FI61916B - Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas - Google Patents
Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas Download PDFInfo
- Publication number
- FI61916B FI61916B FI782789A FI782789A FI61916B FI 61916 B FI61916 B FI 61916B FI 782789 A FI782789 A FI 782789A FI 782789 A FI782789 A FI 782789A FI 61916 B FI61916 B FI 61916B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- mmol
- glucose
- liter
- glucosidase
- units
- Prior art date
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 49
- 108010028144 alpha-Glucosidases Proteins 0.000 claims description 39
- 102100024295 Maltase-glucoamylase Human genes 0.000 claims description 38
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 38
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 claims description 38
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 claims description 38
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 claims description 38
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 38
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 32
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims description 29
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims description 29
- BNABBHGYYMZMOA-AHIHXIOASA-N alpha-maltoheptaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O[C@@H]6[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]6O)CO)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O BNABBHGYYMZMOA-AHIHXIOASA-N 0.000 claims description 22
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 19
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 19
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 16
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 claims description 15
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 claims description 15
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 15
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 15
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N D-gluconic acid Chemical group OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims description 13
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 13
- 102000005548 Hexokinase Human genes 0.000 claims description 12
- 108700040460 Hexokinases Proteins 0.000 claims description 12
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 12
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 claims description 11
- 108010057899 Maltose phosphorylase Proteins 0.000 claims description 10
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 claims description 10
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 9
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 claims description 9
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 claims description 8
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 claims description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 claims description 8
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 claims description 8
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 claims description 7
- NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N D-Glucose 6-phosphate Chemical compound OC1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O NBSCHQHZLSJFNQ-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 7
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 6
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 6
- BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 6-Phospho-D-gluconate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O BIRSGZKFKXLSJQ-SQOUGZDYSA-N 0.000 claims description 5
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 claims description 5
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 claims description 5
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 5
- 101000935015 Emericella nidulans (strain FGSC A4 / ATCC 38163 / CBS 112.46 / NRRL 194 / M139) N-acetyl-6-hydroxytryptophan oxidase ivoB Proteins 0.000 claims description 5
- 108010021382 Gluconokinase Proteins 0.000 claims description 5
- 108010009384 L-Iditol 2-Dehydrogenase Proteins 0.000 claims description 5
- 102100024009 Probable gluconokinase Human genes 0.000 claims description 5
- 102100026974 Sorbitol dehydrogenase Human genes 0.000 claims description 5
- RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1,6-bisphosphate Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H]1O RWHOZGRAXYWRNX-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 5
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 claims description 5
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 claims description 5
- -1 mononitrophenyl glucoside Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 claims description 5
- RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 5-methylphenazinium methyl sulfate Chemical compound COS([O-])(=O)=O.C1=CC=C2[N+](C)=C(C=CC=C3)C3=NC2=C1 RXGJTUSBYWCRBK-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 claims description 4
- RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N D-gluconic acid Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O RGHNJXZEOKUKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N Glc6P Natural products OP(=O)(O)OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O VFRROHXSMXFLSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N alpha-D-glucose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 4
- 239000000174 gluconic acid Substances 0.000 claims description 4
- 235000012208 gluconic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 229950010772 glucose-1-phosphate Drugs 0.000 claims description 4
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims description 4
- 125000004395 glucoside group Chemical group 0.000 claims description 4
- NEZJDVYDSZTRFS-RMPHRYRLSA-N Phenyl beta-D-glucopyranoside Chemical group O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC=CC=C1 NEZJDVYDSZTRFS-RMPHRYRLSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012992 electron transfer agent Substances 0.000 claims description 3
- 150000008131 glucosides Chemical group 0.000 claims description 3
- 108060008724 Tyrosinase Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003425 Tyrosinase Human genes 0.000 claims description 2
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims 2
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims 2
- CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N hydroxymethyl Chemical compound O[CH2] CBOIHMRHGLHBPB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 102000051584 NAD kinases Human genes 0.000 claims 1
- 108010084634 NADP phosphatase Proteins 0.000 claims 1
- 102000009569 Phosphoglucomutase Human genes 0.000 claims 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 claims 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims 1
- 108091000115 phosphomannomutase Proteins 0.000 claims 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 claims 1
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 claims 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N UNPD55895 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(O)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O LUEWUZLMQUOBSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N malto-tetraose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UYQJCPNSAVWAFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N maltotetraose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-OUBHKODOSA-N 0.000 description 9
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 8
- DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 32-alpha-galactosyl-3-alpha-galactosyl-galactose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(OC2C(C(CO)OC(O)C2O)O)OC(CO)C1O DBTMGCOVALSLOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N D-maltotriose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 RXVWSYJTUUKTEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N UNPD130147 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(OC3C(OC(OC4C(OC(O)C(O)C4O)CO)C(O)C3O)CO)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FTNIPWXXIGNQQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N malto-pentaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N maltopentaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O[C@H]([C@H](O)CO)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O[C@@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@@H](CO)O2)O)[C@@H](CO)O1 FJCUPROCOFFUSR-GMMZZHHDSA-N 0.000 description 7
- FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N mannotriose Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)C(O)C1O FYGDTMLNYKFZSV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N β-1,4-galactotrioside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@H](CO)O[C@@H](O[C@@H]2[C@@H](O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-BYLHFPJWSA-N 0.000 description 7
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- JORABGDXCIBAFL-UHFFFAOYSA-M iodonitrotetrazolium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1N1[N+](C=2C=CC(I)=CC=2)=NC(C=2C=CC=CC=2)=N1 JORABGDXCIBAFL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 6
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 6
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 101710125031 6-phosphogluconate dehydrogenase, NAD(+)-dependent, decarboxylating Proteins 0.000 description 3
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 3
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000954 2-hydroxyethyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])O[H] 0.000 description 2
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100459440 Caenorhabditis elegans nac-3 gene Proteins 0.000 description 2
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 2
- FNZLKVNUWIIPSJ-UHNVWZDZSA-N D-ribulose 5-phosphate Chemical compound OCC(=O)[C@H](O)[C@H](O)COP(O)(O)=O FNZLKVNUWIIPSJ-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 2
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 2
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 2
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 description 2
