ES2998885T3 - Haloallylamine compounds and application thereof - Google Patents
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Abstract
La presente invención se refiere al campo técnico de la medicina. Específicamente, la presente invención se refiere a compuestos de haloalilamina representados por la fórmula (I) o sales, ésteres, estereoisómeros y tautómeros farmacéuticamente aceptables de los mismos, y preparaciones farmacéuticas y composiciones farmacéuticas que contienen estos compuestos, así como a su aplicación en la prevención y/o tratamiento de enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1, en donde R1, R2, R3, R4, R5, R6, L1 y Cy1 se definen en la especificación. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)
Description
DESCRIPCIÓN
Compuestos de haloalilamina y aplicación de los mismos
Campo técnico
La presente invención pertenece al campo técnico de los productos farmacéuticos. Específicamente, la presente invención se refiere a un compuesto de haloalilamina o una sal farmacéuticamente aceptable, un éster, un estereoisómero o un tautómero del mismo, a una formulación farmacéutica y una composición farmacéutica que comprende los compuestos, y al uso en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1.
Antecedentes
Como una clase de amina oxidasas particularmente sensibles a la semicarbazida, la amina oxidasa sensible a la semicarbazida (SSAO) se encuentra ampliamente distribuida in vivo, así como en las membranas celulares y en el plasma. En las células endoteliales, la SSAO existe en forma de proteína de adhesión vascular 1 (VAP-1). En la actualidad, se cree que la principal función fisiológica in vivo de la SSAO es participar en el metabolismo de las aminas, catalizar la desaminación oxidativa de aminas primarias de cadena corta (como metilamina, aminoacetona y similares) y generar los correspondientes aldehídos, peróxido de hidrógeno y amoníaco. La estructura de la SSAO contiene un ion cobre bivalente, con un grupo quinonilo como coenzima. La SSAO no tiene un sustrato específico y sus sustratos principales son las aminas primarias alifáticas y aromáticas.
El documento WO2013163675A1 divulga un derivado de 3-haloalilamina como inhibidor de la SSAO/VAP-1 (que se muestra como fórmula I) que tiene actividad inhibidora sobre la enzima SSAO/VAP-1 y divulga específicamente un compuesto 23, también denominado PXS-4728, cuya estructura es tal como sigue:
En la actualidad, todavía no se ha introducido ningún inhibidor de la SSAO/VAP-1. El inhibidor de la SSAO/VAP-1 de la presente invención puede usarse para aliviar eficazmente los síntomas y las lesiones en situaciones de falta de equilibrio de una variedad de enfermedades que están relacionadas con la sobreexpresión de SSAO/VAP-1, etc., por lo que tiene una gran perspectiva de aplicación.
Resumen de la invención
En vista del objeto en la técnica mencionado anteriormente, el inventor llevó a cabo un estudio en profundidad y, como resultado, desarrolló un novedoso compuesto de haloalilamina (a continuación en el presente documento, también denominado a veces “el compuesto de la presente invención”) o una sal farmacéuticamente aceptable, un éster, un estereoisómero o un tautómero del mismo como inhibidor de la SSAO/VAP-1. Un compuesto inhibidor de este tipo muestra una excelente actividad inhibidora sobre la proteína SSAO/VAP-1, por lo que puede usarse para prevenir y/o tratar enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1.
Además, el compuesto inhibidor de la SSAO/VAP-1 de la presente invención muestra una excelente inhibición de la proteína SSAO/VAP-1 y una excelente selectividad contra la proteína rhAOC1 y la proteína MAO, evitando de este modo otros efectos secundarios innecesarios al mismo tiempo que previene y/o trata enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1.
Además, en comparación con los fármacos existentes, el compuesto inhibidor de la SSAO/VAP-1 de la presente invención apenas puede penetrar en la barrera hematoencefálica, por lo que el compuesto de la presente invención tiene un muy bajo riesgo de toxicidad en el sistema nervioso, mostrando una excelente seguridad farmacológica. Específicamente, la presente invención proporciona las siguientes soluciones técnicas.
Solución 1. Un compuesto de la fórmula I,
en donde Ri y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno;
R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6 o forman un heterociclo de 5-10 miembros que contiene nitrógeno opcionalmente sustituido con un sustituyente junto con un átomo de N unido a los mismos;
R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
L1 está ausente o es -CR'R''-, -N-, -O-, -S-, -SO2-, S(O), -SONR'-, -SO2NR'- o -NR'CONR'-, y R' y R'' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-1), (A-2), (A-3) o (a):
(a ) ;
m es un número entero de desde 0 hasta 3;
Y1, Y2, Y3 e Y4 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, NH, O, S y C=O;
X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N;
cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1.6, alcoxi C1-6-alquilo C1.6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1.6, alquiltio C1-6, alquilo C1.6, alquilamino C1.6, (alquil C1-6)2amino, alquilamino C1-6-alquilo C1.6, alquilaminocarbonilo C1.6, alquilaminocarbonil C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilamino C1-6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1-6, (alquil C1-6)2amino-alquilo C1.6, alquilcarbonilo C1.6, alquilcarbonil C1-6-alquilo C1-6, alquilaminosulfonilo C1.6, alquilaminosulfonil
C1-6-alquilo C1.6, alquilsulfonilamino C1.6, alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilsulfonilo C1.6, alquilsulfonil C1-6-alquilo C1.6, Cy2-, Cy2-alquilo C1.6, Cy2-alcoxilo C1.6, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más Rb,
Cy2 es un cicloalquilo de 3-12 miembros, cicloalquenilo de 3-12 miembros, heterociclilo de 3-12 miembros, arilo o heteroarilo de 5-14 miembros;
cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1-6, alquilamino
C1-6, (alquil C1-6)2amino, alquilaminocarbonilo C1-6, alquilcarbonilamino C1.6, alquilcarbonilo C1.6, alquilaminosulfonilo
C1.6, alquilsulfonilamino C1-6 y alquilsulfonilo C1.6;
= representa un enlace sencillo o un doble enlace; y
representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo,
o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un tautómero del mismo.
Solución 2. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según la solución 1,
en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno;
R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6 o forman un heterociclo de 5-10 miembros que contiene nitrógeno opcionalmente sustituido con un sustituyente junto con un átomo de N unido a los mismos;
R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
L1 está ausente o es -CR'R"-, -N-, -O-, -S-, -SO2-, S(O), -SONR'-, -SO2NR'- o -NR'CONR'-, y R' y R'' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-1), (A-2), (A-3) o (a) a continuación:
m es un número entero de desde 0 hasta 3;
Y1, Y2, Y3 e Y4 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, NH, O, S y C=O;
X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N;
cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1-6, alquiltio C1-6-alquilo C1-6, alquilamino C1-6, (alquil C1-6)2amino, alquilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilaminocarbonilo C1-6, alquilaminocarbonil C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilamino C1-6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1-6, (alquil C1-6)2amino-alquilo C1.6, alquilcarbonilo C1-6, alquilcarbonil C1-6-alquilo C1.6, alquilaminosulfonilo C1.6, alquilaminosulfonil C1-6-alquilo C1.6, alquilsulfonilamino C1-6, alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1.6, alquilsulfonilo C1.6, alquilsulfonil C1.6alquilo C1-6, Cy2-, Cy2-alquilo C1-6, Cy2-alcoxilo C1-6, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más Rb,
Cy2 es un cicloalquilo de 3-12 miembros, cicloalquenilo de 3-12 miembros, heterociclilo de 3-12 miembros, arilo o heteroarilo de 5-14 miembros;
cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1.6, alcoxi C â-alquilo C1.6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1.6, alquiltio C1.6, alqui C1.6, (alquil C1-6)2amino, alquilaminocarbonilo C1.6, alquilcarbonilamino C1.6, alquilcarbonilo C1.6, alquilaminosulfonilo
C1.6, alquilsulfonilamino C1-6 y alquilsulfonilo C1.6;
= representa un enlace sencillo o un doble enlace; y
representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo.
