FI59410C - Mellanprodukt foer framstaellning av en ftalidester av 6-(d(-)-alfa-aminofenylacetamido)penicillansyra - Google Patents

Description

ι;τ^·;,| r, kuulutusjijlkaisu COil,A

w (11> utlAggningsskrift 5 9410 (51) Kv.ik.Wct3 σ 07 D *99/*2. *99/32 SUOMI—FINLAND (21) 773i99 (22) HtkmrttfUH - Ai·**·***** 26.10.77 ' (23) Alkuptfvt—GtoglMtadac 06.06.72 (41) ThHm («IklMiial—Mivk eHwtNf 2g q jj PMmttl· ja rakistarihalHtut (44) NihtivtktlpMon i· iuwt|vHuinM pvm.—· htx och r*fi«t*r*tyr«lMn ' AiwMtan uthfd octi utUkrUMn pvMc*rad 30,01.81 (32)(33)(31) *rr*«*y·ο·*λ«·-»«*»η prtork* 09.06.71 Iso-Britannia-Storbritannien(GB) I960I/71 (71) Beecham Group Limited, Beecham House, Great West Road, Brentford, Middlesex, Iso-Britannia-Storbritannien(GB) (72) John Peter Clayton, Horsham, Sussex, Harry Ferres, Horsham, Sussex, Iso-Britannia-Storbritannien(GB) (7b) Berggren Oy Ab (5l) Välituote 6 - /D (-) -0<:-ami no f e nyy li as e t ami dojpeni s i liaani hapon ftalidi-esterin valmistamiseksi - Mellanprodukt för framställning av en ftalidester av 6-/1)(-)-ftr-aminofenylacetamido/penicillansyra (62) Jakamalla erotettu hakemuksesta 1597/72 (patentti 58612) -Avdelad fr&n ansokan 1597/72 (patent 58612) Tämä keksintö kohdistuu uuteen välituotteeseen, jota käytetään 6-/D(-)-a-aminofenyyliasetamido7penisillaanihapon ftalidi-esterin, jolla on kaava 1 /r\ (D) /oh3

< y— CH - CO - NH - CH - CH C

III CIi3

NH„ CO - N -CH- CO - 0 - CH

<.r> ti (I) 0 ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien happoadditiosuolojen valmistamiseksi.

Uudella välituotteella 6-aminopenisillaanihappoftalidieste-rillä on kaava 59410 2 /Ch3 NH2 - CH - CH c ^ II I oh3 /h

CO - N -CH - CO - 0 - C

co

II

o 6-/D(-)-a-aminofenyyliasetamido7penisillaanihappo on paljon käytetty laajavaikutteinen antibiootti. Suun kautta otettuna se kuitenkin absorboituu epätäydellisesti vereen. Jotkut lääketieteen harjoittajat uskovat, että tämä on haitaksi ja sen vuoksi on muutamia yrityksiä tehty sellaisten 6-/D(-)-a-aminofenyyliasetamido7-penisilJaanihappojohdannaisien löytämiseksi, jotka antaisivat korkeampia kantapenisilliinin väkevyyksiä veressä suun kautta oton jälkeen kuin mitä on aikaansaatavissa kantapenisilliinillä itsessään.

Tämän keksinnön tarkoituksena on aikaansaada välituote sellaisen uuden 6-/D(-)-a-aminofenyyliasetamido7penisillaanihapon esterin valmistamiseksi, joka hydrolysoituu vasta veressä ja antaa korkeampia kantapenisilliinin veriheraväkevyyksiä suun kautta annettaessa kuin edellä mainitut tunnetut yhdisteet.

Kaavan I mukaisen yhdisteen suosittu happoadditiosuola on vetykloridi, mutta myös muiden epäorgaanisten tai orgaanisten happojen suoloja voidaan käyttää, erityisesti sellaisia happoja, joita on käytetty suolojen muodostamiseksi itse 6-/D(-)-a-aminofenyyli-asetamido7penisillaanihapon kanssa. Kaavan I mukainen yhdiste muodostaa lisäksi suoloja muiden penisillaanihappojen, esim. 3-(2'-kloori-61-fluorifenyyli)-5-metyyli-^-isoksatsolyylipenisilliinin kanssa.