- 241000588752 Kluyvera Species 0.000 description 2
- 241000192132 Leuconostoc Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 2
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 description 2
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 2-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O IQUPABOKLQSFBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-M 4-nitrophenolate Chemical compound [O-]C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108090001003 Beta-phosphoglucomutases Proteins 0.000 description 1
- GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N C[CH]O Chemical group C[CH]O GAWIXWVDTYZWAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 241000920033 Eugenes Species 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000001746 Pancreatic alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010029785 Pancreatic alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N Rbl5P Natural products OCC(=O)C(O)C(O)COP(O)(O)=O FNZLKVNUWIIPSJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N Triethanolamine Chemical compound OCCN(CCO)CCO GSEJCLTVZPLZKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GBXZONVFWYCRPT-JGWLITMVSA-N [(2r,3s,4r,5r)-3,4,5,6-tetrahydroxy-1-oxohexan-2-yl] dihydrogen phosphate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C=O)OP(O)(O)=O GBXZONVFWYCRPT-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- VFRROHXSMXFLSN-VANKVMQKSA-N [(2s,3s,4r,5s)-2,3,4,5-tetrahydroxy-6-oxohexyl] dihydrogen phosphate Chemical compound OP(=O)(O)OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O VFRROHXSMXFLSN-VANKVMQKSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000012670 alkaline solution Substances 0.000 description 1
- OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N alpha-maltohexaose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O[C@@H]4[C@H](O[C@H](O[C@@H]5[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]5O)CO)[C@H](O)[C@H]4O)CO)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O OCIBBXPLUVYKCH-QXVNYKTNSA-N 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 102000006995 beta-Glucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010047754 beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 239000011229 interlayer Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N malto-hexaose Natural products OC1C(O)C(OC(C(O)CO)C(O)C(O)C=O)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(OC4C(C(O)C(O)C(CO)O4)O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 DJMVHSOAUQHPSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- YNPFMWCWRVTGKJ-UHFFFAOYSA-N mianserin hydrochloride Chemical compound [H+].[Cl-].C1C2=CC=CC=C2N2CCN(C)CC2C2=CC=CC=C21 YNPFMWCWRVTGKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000000269 nucleophilic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012434 nucleophilic reagent Substances 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 125000000636 p-nitrophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1*)[N+]([O-])=O 0.000 description 1
- 230000004203 pancreatic function Effects 0.000 description 1
- DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N phenobarbital Chemical compound C=1C=CC=CC=1C1(CC)C(=O)NC(=O)NC1=O DDBREPKUVSBGFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000011343 solid material Substances 0.000 description 1
- 238000000859 sublimation Methods 0.000 description 1
- 230000008022 sublimation Effects 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000000870 ultraviolet spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/40—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving amylase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2334/00—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases
- C12Q2334/10—O-linked chromogens for determinations of hydrolase enzymes, e.g. glycosidases, phosphatases, esterases p-Nitrophenol derivatives
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/805—Test papers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/81—Packaged device or kit
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Tri kuulutusjulka.su $3Γφ ™ (11) UTLÄGGNINGSSKRI FT 61916 c ^ Patentti myönnetty IL 10 1982 (51) Kv.iic7int.cir C 12 Q 1/40 SUOMI —FINLAND (21) P»Mnttlh»k*mu* — Paununtttknlng 702789 (22) Htknmltpllvi — Antökningadag 12.09*78 (23) Atkupllvi —Glltlghrtsdag 12.09*78 (41) Tullut Julkiseksi — Blivlt offuntllg ll+. 03.79
Patentti- Ja rekisterihallitus Nihtivikilpanon ]. kuuL|ulkai.un pvm. - 30.06.82
Patent- och registerstyrelsen AnsOkan utlagd oeh utl.tkrift«n publicend (32)(33)(31) Pyydetty stuoiksu*— Begird priorltet 13.09.77 11+.12.77 Saksan Liittotasavalta-Förbunds-republiken Tyskland(DE) P 27^1192.3, P 2755803*8 (71) Boehringer Mannheim GmbH., Sandhofer Strasse 112-132, D-6800 Mannheim-Waldhof, Saksan Liittotasavalta-Förbundsrepubliken Tyskland(DE) (72) Elli Rauscher, Miinchen, Ulrich Neumann, Peissenberg, August Wilhelm Wahlefeld, Weilheim, Alexander Hagen, Tutzing, Wolfgang Gruber, Tutzing-Unterzeismering, Joachim Ziegenhorn, Unterpfaffenhofen,
Eugen Schaioh, Weilheim, Ulfert Deneke, Peissenberg, Gerhard Michal,
Tutzing, Gunter Weimann, Tutzing, Saksan Liittotasavalta-Förbunds-republiken Tyskland(DE) (7*0 Berggren Oy Ab (5I+) Menetelmä ja reagenssi c*-amylaasin määrittämiseksi - Förfarande och reagens för bestämning av Oi-amylas
Seerumin a-amylaasitason määrittäminen on tärkeä kliininen haiman toimintaa selvittävä parametri. Kaupan olevat a-amylaasin määrittämiseen tarkoitetut reagenssit perustuvat pääasiallisesti systeemiin, jossa a-amylaasi pilkkoo tärkkelystä ja muodostuneet pilkkoutuneet osat määritetään näkyvällä alueella tai UV-alueella siitä riippuen, onko kokeessa käytetty amylaasisubstraattina värjättyä tärkkelystä vai luonnon tärkkelystä. Tämän menetelmän tai reagenssien oleellisena varjopuolena on se, että makromolekyylinä olevaa tärkkelystä ei voida riittävän hyvin karakterisoida ja standardisoida, joten yksityisten erien muuttumisnopeudet muodostuvat hyvin erilaisiksi ja mittauksissa on aina käytettävä standardikoetta. Parempien tulosten saavuttamiseksi tarvittaisiin yhtenäisempää substraattia, joka antaisi pilkottaessa luotettavia tuloksia.
/
Askeleen yhtenäisen substraatin suuntaan toi mukanaan maltopentaoosin käyttäminen. α-amylaasi pilkkoo tämän maltotrioosiksi ja maltoosiksi, α-glukosidaasi muuttaa maltotrioosin ja maltoosin glukoosiksi, joka 6191 6 2 voidaan sitten määrittää halutuilla menetelmillä, esimerkiksi tunnetulla heksokinaasi-menetelmällä.
Maltopentaoosin ohella substraatiksi on jo ehdotettu maltotetraoosia ja maltoheksaoosia (US-patenttijulkaisut 3 879 263 ja 4 000 042). Tetraoosia käytettäessä tulokset muodostuivat kuitenkin selvästi huonommiksi kuin pentaoosilla, ja heksaoosilla saadut tulokset olivat vielä huonommat kuin tetraoosilla saadut. Maltotetraoosin ja maltopentaoosin reaktiot on katsottava vielä stökiömetrisiksi kun taas heksaoosia käytettäessä on jo todettavissa poikkeamia stö-kiömetrisestä reaktiosta, jotka poikkeamat ovat kuitenkin vielä sallittavissa.
Eräs maltopentaoosin varjopuoli, joka on todettu myös tetraoosilla, on kuitenkin se, että tapahtuu huomattavaa reagenssihukkaa, so. mit-tausreaktio on jo käynnissä ennen määritettävän näytteen lisäämistä. Lisäksi tämäkään reagenssihukka ei suurempien substraattikonsentraa-tioiden yhteydessä ole vakio, vaan muuttuu yli 25 minuutin ajan ennen kuin tämä sivureaktio saavuttaa vakiotilan. Osoittautui myös, että oletettu haima-a-amylaasin ja sylki-o-amylaasin aiheuttama maltopentaoosin erilainen pilkkoutuminen, joka olisi mahdollistanut erottamisen, ei todellisuudessa ole mahdollista (J. BC, 1970, 245, 3917-3927; J. Biochem. 51, p. XVIII 1952).
Julkaisussa Chemical Abstracts, voi. 53 (1959), 12378 i, on esitetty, että a-(p-nitrofenyyli) maltosidi saattaa olla sopiva substraatti amylaasin määrittämiseen.
Keksintö perustuu tämän vuoksi tehtävään hankkia menetelmä ja rea-genssi α-amylaasin määrittämiseksi, jossa menetelmässä käytetään substraattia, jonka puhtaus ja yhtenäisyys on parempi kuin tunnettujen substraattien, jota on helppo saada ja joka ilman seerumia mitatun tyhjä-arvon, lag-faasin keston ja saavutettavissa olevan maksimiaktiivisuu-den suhteen vastaa vaatimuksia. Edelleen mittauksen on oltava mahdollista ilman kalliita ja monimutkaisia laitteita ja sovelluttava pikadiagnostisiin tarkoituksiin, kuten mittaukseen testaussuikalein.
Tämä tehtävä on ratkaistavissa keksinnön mukaisella α-amylaasin määritysmenetelmällä, jossa pilkotaan entsymaattisesti a-amylaasisubstraattia ja mitataan pilkkoutumistuote, joka menetelmä on tunnettu siitä, että substraattina käytetään yhdistettä, jonka yleiskaava I on 3 6191 6 j~ CHo0H “j
CH2°h i |_10 I
, /' "°v j ; / N i R
—c-x°H / 0 HO OH OH j 5 jossa R vastaa glukosidi-, fenyyliglukosidi-, mononitrofenyyligluko-sidi-, sorbitoli- tai glukonihapporyhraää.
Yllättäen on osoittautunut, että maltoheptaoosilla on ylivoimaisesti paremmat ominaisuudet a-amylaasin substraattina, vaikka tähän tarkoitukseen jo ehdotettujen oligomaltoosien yhteydessä soveltuvuuden on todettu oleellisesti heikentyvän maltopentaoosista maltoheksaoosiin siirryttäessä, koska tällä saadaan oleellisesti heikompia tuloksia kuin pentaoosilla. Tämän vuoksi oli odotettavissa, että maltoosioli-gosakkaridiketjua edelleen pidennettäessä esiintyisi virheellisyyksiä, jotka eivät enää olisi siedettäviä. Yllättäen saavutetaan kuitenkin parempia tuloksia kuin pentaoosilla. Siten reagenssihukka-arvo on 0,02 ml:n näytteen osalta maltopentaoosia substraattina käytettäessä 73 %, maltoheptaoosia käytettäessä sitä vastoin vain 13 %, laskettuna määrityksen loppuarvosta normaalialueella.
Lisäksi todetttiin, että maltoheptaoosin itsensä asemesta voidaan käyttää myös määrättyjä maltoheptaoosi-johdannaisia, jotka a-amylaasin vaikuttaessa muodostavat pilkkoutumistuote-johdannaista, joka on määritettävissä erityisen edullisella tavalla.
Keksinnön mukainen menetelmä soveltuu erityisesti suoritettaessa pilk-koutumistuotteiden määritystä α-glukosidaasin tai maltoosifosforylaa-sin avulla.
