FI70220C

FI70220C - Foerfarande foer framstaellning av en ny som antibakteriellt medel anvaendbara alfa-substituerad ureidobensylpenicillansyra

Info

Publication number: FI70220C
Application number: FI812395A
Authority: FI
Inventors: Nobuhiro Oi; Bunya Aoki; Teizo Shinozaki; Kanji Moro; Toshio Kuroki; Isao Matsunaga; Takao Nato; Toshiyuki Nebashi; Yusuke Harada; Hisao Endo; Takao Kimura; Kana Kojima; Masahiko Matsumoto; Hirohi Okazaki; Haruki Ogawa; Minoru Shindo
Original assignee: Chugai Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1980-08-05
Filing date: 1981-07-31
Publication date: 1986-09-15
Also published as: JPS5732289A; CA1203530A; FI812395L; DE3167610D1; IL63456A; DK159272C; NO812630L; EP0045523B1; FI70220B; US4355038A; EP0045523A1; DK343481A; NO158300C; AU542522B2; DK159272B; ATE10635T1; KR850000049B1; MX6943E; ZA815222B; JPH0118916B2

Description

1 70220

Menetelmä uuden, bakteerienvastaisena aineena käyttökelpoisen P\-substituoidun ureidobentsyylipenisillaanihapon valmistamiseksi 5 Keksinnön kohteena on menetelmä uuden, bakteerienvas taisena aineena käyttökelpoisenCX-substituoidun ureidobentsyy-lipenisillaanihapon valmistamiseksi, jolla on kaava (I): 10 un / \ S CH-, HO —& > CO-N-CONH-CH-CONH η--3 (I) / X Jr—N -\^Η3

HO V I 0 COOH

V

15 jossa R^ on vety tai hydroksyyli, X on C q-alkyyli ja Y on 2 n 3 X:n substituentti ]a Y on -OR , -CN, -COOR , 20 HQ tai “O ' 2 joissa R on vety, C^^-alkyyli, C2_4~alkanoyyli tai C2_4~ alkyyli, joka on substituoitu hydroksyylillä, R^ on C, 2 1-4 alkyyli, n on 2, kun Y on -OR , ja 1, kun Y on joku muista 25 ryhmistä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi .

GB-patenttijulkaisuissa 1 250 611, 1 301 961 ja 1 426 199, US-patenttijulkaisuissa 3 931 405, 3 933 795, 3 936 442, 3 939 149, 3 959 258, 3 974 140, 3 978 223, 30 3 980 792 ja 4 016 282, DE-hakemusjulkaisussa 2 311 328, BE-patenttijulkaisussa 877 295 ja JP-patenttijulkaisussa 3532/78 esitetään joukko erilaisiaiX-bentsoyyliureido-iX-bentsyylipenisilliinejä, mutta missään näistä alan tunnettua tekniikkaa kuvaavista viitteistä ei mainita yhdisteitä, jois-35 sa bentsoyyliryhmä on substituoitu hydroksyyliryhmällä.

GB-patenttijulkaisussa 1 260 882 esitetään X-bentsoyyliureido- ιχ-bentsyylipenisilliinejä, joissa on 2 70220 bentsoyyliryhmänä 4-kloori-3-hydroksibentsoyyli, 3-kloori- 4-hydroksibentsoyyli tai m-hydroksibentsoyyli. Siinä ei kuitenkaan mainita bentsoyyliryhmää, jossa on kaksi hydroksyy-liryhmää.

5 DE-hakemusjulkaisussa 1 904 851 esitetään joukko eri laisia »X-bentsoyyliureido- (X-bentsyylipenisilliinejä. Vaikka siinä esitetään yhdiste, jossa bentsoyyliryhmä on substi-tuoitu hydroksyyliryhmällä, ts. D-iX.-(N-p-hydroksibentsoyyli-ureido)bentsyylipenisilliini, siinä ei mainita yhdistettä, 10 jossa bentsoyyliryhmä on substituoitu kahdella hydroksyyliryhmällä.

Tämän hakemuksen keksijöiden tekemää keksintöä, jonka kohteena oli ryhmä penisillaanihappojohdannaisia, joissa oli 3- ja 4-hydroksiryhmiätX-bentsoyyliureido-osan fenyyliren-15 kaassa, on kuvattu esimerkiksi US-patenttijulkaisussa 4 229 348 ja DE-hakemusjulkaisussa 2 921 348. Kuitenkin näiden johdannaisten substituentti, joka vastaa tämän keksinnön yhdisteen ryhmää -X-Y, on vetyatomi tai alempi alkyyli, joten nämä johdannaiset poikkeavat kemialliselta rakenteel-20 taan selvästi tämän keksinnön mukaisesti saatavista johdannaisista .

Kaavan (I) mukaiset OC-substituoidut ureidobentsyyli-penisilliinit ovat uusia yhdisteitä. Niillä on voimakas bak-teerienvastainen vaikutus Gram-positiivisia ja Gram-negatii-25 visia bakteereja vastaan, erityisesti Pseudomonas-sukuun kuuluvia bakteereita vastaan ja niillä on suurempi in vivo aktiivisuus kuin millään tunnetuista yhdisteistä. Sen tähden kaavan (I) mukaiset yhdisteet ja niiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat ovat hyödyllisiä bakteerienvastaisina ai-30 neina.

Substituentteihin liittyvä alkyyliryhmä on tyydytetty hiilivetyryhmä, joka voi olla suora tai haarautunut. Substituentti Y voi liittyä mihin tahansa X:n hiiliatomiin.

Koska kaavan (I) mukaisilla^X-substituoiduilla ureido-35 bentsyylipenisilliineillä on karboksyyliryhmä 3-asemassa, ne pystyvät muodostamaan suoloja erilaisten emäksisten aineiden kanssa karboksyyliryhmällä, ja näin muodostetuista suo- 70220 loista ovat tärkeitä ne, jotka on muodostettu farmaseuttisesti hyväksyttävien emäksisten aineiden kanssa. Esimerkkejä tällaisista suoloista ovat epäorgaanisten emästen suolat, esimerkiksi alkalimetallien (esim. natriumin ja kaliumin) 5 suolat ja maa-alkalimetallien (esim. kalsiumin) suolat sekä myös orgaanisten emästen suolat, esimerkiksi prokaiini- ja dibentsyylietyleenidiamiinisuolat. Näitä suoloja voidaan valmistaa tavanomaisin menetelmin, nimittäin käsittelemällä karboksyyliryhmää ekvivalentilla moolimäärällä edellä kulo vattuja emäksisiä aineita.

Koska 6-asetamidiryhmässä on epäsymmetrinen hiiliatomi, sisältyy kaavan (I) mukaisiin yhdisteisiin optisia isomeerejä, ts. DL-, D- ja L-isomeerejä, ja joissakin tapauksissa, jopa diastereomeereja. Nämä isomeerit sisältyvät kaa-15 van (I) mukaistentX-substituoitujen ureidobentsyylipenisil-liinien määritelmään.

Keksinnön mukaiselle menetelmälle uuden, kaavan (I) mukaisen (X-substituoidun ureidobentsyylipenisillaanihapon valmistamiseksi on tunnusomaista, että 20 a) o(-substituoitu ureidofenyylietikkahappo, jolla on kaava (II): R ~ ^ ^/)-CON-CONH-CH-COOH (II) 25 ^ i1 φ T1

11 6 jossa R on vety, hydroksyyli tai suojattu hydroksyyli, R

30 on hydroksyyli tai suojattu hydroksyyli, Y-1 on joko sama kuin Y kaavassa (I) tai Y, joka sisältää suojatun hydroksyyli- tai karboksyyliryhmän ja X on sama kuin X kaavassa (I), tai sen reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan 6-aminopenisillaanihapon kanssa, jolla on kaava (III) : 4 70220 Η2ΝΊ-ί'^'Χ0*3 (III) / Ν \CH3 7

5 υ COOR

jossa on vety tai suojaryhmä, tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa inertissä orgaanisessa liuottimessa, ja 11 6 7 suojaryhmä, mikäli sellainen on R :ssä, R :ssa, R :ssä tai Y^rssä, poistetaan, tai 10 b) N-bentsoyylikarbamiinihappohalogenidi, jolla on kaava (IV): R8 Y2

8 2 jossa R on suojattu hydroksyyli, Y on joko sama kuin Y

kaavassa (I) tai Y, joka sisältää suojatun hydroksyyli- tai 20 karboksyyliryhmän, ja Z on halogeeni, saatetaan reagoimaan -aminobentsyylipenisilliinin kanssa, jolla on kaava (V):

c PH

H -N-CH-CONH-NO' 3 I LO _ΓθΗ, (V) 25 ffS " \oOR7

V

R1 7 jossa R ja R merkitsevät samaa kuin edellä, tai sen reak-30 tiivisen johdannaisen kanssa orgaanisessa liuottimessa, ja jokainen saadussa tuotteessa läsnäoleva suojaryhmä poistetaan, ja haluttaessa saatu yhdiste muutetaan suolaksi. Menetelmävaihtoehdossa a) kaavan (II) substituenttei-35 hin R^, R^ ja sisältyvä hydroksyylin suojaryhmä voi olla mikä tahansa ryhmä, joka voidaan helposti poistaa lievissä 70220 olosuhteissa. Esimerkkejä ovat asyyliryhmä, kuten formyyli, asetyyli, propionyyli, butyryyli tai klooriasetyyli; aralkyyliryhmä, kuten bentsyyli, bentshydryyli tai trityyli; subs-tituoitu aralkyyliryhmä, jossa on substituenttina esimerkiksi 5 metoksi- tai nitroryhmä näiden aralkyyliryhmien aryyliren-kaalla; yksiarvoinen silyyliryhmä, kuten trimetyylisilyyli, trietyylisilyyli, dimetyylimetoksisilyyli, dietyylimetoksi-silyyli, trimetoksisilyyli tai trietoksisilyyli; kaksiarvoinen silyyliryhmä, kuten dimetyylisilyyli, tapauksessa, jossa 10 suojataan kaksi vierekkäistä hydroksyyliryhmää; sekä ryhmä, jota tavallisesti käytetään suojaamaan hydroksyyliryhmää, kuten t-butyyli, metoksimetyyli, fenasyyli tai tetrahydro-pyranyyli.