Kaavan I mukainen esteri voidaan valmistaa keksinnön mukaisesta välituotteesta 6-aminopenisillaanihappoftalidiesteristä saattamalla tämä tai sen silyylijohdannainen reagoimaan sellaisen yhdisteen (D)-isomeerin reaktiivisen N-asyloivan johdannaisen kanssa, jolla on kaava (II) o CH - COOH (II) X · 3 59410 jossa X on aminoryhmä, tunnetulla tavalla suojattu aminoryhmä tai atsidiryhmä, jolloin silyyliryhmä sen ollessa läsnä poistetaan hydrolyysillä tai alkoholyysillä ja jos X ei ole aminoryhmä, saatetaan se reagoimaan sellaiseksi ryhmäksi neutraaleissa tai happamissa olosuhteissa.

6-aminopenisillaanihapon ftalidiesterin silyylijohdannaisel-la tarkoitetaan β-aminopenisillaaniftalidiesterin ja sellaisen silylointiaineen, kuten halogeenitrialkyylisilaanin, dihalogee-nidialkyylisilaanin, halogeenitrialkyylisilaanin, dihalogeenidi-alkoksisilaanin tai vastaavan aryyli- tai aralkyylisilaanin ja sellaisten yhdisteiden kuin heksametyylidisilatsaanin välisen reaktion tuotetta. Yleensä suositaan halogeenitrialkyylisilaane-ja, erityisesti trimetyylikloorisilaania. 6-aminopenisillaanihap-poftalidiesterin silyloidut johdannaiset ovat erittäin herkkiä kosteudelle ja hydroksyylisille yhdisteille ja yhdisteen (II) reaktiivisen johdannaisen kanssa tapahtuneen reaktion jälkeen voidaan asyloidun välituoteyhdisteen silyyliryhmä poistaa hydrolyysillä tai alkoholyysillä.

Yhdisteessä (11) on ryhmä X aminoryhmä, tunnetulla tavalla suojattu aminoryhmä tai atsidiryhmä.

Esimerkkejä suojatusta aminoryhmästä ovat protonoitu aminoryhmä (X = NH*), joka asylointireaktion jälkeen voidaan saattaa reagoimaan vapaaksi aminoryhmäksi yksinkertaisella neutraloinnilla, ja erilaiset ryhmät, jotka asylointireaktion jälkeen regeneroivat aminoryhmän lievässä happohydrolyysissä. Esimerkkejä tällaisista ryhmistä ovat yleisen kaavan (III) enamiiniryhmät tai näiden tautomeeriset modifikaatiot ja yleisen kaavan (IV) mukaiset α-hydroksiarylideeniryhmät tai näiden tautomeeriset modifikaatiot : R1 sCH v - C N - /^C N - ,11 U :

R - C H H

0' 0 (III) (IV)

Kaavassa (III) ja (IV) tarkoittavat katkoviivat vetysidoksia. Kaa- 1 2 vassa (III) on R alhainen alkyyliryhmä, R on joko vetyatomi tai muodostaa yhdessä ryhmän kanssa karbosyklisen renkaan ja R^ on " 5941 0 alhainen alkyyli-, aryyli- tai alhainen alkoksiryhmä. Kaavassa (IV) tarkoittaa Z substituoidun tai substituoimattoman bentseeni-tai naftaleenirenkaan tähdettä. Emäksistä hydrolyysiä ei yleensä käytetä, koska ftalidiryhmän hydrolyysi tapahtuu emäksisissä olosuhteissa .

Atsidiryhmä muutetaan Ni^-ryhmäksi joko katalyyttisella hydrauksella tai elektrolyyttisellä pelkistyksellä.