Käytettäessä substraattina yleisen kaavan I mukaista yhdistettä, jossa R = glukosidi ja suoritettaessa maltoheptaoosi-, maltotetraoosi- ja maltotrioosipilkkoutumistuotteiden määritys α-glukosidaasilla, nämä pilkkoutumistuotteet pilkkoutuvat edelleen glukoosiksi, joka sitten mitataan sinänsä tunnetulla tavalla. Mitattaessa muodostunutta glukoosia α-glukosidaasin läsnäollessa ensisijaisena pidetään tällöin heksokinaasi-menetelmää. Keksinnön mukaisen menetelmän tämän suoritusmuodon periaate on esitettävissä seuraavien yhtälöiden avulla: 6191 6 4 maltoheptaoosi + H20 α amylaasi ^ maltotrioosi + maltotetraoosi maltotrioosi + 2 H20 -a s i da a s i ^ 3 glukoosia maltotetraoosi + 3 H20 α glj^.,05^555^. 4 glukoosia
HK
7 glukoosia + 7 ATP -> 7 glukoosi-6-P
7 glukoosi-6-P + 7 NAD+ —G -5¾ 7 glukonaatti-6-P+7 NADH + 7H+.
Keksinnön tässä suoritusmuodossa soveltuvat käytettäviksi erityisesti myös keksinnön mukaisesti käytettävät maltoheptaoosi-johdannaiset, siis yleiskaavan I mukaiset yhdisteet, joissa R ei vastaa glukosidi-ryhmää. Molempien entsyymien α-amylaasi ja α-glukosidaasi vaikutuksesta lohkeaa substituentti, siis fenyyliryhmä, mononitrofenyyliryh-mä tai päässä oleva sorbitoli- tai g1ukonihappotähde ja on helposti määritettävissä. Fenyyliryhmät voivat olla a-tai β-asemassa. Jos kysymyksessä on α-asema, a-amylaasin ja α-glukosidaasin vaikutuksesta tapahtuu vain näiden lohkeaminen ja lohjenneet substituoidut tai substituoimattomat fenolit ovat helposti määritettävissä tunnetuin värireaktioin. Keksintö mahdollistaa kuitenkin myös β-asemassa olevien substituenttien käytön. Viimeksi mainitussa tapauksessa a-glu-kosidaasin ohella käytetään lisäksi myös β-glukosidaasia.
Nitroryhmän sisältävän substituentin lohkaisun yhteydessä vapautuva nitrofenoli on itse värillinen yhdiste, joka on ilman muuta optisesti määritettävissä. Jos tällöin lohkeaa itse fenolia, tämä on määritettävissä tunnetuin menetelmin, esimerkiksi antamalla sen reagoida nukleofiilisen aineen kuten 3-metyyli-6-sulfonyyli-bentstiatsoloni-hyd-ratsoni-(2) (HSK):n kanssa monofenolioksidaasin läsnäollessa. Tässä reaktiossa muodostuu punaista väriainetta, joka on mitattavissa.
5 61 91 6
Sorbitolin lohjetessa tämä voidaan hapettaa esim. sorbitolidehydroge-naasin välityksellä fruktoosiksi? läsnä oleva NAD pelkistyy samanaikaisesti NADH:ksi. Viimeksi mainitun muodostuminen on helposti määritettävissä tunnetulla tavalla UV-spektrofotometrisesti. Ellei tällaista ole käytettävissä, voidaan, antamalla yhdisteen reagoida tetratsoliumsuolan, kuten esim. INT /2-(p-jodifenyyli)-3-(p-nitrofenyy-li)-5-fenyyli-tetratsoliumkloridin/, kanssa diaforaasin tai muun elektroninsiirtäjän läsnäollessa, myös muodostaa värillistä formatsaa-nia, joka voidaan mitata näkyvällä alueella.
Vastaavalla tavalla vapautunut glukonihappo voidaan määrittää tähän tarkoitukseen käytetyin tunnetuin menetelmin, esim. käyttämällä glu-konaatti-kinaasia, 6-fosfoglukonihappo-dehydrogenaasia ja NADPrtä, sekä mahdollisesti tetratsoliumsuolaa ja elektroninsiirtäjää.
Keksinnön mukaista menetelmää sovellettaessa sopivia pH-arvoja ovat tavallisesti välillä 5-9 olevat pH-arvot. Työskentely tapahtuu ensisijaisesti pH-arvojen ollessa välillä 7-7,5, koska tällöin saadaan parhaat tulokset ja reaktioaika on lyhyin. Jos käytetään keksinnön mukaista mononitrofenyyliyhdistettä, hyvin soveltuvien pH-arvojen alue on hiukan kapeampi ja on yleensä välillä pH 6 - pH 8,5.
Puskureiksi soveltuvat sellaiset puskurit, jotka toimivat käytettyjen entsyymien pääasiallisella aktiivisuusalueella. Ensisijaisia ovat fosfaatti, HEPES /N-(2-hydroksietyyli)-piperats iini-N-2-etaanisulfoni-happo7 ja glysyyliglysiini. Edullisimmat konsentraatiot ovat välillä 10-200 mmoolia/1.
α-glukosidaasia käytetään yleensä määrin 0,1-5000 yks./ml. Keksinnön mukaisen menetelmän erikoisena etuna on se, että tätä entsyymiä voidaan käyttää suhteellisen suurina määrinä, joten a-amylaasin vaikutuksesta tapahtuva pilkkoutuminen on nopeuden määräävä tekijä, a-glukosidaasientsyymiä voidaan luonnollisestikin käyttää vieläkin suuremmin määrin, mutta sillä ei kuitenkaan saavuteta mitään lisäetuja.
Keksinnön mukaisesti käytettäviä yleiskaavan I mukaisia yhdisteitä käytetään kokeessa yleensä määrin 0,1-250 mmoolia/1. Ensisijaiset määrät ovat välillä 0,5-100 mmoolia/1.
6 6191 6 ct-amylaasin kyllästyminen maltoheptaoosilla tapahtuu konsentraa-tiovälillä 8-10 mmoolia. Maltoheptoosia on tämän vuoksi tarkoituksenmukaista käyttää siten, että sen vähimmäiskonsentraatio on 8 mmoolia mikäli tarkoituksena on työskennellä substraatin kyllästymisarvoa vastaavissa olosuhteissa, kuten tapana on.
Tarkoituksenmukaista on lisäksi lisätä oc-amylaasia aktivoivaa ainetta. Sellaiset aktivointiaineet ovat tunnettuja. Ensisijainen on natrium-kloridi tai kaliumkloridi.
Edelleen eräässä ensisijaisessa keksinnön mukaisen menetelmän suoritusmuodossa pilkkoutumistuotteiden määritys tapahtuu antamalla niiden reagoida maltoosifosforylaasin kanssa, jolloin muodostuu glukoosi-1-fosfaattia, joka määritetään sitten tunnetulla tavalla. Erään erityisen ensisijaisen suoritusmuodon mukaisesti glukoosi-l-fosfaatin määrittäminen tapahtuu muuttamalla se glukoosi-6-fosfaatiksi 0-fosfo-glukoosimutaasin (β-PGluM) avulla, hapettamalla muodostunut g.lukoosi-6-fosfaat-ti NAD: llä glukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasin (G6PDH) läsnäollessa, jolloin muodostuu glukonaatti-6-fosfaattia ja NADH:ta, jolloin viimeksimainitun muodostumista on helppo seurata fotometrisesti. Mittaussignaalia voidaan vielä voimistaa jatkamalla hapetusta NAD:llä 6-fosfo-glukonaatti-dehydrogenaasin (6PGDH) läsnäollessa, jolloin muodostuu ribuloosi- 5-fosfaattia ja yksi lisämolekyyli NADH:ta.
Tämän suoritusmuodon periaatetta esittävät seuraavat yhtälöt:
Maltoheptaoosi + .°!.· maltotrioosi + maltotetraoosi---> maltoosi
maltoosi + PO^ —ma^as.^ > glukoosi + 0-glukoosi-l-P β-glukoosi-l-P ,^ PGluM—^ glukoosi-6-P
glukoosi-6-P + NAD+ G6PPH ^ glukonaatti-6-P + NADH + H+ glukonaatti-6-P+IJAD+ 6PGPH—> ribuloosi-5-P+NADH + H+ .
Keksinnön tämän suoritusmuodon etuna on se, että maltoosifosforylaasi on spesifisempi kuin α-glukosidaasi ja sen vuoksi endogeeninen glukoosi ei häiritse.
61916 7 α-glukosidaasi-menetelmällä suoritettu keksinnön mukaisen menetelmän suoritusmuoto pätee samalla tavalla puskurinkin osalta.
Paitsi molemmilla edellä esitetyillä keksinnön mukaisilla suoritusmuodoilla, muodostuneiden maltoheptaoosin pilkkoutumisosien, siis malto-tetraoosin, maltotrioosin ja näistä muodostuneen maltoosin määrittäminen voi tapahtua myös muilla tähän tarkoitukseen käytettävillä tunnetuilla menetelmillä.