Solución 3. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según
la solución 2,
en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno;
R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
L1 está ausente, o es -CR'R"-, -N-, -O- o -S-, y R' y R'' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y
alquilo C1-6;
Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-1), (A-2), (A-3) o (a) a continuación:
m es un número entero de desde 0 hasta 3;
Y1, Y2, Y3 e Y4 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, NH y C=O;
X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de X1, X2 y X3
es N;
cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alcoxilo C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1.6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1.6, alquiltio C1-6-alquilo C1.6, alquilamino C1.6, alquilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilaminocarbonilo C1.6, alquilaminocarbonil C1-6-alquilo C1.6, alquilcarbonilamino C1.6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1.6, alquilcarbonil C1-6-alquilo C1.6, Cy2, Cy2-alquilo C1.6, Cy2-alcoxilo C1-6, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb,
Cy2 es un cicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclilo de 5-10 miembros, fenilo o heteroarilo de 5-10 miembros;
cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo C1-6, alcoxilo
C1-6, alcoxi C i-6-alquilo C1-6, alcoxi C i-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1-6, alquilamino C1-6, alquilaminocarbonilo C1-6, alquilcarbonilamino C i-6 y alquilcarbonilo Ci-e;
y
representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo.
Solución 4. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el éster, el estereoisómero o el tautómero del mismo según las soluciones 2 o 3,
en donde Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-11), (a-1) o (a-2) a continuación:
m es un número entero que es 1 o 2;
Y1, Y2 e Y3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH y NH;
X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N;
y
representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo.
Solución 5. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según la reivindicación 4,
en donde Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-11) o (a-1) a continuación:
m es un número entero que es 1 o 2;
Y2 e Y3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH y NH;
X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N y NH, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N; y
representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo.
Solución 6. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según la solución 5,
en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno;
R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
L1 está ausente;
Cy1 es uno de los siguientes grupos no sustituidos o sustituidos con uno o más Ra:
cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alcoxilo C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquilamino C1-6, alquilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilaminocarbonilo C1.6, alquilaminocarbonil C1-6-alquilo C1.6, alquilcarbonilamino C1.6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1.6, alquilcarbonilo C1-6, alquilcarbonil C1-6-alquilo C1.6, Cy2, Cy2- alquilo C1.6, Cy2-alcoxilo C1.6, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb,
Cy2 es un cicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclilo de 5-10 miembros, fenilo o heteroarilo de 5-10 miembros; cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo C1-6, alcoxilo C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1.6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1.6, alquiltio C1.6, alquilamino C1.6, alquilaminocarbonilo C1.6, alquilcarbonilamino C1-6 y alquilcarbonilo C1-6;
representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo; y
preferiblemente, Cy2 es cicloalquilo de 3-6 miembros, heterociclilo de 5-6 miembros, fenilo o heteroarilo de 5-6 miembros.
Solución 7. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según la solución 1,
en donde Cy1 es uno de los siguientes grupos no sustituidos o sustituidos con uno o más Ra:
Solución 8. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según la solución 7,
en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y flúor, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno;
R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6;
R5 y R6 son hidrógeno;
L1 está ausente;
Cyi es uno de los siguientes grupos no sustituidos o sustituidos con uno o más sustituyentes Ra
cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alcoxilo C1-6, alquilaminocarbonilo C1-6, Cy2, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb,
Cy2 es un cicloalquilo de 3-6 miembros, heterociclilo de 5-6 miembros, fenilo o heteroarilo de 5-6 miembros; cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo C1-6 y alcoxilo C1-6;
preferiblemente, Cy1 es uno de los siguientes grupos sustituidos con uno o más sustituyentes Ra:
preferiblemente, cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6 o cicloalquilo de 3-6 miembros no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb; y preferiblemente, cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, ciano, nitro y halógeno.
Solución 9. El compuesto, o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según la solución 1, en donde el compuesto se selecciona de:
Solución 10. Una composición farmacéutica que comprende el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según una cualquiera de las soluciones 1-9, en donde la composición farmacéutica comprende opcionalmente uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
Solución 11. La composición farmacéutica según la solución 10, que se utiliza para prevenir y/o tratar una enfermedad relacionada con o mediada por la proteína SSAO/VAP-1.
Efecto de la invención
La presente invención proporciona un novedoso compuesto de haloalilamina, que es eficaz para prevenir y/o tratar enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1. Específicamente, el compuesto que se muestra como fórmula I y su sal farmacéuticamente aceptable, éster, estereoisómero o tautómero de la presente invención muestran una excelente actividad inhibidora frente a la proteína SSAO/VAP-1 y, por lo tanto, pueden usarse para prevenir y/o tratar enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína s Sa O/VAP-1.
Además, el compuesto de la presente invención muestra una excelente inhibición de la proteína SSAO/VAP-1 y una excelente selectividad frente a la proteína rhAOC1 y la proteína MAO. Por lo tanto, el compuesto de la presente invención evita otros efectos secundarios no deseados al mismo tiempo que previene y/o trata enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1.
Además, en comparación con los fármacos existentes, el compuesto de la presente invención apenas puede penetrar en la barrera hematoencefálica. Por lo tanto, el compuesto de la presente invención tiene un muy bajo riesgo de toxicidad en el sistema nervioso, mostrando una excelente seguridad farmacológica.
Por lo tanto, la presente invención puede proporcionar un compuesto altamente seguro o una sal farmacéuticamente aceptable, un éster, un estereoisómero o un tautómero del mismo que puede prevenir y/o tratar enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1.
Descripción detallada de la invención
Las realizaciones de la presente invención se describirán con más detalle junto con las implementaciones específicas a continuación, pero los expertos en la técnica entenderán que las implementaciones específicas descritas a continuación solo se usan para ilustrar la presente invención y no deben considerarse limitantes del alcance de protección de la presente invención. Por el contrario, se pretende que la presente invención abarque todas las alternativas, modificaciones y equivalencias que puedan incluirse en el alcance de la invención, tal como se define en las reivindicaciones. A menos que se especifique lo contrario, las diversas realizaciones de la presente invención pueden combinarse de cualquier manera, y las conversiones, modificaciones y los cambios de las soluciones técnicas así obtenidas también se incluyen en el alcance de la presente invención.
Definiciones
En la presente invención, la expresión “grupo Ca-b” (a y b representan un número entero > 1, y a < b) significa que el “grupo” presenta de a hasta b átomos de carbono, por ejemplo, alquilo C1-6 representa alquilo con 1-6 átomos de carbono, alcoxilo C1-6 representa alcoxilo con 1-6 átomos de carbono, cicloalquilo C3-8 representa cicloalquilo con 3-8 átomos de carbono, y alcoxi C1-6-alquilo C1-6 representa un grupo formado por la unión de alcoxilo que tiene 1-6 átomos de carbono con alquilo que tiene 1-6 átomos de carbono. Además, en la presente invención, la expresión “grupo” también puede referirse a un grupo que contiene dos o más subgrupos y, en este punto, la expresión “Ca-b” define el número de átomos de carbono de todo el grupo que contiene los dos o más subgrupos. Por ejemplo, la expresión “alquilarilo C7-12” significa que el número total de átomos de carbono de un grupo alquilarilo que comprende un resto alquilo y un resto arilo es de 7-10, es decir, puede descomponerse, entre otros, en alquilfenilo C1-6 o alquilnaftilo C1-2.
En la presente invención, “grupo” representa un grupo monovalente o un grupo divalente o superior que cumple la valencia según se requiere. Por ejemplo, “cicloalquilo” (también expresado como grupo cicloalquilo) incluye un grupo monovalente obtenido mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de cicloalcano, así como un grupo divalente o superior obtenido mediante eliminación de dos o más átomos de hidrógeno a partir del mismo átomo de carbono o dos o más átomos de carbono diferentes de cicloalcano. Por ejemplo, cuando “cicloalquilo” sirve como grupo terminal, está unido a otras partes de la estructura del compuesto en forma de un grupo monovalente cuando no porta sustituyentes; cuando porta sustituyentes, cicloalquilo muestra un número de valencia correspondiente (número de sustituyente 1) según el número de sustituyentes portados. Los expertos en la técnica pueden determinar sin ambigüedades la valencia de un “grupo”. Además, en la presente invención, si un “grupo” representa un grupo divalente o superior, se prefiere unir estos enlaces a diferentes átomos (tales como, pero sin limitarse a, átomos de carbono, átomos de nitrógeno, etc.) del grupo.