Esimerkkejä kaavan (II) substituenttiin Y1 sisältyvän 15 karboksyyliryhmän suojaryhmästä ovat halogenoitu alempi alkyyliryhmä, kuten kloorimetyyli, 2,2,2-trikloorietyyli tai 2,2,2-trifluorietyyli? aralkyyliryhmä, kuten bentsyyli, bentshydryyli tai trityyli; ja substituoitu aralkyyliryhmä, jossa on substituentti, kuten metoksi- tai nitroryhmä näiden 20 aralkyyliryhmien aryylirenkaalla.

Kaavan (II) mukaisen^X-substituoidun ureidofenyyli-etikkahapon reaktiivinen johdannainen on sellainen, että reaktiossa osallisena oleva karboksyyliryhmä on aktivoitu, ja esimerkkejä ovat happoanhydridi, aktiivinen esteri, aktii-25 vinen amidi ja happohalogenidi. Yksityiskohtaisemmin reaktiivista johdannaista kuvaa seka-anhydridi alifaattisen karboksyy-lihapon, kuten pivaliinihapon, trikloorietikkahapon tai valeriaanahapon kanssa; seka-anhydridi alkyyli-hiilihapon kanssa; seka-anhydridi fenyylifosforihapon kanssa; seka-30 anhydridi aromaattisen karboksyylihapon kanssa; esteri, kuten 1-hydroksibentsotriatsolyyliesteri, 2,4-dinitrofenyyli-esteri, N-hydroksisukkiini-imidyyliesteri, N-hydroksiftaali-imidyyliesteri, pentakloorifenyyliesteri, fenyyliatsofenyyli-esteri, syaanimetyyliesteri ja metoksimetyyliesteri; sekä 35 happoamidi imidatsolin, triatsolin tai tetratsolin kanssa.

7

Kun R kaavassa (III) tarkoittaa suojaryhmaä, erityisesti esterin muodostavaa ryhmää, voidaan amidisidoksen muodostava reaktio saattaa tehokkaasti tapahtumaan käyttämällä 6 70220 kondensoimisaineena karbodi-imidiä (esim. N,N1-disyklo-heksyylikarbodi-imidiä, N,N’-dietyylikarbodi-imidiä, N-sykloheksyyli-N'-morfoliinietyylikarbodi-imidiä tai N,N'-di-isopropyylikarbodi-imidiä) substituoitua ureidofenyyli-5 etikkahappoa varten, jota ei muuteta reaktiiviseksi johdannaiseksi vaan joka pysyy karboksyylihappona.

11 6

Kun kaikki kaavan (II) substituentteihin R , R ja Y^ sisältyvät hydroksyyli- ja karboksyyliryhmät on suojattu, saatetaan3<,-substituoitu ureidofenyylietikkahappo reagoimaan 10 halogenidina. Etikkahappo voidaan muuttaa halogenidiksi joko käsittelemällä sitä tavallisesti käytetyllä halogenoimisai-neella, kuten oksalyylikloridilla tai tionyylikloridilla, tai käsittelemällä sitä Vilsmeyer'in reagenssilla, joka saadaan dimetyyliformamidin tai N-metyyliformanilidin ja tionyy-15 likloridin, fosforioksikloridin, trikloorimetyylikloori-formiaatin tai fosgeenin välisellä reaktiolla.

Esimerkkejä kaavan (III) mukaisen 6-aminopenisillaani-hapon substituenttiin R sisältyvästä suojaryhmästä ovat suolan muodostava orgaaninen tai epäorgaaninen emäs, kuten 20 alkalimetalli, maa-alkalimetalli, trietyyliamiini, N-metyyli-piperidiini ja pyridiini; halogenoitu alempi alkyyliryhmä, kuten kloorimetyyli, 2,2,2-trikloorietyyli ja 2,2,2-trifluori-etyyli; aralkyyliryhmä, kuten bentsyyli, bentshydryyli ja trityyli; substituoitu aralkyyliryhmä, jossa on substituent-25 tina esimerkiksi metoksi- tai nitroryhmä aralkyyliryhmän aryylirenkaalla; ja silyyliryhmä, kuten trimetyylisilyyli, trietyylisilyyli, dimetyylimetoksisilyyli, dietyylimetoksi-silyyli, trimetoksisilyyli ja trifenyylisilyyli.

6-aminopenisillaanihapon reaktiivinen johdannainen 30 tarkoittaa johdannaista, jossa 6-aminoryhmä on aktivoitu.

6-aminoryhmä voidaan aktivoida esimerkiksi tuomalla silyyliryhmä, kuten trimetyylisilyyliryhmä 6-aminoryhmään.

Amidisidoksen muodostamisreaktio saatetaan edullisesti tapahtumaan inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten 35 asetonissa, tetrahydrofuraanissa, dimetyyliformamidissa, pyridiinissä, asetonitriilissä, dioksaanissa, kloroformissa, dikloorimetaanissa, dikloorietaanissa tai etyyliasetaatissa.

7 70220

Hydrofiilistä inerttiä orgaanista liuotinta voidaan käyttää seoksena veden kanssa. Reaktio saatetaan tapahtumaan tavallisesti -30...+30 °C:ssa ja edullisesti 0-10 °C:ssa, kun 'Λ-substituoitua ureidofenyylietikkahappoa käytetään aktii-5 visen esterin tai aktiivisen amidin muodossa, ja -15...-5 °C:ssa, kun sitä käytetään happoanhydridin muodossa, ja -20...-10 °C:ssa, kun sitä käytetään happohalogenidin muodossa. Reaktioaika vaihtelee reaktiolämpötilan, reaktioon saatetun yhdisteen, käytetyn liuottimen jne. mukaan, mutta 10 sopivasti reaktioaika on 0,5 - 48 tuntia, edullisesti 1 -24 tuntia.

Amidisidoksen muodostusreaktion päätyttyä poistetaan kaikki reaktiotuotteessa olevat suojaryhmät. Jos hydroksyyli-ryhmän suojaryhmä R^rssä, R^:ssa ja Y^tssä on asyyliryhmä, 15 se voidaan poistaa käsittelemällä tuotetta epäorgaanisella tai orgaanisella emäksellä. Esimerkkejä epäorgaanisesta emäksestä ovat alkalimetallin hydroksidi, kuten natrium-hydroksidi tai kaliumhydroksidi; maa-alkalimetallin hydroksidi, kuten magnesiumhydroksidi tai kalsiumhydroksidi; alkali-20 metallin karbonaattisuola, kuten natriumkarbonaatti tai kaliumkarbonaatti; maa-alkalimetallin karbonaattisuola, kuten magnesiumkarbonaatti tai kalsiumkarbonaatti; alkalimetallin bikarbonaattisuola, kuten natriumvetykarbonaatti tai kaliumvetykarbonaatti; maa-alkalimetallin fosfaattisuola, 25 kuten kalsiumfosfaatti; alkalimetallin vetyfosfaattisuola, kuten dinatriumvetyfosfaatti tai dikaliumvetyfosfaatti; ja ammoniakki. Esimerkkejä orgaanisesta emäksestä ovat alkalimetallin asetaattisuola; trialkyyliamiini, kuten trimetyyli-amiini tai trietyyliamiini; ja alkoholiamiini, kuten dietyyli-30 aminoetanoli tai trietanoliamiini. Asyyliryhmän poistaminen näillä emäksillä suoritetaan vedessä tai orgaanisissa liuot-timissa, jotka sisältävät alkoholihydroksyyliryhmän (esim. metanolissa, etanolissa tai etanoliamiinissa) tai niiden seoksessa. Edullisia esimerkkejä ovat metanolipitoinen 35 ammoniakki ja trietyyliamiini/trietanoliamiini/dimetyyli-formamidiseos.

Jos suojaryhmä on aralkyyli- tai substituoitu aralkyy- 8 70220 liryhmä, se poistetaan katalyyttisellä pelkistyksellä, esimerkiksi katalyyttisellä pelkistyksellä palladiumhiiltä käyttäen. Jos suojaryhmä on t-butyyliryhmä, metoksimetyyliryhmä, fenasyyliryhmä, tetrahydropyranyyliryhmä tai silyyliryhmä, 5 se voidaan poistaa epäorgaanisella hapolla kuten kloorivety-hapolla .

Karboksyyliryhmän suojaryhmä, joka sisältyy Y^rn määritelmään kaavassa (II), ja suojaryhmä, jolla tarkoitetaan 7 R :ää kaavassa (III) , voidaan poistaa pelkistämällä metallil-10 la ja hapolla, esim. sinkkietikkahapolla, jos suojaryhmä on halogenoitu alempi alkyyliryhmä, ja katalyyttisellä pelkistyksellä, esim. palladiumhiilellä, tai käyttäen orgaanista tai epäorgaanista happoa, kuten muurahaishappoa, trifluori-etikkahappoa, bentseenisulfonihappoa, p-tolueenisulfonihap-15 poa, kloorivetyhappoa tai kationista ioninvaihtohartsia tai Lewis-happoa, kuten aluminiumkloridia, jos suojaryhmä on aralkyyliryhmä tai substituoitu aralkyyliryhmä. Jos suoja-ryhmä on silyyliryhmä, se voidaan poistaa joko edellä maini- 7 tuilla hapoilla tai alkoholilla, kuten metanolilla. Jos R 20 on suolan muodostava emäs, se voidaan poistaa käsittelemällä hapolla.

Saatu yhdiste voidaan eristää reaktioseoksesta ja eristetty tuote voidaan helposti puhdistaa jollakin tavanomaisista menetelmistä, esimerkiksi uuttamalla orgaanisella 25 liuottimena, kuten dikloorimetaanilla, kloroformilla, tetra-hydrofuraanilla tai etyyliasetaatilla, tai erilaisin kromatografisin menetelmin käyttäen aktiivihiiltä, piihappogeeliä, ioninvaihtohartsia, dekstraanilla silloitettua polymeeriä tai erittäin huokoista styreenidivinyylibentseeni- tai 30 akryyliesteripolymeeriä.

Kaavan (II) mukainen CX-subs ti tuo itu ureidofenyylietik-kahappo on uusi yhdiste ja se voidaan valmistaa esimerkiksi saattamalla vastaava'X-aminofenyylietikkahappo reagoimaan vastaavan N-substituoitu-bentsoyyli-N-substituoidun alkyyli-35 karbamiinihappohalogenidin kanssa, jossa on suojattu hydroksyyliryhmä ja/tai karboksyyliryhmä, ja poistamalla tarvittaessa suojaryhmä. Käyttökelpoisten suojaryhmien 70220 ja niiden poistamismenetelmien osalta viitataan edellä esitettyyn kuvaukseen substituentteihin R^, ja Y1 sisälty vistä suojaryhmistä ja niiden poistamisesta.