Yllä mainitussa menetelmässä käytetään hapon (II) reaktiivista N-asyloivaa johdannaista, α-substituentin X kemiallinen luonne vaikuttaa tietenkin reaktiivisen johdannaisen valintaan. Näin ollen, kun X on happostabiili ryhmä, kuten protonoitu aminoryhmä NH* tai atsidoryhmä, on usein tarkoituksenmukaista saattaa happo (II) reagoimaan happohalogenidiksi, esim. käsittelemällä sitä tionyyli-kloridilla tai fosforipentakloridilla happokloridin aikaansaamiseksi .

Tällaisia reagensseja on kuitenkin vältettävä, kun X on tyypin (III) tai (IV) happolabiili ryhmä. Sellaisissa tapauksissa on usein tarkoituksenmukaista käyttää seka-anhydridiä. Tähän tarkoitukseen erityisen sopivia seka-anhydridejä ovat alkoksimuurahais-happoanhydridit, jotka edullisesti valmistetaan käsittelemällä hapon (II) alkalimetalli- tai tertiääristä amiinisuolaa sopivalla alkyyliklooriformiaatilla vedettömässä väliaineessa huoneen lämpötilassa tai sen alapuolella.

Muita hapon (II) reaktiivisia N-asyloivia johdannaisia on karbodi-imidin tai karbonyylidi-imidatsolin in situ tapahtuvassa reaktiossa muodostuva reaktiivinen välituote.

Keksinnön mukainen välituote 6-aminopenisillaanihappoftalidi-esteri voidaan valmistaa, vaikka huonolla saannolla kytkemällä β-aminopenisillaanihappo suoraan 3-bromiftalidiin emäksen läsnäollessa. Tässä menetelmässä tapahtuu jonkin verran epimeroitumis-ta Cg-asemassa ja sen vuoksi tämä menetelmä ei ole täysin tyydyttävä .

Paljon parempia 6-aminopenisillaanihappoftalidiesterisaanto-ja voidaan aikaansaada kytkemällä 6-aminopenisillaanihapon N-suojattu johdannainen (esim. trifenyylimetyylijohdannainen) 3-bromiftalidin kanssa ja poistamalla sen jälkeen suojattu ryhmä (esim. lievällä happohydrolyysillä trifenyylimetyylijohdannaisen tapauksessa).

Vaihtoehtoisia N-suojattuja 6-aminopenisillaanihappotyyppe-jä ovat 6-asyyliaminopenisillaanihapot. 6-asyylisivuketjun poista- 5 59410 mistekniikat esim. bentsyylipenisilliineistä ja fenoksimetyyli-penisilliinistä ovat hyvin tunnettuja (katso brittiläinen patentti n:o 1 189 022) ja käsittävät yleensä 6-asyyliaminopenisillaa-nihapon esterin käsittelemistä fosforipentakloridilla iminoklo-ridisidoksen muodostamiseksi 6-amidotyppiatomiin, minkä jälkeen iminokloridi käsitellään alkoholilla iminoeetterin muodostamiseksi ja hydrolysoidaan sen jälkeen iminosidos 6-aminopenisil-laanihappoesterin muodostamiseksi. Esillä olevassa tapauksessa on mahdollista lähteä penisilliinin G tai penisilliinin V ftali-diesteristä, jotka on valmistettu esim. saattamalla penisilliinin natrium- tai kaliumsuola reagoimaan 3-bromiftalidin kanssa, ja lohkaisemalla asyylisivuketju 6-aminopenisillaanihapon ftalidi-esterin valmistamiseksi.

Keksinnön mukaisesta välituotteesta valmistettu 6-/D(-)-o-aminofenyyliasetamido7penisillaanihappoftalidiesteri absorboituu hyvin ihmiselle ja eläimille suun kautta annettuna. Veriheraan saadaan korkeita kanta-6-/D(-)-a-aminofenyyliasetamido7penisil-laanihapon pitoisuuksia.