El “halógeno” o “átomo de halógeno” descrito en la presente invención se refiere a flúor, cloro, bromo y yodo, preferiblemente flúor y cloro.
El “alquilo C1-6” descrito en la presente invención se refiere a un grupo alquilo lineal o ramificado derivado mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un resto alcano que contiene de 1 a 6 átomos de carbono e incluye alquilo C1-6 lineal y alquilo C1-6 ramificado. De hecho, los expertos en la técnica saben bien que alquilo C1-6 presenta al menos tres átomos de carbono cuando tiene una cadena ramificada (alquilo C1-6 ramificado). Los ejemplos de “alquilo C1-6” pueden incluir, por ejemplo, metilo, etilo, n-propilo, isopropilo, n-butilo, isobutilo, sec-butilo, terc-butilo, n-pentilo, isopentilo, 2-metilbutilo, neopentilo, 1 -etilpropilo, n-hexilo, isohexilo, 4-metilpentilo, 3-metilpentilo, 2-metilpentilo, 1 -metilpentilo, 3,3-dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,1 -dimetilbutilo, 1,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2,3-dimetilbutilo, 2-etilbutilo, 1-metil-2-metilpropilo, etc. El “alquilo C1-4” se refiere a los ejemplos mencionados anteriormente que contienen de 1 a 4 átomos de carbono.
El “alquenilo C2-6” descrito en la presente invención se refiere a un grupo alquenilo lineal o ramificado derivado mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un alqueno que contiene de 2 a 6 átomos de carbono y al menos un doble enlace carbono-carbono, por ejemplo, vinilo, 1-propenilo, 2-propenilo, 1 -butenilo, 2-butenilo, 1,3-butadien-1-ilo, 1-penten-3-ilo, 2-penten-1-ilo, 3-penten-1-ilo, 3-penten-2-ilo, 1,3-pentadien-1-ilo, 1,4-pentadien-3-ilo, 1-hexen-3-ilo, 1,4-hexadien-1-ilo, etc. Preferiblemente, el “alquenilo C2-6” contiene un doble enlace carbono-carbono.
El “alquinilo C2-6” descrito en la presente invención se refiere a un grupo alquinilo lineal o ramificado derivado mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un alquino que contiene de 2 a 6 átomos de carbono y al menos un triple enlace carbono-carbono, por ejemplo, etinilo, propinilo, 2-butin-1-ilo, 2-pentin-1-ilo, 3-pentin-1-ilo, 4-metil-2-pentin-1-ilo, 2-hexin-1-ilo, 3-hexin-2-ilo, 3-hexin-1-ilo, 3-hexin-2-ilo, etc. Preferiblemente, el “alquinilo C2-6” contiene un triple enlace carbono-carbono.
El “alcoxilo C1-6” descrito en la presente invención se refiere a un grupo derivado mediante la unión de “alquilo C1-6” definido anteriormente a otras partes de la fórmula estructural química a través de átomos de oxígeno, es decir, un grupo “Alquil C1-6-O-”, tales como grupos obtenidos mediante la unión de los grupos mencionados con respecto al grupo “alquilo CW mencionado anteriormente a -O-, incluyendo, pero no se limitan a, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, n-butoxi, terc-butoxi, n-pentiloxi, neopentiloxi, n-hexiloxi, etc. El “alcoxilo C1-4” se refiere a los ejemplos mencionados anteriormente que contienen de 1 a 4 átomos de carbono, es decir, un grupo “alquil C1-4-O-”.
“Alcoxi C1-6-alcoxilo CW se refiere a un grupo formado mediante sustitución de uno o más átomos de hidrógeno de alcoxilo C1-6 con alcoxilo C1-6.
“Alquilamino C1-6 (alquilamino C1-6)”, “(alquil C1-6)2amino”, “alquilcarbonilamino CW, “alquilaminocarbonilo C1-6”, “alquilcarbonilo CW, “alquilaminosulfonilo C w , “alquilsulfonilamino C1.6”, “alquilsulfonilo C1.6”, “alquiltio C1.6 (alquiltio C1-6)”, etc., descritos en la presente invención se refieren a grupos formados mediante unión de alquilo C1-6 respectivamente a grupos correspondientes, tales como -NH2, -CO-NH2-, -NH2-CO-, -CO-, -NH2SO2-, -SO2NH2-, -SO2- y -S-.
“Alcoxi C1-6-alquilo C1.6”, “alquiltio C1-6-alquilo CW, “alquilamino C1-6-alquilo C1.6”, “alquilaminocarbonil C^e-alquilo C1.
6”, “alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1.6”, “alquilcarbonil C1-6-alquilo C1.6”, “alquilaminosulfonil C1-6-alquilo C1.6”, “alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1.6”, “alquilsulfonil C1-6-alquilo C1.6”, etc., descritos en la presente invención se refieren a grupos formados mediante sustitución de uno o más átomos de hidrógeno de alquilo C1-6 con alcoxilo C1-6, alquiltio C1-6, alquilamino C1.6, alquilaminocarbonilo C1.6, alquilcarbonilamino C1-6, alquilcarbonilo C1.6, alquilaminosulfonilo C1.6, alquilsulfonilamino C1.6 y alquilsulfonilo C1-6.
El “anillo policíclico” de la presente invención se refiere a una estructura de sistema de múltiples anillos formada por dos o más estructuras de anillo unidas por un enlace ortocondensado, espiro o en puente. El anillo ortocondensado se refiere a una estructura policíclica formada por dos o más estructuras de anillo que comparten dos átomos del anillo adyacentes entre sí (es decir, que comparten un enlace). El anillo unido en puente se refiere a una estructura policíclica formada por dos o más estructuras de anillo que comparten dos átomos del anillo no adyacentes entre sí. El anillo espiro se refiere a una estructura policíclica formada por dos o más estructuras de anillo que comparten un átomo del anillo entre sí.
El “cicloalquilo” descrito en la presente invención se refiere a un grupo monovalente o un grupo bivalente (según sea necesario) derivado de cicloalcano, y el cicloalcano incluye cicloalcano monocíclico o cicloalcano policíclico y puede tener 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 átomos de carbono. A menos que se especifique lo contrario, un determinado cicloalquilo con miembros incluye todos los casos monocíclicos y policíclicos posiblemente formados (incluyendo los condensados en forma orto, espiro o en puente). El cicloalquilo puede ser un grupo monovalente, divalente o superior (según sea necesario) de 3-12 miembros, un grupo monovalente, divalente o superior (según sea necesario) de 3-10 miembros, un grupo monovalente, divalente o superior (según sea necesario) de 3-8 miembros, un grupo monovalente, divalente o superior (según sea necesario) de 3-6 miembros, un grupo monovalente, divalente o superior (según sea necesario) de 4-6 miembros, o un grupo monovalente, divalente o superior (según sea necesario) de 5-7 miembros.
El cicloalquilo monocíclico (monovalente, divalente o superior) puede ser cicloalquilo de 3-12 miembros, cicloalquilo de 3-10 miembros, cicloalquilo de 3-8 miembros, cicloalquilo de 3-6 miembros, cicloalquilo de 4-6 miembros o cicloalquilo de 5-7 miembros, ejemplos de los cuales incluyen, pero no se limitan a, ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, ciclopentil-1,3-diilo, ciclohexil-1,4-diilo, cicloheptil-1,4-diilo, etc.
El cicloalquilo policíclico (monovalente, divalente o superior) incluye cicloalquilo ortocondensado, cicloalquilo en puente y espirocicloalquilo.