Menetelmävaihtoehdossa b) kaavan (IV) substituenttei-8 2 5 hin R ja Y sisältyvä hydroksyylin suojaryhmä on samanlainen kuin edellä menetelmävaihtoehdon a) yhteydessä kaavan (II) substituentteihin R^ ja Y^ sisältyvä hydroksyylin suojaryhmä.

Kaavan (V) mukaisen(X-aminobentsyylipenisilliinin 10 reaktiivinen johdannainen on sellainen, että^X-aminoryhmä on aktivoitu viemällä siihen silyyliryhmä, kuten trimetyyli-silyyliryhmä.

Menetelmävaihtoehdossa b) reaktio saatetaan edullisesti tapahtumaan inertissä orgaanisessa liuottimessa, kuten 15 asetonissa, tetrahydrofuraanissa, asetonitriilissä, dimetyy-liformamidissa, pyridiinissä, dioksaanissa, kloroformissa, dikloorimetaanissa, dikloorietaanissa tai etyyliasetaatissa. Hydrofiiliä inerttiä orgaanista liuotinta voidaan käyttää seoksena veden kanssa. Reaktio saatetaan tavallisesti tapah-20 tumaan jäähdytyksen tai kuumennuksen alaisena, edullisesti lämpötilassa 0-30 °C. Reaktioaika on tavallisesti 1-48 tuntia, edullisesti 1-10 tuntia. Reaktiotuotteessa läsnäoleva suojaryhmä poistetaan samalla tavalla kuin substituen-teissa R11, R6, R7 ja Y1 oleva suojaryhmä. Saatu yhdiste voi-25 daan eristää reaktioseoksesta ja eristetty tuote voidaan puhdistaa samalla tavalla kuin menetelmävaihtoehdon a) mukaisesti saatu tuote.

Kaavan (IV) mukainen N-bentsoyylikarbamiinihappo-halogenidi on uusi yhdiste ja se voidaan valmistaa käsitte-30 lemällä vastaavaa bentsamidia tai sen johdannaista karbony-loimisaineella, kuten fosgeenilla, trikloorimetyylikloori-formiaatilla orgaanisessa liuottimessa, kuten dikloorimetaanissa, tetrahydrofuraanissa tai etyyliasetaatissa.

Kaavan (I) mukaistenOC-substituoitujen ureidobentsyy-35 lipenisilliinien isomeeri voidaan valmistaa tehokkaasti keksinnön mukaisella menetelmällä, kun käytetään^-substituoi-tua ureidofenyylietikkahappoa (kaava (II)) ja !\-amino- 10 70220 bentsyylipenisilliinia (kaava (V)), joilla on haluttu optinen aktiivisuus, tai N-bentsoyylikarbamiinihappohalogenidia (kaava (IV)), jolla on optinen aktiivisuus ja joka pystyy muodostamaan halutun diastereomeerin. Haluttu optisesti 5 aktiivinen aine voidaan saada käyttämällä tavanomaista optista hajotusmenetelmää.

Kaavan (I) mukainen yhdiste ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat voidaan muodostaa farmaseuttisiksi valmisteiksi, jotka on sovitettu eri antoteille samalla tavalla 10 kuin mitä muille penisilliiniyhdisteille käytetään. Valmisteen vaikuttavan yhdisteen pitoisuus vaihtelee antotiestä riippuen, mutta tavallisesti se on yli 0,1 %, esim. 5 - 99 % ja edullisesti 10 - 60 %. Ihmiselle annettava määrä on tavallisesti 100 - 300 mg päivässä täysikasvuiselle. Päivittäin 15 annettava määrä 500 - 2000 mg on edullinen täysi-ikäiselle, vaikkakin tarkka määrä vaihtelee antotien, taajuuden, kehon painon, iän ja potilaan tilojen mukaan.

Kaavan (I) mukaisten yhdisteiden ja niiden suolojen farmaseuttisten etujen osoittamiseksi verrattiin joidenkin 20 yhdisteiden vähimmäisestopitoisuutta (MIC, ^ug/ml) ja niiden tehokkuutta (osoitettuna ED^gillä) käsittelemällä hiiriä, jotka oli tartutettu Pseudomonas-suvun mikro-organismeilla, vastaaviin arvoihin kahdella yhdisteellä, joiden tunnetaan olevan tehokkaita Pseudomonas-suvun mikro-organismeja vas-25 taan, ts. 6/1) (-) - 0^-(4-etyyli-2,3-diokso-l-piperatsinyyli-karbonyyliamino)fenyyliasetamidjjpenisillaanihapolla (jota tavallisesti nimitetään piperasilliiniksi) ja 6[d(-)-^-£3-(3,4-di-hydroksibentsoyyli)-3-metyyli-l-ureido7- 0\-fenyyli-asetamidi\ -penisillaanihapolla (kuvattu DE-hakemusjulkaisus-30 sa 2 921 324 ja nimitetään tässä yhdisteeksi Z).

1. MIC-mittaus (1) Menetelmä

Bakteerinvastainen vaikutus in vitro mitattiin seu-raavassa kuvatulla agar-levykahdennuslaimennusmenetelmällä.

35 Testiviljely, jota oli inkuboitu yli yön sydäninfuusio- liemessä, laimennettiin 100 - 1000-kertaiseksi ja lusikalli-nen viljelyä ympättiin sydäninfuusioagareille (HI-agar), 11 70220 jotka sisälsivät eri pitoisuuksia spesifistä yhdistettä, ja ympättyjä agareja inkuboitiin 37 °C:ssa 20 tuntia.

(2) Tulokset MIC-mittauksen tulokset on esitetty taulukossa I, 5 jossa kaavan (I) mukaisille yhdisteille on annettu symbolit A, B,...L (vrt. esimerkit). Kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä A, B, D, E, G, I, K ja L on seuraavat rakenteet: - — .... ..... ......- ....... ——, • i

Kaavan (I) mukaisen yhdisteen rakenne \Symboli 10 HO-^VCO—N—CONH — CH CONH —,—r" S -< j HÖ (CH ) 0- N--1 | A i ; 27 3 (o) O COOH ‘ Ά _°»_i.............. , ! 1 Η0-ίθ/-00 - N CONH — CH —CONH—s—/ s γ ] !

HO 0 O" N fcOOH B

15 I ^ ___oh__;_____

' i s I

H0 "(2/"co ” N — C0NH — CH—C0NH “—( V i

«O (CH2)2 /*·—'-COOH | D

OCH2CH2OH j 2 0 HO-^Ö^-O0 — N — CONH CH — CONH \ f S "j<.

HO ίθ) O N COOH | E j

OCH-, I

---4-------^---------- HO-<\0)- co — N -- CONH — CH - CONH —j—f S !

H0 CH2 ^ CT N 'COOH ! G

25 _E22-C2H5_j_| Η°-^θ)-00— N -CONH — CH - CONH —j—f* ® >< j H° ^ ^ 0^“-'W I | _I-- HO-^OV-CO — N - CONH — CH —CONH “l-f S ><. j

30 ηΓ (ca2)3 ^ S~» —\ooh κ I

OCOCH3 ; H<0-^>-CO — N - CONH — CH -CONH[ ^

H0 (ciy3 h ο^ν-ΛοοΗ ; L

i.............°h_Ie_,_ 35 Vertailuyhdisteinä käytettiin seuraavia hakijan val mistamia yhdisteitä, joista yhdiste a tunnetaan FI-patentti-hakemuksesta 1537/72 (esimerkki 3), yhdiste g tunnetaan FI- 70220 patenttihakemuksesta 791 680 (esimerkit 8, 5 ja 11) ja yhdiste z tunnetaan FI-patenttihakemuksesta 791 680 (esimerkit 9, 13, 20) : ' Vertailuyhdisteen rakenne Symboli

ί /-Λ S

I <AJ/~ CO-NH-C-NH-C-NH-CH-CONH j—^ S

! , , I ~ - N---' o o (oi 0 cooh a (ÖV-CO-N---CONH-CH-CONH-]—g S< 0>N goOH h CH CH OH ^ 2 2 : HO ~(g>- CO-N--CONH-CH-CONH-j f S X , l i I fik o^~N —\ · c i | CH2CH2OCHf COOH : i" ~....... " ......" ’ ' \ gg-CO-N - CONH-CH-CONH --j- —f S i 0CH3 Ϊη CH OCH (Sl ^~ N ~^COOH d ' ^23 ; j HÖ ~ ' | <^g)~CO-N -CONH-CH-CONH—r-|" SX i ! hS" I I e [ I I (gJ COOH ! • CH CH CH OH : , - --------------2..............—--------- ! /-> s ; !

! HO“\C>- CO-N -CONH-CH-CONH——" X

i / I J J- n-\ : i H3CO ί (S) O- COOH f ! CH CH CH OH i __________2 2 2__j______< S ! ' HO-<0/-CO-N-CONH-CH-CONH—j—r < 1 i n6~ I φ <yLN·—Vooh I 9 : ___CH3 Oh_j___! HO-^Cz-CO-N-CONH-CH-CONH —;-f S< : HO I (o) 0^~ N ^COOH j z , OO · ^__' C H -N N-CONH-CH-CONH-|—f S χ- Pipera- ' -'-«»Η ;sillilnl 13 7 0220

CO

CM*rr~fHrH^r'yCMH,'3« O ..........

oooooooooo v|| v 11

CO 00 CO VO

ΓΜΓ'^ΉιΗΗΓ'ΓΗΓ-'ΐη tl

OOOOOOOOO·—I

vi vn

CO 00 (M (N

Μ'Γ'^ΤιΗ.ΗίΜηΟΓ'.Η.Η W ..........

oooooooonn vi v||

\D 00 O

r-t ^ i-i «h tn cm r-~ in Q ..........

. OOOOOOrHOOi—1 rH Vi V|| e ___________ O O CO 00 3 Η1 LO i—I »H «Η Γ— H1 ««H Γ"- O ..........

—' Or—iOOOOOOOO

Vi vfl H -----------

S CO VO LO CM (N 00 CM

Γ- LO <N r*H iH rH fH Γ" rH

«* CQ

H o>—iiooomnomtn 0 v II v i cm

Ai -----------

-¾ 00 ID 00 (M

' (ΝΓ~-Η'.ΗΓΗτΤΐηΗ,Γ'~«Η 3 < ..........