Keksintöä selostetaan alla lähemmin esimerkkien avulla:

Esimerkki 1 (a) 3-bromif talidi-/3~bromi-l- (3H) -isobent sofuranoni.7

Ftalidia (10,0 g, 0,075 moolia) ja N-bromisukkinimidiä keitettiin palautusjäähdyttäen kuivassa hiilitetrakloridissa (200 ml) α-atsoisobutyronitriilin katalyyttisen määrän läsnäollessa 3-4 tuntia. Reaktion päättyminen ilmeni N-bromisukkinimidin häviämisenä reaktioastian pohjalta ja sukkinimidin kerääntymisenä sen yläosaan. Sukkinimidi poistettiin suodattamalla ja suodate väkevöitiin tyhjössä 15-20 mlrksi. Jäähdyttämällä tämä konsentraatti ja suodatta- . maila sen jälkeen, saadaan 13,0 g (8l J5:nen saanto) raakaa 3-bromi-ftalidia, sp. 75-80°C valkoisena kiteisenä kiintoaineena. Tuote uudelleenkiteytettiin sykloheksaanista värittöminä levyinä, sp. 78-80°C 95 5!»:sena saantona.

N.m.r. (CCljj)B- δ = 7,67 (4H.m. aromaattinen), δ = 7,38 (lH.s. CH-)

> A

6 i 5941 0

Esimerkki 2

Ftalidi-6-aminopenisillanaatti

Menetelmä 1

Seosta, jossa oli 6-aminopenisillaanihappoa (10,8 g, 0,05M) ja trietyyliamiinia (6,9 ml, 0,05 M) sekoitettiin kuivassa asetonissa (20 ml) 1/2 tuntia ympäristön lämpötilassa. Seos jäähdytettiin 0°C:seen ja liuosta, jossa oli 3-bromiftalidia (10,65 g, 0,05 M) kuivassa asetonissa (20 ml) lisättiin yhtenä annoksena ja saatua keltaista seosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 5 tuntia. Reaktioseos laimennettiin kuivalla dietyylieetterillä (150 ml) ja suodatettiin. Kirkas keltainen suodate pestiin 1-n natriumbikarbonaatilla (100 ml) ja kyllästetyllä suolaliuoksella (100 ml). Liuosta, jossa oli p-tolueenisulfonihappomonohydraattia (9,5 g, 1 ekvivalentti) kuivassa asetonissa (150 ml), lisättiin kirkkaaseen kuivaan keltaiseen suodatteeseen ja ftalidi-epi-6-aminopenisillanaatti kiteytyi välittömästi liuoksesta p-tolueeni-sulfonaattisuolana.

6-a(trans)isomeeri: n.m.r. /(CD3)2S07:L δ = 7,84 (4H.s. ftalidiaromaatteja) 6 = 7,58 (lH.s. CO.O.CH), δ = 7,30 (4H.q. sulfonaattiaromaatteja), δ = 5,35 (lH.d. C-5-protoni, J = 2Hz), δ = 4,89 (lH.s. C-3-protoni) 6= 4,70 (lH.d. C-6-protoni, J = 2Hz), δ = 2,30 (3H.s. CH3), δ = 1,48 (6H.d. gemdimetyyli).

Infranpunakirjossa (KBr-levy) oli voimakkaita viivoja arvoissa 1780 cm-1 1210 cm-1 1170 cm-1 1010 cm"1 970 cm-1 682 cm"1 574 cm Jäännösöljy saatiin emäliuokseata, josta saatiin pieni määrä (noin 5 %) ftalidi-6-aminopenisillanaatin luonnollisen cis-isomee-rin kohtuullisen puhdasta näytettä sen p-tolueenisulfonaattisuolana, 7 59410 fraktiokiteyttämällä toistuvasti 6-α(trans)isomeeri asetoni:eetteri-liuotinseoksesta (3:1).

