FI71159C - 4'-halogensubstituerade sackarosderivat - Google Patents

Description

71 159 4'-halogeenisubstituoidut sakkaroosijohdannaiset 4'-halogensubstituerade sackarosderivat Tämä keksintö koskee uusia» sakkaroosista johdettuja yhdisteitä, jotka ovat hyvin voimakkaita makeutusaineita. Keksintö koskee myös koostumuksia, jotka sisältävät näitä makeutusaineita, sekä makeutta-mismenetelmiä niitä käyttäen.

5

Vaikka sakkaroosi on vielä yleisimmin käytetty raakeutusaine, on tehty useita yrityksiä löytää oleellisesti makeampia vaihtoehtoja, joita voitaisiin käyttää haluttaessa yhdistää suuri makeus ja alhainen kaloripitoisuus ja/tai pieni hammasmädän vaara, esim. dieettivalmis-10 teissä ja alkoholittomien juomien valmistuksessa. Tähän mennessä kaksi kaupallisesti menestyksekkälntä ei-sakkaroosi makeutusainetta (ts. makeutusainetta, jotka koostuvat muusta yhdisteestä kuin sakkaroosista) ovat olleet sakkariini ja syklamaatti, joiden makeutusteho on vastaavasti noin 200- ja noin 30-kertainen sakkaroosiin verrattuna.

15 Näiden makeutusaineiden, erityisesti syklamaatln, käyttö on kuitenkin äskettäin rajoitettu tai kielletty joissakin maissa niiden turvallisuuteen kohdistuvien epäilysten vuoksi. Sakkariinin varjopuolena on myös epämiellyttävän karvas jälkimaku, jonka monet ihmiset huomaavat.

20 Viime aikoina on tutkittu monia muita ei-sakkaroosl makeutusaineita, joista jotkut ovat luonnosta peräisin ja toiset synteettisiä ja jotka kattavat laajan alueen kemiallisia rakenteita. Näihin yhdisteisiin kuuluu proteiineja kuten monelliini, taumatiini ja mirakuliini; dipeptidejä kuten aspartaami; ja dihydrokalkoneja kuten neohesperi-25 diinidihydrokalkonl. Paitsi vaikeuksia tällaisten makeutusaineiden syntetisolmisessa tai uuttamisessa, on kuitenkin myös se ongelma, ettei niillä välttämättä ole samanlaatuinen makeus kuin sakkaroosilla. Erityisesti voi sakkaroosiin verrattuna makeus olla viivästynyt ja suhteellisen pitkällinen ja voi esiintyä lakrltsinkaltalnen 30 tai muu jälkimaku, mitkä seikat tekevät makeutusaineista sopimattomia suoranaisiksi sakkaroosin korvikkeiksi, ellei näitä eroja voida peittää.

Vaikka lukuisia, kemialliselta rakenteeltaan hyvin erilaisia makeu- 2 71159 tusaineita on nyt tutkittu, on merkillepantavaa, että olennaisesti suurempi makeus kuin sakkaroosilla on havaittu vain yhdessä hyvin pienessä sakkaroosijohdannaisten ryhmässä eikä yhdessäkään muussa yksinkertaisessa hiilihydraatissa. Tunnetut voimakkaasti makeat 5 yhdisteet eivät yleensä ole lainkaan hiilihydraatteja. Joidenkin substituenttien sakkaroosimolekyylissä tiedetään todellakin tuhoavan makeuden. Niinpä esimerkiksi klooraus 6- ja 6'-asemissa tai aminointi eri asemissa antaa tuotteita, jotka eivät ole makeita. Makeuden menetys sakkaroosijohdannaisissa, joissa hydroksiryhmät oli korvattu 10 muilla funktionaalisilla ryhmillä, vahvisti Shallenbergerin teorian [j. Food Sei., £8^ (1963), p. 584^ , jonka mukaan sakkaroosin makeuden aiheuttaa sopivasti sijoittuneiden hydroksiryhmien sitoutuminen vety-sidoksilla reseptoriin. Monet tekivät tätä teoriaa tukevaa tutkimusta poistamalla hydroksiryhmät sakkaroosista ja muuttamalla niiden konfigu-15 raatiota. Kaikissa tapauksissa hydroksiryhmien poistaminen joko vähensi makeutta tai jätti sen oleellisesti ennalleen.

Vuoden 1975 lopulla keksittiin sitten joitakin hyvin makeita sakkaroos ij ohdannaisia . Patentissa GB 1 543 167 selitetään tietty ryhmä 20 sakkaroosin kloorattuja johdannaisia, joiden havaittiin omaavan suuren makeuden, joissakin tapauksissa useita satoja kertoja sakkaroosin makeus, ja kuitenkin samanlaatuisen makeuden kuin sakkaroosi ilman mitään viivettä tai epämiellyttävää jälkimakua. Patentin GB 1 543 167 yhdisteissä on hydroksiryhmät 4-, 6-, 1'- ja 6'-asemien 25 tietyissä yhdistelmissä korvattu klooriatomeilla. Erityisen mielenkiintoinen yhdiste on 4,1',6'-trikloori-4,1 *,6'-trideoksigalakto-sakkaroosi, josta jäljempänä on käytetty nimitystä TGS. Kloori-substituenttien sijoituksen havaittiin olevan sikäli kriittinen, että vain tietyt kloorisubstituenttien yhdistelmät antavat sakkaroosi-30 johdannaisia, joilla on suuri makeus: toiset yhdistelmät poistivat sakkaroosin makeuden, kuten oli odotettavissakin.

Vuoden 1975 jälkeen ei ole löydetty lisää hyvin makeita sakkaroosin johdannaisia. Todellakin ainoat tänä aikana vielä määritetyt klooratut 35 sakkaroosin johdannaiset ovat 2,1'-dikloori-2,1'-dideoksijohdannainen, 2,1'-dideoksijohdannainen, joka ei ole lainkaan makea sekä 2,6,1',6'-tetrakloori-2,6,1',61-tetradeoksijohdannainen, joka on selitetty patenttihakemuksessa GB (Λ) 2 037 561. Täydellisenä vastakohtana 3 71159 patentin 1 543 167 yhdisteille tämä sakkaroosin 2,6,1',6'-tetra-kloorijohdannainen havaittiin voimakkaaksi karvasaineeksi, joka teholtaan on verrattavissa kiniiniin. Näin ollen näyttää siltä, että poikkeaminen patentin 1 543 167 tarkoittamasta kloorisubsti-5 tuoinnista johtaisi yhdisteisiin, jotka eivät ole makeita, mutta joilla sensijaan voisi olla muita organoleptisiä ominaisuuksia.

Hyvin yllättäen on keksitty uusi joukko halogeenisakkaroosijohdan-naisia, joiden halogeenisubstituointi on malliltaan erilainen, mutta 10 joilla kuitenkin on voimakas imelyys. Nämä uudet yhdisteet ovat kaikki 4'-halogeenisubstituoituja.

Tämän keksinnön mukaisesti tarjotaan yhdisteet, joilla on yleinen kaava: 15 HO—> .1 R3 0Ϊ/—0 ( n Χλ 7>.ΐΙ·νβ· (I) οΐΛ_l y t'/ \t f \ '

OH OH HO X

(jossa X tarkoittaa halogeeniatomia; 12 .

R ja R tarkoittavat vastaavasti hydroksiryhmää ja vetyatomia,

20 halogeeniatomia ja vetyatomia tai vetyatomia ja halogeeniatomia; ja 3 A

k ja R , jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat halogeeni atomeja tai hydroksiryhmiä; 12 3. .

25 ainakin yksi symboleista R ,R ja R tarkoittaa halogeeniatomia,

2 3 A

sillä edellytyksellä, että R :n, R.n ja R ui kaikkien tarkoittaessa klooriatomeja X ei tarkoita klooriatomia).

Halogeenisubstituoinnista 4-asemnssn huolehditaan edullisesti siten, 71159 k että tarkoittaa halogeeniatomia. Suurin makeus saavutetaan, kun 2 3 4 kaikki substituentit R ,R ,R ja X tarkoittavat halogeeniatomeja.

Epävirallisissa makutesteissä on näiden uusien yhdisteiden havaittu 5 omaavan yleisesti suuremman makeuden kuin vastaavat 4'-hydroksi-yhdisteet, 4'-halogeenisubstituoinnin ilmeisesti lisätessä muun halogeenisubstituoinnin antamaa makeutta. Niinpä on yleisesti havaittu, että sellaisen halogeenisakkaroosimakeutusaineen, joka on halogeenisubstituoitu ainakin toisessa 4- ja 1'-asemista ja substituoi-10 maton 4'-asemassa, esimerkiksi patentin GB 1 543 167 tarkoittaman kloorisakkaroosimakeutusaineen, makeus lisääntyy liitettäessä 4'-halogeenisubstituentti. Makupaneelit ovat arvostelleet tätä makeutta laimeisiin sakkaroosiliuoksiin verraten. Tyypillisessä kokeessa ryhmä maistajia vertaa yhdisteen 0,003 % liuosta sakkaroosiliuoksiin, joi-15 den väkevyydet ovat 5,6,7,8 ja 9 %. Keskimääräinen sakkaroosipitoi-suus, joka osuu yksiin koeliuoksen kanssa, jaetaan sitten 0,003:11a, jolloin saadaan luku, joka suurinpiirtein osoittaa kuinka monta kertaa koeyhdiste on sakkaroosia makeampi.

20 Erityisen kiinnostavia kaavan I mukaisia yhdisteitä ovat: 1. 4'-bromi-4,1'-6'-trikloori-4,1',4',6'-tetradeoksigalaktosakka-roosi (4-bromi-l,6-dikloori-l,4,6-trideoks i-g-D-fruktofurano-syyli-4-kloori-4-deoksi-a-D-galaktopyranosidi); 25 2. 4,1',4',6'-tetrabromi-4,1',41,6'-tetradeoksi-galaktosakkaroosi (1,4,6-trideoksi-8-D-fruktofuranosyyli-4-bromi-4-deoksi-a-D-galaktopyranosidi); 30 3. 4,1',4'-trikloori-4,1'-4'-trideoksigalaktosakkaroosi (1,4-di- kloori-1,4-dideoksi-8-D-fruktofuranosyyli-4-kloori-4-deoksi-α-D-galaktopyranosidi); 4. 4,4',6'-trikloori-4,4',6'-trideoksigalaktosakkaroosi (4,6-di- 35 kloori-4,6-dideoksi-R-D-fruktofuranosyylϊ-4-kloori-4-cleoksi-a- D-galaktopyranosidi); 5 71159 5. 1' ,4' ,6'-trikloori-1' ,4' ,6'-trideoksisakkaroosi (1,4,6- trikloori-1,4,6-trideoksi-B-D-fruktofuranosyyli-a-D-gluko-pyranosidi); 5 6. 1,4,6-tribromi-l,4,6-trideoksi-B-D-fruktofuranosyyli-4-kloori- 4-deoksi-a-D-galaktopyranosidi; ja 7. 1,6-dikloori-l,4,6-trideoksi-4-jodi-B-D-fruktofuranosyyli-4-kloori-4-deoksi-a-D-galaktopyranos id i.

10 8. 1',4'-dikloori-1',4'-dideoksisakkaroosi (1,4-dikloori-1,4-dideoks ΐ-6-D-f ruktof uranosyyl i-ot-D-glukopyranosid i) ; 9. 1,4,6-trikloori-1,4,6-trideoksΐ-β-D-fruktofuranosyyli-4-deoksi- 15 4-fluori-a-D-galaktopyranosidi; 10. 1,6-dikloori-1,4,6-trideoksi-4-fluori-fi-D-fruktofuranosyyli-4-deoksi-4-kloori-a-D-galaktopyranosidi (4,1' ,6’-trikloori-4,l',4',6'-tetradeoksi-4'-fluorigalaktosakkaroosi).

20 Näiden yhdisteiden makeus verrattuna tiettyyn sakkaroosilluokseen on esitetty alla. Vertailun vuoksi on ilmoitettu myös vastaavan kloori- substituoidun yhdisteen, jossa on 4'-hydroksi-ryhmä, makeus.