El cicloalquilo ortocondensado (monovalente, divalente o superior) puede ser cicloalquilo ortocondensado de 6-12 miembros o cicloalquilo ortocondensado de 7-10 miembros, ejemplos de los cuales incluyen, pero no se limitan a, biciclo[3.1.1]heptilo, biciclo[2.2.1]heptilo, biciclo[2.2.2]octanilo, biciclo[3.2.2]nonilo, biciclo[3.3.1]nonilo y biciclo[4.2.1]nonilo.
El “cicloalquenilo” descrito en la presente invención se refiere a un grupo obtenido con al menos un doble enlace carbono-carbono (preferiblemente con un doble enlace carbono-carbono) en el grupo cicloalquilo mencionado anteriormente.
El “cicloalquilo” y el “cicloalquenilo” también pueden ser grupos monovalentes obtenidos mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un anillo espiro de 6-12 miembros o de un anillo espiro de 7-11 miembros o grupos divalentes (según sea necesario) obtenidos mediante eliminación de un átomo de hidrógeno cada uno a partir de
dos átomos de carbono diferentes. Los eem los de anillo es iro inclu en, ero no se limitan a:
El “cicloalquilo” y el “cicloalquenilo” también pueden ser grupos monovalentes obtenidos mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un anillo en puente de 6-12 miembros o de un anillo en puente de 7-11 miembros o grupos divalentes (según sea necesario) obtenidos mediante eliminación de un átomo de hidrógeno cada uno a
artir de dos átomos de carbono diferentes. Los eem los del anillo en puente incluyen, pero no se limitan a:
Por lo tanto, a menos que se especifique lo contrario, el “cicloalquenilo de 3-12 miembros” descrito en la presente invención incluye todos los casos monocíclicos y policíclicos posiblemente formados (incluyendo los condensados en forma orto, espiro o en puente). Es un grupo que tiene al menos un doble enlace carbono-carbono en el grupo cicloalquilo monovalente, divalente o superior (según sea necesario) de 3-12 miembros mencionado anteriormente. Por ejemplo, puede ser un grupo monovalente o bivalente derivado de cicloalquenilo de 3-8 miembros, espirocicloalquenilo de 7 a 11 miembros, cicloalquenilo ortocondensado de 7-11 miembros, cicloalquenilo en puente de 6 11 miembros o similares. Los ejemplos incluyen ciclobutenilo, ciclopentenilo, ciclohexenilo, 1,4-ciclohexadienilo, cicloheptenilo, 1,4-cicloheptadienilo, ciclooctenilo y 1,5-ciclooctadienilo.
El “heterocidilo” descrito en la presente invención se refiere a un grupo cíclico monovalente o bivalente no aromático formado mediante sustitución de al menos un átomo de carbono cíclico del cicloalquilo mencionado anteriormente con un heteroátomo seleccionado de O, S y N, preferiblemente sin o con un doble enlace carbono-carbono. Preferiblemente, es un heterociclilo obtenido mediante sustitución de los átomos de carbono que forman un anillo del alquilo que forma anillo mencionado anteriormente con de 1 a 3 heteroátomos seleccionados de O, S y N. Además, el heterociclilo descrito en la presente invención incluye, además, el caso en el que los átomos de carbono o los átomos de azufre como átomos que forman anillos están sustituidos con oxígeno o nitrógeno, por ejemplo, los átomos de carbono que forman anillos están sustituidos con C(=O), S(=O), S(=O)2 y S(=O)(=NH).
Específicamente, el “heterociclilo” de la presente invención puede ser un grupo con 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 y 12 átomos que forman anillos. Puede ser heterociclilo de 3-14 miembros, heterociclilo de 3-12 miembros, heterociclilo de 3-10 miembros, heterociclilo de 4-10 miembros, heterociclilo de 3-8 miembros, heterociclilo de 4-12 miembros, heterociclilo de 4-8 miembros, heterociclilo de 4-6 miembros o heterociclilo de 5-10 miembros.
Además, “heterociclilo” incluye además un sistema heterociclilo monocíclico monovalente, bivalente o superior (según sea necesario) o un sistema heterociclilo policíclico (también denominado sistema policíclico) monovalente, bivalente o superior (según sea necesario), e incluye un grupo heterociclilo saturado o insaturado y no es aromático en su conjunto. A menos que se indique lo contrario, incluye todos los casos monocíclicos, policíclicos posiblemente formados (incluyendo los condensados en forma orto, espiro o en puente), saturados e insaturados, y no es aromático en su conjunto.
El heterociclilo monocíclico monovalente, bivalente o superior (según sea necesario) puede ser heterociclilo de 3-14 miembros, heterociclilo de 3-12 miembros, heterociclilo de 3-10 miembros, heterociclilo de 4-10 miembros, heterociclilo de 3-8 miembros, heterociclilo de 4-12 miembros, heterociclilo de 4-8 miembros, heterociclilo de 4-6 miembros, heterociclilo de 5-10 miembros, heterociclilo saturado de 3-8 miembros, heterociclilo de 3-6 miembros, heterociclilo de 4-12 miembros, heterociclilo de 4-7 miembros, heterociclilo de 4-6 miembros, heterociclilo de 5-10 miembros, heterociclilo de 5-7 miembros, heterociclilo de 5-6 miembros, heterociclilo que contiene oxígeno de 5-6 miembros, heterociclilo que contiene nitrógeno de 5-6 miembros, heterociclilo saturado de 5-6 miembros, heterociclilo saturado de 5-7 miembros o similares, que puede ser saturado, parcialmente saturado o insaturado, pero no aromático. Sus ejemplos incluyen, pero no se limitan a: azaciclopropilo, 2H-azaciclopropilo, diazaciclopropilo, 3H-diazaciclopropilo, azetidinilo, 1,4-dioxaciclohexilo, 1,3-dioxaciclohexilo, 1,3-dioxaciclopentilo, 1.4- dioxaciclohexadienilo, tetrahidrofurilo, dihidropirrolilo, pirrolidinilo, imidazolidinilo, 4,5-dihidroimidazolilo, pirazolidinilo, 4,5-dihidropirazolilo, 2,5-dihidrotienilo, tetrahidrotienilo, 4,5-dihidrotiazolilo, piperidilo, piperazinilo, morfolinilo, hexahidropirimidinilo, hexahidropiridazinilo, 4,5-dihidroxazolilo, 4,5-dihidroisoxazolilo, 2,3-dihidroisoxazolilo, 2H-1,2-oxazinilo, 6H-1,3-oxazinilo, 4H-1,3-tiazinilo, 6H-1,3-tiazinilo, 2H-piranilo, 2H-piran-2-ona, 3.4- dihidro-2H-piranilo, 1,1-dioxotetrahidrotiapiranilo, 1,1 -dioxotetrahidrotienilo, 1 -imino-1-oxo-tetrahidrotiobutilciclilo, 1-imino-1-oxo-tetrahidrotienilo, 1-imino-1-oxo-hexahidrotiapiranilo, etc.
El heterociclilo policíclico monovalente, divalente o superior (según sea necesario) incluye heterociclilo ortocondensado, espiro-heterociclilo y heterociclilo en puente, que pueden ser saturados, parcialmente saturados o insaturados, pero no aromáticos.
El heterociclilo ortocondensado puede ser un heterociclilo ortocondensado de 6-12 miembros, un heterociclilo ortocondensado de 7-10 miembros, un ciclilo ortocondensado de 6-10 miembros, un heterociclilo ortocondensado saturado de 6-12 miembros, un heterociclilo ortocondensado saturado de 7-8 miembros o heterociclilo ortocondensado saturado de 8 miembros, y sus ejemplos incluyen, pero no se limitan a: 3-azabiciclo[3.1.0]hexilo, 3,6-diazabiciclo[3.2.0]heptilo, 3,8- diazabiciclo[4.2.0]octilo, 3,7-diazabiciclo[4.2.0]octilo, octahidropirrolo[3,4-c]pirrolilo, octahidropirrolo[3,4-6]pirrolilo, octahidropirrolo[3,4-6][1,4]oxazinilo, octahidro-1 H-pirrolo[3,4-c]piridilo, 2,3-dihidrobenzofuran-2-ilo, 2,3-dihidrobenzofuril-3-ilo, indolin-1-ilo, indolin-2-ilo, indolin-3-ilo, 2,3-dihidrobenzotiofen-2-ilo, octahidro-1 H-indolilo, octahidrobenzofurilo, octahidrociclopenta[c]pirrolilo, hexahidrociclopenta[c]furilo, 2,2-dioxohexahidrociclopenta[c]tienilo y 2-imino-2-oxo-octahidrociclopenta[c]tienilo.