6-$(cis)isomeeri: n.m.r. /TCD^^SO/: δ = 7,84 (4H.s. ftalidiaromaatteja), δ = 7,58 (lH.s. CO 0 CH), δ = 7,30 (4H.q. sulfaattiaromaatteja), δ = 5,50 (lH.d. C-5-protoni, J = 4Hz), δ = 5,14 (lH.d. C-6-protoni, J = 4Hz) , δ = 4,68 (lH.s. C-3-protoni), δ= 2,27d (3H.s. CH^), δ = 1,53 (6H.d. gem-dimetyylejä).

’ _ Ί

Infranpunakirjossa (KBr-levy) voimakkaita viivoja arvoissa 1780 cm 1210 cm-1 1170 cm"1 1010 cm'1 970 cm'1 682 cm"1 574 cm"1.

Menetelmä 2

Liuosta, jossa oli 6-trityyliaminopenisillaanihappoa (9,8 g, 0,02M) kuivassa asetonissa (100 ml), jäähdytettiin 0°C:seen, trietyy-liamiinia (2,9 mg, 0,02 M) lisättiin ja sen jälkeen 3“bromiftalidia (4,1 g, 0,02M) kuivassa asetonissa (20 ml) ja reaktioseosta pidettiin 0°C:ssa sekoittaen 2 tuntia ja lopuksi ympäristön lämpötilassa tunnin ajan. Saostunut trietyyliammoniumbromidi poistettiin suodattamalla, haihdutettu suodate liuotettiin etyyliasetaatissa (150 ml) ja kahden pesun jälkeen kylmällä natriumbikarbonaatin 255:sella vesiliuoksella (2 x 150 ml) ja jäävedellä (2 x 100 ml) kuivattiin etyyli-asetaattikerros vedettömällä magnesiumsulfaatilla, jolloin saatiin, sen jälkeen kun liuotin pii poistettu tyhjössä, ftalidi-6-trityyli-aminopenisillanaattia valkoisena amorfisena kiintoaineena.

n.m.r. /TCD^)2S07: δ = 7,4 (20H. leveä yksinkertainen viiva pienellä olakkeella arvossa δ = 7,80, aromaattisia protoneja ja CO 0 CH-), S f 4,41 (2H.m. (3-laktaamiprotoneja), δ = 4,15 (1H. leveä yksinkertainen viiva C-3-protoni), δ = 1,38 (6H.d. gem-dimetyylejä).

Infranpunakirjossa (KBr-levy) voimakkaita viivoja arvoissa 1745 cm"1 980 cm 1 750 cm 1 708 cm 1.

Asetonissa (200 ml, jossa 0,2¾ vettä) olevaa ftalidi-6-tri-tyyliaminopenisillanaattia (5,9 g, 0,01 M) käsiteltiin p-tolueeni-sulfonihappomonohydraatilla (1,9 g, 0,01 M). Seistyään huoneen lämpötilassa 2 tuntia lisättiin vettä (0,25 ml) ja ftalidi-6-aminopenisil-feiaatti-p-tolueenisulfonaatin sakka saatiin lisäämällä hitaasti pet-rolieetteriä, kp. 40-60°C (250 ml). Suodattamalla ja pesemällä toistuvasti petrolieetterillä saadaan raakaa p-tolueenisulfonaattisuolaa. Näyte uudelleenkiteytettiin asetoni-dietyylieetteristä 85$:sena saantona.

e 59410 n.m.r. /JCD^) S07: 6= 7,8*1 (*!H.s. ftalidiaromaatteja), δ = 7,58 (lH.s. -C0.0 CH-), δ = 7,30 (*1*1,9 q· sulfonaattiaromaatteja), δ = 5,50 (lH.d. β-laktaameja, J = *1Ηζ), δ = 5,1*1 (lH.d. β-laktaarni, J = *lHz), 6 = *1,68 (lH.s. C-3-protoni), 6 = 2,27 (3H.s. CH-j), 6 = 1,53 (6H.d. gem-dimetyylejä).