(, 71159

Yhdiste Makeus Vertailuliuoksen Vertailuyhdisteen n:o (x sakkaroosi) sakkaroosipitoisuus makeus (Z) (x sakkaroosi) 5 1 3000 9 600 2 7500 9 600 3 220 8 120 4 160 8 40-50 5 100 5 70-80 10 6 noin 7000 noin 5-10 600 7 noin 3500 noin 5-10 600 8 30 0,6 20 9 noin 200 noin 5-10 600 10 noin 1000 noin 5-10 600 15 _

Yhdisteiden ei ainoastaan havaittu olevan hyvin makeita, vaan myös ilman epämiellyttävää katkeraa, metallista tai viipyvää jälkimakua, jonkalainen on muilla tehokkailla makeutusaineilla. Ne kestävät kuu-20 muutta ja happoja.

Tämän keksinnön mukaiset uudet kloorisubstituoidut yhdisteet, joilla on kaava (I), voidaan saada suoraan klooraamalla sakkaroosijohdan-nainen, joka on suojattu 6-asemassa esim. esteröimällä, mutta joka 25 on suojaamaton ainakin 4'-asemassa ja ainakin yhdessä 4—,1f — ja 6'-asemista, käyttäen sulfuryylikloridia orgaanisen emäksen kuten pyri-diinin ja sopivan liuottimen, esim. klooratun hiilivedyn kuten kloroformin, läsnäollessa. Tässä reaktiossa muodostuu myös eräitä sivutuotteita, kuten TGS, ja uskotaan, että klooraus mahdollisesti edis-30 tyy nopeanmin 4-, 1'- ja 6'- kuin 4'-asemassa. Vaihtoehtoisesti voidaan lähtöaineena käyttää sakkaroosijohdannaista, jossa jo on kloori-atomeja, esim. TGS:n 6-esteriä ja 6-eetterin.

Reaktio järjestetään edullisesti siten, että reaktioseoksesta keliit-35 tyvä rikkitrioksidi johdetaan pois reaktinastiästä kuivausputken kautta, jotta estetään rikkihapon muodostuminen, joka happo saattaisi valua takaisin reakt i.oseokseen, esim. rofluksoi tuvan liuottimen mu- 7 71159 kana. Tyypillisesti 8 mooliekvivalentin sulfuryylikloridia annetaan reagoida sakkaroosin kanssa pyridiini/kloroformi-seoksessa noin 40°-50°C:ssa usean tunnin ajan. Reaktioseosta voidaan käsitellä kuten yleensäkin sulfuryylikloridireaktiossa, esim. pysäyttämällä 5 reaktio metanolilla, dekloorisulfatoimalla hivenellä natriumjodidia ja asetyloimalla, joita seuraa erotus kromatografiällä, kiteytys jne.

Kuitenkin tuotteen, joka saadaan tällä menetelmällä, sovellettuna esim. sakkaroosi-6-asetaattiin, on havaittu käsittävän kaksi isomee-10 riä, jotka eroavat toisistaan 3'- ja 4’-asemien konfiguraation osalta. Vaikka emme halua rajoittua teoriaan, uskotaan, että epoksidin muodostumisesta voi syntyä joko lykso- tai ribo-epoksidi, jotka puolestaan renkaan auetessa antavat 4-kloori-4-deoksi-fruktoosi- ja A-kloori-4-deoksi-sorboosi-johdannaiset. Tästä syystä ei tätä mene-15 telmää pidetä parhaana, koska tuotteet on jälkeenpäin erotettava ja saannot ovat väistämättä alhaisemmat.

Vaihtoehtoinen menetelmä yleisen kaavan (Ia) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi käsittää sellaisen A'-halogeeni-4'-deoksisakkaroosin 20 johdannaisen halogenoinnin, joka on esteröity tai muulla tavoin suojattu 6-asemassa ja jossa on vapaa hydroksiryhmä ainakin toisessa A- ja l'-asemista. Voidaan käyttää mitä tahansa sopivaa halogenointi-ainetta, esimerkiksi sulfuryylikloridia, tai Vilsmeier-reagenssia, esim. N,N-dialkyyli(kloorimetaniminium)kloridia, joka saadaan epä-25 orgaanisen hapon kloridin reaktiolla Ν,Ν-dialkyyliformamidin tai N,N-dialkyyliasetamidin kanssa tai hiilitetrabromidia trifenyyli-fosfiinin kanssa. A'-kloori-A'-deoksisakkaroosi (so. A-kloori-A-deoksi" β-D-fruktofuranosyyli-ot-D-glukopyranosidi)on tunnettu yhdiste (Guthrie et.ai, Carbohydrate Research, voi. 75 (1979), p. Cl-CA).

30

Edullinen menetelmä yleisen kaavan (I) mukaisten yhdisteiden valmistamiseksi, joka menetelmä tarjotaan tämän keksinnön lisäpiirteenä, on kuitenkin sellainen, jossa A'-halogeenisubstituentti tuodaan sakkaroosi johdannaisen fjukdjo-renkaaseen ilman, että konfiguraatio muut-35 tuu, muodostamalla 3',4'-lyksoepoksidi.

Tämän keksinnön mukaisesti tarjotaan menetelmä yleisen kaavan (I) mu- 8 71159 kaisen yhdisteen valmistamiseksi: HO—. ,| R3

^ν~°\ Oa\ i R1")—< M V

OH OH HO* X

(jossa X tarkoittaa halogeeniatomia; 1.2 5 R ja R tarkoittavat vastaavasti hydroksiryhmää ja vetyatomia, halogeeniatomia ja vetyatomia tai vetyatomia ja halogeeniatomia; ja 3.4.

R ja R , jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat halo-geeniatomeja tai hydroksiryhmiä; 10 12 3 ainakin yhden symboleista R ,R ,R tarkoittaessa halogeeniatomia), joka menetelmä käsittää seuraavat vaiheet: 15 (a) saatetaan yleisen kaavan (II) mukainen yhdiste: iry r3 j)w......0.....V°>.....\ , (Π) K / % /—\ r

HO OH HO OH

9 71159 12 . .

(jossa R ja R tarkoittavat vastaavasti hydroksiryhmää tai suojattua hydroksiryhmää ja vetyatomia, halogeeniatomia ja vetyatomia tai vetyatomia ja halogeeniatomia; 3 4 5 R ja R , jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat halo-geeniatomeja tai suojattuja hydroksiryhmiä; 12 3. . .

ainakin yhden symboleista R ,R ja R tarkoittaessa halogeeniatomia; ja 10 R^ tarkoittaa hydroksiryhmää tai suojattua hydroksiryhmää) reagoimaan triaryylifosfiinin yhdessä dialkyyli-atsodikarboksylaatin kanssa, 3'^'-lyksoepoksidin muodostamiseksi; 15 (b) suojataan kaikki reaktiiviset hydroksiryhmät molekyylissä; (c) saatetaan epoksidi reagoimaan halogeeni-ioni-lähteen kanssa; ja 20 (d) poistetaan suojaryhmät.

Menetelmä suoritetaan tarkoituksenmukaisesti käyttäen lähtöaineena sakkaroosijohdannaista, jossa on halogeenisubstituentit muissa tarvittavissa asemissa.

25

Vapaat hydroksiryhmät 3- ja 6-asemissa johtavat vaiheessa (a) ei- toivottujen 3,6-anhydrosivutuotteiden muodostumiseen ja tästä syystä on hyvin edullista suojata toinen tai molemmat näistä asemista, esim.

esteröimällä tai eetteröimällä; näistä kahdesta on 6-asema helpompi 5 30 suojata (ts. R tarkoittaa edullisesti suojattua hydroksiryhmää).

Vaiheessa (a) erityisen käyttökelpoinen suojattujen hydroksiryhmien luokka ovat aryyli- ja/tai alkyylisubstituoidut silyylioksiryhmät, esimerkiksi t-butyylidifenyylisilyylioksiryhmä, t-butyylidimetyyli-35 silyylioksiryhmä ja t-butyylidi-isopropyylisilyylioksiryhmä. Muita suojattuja hydroksiryhmiä ovat asyylioksiryhmät, erityisesti nlifaat-tiset tai aromaattiset karboksyyliasyylioksiryhmät kuten hentsoyyli- l0 71159 oksiryhmät tai asetoksiryhmät, ja myös triaryylimetoksiryhmät kuten trityylioksiryhmät.

Toinen luokka suojattuja hydroksiryhmiä käsittää alkylideenidioksi-5 tai aralkylideenidioksiryhmät, esimerkiksi 4,6-isopropylideenidioksi-ryhmän, 1,2:4,6-di-isopropylideenidioksirakenteen tai 4,6-bentsyli-d een i d iok s i ryhmän.

Lykso-epoksidin muodostava reagenssi on triaryylifosfiinin, kuten tri-10 fenyylifosfiinin, ja aktivoivan atsodikarboksylaattidiesterin, erityisesti dietyyliesterin (DEAD) ja di-isopropyyliesterin (DIAD), yhdistelmä. Triaryylifosfiinia tarvitaan vähintään yksi mooliekvivalentti, edullisesti pieni ylimäärä, ja hyvin sopiva määrä on noin 1,3 mooli-ekvivalenttia. Vähintään yksi ja edullisesti kaksi mooliekvivalent-15 tia atsodikarboksylaattia triaryylifosfiinin mooliekvivalenttia kohti on toivottavaa, esim. määrä noin 2,6 mooliekvivalenttia.

Vaiheen (a) reaktio, jossa muodostuu lykso-epoksidi, suoritetaan tarkoituksenmukaisesti inertissä liuottimessa, esim. hiilivedyssä 20 kuten tolueenissa, esterissä kuten etyyliasetaatissa; tai amidissa kuten dimetyyliformamidissa, riippuen lähtöaineen liukoisuudesta. Reaktio on hieman eksoterminen ja seosta voidaan pitää ympäristön tai korkeammassa (esim. kiehumis-) lämpötilassa sopiva aika, sanokaamme 0,25-5 tunnin ajan. Lämpötilan säätäminen on tärkeämpää, jos 25 3- ja 6-asemat ovat suojaamattomia. Tässä tapauksessa seos täytyy pitää viileänä. Reaktioseosta voidaan sitten käsitellä pysäyttämällä reaktio alkanolilla, esim. metanolilla, ja erottamalla seoksen osat, esim. kromatografiällä.

30 Hydroksiryhmien suojaus vaiheessa (b) aikaansaadaan tarkoituksenmukaisesti asyloimalla, erityisesti asyloimalla reaktiolla etikkahapon anhydridin kanssa. On myös tarkoituksenmukaista, että suojaus asemassa 6 kloridi-ionilähteen kanssa tapahtuvan reaktion aikana vaiheessa (c) olisi asylointi. Näin ollen, jos 6-asema on aikaisemmin 35 suojattu silyyliryhmällä, on toivottavaa poistaa tämä ja sen asemasta asyloida vaiheessa (b). Vaihtoehtoisesti voidaan hydroksisuojaus vaiheessa (b) tuottaa muodostamalla eetteri, esim. tetrahydropyranyyli-eetteri.

Π 71159 1 Halogenointi 4'-asemassa suoritetaan avaamalla epoksidl halogeeni-ioni lähteellä. Kloorattaessa on edullista käyttää aproottlsta liuotinta reagoiville aineille, esimerkiksi amidia kuten DMF tai eetteriä kuten dioksaanl. Ionilähde on tarkoituksenmukaisesti lluottlmeen 5 liukeneva kloridi kuten litiumkloridi. Bromattaessa voidaan käyttää samankaltaisia olosuhteita lonllähteen ollessa bromidi kuten litlumbromidi. Saantojen parantamiseksi on kuitenkin edullista käyttää bromlvetyä kuivassa etikkahapossa. Jodi voidaan tarkoituksenmukaisesti viedä molekyyliin reaktiolla. Grignard-tyyppisen reagens-10 sin, esim. alkyylimagnesiumjodidin, kanssa.

Uusia kaavan 1 mukaisia yhdisteitä voi käyttää makeutusaineena nautittavissa tuotteissa ja oraalisissa koostumuksissa. Määrittelyllä "nautittava tuote" tarkoitetaan sellaista, joka tavanomaisessa käytössä 15 on tarkoitettu nieltäväksi, esimerkiksi ruokatarviketta tai juomaa tai suun kautta annettavaa farmaseuttista koostumusta. Määritelmä kattaa myös väkevöltteet, jotka laimennetaan nautittaviksi tuotteiksi, esim. "kuivamuonat" ja juomasekoitukset. "Oraalisella koostumuksella" tarkoitetaan sellaista, jota ei ole tavanomaisessa käytössä tarkoitettu nleltä-20 väksi sellaisenaan, vaan se otetaan suuhun kurkun tai suuontelon käsittelemiseksi, esimerkiksi hammastahna, hammasjauhe, suuvesi, kurlausvesi, pastilli, hampaanhoidolllnen liuos tai purukumi.

