FI108036B

FI108036B - Menetelmä antituumorisesti aktiivisten antrasykliiniglykosidien valmistamiseksi

Info

Publication number: FI108036B
Application number: FI953784A
Authority: FI
Inventors: Antonino Suarato; Michele Caruso; Alberto Bargiotti; Maria Grandi; Marina Ripamonti
Original assignee: Pharmacia & Upjohn Spa
Priority date: 1993-12-13
Filing date: 1995-08-09
Publication date: 2001-11-15
Also published as: NO953163D0; CN1117734A; TW336235B; RU2149163C1; HU217630B; FI953784A; NO304951B1; FI953784A0; KR960701074A; WO1995016695A2; ATE157369T1; WO1995016695A3; KR100352734B1; MY117086A; US5532218A; DK0683788T3; GR3025266T3; PL310177A1; NO953163L; HU9502662D0

Description

108036

Menetelmä antituumorisesti aktiivisten antrasykliinigly-kosidien valmistamiseksi

Keksintö koskee menetelmää uusien antituumorisesti ak-5 tiivisten antrasykliiniglykosidien valmistamiseksi.

Keksintö liittyy antrasykliiniglykosideihin, jotka ovat daunorubisiinin- ja doksorubisiinin sukuisia yhdisteitä, joissa sokeritähteen 3'-aminoryhmä liittyy atsiridinoren-10 kaaseen ja mahdollisesti sokerin C-4'-asemassa oleva hydroksiryhmä voi olla suojattuna sulfonaatin muodossa. Keksintö liittyy myös niiden vesiliukoisiin johdannaisiin ja farmaseuttisesti hyväksyttäviin happoadditiosuoloihin.

15 Keksintö koskee menetelmää yhdisteen valmistamiseksi, joka on kaavan 1 tai 2 mukainen antrasykliiniglykosidi

O OH O O OH O

20

R1 O OH O R} o OH O

• · : jossa Rx on vety tai metoksiryhmä, R2 on hydroksiryhmä tai se tarkoittaa kaavan 3 mukaista asyylioksitähdettä 30 -0-C0R5 (3) : ; jossa R5 on lineaarinen tai haarautunut C^-Cg-alkyyH, mono- tai bisyklinen aryyli, mieluimmin fenyyli, tai 35 mono- tai bisyklinen heterorengas, mieluimmin pyridyyli, , joista ryhmistä jokainen voi mahdollisesti olla substitu-oitu (a) aminoryhmällä -NR6R7, jossa Rs ja R7 ovat toisistaan riippumatta vety tai Ci-C^-alkyyli, tai (b) karboksi- • · 4 2 108036 ryhmällä, R3 ja R4 tarkoittavat molemmat vetyä tai toinen ryhmistä R3 ja R4 on vety ja toinen on hydroksiryhmä tai kaavan -0S02R8 mukainen ryhmä, jossa R8 voi olla lineaarinen tai haarautunut, 1-6 hiiliatomia, esimerkiksi 1-4 5 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä, R8 voi erityisesti olla metyyli, etyyli, n-propyyli tai isopropyyli.

Vaihtoehtoisesti R8 voi olla aryyliryhmä, kuten fenyyli, joka on substituoimaton tai substituoitu 1-3 substituen-10 tiliä, joista jokainen voi olla toisistaan riippumatta lineaarinen tai haarautunut, 1-6 hiiliatomia, esimerkiksi 1-3 hiiliatomia, sisältävä alkyyli- tai alkoksiryhmä, ha-logeeniatomi tai nitroryhmä. Esimerkkejä halogeeniato-meista ovat fluori, kloori, bromi ja jodi, edullisia ovat 15 fluori tai kloori, vielä edullisempi on kloori.

Tässä keksinnössä aryyliryhmä on monosyklinen tai bisyk-linen, 6-10 hiiliatomia, sisältävä aromaattinen hiilivety, esimerkiksi fenyyli tai naftyyli. Heterosyklinen ren-20 gas on 5- tai 6-jäseninen, tyydyttynyt tai tyydyttymätön heterosyklinen rengas, joka sisältää ainakin yhden hete-roatomin, joka on O, S tai N, ja joka on mahdollisesti liittynyt toiseen 5-tai 6-jäseniseen, tyydyttyneeseen tai tyydyttymättömään heterosyklyyliryhmään.

25 .. Esimerkkejä tyydyttyneistä ja tyydyttymättomistä hetero- syklisistä renkaista ovat pyratsolyyli-, imidatsolyyli-, pyridyyli-, pyratsyyli-, pyrimidyyli-, pyridatsynyyli-, morfolino-, tiomorfolino-, furyyli- ja tienyylirenkaat.

30

Mieluimmin R2 on hydroksi tai O-nikotinyyli, R3 on hydrok-: si tai -0S02R8, jossa R8 on Ci-C^-alkyyli, ja R4 on vety.