C23H2*1N2S208 edellyttää: C 53,08, H *1,61, N 5,39, S 12,31.

saatu : C 52 ,32 , H 4,60, N *1,9*1, S 12,27.

Menetelmä 3

Bentsyylipenisiiliftalidiesteri

Bentsyylipenisilliinin kaliumsuolaa (20,0 g, 10,05*1 moolia) liuotettiin kuivaan dimetyyliformamidiin (50 ml) ja jäähdytettiin 0° C:een. Tähän sekoitettuun liuokseen lisättiin 3“bromiftalidia (11,5 g, 0,05*1 moolia) kuivassa dimetyyliformamidissa (20 ml) yhtenä ainoana annoksena. Reaktioseoksen annettiin lämmetä huoneen lämpötilaan ja sekoitettiin sen jälkeen vielä 2 tuntia. Seos kaadettiin sen jälkeen jääkylmään veteen (600 ml) ja sekoitettiin voimakkaasti. Erottuva valkoinen kiinteä sakka otettiin talteen ja pestiin hyvin vedellä. Kuivauksen jälkeen uudelleenkiteytettiin aine kuumasta isopro-pyylialkoholista, jolloin saatiin valkoinen kiteinen tuote (10,5 g, *11,9Ϊ), sp. 167-169°C.

Infranpunakirjo (Nujol) sisälsi m.m. voimakkaita viivoja: 1770 cm-1 1678 cm"1 152*1 cm 1 970 cm"1.

n.m.r. /TCD^)2SO/D2o7 sisältää huippuja arvoissa: δ = 7,88 (*lH.m. ftalidiaromaatteja), δ = 7,61 (lH.s. CO.O CH-), δ = 7,28 (5H.s. aromaatteja), δ = 5,55 (2H.m. β-laktaameja), δ = *1,55 (lH.s. ^-protoni), δ= 3,56 (2H.s. PhCH2C0), δ = 1,53 (6H.d. gem-dimetyylejä).

Puhtaus järjestettiin hydroksyyliaminokokeella ja oli 109,2%. Saatu C 61,55, H *1,90, N 5,87, S 6,72, C2ljH22N2S06 todettu: C 61,80, H *1,72, N 6,02, S 6,86.

Bentsyylipenisilliiniftalidiesteriä (11,6 g, 0,025 M) liuotettiin kuivaan metyleenidikloridiin (250 ml) ja jäähdytettiin -25°C:een. N-metyylimorfoliinia (5,60 ml, 0,025 M) lisättiin ja sen jälkeen fos-foripentakloridin liuosta (6,0 g) metyleenidikloridissa (150 ml) 5 minuutin sisällä. Hailakankeltainen väri ilmestyi ja 1/2 tunnin sekoituksen jälkeen nousi lämpötila 0°C:een. Reaktioseos jäähdytettiin uudestaan -25°C:een ja N-metyylimorfoliinia (5,60 ml) ja kuivaa me-tanolia lisättiin, jolloin saatiin hidas lämpötilan nousu noin -10° C:een.

9 59410 Lämpötilassa -5 - 0°C:ssa 2 tuntia suoritetun sekoituksen jäl-keen lisättiin vettä (400 ml) voimakkaasti sekoittaen, kunnes seoksen pH oli säädetty 1,2-6,0: aan laimealla natriumhydrokcidili uoksella.

Orgaaninen faasi erotettiin, pestiin vedellä ja kyllästetyllä suolaliuokoclla ja suodatettiin silikonipaperin läpi.