Tämän keksinnön mukaisesti tarjotaan myös makeutuskoostumus, joka 25 koostuu ainakin yhdestä edellä mainituista uusista yhdisteistä yhdessä kiinteän laimennus- tai kantoaineen tai nestemäisen laimennusta! kantoalneen kanssa. "Makeutuskoostumuksella" tarkoitetaan koostumusta, jota el sinänsä oteta suun kautta, nieltäväksi tai suussa pidettäväksi, vaan joka on tarkoitettu lisättäväksi muihin nautittaviin 30 tuotteisiin tai oraalisiin koostumuksiin niiden makeuttamiseksi tai niiden makeuden lisäämiseksi. Edellä mainittu laimennus- tai kanto-aine käsittää minkä tahansa sopivan väliaineen makealle yhdisteelle, niin että se voidaan muodostaa koostumukseksi, jota voidaan mukavasti käyttää muiden tuotteiden makeuttamlseen, esim. rakeiksi, tableteik-35 sl tai liuokseksi tlppapullossa. Laimennus- tai kantoaine voi siten i2 7115 9 sisältää esim. tavanomaisia veteen dispergoituvia tabletointilisä-aineita kuten tärkkelystä, laktoosia ja sakkaroosia itseään; pienen tiheyden omaavia, suuren ominaistilavuuden antavia aineita, joilla saadaan rakeinen makeutuskoostumus, jonka tilavuus makeutusyksikköä 5 kohti on sama kuin sakkaroosin, esim. sumukuivattuja maltodekstriinejä; ja vesiliuoksia, jotka sisältävät lisäaineita kuten stabiloivia aineita, väriaineita ja viskositeettia säätäviä aineita.

Juomat kuten alkoholittomat juomat, jotka sisältävät edellä mainittua 10 makeaa yhdistettä, voidaan koostaa joko sokerittomina dieettituotteina tai "vähäsokerisina" tuotteina, jotka sisältävät sokeria lain edellyttämän vähimmäismäärän. Sokerin puuttuessa on suotavaa lisätä aineita, jotka antavat samantapaisen tunnun suussa kuin sokeri, esim. pektiiniä tai kasviskumia. Niinpä pektiiniä voidaan lisätä pullotus-15 siirappiin pitoisuudessa 0,1-0,15 %.

Tämän keksinnön lisäpiirteen mukaisesti tarjotaan menetelmä aineksen makeuttamiseksi sisällyttämällä siihen edellä mainittua yleisen kaavan (I) mukaista uutta yhdistettä.

20

Seuraavat esimerkit tuovat lisävalaistusta keksintöön (lämpötilat ovat Celsius-asteina; Amberlyst ja Amberlite ovat rekisteröityjä tavaramerkkejä).

25 Esimerkki 1 4,1^41,b'-tetrakloori-A,!* ,4' ^'-tetradeoksigalaktosakkaroosi (l,4,6-trikloori-l,4>6-trideoksi-g-D-fruktofuranosyyli-4-kloori- 4-deoksi-q-D-galaktopyranosidi) 30

Reitti 1 TGS:n (10 g) liuosta kuivassa tolueenissa (250 ml) käsiteltiin DEAD:1 la (12 ml; 2,3 moniiekvivalenttia) ja sitten TIM·:I la (10 g; 1,3 m.e.).

35 Reaktio oli eksoterminen, 5 minuutin kuluttua TLC (oeltori/petrooli 7:1) osoitti 2 päätuotetta. Seosta refluksoiLiin 2,5 h, sitten se jäähdytettiin ja laimennettiin metanolilla (50 mi), väkeväitiin siirapiksi 13 71159 ja otettiin eetteriin. Knin osa läsnäolevasta TPP-oksidi st a poistettiin kiteyttämällä ja raaka materiaali kromatografoitiin piigeeli-pylväässä (150 g) eluoiden eetteri/kevytoetrooliseoksella (1:1), jolloin saatiin TGS:n 3,6-anhydro-3' ,4 '-lyksoepoksidijohdannaista 5 (so. 3,6-anhydro-4-kloori-4-deoksi-a-D-galaktopyranosyyli-3,4- anhydro-1,6-dikloori-l,6-dideoksi-$-D-tagatofuranosidia) (5 g; 55 %) . [aJD +6,5° (c = 1,0; CHC13) .

analyysi: laskettu 1 le 10 C 39,83 H 4,14 Cl 29,46 % C 40,28 H 4,28 Cl 26,45 %

Pylvään jatkoeluointi antoi TGS-31,4'-lyksoepoksidia. Tämä aine pera-setyloitiin käsittelemällä etikkahapon anhydridillä, jolloin saatiin 15 TGS-3*,4'-lyksoepoksiditriasetaattia (so. 4-kloori-4-deoksi-2,3,6-tri- 0-asetyyli-a-D-galaktopyranosyyli-3,4-anhydro-l,6-d ikloori-1,6-dedeoksi-g-D-tagatofuranosidia), jonka rakenteen vahvistivat 'HNMR ja MS (katso alla).

20 (a) TGS-6-t-butyylidifenyylisilyylieetteri TGS:n (8 g) liuosta kuivassa pyridiinissä käsiteltiin t-BDPS-kloridilla (5,6 ml) ja 4-dimetyyliaminopyridiinilla (200 mg) huoneen lämpötilassa 18 h:n ajan. TLC osoitti läsnä olevan yhtä päätuotetta sekä hieman 25 reagoimatonta lähtöainetta (TLC eluantti etyyliasetaatti/asetoni/ vesi 10:10:1). Seos kaadettiin sitten jääveteen ja uutettiin etyyliasetaatilla. Uutteet kuivattiin (Na2S0^) ja haihdutettiin kuiviin. Kiteytys etanolista tuotti TGS-t-BDPS-etteriä (10,5 g; 82,6 %) sul.p. 95-97°C (tolueeni/petroli), +39,3° (c = 1,0; CHCl^) 30 analyysi: laskettu C2gH3yOgCl^Si C 52,87 H 5,82 Cl 16,75 1 löydetty 52,28 5,76 35 (b) TCS-6-t-BDPS-eetteri-31,4'-lyksoepoksidi TGS-t-BDPS-eetterin (H) g) liuosta kuivassa tolueenissa (250 ml) käsi-

IA

71159 teltiin DEAD:lla (12 ml; 2,3 m.e.) ja sitten TPP:lla (19 g; 1,3 m.e.). Reaktio oli ekstoterminen, 5 minuutin kuluttua TLC (eetteri/asetoni 10:1) osoitti yhden päätuotteen ja lähtöaineen poissaolon. Reaktio-seos laimennettiin metanolilla (50 ml), väkevöitiin siirapiksi ja 5 otettiin eetteriin. Enin osa TPP-oksidista poistettiin kiteyttämällä ja raaka aines kromatografoitiin kuivassa piigeelipylväässä (150 g) eetteri/kevytpetroolilla (2:1), lisäten sitten asteittain polaari-suutta arvoon 4:1 ja lopuksi eetteri/asetonilla (9:1), jolloin saatiin epksidia (8,5 g; 87,6 %).

10 (c) perasetylointi

Vaiheessa (b) saadun tuotteen (7 g) tavanomainen asetylointi käyttäen pyridiiniä (70 ml) ja etikkahapon anhydridiä (7 ml) antoi diasetaatin 15 (7,5 g; 94,8 %) fa^ + 104,5° (c = 1,0; CHCI3) analyysi: laskettu C32H39°9C13Si:lle C 54,73 H 5,55 CL 15,18 % löydetty 55,42 5,76 11,40 % 20 (d) TGS-3*,41-lyksoepoksiditriasetaatti

Vaiheessa (c) saadun diasetaatin (7 g) liuosta tetrahydrofuraanissa (150 ml) käsiteltiin tetra-n-butyyliammoniumfluoridilla (1,4 g) huo-25 nee.n lämpötilassa 18 h:n ajan. TLC (eetteri/kevytpetrooli 6:1) osoitti yhden päätuotteen ja jälkiä hitaasti liikkuvista, osittaisen deasetyloinnin tuotteista. Seos väkevöitiin, otettiin kuivaan pyri-diiniin (50 ml) ja käsiteltiin etikkahapon anhydridillä (7 ml) huoneen lämpötilassa 3 tunnin ajan. TLC eetteri/kevypetrooli (7:1) osoitti 30 vain yhden tuotteen. Reaktioseos väkevöitiin ja eluoitiin lyhyestä piigeelipylväästä (50 g) eetteri/kevytpetroolilla (1:1), jolloin saatiin kiteinen tuote, identtinen reittiä l käyttäen saadun tuotteen kanssa, sul.p. 133-134°C [a] ^ +116,3° (c = 1,0; CHC13).

35 analyysi laskettu C^ gl^O^Cl^: 1 le C 42,72 H 5,54 Cl 21.,06 7 löydetty 43,00 4,58 20,79 7, 15 71159 (e) 4,11,4 1,6'-tetrakloori-4,11,4',6’-tetradeoksigalaktosakkaroosin tetra-asetaatti

Tuotteen vaiheesta (d) liuosta DMF:ssa (50 ml) käsiteltiin litium-5 kloridilla (4 g) 90°C:ssa 5 tunnin ajan. Reaktioseos kaadettiin jääveteen ja uutettiin eetterillä. Uutteet kuivattiin (Na2S0^), väkevöitiin siirapiksi ja asetyloitiin tavalliseen tapaan pyridii-nillä ja etikkahapon anhydridillä, jolloin saatiin tetraklooritetra-asetaattia (2,6 g;56,2 %) sul.p. 103-104°C (eetteri/kevytpetrooli) 10 [aJD +75,0° (c = 1,0; CHCl-j) analyysi laskettu C^g H26°llC14:lle C 41,09 H 4,45 Cl 24,31 % löydetty 41,43 4,53 21,89 % 15 (f) 4,1^4^61 - totrakloori-4,1 ',4' ,6 *-tet radooksigalaktosakkaroosi

Tetra-asetaatin vaiheesta (e) (1,5 g) liuosta kuivassa metanolissa (25 ml) käsiteltiin katalyyttisellä määrällä natriummetoksidia liuo- 20 neen lämpötilassa 5 tunnin ajan, deionisoitiin hämmentämällä

Amberlyst15-hartsin kanssa ja väkevöitiin kuiviin. Kiteytys 20 o eetteristä antoi tuotteen (g; 93,5 %) sul.p. 58-60, [α]β +72,3 (c = 1,0; H20) 25 analyysi laskettu 2H^gO^Cl^:1le C 34,61 H 4,32 Cl 34,13 % löydetty 35,5 4,84 34,2 %

Esimerkki 2 30 1 *,4'-dikloorisakkaroos i (a) 2,3,4,3’,4'-penta-O-asetyy1isakkaroosin (4-PAS) silyloiini 35 Liuosta, jossa oli 20 g 4-I’AS (kts. esim. patenttijulkaisu GB l 543 167) kuivassa pyridiinissä (100 ml), käsiteltiin t-hutyy1idifenyylisi1yy1i~ kloridilla (32,7 g; 3,3 m.e.) ja 4-dimentyv!inminopyrvdiini11ä (I g) 71159 huoneen lämpötilassa 36 h:n ajan. TLC (eetteri/asetoni 4:1) osoitti kahden tuotteen muodostumisen. Reaktioseosta käsiteltiin kaatamalla jääveteen ja tuote eristettiin uuttamalla eetteriin, joka kuivattiin (natriumsulfaatti) ja väkevöitiin. Saatu siirappi eluoitiin 5 piigeelipylväästä eetteri/petroolilla (4:1), jolloin saatiin ensin 6,1' ,6'-tri—0—(t-butyylidifenyylisilyyli)sakkaroosin penta-asetaattia (1,0 g;27 %) ja seuraavaksi 2,3,4,3',4'-penta-O-asetyyli-6,6'-di-0-(t-butyylidifenyylisilyyli)sakkaroosia (25 g; 67 %) .