Esimerkkejä keksinnön mukaisesti valmistetuista yhdis-35 teistä ovat: (la) 3'-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-4-0-metaanisulfonyy- li-daunorubisiini (Rx = OCH3, R4 = H, R3 = 0S02CH3) ; • · · 3 108036 (lb) 4-demetoksi-31-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulfonyyli-daunorubisiini (Rx = R4 = H, R3 = 0S02CH3) ; (lc) 31-deamino-3 1-[l-atsiridinyyli]-daunorubisiini (Ri = 5 OCH3, R4 = H, R3 — OH); (ld) 4-demetoksi-3'-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-daunorubisiini (Ri = R4 = H, R3 = OH); (2a) 31-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-41-O-metaanisulfo- nyyli-14-nikotinaatti-doksorubisiini (Rx = OCH3, R2 = 10 O-nikotinoyyli, R4 = H, R3 = 0S02CH3); (2b) 3'-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-14-nikotinaatti-doksorubisiini (Ra = OCH3, R2 = O-nikotinoyyli, R4 = H, R3 = OH); (2c) 3'-deamino-3 1-[l-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulfo-15 nyyli-doksorubisiini (Ri = OCH3/ R2 = OH, R4 = H, R3 = 0S02CH3) ; (2d) 4-demetoksi-31-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-4'-0-metaanisulfonyyli-doksorubisiini (Rx = R4 = H, R2 = OH, R3 = 0S02CH3) ; 20 (2e) 3'-deamino-3 1-[l-atsiridinyyli]-doksorubisiini (R3 = OCH3, R4 = H, R2 = R3 = OH) ; (2f) 4-demetoksi-3'-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-doksorubisiini (Rx = R4 = H, R2 = R3 = OH) ; (2g) 3'-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-4'-jodidoksorubisii-25 ni (Rx = OCH3, R2 = OH, R4 = H, R3 = I) ; (2h) 3'-deamino-3'-[l-atsiridinyyli]-4'-deooksidoksoru-bisiini (Rx = 0CH3, R2 = OH, R3 = R4 = H) ; ja näiden farmaseuttisesti hyväksyttävät suolat, kuten hydrokloridisuolat.

30

Keksintö koskee siten menetelmää edellä määritellyn kaavan 1 tai 2 mukaisen atsiridinoantrasykliiniglykosidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, jossa menetelmässä: ·» * * » 35 4 108036 (1) yleisen kaavan 4 mukainen antrasykliini

O OH O

5 R1 O OH o 10 R< /

NH

*3/ 15 4 jossa Rx, R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja Rg tarkoittaa sulfonaattiryhmää tai halogeeniatomia, mieluimmin klooriatomia, muutetaan kaavan 1 mukaiseksi ant-20 rasykliiniglykosidiksi, mieluimmin kaavan 4 mukainen yhdiste liuotetaan vedettömään orgaaniseen liuottimeen vedettömän alkalimetallisuolan ja heikon emäksen läsnäollessa, ja haluttaessa näin saatu kaavan 1 mukainen antra-sykliiniglykosidi muutetaan farmaseuttisesti hyväksyttä-25 väksi suolakseen; tai ' · · • (2) yleisen kaavan 4 mukainen antrasykliiniglykosidi käsitellään piihappogeelillä kaavan 1 mukaisen antrasyk-liiniglykosidin saamiseksi, ja näin saatu kaavan 1 mukai- 30 nen antrasykliiniglykosidi muutetaan haluttaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen; tai (3) kaavan 2 mukaisen antrasykliiniglykosidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi 35 yleisen kaavan 6 mukainen antrasykliiniglykosidi • · .

5 108036 j? OH 0 1 ° OH ö

S

10 "» O*» jossa Rlf R2/ R3, R4 ja R9 tarkoittavat samaa kuin edellä, käsitellään piihappogeelillä, ja näin saatu kaavan 2 mukainen antrasykliiniglykosidi muutetaan haluttaessa far-15 maseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen; tai (4) kaavan 5 mukainen johdannainen

O OH O

^ I I V////OH

R1 O OH o 30 jossa Rlf R3, R4 tarkoittavat samaa kuin edellä (joka ; ' voidaan valmistaa kaavan 1 mukaisesta yhdisteestä käyttä mällä menetelmää, joka on kuvattu US-patentissa nro 3,803,124) hydrolysoidaan kaavan 2 mukaisen atsiridino-35 antrasykliinijohdannaisen, jossa R2 on hydroksiryhmä, saamiseksi tai edellä määritellyn kaavan 5 mukainen • · « 6 108036 yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan 3' mukaisen suolajohdannaisen kanssa X+_OCOR5 (3) 5 jossa R5 tarkoittaa samaa kuin edellä sillä edellytyksellä, että R5 ei tarkoita primaarisen aminoryhmän sisältävää tähdettä, ja X1 tarkoittaa ionia, mieluimmin natrium- tai kaliumionia, ja näin saatu kaavan 2 mukainen yhdiste 10 muutetaan haluttaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen, tai edellä määritellyn kaavan 5 mukainen yhdiste saatetaan reagoimaan kaavan 3* mukaisen suolajoh-dannaisen, jossa R5 on happosensitiivisellä suojaryhmällä suojattu primaarinen aminoryhmä, kanssa, jonka jälkeen 15 suojaryhmä poistetaan ja näin saatu kaavan 2 mukainen yhdiste muutetaan haluttaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen; tai (5) kaavan 2 mukaisen antrasykliiniglykosidin tai sen 20 farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, jossa R2 on kaavan 3 mukainen ryhmä, jossa R5 ei tarkoita primaarisen aminoryhmän sisältävää tähdettä, valmistamiseksi edellä määritelty kaavan 5 mukainen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan 3· mukaisen suolajohdannaisen kanssa vedettömässä, 25 polaarisessa liuottimessa lämpötilassa, joka on 20 °C:sta ;· 60 °C:seen, reaktioajan ollessa 4 tunnista 15 tuntiin; tai (6) kaavan 2 mukaisen antrasykliiniglykosidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, jossa R2 tarkoittaa 30 kaavan 3 mukaista, primaarisen aminoryhmän sisältävää ryhmää, valmistamiseksi edellä määritelty kaavan 5 mukainen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan 3’ mukaisen happosuolajohdannaisen, jossa aminoryhmä on suojattu happosensitiivisellä ryhmällä, kanssa polaarisessa aprootti-35 sessa liuottimessa lämpötilassa, joka on 20 °C:sta 60 °C:seen, 4 tunnista 15 tuntiin, jonka jälkeen muodostuneesta (N-suojatusta)-esterijohdannaisesta poistetaan 7 108036 suojaus liuottamalla se orgaaniseen liuottimeen ja lisäämällä tislattua vettä ja vesipitoista kloorivetyhappoa sekoittaen lämpötilassa, joka on 0 °C:sta 20 °C:seen, 30 minuutista kahteen tuntiin, minkä jälkeen erotetaan ja 5 jäädytyskuivataan vesipitoinen faasi, jolloin saadaan kaavan 2 mukaisen vastaavan C-14-esterijohdannaisen liukoinen ammoniumhydrokloridisuola.