G ΟΟΟΟΟΟιΗΟΟΓΟ £ vll vi

i(N

CM

S

o

CM O O

r- uo vo

&i CM «—V «H

en σι O iti «HO ID l~3 f"0 H)

CJ CM I—I

i < ie (ö rt m tn i-3 0) en tn tn

U 3 K Λ -H to - OOO

O^tUMfMXI-HOCCc:

U Z O. C ·Η ·Η -H

W 3 ·Η >v o in öv 17 Π> -rf rO ·Η M 4-> £ -H 3 3 3 «H rH tl) ro 3 «—I m ^-1 }_| -HtnOGHO-HOJtua) UGuxtccxjtötöd λ u a> oj aJ ro 3 o <0 «h u in to tn

tno-H>+-l(Ote-HrO(CtO

o «G H rH g G G e tn o o ro «h «h ooo 3rH-H*H(l)Q)W£££ «H>1>MrHC-r-l300 0

HximajotnoOOO

•H a, Ä ΟεΛ-υ 3 3 3 oitJo-H^ajoajoa) rO-UtnjGfOMMtntntn mc/5WLOtn«aiCMOia< 14 70220 •r-4

L C 00 CM TO

jjj cm cm cm r~- iH (— into

HI rH

Ο,γΗ OOOOOOOCMCMin

·Η V (I ι-H r—I CM

Qj tfl 00 Ή ^3* CM i—I I—t i—4 ! ' I—I CM *3* [S3 oooooooooo v|l vfi vfl

00 00 VD 00 (N

'cr^r^-r-HrH^rLnrMr-^H

•J ..........

OOOOOOlHOOn vj vj vd co oo cnj in

'ΤΙΓ)Γ'·γ-Ιγ-Ι'*3<Γ-·'3·1Η CM

* ..........

OiHOOOOOOeovD

v P v P

CO CO CM CO

•^γ-'^Τγ-Ιι-Ιγ-ιγ'-γίι—ir- d) ..........

ΟΟΟΟΟΟΟΟΓΟΟ V II V c VII

00 CM CM VO

O •νΓΓ'ΐΗΓ'Ι^ιΗΐη'Τ^Τΐη o M *.........

ö oomoooirMOOi—I

3 1 (0 •1—1 -----------

VO CM CM

H CM^TrTrHfHr——1 _ a ..........

g OOOOOOiHOCOCO

2 vl Vll vl 3 . -j---------- s s

/ CM

/ I

/ a u

/ I

0)/ CM CTi CTi 4-)/ t— vo vo

/5 / CU CM rH rH

^ Ο) σι O ill ,c / Ή O in 1-3 1-3 »3 >, / CM CM r-4 -H / I < it! r3 (T3 a) tnww S / u d n: xi -h g - ooo

Eh/ D4 0) H CM -C Ή ΟΊ G C G

/ )-1 13 Cu G ·—i ·Η -H

/ W 3 -H >1 O W CTi CTi CP

/ -H (0 -H I H 4J g -H 3 3 3

/ Ή I—11 0) (0 3 I—) M

/ ·Γ4ΜΟ|ΰν4(ΰ-Γ4 0)<1)<1) / 4J3OlX(0C.arÖGc3

/ "d -Q U O O. CU G

/SdunJ-H umwin /XjWO-hu-igg-i-Iggg

/ C OJG -H^lgCGC

/ g w o o g .h ooo / Η1;3τ,·Γ,Γ-,(1)<1,ωεεε / 3--l>iV4r-tC-H 3000 / i'.-i.cooowcdo'cso / 0-HCliX:cngX(4J3d3 / i-iotoo-rHrHaioooo) / ;*jG4->W.GG.-l>-lWWtn / gacnwcocoscjc^cwc^a, 70220

r j i s : I I ! : ; I

j ι ; I ! J

I ! 1 i ni ocj oo!

tT> I

c( o· ö ο· o rm Oi o o! oj

j j i VII1 vii j ; j I

- · -j-·· J— - -fcf----------1------^---j-:--!-i

^ in in I

i 1 ^ ; i i o ol Η m; o| oi o oi o| , I [ .-1 cm! oi in'. oi ol oj I j : . ; rH 1 ojj <Nt in I VII vlli ! I I I A( a] --1- -j-<25-^-1-1--«--1--1 ! r-ι ^ m( rH. mi ii 4 4 ' . ! <U ' o oj m! CN: ο- ο ο Q oj j I ; , rH. in; o: o! Q o; l t i ' i—* t t“H* r—1 T—i 1 ________________VHJ____[_____;____ j j __Aj_ A A > ( CT\| ; j (Mj ro in; ; I ; τι "1 * *l 1 . » i o o i—i; inf o-o.o σ ο! ο ί j <m m o' m: o oi o f

VII ! (N: ^ J

rj* in ^ in ;

i ^ 4 ^ I ! i I

n °i ol ^ U3- °, o, IN ol O; o! „ υ °* i-h| 1X3 m m I η ί oi ol oi

3 I ng; cn| in I

0 ! ' A; A! 1

M · .....- ------------osh--—---:---------------4--. -I

+J m r\j m in , in 3 ' 4 * ·: i · ’ I ; ! o n o o! 1 tv cn, ο ί <n o; o; o ; —· j , i-i ι-t o i i-ι ; o’ ol o · , H ; t\| (Ni (N i

M vll VII j j j AAA

Ο Γ ' 1

X

.y IN in i 0 3 · i ί rH o o o m cn ; o in o o o i 0 in'(NrH 0CN0'0!0', (0 (N I-H fN ' i l·* -1---1--;--1-! I :

I |j <N

I ^ .

; 7: S ; I . ' « / : l 3 / (N O ’ ON :

Oi : r- m j

Λ , dl (N 1—I i—I I

>1 / (Tl OS · U ‘ I I I I

H j rH O I in 1 t-H I-) I f P ! nj nj ! H ; ! j 03 ' i < 3 n | 3 <u / h in ^ <u in tn I in : tn j ι U 3 X X -h 3 - OOlOi I CU O) M IN X ι -H O C ClC; I P SS O,; C Ή Ή -h i ; 03 3 ·Η[ >1 ; Ο ' ιη &ι 1 Cn ; -Η <0 -Η Pf -Ρ S ; ·Η . 0 : 0 0 : / ·Η H rH 1) Π3 ι 3 ί Ή Sh Ρ · Ρ | / ε ·η ιη ο β| ρ ; «υ I -η ' (υ ω i <υ ι / «β -ρ 3 υ Xfc3 G|x;3, 3 3 ι -η λ υ ι α)Ρ öj oj ι 3 ! ! c 3 υ 3 rH ι I iw'W’initn (O in O -H MHj ia ! 3 I -h , (0 , to i dj ' cp υ x γη , rH ! ε . c c c / ^ Ö3 0 O lO j rH ι rH 0 ' 0 ' 0 | 0 3 rH -H rH . (1) QJ tn ε · ε 1 6 I I “! >1 p Hl C 1 ·Η j 3 : o 0:0 i 0 Ή χ 0) 0) ! O : in · 0) T3 ΌΌ l p -h αχ cn. e x 1 -ρ ; 3 3-3 / X O 3 o -h ; rH ; υ : o ; ο o , Φ / -n 3I4J tn, x j 3 1 rH 1 sh 1 m tn, in! S aa 11 co ω1. m w I; x . a a a a \ -............ jl. I.. ____]_, 70220 16 2. In vivo antibakteerinen aktiivisuus (1) Menetelmä

Viiden viikon ikäisille ddY urospuolisille hiirille (joista viisi muodosti yhden ryhmän), jotka painoivat keski-5 määrin 21 - 25 g, annettiin vatsaontelon sisäisesti testi-mikro-organismien, joita oli inkuboitu aivo/sydän-infuusio-agar-levyillä yli yön 37 °C:ssa, 5-%:sia musiinisuspensioita. Yhden tunnin ja kolmen tunnin kuluttua ymppäämisestä hiiriin ruiskutettiin ihonalaisesti testiyhdisteitä eri väkevyyksis-10 sä. Jokaisen testiyhdisteen ED,-q määritettiin hiirien lukumäärästä, jotka olivat vielä hengissä viisi päivää vastaavien annosten ruiskuttamisen jälkeen.

(2) Tulokset

Testitulokset on esitetty taulukossa II.

15 Taulukko II: ED,_0 (SC mq/yksilö)

Testi-mikro- Ympättyjen Testiyhdiste___ organismi solujen

___luku__A__B__D__E___G__I

Pseudomonas 1 x 10^ 0,61 1,20 1,48 1,52 2,20 2,00 20 aeruginosa J-272 ; __I _ _ »-;---— --

Testi-mikro- Ympättyjen j Testiyhdiste organismi solujen ! " j ___luku_|_K__L | Z j piperasilliini 2 5 Pseudomonas 1x10^ j 1,71 1,18 | 2,30j 10,0 aeruginosa j I 1 J-272 __________[|___j___

Taulukoiden I ja II lukuarvot osoittavat, että uusil-30 la kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on voimakkaampi in vitro antibakteerinen aktiivisuus Pseudomonas-suvun bakteereja vastaan kuin vertailuyhdisteillä, joissa ei ole kahta hydroksyyliryhmää vierekkäisissä asemissa 6-bentsoyyliureido-ryhmän bentseenirenkaassa.

35 Lisäksi kaavan (I) mukaisilla yhdisteillä on voimak kaampi in vivo antibakteerinen aktiivisuus Pseudomonas-suvun bakteereja vastaan kuin vertailuyhdisteillä. Tämän paremman

II

70220 in vivo antibakteerisen aktiivisuuden arvellaan johtuvan tietyntyyppisen substituoidun alkyyliryhmän liittymisestä 6-bentsoyyliureidoryhmään.

Seuraavat esimerkit kuvaavat lähemmin keksintöä.