El espiro-heterociclilo puede ser un grupo monovalente obtenido mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un anillo espiroheterocíclico de 6-12 miembros, un anillo espiroheterocíclico de 7-11 miembros, un anillo espiroheterocíclico saturado de 6-12 miembros o un anillo espiroheterocíclico saturado de 7 miembros, o un grupo bivalente (según sea necesario) obtenido mediante eliminación de un átomo de hidrógeno cada uno a partir de dos
El heterociclilo en puente puede ser un grupo monovalente obtenido mediante eliminación de un átomo de hidrógeno a partir de un anillo heterocíclico en puente de 6-12 miembros, un anillo heterocíclico en puente de 7-11 miembros, un anillo heterocíclico en puente saturado de 6-12 miembros o un anillo heterocíclico en puente saturado de 7-8 miembros, o un grupo bivalente (según sea necesario) obtenido mediante eliminación de un átomo de hidrógeno cada uno a partir de dos átomos de carbono diferentes, y los ejemplos del heterociclilo en puente incluyen, pero no
El “arilo” descrito en la presente invención se refiere a un grupo monovalente o un grupo bivalente o superior, según sea necesario, derivado de un hidrocarburo carbocíclico aromático, y el hidrocarburo carbocíclico aromático incluye un hidrocarburo monocíclico aromático de 6-8 miembros y un hidrocarburo policíclico aromático de 8-14 miembros. El arilo monocíclico de 6-8 miembros es, por ejemplo, fenilo. El arilo policíclico de 8-14 miembros es, por ejemplo, naftilo, fenantrilo, antrilo y similares. El arilo divalente puede incluir, por ejemplo, fenileno, naftileno y similares.
El “heteroarilo” descrito en la presente invención puede ser heteroarilo de 5-14 miembros, heteroarilo de 5-10 miembros o heteroarilo de 5-6 miembros, y se refiere a un grupo cíclico aromático monovalente o divalente con 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 o 14 átomos que forman anillos que tiene al menos un heteroátomo seleccionado de O, S y N. Preferiblemente, tiene de 1 a 3 heteroátomos que forman anillos. Además, el heteroarilo incluye además el caso en el que los átomos de carbono o átomos de azufre como átomos que forman anillos están sustituidos con oxígeno o nitrógeno, tal como el caso en el que los átomos de carbono están sustituidos con C(=O), S(=O), S(=O)2 y S(=O)(=NH). El anillo heteroaromático descrito en la presente invención puede ser un sistema monocíclico o un sistema policíclico (condensado en forma orto, espiro o en puente). El heteroarilo incluye heteroarilo monocíclico y heteroarilo policíclico. A menos que se especifique lo contrario, un determinado heteroarilo con miembros incluye todos los casos monocíclicos, policíclicos, completamente aromáticos y parcialmente aromáticos, posiblemente formados. El heteroarilo monocíclico puede ser, por ejemplo, heteroarilo de 5-7 miembros o heteroarilo de 5-6 miembros, ejemplos de los cuales incluyen, pero no se limitan a, furilo, imidazolilo, isoxazolilo, tiazolilo, isotiazolilo, oxadiazolilo, oxazolilo, isoxazolilo, piridilo, piridonilo, piridazinilo, pirimidinilo, pirazinilo, pirazolilo, pirrolilo, tetrazolilo, tiadiazolilo, tiazolilo, tienilo, triazolilo y triazinilo. El heteroarilo policíclico puede ser heteroarilo ortocondensado de 8 12 miembros o heteroarilo ortocondensado de 9-10 miembros, ejemplos de los cuales incluyen, pero no se limitan a, bencimidazolilo, benzofurilo, isobenzofurilo, benzotienilo, benzooxadiazolilo, benzotiazolilo, cinnolinilo, indazolilo, indolilo, isoindolilo, isoquinolinilo, naftiridinilo, purinilo, quinolinilo, quinoxalinilo y quinazolinilo. El heteroarilo también puede ser un grupo divalente derivado de los grupos anteriores.
En la presente invención, “heteroátomo” significa un átomo seleccionado de S, O y N. Además, en algunos casos, también se incluyen los casos en los que S u O se oxidan o nitruran.
El “anillo de 3-6 miembros”, “anillo de 3-8 miembros”, “anillo de 4-6 miembros” y “anillos de 4-7 miembros” descritos en la presente invención se refieren a estructuras de anillo químicamente factibles con 3-6 átomos del anillo, 3-8 átomos del anillo, 4-6 átomos del anillo y 4-7 átomos del anillo; los átomos del anillo pueden seleccionarse opcionalmente de C, N, O, S, C(=O), S(=O), S(=O)2 y S(=O)(=NH), y las estructuras de anillo formadas pueden ser monocíclicas, policíclicas condensadas, saturadas, parcialmente saturadas o aromáticas. Específicamente, los ejemplos pueden ser los grupos mencionados anteriormente enumerados como cicloalquilo, cicloalquenilo, heterociclilo, arilo y heteroarilo.
En la presente invención, el término “opcionalmente sustituido” u “opcionalmente sustituido con” significa que cualquier parte del resto que los expertos en la técnica saben que está disponible para estar sustituida puede no estar sustituida o estar sustituida con un sustituyente descrito en la presente invención, en el que si uno o más sustituyentes están presentes, cada sustituyente puede seleccionarse independientemente. En cuanto a la sustitución, el número de sustituyentes se determina según el número de posiciones que pueden sustituirse en un grupo sustituido, y puede haber 1 sustitución, 2 sustituciones, 3 sustituciones, 4 sustituciones, 5 sustituciones, 6 sustituciones, 7 sustituciones, 8 sustituciones o más siempre que no se supere el número de posiciones que pueden sustituirse en el grupo sustituido. Cuando existan sustituyentes, “uno o más” sustituyentes indican que está presente no menos de un sustituyente, y el número específico de sustituyentes varía según el grupo sustituido, y puede haber 1 sustitución, 2 sustituciones, 3 sustituciones, 4 sustituciones, 5 sustituciones, 6 sustituciones, 7 sustituciones, 8 sustituciones o más siempre que no se supere el número de posiciones que pueden sustituirse en el grupo sustituido.
En la presente invención, “opcionalmente sustituido” añadido antes de un grupo u “opcionalmente sustituido con” añadido después de un grupo indica que todos los subgrupos del grupo pueden estar opcionalmente sustituidos. Por ejemplo, para “alquilarilo C7-12 opcionalmente sustituido con halógeno”, el resto alquilo puede estar sustituido con halógeno, el resto arilo puede estar sustituido con halógeno, o tanto el resto alquilo como el resto arilo pueden estar sustituidos con halógeno.
En la presente invención, en la estructura del anillo representa un doble enlace que existe opcionalmente en el anillo, y puede haber 1, 2 o 3 dobles enlaces, limitado al número máximo de dobles enlaces que pueda existir en el anillo. Por ejemplo, en un anillo de 5 miembros, pueden existir uno o dos dobles enlaces; y en un anillo de 6 miembros pueden existir uno, dos o tres dobles enlaces.
En la presente invención, = representa un enlace simple o un doble enlace.
En la presente invención, la “ausencia” de un determinado grupo puede significar que el grupo en sí está ausente; por ejemplo, para la definición de “Rd está ausente”, cuando el átomo de N que forma el anillo está unido a átomos adyacentes con enlaces simples y dobles enlaces en un anillo, Rd está ausente en la definición de “NRd”. Además, también puede significar que el grupo es un enlace; por ejemplo, para la definición de “L1 está ausente” en la presente invención, significa que L1 es un enlace que permite que el grupo Cy1 se una directamente a un átomo de carbono unido con un grupo R6.