Kaavan 6 mukaiset yhdisteet, joissa Rx, R2, R3, R4 ja R9 10 tarkoittavat samaa kuin edellä, on esitetty myös julkaisussa WO 93/01201.

On huomattava, että kaavan 4 tai 6 mukaiset antrasyklii-nit voivat muodostaa myös atsiridinorenkaan, kun ne käsi-15 tellään piihappogeelillä. Tätä käsittelyä voidaan käyttää lievissä olosuhteissa, mikä tekee mahdolliseksi kaavan 2 mukaisten yhdisteiden valmistamisen lähtemällä emäsher-kistä esterijohdannaisista, kuten kaavan 6 mukaisista yhdisteistä.

20

Keksinnön mukaisesti edulliset reaktio-olosuhteet kaavan 1 mukaisten atsiridinoantrasykliinien valmistamiseksi käsittävät edellä määritellyn kaavan 4 mukaisen yhdisteen liuottamisen vedettömään orgaaniseen liuottimeen, kuten 25 vedettömään metyleenikloridiin, vedettömän alkalisuolan, ;· esimerkiksi vedettömän natrium- tai kaliumkarbonaatin tai -vetykarbonaatin, läsnäollessa sekoittamalla lämpötilassa, joka on 0 °C:sta 30 °C:seen, mieluimmin huoneen lämpötilassa, ja noin 15 minuutista kahteen tuntiin, mie-30 luimmin noin 30 minuuttia.

Menetelmävaihtoehdossa (3) kaavan 4 mukaiset yhdisteet liuotetaan orgaanisten liuottimen seokseen, kuten kuivan metyleenikloridin ja metanolin seokseen, tilavuuksien 35 ollessa 1:1:stä l:3:een, jonka jälkeen liuos käsitellään piihappogeelillä, jonka hiukkaskoko on mieluimmin 230-400 mesh, sekoittamalla lämpötilassa, joka on 0 °C:sta · 8 108036 30 °C:seen, mieluimmin huoneen lämpötilassa, ja 15 minuutista kahteen tuntiin, mieluimmin noin 30 minuuttia.

Samanlaisessa menetelmässä reaktio-olosuhteet edellä mää-5 ritellyn kaavan 6 mukaisten yhdisteiden muuttamiseksi kaavan 2 mukaisiksi atsiridinoantrasykliineiksi käsittävät mieluimmin kaavan 6 mukaisten yhdisteiden liuottamisen vedettömään orgaaniseen liuottimeen, kuten kuivaan metyleenikloridiin ja metanoliin, ja muodostuneen liuok-10 sen käsittelemisen piihappogeelillä, jonka hiukkaskoko on mieluimmin 230-400 mesh, sekoittamalla lämpötilassa, joka on 0 °C:sta 30 °C:seen, mieluimmin huoneen lämpötilassa, 15 minuutista kahteen tuntiin, mieluimmin noin 30 minuuttia.

15

Polaarisen liuottimen, kuten metanolin, käytön tarkoituksena piihappogeelimenetelmässä on antrasykliinin poistaminen piihaposta.

20 Toisessa menetelmässä kaavan 2 mukaisen atsiridinoantra-sykliiniglykosidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, jossa R2 on kaavan 3 mukainen ryhmä, jossa R5 ei tarkoita primaarisen aminoryhmän sisältävää tähdettä, valmistamiseksi edulliset reaktio-olosuhteet käsittävät 25 kaavan 5 mukaisen yhdisteen reaktion edellä määritellyn .. kaavan 3' mukaisen suolajohdannaisen kanssa vedettömässä polaarisessa liuottimessa, mieluimmin asetonissa tai di-metyyliformamidissa, lämpötilassa, joka on 20 °C:sta 60 °C:seen, mieluimmin huoneen lämpötilassa, 4 tunnista 30 15 tuntiin, mieluimmin 5 tunnista 12 tuntiin.