Keksinnön lisäkohteena on reagenssi a-amylaasin määrittämiseksi, joka käsittää α-amylaasisubstraatin ja systeemin a-amylaasisubstraatista α-amylaasin vaikutuksesta muodostuneen pilkkoutumistuotteen määrittämiseksi, joka reagenssi on tunnettu siitä, että substraattina on yleiskaavan I mukainen yhdiste.
Suosittu pilkkoutumistuotteiden määrityssysteemi on a-glukosidaasi-systeemi, jossa käytetään α-glukosidaasia, alkalikloridia ja puskuria. Jos substraattina on itse maltoheptaoosi, entsyymeiksi tarvitaan lisäksi heksokinaasia (HK) ja glukoosi-6-fosfaatti-dehydroge-naasia (G6PDH) sekä NAD:tä, ATP:tä ja magnesiumia.
α-glukosidaasi-systeemiin perustuvan reagenssin muodostavat lähinnä 3 4 5 x 10 - 3 x 10 yks/1 α-glukosidaasia, 103 - 5 x 104 HK:ta, 103 - 5 x 104 G6PDH:ta, 0,5-8 mmoolia/1 NAD:tä, 0,5-5 mmoolia/1 ATP:tä, 2+ 1-3 mmoolia/1 Mg :a, 25-100 mmoolia/1 NaCl:a tai KCl:a, 25-200 mmoolia/1 puskuria, pH 6,2-7,8 ja 5-100 mmoolia/1 maltoheptaoosia tai sen moninkerta tai murto-osa, kuivana tai liuenneessa muodossa.
Toisessa suositussa suoritusmuodossa reagenssin muodostavat a-glukosi- daasi, KC1 tai NaCl, puskuri ja substraatti. Sellainen reagenssi 2 6 sisältää erityisesti 10 - 5 x 10 yks/1 α-glukosidaasia, 1-100 mmoo lia/1 NaCl tai KC1, 10-250 mmoolia/1 puskuria, pH 5-9 ja 0,1-250 mmoolia/1 yleiskaavan I mukaista maltoheptaoosi-johdannaista, kokeessa käytettävää konsentraatiota kohti laskettuna. Reagenssi voi olla 8 6191 6 kuivana, erityisesti sublimoimalla kuivatussa muodossa, tai liuoksen muodossa, seoksena kaikkien aineosien kanssa tai erillisenä.
Edelleen eräässä suoritusmuodossa edellä esitetyn tapainen keksinnön mukainen reagenssi sisältää lisäksi vielä g-glukosidaasia tai/ja fenolioksidaasia ja HSKrta.
Edelleen eräässä keksinnön suoritusmuodossa keksinnön mukainen reagenssi sisältää α-glukosidaasin, NaCl:n tai KCl:n, puskurin ja substraatin ohella vielä sorbitolidehydrogenaasia ja NADstä tai glukonaat-ti-kinaasia, ATPrtä, 6-fosfoglukonihappo-dehydrogenaasia ja NADP:tä sekä mahdollisesti tetratsoliumsuolaa ja diaforaasia tai fenatsiini-metosulfaattia (PMS).
2 6
Suosittu tämän tapainen reagenssi sisältää 1 x 10 - 3 x 10 yks/1 α-glukosidaasia, 2 x 10^ - 5 x 10^ yks/1 sorbitolidehydrogenaasia, 3 4 1 x 10 - 5 x 10 yks/1 heksokinaasia, 0,5-50 mmoolia/1 ATP:tä, 10-500 yks/1 diaforaasia (Clostridium, Kluyvera), 0,01-0,5 mmoolia/1 tetratsoliumsuolaa, 0,1-10 mmoolia/1 NAD:tä, 0,2-5 mmoolia/1 MgC^# 0,5-20 mmoolia/1 maltoheptaiittiä,1-100 mmoolia/1 NaCl tai KC1 ja 10-250 mmoolia/1 puskuria, pH 5,5-8,5.
Haluttaessa läsnä voi olla lisäksi vielä ionitonta pinta-aktiivista ainetta määrin 5-50 mmoolia/1.
C.
Eräs myöskin suosittu reagenssi sisältää 100 - 3 x 10 yks/1 4 a-glukosidaasia, 10-10 yks/1 6-fosfoglukonaatti-dehydrogenaasia, 4 20 - 2 x 10 yks/1 glukonaatti-kinaasia, 0,5-25 mmoolia/1 ATP:tä, 0,05-1,0 mmoolia/1 NADP:tä, 1,0-20 mmoolia/1 maltoheptaglukonihappoa, 0,5-5 mmoolia/1 MgC^/ 1-100 mmoolia/1 NaCl ja 10-250 mmoolia/1 puskuria, pH 5,5-8,5.
Edelleen eräs keksinnön reagenssi sisältää 0,1-250 mmoolia/1 a-nitrofenyyli-maltoheptaosidia 2 6 1 x 10 - 2,5 x 10 yks/1 a-glukosidaasia, 1-100 mmoolia/1 natriumkloridia tai kaliumkloridia ja 10-250 mmoolia/1 fosfaattipuskuria, pH 7,0-8,0.
61916 9
Vieläkin eräs keksinnön mukaisen suoritusmuodon reagenssi sisältää: 0,1-250 mmoolia/1 a-fenyylimaltoheptaosidia, 2 6 1 x 10 - 1,5 x 10 yks/1 α-glukosidaasia, 5 10-10 yks/1 monofenolioksidaasia, 0,1-10 mmoolia/1 HSKrta, 1-100 mmoolia/1 NaCl tai KC1 ja 10-250 mmoolia/1 puskuria.
Eräs muu suosittu systeemi pilkkoutumistuotteiden määrittämiseksi on maltoosifosforylaasisysteemi, jonka muodostavat oleellisesti maltoo-sifosforylaasi, B-fosfoglukomutaasi (B?MG), glukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasi (G6PDH), glukoosi-1,6-difosfaatti (Gl, 6DP), NAD, puskuri, maltoheptaoosi ja mahdollisesti 6-fosfoglukonaatti-dehydro-genaasi (6PGDH).
Erään erittäin edullisen reagenssin koostumus on 3 3 0,5 x 10 - 20 x 10 yks/1 maltoosifosforylaasia, 1 x 102 - 1 x 104 B-PGluM, 2 4 2 x 10 - 3 x 10 yks/1 glukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasia, 0,5-10 mmoolia/1 NAD:tä 0,001-1 mmoolia/1 glukoosi-1,6-difosfaattia, 0,5-100 mmoolia/1 puskuria, pH 6,0-7,5, 5-50 mmoolia/1 maltoheptaoosia ja mahdollisesti 2 4 1 x 10 - 1 x 10 yks/1 6-fosfoglukonaatti-dehydrogenaasia.
Keksinnön mukainen reagenssi voi olla kuivassa tai liuenneessa muodossa, se voi myös olla imeytettynä lehtimäiselle kantajalle, esim. kalvolle, imukykyiselle paperille tai vastaavalle kantajalle. Viimeksi mainitussa tapauksessa se muodostuu tarkoituksenmukaisimmin vähintään kolmesta kerroksesta, jolloin ensimmäinen kerros sisältää substraatin, toinen kerros toimii eristyskerroksena ja kolmas kerros sisältää pilkkoutumistuotteiden määrityssysteemin. Jos tämän tapainen monikerroksinen reagenssimateriaali, joka soveltuu käytettäväksi yksinkertaiseen a-amylaasin pikatestaukseen, saatetaan kosketuksiin nestemäisen, a-amylaasipitoisen näytteen kanssa, a-amylaasi pilkkoo substraattia ja pilkkoutuneet osat diffundoituvat välikerroksen läpi kolmanteen, määrityssysteemin sisältävään kerrokseen. Osoi-tusreaktioon käytetään tässä tapauksessa tarkoituksenmukaisimmin värin muodostavaa reaktiota jotta värinmuutoksen yhteydessä 6191 6 ίο α-amylaasin konsentraatio voidaan tehdä silmin havaittavaksi, elleivät pilkkoutumistuotteet jo itse ole värillisiä.
Kuten jo on mainittu, keksinnön avulla ei ainoastaan luoda nopeata ja spesifistä menetelmää α-amylaasin määrittämiseksi, vaan varas-tointivaihe voidaan sivuuttaa kokonaan tai suurelta osin, millä on erityinen merkitys käytettäessä menetelmää analyysiautomaattien yhteydessä. Sen lisäksi keksinnön mukaista menetelmää voidaan soveltaa monissa suoritusmuodoissa ilman monimutkaisia laitteistoja, ja sen vuoksi se soveltuu erityisesti käytettäväksi pikadiagnostiikassa ja näkyvällä alueella tapahtuvaan optiseen määritykseen. Samanaikaisesti keksinnön mukaisen menetelmän erilaisten suoritusmuotojen yhteydessä määritykset voidaan silti suorittaa myös UV-mittauslaitteilla. Muita etuja ovat ehdoton suhteellisuus ja se, että menetelmää eivät häiritse veren sisältämät kemiallisesti läheiset aineet.