10 (b) Klooraus

Vaiheen (a) tuotteen (20 g) liuosta pyridiinissä (250 ml) käsiteltiin trifenyylifosfiinilla (10,2 g; 2 m.e.) huoneen lämpötilassa. Seos jäähdytettiin 0°C:een ja lisättiin hitaasti hii1itetrakloridi (2 ml; 15 1 m.e.). Reaktioseos lämmitettiin huoneenlämpötilaan ja kuumennettiin sitten 70°C:een 1,5 h:n ajaksi. TLC (eetteri/petrooli 4:1) paljasti yhden tuotteen muodostumisen, joten reaktioseos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan, lisättiin metanolia (20 ml) ja liuos väkevöitiin siirapiksi keratislaamalla tolueenin kanssa. Saatu tuote otettiin eetteriin 20 ja läsnäolevan trifenyylifosfiinioksidin annettiin kitetyä. Lopullinen puhdistus aikaansaatiin piigeelipylväskromatografial 1 a, käyttäen eetteri/petroolia (1:1), jolloin saatiin 6,6'-di-0-(t-butyylidi£enyyli-silyyli) — 1'-kloori-1'-deoksisakkaroosin penta-asetaattia (20 g, 98 %) .

25 (c) Deasetylointi

Deasetylointi suoritettiin lisäämällä katalyyttinen määrä natrium-metoksidia liuokseen, jossa oli vaiheen (b) tuotetta (20 g) metano-lissa (200 ml) ja hämmentämällä reaktioseosta 4 tunnin ajan huoneen 30 lämpötilassa. Liuos deionisoitiin ravistelemalla Amberlyst 15-hartsin kanssa ja väkevöitiin, jolloin saatiin 6,6'-di-0-(t-butyylidifenyyli-silyyl i)-l '-kloori-1'-deoksi sakkaroos ia (15,5 g; 96 7).

(d) hpoksidin muodostus käyttäen DIAI):ia ja d e s i l y 1 o i n t. i 35

Vaiheen (e) tuotteen (15 g) liuosta tolueonissa (200 ml) käsiteltiin di-isopropyyliatsodikarboksyl nai i Π n (ΠΙΛΟ) (10 ml; '3 m.e) ja tri- 71159 fenyylifosfiinilla (14 g, 3 m.e.)· Havaittiin vaimea eksoterminen reaktio ja reaktio pysäytettiin lisäämällä metanolia (15 ml) 0,5 h:n kuluttua ja reaktioseos väkevöitiin siirapiksi.

5 Läsnäoleva trifenyylifosfiinioksidi kiteytyi eetteri1iuoksesta ja näin saatu tuote otettiin THFiiin (200 ml) ja käsiteltiin 1-M tetra-n-butyyliammoniumfluoridilla (55 ml; 3 m.Q.) huoneen lämpötilassa 4,5 h:n ajan. TLC (eetteri/petrooli 7:1) osoitti yksittäisen tuotteen muodostumisen ja niinpä reaktioseos väkevöitiin ia asetyloi-10 tiin pyridiinissä (100 ml) etikkahapon anhydridillä (20 ml). Siirapiksi väkevöimisen jälkeen tuote puhdistettiin piigeelipylväskroma-tografiällä käyttäen eetteri/petroolia (1:1), jolloin saatiin Γ-kloori-1'-deoksisakkaroosi-3',4'-lyksoepoksidin penta-asetaattia (4,5 g; 73 %).

15 (e) Klooraus

Vaiheen (d) tuotteen (3,5 g) liuosta DMF:ssa (40 ml) käsiteltiin litiumkloridilla (3,5 g) 80°C:ssa 24 h:n ajan. Reaktioseosta käsitel-20 tiin kaatamalla se jääveteen (300 ml) ja tuote uutettiin eetteriin (3 x 100 ml), joka kuivattiin (natriumsulfaatti) ja väkevöitiin.

Sitten lisättiin etikkahapon anhydridiä (4 ml) ja pyridiiniä (30 ml), reaktioseosta hämmennettiin huoneen lämpötilassa 4 h:n ajan ja väkevöitiin sitten kuiviin keratislaamalla tolueenin kanssa. Tuote puh-25 distettiin pylväskromatografiällä eluoiden eetteri/petroolilla (1:1), jolloin saatiin 1’,4’-dikloori-l',4'-dideoksisakkaroosin heksa-asetaattia (2,2 g; 56 %).

(f) Deasetylointi 30

Katalyyttinen määrä natriummetoksidia lisättiin heksa-asetaatin (1,5 g) liuokseen metanolissa (70 ml) ja reaktioseosta hämmennettiin huoneen lämpötilassa 4 tunnin ajan. TLC (etyy l iasetaatti/asetoni/ vesi 4:6:1) paljasti yksittäisen tuotteen. Liuos «leionisnitiin 35 Amberlyst 15-hartsilla ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1' ,4'-dikloori-1 ' ,4 '-dideoks i sakkaroosi a (0,8 g; 92 7).

18 711 59

Esimerkki 3 4 ,11 ,4 '-trikloori-4,1/,4'-trideoksigalaktosakkaroosi 5 (a) 2,3,6,31,4'-penta-O-asetyylisakkaroosin (6-PAS) silylointi 6-PAS:n (50 g) liuosta kuivassa pyridiinissä (600 ml) käsiteltiin t-butyylidifenyylisilyylikloridilla (30,1 g; 1,1 m.e.) ja 4-dimctyyli-aminopyridiinillä (2 g) huoneen lämpötilassa 36 tunnin ajan. Yli-10 määräisen reagenssin tuhoamiseksi lisättiin metanolia ja seos väke-vöitiin siirapiksi, joka eluoitiin piigeelipylväästä käyttäen eetteri/asetonia (12:1), jolloin saatiin 6'-0-(t-butyylidifenyy1i-silyyli)-2,3,6,3',4'-penta-0-asetyylisakkaroosia (54 g; 75 %) .

15 (b) Klooraus 4- ja l’-asemissa

Vaiheen (a) tuotteen (24 g; 1 m.e.) liuosta kuivassa pyridiinissä (250 ml) käsiteltiin trifenyylifosfiinilla (32 g; 4 m.e.) huoneen lämpötilassa. Seos jäähdytettiin 0°C:een, hiilitetrakloridi (6 ml; 20 2 m.e.) lisättiin varovasti ja reaktioseos kuumennettiin sitten 70°C:een 2 tunnin ajaksi. TLC (eetteri/petrooli 4:1) paljasti yksittäisen tuotteen, joten reaktioseos jäähdytettiin 20°C:een, metanolia (20 ml) lisättiin ja seos väkevöitiin siirapiksi kerät is 1an-malla tolueenin kanssa. Tuote liuotettiin eetteriin, läsnäoleva 25 trifenyylifosfiinioksidi kiteytyi ja jäännös eluoitiin piigeeli-pylväästä käyttäen eetteri/kevytpetroolia (1:1), jolloin saatiin 4,11-dikloori-4,1’-dideoksi-6’-0-(t-butyylidifenyylisilyyli)-2,3,6, 3 ', 4 ’-penta-0-asetyyl ijyjljiktos akka roosia (24 g; 96 %) siirappina.

30 (c) Deasetylointi ja silylointi C-6:ssa

Katalyyttinen määrä natriummctoksidia lisättiin vaiheen (b) tuulleen (24 g) liuokseen kuivassa mctanolissa (200 ml) ja reaktioseosta hämmennettiin huoneen lämpötilassa 4 h:n ajan. I.iuos dcionisoii iin 35 ravistelemalla Amberlyst 15 (H+)- hartsin kanssa ja väkevöitiin, jolloin saatiin vapaa sokeri kuivana siirappina (saanto 15 g; H/( l) , joka käytettiin ilman jatkopuhdistusta.

19 7115 9 Tämän tuotteen (IA g) liuosta kuivassa pyridiinissä (200 ml) käsiteltiin t-butyylidimetyylisilyylikloridilla (7,5 g; '2,2 m.e.) ja 4-dimetyyliaminopyridiinillä (0,5 g) huoneen lämpötilassa 36 tunnin ajan. Metanolia (20 ml) lisättiin ja reaktioseos väkevöitiin 5 siirapiksi, joka puhdistettiin piigeelipylväskromatografiällä, käyttäen eetteriä eluenttina, jolloin saatiin 4,1'-dikloori-4,1'-dideoksi-6'-0-(t-butyylidifenyylisilyyli)-6-0-(t-butyylidimetyylisilyyli) galaktosakkaroosia (11 g; 58 %) .

10 (d) Epoksidin muodostus

Vaiheen (c) tuotteen (11 g) liuosta etyyliasetaatissa (200 ml) käsiteltiin DEADrlla (7 ml, 2,6 m.e.) ja trifenyylifosfiinilla (4,3 g; 1,3 m.e.). Havaittiin vaimea eksoterminen reaktio ja 1 h:n kulut-15 tua TLC (eetteri/petrooli 7:1) paljasti yhden päätuotteen muodostumisen. Reaktio pysäytettiin lisäämällä metanolia (15 ml) ja seos väkevöitiin siirapiksi, joka liuotettiin eetteriin. Trifenyyli-fosfiinioksidi poistettiin kiteyttämällä ja neste väkevöitiin, jolloin saatiin lyksoepoksidi siirappina (7,8 g; 73 %).

20 (e) Desilylointi ja asetylointi

Tetrabutyyliammoniumfluoridia (19,2 ml; 3 m.e.) lisättiin lykso-epoksidin (7 g) liuokseen THF:ssa (100 ml) huoneen lämpötilassa.

25 Seosta hämmennettiin 5 h:n ajan, minkä jälkeen se väkevöitiin ja ase-tyloitiin lisäämällä etikkahapon anhydridiä ja pyridiiniä. Saatu tuote puhdistettiin pylväskromatografialla, jolloin saatiin 4,1'-dikloori-4,1'-dideoksigalaktosakkaroosi-3',4’-lyksoepoksidin tetra-asetaattia (3,5 g; 84 %) ^ +119,8° (c = 1,0; CHCl^).

30 (f) Klooraus ja asetylointi

Epoksidi (3,5 g) liuotettiin DMFriin (40 ml) ja 1iLiumkloridia (3,5 g) lisättiin. Reaktioseos kuumennettiin 80uC:een 24 h:n ajaksi ja kasi-35 tultiin sitten kaatamalla jäiiveteen (200 ml) ja uni lamalla eetteriin (3 x 100 ml). Orgaaniset uutteet kuivattiin nat r i mnsii! fan t i 1 1 a ja väkevöitiin siirapiksi, joka asctyloitiin lisäämällä pyridiiniä (30 ml) 2° 71159 ja etikkahapon anhydridiä (4 ml) huoneen lämpötilassa. 4 h:n kuluttua reaktioseos väkevöitiin kuiviin kerät is 1aamalla tolueenin kanssa ja tuote puhdistettiin piigeelikromatografialla pylväässä (eetteri/petrooli 1:1), jolloin saatiin 4,1',4'-trikloori-4,1',4'-5 trideoksigalaktosakkaroosin penta-asetaattia (2,6 g; 60 %) + 83,8° (c = 1,9; CHCl-j).

(g) Deasetylointi 10 Penta-asetaatin (2,3 g) liuosta kuivassa metanolissa (100 ml) käsiteltiin katalyyttisellä määrällä natriummetoksia huoneen lämpötilassa 4 h:n ajan. TLC (dikloorimetaani/metanoli 4:1) paljasti yksittäisen tuotteen. Liuos deionisoitiin Amberlyst 15 (H+)- hartsilla ja väkevöitiin, jolloin saatiin 4,1',4'-trikloori-4,11,4'-trideoksigalakto-15 sakkaroosia (1,3 g; 78 %), joka kiteytyi asetoni/eetteristä.

Sul.p. 125-126°C, [<x]D +72,5° (c = 1,1; HO).

analyysi: laskettu C^H-^gCl^Og : 11 e C 36,2 H 4,77 % 20 löydetty 36,0 5,41 %

Esimerkki 4 4,4',6 *-trikloori-4,4 *,6'-trideoksigalaktosakkaroosi 25 (a) 6-PAS:in klooraus 6-PAS (27 g) ja trifenyylifosfiini (26 g; 2 m.e.) liotettiin kuivaan pyridiiniin (250 ml), liuos jäähdytettiin 0°C:een ja hiilitetra-30 kloridi (5 ml; 1 m.e.) lisättiin hitaasti. Reaktioseosta hämmennettiin 0°G:ssa 0,5 h:n ajan, kuumennettiin sitten 70°C:een 2 h:ksi.