En la presente invención, las valencias de todos los grupos, sustituyentes, sitios de unión química, átomos, etc. no contradicen el conocimiento común en el campo químico. Por ejemplo, los átomos de carbono son tetravalentes, los átomos de nitrógeno son trivalentes, los átomos de oxígeno son bivalentes y los átomos de hidrógeno son monovalentes.
En una realización de la presente invención, se proporciona una composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable, un éster, un estereoisómero o un tautómero del mismo descrito anteriormente, y también comprende opcionalmente uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
En una realización de la presente invención, se proporciona el uso del compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable, un éster, un estereoisómero o un tautómero del mismo descrito anteriormente o la composición farmacéutica de la presente invención descrita anteriormente en la fabricación de un medicamento para prevenir y/o tratar enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1.
En una realización de la presente invención, se proporciona un método para prevenir y/o tratar enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1, en donde la composición farmacéutica del compuesto de la presente invención o una sal farmacéuticamente aceptable, un éster, un estereoisómero o un tautómero del mismo descrito anteriormente o la composición farmacéutica descrita anteriormente se administra en una dosis eficaz a un sujeto que necesita tratamiento.
La “sal farmacéuticamente aceptable” descrita en la presente invención se refiere a una sal de adición farmacéuticamente aceptable de un ácido o una base del compuesto de fórmula I o una sal de adición de un solvato del mismo. Cuando un grupo funcional ácido (como -COOH, -OH, -SO3H, etc.) está presente en el compuesto, el grupo funcional ácido puede ser una sal formada con un catión (base) inorgánico u orgánico apropiado, incluyendo una sal formada con metal alcalino, metal alcalinotérreo o similar, una sal de amonio y una sal formada con una base orgánica nitrogenada. Cuando un grupo funcional básico (como -NH2, etc.) está presente en el compuesto, el grupo funcional básico puede ser una sal formada con un anión (ácido) inorgánico u orgánico apropiado, incluyendo una sal formada con una sal de ácido inorgánico o ácido orgánico. Una “sal farmacéuticamente aceptable” de este tipo incluye, pero no se limita a, sales ácidas, tales como clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, sulfato, fosfato, nitrato, sulfonato de benceno, benzoato, p-toluenosulfonato, 2,3-dihidroxisuccinato, alcanforsulfonato, citrato, metanosulfonato, etanosulfonato, propanosulfonato, fumarato, gluconato, glutamato, hidroxietilsulfonato, lactato, maleato, malato, mandelato, muconato, pamoato, pantotenato, succinato, tartrato y similares, preferiblemente sales benzoato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato, metanosulfonato, citrato, maleato, fumarato, tartrato, ácido alcanoico (HOOC-(CH2)n-COOH (en donde n es de 0 a 4)) (tales como formiato, acetato y propionato). Además, la “sal farmacéuticamente aceptable” también incluye, pero no se limita a, sales formadas por las siguientes bases: arginina, betaína, cafeína, colina, W,A/-dibenciletilendiamina, dietilamina, 2-dietilaminoetanol, 2-dimetilaminoetanol, etanolamina, etilendiamina, W-etil-morfolina, W-etilpiperidina, meglumina, glucosamina, histidina, hidrabamina, isopropilamina, lisina, metilglucamina, morfolina, piperazina, piperidina, procaína, purina, teobromina, trietilamina, trimetilamina, tripropilamina y trometamina; y además, la “sal farmacéuticamente aceptable” también puede ser sal de litio, sal de sodio, sal de potasio, sal de calcio, sal de magnesio, sal de zinc, sal de bario, sal de aluminio, sal férrica, sal de cobre, sal ferrosa, sal de manganeso, sal de manganeso divalente o similares.
El “éster farmacéuticamente aceptable” del compuesto de la presente invención se refiere a un éster del compuesto de la presente invención que está hidrolizado in vivo e incluye un éster que puede descomponerse fácilmente en el cuerpo humano para dejar el compuesto original o la sal del mismo. Los grupos éster adecuados incluyen, por ejemplo, grupos éster derivados de ácidos carboxílicos alifáticos farmacéuticamente aceptables (en particular ácido alcanoico, ácido alquenoico, ácido alcanoico cíclico y diácido alcanoico), en los que cada alquilo o alquenilo tiene preferiblemente seis o menos átomos de carbono. Los ejemplos representativos de un éster específico incluyen, pero no se limitan a, formiato, acetato, propionato, butirato, acrilato y etilsuccinato.
En la presente invención, durante la reacción, el átomo de N de un grupo amino puede protegerse opcionalmente con un grupo protector de amino. El “grupo protector de amino” se refiere a un grupo químico que está unido al grupo amino y puede eliminarse fácilmente en determinadas condiciones e incluye, pero no se limita a, grupos alcoxicarbonilo, grupos acilo y grupos alquilo, tales como terc-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, fluorenilmetoxicarbonilo, aliloxicarbonilo, ftaloilo, bencilo, p-metoxibencilo, trifenilmetilo, etc. Los expertos en la técnica pueden llevar a cabo la selección y operación apropiadas según el libro de texto Greene's Protective Groups in Organic Synthesis (4‘ edición) conocido en la técnica.
La expresión “farmacéuticamente aceptable” significa que la sustancia o composición debe ser farmacéutica y/o toxicológicamente compatible con otros componentes contenidos en la preparación y/o composición farmacéutica. Los “isómeros” descritos en la presente invención incluyen un estereoisómero y un tautómero.
El estereoisómero significa que se producirá un enantiómero cuando un átomo de carbono asimétrico esté presente en un compuesto o que se producirá un isómero cis-trans cuando un doble enlace carbono-carbono o una estructura de anillo esté presente en un compuesto.
El “tautómero” significa un isómero de grupo funcional que se produce debido al cambio rápido de un determinado átomo entre dos posiciones en una molécula, y el tautómero es un isómero especial de grupo funcional. Por ejemplo,
un tautómero de un compuesto carbonilo que comprende a-H puede ser: o11 T T
<h>-,<c>-<c>-<t>2^ ^ 1':c=C" 2
T O T OH , en donde T, Ti y T2 se seleccionan cada uno independientemente de cualquier grupo que cumpla la regla de unión del compuesto.
El “tautómero” también puede ser, por ejemplo, otros tautómeros prototrópicos, específicamente tales como un tautómero fenol-ceto, un tautómero nitroso-oximino y un tautómero imina-enamina. Sin embargo, no se limita a esto, y los expertos en la técnica pueden determinar fácilmente la existencia de un tautómero y una forma específica del mismo en un compuesto.
Por lo tanto, todos los enantiómeros, diastereómeros, racematos, isómeros cis-trans, isómeros geométricos, epímeros, tautómeros y mezclas de los mismos del compuesto de fórmula I están incluidos en el alcance de la presente invención.
La composición farmacéutica de la presente invención comprende al menos uno del compuesto de fórmula I y una sal farmacéuticamente aceptable, un éster, un estereoisómero y un tautómero del mismo, y opcionalmente uno o más portadores farmacéuticamente aceptables.
La composición farmacéutica de la presente invención puede administrarse a un paciente o sujeto que necesita profilaxis y/o tratamiento de cualquier manera adecuada conocida en la técnica, por ejemplo, por vía oral, parenteral (incluyendo la vía subcutánea, intramuscular, intravenosa, intraarterial, intradérmica, intratecal y epidural), transdérmica, rectal, nasal, transpulmonar, tópica (incluyendo la vía bucal y sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonar, intranasal y otras vías de administración.