Keksinnön mukaisesti käytettäviä substraatteja on saatavissa hyvin ja hyvin puhtaina tuotteina. Erästä yksinkertaista maltoheptaoosin valmistusmenetelmää on selostettu saksalaisessa patenttihakemuksessa P 27 41 191.2. Menetelmä soveltuu α-amylaasin määrittämiseksi biologisissa nesteissä, kuten seerumissa, hepariiniplasmassa, virtsassa ja näiden kaltaisissa nesteissä, tai muissa nestemäisissä tai kiinteissä materiaaleissa.
Seuraavat esimerkit valaisevat keksintöä.
Esimerkki 1 Määritys maltogeeni-menetelmää käyttäen (a-glukosidaasi-systeemi)
Reagenssiseos, joka sisältää a-glukosidaasia, G6PDH:ta, HK:ta, 2 + NAD:tä, ATP:tä, maltoheptaoosia, Mg , NaC.l:a ja fosfaattipuskuria, liuotetaan 2,0 ml:aan tislattua vettä. Reagenssin säilyvyys huoneen lämpötilassa on noin 1 tunti, 8°C:n alapuolella olevissa lämpötiloissa 6 tuntia.
11 61916
Saadun liuoksen reagenssi konsentraatio on seuraava: fosfaattipuskuri 50 mmoolia/l; pH 7,0
NaCl 50 mmoolia/l 2+
Mg 2 mmoolia/l maltoheptaoosi 10 mmoolia/l ATP 1,2 mmoolia/l NAD 2 mmoolia/l HK =A 2 yks/1 G6PDH =^· 2 yks/1 α-glukosidaasi 10 yks/1
Liuokseen lisätään 25°C:ssa 0,02 ml seeruminäytettä, pannaan kyvettiin, jonka kerrospaksuus on 1 cm, ja sen jälkeen määritetään fotometrillä ekstinktio kohdilla Hg 365 nm, 340 nm tai Hg 334 nm. Ekstinktio luetaan 10 minuutin kuluttua ja sitten se luetaan uudelleen minuutin välein viisi kertaa.
Näin saaduista ekstinktioeroista minuuttia kohden (ΔΕ/min) muodostetaan keskiarvo, vähennetään reagenssityhjäarvo ja korjattua arvoa käytetään laskettaessa.
Laskeminen tapahtuu seuraavasti:
Yks/1 25°C = 4244 x ΔΕ 365 nm/min = 2290 x ΔΕ 340 nm/min = 2335 x ΔΕ 334 nm/rain.
Piirroksen kuva 1 esittää tuloksia, jotka on saatu tällä menetelmällä ihmisen seerumin fysiologisesta keittosuolaliuoslaimennussarjasta.
Jos reagenssi jaetaan kahteen erään, joista toinen sisältää malto-heptaoosia ja toinen kaikkien muiden reagenssien seosta voidaan liuosten säilyvyyttä parantaa, Reagenssiseoksen osalta säilyvyysaika on enintään 8°C:ssa 30 tuntia, huoneen lämpötilassa noin 8 tuntia. Maltoheptaoosi-liuoksen säilyvyysaika on vastaavasti 6 viikkoa tai noin 1 viikko.
Esimerkki 2 Määritys ma1toosifosforylaasi-systeemillä
Valmistettiin kaksi reagenssia, joina olivat amylaasisubstraatti ja 61 91 6 12 maltoosifosforylaasi-systeem.i. Toinen reagenssi sisälsi maltohep-taoosisubstraattia, toinen nykyisen tekniikan mukaista liukoista tärkkelystä. Veteen liuottamisen jälkeen reagenssikonsentraatio oli seuraava:
Keksintö Vertailu
Fosfaattipuskuri 20 mmoolia/1 pH 6,5 20mmoolia/l pH 6,5 NAD 2 mmoolia/1 2 mmoolia/1
Maltoheptaoosi 10 mmoolia/1
Liukoinen tärkkelys - 5 mg/ml
Glukoosi-1,6-difosfaatti jälkiä jälkiä
Maltoosifosforylaasi 3 yks/ml 3 yks/ml (mikro-org.) 6-fosfoglukomutaasi 1 yks/ml 1 yks/ml (mikro-org.) G6PDH (Leuconostoc mesentroides) 9 yks/ml 9 yks/ml 6PGDH (Leuconostoc mesentroides) 1 yks/ml 1 yks/ml
Saatua liuosta inkuboitiin 30°C:ssa, lisättiin näyteliuos ja fotometrillä mitattiin ekstinktioero kohdalla Hg 334 nm. 10 minuuttisen esi-inkuboinnin jälkeen ekstinktioero mitataan 10 minuutin aikana. Rea-genssin määrän ollessa 2,0 ml ja näytteen määrän 0,10 ml, laskentakaavaksi tulee: AB/min x ^lsVo!? x"ö;2 = ^E/min x 1699 yks/1
Suoritettaessa α-amylaasimääritys, viidestä ihmisen seeruminäytteestä edellä mainituilla reagensseilla saatiin seuraavat arvot: ______g-amylaasia__
Seerumi keksintö Vertailu 1 37,4 yks/1 15,3 yks/1 2 61,2 yks/1 27,3 yks/1 3 95,1 yks/1 39,1 yks/1 4 114 yks/1 44,2 yks/1 5 374 yks/1 161 yks/1 6191 6 13
Esimerkki 3 α-amylaasin osoittaminen fenyyli-a-maltoheptaosidin ollessa substraattina .
a-amylaasi pilkkoo fenyyli-a-maltoheptaosidin fenyyli-a-maltotri-iidiksi tai -tetraiidiksi, joiden annetaan reagoida a-glukosidaasin avulla fenoliksi ja glukoosiksi. Vapautunut fenoli kytketään mono-fenolioksidaasin avulla hapettamalla nukleofiilisen reagenssin 3-metyyli-6-sulfonyyli-bentstiatsoloni-hydratsoni-(2) (HSK) kanssa punaiseksi väriaineeksi, jonka muodostumisnopeus on verrannollinen näytteessä olevaan amylaasiaktiivisuuteen ja jota voidaan seurata fotometrisesti.
Kokeen periaate: 1 a) Fenyyli-a-maltoheptaosidi + I^O α amy^aas^fenyyli-a-D-tri-(tetra)-glukopyranosidi + maltotetra-(tri)-oosi b) Fenyyli-a-D-tri-(tetra)-glukopyranosidi +3 (4) H20 ex-glukosIdaasi t fenoll + 3 (4) glukoosi o) Fenoli + HSK + 02 ~°°°fenolloksldaasl; vSriaine + 2 Mittausolosuhteet: 25°C, mittausaallonpituus 492 nm, 1 cm:n kyvetit; reagenssin kokoomus on seuraavassa taulukossa.
Taulukko
Reagenssi Konsentraatio kokeessa
Fosfaattipuskuri 0,05 moolia/1
Natriumkloridi 0,05 moolia/1
Fenyyli-a-D-maltoheptaosidi 10 mmoolia/1 HSK 1 mmooli/1
Monofenolioksidaasi 1 yks/ml a-glukosidaasi 10 yks/ml
Testitilavuudet: 2,0 ml
Fosfaattipuskurin asemesta osoittautuivat käyttökelpoisiksi myös glysiini-, gly-syyliglysiini-, HE^ES-/~»7, TRIS-/xx7, TRA-(*##) ja muut puskurit.
/*7 = /~N- (2-hydroksietyyli) -piperatsiini-N-2~etaanisulfonihappo7 / »$/ = /"tr is (hydroksinetyyli) -arrvLnonetaani7 (♦ **) = (trietanoliamiini) 61 91 6 14
Esimerkki 4 α-amylaasin määrittäminen p-nitrofenyyli-maltoheptaosidilla.
Kokeen periaate: p-nitrofenyyli-a-maltoheptaosidi α amylaasi ^ (glukoosi) + p-nitrofenyyli-α-(glukoosi)m .? 9\uk°sfäaasi^ n glukoosia + p-nitrofenoli.
Maltoheptaosidin pilkkomisen jälkeen pilkkoutumistuotteet pilkotaan glukoosiksi ja p-nitrofenoliksi. p-nitrofenolaatti-anioni on värjäytynyt alkalisessa liuoksessa keltaiseksi ja voidaan sen vuoksi mitata suoraan optisesti.
Testisysteemi:
Reaktioseos: 50 mmoolia/1 fosfaattipuskuria, pH 7,4 50 mmoolia/1 natriumkloridia 5-50 yks/ml a-glukosidaasia 5 tai 10 mmoolia/1 p-nitrofenyyli-a-maltoheptaosidia.