* : Reaktio-olosuhteet yleisen kaavan 2 mukaisen atsiridino- antrasykliiniglykosidin, jossa R2 tarkoittaa kaavan 3 mukaista ryhmää, jossa R5 on primaarinen aminoryhmä, valmis-'35 tamiseksi käsittävät edellä määritellyn kaavan 5 mukaisten yhdisteiden reaktion kaavan 3’ mukaisen happosuola-johdannaisen, jossa aminoryhmä on suojattu happoherkällä »» · i 9 108036 ryhmällä, esimerkiksi aminoryhmä on suojattu Schiffin emäksellä, kanssa polaarisessa aproottisessa liuottimes- sa, kuten asetonissa tai dimetyyliformamidissa, lämpötilassa, joka on 20 °C:sta 60 eC:seen, mieluimmin huoneen 5 lämpötilassa, 4 tunnista 15 tuntiin, mieluimmin 5 tunnista 12 tuntiin, jonka jälkeen muodostuneesta (N-suojatus-ta)-esterijohdannaisesta poistetaan suojaus liuottamalla se esim. metyleenikloridiin ja lisäämällä tislattua vettä ja vesipitoista kloorivetyhappoa, mieluimmin noin sama 10 tilavuus vettä kuin metyleenikloridia ja kloorivetyhappoa määrä, joka vastaa noin kolmea ekvivalenttia 0,1 N HC1: ää. Seosta sekoitetaan voimakkaasti lämpötilassa, joka on 0 °C:sta 20 °C:seen, mieluimmin noin 15 °C:ssa, noin 30 minuutista kahteen tuntiin, mieluimmin 45 minuutista 90 15 minuuttiin, faasit erotetaan ja vesipitoinen faasi jäädy-tyskuivataan kaavan 2 mukaisen C-15-esterijohdannaisen liukoisen ammoniumhydrokloridisuolan saamiseksi. Primaarinen aminoryhmä on suojattu mieluimmin metyleenidifenyy-liryhmällä.

20

Keksinnön mukaisesti valmistetuista yhdisteistä voidaan valmistaa farmaseuttisia koostumuksia, jotka sisältävät kaavan 1 tai 2 mukaisen antrasykliiniglykosidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan yhdessä farmaseut-25 tisesti hyväksyttävän laimennusaineen tai kantoaineen :· kanssa.

Voidaan käyttää tavanomaisia kantoaineita ja laimen-nusaineita. Koostumukset voidaan valmistaa ja annostaa 30 tavanomaisella tavalla.

Sopiviin annostamistapoihin kuuluu parenteraalinen annostus. Parenteraaliseen annostukseen käytetty nestemäinen valmiste voidaan valmistaa käyttämällä aktiivista yhdis-35 tettä ja steriiliä laimennusainetta tai kantoainetta, joka voi joko liuottaa aktiivista yhdistettä tai suspendoida sen. Parenteraalinen valmiste voidaan muodostaa - · · 10 108036 steriiliksi kiinteäksi aineeksi, josta se valmistetaan ennen annostamista sopivalla kantoaineella, kuten fysiologisella suolaliuoksella, steriilillä vedellä tai muulla steriilillä kantoaineella.

5

Keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat käyttökelpoisia ihmisen ja eläimen terapeuttisissa hoitomenetelmissä. Ne ovat käyttökelpoisia antituumorisina aineina erityisesti hoidettaessa leukemiaa tai paksun-10 suolen rauhassyöpää. Potilaalle, jolla on tuumori, annostetaan terapeuttisesti tehokas määrä potilaan tilan helpottamiseksi tai parantamiseksi. Voidaan annostaa sellainen määrä, joka on riittävä tuumorin kasvun estämiseksi.

15

Annettava annos voidaan varmistaa käyttämällä doksoru-bisiinille ja daunorubisiinille tunnettuja annosrajoja, joita muunnetaan huomioon ottaen aktiivisuus, joka keksinnön mukaisilla yhdisteillä on in vitro- ja in vivo-20 antituumoritesteissä. Sopivat annokset ovat yleensä alueella, joka on 1-200 mg/m2 kehon pinta-ala, mieluimmin 1-100 mg/m2, riippuen hoidettavan sairauden luonteesta ja vakavuudesta ja potilaan yleistilasta.

25 Seuraavat esimerkit kuvaavat keksintöä.

1 ·

Esimerkki 1 31-deamino-3»-[1-atsiridlnyyli]-4'-O-metaanisulfonyyll-daunorubisiinin valmistus 30 (Ri = 0CH3, R4 = H, R3 = 0S02CH3) 31-N-(2-kloorietyyli)-4*-O-metaanisulfonyylidaunorubisii-ni (4a, Rt = 0CH3, R4 = H, R3 = 0S02CH3, R9 = Cl) (0,33 g, 0,05 mmoolia), joka valmistettiin julkaisussa WO/93/ 35 012001 esitetyllä tavalla, liuotettiin vedettömän mety- leenikloridin (10 ml) ja metanolin (20 ml) seokseen ja sekoitettiin piihappogeelin (Merck, 200-400 mesh, 2 g) • · 11 108036 kanssa huoneen lämpötilassa 30 minuuttia. Sen jälkeen liuos suodatettiin, konsentroitiin kuiviin ja raakamate-riaali pikakromatografoitiin piihappogeelipylväässä käyttäen eluointisysteeminä metyleenikloridin ja metanolin 5 seosta (95:5, tilavuuksia), jolloin saatiin otsikossa mainittu yhdiste la (saanto 0,22 g).

TLC piihappogeelilevyillä F254 (Merck), käyttäen eluointisysteeminä metyleenikloridia ja metanolia (98:2, tilavuuksia) : Rf = 0,65.