La composición farmacéutica de la presente invención puede formularse en una preparación sólida convencional, tal como comprimido, cápsula, píldora, gránulo, etc., y también puede formularse en una preparación oral líquida, como disolución oral, suspensión oral, jarabe, etc. En la preparación de una preparación oral, pueden añadirse uno o más de un excipientes, diluyente, edulcorante, solubilizante, lubricante, aglutinante, disgregante de comprimidos, estabilizador, conservante y material encapsulante adecuado. Para la administración parenteral, la composición farmacéutica puede formularse para inyección, que incluye una disolución inyectable, un polvo estéril para inyección y una disolución concentrada para inyección. La inyección puede producirse mediante un método convencional existente en el campo farmacéutico, y durante el procedimiento de preparación puede no añadirse ningún aditivo, o puede añadirse un aditivo apropiado según las propiedades del medicamento. Para administración por vía rectal, la composición farmacéutica puede formularse en forma de supositorio y similares. Para la administración por vía transpulmonar, la composición farmacéutica puede formularse en forma de inhalador, aerosol o similar. En la presente invención, los portadores sólidos adecuados incluyen, pero no se limitan a, celulosa, glucosa, lactosa, manitol, estearato de magnesio, carbonato de magnesio, carbonato de sodio, sacarina sódica, sacarosa, dextrina, talco, almidón, pectina, gelatina, goma tragacanto, goma arábiga, alginato de sodio, p-hidroxibenzoato, metilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio, cera de bajo punto de fusión, manteca de cacao, etc. Los portadores líquidos adecuados incluyen, pero no se limitan a, agua, etanol, poliol (tal como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol líquido, etc.), aceite vegetal, glicérido y mezclas de los mismos.
Se conocen generalmente los métodos para preparar la composición farmacéutica de la presente invención. La composición farmacéutica de la presente invención se prepara mediante métodos conocidos que incluyen mezclado, granulación, fabricación de comprimidos, recubrimiento, disolución o liofilización convencionales.
La formulación farmacéutica es preferiblemente en la forma de dosis unitaria. De esta forma, la formulación se subdivide en dosis unitarias que contienen una cantidad adecuada de componentes activos. La forma de dosis unitaria puede envasarse en envases que contienen una cantidad discreta de formulación, tales como comprimidos, cápsulas o polvos envasados en viales o ampollas.
La dosificación de un medicamento depende de varios factores que incluyen la edad, el peso y el estado del paciente, así como la vía de administración. La dosis precisa administrada se determina según el criterio del médico responsable del tratamiento. La dosis habitual para la administración del compuesto activo puede ser, por ejemplo, de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 100 mg/día, de aproximadamente 0,05 a aproximadamente 75 mg/día, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg/día o de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 mg/día. La dosis deseada también depende del compuesto específico empleado, la gravedad de la enfermedad, la vía de administración, el peso y el estado de salud del paciente y el criterio del médico responsable del tratamiento. El compuesto de la presente invención también incluye un compuesto en el que uno o más átomos de hidrógeno, átomos de flúor, átomos de carbono, átomos de nitrógeno, átomos de oxígeno y átomos de azufre se reemplazan con radioisótopos o isótopos estables. Estos compuestos marcados pueden usarse para estudios metabólicos o farmacocinéticos, análisis biológicos como ligandos para receptores, etc.
El compuesto de la presente invención puede usarse para tratar y/o prevenir enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1, que comprende administrar el compuesto de la presente invención a un sujeto.
La composición farmacéutica que comprende el compuesto de la presente invención puede usarse para tratar y/o prevenir enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1, que comprende administrar el compuesto de la presente invención a un sujeto.
Método de preparación del compuesto de fórmula (I) de la presente invención
El compuesto de la presente invención puede prepararse mediante una variedad de métodos que incluyen los métodos químicos convencionales. A menos que se indique lo contrario, cualquier variable definida anteriormente seguirá teniendo el significado definido anteriormente. Los métodos a modo de ejemplo de la síntesis general se elaboran en los siguientes esquemas y pueden modificarse fácilmente para preparar otros compuestos de la presente invención. Los expertos en la técnica pueden realizar las siguientes reacciones según un método convencional (tal como Organic Synthesis (2‘ edición), Michael B. Smith etc.) impartido en la técnica. Los compuestos específicos de la presente invención se prepararon específicamente en los ejemplos.
En una realización de la presente invención, el compuesto de fórmula general (I) se obtuvo mediante una reacción entre la fórmula (SM1) y la fórmula (SM2),
en donde Cyi, Ri, R2, R3, , R6 y Li se describen como anteriormente; y Xi es u pero no se limita a, halógeno o sulfonato.
Además, cuando R3 y R4 son hidrógeno, en el procedimiento de preparación, había que proteger el hidrógeno en N
R3 G<j>
en i formando así z<J>9<2>, en donde G1 y G2 son grupos protectores de amino.
Los “grupos protectores de amino” son grupos protectores habitualmente utilizados por los expertos en la técnica, tales como tere-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, tere-butilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, aliloxicarbonilo, trifluoroacetilo, cloroacetilo, trifenilmetilo, tetrahidropiranilo, 4-metoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo, onitrobencenosulfonilo y ftaloilo. Además, el método para proteger y desproteger grupos amino también puede realizarse mediante métodos conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, puede hacerse referencia a las etapas ilustradas en Proteetive Groups in Organie Synthesis (3a edición).
En una realización de la presente invención, el compuesto de fórmula general (I') se preparó mediante las siguientes etapas:
en donde las definiciones de Cyi, Gi, G2 y Xi se describen como anteriormente.
(1) Se disolvió la fórmula (SMi) en un disolvente orgánico'1 y a la disolución se le añadió una base adecuada para reaccionar con la fórmula (SM2-a) para dar la fórmula (Il-a);
(2) Se disolvió la fórmula (Il-a) en un disolvente orgánico2 y a la disolución se le añadió un reactivo desprotector adecuado para la desprotección, de modo que se obtuvo la fórmula (I').
En una realización de la presente invención, el compuesto de fórmula general (I') se preparó mediante las siguientes etapas:
en donde las definiciones de Cyi y Xi se describen como anteriormente; y
G2 se selecciona de tere-butoxicarbonilo, benciloxicarbonilo, tere-butilo, 9-fluorenilmetoxicarbonilo, aliloxicarbonilo, trifluoroacetilo, cloroacetilo, trifenilmetilo, tetrahidropiranilo, 4-metoxibencilo, 2,4-dimetoxibencilo y onitrobencenosulfonilo.
(1) Se disolvió la fórmula (SM1) en un disolvente orgánico1 y a la disolución se le añadió la fórmula (SM2-c) y una base para dar la fórmula (II-c);
(2) Se disolvió la fórmula (II-c) en un disolvente orgánico2 y a la disolución se le añadió un agente desprotector para la desprotección, de modo que se obtuvo la fórmula (I').
En una realización de la presente invención, el compuesto de fórmula general (I') se preparó mediante las siguientes etapas:
en donde las definiciones de Cy1 y X1 se describen como anteriormente.
(1) Se disolvió la fórmula (SM1) en un disolvente orgánico1 y a la disolución se le añadió una base adecuada para reaccionar con la fórmula (SM2-b) para dar la fórmula (II-b);
(2) Se disolvió la fórmula (II-b) se disolvió en disolvente orgánico2 y a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina para la hidrazinólisis, de modo que se obtuvo la fórmula (I').
En una realización de la presente invención, el disolvente orgánico1 era DMF, DMA, ACN, metanol, etanol, isopropanol o THF.
En una realización de la presente invención, el disolvente orgánico2 era metanol, etanol o isopropanol.
En una realización de la presente invención, la base era hidruro de sodio, carbonato de cesio o carbonato de potasio.
En una realización de la presente invención, el agente desprotector era ácido clorhídrico, ácido trifluoroacético, ácido bromhídrico, trimetilyodosilano o similares.
En una realización de la presente invención, puede añadirse un catalizador de transferencia de fase para dar el compuesto objetivo durante la reacción, y el catalizador de transferencia de fase puede ser un catalizador habitualmente usado en la técnica que incluye, pero no se limita a, acetato de cobre, cloruro de cobre, paladio sobre carbono, cloruro férrico, acetato de paladio, dicloruro de [1,1'-bis(difenilfosfino)ferroceno]paladio, bromuro de tetrabutilamonio, cloruro de benciltrietilamonio, cloruro de tetrabutilamonio, etc.