Testierä: 1 ml reaktioseosta + 50 ^,ul näytettä (seerumia).
Lämpötila: 30°C Aallonpituus: 405 nm
Seerumin lisäys mittauslämpötilan saavuttamisen jälkeen (10 minuutin esi-inkubointi).
Esimerkki 5 α-amylaasin määritys maltoheptaiitillä.
Kokeen periaate:
Maltoheptaiitti + ^0 ·α maltotriitti + maltotetraoosi
Maltotriitti + ^ α-glukosIdaasi^ sorbitoli + malt0osi
Sorbitoli + NAD+ fruktoosi + N AD H + H+ NADH + INT + H+ —g.iaforaasl ^ formatsaani + NAD+ SDH = sorbitolidehydrogenaasi.
INT = 2-(p-jodifenyyli)-3-(p-nitrofenyyli)-5-fenyyli-tetratsolium-kloridi
Testisysteemi:
Reaktioseos ml Konsentraatio kokeessa
61 91 C
15
Na-/K-PO^-puskuri 0,02 mmoolia/1 1,92 12,8 mmoolia/1 P0^ + Triton X 100 2 ml/100 ml + NaCl 10 ramoolia/1, pH 6,9 6,4 mmoolia/1
MgCl2 0,3 moolia/1 0,01 1,0 mmoolia/1
Maltoheptaiitti lOO mmoolia/1 0,10 3,3 mmoolia/1 NAD c = 40 mg/ml 0,05 1,0 mraoolia/1 INT c = 0,6 mg/ml 0,20 0,09 mmoolia/1
Diaforaasi (Clostr.,Kluyvera) 0,05 167 yks/1 5 mg/ml+ ATP c = 50 mg/ml 0,10 3,29 yks/1
Heksokinaasi 280 yks/ml+ 0,05 4666 yks/1 SDH 180 yks/ml+ 0,30 18000 yks/1 a-glukosidaasi 1120 yks/ml+ 0,20 74670 yks/1 Näyte (seerumi) 0,02 + testipuskurissa
Aloitus näytettä lisäämällä: mittaus tapahtuu aallonpituuden 492 nm kohdalla.
Lämpötila: 25°C.
Esimerkki 6 a-amylaasin määrittäminen maltoheptaglukonihapolla.
Kokeen periaate:
Maltoheptaglukonihappo + HjO maltotrioglukonihappo + maltotetraoosi
Maltotrioglukonihappo + HjO α glukosidaasi^ giukonihappo + maltoosi Glukonihappo + ATP ,glukonaatti-kinaasi_^ glukonihappo-6-P + ADP
Giukonihappo-6-P + NADP+ 6~fdlhfribuloosi-5-P + NADPH + CO2 + H+ 16 61916
Testisysteemi:
Reaktioseos ml Konsentraatio kokeessa
Na-ZK-PO^-puskuri 0,02 moolia/1 2,19 14,6 mmoolia/1 fosfaattia + NaCl 10 mmoolia/1, pH 6,9 ?,3 mmoolia/1 NaCl
MgC^ 1 mooli/1 0,01 3,3 mmoolia/1
Maltoheptaglukonihappo 0,10 5 mmoolia/1 150 mmoolia/1 NADP c = 10 mg/ml 0,10 0,38 nunoolia/1 ATP c = 50 mg/ml 0,10 2,7 mmoolia/1
Glukonaatti-kinaasi 40 yks/1 0,03 1066 yks/1 6-fosfoglukonihappo-dehydro- 0,10 800 yks/1 genaasi 24 yks/ml a-glukosidaasi 1120 yks/ml 0,30 11,2 x 10^ yks/1 Näyte (seerumi) 0,02 Lähtö näytettä lisäämällä, mittaus tapahtuu aallonpituuksilla 340 nm tai 365 nm.
Lämpötila: 25°C, testitilavuudet: 3,00 ml. '
Claims (23)
- 6191 6 17 Patenttiväätimukset
- 1. Menetelmä ot-amylaasin määrittämiseksi ruumiinnesteistä pilkkomalla entsymaattisesti α-amylaasisubstraattia ja määrittämällä pilk-koutumistuotteet sinänsä tunnetulla tavalla, tunnettu siitä, että substraattina käytetään yleiskaavan I mukaista yhdistettä CH2OH CH2OH vkx JfTX - J_r HO I I OH OH 5 jossa R on glukosidi-, fenyyliglukosidi-, mononitrofenyy1iglukosidi-, sorbitoli- tai glukonihapporyhmä. 2. patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ryhmän R ollessa glukosidiryhmä, pilkkoutumistuotteet muutetaan ot-glukosidaasin avulla glukoosiksi, joka määritetään tunnetulla tavalla.
- 3. Patenttivaatimuksen 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että määritys tapahtuu pH-arvojen ollessa välillä 5-9.
- 4. Patenttivaatimuksen 2 tai 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että käytetään 0,1-250 mmoolia/1 kaavan' I mukaista yhdistettä, jossa R on glukosidiryhmä.
- 5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ryhmän R ollessa glukosidiryhmä, pilkkoutumistuotteiden annetaan reagoida maltoosifosforylaasin kanssa, jolloin muodostuu glukoosi-l-fosfaattia, joka määritetään.
- 6. Patenttivaatimuksen 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että muodostuneen glukoosi-l-fosfaatin määrittämiseksi tämä muutetaan fosfoglukomutaasin avulla glukoosi-6-fosfaatiksi ja NAD pelkistetään viimeksi mainitulla glukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaa-sin läsnäollessa NADHrksi, joka mitataan optisesti. is 61916
- 7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ryhmän R ollessa fenyyliglukosidiryhmä, pilkkoutumis-tuotteiden määritys suoritetaan antamalla pilkkoutumistuotteiden reagoida α-glukosidaasin kanssa, jolloin muodostuu fenolia, joka mitataan optisesti 3-metyyli-6-sulfonyyli-bentstiatsoloni-hydratso-ni-(2):n avulla monofenolioksidaasin läsnäollessa.
- 8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ryhmän R ollessa sorbi toi iryhmä, pilkkoutumistuotteiden määritys suoritetaan antamalla pilkkoutumistuotteiden reagoida a-gluko-sidaasin kanssa, jolloin muodostuu sorbitolia, joka määritetään sorbitoli-dehydrogenaasin ja NAD:n avulla.
- 9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että ryhmän R ollessa glukonihapporyhmä, pilkkoutumistuotteiden määritys suoritetaan antamalla pilkkoutumistuotteiden reagoida α-glukosidaasin kanssa, jolloin muodostuu glukonihappoa, joka määritetään glukonaatti-kinaasin, 6-fosfoglukonihappo-dehydrogenaa-sin ja NADP:n avulla.
- 10. Patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen menetelmä, tunne ttu siitä, että NAD:n pelkistyksessä muodostuneen NADHsn annetaan reagoida tetratsoliumsuolan kanssa elektroninsiirtäjän läsnäollessa formatsaaniksi, joka mitataan optisesti.
- 11. Patenttivaatimuksen 10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että elektroninsiirtäjänä käytetään diaforaasia tai fenat-siinimetosulfaattia.
- 12. Reagenssi a-amylaasin määrittämiseksi ruumiinnesteistä patenttivaatimuksen 1 mukaisesti, joka reagenssi sisältää ce-amylaasisubstraattia ja systeemin amylaasisubstraatista α-amylaasin vaikutuksesta muodostuneen pilkkoutumis-tuotteen määrittämiseksi, tunnettu siitä, että substraattina on yhdiste, jonka yleiskaava I on ch9oh CH20H /1— /-/ / R --1 HO ' I 0H 5 OH 3 6191 β 19 jossa R on glukosidi-, fenyyliglukosidi-, mononitrofenyyligluko-sidi-, sorbitoli- tai glukonihapporyhmä.
- 13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että sen muodostavat α-glukosidaasi, heksoki- naasi, glukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasi, NAD, ATP, Mg, NaCl, fosfaattipuskuri ja maltoheptaoosi substraattina.
- 14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 3 4 5 x 10 - 3 x 10 yks/1 a-glukosidaasia, 3 4 10 - 5 x 10 yks/1 heksokinaasia, 3 4 10 - 5 x 10 yks/1 glukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasia, 0,5-8 mmoolia/litra NAD:tä, 0,5-5 mmoolia/litra ATPitä, 2+ 1-3 mmoolia/litra Mg , 25-100 mmoolia/litra NaCl tai KCl, 25-100 mmoolia/litra puskuria, pH 6,2-7,8 ja 5- 100 mmoolia/litra maltoheptaoosia tai sen moninkerta tai murto-osa kuivana tai liuenneessa muodossa.