5 Esimerkki 1 (1) 70 ml:aan kuivatun dikloorimetaanin suspensiota, joka sisälsi 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydr-oksibentsamidia ja 12,9 g trimetyylisilyylikloridia, lisättiin tiputtaen 40 ml kuivatun dikloorimetaanin liuos- 10 ta, joka sisälsi 11,5 g trietyyliamiinia, jäävedellä jäähdyttäen. Syntynyttä seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 40 minuuttia typpiatmosfäärissä. Jäähdyttäen lisättiin tiputtaen 2,8 ml trikloorimetyyliklooriformiaattia lämpötilassa -10...-5 °C. Seoksen lämpötilaa nos-15 tettiin vähitellen ja 2-tuntisen sekoittamisen jälkeen 0-5 °C:ssa tislattiin ylimääräinen fosgeeni ja liuotin pois tyhjössä. Jäännökseen lisättiin kuivaa dikloorimetaa-nia (80 ml) ja liukenematon osa suodatettiin pois painovoiman vaikutuksella ja saatettiin seuraavassa kuvattuun 20 reaktioon.

(2) Trimetyylisilyylikloridia (7,8 g) lisättiin tiputtaen 5-10°C:ssa 100 ml:aan kuivatun dikloorimetaanin liuosta, joka sisälsi 10,8 g vedetöntä ampisilliiniä ja 7,1 g trietyyliamiinia. Sen jälkeen kun seosta oli se- 25 koitettu samassa lämpötilassa 1 tunti, lisättiin kohdassa (1) edellä valmistettu dikloorimetaani-liuos tiputtaen ja sekoittaen 0-5°C:ssa. Yhden tunnin sekoittamisen jälkeen 5-10°C:ssa seos haihdutettiin kuiviin huoneen lämpötilassa tyhjössä ja jäännökseen lisättiin seos, jossa oli 300 ml 30 etyyliasetaattia ja 100 ml kylmää IN kloorivetyhappoa, ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin sitten 300 ml:11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta ja uutettiin kahdesti 300 ml:11a kylmää kyllästettyä natrium-vetykarbonaatin vesipitoista liuosta. Erotettu vesipitoi-35 nen kerros pestiin 100 ml :11a etyyliasetaattia. Vesipitoinen kerros sekoitettiin 250 ml:n kanssa etyyliasetaattia, käsiteltiin kylmällä 6N kloorivetyhapolla sen pH:n asetta- 70220 18 miseksi noin 1,5:een ja kyllästettiin natriumkloridilla. Orgaaninen kerros erotettiin sitten, pestiin 100 ml :11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois tyh-5 jössä. Jäännös kromatografoitiin aktiivihiilellä (kro-matografia-asteista) pylväässä ja eluoitiin etyyliasetaatilla. Eluaatit yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjössä kunnes tilavuus oli noin 30 ml. Väkevöite lisättiin 300 ml: aan η-heksaania sekoittaen, jolloin saatiin 5,0 g β{ρ (-) -<X-£2-10 (3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-(3-hydroksipropyyli)-l-ureido7- O^-fenyyliasetamidoJ penisillaanihappoa (jota tämän jälkeen tässä nimitetään yhdisteeksi (A)) valkoisena jauheena. IR1>KB5 (cm-1): 3700-2300 , 1775, 1675, 1600, 1515

ITlclX

15 NMR (DMSO-dg, 60 MHz) £ (ppm): 1,41 (3H,s), 1,55 (3H,s), 1,4-2,0 (2H, br), 3,36 (2H, t, J = 6Hz), 3,75 (2H, br), 4,20 (1H, s), 5,3-5,8 (3H, m), 6,7-7,5 (8H, m), 9,2 (2H, br) 20 uvO E*0H nm (f) : 209 (3,1 x 104), 295 (6,3 xlO3), ΠΙαΧ * 225 (olake), 271 (6,1 x 10J).

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(a) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi että 25 5,0 g:n N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia asemesta käytettiin 5,0 g N-(5-hydroksipentyyli)-3,4-di-hydroksibentsamidia, saatiin 5,2 g 6 fD(-)-^-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli) -3- (5-hydroksipentyyli) -l-ureido7 - - fenyyliasetamido-} -penisillaanihappo (nimitetään tässä yh-30 disteeksi (C)) valkoisena jauheena.

IR l)KBr (cm-1): 3700-2200, 1770, 1675, 1600, 1515 max NMR (DMSO-dg, 60 MHz) S (ppm): 1,3 (6H, brs), 1,41 (3H, s), 1,55 (3H, s), 3,1-3,9 (4H, m), 4,21 (1H, s), 35 5,3-5,8 (3H, m), 6,7-7,5 (8H, m), 9,14 (1H, d, J = 7 Hz), 9,24 (1H, d, J = 7 Hz) 70220 UV^maxH nm (£): 207 (2'2 X 1q4) ' 225 (°lake> 272 <4'0 x 103), 293 (4,3 x 103).

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(b) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi et-5 tä 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia korvattiin 5,0 g:lla N-/2-(2-hydroksietoksi)etyyli7-3,4-dihydroksibentsamidia saatiin 5,2 g 6- £d(-) -0^-/3- (3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-/2-(2-hydroksietoksi)etyyli7~l~ ureido7~^ -fenyyliasetamido? -penisillaanihappoa (nimitetään 10 tässä tämän jälkeen yhdisteeksi (D)) valkoisena jauheena.

(cm-1): 3700-2200, 1775, 1675, 1600, 1515, 1050 NMR (DMSO-dg, 60 I4Hz) £ (ppm) : 1,41 (3H, s), 1,55 (3H, s), 15 3,3-4,1 (8H, m), 4,20 (1H, s), 5,3-5,8 (3H, m), 6,7-7,6 (8H, m), 9,08 (1H, d, J = 7 Hz), 9,20 (1H, d, J = 7 Hz) uv^f=°H nm (6 ): 207 (2,8 x 104) , 224 (olake) , 270 (4,6 x 10·3) , 295 (4,6 x 103) 20

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(c) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi että 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia korvattiin 5,0 g:11a N-(2-metoksietyyli)-3,4-dihydroksi- 25 bentsamidia ja että trimetyylisilyylikloridia ja trietyyli-amiinia käytettiin vastaavasti määrissä 9,7 g ja 8,6 g, saatiin 7,0 g 6 fΌ(-)-o(-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-(2-metoksietyyli) -l-ureidä?-*^-fenyyliasetamidoj penisillaanihappoa (jota tässä tämän jälkeen nimitetään yhdisteeksi 30 _(E) ) valkoisena jauheena.

IRT>KBr (cm-1): 3700-2300, 1775, 1675, 1600, 1515, 1055 max NMR (DMSO-dg, 60 MHz) S (ppm): 1,41 (3H, s), 156, (3H, s), 35 3,18 (3H, s), 3,40 (2H, br), 3,85 (2H, br), 4,20 (1H, s), 5,3-5,8 (3H, m), 6,7-7,6 (8H, m), 9,11 (1H, d. J = 7 Hz),

2Q

70220 9,15 (1H, d, J = 7 Hz) W AE“H nm (£): 208 (2,8 x 104) , 224 (olake) , 272 max « ^ (5,9 x 10^) , 295 (5,9 x 10·5) .

5

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(d) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi että 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia korvattiin 4,0 g:lla N-(2-syaanietyyli)-3,4-dihydroksi- 10 bentsamidia ja että trimetyylisilyylikloridia ja trietyy- liamiinia käytettiin määrissä 7,9 g ja 7,1 g, saatiin 4,0 g 6 /d (-) -0^-/3- (3,4-dihydroksibentsoyyli) -3- (2-syaanietyyli) - 1-ureidp7-o/-fenyyliasetamido} penisillaanihappoa (jota tässä nimitetään yhdisteeksi (F)) valkoisena jauheena.

15 (cm"1): 3700-2300, 2200, 1770, 1685, 1600, 1510

IUclX

NMR (DMSO-dg, 60 MHz) £ (ppm): 1,41 (3H, s), 1,55 (3H, s), 2,78 (2H, br) , 3,98 (2H, br) , 4,20 (1H, s), 5,3-5,8 (3H, m), 20 6,7-7,5 (8H, m), 9,09 (1H, d, J = 7 Hz), 9,14 (1H, d, J = 7 Hz) UV^OH nm (6): 207 (2,8 x 104) , 225 (olake), 276 (5,1 x 10J), 295 (5,5 x 10J).

25

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(e) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi että 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia korvattiin 3,5 g:11a N-etoksikarbonyylimetyyli-3,4-dihydr- 30 oksibentsamidia ja että trimetyylisilyylikloridia ja tri-etyyliamiinia käytettiin vastaavasti määrissä 5,9 g ja 5,3 g, saatiin 4,0 g 6 fD(-)-<^-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli) -3-etoksikarbonyylimetyyli-l-ureido7~<3(-fenyyliaset-amidoj penisillaanihappoa (jota tässä tämän jälkeen nimi-35 tetään yhdisteeksi (G)) valkoisena jauheena.

n 21 70220 IR>) KEr (cm-1): 3700-2200, 1770, 1730, 1685, 1600, 1515

ITlaX

NMR (DMSO-dg, 60 MHz) 6 (ppm): 1,0-1,4 (3H, m), 1,40 (3H, s), 1,55 (3H, s), 3,8-4,6 (4H, m), 4,20 (1H, s), 5,3-5,9 5 (3H, m), 6,7-7,6 (8H, m), 9,22 (1H, d, J = 7 Hz), 9,47 (1H, d, J = 7 Hz) UV/}E|;°H nm (6): 208 (2,5 x 104) , 226 (olake) , 285 (4,8 x 10"3) , 294 (4,8 x 103) .

10

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(f) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi että 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)3,4-dihydroksibentsamidia korvattiin 5,0 g:11a N-bentsyyli-3,4-dihydroksibentsamidia 15 ja että trimetyylisilyylikloridia ja trietyyliamiinia käytettiin vastaavasti määrissä 8,4 g ja 7,5 g, saatiin 4,0 g 6- /*D(-)- -/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-bentsyyli-l- ureidgj- Q(-fenyyliasetamido{ penisillaanihappoa (jota tässä nimitetään yhdisteeksi (H)) valkoisena jauheena.

20 (cm-1): 3700-2200, 1770, 1680, 1600, 1510 ϊΐΐαΧ NMR (DMSO-dg, 60 MHz) £ (ppm) : 1,42 (3H, s), 1,55 (3H, s), 4,21 (1H, s), 4,8-5,1 (2H, brs), 5,3-5,3 (3H, m), 6,7-7,6 25 (13H, m), 9,16 (1H, d, J = 7Hz), 9,24 (1H, d, J = 7Hz)

UvAEt0H nm (£): 208 (3,2 x 104) , 272 (4,7 x 103) , 295 max , v ' ' (5,3 x 10-3).