TLC (eetteri/asetoni 4:1) paljasti yksityisen tuotteen läsnäolon ja lähtöaineen poissaolon. Reaktioseos jäähdytettiin 20o0:uen, metanolia (20 ml) lisättiin ja seos väkevöitiin kuiviin ke ratis I aama 1 la to-35 lueenin kanssa. Jäännös jaettiin veden (600 m!) ja etyyliasetaatin (500 ml) välillä. Vesikerrosta uutettiin vielä etyyliasetaatilla (2 x 100 ml) ja orgaaniset uutteet kuivattiin (natriumsulΓnätti) ia 21 r-, * * ,__ 71159 väkevöitiin, jolloin saatiin 6'-kloori-6'-deoksi—2,3,6,3',4'-penta-O-asetyylisakkaroosia (24 g; 86 %) sul.p. 124-125°C.

(b) Silylointi 5 6'-kloorijohdannaisen (15 g) liuosta kuivassa pyridiinissä (150 ml) käsiteltiin t-butyylidimetyylisilyylikloridilla (9 g; 2,3 m.e.) ja 4-dimetyyliaminopyridiinillä (200 mg) 50°C:ssa 16 h:n ajan. TLC (eetteri/petrooli 10:1) osoitti yhden päätuotteen. Reaktioseos jääh-10 dytettiin 20°C:een, metanolia (20 ml) lisättiin ja seos väkevöitiin kuiviin keratislaamalla tolueenin kanssa. Tuote puhdistettiin piigeeli-pylväskromatografiällä käyttäen eetteri/petroolia (2:1) eluointiliuot-timena, jolloin saatiin 1'-0-(t-butyylidimetyylisilyyli)-6'-kloori-6’-deoksi-2,3,6,3',4'-penta-0-asetyylisakkaroosia (18 g; 89 %).

15 (c) Klooraus ja deasetylointi

Vaiheen (b) tuote (15 g) ja trifenyylifosfiinia (11,5 g; 2 m.e.) liuotettiin kuivaan pyridiiniin (200 ml) ja liuos jäähdytettiin 0°C:een.

20 Hiilitetrakloridi (2,4 ml; 1 m.e.) lisättiin hitaasti, rcaktioseosta hämmennettiin 0°C:ssa 0,5 h:n ajan ja kuumennettiin sitten 70°C:een 2 h:n ajaksi. TLC (eetteri/petrooli 4:1) osoitti yksittäisen tuotteen. Reaktioseosta käsiteltiin kuten vaiheessa (b) , jolloin saatiin 1'-0-(t-butyylidimetyylisilyyli)-4,6'-dikloori-4,6'-dideoks igalakto-25 sakkaroosin penta-asetaattia (15 g; 97 %), sul.p. 128°C (eetteri/ petroolista).

Ilman jatkopuhdistusta tämän dikloridin (13 g) liuos metanolissa (150 ml) deasetyloitiin käsittelemällä natriummetoksidi1 la huoneen 30 lämpötilassa 4 h:n ajan. Reaktioseosta käsiteltiin ravistelemalla Amberlyst 15- hartsin kanssa ja väkevöitiin, jolloin saatiin 1'-0-(t-butyylidimetyylisilyyli)-4,6'-dikloori-4,6'-didooksigalakto-sakkaroosia (8,7 g; 96 %).

35 (d) Silylointi

Vaiheen (c) tuotteen (8 g) liuosta pyridiinissä (150 ml) käsiteltiin 22 71 1 5 9 t-butyylidimetyylisilyylikloridilla (5,4 g; 2,2 m.e.) ja 4-di-metyyliaminopyridiinillä (400 mg) huoneen lämpötilassa 18 h:n ajan. Reaktioseosta käsiteltiin kohdassa (b) kuvatulla tavalla ja puhdistettiin pylväskromatografiällä, jolloin saatiin l’-6-di-O-5 (t-butyylidimetyylisilyyli)-4,6,-dikloori-4,6'-dideoksigalakto-sakkaroosia (8 g; 82 %).

(e) Epoksidin muodostus 10 DEAD:ia (4,2 ml; 3 m.e.) ja trifenyylifosfiinia (7,9 g; 3 m.e.) lisättiin vaiheen (d) tuotteen (7 g) liuokseen etyyliasetaatissa (200 ml) huoneen lämpötilassa ja tätä hämmennettiin sitten 30 minuutin ajan. Metanolia (10 ml) lisättiin, seos väkevöitiin siirapiksi ja dietyyli-eetteriä lisättiin. Enin osa trifenyylifosfiinioksidista kiteytyi 15 ja poistettiin suodattamalla, jolloin saatiin 1' ,6-di-0-(t-butyyli-dimetyylisilyyli)-4,6'-dikloori-4,6'-dideoksigalaktosakkaroosi-S’,4’-lyksoepoksidia (6 g; 88 %).

(f) Desilylointi ja asetylointi 20

Epoksidin (5 g) liuosta THF:ssa (100 ml) käsiteltiin 1-M tetrabutyyli-ammoniumfluoridillä huoneen lämpötilassa 5 h:n ajan. TLC (eetteri/ petrooli 7:1) paljasti yksittäisen, hitaasti liikkuvan tuotteen. Seos väkevöitiin, liuotettiin pyridiiniin (50 ml) ja etikkahapon anhydri-25 diin (10 ml) 20°C:ssa 4 h:n ajaksi ja väkevöitiin sitten uudelleen kuiviin. Näin saatu tuote puhdistettiin pylväskromatografiällä, jolloin saatiin 4,6*-dikloori-4,6*-dideoksigalaktosakkaroosi-O*,4*-lyksoepoksidin tetra-asetaattia (4,3 g; 95 %).

30 (g) Klooraus, asetylointi ja deasetylointi

Litiumkloridia (4 g) lisättiin vaiheen (f) tuotteeseen (4 g) f)MF:ssa (40 ml) ja seosta kuumennettiin 80°C:ssa 24 h:n ajan. Reaktioseosta käsiteltiin kaatamalla se jäiivetecn ja tuote uinuttiin eetteriin 35 (3 x 100 ml), joka kuivattiin (natriumsulfaatLi) ja väkevöitiin.

Siirappimainen tuote asetyloitiin etikkahapon anhydridillä (4 ml) pyridiinissä (30 ml) huoneen lämpötilassa 4 h:n ajan ja väkevöitiin 23 71159 sitten kuiviin keratislaamalla tolueenin kanssa. Saatu tuote puhdistettiin pylväskromatografiällä (eetteri/petrooli 1:1), jolloin saatiin 4,4' »e'-trikloori-A^1 ,6 '-trideoksigalaktosakkaroosin penta-asetaattia (4 g; 88 %).

5 Tämän penta-asetaatin (3,5 g) liuosta kuivassa metanolissa (100 ml) käsiteltiin katalyyttisellä määrällä natriummetoksidia huoneen lämpötilassa 4 h:n ajan. TLC (dikloorimetaani/metanoli 4:1) paljasti yksittäisen tuotteen. Reaktioseos neutraloitiin lisäämällä 10 Amberlyst 15- hartsia, väkevöitiin kuiviin ja kiteytettiin asetoni/ dietyylieetteristä, jolloin saatiin 4,4',6'-trikloori-4,4' ,6'-tri-deoksigalaktosakkaroosia (2 g; 85 %), [cQq + 78,8° (c = 1,0; 1^0).

Esimerkki 5 15 41-bromi-4,1',61-trikloori-4,41,11,6'-tetradeoksigalaktosakkaroosi (4 f-bromi-TGS) (a) Bromaus 20 (i) TGS-3',4'-lyksoepoksidin triasetaatin (kts. esimerkki 1, reitti 2, vaihe (d)) (4 g) liuosta DMF:ssa (40 ml) käsiteltiin litiumbromidilla o (6 g) 80 C:ssa 24 h:n ajan. Reaktioseosta käsiteltiin kaatamalla jää-veteen (300 ml) ja tuote uutettiin eetteriin (3 x 100 ml), joka sit-25 ten kuivattiin (natriumsulfaatti) ja väkevöitiin siirapiksi. Tämä liuotettiin pyridiiniin (40 ml) ja käsiteltiin etikkahapon anhydri-dillä (4 ml) huoneen lämpötilassa 4 h:n ajan. Reaktioseos haihdutettiin keratislaamalla tolueenin kanssa, jolloin saatiin 4’-bromi-TGS-tetra-asetaattia, joka puhdistettiin piigeelipylväskromatografiällä, eluoiden 30 eetteri/petrooli11a (1:1). Saanto 3,5 g; 70 %.

(ii) Vaihtoehtoisessa bromausreaktiossa epoksidin triasetaatin (4 g) liuosta dikloorimetaanissa (40 ml) käsiteltiin bromivetyhapolla etikka-hapossa (45 p-%) (1,4 ml; 1 m.e.) 0°C:ssa 5 minuutin ajan. Sitten 1i- 35 sättiin pyridiiniä (40 ml) ja etikkahapon anhydridiä (5 ml) ja seosta hämmennettiin huoneen lämpötilassa 2 h:n ajan. Reaktioseos väkevöitiin kuiviin keratislaamalla tolueenin kanssa ja puhdistettiin piigeeli- 24 71159 pylväskromatografiällä käyttäen eetteri/petroolia 1:1, jolloin saatiin 4'-bromi-TGS-tetra-asetaattia (4 g; 81 %) .

(b) Deasetylointi 5

Tetra-asetaatin (4 g) deasetylointi suoritettiin käsittelemällä sen liuosta kuivassa metanolissa (40 ml) katalyyttisellä määrällä natrium-metoksidia 0°C:ssa 16 h:n ajan. Liuos deionisoitiin hämmentämällä Amberlyst 15-hartsin kanssa ja väkevöitiin kuiviin. Eluointi lyhyestä 10 piigeelipylväästä käyttäen dikloorimetaani/metanolia (20:1) tuotti 4'-bromi-TGS:a (1,8 g; 61 %) , joka kiteytyi asetoni/eetteristä.

Sul.p. 78-80°C [a]D +63,4° (c = 1; HgO).

(a 1) Vastaavan 41-fluoriyhdisteen valmistus 15

Lyksoepoksidin triasetaatin (edellä) (4 g) liuosta etaanidiolissa (40 ml) käsiteltiin KHF2:lla (4 g) ja NaF:lla (2 g) 120°C:ssa 36 h:n ajan. Seos jäähdytettiin huoneen lämpötilaan ja uutettiin etyyliasetaatilla (4 x 100 ml). Yhdistetyt uutteet väkevöitiin siirapiksi ja 20 liuotettiin metanoliin. Tuote deasetyloitiin käsittelemällä katalyyttisellä määrällä NaOMe:a huoneen lämpötilassa 4 h:n ajan. Seos deionisoitiin sitten Amberlyst 15 H+-hartsilla ja väkevöitiin. Puhdistus piigeelipylväällä, eluoiden dikloorimetaani/metanolil La 20:1 tuotti 4,1',6'-trikloori-4,1',4',6'-tetradeoksi-4'-fluorigalakto-25 sakkaroosia 2,7 g (66 %) siirappina. [°0D +83,2° (c = 1,1; vesi).

Massaspektri: m/e 201, 203, 205 (9:6:1, dikloorimonofluorifruktoosi) 181, 183 (monokloorigalaktoosi) 30 165 (201 - HC1) * 163 (181 - H„0) ,

^ I

Esimerkki 6 35 4,1',4',6'-tet rabromi-4,11,41,6'-tetradeoksi galaktosakka roos i (a) 6-PAS:n bromaus 6-PAS (27,6 g) ja t ri fenyy li fos f i i ni a (78,6 g; 6 m.c>.) liuotettiin 25 71 1 5 9 pyridiiniin (300 ml) huoneen lämpötilassa ja jäähdytettiin sitten 0°C:een. Hiilitetrabromidia (50 g; 3 m.e.) lisättiin hämmentäen ja reaktioseos kuumennettiin 75°C:een 4 tunnin ajaksi. Metanolia (50 ml) lisättiin jäähdytettyyn reaktioseokseen ylimääräisen trifenyyli-5 fosfiinin tuhoamiseksi ja saatu liuos haihdutettiin siirapiksi, joka otettiin dikloorimetaaniin. Tämä liuos pestiin peräjälkeen vedellä, 1 M HClrlla, natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä; orgaaniset uutteet kuivattiin sitten natriumsulfaatilla, suodatettiin puu-hiilen läpi ja väkevöitiin. Saatua siirappia hämmennettiin dietyyli-10 eetterin kanssa, jolloin muodostui kiteinen trifenyylifosfiinioksidin saostuma, joka poistettiin suodattamalla. Suodos haihdutettiin ja jäännös liuotettiin etanoliin, josta 4,1',6'-tribromi-4,11,6 trideoksigalaktosakkaroosin penta-asetaatti (18,5 g; 50 Z) saatiin kiteisenä.

