanitraattia liuotettiin 14 ml:aan vettä ja sitten liuokseen lisättiin 760 mg cis-dikloorif trans1) -1.2-dlaminosvkloheksaani) -5 platina(II):ta. Liuosta sekoitettiin yli yön huoneenlämpötilassa samalla kun sitä suojattiin valolta alumiinifolion avulla. Tämän ajan kuluttua hopeakloridisakka suodatettiin pois ja sitten lisättiin 344 mg etyleeni-ureaa tuloksena olevaan suodokseen. Sitten lisättiin seokseen riittävästi natriumhydroksidin IN vesiliuosta sen pH:n säätämiseksi arvoon 7, Seosta sekoitettiin sitten huoneenlämpötilassa 12 tuntia, jonka jälkeen se väkevöitiin haihduttamalla alipaineessa saaden 3 ml väkevöityä vesiliuosta. Tähän väkevöityyn liuokseen lisättiin 70 ml etanolia ja 60 ml dietyylieetteriä ja muodostunut sakka kerättiin suodattamalla saaden 435 mg platina-etyleeniurea-kompleksia värittömänä 10 jauheena. Tämä kompleksi on esimerkin 1 vastaavan yhdisteen ja esimerkin 5 yhdisteen kahta isomeeriä vastaavien dl-yhdisteiden seos.

Infrapuna-absorptiospektri (KBr) umaxcm"^: 3200, 3100, 1690, 1630, 1390, 1130.

20 ESIMERKKI $ 312 mg hopeasulfaattia ja 380 mg cis-dikloori(trans-1.2-diaminosvklohek-saani)platina(II):ta suspensoitiin 7 ml:aan vettä ja suspensiota sekoi-25 tettiin lämpötilassa 50 °C pidetyn öljykylvyn yläpuolella 4 päivää suojellen reaktioseosta samalla valolta alumiinifolion avulla. Saostunut hopeakloridi suodatettiin pois ja sitten lisättiin 172 mg etyleeniureaa suodokseen. Lisättiin riittävä määrä natriumhydroksidin IN vesiliuosta reaktioseoksen pH:n säätämiseksi arvoon 7. Sitten seosta sekoitettiin 30 5o Oq.ssa iQ tuntia. Tämän ajan kuluttua reaktioseos väkevöitiin haihduttamalla alipaineessa saaden noin 2 ml väkevöityä vesiliuosta. Tähän väkevöityyn liuokseen lisättiin 15 ml etanolia ja 50 ml dietyylieetteriä öljymäisen sakan muodostamiseksi. öljymäiseen sakkaan lisättiin isopro-panolla ja sitten tuloksena oleva jauhemainen sakka kerättiin suodattamalla saaden 376 mg etyleeniurea-platinakompleksin sulfaattia värittömänä jauheena. Tämä kompleksi on esimerkin 1 yhdistettä vastaavan 20 83036 ^ ill-yhdisteen ja esimerkin 5 yhdisteen kahta isomeeriä vastaavien dl- yhdisteiden sulfaattien seos.

Infrapuna·absorptiospektri (KBr) vmaxcm 5 3200, 3080, 1690, 1630, 1180.

ESIMERKKI 9

/\ Q

15 T Pts ] J 2«03w 100 mg propyleeniureaa lisättiin vesiliuokseen, joka sisälsi 390 mg bis fhvdroxo-cis-ftrans-(d)-1,2-diaminosykloheksaani)platina(II)]-nitraattia (valmistettu samalla tavalla kuin valmistuksessa on kuvattu) ja tuloksena olevan seoksen annettiin seisoa 40 °C:ssa 1 kuukauden ajan. Tämän ajan kuluttua vesi tislattiin pois reaktioseoksesta 25 alipaineessa ja sitten jäännös syötettiin kromatografiapylvääseen, joka sisälsi noin 50 ml Diaion CHP 20P hartsia. Pylvästä eluoitiin sitten vedellä ja eluentti jäädytyskuivattiln saaden 302 mg otsikko-yhdistettä.

33 Ydinmagneettiresonanssispektri (270 MHz, D2O) δ ppm: 0,8-1,3 (8H, multipletti); 1,3-1,6 (8H, multipletti); 1,75-2,0 (4H, multipletti); 35 2,2-2,45 (2H, multipletti); 2,9-3,0 (2H, multipletti); 21 83036 1 3,4-3,5 (2H, tripletti).