- 15. Patenttivaatimuksen 12 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että sen muodostavat maltoosif os f o ryi aasi 8-fosfo-gluko-mutaasi, glukoosi- 6- fosfaatti-dehydrogenaasi, glukoosi-1,6-difosfaatti, NAD, puskuri, mahdollisesti 6-fosfo-glukonaatti-dehydrogenaasi, ja maltoheptaoosi substraattina.
- 16. Patenttivaatimuksen 15 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää 3 4 0,5 x 10 - 2 x 10 yks/litra maltoosi-fosforylaasia, 2 4 1 x 10 - 1 x 10 yks /litra 8-fosfo-gluko-mutaasia, 2 4 2 x 10 - 3 x 10 yks /litra glukoosi-6-fosfaatti-dehydrogenaasia, 0,5-10 mmoolia/litra NAD:tä, 0,001-1 mmoolia/litra glukoosi-1,6-difosfaattia, 0,5-100 mmoolia/litra purskuria, pH 6,0-7,5, 5-50 mmoolia/litra maltoheptaoosia ja mahdollisesti 2 4 1 x 10 - 1 x 10 yks/litra 6-fosfo-glukonaatti-dehydrogenaasia.
- 17. Patenttivaatimuksen 12 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että reagenssin muodostavat α-glukosidaasi, Naci tai KCl, 20 61916 puskuri ja yleiskaavan I mukainen yhdiste.
- 18. Patenttivaatimuksen 12 tai 17 mukainen reagenssi, tunne t- t u siitä, että se sisältää 2 6 10 - 5 x 10 yks/1 α-glukosidaasia, 1-100 mmoolia/1 NaCl tai KCl, 10- 250 mmoolia/1 puskuria, pH 5-9, ja 0,1-2 50 mmoolia/1 yleiskaavan I mukaista yhdistettä kokeessa käytettävää konsentraatiota kohden laskettuna.
- 19. Jonkin patenttivaatimuksista 12, 17 tai 18 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää lisäksi vielä e-glukosidaasia tai/ja fenolioksidaasia ja 3-metyyli-6-sulfonyyli-bentstiatsolonihydratsoni-(2):ta.
- 20. Jonkin patenttivaatimuksista 12, 17 tai 18 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää lisäksi sorbito- 11- dehydrogenaasia ja NAD:tä tai glukonaatti-kinaasia, 6-fosfoglu-konihappo-dehydrogenaasia, ATPrtä ja NADP:tä.
- 21. Patenttivaatimuksen 20 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se sisältää lisäksi tetratsoliumsuolaa ja diaforaasia tai fenatsiinimetosulfaattia.
- 22. Patenttivaatimuksen 20 tai 21 mukainen reagenssi, tunnet-t u siitä, että se sisältää lisäksi pinta-aktiivista ainetta.
- 23. Jonkin patenttivaatimuksista 12-22 mukainen reagenssi, tunnettu siitä, että se on impregnoituna tai sekoitettuna lehtimäiseen kantaja-materiaaliin. 21 61916
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI820586A FI68418C (fi) | 1977-09-13 | 1982-02-23 | Foerfarande foer framstaellning av maltoheptaos-derivat |
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2741192A DE2741192C2 (de) | 1977-09-13 | 1977-09-13 | Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase |
| DE2741192 | 1977-09-13 | ||
| DE2755803 | 1977-12-14 | ||
| DE19772755803 DE2755803A1 (de) | 1977-12-14 | 1977-12-14 | Verfahren und reagens zur bestimmung von alpha-amylase |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI782789A FI782789A (fi) | 1979-03-14 |
| FI61916B true FI61916B (fi) | 1982-06-30 |
| FI61916C FI61916C (fi) | 1982-10-11 |
Family
ID=25772710
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI782789A FI61916C (fi) | 1977-09-13 | 1978-09-12 | Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4544631A (fi) |
| JP (1) | JPS5451892A (fi) |
| AR (1) | AR217476A1 (fi) |
| AT (1) | AT362526B (fi) |
| AU (1) | AU521908B2 (fi) |
| CA (1) | CA1120836A (fi) |
| CH (1) | CH651590A5 (fi) |
| CS (1) | CS236765B2 (fi) |
| DD (1) | DD138921A5 (fi) |
| DK (1) | DK153335C (fi) |
| ES (2) | ES473296A1 (fi) |
| FI (1) | FI61916C (fi) |
| FR (1) | FR2402872A1 (fi) |
| GB (2) | GB2058780B (fi) |
| HK (1) | HK54785A (fi) |
| HU (1) | HU182005B (fi) |
| IE (1) | IE47953B1 (fi) |
| IL (2) | IL55408A (fi) |
| IT (1) | IT1099451B (fi) |
| LU (1) | LU80213A1 (fi) |
| MY (1) | MY8600101A (fi) |
| NL (1) | NL190818C (fi) |
| SE (2) | SE433857B (fi) |
| SG (1) | SG21085G (fi) |
| YU (1) | YU44180B (fi) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2741192C2 (de) * | 1977-09-13 | 1982-07-01 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Bestimmung von alpha- Amylase |
| JPS60997B2 (ja) * | 1978-01-31 | 1985-01-11 | 東洋紡績株式会社 | アミラ−ゼ活性測定法 |
| EP0005867B2 (en) * | 1978-06-06 | 1986-07-09 | Cooperbiomedical, Inc. | An alpha-amylase assay, a reagent composition and a reagent system therefor |
| JPS5768798A (en) * | 1980-10-14 | 1982-04-27 | Toyo Jozo Co Ltd | Novel measurement of amylase activity |
| US4622295A (en) * | 1982-09-16 | 1986-11-11 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Modified oligosaccharides used as substrate for measuring α-amylase activity |
| DE3323245A1 (de) * | 1983-06-28 | 1985-01-10 | Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt | Verfahren und reagenz zur bestimmung von (alpha)-amylase |
| DE3328616A1 (de) * | 1983-08-08 | 1985-02-28 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Oligoglucosidderivate |
| JPS60114193A (ja) * | 1983-11-22 | 1985-06-20 | Toyo Jozo Co Ltd | 新規なマルトースデヒドロゲナーゼおよびその製法それを用いる分析法 |
| US4649108A (en) * | 1984-07-26 | 1987-03-10 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| US4794078A (en) * | 1984-07-26 | 1988-12-27 | Genzyme Corporation | Alpha amylase assay |
| JPS6183195A (ja) * | 1984-08-24 | 1986-04-26 | Wako Pure Chem Ind Ltd | 新規なオリゴサツカライド誘導体、及びこれを基質として用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 |
| JPS61124397A (ja) * | 1984-11-22 | 1986-06-12 | Toyobo Co Ltd | α−アミラ−ゼの活性測定用試薬 |
| DE3508384A1 (de) * | 1985-03-08 | 1986-11-06 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Hemmung humaner speichel- und pankreasamylase durch monoklonale antikoerper |
| SE451849B (sv) * | 1985-12-11 | 1987-11-02 | Svenska Sockerfabriks Ab | Sett att syntetisera glykosidiska bindningar samt anvendning av pa detta sett erhallna produkter |
| US4782018A (en) * | 1986-01-17 | 1988-11-01 | Eastman Kodak Company | Detection of hydrolyzing enzymes |
| DE3621271A1 (de) * | 1986-06-25 | 1988-01-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von alpha-amylase |
| US4963479A (en) * | 1986-10-07 | 1990-10-16 | Hoechst Celanese Corporation | Reagent system for an alpha-amylase assay containing aromatic substituted glycoside |
| US5158872A (en) * | 1986-10-07 | 1992-10-27 | Hoechst Celanese Corporation | Aromatic substituted glycoside |
| ATE124719T1 (de) * | 1987-07-17 | 1995-07-15 | Modrovich Ivan Endre | Stabiles alpha-amylase-reagenz. |
| US4932871A (en) * | 1987-11-20 | 1990-06-12 | Miles Inc. | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields |
| DE3743908A1 (de) * | 1987-12-23 | 1989-07-06 | Boehringer Mannheim Gmbh | Neue oligoglucoside |
| DE3929355A1 (de) * | 1989-09-04 | 1991-03-07 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung von pankreas-(alpha)-amylase |
| JP2576910B2 (ja) * | 1990-04-13 | 1997-01-29 | 富士写真フイルム株式会社 | 免疫分析要素および免疫分析方法 |
| US5300634A (en) * | 1991-05-07 | 1994-04-05 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Process for producing maltooligosaccharide derivative |
| JP3075377B2 (ja) * | 1991-11-06 | 2000-08-14 | 東洋紡績株式会社 | α−アミラーゼ活性の測定法およびα−アミラーゼ活性測定用試薬 |
| EP1100953B1 (en) * | 1998-07-24 | 2002-10-09 | Samsung Fine Chemicals Co., Ltd. | CONTINUOUS PROCESS FOR PREPARING OPTICALLY PURE ($i(S))-3-HYDROXY-GAMA-BUTYROLACTONE |