15 (b) 4,1'-6'-tribromi-A,1',6’-trideoksigalaktosakkaroosin penta-asetaatin deasetylointi

Edellisen tuotteen liuosta metanolissa käsiteltiin natriummetoksidilla 20 pH-arvoon 9,5-10 huoneen lämpötilassa A h:n ajan, neutraloitiin lisäämällä Amberlyst 15 (H+)-hartsia, suodatettiin ja väkevöitiin kuivaksi vaahdoksi. Saanto 12 g (91 %).

(c) A,11,61-tribromi-4,11,6'-trideoksigalaktosakkaroosin silylointi 25 4,1'^'-tribromi-A,1 *,6'-trideoksigalaktosakkaroosin (18 g) liuosta pyridiinissä (100 ml) käsiteltiin t-butyylidimetyylisilyylikloridilla (11,3 g; 2,2 m.e.) ja 4-N,N-dimetyyliaminopyridiinillä (2,6 g; 0,6 m.e.) ja seos kuumennettiin 70°C:een 2 h:n ajaksi. Reaktioseos kaadettiin 30 jääveteen ja vesi dekantoitiin pois siirappimaisesta jäännöksestä, joka liuotettiin dietyylieetteriin, kuivattiin (natriumsul faatti) ja eluoitiin piigeelipylväästä käyttäen dietyylieetteriä. Saatu tuote, 4,1'-6 '-tribromi-A,l*,6'-trideoks i-6-0-t-butyy1idimetyylisilyyli-galaktosakkaroosi (13 g; 60 %), eristettiin kuivana siirappina.

35 (d) Epoksidin muodostus DEAD:a (9,6 g; 2,8 m.e.) ja trifenyylifosfiinia (15 g; 2,8 m.e.) 26 71 1 5 9 lisättiin edellisen tuotteen (13 g) liuokseen tolueenissa (100 ml). Reaktioseosta hämmennettiin 10 minuutin ajan huoneen lämpötilassa, sitten lisättiin metanolia (20 ml) ja seos haihdutettiin, jolloin saatiin 4,1',6'-tribromi-4,1',6'-trideoksi-6-O-t-butyylidiraetyyli-5 silyyli-galaktosakkaroosi-3',4'-lyksoepoksidia, joka käytettiin ilman jatkopuhdistusta.

(e) Desilylointi ja asetylointi 10 Edellä valmistettu siirappimainen epoksidi liuotettiin THF:iin (150 ml) ja tähän liuokseen lisättiin 20 ml (1,5 m.e.) tetrabutyyliammonium-fluoridin 1 M liuosta THF:ssa. Seos jätettiin 2 h:ksi huoneen lämpötilaan, sitten haihdutettiin ja käsiteltiin etikkahapon anhydridillä ja pyridiinillä huoneen lämpötilassa 16 h:n ajan. Metanolia lisät-15 tiin ylimääräisen etikkahapon anhydridin tuhoamiseksi ja seos haihdutettiin. Jäännös liuotettiin dikloorimetaaniin, joka pestiin peräjälkeen vedellä, 1 M HCl:llä, natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, kuivattiin sitten natriumsulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin. Saatu siirappi eluoitiin piigeelipylvään läpi käyttäen 20 eetteri/petroolia 1:1, jolloin saatiin 4,1',6'-tribromi-4,1',6'- trideoksigalaktosakkaroosi-31,4'-lyksoepoksidi-triasetaattia (6,4 g; 49 %).

(f) Epoksidirenkaan aukaiseminen bromidilla ja sitä seuraava asetylointi 25

Epoksidin (1,7 g) liuosta dikloorimetaanissa (15 ml) käsiteltiin 45 % HBrtllä etikkahapossa (0,6 ml; 1,2 m.e.) ja reaktioseoksen annettiin olla huoneen lämpötilassa 20 minuutin ajan. Pyridiiniä (10 ml) ja etikkahapon anhydridiä (2 ml) lisättiin ja seos jätettiin huoneen läm-30 potilaan 2 h:n ajaksi. Metanolia (2 ml) lisättiin ja reaktioseos väkevöitiin siirapiksi, joka otettiin dikloorimetaaniin. Tämä liuos pestiin vedellä, 1 M HCl:llä, natriumbikarbonaatin vesiliuoksella ja vedellä, sitten kuivattiin (natriumsulfaatti), suodatettiin ja väkevöitiin. Jäännös kiteytyi eetteri/petroolista, jolloin saaliin 35 4,1’,4'—6'-tetrabromi-4,1',4',6'-tetradeoks igalaktosakkaroosi n letra- asetaattia (1,4 g; 70 7.).

27 71 1 5 9 (g) Deasetylointi

Tetra-asetaatin (1,4 g) liuosta kuivassa metanolissa käsiteltiin 1 M natriummetoksidilla pH-arvoon 8,5 ja seos jäähdytettiin -5°C:een 5 10 h:n ajaksi. Yksi pää- ja yksi sivutuote havaittiin TLC:lla. Liuos neutraloitiin Amberlyst 15 (H+)-hartsilla, sitten suodatettiin ja haihdutettiin. Jäännös eluoitiin piigeelipylvään läpi käyttäen dikloori-metaani/metanolia (20:1), jolloin saatiin 0,8 g päätuotetta. Kiteytys ja uudelleenkiteytys dietyylieetteristä antoi 4,1' ,4' ,6'-tetrabromi-10 4,1',4’^'-tetradeoksigalaktosakkaroosia (0,65 g; 60 Z) , sul.p. 72-76°C, [ajp° +58,3° (c = 0,75; H20).

Esimerkki 7 15 1',4'^'-trikloori-l·',4',6’-trideoksisakkaroosi (a) 6-PAS:n klooraus 6-PAS (54,9 g) liuotettiin pyridiiniin (500 ml) ja trifenyylifosfiinia 20 (48,9 g) lisättiin liuokseen. Kun liuos ravisteltaessa kirkastui, seos jäähdytettiin 0°C:een jäähauteessa. Hiilitetrakloridia (9 ml) lisättiin reaktioseokseen ja sitten sen annettiin tulla huoneen lämpötilaan. Sen jälkeen kun sitä oli pidetty huoneen lämpötilassa 30 minuutin ajan, seos kuumennettiin 60°C:een 1 tunniksi. TLC (5:1 eetteri: 25 petrooli) osoitti yhden päätuotteen, jonka Rf-arvo oli samanlainen autenttisen näytteen kanssa ja yhden nopeamman sivutuotteen. Metanolia lisättiin reaktioseokseen ja väkevöitiin siirapiksi, joka jaettiin eetterin ja veden välillä. Eetterikerros kuivattiin (Na~S0,) ia l 4 eluoitiin piigeelipylväästä käyttäen 1:1 eetteri/petrooli-seosta.

30 Saanto 30 g 2,3,6,3',4'-penta-O-asetyyli-6'-kloori-6'-deoksisakka-roos ia.

(b) Silylointi 35 t-Butyy1idifenyy1ikloorisiIaania (14,35 ml) lisättiin vaiheen (a) tuotteen (27 g) liuokseen pyridiinissä (300 ml). Sen jälkeen kun oli lisätty 4-dimetyy I iuminnpyriili Lnikntnlyyt. t i (100 mg), seosta kuumennet- 71159 28 tiin 60°C:ssa 16 h:n ajan. TLC eetterissä osoitti hyvin vähäistä reaktiota, -30 %. Tässä vaiheessa reaktioseokseen lisättiin vielä t-BDPSCl:a (5 ml) ja katalyyttiä (10 mg) ja kuumennusta jatkettiin 24 tunnin ajan. TLC osoitti lähes 50 % reaktiota ja oli muodos-5 tunut vain yksi tuote. Reaktioseos väkevöitiin ja eluoitiin piigeeli-pylväästä käyttäen ensin petroolia (~2 1) ja sitten eetteri/petroolia 1,5:1, jolloin saatiin puhdasta 1'-silyylieetteriä (8,0 g), joka asetylointiin käyttäen etikkahapon anhydridiä ja pyridiiniä, jolloin saatiin heksa-asetaatti (8,0 g).

10 (c) Desilylointi

Vaiheen (b) tuotteen (7,5 g) liuos THF:ssa (35 ml) ilesilyloitiin käyttäen tetrabutyyliammoniumfluoridia (7 ml) huoneen lämpötilassa 15 18 tunnin ajan. TLC (eetteri/petrooli 6:1) osoitti 80 Z desilyloinnin.

Lisämäärä TBUAFra (3 ml) lisättiin reaktioseokseen, jota hämmennettiin edelleen 8 tunnin ajan. Sitten TLC osoitti yhden päätuotteen läsnäolon. Väkevöimisen jälkeen seos eluoitiin piigeelipylväästä käyttäen ensin petroolia ja sitten eetteri/petroolia 1:1, jolloin saatiin puhdasta 20 2,3,4,6,3',4'-heksa-0-asetyyli-6,-kloori-6'-deoksisakkaroosia (5,0 g; saanto 88 %) .

(d) Klooraus 25 Heksa-asetaatti kloorattiin käyttäen vaiheen (a) olosuhteita. Pylväs- kromatografiän jälkeen seoksesta saatiin 2,3,4,6,3',4'-heksa-0-asetyyli-1',6'-dikloori-l',6'-dideoksisakkaroosia, joka sitten deasetyloitiin CH.jONa:a käyttäen puhtaaksi 1',6'-dikloori-l' ,6’-dideoksisakkaroosiksi, joka kiteytettiin etyyliasetaatista.

30 (e) Silylointi l',6'-dikloorijohdannaisen (5,7 g) liuos pyridiinissn (50 ml) silyloi-tiin käyttäen t-butyy1idifenyylisilyy1iklorid ia, 4-dimetyyliaminopyri-35 diinin (100 mg) läsnäollessa 60°C:ssa 16 h:n ajan. TLC (etyyliasetaatti: asetoni:vesi 6:8:1) osoitti, ettei lähtöainetta ollut jäljellä. Reaktio-seos, jossa oli joitakin nopeampia ja hitaampia epäpuhtauksia, asety- 29 71 1 5 9 loitiin etikkahapon anhydridillä/pyridiinillä ja eluoitiin sitten piigeelipylväästä käyttäen eetteri/petroolia 1:1. Tuote deasetyloi-tiin natriummetoksidia käyttäen, jolloin saatiin puhdas 6-t-butyyli-difenyylisilyylieetteri (6,0 g).

5 (f) Epoksidointi

Trifenyylifosfiinia (9,1 g) lisättiin vaiheen (e) tuotteen (7,0 g) ja dietyyliatsodikarboksylaatin (6,12 ml) liuokseen pyridiinissä. Reaktio-10 seos lämpeni melkein välittömästi ja pysyi lämpimänä noin 5 minuutin ajan. TLC eetteri:petrooli osoitti yhden päätuotteen ja joitakin nopeampia sivutuotteita. Metanolin (10 ml) lisäämisen jälkeen reaktioseos väkevöitiin siirapiksi, jota asetyloitiin etikkahapon anhydridi/ pyridiinillä 6 tunnin ajan. Sitten se väkevöitiin ja eluoitaessa pyl-15 väskromatografiässä eetteri/petroolilla 1:1 tuotti 3',4'-epoksidin (4,5 g)· (g) Desilylointi 20 Näyte epoksidista (4,0 g) desilyloitiin tetrabutyyliammoniumfluoridilla kuten vaiheessa (c). Väkevöinnin jälkeen reaktioseos 6-asetyloitiin käyttäen etikkahapon anhydridi/pyridiiniä. Käsittelyn aikana TLC (eetteri/petrooli 4:1) osoitti yhden päätuotteen. Reaktioseoksen pylväskromatografia käyttäen eetteri/petroolia 1:1 antoi puhtaan tetra-25 asetaatin (2,75 g).