BIOLOGINEN AKTIIVISUUS

5 Seuraajissa kokeissa käytetyt koe-eläimet olivat 8-9 viikkoa vanhoja CDF^-rodun naaraspuolisia hiiriä, jotka kukin painoivat 20-25 g. Standardileukemia L^210-soluja toimitti Dr. T. Yamamoto, Institute of Medical Science, University of Tokyo, Japan, kun taas cisplatinaa kestävää L^-210 solulinjaa (L^-210/CDDP) toimitti Dr. T. Tashiro, Cancer 10 Chemotherapy Centre, Japanese Foundation for Cancer Research, Tokyo, Japan. Cisplatinaa kestävän solulinjan cisplatinan vastustuskyky in vitro herkkyydellä mitattuna oli 40-kertainen verrattuna rinnakkaiseen L.1-210 solui in jaan.

15 KOE 1 CDF^ hiiriin istutettiin vatsaontelon sisäisesti L.1-210 soluja (10-* solua/hiiri). Esilläolevan keksinnön yhdiste (esimerkissä 1 valmistettua) ja karboplatina liuotettiin kumpikin 5 til-% mannitolin 20 vesiliuokseen, kun taas cisplatlna liuotettiin 5 tll-% mannitolin fysiologiseen suolaliuokseen. Kukin lääkeaine ruiskutettiin suoneen päivinä 1 ja 4 kasvaimen istutuksen jälkeen. Hiirien lukumäärä kussakin koeryhmässä oli 6.

25 Eliniän lisääntyminen (ILS) laskettiin seuraavasti: ILS% - [(St/Su) - 1] x 100 missä: 30

St - käsiteltyjen hiirien hengissäpysymispäivien lukumäärän punnittu mediaani; ja

Su - käsittelemättömien hiirien hengissäpysymispäivien lukumäärän punnittu mediaani.

35 Γ Tulokset on esitetty taulukossa 1.

22 83036 1 KOE 2

Kokeessa 1 esitetyt proseduurit toistettiin, paitsi että kasvaimia estävät solut olivat cisplatina-kestoisia L^210/CDDP soluja. Tulokset 5 on esitetty taulukossa 2.

10 15 20 25 30 35 23 83036

Taulukko 1

Yhdiste Annos Painon- Med. S.T. ILS Hengissä (mg/kg) muutos (päivää) (%) olevien 5 (g) lukumäärä päivänä 42 1) 2) 3) Käsittele mätön kontrolli - +1,9 8,4 - 0/6

Esimerkin 15 +2,6 9,0 7 0/6 yhdiste 10 +2,8 11,0 31 0/6 20 +2,2 16,0 90 0/6 15 40 +0,4 35,0 317 2/6 80 +0,2 >41,7 >396 3/6 160 -3,0 >41,7 >396 3/6 2Q 240 - >41,9 >399 4/6 (2/6 myrkyllinen) ; 320 - 4,8 -43 0/6 ' ' (5/6, myr- : : kyllinen) 25______ karbo- 5 +1,3 9,0 7 0/6 platina 10 +2,0 9,0 7 0/6 20 +0,8 9,0 7 0/6 30 40 +0,4 9,2 10 0/6 80 -0,5 10,3 23 0/6 cisplatina 0,625 +1,6 9,1 8 0/6 ·;;; 35 1,25 +2,5 9,7 15 0/6 M 83086 ^ Taulukko 1 Πatk.)

Yhdiste Annos Painon- Med. S.T. ILS Hengissä 5 (mg/kg) muutos (päivää) (%) olevien (g) lukumäärä päivänä 42 1) 2) 3) 10 2,5 +1,7 13,3 58 0/6 5 -3,5 39,0 364 2/6 10 -5,5 10,3 23 0/6 (6/6, myrkyllinen) 15

Huomautuks ia: 20 1) Muutos ruumiinpainossa päivästä 1 päivään 7.

2) Selviytymisajan mediaani (päivää).

25 3) Eliniän lisääntyminen.