10 FD-MS: m/z [M+] 631.

2H-NMR (400 MHz, CDC13) 6: 1,16, 1,25 (mf2H,atsiridiinive-dyt), 1,36 (d,J=6,4 Hz,3H,£H3-5'), 1,52 (m,lH,H-3·), 1,73 (mf2Hfatsirldiini vedyt) r 1,80 (m, 1H,H~2 'eq) , 2,09 (m,lH, H-2'ax), 2,12 (m,lH,H-8ax), 2,31 (m,lH,H-8eq), 2,39 (s, 15 3H,COCH3), 2,98 (d,J=19,2 Hz,1H,H-I0ax), 3,21 (dd,J=l,7, 19,2 Hz,1H,H-I0eq), 3,22 (s,3H,CH3S02) > 4,09 (q,J=6,4 Hz, lH,H-5'), 4,10 (s,3H,OCH3), 4,44 (s,lH,QH-9), 4,75 (s,lH, H-4'), 5,28 (m,lH,H-7), 5,55 (d,J=3,4 Hz,lH,H-l')/ 7/41 (d,J=8,l Hz,lH,H-3), 7,80 (dd,J=7,7, 8,1 Hz,lH,H-2), 8,05 20 (d,J=7,7 Hz,1H,H-1), 13,30 (s,1H,QH-11), 14,00 (s,lH,QH- 6) .

Esimerkki 2 4-demetoksi—31-deamino-31-[1-atsiridinyyli]-41-Q-me-25 taani sulfonyylidaunorubi si ini n valmistus :. (Ib: Ri = R4 = H, R3 = OS02CH3) 4-demetoksi-N-(2-hydroksietyyli)daunorubisiini (4b: R3 = R4 = H, R3 = 0S02CH3, R9 = OH, 0,3 g, 0,5 mmoolia) liuotet-30 tiin metyleenikloridin (10 ml) ja metanolin (5 ml) seokseen ja ravisteltiin huoneen lämpötilassa piihappogeelin > « ’ ‘ (3 g) kanssa 30 minuuttia. Sen jälkeen orgaaninen liuos suodatettiin ja liuotin poistettiin alennetussa painees-' sa. Jäännös pikakromatografoitiin piihappogeelipylväässä 35 käyttäen eluointisysteeminä metyleenikloridin ja metanolin seosta (95:5, tilavuuksia), saatiin otsikossa mainittu yhdiste Ib (0,18 g).

. · · 12 108036 TLC piihappogeelilevyt F254 (Merck), käyttäen eluointi-systeeminä metyleenikloridia ja metanolia (20:1, tilavuuksia): Rf = 0,42.

FD-MS: m/z [It] 601.

5

Esimerkki 3 3 '-deafflino-3 ' - [ 1-atsiri-dinyyl i ]-4 '-O-metaani sulf onyyli- 14-ni kori naatti-doksorubisiinin valmistus (2a: Ri = 0CH3, R2 = O-nikotinoyyli, R4 = H, R3 = 0S02CH3) 10 3'-deamino-3·-[l-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulfonyyli-daunorubisiini (la, 0,63 g, 1 mmoolia), joka valmistettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla, liuotettiin vedettömän metanolin (6 ml) ja dioksaanin (13 ml) seokseen, 15 lisättiin etyyli-orto-formiaattia (0,5 ml), jonka jälkeen seos käsiteltiin bromin (1 g) liuoksella vedettömässä me-tyleenikloridissa (5 ml) 10 °C:ssa 1,5 tunnin ajan. Sen jälkeen reaktioseos saostettiin etyylieetterin (100 ml) ja petrolieetterin (50 ml) seoksella. Sakka kerättiin ja 20 liuotettiin uudestaan asetonin (15 ml) ja 0,25 N vesipitoisen bromivedyn (15 ml) seokseen. Seosta pidettiin 30 °C:ssa 20 tuntia, jonka jälkeen se uutettiin n-bu-tanolilla (50 ml). Orgaaninen liuotin poistettiin alennetussa paineessa ja jäännös, joka liuotettiin kuivaan 25 asetoniin (200 ml), käsiteltiin kaliumnikotinaatilla (2 .· g) keittäen palautusjäähdyttäen yhden tunnin ajan. Liuo tin poistettiin alennetussa paineessa ja raaka materiaali kromatografoitiin piihappogeelipylväässä käyttäen eluoin-tisysteeminä metyleenikloridin ja metanolin seosta (95:5, 30 tilavuuksia), saatiin otsikossa mainittu yhdiste 2a (0,35 g), sul.p. 148-149 °C hajaantuen.

TLC piihappogeelilevyt F254 (Merck), käyttäen eluointi-systeeminä metyleenikloridia ja metanolia (10:1, tilavuuksia): Rf = 0,37.

35 FD-MS: m/Z [M*] 752.

> ♦ · i 13 108036

EsimerkTH 4 3 '-daami no-3'-[1-atsiridinyyli]-41-O-metaanisul fonyyli- dolcsoruhi si ini n valrnistus (2c: Rx = 0CH3, R2 = OH, R4 = H, R3 * 0S02CH3) 5 3'-N-(2-kloorietyyli)-4'-metaanisulfonyylidoksorubisiini (6a: Rx = OCH3, R2 =OH, R9 = Cl, R3 = 0S02CH3, R4 = H) , joka valmistettiin julkaisussa GB 9114549 kuvatulla tavalla, muutetaan otsikossa mainituksi yhdisteeksi 2c esimerkissä 10 1 kuvatulla tavalla.