30 Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(g) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi että 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia korvattiin 2,7 g:11a N-syaanimetyyli-3,4-dihydroksibentsamidia ja että trimetyylisilyylikloridia ja trietyyliamii- 35 nia käytettiin vastaavasti määrissä 5,8 g ja 5,2 g, saatiin 2,0 g 6 (-) -<(-/3- (3,4-dihydroksibentsoyyli) -3-syaani- 70220 22 metyyli-l-ureido.7- C^-fenvvliasetamido f penisillaanihappoa (jota tässä nimitetään yhdisteeksi (I)) valkoisena jauheena.

(cm1): 3700-2300, 1780, 1700, 1600, 1515

ITlciX

5 NMR (DMSO-dg, 60 MHz) 6(ppm): 1,41 (3H, s), 1,56 (3H, s), 4.20 (1H, s), 4,6 (2H, brs), 5,3-5,8 (3H, m), 6,8-7,6 (8H, m) , 9,21 (2H, d, J = 7 Hz) 10 nm (£): 207 (3,3 x 104), 226 (olake) , 278 (6,9 x ^ IuclX ~ 10J) , 296 (7,4 X 10J) .

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(h) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi et-15 tä 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia korvattiin 5,0 g:11a N-furfuryyli-3,4-dihydroksibentsamidia ja että trimetyylisilyylikloridia ja trietyyliamiinia käytettiin määrissä 9,2 g ja 8,2 g, saatiin 5,5 g 6 f. D(-) -(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-furfuryyli-l-ureido7-20 o^-fenyyliasetamido penisillaanihappoa (jota tässä nimitetään yhdisteeksi (J)) valkoisena jauheena.

IRyKBr (cm-1) : 3700-2200, 1770, 1680, 1600, 1510 max , , , , 25 NMR (DMSO-d6, 60 MHz) £ (ppm): 1,41 (3H, s), 1,55 (3H, s), 4.20 (1H, s), 4,8-5,1 (2H, brs), 5,3-5,8 (3H, m), 6,1-7,6 (11H, m), 9,18 (2H, d, J = 7 Hz) υνΛΕ^0Η nm (£): 208 (3,4 x 1Q4) , 272 (5,3 x 103) , 294 ITlciX _ 30 (5,8 x 10J)

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

(i) Toistamalla esimerkin 1(1) menettely, paitsi että 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia 35 korvattiin 5,0 g:11a N-(3-asetoksipropyyli)-3,4-dihydroksi- 23 70220 bentsamidia ja että trimetyylisilyylikloridia ja trietyy-liamiinia käytettiin vastaavasti määrissä 8,1 g ja 7,2 g, saatiin 3,5 g 6 ^ D(-)- 0(-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-(3-asetoksipropyyli)-l-ureido7-^-fenyyliasetamido^ peni-5 sillaanihappoa (jota tässä nimitetään yhdisteeksi (K)) valkoisena jauheena.

IR t)KBr (cm"1): 3700-2300, 1775, 1730, 1680, 1600, 1510 v max 10 NMR (DMSO-dg, 60 MHz) h (ppm): 1,41 (3H, s), 1,5-2,1 (2H, br) , 1,55 (3H, s), 1,88 (3H, s), 3,6-4,1 (4H, m), 4,21 (1H, s), 5,3-5,8 (3H, m), 6,8-7,6 (8H, m) 9,17 (1H, d, J = 7 Hz), 9,30 (1H, d, J = 7 Hz) 15 υνλΕΙ:0Η nm (£): 205 (2,8 x 104) , 223 (olake) , 272 max «2 -j (4,0 x 10J), 293 (4,4 x 10J).

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä). Esimerkki 2 20 (1) Seokseen, jossa oli 30 ml kuivattua dikloorime- taania ja 30 ml tetrahydrofuraania ja johon oli suspendoi-tu 5,0 g N—(2-hydroksietyyli)-3,4—dihydroksibentsamidia ja 13,8 g trimetyylisilyylikloridia, lisättiin tiputtaen 30 ml liuosta, jossa oli kuivattua dikloorimetaania, joka 25 sisälsi 12,3 g trietyyliamiinia, jäävedellä jäähdyttäen.

Syntynyttä seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 40 minuuttia typpiatmosfäärissä. Jäähdyttäen lisättiin tiputtaen 3,0 ml trikloorimetyyliklooriformiaattia lämpötilassa -10...-5 °C. Seoksen lämpötilaa nostettiin vähitellen 30 ja 2-tuntisen sekoittamisen jälkeen 0-5 °C:ssa ylimääräinen fosgeeni ja liuotin tislattiin pois tyhjössä. Jäännökseen lisättiin kuivattua dikloorimetaania (80 ml) ja liukenematon osa suodatettiin pois painovoiman avulla ja saatettiin reaktioon, jota selostetaan seuraavassa.

35 24 70220 (2) Trimetyylisilyylikloridia (8,4 g) lisättiin tiputtaen 5-10°C:ssa 110 ml:aan kuivatun dikloorimetaa-nin liuosta, joka sisälsi 11,6 g vedetöntä ampisilliinia ja 7,6 g trietyyliamiinia. Senjälkeen kun seosta oli se-5 koitettu samassa lämpötilassa 1 tunti lisättiin kohdassa (1) valmistettu dikloorimetaani-liuos tiputtaen 0-5°C:ssa sekoittaen. Senjälkeen kun oli sekoitettu 5-10°C:ssa 1 tunti seokseen lisättiin noin 100 ml kylmää kyllästettyä suolaliuosta ja seos ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaa-10 ninen kerros pestiin sitten 300 ml:11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta ja uutettiin kahdesti 300 ml:11a kylmää kyllästettyä vesipitoista natriumvetykarbonaatin liuosta. Erotettu vesipitoinen kerros pestiin 100 ml:11a etyyliasetaattia. Vesipitoinen kerros sekoitettiin 250 ml:n kans-15 sa etyyliasetaattia, käsiteltiin kylmällä 6N kloorivety-hapolla sen pH:n asettamiseksi noin l,5:een ja kyllästettiin natriumkloridilla. Orgaaninen kerros erotettiin sitten, pestiin 100 ml:11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin 20 tislattiin pois tyhjössä. Jäännös saatettiin pylväskro- matografiaan Sephadex Lh-20:lla (kauppanimi silloitetulle dekstraanipolymeerille, jota tuottaa Fine Chemicals Corp.) ja eluoitiin asetonilla. Eluaattia haihdutettiin tyhjössä kunnes tilavuus oli noin 30 ml. Väkevöitettä käsiteltiin 25 300 ml: 11a dietyylieetteriä antamaan 3,0 g 6 i D(-) -^-Z3- (3,4-dihydroksibentsoyyli) -3- (2-hydroksietyyli) -l-ureid<l7-o(-fenyyliasetamido^ penisillaanihappoa (jota tässä nimitetään yhdisteeksi (B)) valkoisena jauheena.

30 1R ^ max : 3700-2200, 1770, 1675, 1600, 1510 NMR (DMSO-dg, 60 MHz) 6 (ppm): 1,41 (3H, s), 1,56 (3H, s), 3,3-4,1 (4H, m), 4,21 (1H, s), 5,3-5,8 (3H, m), 6,7-7,6 (8H, m), 9,21 (1H, d, J = 7 Hz), 9,33 (1H, d, J = 7 Hz) 35

II

70220 25 UV ^.EtOH njn (£). 204 (3,3 x 104) , 221 (olake) , 266 max o (5,4 x 103) , 295 (5,6 x 10-3) .

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

5 Esimerkki 3 70 ml:aan kuivattua dikloorimetaania, johon oli sus-pendoitu 12,9 g amoksilliinitrihydraattia, lisättiin 12,9 g Ν,Ο-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia 10-15°C:ssa ja sekoitettiin homogeenisen seoksen muodostamiseksi. Seokseen li-10 sättiin tiputtaen esimerkin 1(1) mukaisesti valmistettu di-kloorimetaaniliuos 5-10°C:ssa. Seosta sekoitettiin samassa lämpötilassa yksi tunti ja seoksen kuiviinhaihduttamisen jälkeen huoneen lämpötilassa tyhjössä jäännökseen lisättiin seos, jossa oli 250 ml etyyliasetaattia, 50 ml tetra-15 hydrofuraania ja 100 ml kylmää IN kloorivetyhappoa, ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin sitten 300 ml:11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta ja uutettiin kahdesti 300 ml:11a kylmää kyllästettyä vesipitoista natriumvetykarbonaatin liuosta. Uutteeseen lisättiin seos, 2Q jossa oli 250 ml etyyliasetaattia 'ja 50 ml tetrahydrofu- raania, ja sen pH asetettiin noin l,5:een kylmällä 6N kloo-rivetyhapolla. Vesipitoinen kerros kyllästettiin natrium-kloridilla ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 100 ml:11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta, 25 kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois tyhjössä. Jäännös kromatografoitiin aktiivi-hiilellä (kromatografiaa varten) pylväässä ja eluoi-tiin asetonilla. Eluaatit yhdistettiin ja väkevöitiin tyhjössä kunnes tilavuus oli noin 30 ml. Väkevöite lisät-30 tiin 300 ml:aan etyylieetteriä sekoittaen antamaan 4,5 g 6 f D(—) - *V-/3- (3,4-dihvdroksibentsovvli) -3- (3-hydroksi-propyyli)-l-ureidQ7~°(~(4-hydroksifenyyli)asetamidoj peni-sillaanihappoa (jota tässä nimitetään yhdisteeksi (L)) valkoisena jauheena.