30 35 » 83036 ^ Taulukko 2

Yhdiste Annos Ruumiinpainon Selviyty- ILS 30 päivää (mg/kg) muutos misajan (%) selvinnei- 5 päivistä mediaani tä 1-7 (päivää) Käsitte- - +2,6 9,1 - 0/12 tön kontrolli 10______

Esimerkin 5 +2,4 10,8 19 0/6 yhdiste 10 +2,3 13,3 46 1/6 20 +2,2 20,0 120 2/6 40 -0,3 >30,0 >230 6/6 15 80 -0,5 >30,0 >230 6/6 160 -1,8 >30,0 >230 6/6 karbo- 30 +1,2 9,9 9 0/6 20 platina 60 -0,6 9,8 8 0/6 cisplatina 2,5 +1,0 9,3 2 0/5 5,0 -1,9 9,9 9 0/6 25 30 ::: 35

Claims

26 83086

1 XP' tarkoittaa anionia, jolla on valenssi e; ja H on 0, 1, 2 tai 3], 5 tunnettu siitä, että saatetaan platinakompleksi, jolla on kaava (III): _ Tn1® 10 /«H2v /V rr χ ",n 15 [jossa: XP‘ on kuten edellä on määritelty; 20 : s' on 0, 1 tai 2; ja Y ja Y' ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tarkoittaa vettä, nitraatti-ionia, hydroksidi-ionia tai perkloraatti-ionia tai Y ‘ 25 ja Y' on kytketty yhteen tarkoittamaan sulfaatti- tai karbonaatti- ionia tai ryhmää, jolla on kaava (IV): H J HH, . 30 (IV l] reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava (V): : : \ 35 28 83036 H o-c^ ) m 5 ΊΚ H (jossa A on kuten edellä on määritelty). -|q

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen prosessi, tunnettu siitä, että mainittu reaktio suoritetaan vesipitoisessa väliaineessa yhdisteen valmistamiseksi, jossa mainittu ligandi il· ja/tai Ό- on vesi.

10 Xj (X Wp(I1 L J 15 [missä: A tarkoittaa alkyleeniryhmää, jossa on 2-5 hiiliatomia; 20 0----c----N tarkoittaa 0-C-N tai 0-C-N; ja ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tarkoittaa neutraalia ligandia tai yksiarvoista tai kaksiarvoista anionia, tai ΐΛ ja l?· on 25 kytketty yhteen muodostamaan yksiarvoinen anioni, kaksiarvoinen anioni tai kaavan (II) ryhmä: Q il 30 'L «'N V,,/ missä A ja 0----C----N ovat kuten edellä on määritelty; 35 27 83086

1 Patenttivaatimukset:

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen prosessi, tunnettu siitä, -jg että ja L.2 ovat samoja tai erilaisia ja kumpikin tarkoittaa vettä, nitraatti-ionia, halidi-ionia, perkloraatti-ionia, sulfaatti-ionia, karbonaatti-ionia, hydroksidi-ionia, metoksidi-ionia tai etoksidi-ionia. 2Q

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen prosessi, tunnettu siitä, että ΐΛ ja 1,2 yhdessä tarkoittavat nitraatti-ionia, kloridi-ionia, sulfaatti-ionia, hydroksidi-ionia, metoksidi-ionia, etoksidi-ionia tai mainittua kaavan (II) ryhmää.

5. Jonkin edellisen patenttivaatimuksen mukainen prosessi, tun nettu siitä, että XP- tarkoittaa nitraatti-ionia, perkloraatti-ionia, sulfaatti-ionia tai karbonaatti-ionia.

6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen prosessi, tunnettu siitä, 3q että XP* tarkoittaa nitraatti-ionia tai sulfaatti-ionia.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen prosessi, tunnettu siitä, että lA ja yhdessä tarkoittavat hydroksidi-ionia.

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen prosessi, tunnettu siitä, että ΐΛ ja yhdessä tarkoittavat kaavan (II) ryhmää. 29 83086

9. PatentivaaClmuksen 1 mukainen prosessi, tunnettu siitä, että reagenssit ja reaktio-olosuhteet on valittu seuraavien yhdisteiden valmistamiseksi: 5 hydroxo(etyleeniurea-fi,Q)-bis[cis-(trans-(ί)-1,2-diaminosykloheksaa-ni)platina(II)]nitraatti; hydroxo(etyleeniurea-fi,2)-bis fcis-(trans -(d)-1,2-diaminosyklohek-saani)platina(II)]nitraatti; 10 hydroxo(etyleeniurea-N.O)-bisf cis-(cis-1,2-diaminosykloheksaani)-platina(II)]nitraatti; bis(etyleeniurea-ii,0)-bis f cis-(trans -(£)-1,2-diaminosykloheksaani)-jg platina(II) ]nitraatti; bis(etyleeniurea-U,Q)-bis icis-ftrans - (£)-1,2-diaminosykloheksaani)-platina(II)Jnitraatti; tai 20 hydroxo(propyleeniurea-g.O)-bisfcis-(trans -(d)-1,2-diaminosyklo- heksaani)platina(II)Jnitraatti. : 25 30 35 30 83086