TLC piihappogeelilevyt F254 (Merck), käyttäen eluointi-systeeminä metyleenikloridia ja asetonia (8:2, tilavuuksia) : Rf = 0,35.

FD-MS: m/z [M+] 647.

15

Esimerkki 5 31-deamino-31-[Ί-atsi ri di nyyli]-4'-jodidoksorubisiinin valmistus (2g: Rx = OCH3, R2 = OH, R4 = H, R3 = I) 20 3'-N-(2-kloorietyyli)-4’-jodidoksorubisiini (6b: R2 = OCH3, R2 = OH, Rg = Cl, R3 = I, R4 =H) , joka valmistettiin julkaisussa GB 9114549 kuvatulla tavalla, muutetaan otsikossa mainituksi yhdisteeksi 2g esimerkissä 1 kuva-25 tulla tavalla.

.· TLC piihappogeelilevyt F254 (Merck), käyttäen eluointi- systeeminä metyleenikloridia ja asetonia (9:1, tilavuuksia) : Rf = 0,45.

FD-MS: m/z [M+] 679.

30

Esimerkki 6 3 1-deamino-3 1 - [ l-atsiri dinyyl i ]-4 1 -deoksidoksorubisiinin valmistus ' (2h: Rx = 0CH3, R2 = OH, R3 = R4 = H) 35 3'-N-(2-kloorietyyli)-41-deoksidoksorubisiini (6c: Ra = OCH3, R2 = OH, Rg = Cl, R3 = R4 =H) , joka valmistettiin • · « 108036 14 julkaisussa GB 9114549 kuvatulla tavalla, muutetaan otsikossa mainituksi yhdisteeksi 2h esimerkissä 1 kuvatulla tavalla.

TLC piihappogeelilevyt F254 (Merck), käyttäen eluointi-5 systeeminä metyleenikloridia ja asetonia (20:1, tilavuuksia) : Rf = 0,33.

FD-MS: rn/2 [M+] 553.

R~i r>1 ngi nsn aktiivisuus 10 3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-41-O-metaanisulfonyyli- daunorubisiini (la), 4-demetoksi-3'-deamino-3'-l-[atsiridinyyli]-4'-O-metaan-misulfonyyli-daunorubisiini (Ib), 31-deamino-3'-[1-atsiridinyyli J-4'-O-metaanisulfonyyli-15 14-nikotinaatti-doksorubisiini (2a) ja 3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-4’-O-metaanisulfonyyli-doksorubisiini (2c) testattiin in vitro kahdella ihmisen solulinjalla, LoVo (paksunsuolen rauhassyöpä = colon adenocarcinoma) ja LoVo/DX (paksunsuolen rauhassyöpä, joka 20 resistentti doksorubisiinille), vertailuna käytettiin doksorubisiinia.

Sytotoksinen aktiivisuus ilmoitetaan IC50-arvona, joka on 50%:isesti pesäkkeen muodostumisen estävä konsentraatio, 25 jonka arvo laskettiin konsentraatiota vastaavilta käyriltä. Resistenssi-indeksi R.I. on resistenteillä soluilla saadun IC50-arvon suhde sensitiivisillä soluilla saatuun IC50-arvoon. Yhdisteillä la, Ib, 2a ja 2c havaittiin korkea aktiivisuus molemmilla solulinjoilla ja alhainen 30 resistenssi-indeksi (taulukko I).

Yhdisteet la, Ib, 2a ja 2c arvioitiin myös in vivo hiiren « · P388-leukemiaa vastaan, joka on resistentti doksorubisiinille (105 solua/hiiri siirrostettiin i.v. BD2FI-hiiriin), 35 käyttäen vertailuna doksorubisiinia.

• · V

15 108036

Yhdisteillä la, Ib, 2a ja 2c oli myös hätkähdyttävästi-korkeampi aktiivisuus kiiin doksorubisiinilla (taulukko II) .

5 TAULUKKO 1

Yhdisteiden la, Ib, 2a ja 2c in vitro sytotoksinen aktiivisuus (IC50) LoVo- ja LoVo/DX-soluilla verrattuna dokso-rubisiiniin.

10 IC50(ng/ml)(1)

Yhdiste LoVo LoVo/DX R.I.(2) la 13 22 1,7

Ib 27 26 0,9 15 2a 14 40 2,9 2c 2,7 24 9,2 doksorubisiini 82,5 4975 60,3

Pesäkekoe: 4 tunnin käsittely 20 t:) ic50 = konsentraatio, joka estää 50%:isesti pe säkkeen muodostumisen (2) R.I. = resistenssi-indeksi = (ICS0LoVo/DX) / (IC50LoVo) .

25 1 • · « · · 16 108036

TAULUKKO II

Yhdisteiden la, Ib, 2a ja 2c antituumorinen aktiivisuus P388/DX-leukemialla verrattuna doksorubisiiniin.

5

Yhdiste O.D.(1) T/C(2) (mg/kg) % la 2,2 190

Ib 3,8 240 2a 2,5 200 10 2C 1,8 195 doksorubisiini 16,9 106

Yhdisteet suspendoitiin Tween 80:een (10%:inen) ja injektoitiin i.v.:sti yksi päivä tuumoritransplan-15 taation jälkeen.

(1) Optimaalinen annos.

(2) Käsiteltyjen hiirten keskimääräinen elinaika/ kontrollien keskimääräinen elinaika x 100.