70220 26 IRV?KBr (cm"1): 3700-2300, 1770, 1680, 1610, 1515 max NMR (DMSO-dg, 60 MHz) S (ppm): 1,42 (3H, s), 1,56 (3H, s), 1,3-1,9 (2H, br), 3,1-4,0 (4H, m) , 4,20 (1H, s) , 5,3-5,7 5 (3H, m), 6,5-7,3 (7H, m), 9,0 (2H, br)

UvAEt0H nm (£): 206 (2,8 x 104) , 224 (2,2 x 104) , 276 max 3 (6,6 x 10J), 283 (6,4 x 10·3) , 295 (5,4 x 10J)

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä) . Esimerkki 4 (1) 100 ml:aan kuivatun dikloorimetaanin suspensiota, joka sisälsi 4,7 g D(-)-fenyyliglysiiniä ja 7,8 g tri- metyylisilyylikloridia, lisättiin 7,1 g trietyyliamiinia IS o lämpötilassa väliltä 5-10 C. Sitten lisättiin tiputtaen samassa lämpötilassa 1 ml Ν,Ο-bis(trimetyylisilyyli)aset-amidia ja yhden tunnin sekoittamisen jälkeen huoneen lämpötilassa lisättiin tiputtaen esimerkin 1(1) mukaisesti valmistettu dikloorimetaani-liuos sekoittaen 5-10°C:ssa. Seos- 20 ta sekoitettiin samassa lämpötilassa 1 tunti ja senjälkeen kun se oli haihdutettu kuiviin huoneen lämpötilassa tyhjössä jäännökseen lisättiin seos, jossa oli 300 ml etyyliasetaattia ja 100 ml kylmää IN kloorivetyhappoa, ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 300 ml:11a 25 kylmää kyllästettyä suolaliuosta ja uutettiin kahdesti 300 ml:11a kylmää kyllästettyä natriumvetykarbonaatin vesipitoista liuosta. Uutteeseen lisättiin 250 ml etyyliasetaattia ja sen pH asetettiin noin l,5:een kylmällä 6N kloori- vetyhapolla. Vesipitoinen kerros kyllästettiin natriumklo-30 ridilla ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 100 ml:11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja liuotin tislattiin pois tyhjössä. Jäännös kiteytettiin asetoni/kloro-formilla ja kiteytettiin uudelleen samasta liuotinjärjes-35 telmästä antamaan 5,5 g D (-)- -Q>- (3,4-dihydroksibentso- 70220 27 yyli)-3-(3-hydroksipropyyli)-l-ureido7fenyylietikkahap-poa värittöminä kiteinä.

Sp. (hajoten): 139-141°C Alkuaineanalyysi: ci9H20N2°7*H2O: lie: 5 Laskettu: C 56,16; H 5,46; N 6,89 (%) Löydetty: C 56,30; H 5,40; N 6,87 (%) IRY?KBr (cm-1): 3540, 3500, 1690, 1670, 1595, 1520 max 10 NMR (DMSO-dg, 60 MHz) & (ppm): 1,3-2,0 (2H, m), 3,35 (2H, t, J = 6 Hz), 3,73 (2H, t, J = 6,5 Hz), 5,22 (1H, d, J = 7 Hz), 6,7-7,5 (8H, m), 9,19 (1H, d, J = 7 Hz)

Ferrikloridi-värireaktio: positiivinen (tummanvihreä).

15 (2) 50 ml:aan kuivatun dikloorimetaanin suspensiota, joka sisälsi 4,0 g fenyylietikkahappoa, joka oli saatu edellä kohdassa (1), ja 4,9 g trimetyylisilyylikloridia, lisättiin tiputtaen 4,2 g trietyyliamiinia 5-10°C:ssa. Sekoittamalla seosta välillä 15-20°C 1 tunti saatiin tri-20 metyylisilyloidun fenyylietikkahapon liuos ja se saatettiin reaktioon, jota selostetaan seuraavassa.

(3) 30 ml:aan kuivatun dikloorimetaanin liuosta, joka sisälsi 1,2 g trikloorimetyyliklooriformiaattia, lisättiin 0,8 g dimetyyliformamidia -20°C:ssa ja yhden tunnin 25 sekoittamisen jälkeen 0-5°C:ssa lisättiin edellä kohdassa (2) valmistettu dikloorimetaaniliuos -30°C:ssa ja seosta sekoitettiin -10...-15 °C:ssa 1,5 tuntia. Senjälkeen seokseen lisättiin tiputtaen -10...-15 °C:ssa liuos, joka oli valmistettu liuottamalla 5,5 g N,0-bis(trimetyylisilyy-30 li)asetamidia 50 ml:aan kuivatun dikloorimetaanin suspensiota, joka sisälsi 2,9 g 6-aminopenisillaanihappoa, ja sekoitettiin samassa lämpötilassa yksi tunti.

Suorittamalla uutto ja puhdistus kuten esimerkissä 1(2) saatiin 4,0 g yhdistettä A. Yhdisteellä oli samat 35 IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1 saadulla yhdisteellä.

70220 28 (a) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-(2-hydroksietyyli)-3,4-dihydroksibentsamidilla, valmistettiin D(-)-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli) -3-(2- 5 hydroksietyyli)-l-ureidq7fenyylietikkahappo, ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yhdiste (B). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 2 saadulla yhdisteellä.

(b) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi et-10 tä N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-(5-hydroksipentyyli)-3,4-dihydroksibentsamidilla, valmistettiin D (-) -t>(-/3- (3,4-dihydroksibentsoyyli) -3- (5-hydroksipentyyli)-l-ureido7fenyylietikkahappo, ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkis- 15 sä 4(2) antamaan yhdiste (C). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(a) saadulla yhdisteellä.

(c) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi kor- 20 vattiin N-/2-(2-hydroksietoksi)etyyli7~3,4-dihydroksibentsamidi] la, valmistettiin D(-)- ^3-(3,4-dihydroksibentsoyyli) -3-/2- (2-hydroksietoksi)etyyli7~l-ureidoJ fenyylietik-kahappo, ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yhdiste (D). Yhdisteellä oli 25 samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(b) saadulla yhdisteellä.

(d) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N- (2-metoksietyyli)-3,4-dihydroksibentsamidilla 30 ja että trimetyylisilyylikloridin ja trietyyliamiinin määrää vähennettiin yhdellä mooliekvivalentilla, valmistettiin D(-)-o(-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-(2-metoksietyyli) -l-ureido7fenyylietikkahappo, ja etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yhdiste 35 (E). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esi-

II

70220 29 merkissä 1(c) saadulla yhdisteellä.

(e) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-(2-syaanietyyli)-3,4-dihydroksibentsamidilla ja 5 että trimetyylisilyylikloridin ja trietyyliamiinin määrää vähennettiin yhdellä mooliekvivalentilla, valmistettiin D (-) -<>( -/3- (3,4-dihydroksibentsoyyli) -3- (2-syaanietyyli) - l-ureido7fenyylietikkahappo ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yh-10 diste (F). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(d) saadulla yhdisteellä.

(f) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-etoksikarbonyylimetyyli-3,4-dihydroksibentsamidilla 15 ja että trimetyylisilyylikloridin ja trietyyliamiinin määrää vähennettiin yhdellä mooliekvivalentilla, valmistettiin D(-)- ö^-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-etoksikarbo-nyylimetyyli-l-ureido7fenyylietikkahappo ja tämä etikka-happo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) 20 antamaan yhdiste (G). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(e) saadulla yhdisteellä.

(g) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-bentsyyli-3,4-dihydroksibentsamidilla ja että tri- 25 metyylisilyylikloridin ja trietyyliamiinin määrää vähennettiin yhdellä mooliekvivalentilla, valmistettiin D(l)-0(-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-bentsyyli-l-ureido7fenyy-lietikkahappo, ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yhdiste (H)♦ Yh-30 disteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(f) saadulla yhdisteellä.

(h) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-syaanimetyyli-3,4-dihydroksibentsamidilla ja että 35 trimetyylisilyylikloridin ja trietyyliamiinin määrää vä- 70220 30 hennettiin yhdellä mooliekvivalentilla, valmistettiin D(-)-0(-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-syaanimetyyli-l-ureido/fenyylietikkahappo. Etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yhdiste (I).

5 Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(g) saadulla yhdisteellä.

(i) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-furfuryyli-3,4-dihydroksibentsamidilla ja että 10 trimetyylisilyylikloridin ja trietyyliamiinin määrää vä-/ hennettiin yhdellä mooliekvivalentilla, valmistettiin D(-)--/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-furfuryyli-l-ureido7fe-nyylietikkahappo, ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yhdiste (J).

15 Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(h) saadulla yhdisteellä.

(j) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-(3-asetoksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidilla 20 ja että trimetyylisilyylikloridin ja trietyyliamiinin määrää vähennettiin yhdellä mooliekvivalentilla, valmistettiin D(-)-0^-/3-(3,4-dihydroksibentsoyyli)-3-(3-asetoksipropyyli) -l-ureidC>7fenyylietikkahappo, ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) anta- 25 maan yhdiste (K). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1(i) saadulla yhdisteellä.

(k) Toistamalla esimerkin 4(1) menettely, paitsi että D (-)-fenyyliglysiini korvattiin D(-)-4-hydroksifenyyli-glysiinillä, valmistettiin D(-)-0^-/3-(3,4-dihydroksibentso- 30 yyli)-3-(3-hydroksipropyyli)-l-ureido7~4-hydroksifenyyli-etikkahappo, ja tämä etikkahappo saatettiin samaan käsittelyyn kuin esimerkissä 4(2) antamaan yhdiste (L). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 3 saadulla yhdisteellä.

35

II

70220 31

Esimerkki 5 (1) Valmistettiin suspensio, jossa oli 5,0 g N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidia 150 ml: ssa tetrahydrofuraania. Suspensioon lisättiin 7,64 g di-5 metyylidikloorisilaania ja seokseen lisättiin 11,98 g trietyyliamiinia hitaasti tiputtaen ja huoneen lämpötilassa sekoittaen. Seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen 60 minuuttia, jäähdytettiin 10°C:seen, sekoitettiin 1,6 ml:n kanssa trikloorimetyyliklooriformiaattia ja seos-10 ta sekoitettiin 25°C:ssa 3 tuntia.