(h) Renkaan aukaiseminen litiumkloridilla

Litiumkloridia (3,0 g) lisättiin vaaheen (g) tuotteen (2,6 g) liuok-30 seen DMFrssa (15 ml) ja sisältöä kuumennettiin 120°C:ssa 24 tunnin ajan. Väkevöinnin jälkeen reaktioseos asetyloitiin tavalliseen tapaan.

Se liuotettiin sitten eetteriin ja pestiin hyvin huolellisesti vedellä 3 kertaa. Vesi uutettiin eetterillä 3 kertaa. Sitten eetteriuutteet kuivattiin, suodatettiin ja väkevöitiin. Mluointi piigeelipylväästä 35 käyttäen eluanttina eetteri/petroolia tuotti r,4',6'-lrikloori-l' ,4 ' ,6'-trideoksisakkaroosipent.a-asetanttia (2,0 g).

3° 71159 (i) Deasetylointi ja puhdistus

Penta-asetaatin (1,7 g) liuos metanolissa (15 ml) deasetyloitiin natriummetoksidillä 10 tunnin ajan. TLC (etyyliasetaatti/asetoni/vesi 5 6:8:1) osoitti yhden päätuotteen. Reaktioseos neutraloitiin, suoda tettiin, väkevöitiin ja pylväskromatografoitiin piigeelillä. Eluointi etyyliasetaatilla tuotti puhdasta 1' ,4' ,6'-trikloori-1',4’,6'-tri-deoksisakkaroosia (750 mg).

10 Esimerkki 8 4'-jodi-4,11,6'-trikloori-4,11,4',6'-tetradeoksigalaktosakkaroosi (4'-jodi-TGS) 15 (a) Deasetylointi ja eetteröinti TGS-31,4'-lyksoepoksidi-triasetaattia (20 g) käsiteltiin natriummetok-sidilla ja metanolilla pH-arvoon 9, 4 h:n ajan. Liuos neutraloitiin Amberlyst-hartsilla, väkevöitiin kuiviin ja jäännös liuotettiin di-20 kloorimetaaniin (200 ml). Dihydropyraania (50 ml) ja pyridiniumtosy-laattia (5 g) lisättiin ja reaktioseosta hämmennettiin huoneen lämpötilassa 3 h:n ajan. Amberlite IR45 (OH )-hartsia lisättiin reaktio-seoksen neutraloimiseksi, seos suodattiin, pestiin kahdesti vedellä, kuivattiin (Na2S0^) ja väkevöitiin siirapiksi; TGS-31,4'-lykso-epoksidin tri-(tetrahydropyranyyli)eetteriksi.

(b) Epoksidin reaktio metyylimagnesiumjodidin kanssa TGS-3*,4'-lyk3oepoksidin tri-(tetrahydropyranyyli)eetteri (12,1 g) 30 dietyylieetterissä (100 ml) lisättiin Grignard-reagenssiin, joka oli valmistettu magnesiumista (1 g) ja metyylijodidista (7,5 g), dietyylieetterissä (100 ml) voimakkaasti sekoittaen. Reaktioseosta kuumennettiin refluksoiden 3 h:n ajan, sitten lisättiin hitaasti kyllästettyä ammoniumkioridiliuosta. lietterikerros erotettiin, kuivattiin natrium-35 sulfaatilla, suodatettiin ja haihdutettiin, jolloin saatiin 12,5 g siirappimaista tuotetta. Tämä liuotettiin metnnoliin (150 ml), lisättiin pyridiniumtosylaattia (2,5 g) in reaktioseos jätettiin huoneen 31 71159 lämpötilaan 2 päivän ajaksi. Neutraloimisen jälkeen liuos väke-vöitiin ja eluoitiin piigeelipylvään läpi eetteri/asetonilla 1:1, jolloin saatiin 4'-jodi-TGS, joka karakterisoitiin NMR:llä ja massa-spektrometrialla tetra-asetaattinaan. +54,1° (e = 1,0; 1^0).

5

Esimerkki 9 4-kloori-l1,4',6'-tribromi-4,11,4 *,6'-tetradeoksigalaktosakkaroosi 10 (a) 6-PAS:n tritylointi 6-PAS:n (50 g) liuosta pyridiinissä (450 ml) käsiteltiin trityyli-kloridilla (100 g) 80°C:ssa 8 h:n ajan. Reaktioseos jäähdytettiin, kaadettiin jääveteen ja tuote uutettiin dikloorimetaaniin, joka kui-15 vattiin ja väkevöitiin siirapiksi, joka koostui pääasiallisesti 2,3,6,3’,4'-penta-O-asetyyli-l',6'-di-0-trityylisakkaroos is ta.

(b) Klooraus 20 Tuote vaiheesta (a) liuotettiin pyridiiniin (400 ml), trifenyylifosfiinia (50 g) ja hiilitetrakloridia (15 ml) lisättiin ja reaktioseos kuumennettiin 70°C:een 2 h:n ajaksi. Liuos väkevöitiin siirapiksi keratis-laamalla tolueenin kanssa ja saatu tuote otettiin eetteriin. Trifenyyli-fosfiinioksidi kiteytyi ja poistettiin suodattamalla ja jäljelle jää-25 nyt liuos väkevöitiin kuiviin.

(c) Detritylointi

Tuote vaiheesta (b) liuotettiin etikkahappoon (750 ml) ja veteen (15 ml) 30 ja kuumennettiin 120°C:een 1 h:n ajaksi, sitten jäähdytettiin ja haihdutettiin kuiviin. Tuote eristettiin piigeelipylväskromatografiällä (eetteri), jolloin saatiin 2,3,6,3’,4'-penta-0-asetyy1i-4-kloori-4-deoksigalaktosakkaroosia (6,2 g).

35 (d) Bromaus

Tuote vaiheesta (c) (6,2 g) liuotettiin pyridiiniin (100 ml) ja tri- 32 71 1 59 fenyylifosfiinia (11,4 g) ja hiilitetrabromidia (7,3 g) lisättiin huoneen lämpötilassa. Reaktioseos kuumennettiin 80°C:een 2 h:n ajaksi, sitten jäähdytettiin ja metanolin (20 ml) lisäyksen jälkeen väkevöi-tiin siirapiksi, joka koostui pääasiallisesti l',6'-dibromi-4-kloori-5 4,1'^'-trideoksigalaktosakkaroosin penta-asetaatista.

(e) Deasetylointi

Penta-asetaatti vaiheesta (d) deasetyloitiin tavalliseen tapaan natrium-10 metoksidilla metanolissa, jolloin saatiin 1',6'-dibromi-4-kloori-4,1'-b'-trideoksigalaktosakkaroosia (4,0 g).

(f) Silylointi 13 Tuotteen vaiheesta (e) (4,0 g) liuosta pyridiinissä (20 ml) käsiteltiin t-butyylidifenyylisilyylikloridilla (5 g) ja 4-dimetyyliamino-pyridiinillä (noin 200 mg) huoneen lämpötilassa 36 h:n ajan. Reaktio-seos käsiteltiin kaatamalla jääveteen ja tuote eristettiin uuttamalla eetteriin, joka kuivattiin (Na2S0^) ja väkevöitiin, jolloin saatiin 20 1',6'-dibromi-6-0-t-butyylidifenyylisilyyli-4-kloori-4,1',6’-trideoksi- galaktosakkaroosia (4,0 g).

(g) Epoksidin muodostus 25 Tuotetta vaiheesta (e) (4,0 g) tolueenissa (50 ml) käsiteltiin DEAD:11a (2,5 ml) ja trifenyylifosfiinilla (3,5 g) noin 30°C:ssa 0,5 h:n ajan. Metanolia (5 ml) lisättiin reaktion pysäyttämiseksi ja väkevöitiin siirapiksi. Lisättiin eetteriä ja läsnä oleva trifenyylifosfiini-oksidi kiteytyi. Näin saatu liuos väkevöitiin, otettiin (40 ml) ja 30 käsiteltiin tetra-n-butyyliammoniumfluoridilla (15 ml) huoneen lämpötilassa 5 h:n ajan. Reaktioseos väkevöitiin ja asetyioitiin käyttäen etikkahapon anhydridiä ja pyridiiniä tavalliseen tapaan, jolloin saatiin 1',6'-dibromi-4-kloori-4,1',6l-trideoksigalaktosakkaroosi-3',4' -lyksoepoksidin triasetaattia (1,5 g).

35 (h) Bromaus

Vaiheen (g) tuotteen (1,5 g) liuosta dikloorimetäänissa (20 ml) käsi- 33 71159 teltiin bromivedyllä etikkahapossa (45 %; 1,0 g) huoneen lämpötilassa 30 minuutin ajan. Reaktioseos käsiteltiin kaatamalla jääveteen ja tuote uutettiin eetteriin, joka kuivattiin ja väkevöitiin. Tuote asety-loitiin ja käsiteltiin tavalliseen tapaan, jolloin saatiin Ι',Α',ό'-5 tribromi-4-kloori-A,11,4',6'-tetradeoksigalaktosakkaroosin tetra-asetaattia (1,0 g).

(i) Deasetylointi 10 Tetra-asetaatti vaiheesta (h) (1,0 g) deasetyloit iin natriummetoksi- dilla metanolissa tavalliseen tapaan, jolloin saatiin 1',4',6'-tribromi- 4-kloori-4,11,4 ' ,61 - tet.radeoksigalaktosakkaroosi (0,5 g; 97 %); [a]p° +63,9° (c = 0,3; Η,,Ο) .

15 Esimerkki 10 11,4',6'-trikloori-4,1',41,6'-tetradeoksi-4-fluorigalaktosakkaroosi (a) 1161-dikloori-1',6'-dideoksisakkaroosin penta-asetaatti 20 2,3,6,3',4'-penta-O-asetyylisakkaroosi (45 g) liuotettiin pyridiiniin (340 ml) huoneen lämpötilassa. Trifenyylifosfiinia (78 g) lisättiin hämmentäen ja liuos jäähdytettiin 5°C:een. Hiilitetrakloridia (25 g) lisättiin hitaasti, pitäen reaktiolämpötila 10°C:n alapuolella. Liuosta 25 hämmennettiin huoneen lämpötilassa 0,5 h:n ajan ja sitten 40°C:ssa 48 h:n ajan. Metanolia (200 ml) ja hiilitetrakloridia (20 ml) lisättiin ja seos haihdutettiin kuiviin, minkä jälkeen haihdutettiin toluee-nin kanssa (kahdesti). Jäännös liuotettiin dikloorimetaaniin (300 ml), pestiin laimealla kloorivetyhapolla, kylläisellä natriumbikarbonaa-30 tiliä ja vedellä, kuivattiin (natriumsulfaatti), valkaistiin (puuhiili), suodattiin ja haihdutettiin siirapiksi. Siirappi kromatografoitiin piigeelillä, eluoiden eetteri/petroolilla (kp. 40-60°C) (8:1), jolloin saatiin tuote kiinteänä, eetteri/petroolista uiulel 1 eenkiteytet tynä. Saanto 18 g.

34 71159 (b) 1',6'-dikloori-4,11,6'-trideoksi-4-fluorigalaktosakkaroosi

Edellinen dikloorisakkaroosin penta-asetaatti (10 g) liuotettiin pyridiinin (1,5 ml) ja dikloorimetaanin (15 ml) seokseen ja lisät-5 tiin hitaasti dietyyliaminorikkitrifluöridin (3,2 g) liuokseen pyridiinin (1,5 ml) ja dikloorimetaanin (15 ml) seoksessa. Liuosta hämmennettiin huoneen lämpötilassa 48 h:n ajan ja haihdutettiin kuiviin 65°C:ssa. Tolueenia lisättiin jäännökseen ja seos haidutet-tiin kuiviin (2x). Jäännös kromatografoitiin piigeelissä eluoiden 10 eetteri/petroolilla (3:1). Kiinteä tuote deasetyloitiin M natrium-metoksidilla (0,5 ml) metanolissa (30 ml) pH:ssa 9, 1 h:n ajan huoneen lämpötilassa. Metanoliliuos deionisoitiin ioninvaihtohartsilla 2- ...