20 > 1 2 2 ·

Claims

1 NH 15 jossa Rlf R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä ja R9 tarkoittaa sulfonaattiryhmää tai halogeeniatomia, muutetaan kaavan 1 mukaiseksi antrasykliiniglykosidiksi ja näin saatu kaavan 1 mukainen antrasykliiniglykosidi muutetaan haluttaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi 20 suolakseen; tai (2) yleisen kaavan 4 mukainen antrasykliiniglykosidi käsitellään piihappogeelillä kaavan 1 mukaisen antrasyk-liiniglykosidin saamiseksi, ja näin saatu kaavan 1 mukai- - - 25 nen antrasykliiniglykosidi muutetaan haluttaessa far maseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen; tai (3) kaavan 2 mukaisen antrasykliiniglykosidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi y- 30 leisen kaavan 6 mukainen antrasykliiniglykosidi ” O OH O ^ I I JJ^OH

35 J (I T £ R1 O OH O 1¾ 19 108036 jossa Rlr R2/ R3, R4 ja R9.tarkoittavat samaa kuin edellä, käsitellään piihappogeelillä, ja näin saatu kaavan 2 mukainen antrasykliiniglykosidi muutetaan haluttaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen; tai 5 (4) kaavan 5 mukainen johdannainen O OH O 10 R1 O OH O ^L> jossa RX/ R3 ja R4 tarkoittavat samaa kuin edellä, hydro-20 lysoidaan edellä määritellyn kaavan 2 mukaisen antrasyk-liiniglykosidin, jossa R2 on hydroksiryhmä, saamiseksi tai edellä määritelty kaavan 5 mukainen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan 3' mukaisen suolajohdannaisen kanssa ... 25 X+"OCOR5 (3 · ) jossa R5 tarkoittaa samaa kuin edellä sillä edellytyksellä, että R5 ei tarkoita primaarisen aminoryhmän sisältävää 30 tähdettä, ja X* tarkoittaa ionia, ja näin saatu kaavan 2 . mukainen antrasykliiniglykosidi muutetaan haluttaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suolakseen, tai edellä määritellyn kaavan 5 mukainen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan 3' mukaisen suolajohdannaisen, joka sisäl-35 tää happosensitiivisellä suojaryhmällä suojatun primaarisen aminoryhmän kanssa, jonka jälkeen aminosuojaryhmä . poistetaan ja näin saatu kaavan 2 mukainen antrasykliini- 20 108036 glykosidi muutetaan haluttaessa farmaseuttisesti hyväksyttäväksi suoIäkseen; tai (5) kaavan 2 mukaisen antrasykliiniglykosidin tai sen 5 farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, jossa R2 on kaavan 3 mukainen ryhmä, jossa R5 ei tarkoita primaarisen amino-ryhmän sisältävää tähdettä, valmistamiseksi edellä määritelty kaavan 5 mukainen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan 3* mukaisen suolajohdannaisen kanssa vedettömässä, 10 polaarisessa liuottimessa lämpötilassa, joka on 20 °C:sta 60 °C:seen, reaktioajan ollessa 4 tunnista 15 tuntiin; tai (6) kaavan 2 mukaisen antrasykliiniglykosidin tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan, jossa R2 tarkoittaa 15 kaavan 3 mukaista, primaarisen aminoryhmän sisältävää ryhmää, valmistamiseksi edellä määritelty kaavan 5 mukainen johdannainen saatetaan reagoimaan kaavan 3' mukaisen happosuolajohdannaisen, jossa aminoryhmä on suojattu hap-posensitiivisellä ryhmällä, kanssa polaarisessa aprootti-20 sessa liuottimessa lämpötilassa, joka on 20 °C:sta 60 °C;seen, 4 tunnista 15 tuntiin, jonka jälkeen muodostuneesta (N-suojatusta)-esterijohdannaisesta poistetaan suojaus liuottamalla se orgaaniseen liuottimeen ja lisäämällä tislattua vettä ja vesipitoista kloorivetyhappoa 25 sekoittaen lämpötilassa, joka on 0 °C:sta 2 0 °C:seen, 30 minuutista kahteen tuntiin, minkä jälkeen erotetaan ja jäädytyskuivataan vesipitoinen faasi, jolloin saadaan kaavan 2 mukaisen vastaavan C-14-esterijohdannaisen liukoinen ammoniumhydrokloridisuola. 30 ·*.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa R5 on fenyyli.

1. Menetelmä kaavan l tai 2 mukaisen antituumorisesti aktiivisen antrasykliiniglykosidin 5 O OH O O OH O

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu 35 siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa R5 on pyridyyli. • % ' f 21 108036 I ...

4. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, ! tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa R8 on ' metyyli, etyyli, n-propyyli tai isopropyyli.

’ 5 5. Jonkin patenttivaatimuksen 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jossa R8 on fenyyliryhmä, joka on substituoimaton tai substituoitu l-3 substituentilla, joista jokainen voi olla toisistaan riippumatta lineaarinen tai haarautunut, 1-3 hiiliatomia 10 sisältävä alkyyli- tai alkoksiryhmä.