(2) Valmistettiin suspensio, jossa oli 9,5 g vedetöntä ampisilliiniä 100 ml:ssa etyyliasetaattia. Suspensioon lisättiin 6,5 g trimetyylisilyylikloridia ja seokseen lisättiin hitaasti tiputtaen ja sekoittaen 6,1 g 15 trietyyliamiinia samalla jäillä jäähdyttäen. Senjälkeen kun seosta oli sekoitettu vielä yksi tunti 5-10°C:ssa seokseen lisättiin edellä kohdassa (1) valmistettu tet-rahydrofuraani-liuos ja seosta sekoitettiin 1-2 tuntia noin 20°C:ssa. Kun reaktio oli loppuunkulunut, lisättiin 20 200 ml vettä seokseen, jota sekoitettiin perusteellises ti. Seoksen annettiin seistä orgaanisen kerroksen erottamiseksi. Orgaaninen kerros pestiin kylmällä kyllästetyllä suolaliuoksella ja uutettiin 200 ml:11a kylmää kyllästettyä natriumvetykarbonaatin vesipitoista liuosta. Erottuva 25 vesipitoinen kerros pestiin etyyliasetaatilla. Sitten vesipitoiseen kerrokseen, jonka pH oli asetettu noin 1-2reen kylmällä 6N kloorivetyhapolla, lisättiin 200 ml etyyliasetaattia. Vesipitoinen kerros kyllästettiin natriumklori-dilla ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaanista kerros-30 ta pestiin 100 ml:11a kylmää kyllästettyä suolaliuosta kolme kertaa, kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla ja haihdutettiin tyhjössä. Väkevöite lisättiin 500 ml:aan n-heksaania sekoittaen antamaan 11,5 g raakayhdistettä A vaaleankeltaisena jauheena. Seos, jossa oli 7,0 g raaka-35 yhdistettä A ja 0,9 g natriumvetykarbonaattia, liuotettiin 70220 32 30 ml:aan kylmää vettä ja liuos saatettiin pylväskromatogra-fiaan DIAION HP-30:llä (kauppanimi ioninvaihtohartsille, jota tuottaa Mitsubishi Chemical Industries Limited) ja elu-oitiin ensin vedellä, sitten vesipitoisella asetonilla (ace-5 tone conc.: 10 v/v %). Eluaatit yhdistettiin, sekoitettiin 200 ml:n kanssa etyyliasetaattia ja niiden pH asetettiin noin l,5:een kylmällä IN kloorivetyhapolla. Vesipitoinen kerros kyllästettiin natriumkloridilla ja orgaaninen kerros erotettiin. Orgaaninen kerros pestiin 100 ml :11a kylmää kyl-10 lästettyä suolaliuosta, kuivattiin vedettömällä magnesium-sulfaatilla ja väkevöitiin tyhjössä kunnes tilavuus oli noin 30 ml. Väkevöite lisättiin 300 ml:aan n-heksaania sekoittaen antamaan 5,0 g yhdistettä (A) valkoisena jauheena. Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 1 saa-15 dulla yhdisteellä.

(a) Toistamalla esimerkin 5 (1) menettely, paitsi että N-(3-hydroksipropyyli)-3,4-dihydroksibentsamidi korvattiin N-(2-hydroksietyyli)-3,4-dihydroksibentsamidilla, saatiin yhdiste (B). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-ar- 20 vot kuin esimerkissä 2 saadulla yhdisteellä.

(b) 70 ml:aan etyyliasetaattia, johon oli suspendoi-tu 12,9 g amoksisilliinitrihydraattia, lisättiin 12,9 g N,0-bis(trimetyylisilyyli)asetamidia 10-15°C:ssa ja sekoitettiin homogeenisen seoksen muodostamiseksi. Seokseen lisät- 25 tiin tiputtaen esimerkin 4 (1) mukaisesti valmistettu tet-rahydrofuraaniliuos. Seosta sekoitettiin noin 20°C:ssa 1-2 tuntia. Käsittelemällä myöhemmin seosta kuten esimerkissä 5 (1) saatiin, 4,7 g yhdistettä (L). Yhdisteellä oli samat IR-, NMR- ja UV-arvot kuin esimerkissä 3 saadulla yhdisteel-30 lä.

Esimerkki 6 6 /5 - [~D (-) -0-/3- (3,4-dihydroksibentsoyyli) -3- (3-hydroksipropyyli )-l-ureido_/- OC-fenyyliasetamido^ -penisillaaniha-pon natriumsuola 35 (1) Natrium-2-etyyliheksanoaattia (5,7 g) liuotettiin kuivaan etyyliasetaattiin (100 ml) ja liuos jäähdytettiin 70220 33 -15°C:een käyttämällä jäähdytysainetta.

(2) Esimerkin 1 mukaisesti valmistetusta penisillaa-nihaposta (20 g) ja kuivasta etyyliasetaatista (800 ml) valmistettiin liuos, johon lisättiin tipoittain edellä kohdas-5 sa (1) valmistettua liuosta kunnes seoksen pH saavutti arvon 4-5 pitämällä samalla seoksen lämpötila -15°C:ssa jääh-dytysaineen avulla.

Reaktioseoksen annettiin seistä huoneen lämpötilassa ja muodostunut saostuma otettiin talteen suodattamalla, pes-10 tiin huolellisesti kuivalla etyyliasetaatilla ja kuivattiin fosforipentaoksidilla alennetussa paineessa, jolloin saatiin 19,7 g otsikon tuotetta valkeana kiinteänä aineena, jonka IR- ja NMR-spektrit olivat: IR S KBr (cm_1): 3700 - 2300, 1775, 1675, 1600, max 15 1515.

NMR (DMSO-dg, 100 MHz) S (ppm): 1,41 (3H, s), 1,53 (3H, s), 1,3 -1,8 (2H, m), 3,32 (2H, t, J=6Hz), 3,71 (2H, br), 3,90 (1H, s), 5,2 - 5,7 (3H, m), 20 6,6 - 7,6 (8H, m), 9,02 (1H, d, J=7Hz), 9,21 (1H, d, J=7Hz).

Esimerkki 7 6/3 - f D (-) - G*- -/ 3- (3,4-dihydroksibentsoyyli)-3- (3-hyd-roksipropyyli) -l-ureidQ7~c:^~fenyyliasetamido\ -penisillaani-25 hapon kalsiumsuola

Esimerkin 1 mukaisesti valmistettua penisillaanihap-poa (yhdiste A) (6,0 g) ja kalsiumkarbonaattia (1,4 g) sus-pendoitiin tislattuun veteen (40 ml) ja sekoitettiin 0-3°C:ssa 10 minuuttia. Ylimääräinen kalsiumkarbonaatti pois-30 tettiin suodattamalla ja suodos kylmäkuivattiin, jolloin saatiin 5,4 g otsikon tuotetta valkeana jauheena.

Claims

70220

1. Menetelmä uuden, bakteerienvastaisena aineena käyttökelpoisen c*— substituoidun ureidobentsyylipenisillaa-5 nihapon valmistamiseksi, jolla on kaava (I): \ 0 (I) HO—CO-N-CONH-CH-CONH -----r ' S\r" CH3 \~'/ v I ’ m VnCH_

10 HCT ? j---N-----3 Y 1 σ XCOOH V ά1 jossa R^ on vety tai hydroksyyli, X on C __-alkyyli ja Y . 2 n~b 2 15 on X:n substituentti ja Y on OR , -CN, -COOR , tai -O ’ 2 20 joissa R on vety, C^_^-alkyyli, C2_^-alkanoyyli tai c2_4- alkyyli, joka on substituoitu hydroksyylillä, R3 on C.. 2 14 alkyyli, n on 2, kun Y on OR , ja 1, kun Y on joku muista ryhmistä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että 25 a) substituoitu ureidofenyylietikkahappo, jolla on kaava (II): 6 / Λ —<\ /)--CON-CONH-CH-COOH ,6 JM X X <«> 30 '1 f li X Li' jossa R^3" on vety, hydroksyyli tai suojattu hydroksyyli,

35 R^ on hydroksyyli tai suojattu hydroksyyli, Y3" on joko sa- II 70220 ma kuin Y kaavassa (I) tai Y, joka sisältää suojatun hydrok-syyli- tai karboksyyliryhmän ja X on sama kuin X kaavassa (I), tai sen reaktiivinen johdannainen saatetaan reagoimaan 6-aminopenisillaanihapon kanssa, jolla on kaava (III) : 5 «2»--- Nw rl ·. —\ 3 0' X 7 COOR 10 7 jossa R on vety tai suojaryhmä, tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa inertissä orgaanisessa liuottimessa, ja 11 6 7 suojaryhmä, mikäli sellainen on R :ssä, R :ssa, R:ssä tai Ykissä, poistetaan, tai 15 b) N-bentsoyylikarbamiinihappohalogenidi, jolla on kaava (IV): R8-\-CON-CO-Z X (IV)

20 R8 t2 8. jossa R on suojattu hydroksyyli, Y on joko sama kuin Y kaavassa (I) tai Y, joka sisältää suojatun hydroksyyli-25 tai karboksyyliryhmän, ja Z on halogeeni, saatetaan reagoimaan ^-aminobentsyylipenisilliinin kanssa, jolla on kaava (V) : •S CHi H-N-CH-CONH —I-f "X'

30 Jv j— i— CCH3 (V) n ° c°°r7 11 7 35 jossa R ja R merkitsevät samaa kuin edellä, tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa orgaanisessa liuottimessa, ja jo- 70220 kainen saadussa tuotteessa läsnäoleva suojaryhmä poistetaan, ja haluttaessa saatu yhdiste muutetaan suolaksi.

2. Patenttivaatimuksen 1 (a) mukainen menetelmä, 5 tunnettu siitä, että Ct-substituoidun ureidofenyyli-etikkahapon happohalogenidi saatetaan reagoimaan 6-amino-penisillaanihapon tai sen reaktiivisen johdannaisen kanssa lämpötilassa väliltä -20... -10°C.

3. Patenttivaatimuksen 1 (a) mukainen menetelmä, 10 tunnettu siitä, että suojaryhmä hydroksyyliryhmälle, joka sisältyy R^:n, R^:n tai Y^rn määritelmään, poistetaan käsittelemällä epäorgaanisella hapolla.

4. Patenttivaatimuksen 1 (a) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suojaryhmä karboksyyliryhmälle, 15 joka sisältyy Y^in määritelmään tai suojaryhmä, jolla tar- 7 koitetaan R :ää, poistetaan käsittelemällä epäorgaanisella hapolla tai alkoholilla.

5. Patenttivaatimuksen 1 (b) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että reaktiolämpötila on 0-30°C.

6. Patenttivaatimuksen 1 (b) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suojaryhmä hydroksyyliryhmälle, 11 8 2 joka sisältyy R :n, R :n tai Y :n määritelmään, poistetaan käsittelemällä epäorgaanisella hapolla.

7. Patenttivaatimuksen 1 (b) mukainen menetelmä, 25 tunnettu siitä, että suojaryhmä karboksyyliryhmälle, 2 joka sisältyy Y :n määritelmään, tai suojaryhmä, jolla tarkoitetaan R^:ää, poistetaan käsittelemällä epäorgaanisella hapolla tai alkoholilla. Patentkrav 70 2 2 0