Liuosta, jossa oli p-toluoeni.sulfonihuppomonoliydraattl a, (4,75 G, 0,025 M) asetonissa (100 ml), lisättiin sekoittaen orgaaniseen kerrokseen ja eetteriä lisättiin, kunnes liuos muutti sameaksi. Seis-tyään yön yli 0°C:ssa saatiin 7,0 g valkoista kiteistä 6-aminopeni-sillaanihappof tali di.esteri-p-tolueeni sulfonaattia ja vielä 2,5 g saatiin väkevöimöllä supdate. Kokonaissaanto = 9,5 g, 75,4¾.

n.m.r. /JCD^pSO'/: δ - 7,84 (4ll.s. ftalidi.aromaattoja), δ = 7,58 (lH.s. -C0.0 CU ) δ =. 7,30 (4H.s. sulfonaattiaromnatteja), δ = 5,50 (lH.d. p-laktaami, J - 4Hz) , δ = 5,14 (lll.d. 6-laktaami, J = 4Hz), δ = 4,68 (lii. s. Cj-protoni) , δ = 2,27 (3H.s. CH^-) , δ = 1,53 (6H,d. gem-dimetyyli).

°23Η24Ν2Γ’2ύ8 edellyttää: C 53,08, N 4,61, N 5,39, S 12,31

Saatu : C 52,50, H 4,62, N 4,98, S 12,34.

Esimerkki 3

Ampisilliiniftalidiesteri (I) kytkemällä ftalidi-6-aminopenisi11a-naatti enamiinisuojatun α-aininofenyy lietikkahappo-selca-anhydrid.iri kanssa f~\ (D) (D) ζ J" yli - C02Na V-y f1 " CO",°^COOC2n5 /N \ /N \

CIU-C H CH,-C II

3 !! ! 3 II

CI| J> , CH 0

Y

OOH3 OCHj \ \6-APA- ftalidi __ S *

^ V-CHCONH - T-f V

(I) <-SLiύ /"N J—N-Lc0.

“*1 ϊ <Vii cv°. y° OCH7j 10 5941 0

Ftalidi-6-aminopenisillanaatti-p-tolueenisulfonaattia (10,4 g) suspendoitiin etyyliasetaattiin (60 ml) ja sekoitettiin voimakkaasti 1-n natriumbikarbonaatin kanssa (135 ml) 20 min. ympäristön lämpötilassa. Orgaaninen kerros erotettiin, pestiin vedellä (100 ml), jossa oli 2 % natriumbikarbonaattia (5 ml) ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla, suodatettiin sekä pidettiin -15°C: ssa.

Natrium-D(-)-N-(1-metoksikarbonyylipropen-2-yyli)-a-aminofe-nyyliasetaatin seka-anhydridiä (5,4 g) etyyliasetaatissa (30 ml) valmistettiin lisäämällä etyylikloroformiaattia (2 ml) ja pyri-diiniä (2 tippaa) -15°C:ssa ja sekoittamalla reaktioseosta 10 min. lämpötilassa välillä -15 ja -20°C. Tähän seka-anhydridiliuokseen lisättiin ftalidi-6-aminopenisillanaatin etyyliasetaattiliuosta ja seosta sekoitettiin -15°C:ssa 15 min. ja sen jälkeen vielä 45 min. ilman lisäjäähdytystä.

Vettä (75 ml) lisättiin, sitten 2-n suolahappoa (10 ml) ja reaktioseosta sekoitettiin voimakkaasti 25 min. Petrolieetteriä, kp. 60-80°C (250 ml) lisättiin hitaasti ja sekoittaen. Vesikerros erotettiin ja kyllästettiin natriumkloridilla ja erottuva öljy uutettiin etyyliasetaattiin (2 x 100 ml) ja kuivattiin vedettömällä magnesiumsulfaatilla.

Suodatuksen jälkeen väkevöitiin liuos tyhjössä noin neljännekseen tilavuudestaan, kuivaa eetteriä (noin 250 ml) lisättiin hitaasti ja valkoisena amorfisena vetykloridisuolana saostuva ampi-silliiniftalidi (4,0 g, 40 %) otettiin talteen ja pestiin hyvin eetterillä. Hydroksyyliamiinikoe = 76,1 #, jodometrinen koe = 77,5 %, klooripitoisuus = 7,07 % (teoreettisesti = 6,85 %).