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan 3*-deamino-31-[1-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulfonyyli-15 daunorubisiini; 4-demetoksi-3·-deamino-3’-[l-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulf onyy 1 i -daunorubi s i in i ; 31-deamino-31-[1-atsiridinyyli]-daunorubisiini; 4-demetoksi-3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-daunorubisii-20 ni; 3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulfonyyli-14-nikotinaatti-doksorubisiini; 3'-deamino-31-[1-atsiridinyyli]-14-nikotinaatti-doksoru-bisiini; 25 3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulfonyyli- doksorubisiini; 4-demetoksi-3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-4'-O-metaanisulf onyyli-doksorubisiini ; 3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-doksorubisiini; 30 4-demetoksi-3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-doksorubisii- ·« ni; 3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-4'-jodidoksorubisiini; 3'-deamino-3'-[1-atsiridinyyli]-4'-deoksidoksorubisiini.

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan « 22 108036 3 1-deamino-3 '-[l-atsiridinyyli]-4 '-0-metaanisulfonyyli-daunorubisiini; 4-demetoksi-3 '-deamino-3 '-[l-atsiridinyyli]-4 '-O-metaani-sulfonyyli-daunorubisiini tai 5 3'-deamino-31-[1-atsiridinyyli]-4'-O—metaanisulfonyyli- 14-nikotinaatti-doksorubisiini.

8. Minkä tahansa edellä esitetyn patenttivaatimuksen mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että yhdiste valmisteli) taan hydrokloridisuolansa muodossa.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että menetelmävaihtoehto (1) suoritetaan vedettömässä orgaanisessa liuottimessa vedettömän alkalisuolan 15 ja heikon emäksen läsnäollessa.

10. Patenttivaatimuksen 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vedetön orgaaninen liuotin on vedetön mety-leenikloridi. 20

10. OH O R1 o OH o 15 joissa kaavoissa Rx on vety tai metoksiryhmä, R2 on hyd-roksiryhmä tai se tarkoittaa kaavan 3 mukaista asyyliok-sitähdettä -0-C0R5 (3) 20 jossa R5 on lineaarinen tai haarautunut Cj-Cg-alkyyli, mono- tai bisyklinen aryyliryhmä tai mono- tai bisyklinen heterorengas, joista jokainen voi olla substituoitu (a) aminoryhmällä -NR6R7, jossa R6 ja R7 ovat toisistaan . . 25 riippumatta vety tai C^-C^-alkyyli tai (b) karboksiryhmällä, R3 ja R4 tarkoittavat kumpikin vetyä tai toinen ryhmistä R3 ja R4 on vety ja toinen on hydroksiryhmä tai kaavan -OS02R8 mukainen ryhmä, jossa R8 voi olla lineaarinen tai 30 haarautunut, 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyliryhmä tai - ··« aryyliryhmä, joka on substituoimaton tai substituoitu 1-3 substituentilia, joista jokainen voi toisistaan riippumatta olla lineaarinen tai haarautunut, 1-6 hiiliatomia sisältävä alkyyli- tai alkoksiryhmä, halogeeniatomi tai 35 nitroryhmä, tai sen farmaseuttisesti hyväksyttävän suolan valmistamiseksi, tunnettu siitä, että • 18 108036 (1) yleisen kaavan 4 mukainen antrasykliiniglykosidi

0 OH O Il 11 !1 I 7oh R1 O OH o 10

11. Patenttivaatimuksen 9 tai 10 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vedetön alkalisuola on vedetön natrium-tai kaliumkarbonaatti tai -vetykarbonaatti.

12. Minkä tahansa patenttivaatimuksen 9-11 mukainen mene telmä, tunnettu siitä, että menetelmävaihtoehto (1) suoritetaan lämpötilassa, joka on 0 °C:sta 30 °C:seen, ja reaktioaika on 15 minuutista 2 tuntiin.

13. Patenttivaatimuksen 1 menetelmävaihtoehtojen (2) tai ..t (3) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan 4 mukainen yhdiste liuotetaan vedettömään polaariseen orgaaniseen liuottimeen, joka on kuiva metyleenikloridi, metanoli tai näiden seos. 35 23 108036

14. Patenttivaatimuksen 13 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että liuotin on kuivan metyleenikloridin ja «»etanolin seos alkaen l:l:stä l:3:een (til./til.).

15. Jonkin patenttivaatimuksen 1 menetelmävaihtoehdon (2) tai (3) tai patenttivaatimuksen 13-14 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että se suoritetaan sekoittamalla lämpötilassa, joka on 0 °C:sta 30 °C:seen, reaktioajan ollessa 15 minuutista kahteen tuntiin. 10

16. Jonkin patenttivaatimuksen 1 menetelmävaihtoehdon (2) tai (3) tai patenttivaatimuksen 13-15 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että piihappogeelin hiukkaset ovat kooltaan 230-400 mesh. 15

17. Patenttivaatimuksen 1 menetelmävaihtoehdon 4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että X+ on natrium- tai kalium-ioni.

17 108036

18. Patenttivaatimuksen 1 menetelmävaihtoehdon 5 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että vedetön polaarinen liuotin on asetoni tai dimetyyliformamidi.

19. Patenttivaatimuksen 1 menetelmävaihtoehdon 6 mukainen 25 menetelmä, tunnettu siitä, että happosensitiivinen ryhmä on metyleenidifenyyli ja suojauksen poistovaiheessa käytetty orgaaninen liuotin on metyleenikloridi.

20. Patenttivaatimuksen 1 menetelmävaihtoehdon (6) tai 30 patenttivaatimuksen 19 mukainen menetelmä, tunnettu sii- . .. tä, että polaarinen aproottinen liuotin on asetoni tai dimetyyliformamidi. • < 24 1 08036