(Zeolit-DMF, H+/CO3 ), suodatettiin ja haihdutettiin kuiviin, jolloin tuote saatiin valkoisena vaahtona.

15 (c) 3,4-anhydro-l,6-dikloori-l,6-dideoksi-B-D-tagatofuranosyyli- 4-deoksi-4-fluori-q-D-galaktopyranosidi

Diki00rifluorigalaktosakkaroosi (1 g) liuotettiin tetrahydrofuraaniin 20 (8 ml) ja trifenyylifosfiinia (2 g) lisättiin hämmentäen. Liuos jääh dytettiin 0°C:een ja dietyyliatsodikarboksylaattia (1,4 g) tetrahydro-furaanissa (2 ml) lisättiin hitaasti, pitäen lämpötila 5°C:n alapuolella. Lisäyksen jälkeen reaktioseos pidettiin huoneen lämpötilassa 2 h:n ajan, jolloin TLC (dikloorimetaani/metanoli 5:1) osoitti reak-25 tion olevan täydellinen. Vettä (1 ml) lisättiin ja seos haihdutettiin kuiviin 40°C:ssa. Jäännös uutettiin vedellä (3x 10 ml), suodatettiin ja pestiin vedellä. Yhdistetyt vesiuutteet ja pesunesteet pestiin dikloorimetaanilla (2 x 20 ml) ja vesiliuos haihdutettiin kuiviin. Jäännös kromatografoitiin piigeelillä, eluoiden eetteri/asetonilla 30 (4:1). Tuote eristettiin valkoisena vaahtona. Saanto 0,8 g.

(d) 1,41,61-trikloori-4,11,41,6'-tet radeoksi-4-fluorigalaktosakkaroosi

Epoksidi (0,6 g) liuotettiin asetoniin (6 ml) ja 1itiumkloridin 35 (600 mg) ja 2 M kloorivetyhappoa (1,2 ml) lisättiin. Seosta hämmen nettiin refluksoiden 2 h:n ajan, jolloin TLC (eetteri/asetoni 4:1) osoitti reaktion olevan täydellinen. Liuos neutraloitiin lisäämällä 71159 kiinteää natriumbikarbonaattia ja saatu seos haihdutettiin asetonin poistamiseksi. Jäännös uutettiin etyyliasetaatilla (3 x 10 ml) ja yhdistetyt etyyliasetaattiuutteet pestiin kyllästetyllä suolaliuoksella, kuivattiin (magnesiumsulfaatti), suodatettiin ja haihdutet-5 tiin. Näin saatu vaahto liuotettiin eetteriin ja tuote kiteytettiin lisäämällä petroolia. Tuote uudelleenkiteytettiin eetteri/petroolista ja saatiin valkoisena, kiteisenä kiinteänä aineena (0,3 g), sul.p. 57-58°C; massaspektri m/e 217, 219, 221, 223 (27:27:9:1, trikloori-fruktoosi), 165 (monofluorigalaktoosi), 182, 184, 186 (9:6:1, 217, 10 219, 221-C1), 147 (165-H20). [a]^° +55,1° (c = 0,79; metanoli).

Esimerkki 11

Sokeria sisältävä vähäkalorinen kolajuoma 15 (ainekset 100 ml:n puilotussiirappia valmistamiseksi): 4'-bromi-4,1',6'-trikloori-4, 1',4 ' ,6 '- tetradeoksigalaktosakkaroosia (yhdiste 1) 13,5 mg 20 sakkaroosia 60 g bentsoehappoa 35 mg fosforihappoa (kons.) 1 ml kola-aromia 1,1 ml väriä tarpeen mukaan 25 kivennäisvettä lisätään 100 ml:ksi Tätä siirappia voidaan sitten lisätä 20 ml:n annoksina 225 ml:n eriin hiilihapotettua, jäähdytettyä kivennäisvettä.

30 Esimerkki 12

Makeutustabletit juomia varten

Kukin tabletti sisältää: 35 yhdistettä l 1,34 mg tai yhdistettä 2 0,53 mg 36 71 159 yhdistettynä dispergoituvaan tablettimassaan (n. 60 mg), joka sisältää sakkaroosia, arabikumia ja magnesiumstearaattia ja vastaa makeudeltaan noin 4,5 g sakkaroosia.

5 Esimerkki 13

Suuren ominaistilavuuden omaava makeutusaine

Suuren ominaistilavuuden omaava makeutusaine, jolla on sama makeus 10 kuin vastaavalla tilavuudella sakkaroosia (hienoa sokeria), valmistetaan sekoittamalla seuraavat ainekset ja sumukuivaarnalla tiheyteen 0,2 g/cm^: maltodekstriiniliuosta, jossa kuiva-ainetta 222,2 g 15 yhdistettä 3 5,0 g tai yhdistettä 1 0,34 g

Saatavalla koostumuksella on sama makeutusteho kuin noin 2 kilolla sokeria.

20

Esimerkki 14

Hiilihapotettu vähäkalorinen limonadi (sokeriton) 25 Ainekset 100 ml:n siirappia valmistamiseksi: yhdistettä 2 5 mg tai yhdistettä 4 237 mg bentsoehappoa 35 mg 30 sitruunahappoa (laskettu kuivana) 1,67 g sitruunaesanssia 0,8 g lisätään kivennäisvettä 100 ml:k s i Tätä siirappia voillaan lisätä 25 ml : n annoksina 225 ml:n eriin hii.li-35 hapotettua, jäähdytettyä kivennäisvettä.

71159 37

Esimerkki 13 Hammastahna paino-% 5 kaksiemäksistä kalsiumfosfaattia 50 glyserolia 20 natriumlauryylisulfaattia 2,5 piparminttuöljyä 2,5 tragakanttikumia 1,0 10 yhdistettä 1 0,006 vettä 23,99

Ainekset sekoitetaan piparmintun makuiseksi hammastahnaksi, jolla on hyväksyttävä makeus, mutta joka on vapaa sokerista ja sakariinista. 15

Esimerkki 16 Purukumi paino-osaa 20 polyvinyyliasetaattia 20 butyyliftalyylibutyy1i glykolaattia 3 polyisobuty1eeniä 3 mikrokiteistä vahaa 2 kalsiumkarbonaattia 2 25 maku/aromiainetta 1 yhdistettä 2 0,0056 glukoosia 10 Tämä purukumimassa voidaan leikata tavanomaisiksi tableteiksi tai 30 liuskoiksi.

Claims (12)

1. 38 Patenttivaatimukset 7 Λ Λ 5 9
2. 1. Yhdiste, jolla on yleinen kaava (I):
3. 5 HO—Λ .1 R3 rO-°\ ( .11 i R1"')—< P< V OH OH HO" X ίο (jossa X tarkoittaa halogeeniatomia; 1 2 15. ja R tarkoittavat vastaavasti hydroksiryhmää ja vetyatomia, halo-geeniatomia ja vetyatomia tai vetyatomia ja halogeeniatomia, ja 3 4 R ja R , jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat halo-geeniatomeja tai hydroksiryhmiä; 20 12 3 ainakin yhden symboleista R ,R ja R tarkoittaessa halogeeniatomia; 2 3 4 sillä edellytyksellä, että kun R ,R ja R kaikki tarkoittavat kloori-atomeja, X ei tarkoita klooriatomia). 25 2, Patenttivaatimuksen 1 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, 2 että R tarkoittaa halogeeniatomia.
4. 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, 2 3 4 että R ,R ,R ja X kaikki tarkoittavat halogeeniatomeja. 30
5. 4. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-3 mukainen yhdiste, tunnettu siitä, että se on valittu seuraavista: 41-bromi-4,1’,6’-trikloori-4,1',4',6'-tetradeoksigalaktosakkaroosi; 35 4,1',4’,6'-tetrabromi-4,l',4',6'-tetradeoksigalaktosakkaroosi; 4,1’,4 *-trikloori-4,1',4'-trideoksigalaktosakkaroosi; 39 71 159 1 4,4',6’-trikloori-4,4',6 *-trideoksigalaktosakkaroosi; 1',4',6’-trikloori-1',4',6'-trideoksisakkaroosi; 1.4.6- tribromi-l,4,6-trideoksi-/S-D~fruktofuranosyyli-4-kloori- 4-deoksi-o<-D-galaktopyranosidi; 5 1,6-dikloori-l,4,6-trideoksi-4-jodi-/3-D-frukto-furanosyyli-4-kloori- 4-deoksi-ot-D-galaktopyranosidi; 1',4’-dikloori-11,4'-dideoksisakkaroosi; 1.4.6- trikloori-l,4,6-trideoksi-/3-D-fruktofuranosyyli-4-deoksi-4-fluori-oi-D-galaktopyranosidi; ja 10 4,1’,6’ -trikloori-4,1’,4’,6 *-tetradeoksi-4 *-fluorl-galaktosakkaroosl.
6. 5. Makeutuskoostumus, tunnettu siitä, että se sisältää patenttivaatimuksen 1 mukaista yhdistettä yhdessä kiinteän laimennus- tai kantoaineen tai nestemäisen laimennus- tai kantoaineen kanssa. 15
7. 6. Menetelmä aineen makeuttamiseksi, tunnettu siitä, että aineeseen yhdistetään makeutusaineena patenttivaatimuksen 1 mukaista yhdistettä.
8. 7. Menetelmä yleisen kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi: « H0T\ rO-0. ( o Y/, Υ.,.ηΟηι..Ν/ "Nm..!., g1 /n «'"M MV OH OH HO' X 30 (jossa X tarkoittaa halogeeniatomia; 35 4° 71159 1. ja R tarkoittavat vastaavasti hydroksiryhmää ja vetyatomia, halo-geeniatomia ja vetyatomia tai vetyatomia ja halogeeniatomia; ja 3 4 R ja R , jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat halo-5 geeniatomeja tai hydroksiryhmää; 12 3 ainakin yhden symboleista R ,R ja R tarkoittaessa halogeeniatomia 2 3 4 sillä edellytyksellä, että kun R , R ja R kaikki tarkoittavat kloori-atomeja, X ei tarkoita klooriatomia), 10 tunnettu siitä, että se käsittää vaiheet: (a) saatetaan reagoimaan yleisen kaavan (II) mukainen yhdiste: 15 r5~a r3 RS )—o / \/ \ ( /Ck Λ ΙΊΙΐιίΙιι,,,ν \ ' „i/\ / u \ > \, nn
9. 20 HO OH HO OH 1 2 (jossa R ja R tarkoittavat vastaavasti 25 hydroksiryhmää tai suojattua hydroksiryhmää ja vetyatomia, halogeeni-atomia ja vetyatomia tai vetyatomia ja halogeeniatomia; 3 4 R ja R , jotka voivat olla samoja tai erilaisia, tarkoittavat halo-30 geeniatomeja tai suojattuja hydroksiryhmiä; 12 3 ainakin yhden symboleista R ,R ja R tarkoittaessa halogeeniatomia; 2 3 4 sillä edellytyksellä, että kun R , R ja R kaikki tarkoittavat kloori-atomeja, X ei tarkoita klooriatomia, ja R^ tarkoittaa hydroksiryhmää tai suojattua hydroksiryhmää) triaryyli-fosfiinin sekä dialkyliatsodikarboksylaatin kanssa, 3*,4*-lyksoepoksidin muodostamiseksi; 35 71159 AI 1 (b) suojataan kaikki reaktiiviset hydroksiryhmät molekyylissä; (c) saatetaan epoksidi reagoimaan halogeeni-ionilähteen kanssa; ja 5 (d) poistetaan suojaryhmät.
10. 8. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että R kaavassa (II) tarkoittaa suojattua hydroksiryhmää.
11. 9. Patenttivaatimuksen 7 tai patenttivaatimuksen 8 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suojattu hydroksiryhmä kaavassa (II) on aryyli- ja/tai alkyylisubstituoitu silyylioksiryhmä, asyylioksiryhmä, triaryylimetoksiryhmä tai alkylideenidioksi- tai aralkylideenidioksi-ryhmä. 15
12. 10. Patenttivaatimuksen 7 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että halogeeni-ionilähde on valittu seuraavista: kloridi- tai bromidi-ionien lähde aproottisessa liuottimessa; bromivety etikkahapossa; tai 20 alkyylimagnesiumjodidi eetteriliuottimessa. 25 30 35 71159 42