| KR100374358B1 (ko) * | 2000-07-13 | 2003-03-04 | 주식회사 코메드 | 미생물 동정을 위한 비피검사법과 구연산염 검사법을대체하는 글루코시드 분해검사배지와 셀로비오스분해검사배지 및 그 검사법 |
| US20040096948A1 (en) * | 2002-11-15 | 2004-05-20 | Yunping Huang | Glycoprotein cleavage protocol for oligosaccharide analysis |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT986838B (it) * | 1972-05-12 | 1975-01-30 | Sclavo Inst Sieroterapeut | Complesso di reagenti per la deter minazione enzimatica del glucosio sistema glucosio ossidasi perossi dasi con metodo manuale e automati co con lettura a termine o in cinetica |
| US3879263A (en) * | 1973-09-06 | 1975-04-22 | Du Pont | Method for the determination of amylase |
| US4000042A (en) * | 1973-09-06 | 1976-12-28 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Diagnostic reagent for the determination of amylase |
| US3867259A (en) * | 1973-11-08 | 1975-02-18 | American Cyanamid Co | Lactate dehydrogenase test material |
| DE2600526C3 (de) * | 1976-01-08 | 1981-06-19 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur quantitativen Bestimmung von mit Sauerstoff unter Oxidaseeinwirkung H↓2↓O↓2↓ bildenden Substanzen und Reagens zu seiner Durchführung |
| US4097336A (en) * | 1976-02-13 | 1978-06-27 | Beckman Instruments, Inc. | Reagent system for beta-amylase assay |
| US4036697A (en) * | 1976-02-13 | 1977-07-19 | Beckman Instruments, Inc. | Kinetic assay for alpha-amylase |
| US4059407A (en) * | 1976-04-14 | 1977-11-22 | Becton, Dickinson And Company | Disposable chemical indicators |
| NL188646C (nl) * | 1976-07-13 | 1992-08-17 | Du Pont | Werkwijze voor het bereiden van nitroaromatische glycosiden. |
| NL179399C (nl) * | 1976-07-13 | 1986-09-01 | Du Pont | Werkwijze voor de bepaling van het amylase-gehalte van een monster en reagens-proefpakket daarvoor. |
| US4071407A (en) * | 1976-11-16 | 1978-01-31 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | Novel maltase enzyme produced by a new yeast strain |
| US4081326A (en) * | 1976-10-07 | 1978-03-28 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | A method for removing maltotetraose and lower saccharides from solution |
| US4102747A (en) * | 1977-07-28 | 1978-07-25 | American Hospital Supply Corporation | Amylase determination |
| DE2748036C2 (de) * | 1977-10-26 | 1986-08-21 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren zur Gewinnung von Maltose-phosphorylase oder/und β-Phosphoglucose-mutase und Verwendung derselben |
| US4233403A (en) * | 1978-02-27 | 1980-11-11 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Amylase assay |
| US4219571A (en) * | 1978-06-15 | 1980-08-26 | Kabushiki Kaisha Hayashibara Seibutsu Kagaku Kenkyujo | Process for producing a sweetener |
| US4225672A (en) * | 1979-02-27 | 1980-09-30 | Hall Leo M | Method for producing maltooligosaccharide glycosides |
| US4932871A (en) * | 1987-11-20 | 1990-06-12 | Miles Inc. | Rapid method for preparing chromogenic alpha-amylase substrate compounds at high preparative yields |
-
1978
- 1978-08-14 AT AT589778A patent/AT362526B/de not_active IP Right Cessation
- 1978-08-16 CA CA000309495A patent/CA1120836A/en not_active Expired
- 1978-08-17 NL NL7808528A patent/NL190818C/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-08-22 IL IL55408A patent/IL55408A/xx active IP Right Grant
- 1978-08-23 DK DK372178A patent/DK153335C/da not_active IP Right Cessation
- 1978-08-29 AR AR273483A patent/AR217476A1/es active
- 1978-08-30 IT IT27180/78A patent/IT1099451B/it active
- 1978-09-04 SE SE7809278A patent/SE433857B/sv not_active IP Right Cessation
- 1978-09-06 GB GB8033088A patent/GB2058780B/en not_active Expired
- 1978-09-06 GB GB7835813A patent/GB2004646B/en not_active Expired
- 1978-09-08 FR FR7825964A patent/FR2402872A1/fr active Granted
- 1978-09-11 DD DD78207746A patent/DD138921A5/xx unknown
- 1978-09-11 CH CH9494/78A patent/CH651590A5/de not_active IP Right Cessation
- 1978-09-11 AU AU39750/78A patent/AU521908B2/en not_active Expired
- 1978-09-11 LU LU80213A patent/LU80213A1/de unknown
- 1978-09-12 FI FI782789A patent/FI61916C/fi not_active IP Right Cessation
- 1978-09-12 YU YU2162/78A patent/YU44180B/xx unknown
- 1978-09-12 IE IE1838/78A patent/IE47953B1/en not_active IP Right Cessation
- 1978-09-12 HU HU78BO1734A patent/HU182005B/hu unknown
- 1978-09-13 ES ES473296A patent/ES473296A1/es not_active Expired
- 1978-09-13 JP JP11183678A patent/JPS5451892A/ja active Granted
-
1979
- 1979-04-27 ES ES480028A patent/ES480028A1/es not_active Expired
- 1979-11-29 CS CS798241A patent/CS236765B2/cs unknown
-
1981
- 1981-05-21 IL IL62923A patent/IL62923A0/xx unknown
- 1981-10-16 US US06/311,856 patent/US4544631A/en not_active Expired - Lifetime
-
1984
- 1984-01-17 SE SE8400206A patent/SE454357B/sv not_active IP Right Cessation
-
1985
- 1985-03-21 SG SG210/85A patent/SG21085G/en unknown
- 1985-07-18 HK HK547/85A patent/HK54785A/xx not_active IP Right Cessation
-
1986
- 1986-12-30 MY MY101/86A patent/MY8600101A/xx unknown
-
1990
- 1990-06-27 US US07/545,092 patent/US5108913A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI61916B (fi) | Foerfarande och reagens foer bestaemning av alfa-amylas | |
| EP0231125B1 (en) | Hydrolyzable fluorescent substrates and analytical determinations using same | |
| US4649108A (en) | Alpha amylase assay | |
| US3964974A (en) | Enzymatic determination of glucose | |
| US4251629A (en) | Determination of hydrogen peroxide | |
| JPH02174695A (ja) | 酵素酸化によるアナライトの比色定量方法および試剤、およびそのための還元発色性電子受容体 | |
| EP0295034B1 (en) | Hydrolyzable compounds which release electron transfer agents and analytical use of same | |
| CS244665B2 (en) | Method of enzymatic determination of enzyme substrates | |
| US3732147A (en) | Colorimetric determination of dehydrogenases | |
| US4806415A (en) | Method and system for determining the presence of adenosine triphosphate or flavin mononucleotide | |
| EP0173255B1 (en) | Oligosaccharide derivatives and their use as substrate for measuring alpha-amylase activity | |
| US5962248A (en) | Quantitative determination method for chloride ions | |
| US4794078A (en) | Alpha amylase assay | |
| EP1445328A1 (en) | Atp measurement method allowing visual judgement and reagent therefor | |
| US5350678A (en) | Method of differential assay for α-amylase isozymes and a kit for the same | |
| JPH0824598B2 (ja) | アミラ−ゼ定量用試験試薬 | |
| US5919644A (en) | Method for assaying sulfate-conjugated bile acid and therefore | |
| EP0292169B1 (en) | Substrates for B-galactosidase | |
| CS236758B2 (en) | Method of determining of alpha-amylase | |
| KR100715924B1 (ko) | 1,5-안하이드로글루시톨의 정량 분석법 및 시약 | |
| JPS63109798A (ja) | α−アミラ−ゼの定量法及び定量用試薬 | |
| JPH0532687A (ja) | アルコキシメチリデンマルトオリゴ糖誘導体、これを有効成分とするα‐アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα‐アミラーゼ活性の測定方法 | |
| JPH03200801A (ja) | アンヒドロマルトオリゴシド誘導体、これを有効成分とするα―アミラーゼ活性測定用試薬及びこれを用いたα―アミラーゼ活性の測定方法 | |
| JPH07163395A (ja) | α‐アミラーゼアイソザイム活性の分別定量法 | |
| JPH0542276B2 (fi) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MA | Patent expired | ||
| MA | Patent expired |
Owner name: BOEHRINGER MANNHEIM GMBH |