El “agente desprotector adecuado” se refiere a un reactivo que los expertos en la técnica utilizan para realizar una reacción de desprotección seleccionando un ácido, una base o un oxidante correspondiente según diferentes tipos de grupos protectores de amino G1 y G2 en una estructura química. Pueden adoptarse los ilustrados en Protective Groups in Organic Synthesis (3a edición).
En la presente invención, el “ácido” puede ser ácidos habitualmente usados en la técnica que incluyen ácidos orgánicos y ácidos inorgánicos. Los ácidos orgánicos pueden incluir, por ejemplo, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiónico, ácido trifluoroacético, ácido cítrico, ácido láctico, ácido tartárico, ácido oxálico, ácido maleico, ácido fumárico, ácido mandélico, ácido glutárico, ácido málico, ácido benzoico, ácido Itálico, ácido ascórbico, ácido bencenosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido metanosulfónico y ácido etilsulfónico; y los ácidos inorgánicos pueden incluir, por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido carbónico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido yodhídrico, etc. Se prefiere el ácido clorhídrico.
En la presente invención, la “base” puede ser bases habitualmente usadas en la técnica que incluyen bases orgánicas y bases inorgánicas. Las bases orgánicas pueden incluir, por ejemplo, metilamina, etilamina, propilamina, W,W-diisopropiletilamina, trimetilamina, trietilamina, W-metilmorfolina, diciclohexilamina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, meglumina, dietanolamina, etilendiamina, piridina, metilpiridina, quinolina, etc.; y las bases inorgánicas pueden incluir, por ejemplo, hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos de metales alcalinos (tales como litio, sodio, potasio y cesio); hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos de metales alcalinotérreos (magnesio, calcio, estroncio y bario); terc-butóxido de sodio, terc-butóxido de potasio, etóxido de sodio, etc.
En la presente invención, el “oxidante” puede ser un oxidante habitualmente usado en la técnica que incluye, pero no se limita a, nitrato cérico de amonio, 2,3-dicloro-5,6-diciano-p-benzoquinona, cloruro de cobre, dióxido de manganeso, permanganato, dicromato, ácido peroxiacético, ácido peroxibenzoico, etc.
En la presente invención, el “disolvente orgánico1” se refiere a un disolvente orgánico simple o mixto habitualmente usado en la técnica que incluye, pero no se limita a, éteres, alcanos, haloalcanos, hidrocarburos aromáticos, alcoholes, etc. Específicamente, el disolvente orgánico puede ser W,A/-dimetilformamida, W,A/-dimetilacetamida, dimetilsulfóxido, hidrocarburos aromáticos (tales como tolueno, benceno, dimetilbenceno, trimetilbenceno, etc.), hidrocarburos saturados (tales como ciclohexano, hexano, etc.), halohidrocarburos (tales como diclorometano, cloroformo, 1,2-dicloroetano, etc.), éteres (tales como tetrahidrofurano, éter dietílico, dioxano, 1,2-dimetoxietano, etc.), ésteres (tales como acetato de metilo, acetato de etilo, etc.), cetonas (tales como acetona, metil etil cetona, etc.), nitrilos (tales como acetonitrilo, etc.), alcoholes (tales como metanol, etanol, isopropanol, terc-butanol, etc.), agua, disolventes mixtos de agua y estos, o similares.
En la presente invención, el “disolvente orgánico2” se refiere a un disolvente orgánico simple o mixto habitualmente usado en la técnica que incluye, pero no se limita a, éteres, alcanos, haloalcanos, hidrocarburos aromáticos, alcoholes, etc. Específicamente, el disolvente orgánico puede ser W,A/-dimetilformamida, W,A/-dimetilacetamida, dimetilsulfóxido, hidrocarburos aromáticos (tales como tolueno, benceno, dimetilbenceno, trimetilbenceno, etc.), hidrocarburos saturados (tales como ciclohexano, hexano, etc.), halohidrocarburos (tales como diclorometano, cloroformo, 1,2-dicloroetano, etc.), éteres (tales como tetrahidrofurano, éter dietílico, dioxano, 1,2-dimetoxietano, etc.), ésteres (tales como acetato de metilo, acetato de etilo, etc.), cetonas (tales como acetona, metil etil cetona, etc.), nitrilos (tales como acetonitrilo, etc.), alcoholes (tales como metanol, etanol, isopropanol, terc-butanol, etc.), agua, disolventes mixtos de agua y estos, o similares.
En la presente invención, en el proceso de reacción mencionado anteriormente, la temperatura de reacción puede ajustarse según sea necesario, como temperatura alta, temperatura ambiente, temperatura baja, etc. La temperatura alta generalmente se refiere a una temperatura superior a 30 °C y el calentamiento puede realizarse cuando sea necesario. La temperatura ambiente generalmente se refiere a de 15 °C a 30 °C. Baja temperatura generalmente se refiere a una temperatura inferior a 15 °C y el enfriamiento puede realizarse cuando sea necesario.
Ejemplos
Si las condiciones de reacción específicas no se especifican en los ejemplos, se adoptarán las condiciones convencionales o las recomendadas por los fabricantes. Los reactivos o instrumentos adoptados, sin sus fabricantes, son todos productos convencionales que están disponibles comercialmente.
En la presente invención, a menos que se indique lo contrario: (i) la temperatura se expresa en grados Celsius (°C) y la operación se realiza a temperatura ambiente; (ii) el proceso de reacción se rastrea mediante cromatografía en capa fina (CCF) o cromatografía de líquidos/espectrometría de masas (CL-EM); (iii) el producto final tiene datos de espectroscopia de resonancia magnética nuclear de protones (1H-RMN) y datos de espectrometría de masas (EM) claros.
Las abreviaturas y expresiones usadas en la presente invención tienen los siguientes significados:
DCM: diclorometano
DIPEA: W,A/-diisopropiletilamina
-Boc: terc-butoxicarbonilo
(Boc)2O: dicarbonato de di-terc-butilo
TEA: trietilamina
DMSO: dimetilsulfóxido
DMA o DMAc: dimetilacetamida
DMAP: 4-dimetilaminopiridina
DMF: W,A/-dimetilformamida
EDCI: clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida
EtOH: etanol
EtONa: etóxido de sodio
HCl ac.: ácido clorhídrico diluido
NaH: hidruro de sodio
N2H4: hidrazina
AcONa: acetato de sodio
Ac2O: anhídrido acético
ACN: acetonitrilo
THF: tetrahidrofurano
CuI: yoduro cuproso
Cs2Co3: carbonato de cesio
K2CO3: carbonato de potasio
EA: acetato de etilo
MeOH: metanol
MTBE: metil terc-butil éter
PE: éter de petróleo
HATU: hexafluorofosfato de 2-(7-azabenzotriazol-1-il)-W,A/,W, W-tetrametiluronio
TBAB: bromuro de tetrabutilamonio
Se preparó (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindol-1,3-diona según un método de síntesis del producto intermedio (Ian A. McDonald, Philipe Bey. A general preparation of fluoroallylamine enzyme inhibitors incorporating a ¡3-substituted heteroatom. Tetrahedron Letters, Vo1. 26, N.°.32, páginas 3807-3810, 1985) descrito por Ian A. McDonald, et al.
Ejemplo 1: síntesis de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A1)
Etapa 1: síntesis de (E)-1-ciclopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se añadió lentamente el material ciclopropilpiperidin-2,4-diona (5 g, 32,6 mmol, 1,0 eq) a DMF-DMA (5 g, 41,8 mmol, 1,28 eq) para reaccionar a 25 °C durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró el sistema de reacción para dar un producto en bruto (rendimiento teórico: 6,789 g) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 2: síntesis de 5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto en bruto (£)-1-cidopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (6,789 g, 32,6 mmol) obtenido en la etapa anterior en MeOH (50 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina al 85 % (2,1 g, 35,9 mmol, 1,1 eq) y se hizo reaccionar a reflujo durante 0,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción y se mantuvo separada hasta que precipitó una gran cantidad de sólidos de color blanco. Después, se añadió a la mezcla resultante una pequeña cantidad de MTBE y se filtró a vacío. Se recristalizó la torta de filtración con un volumen de 2 veces de EtOH al 95 %, se filtró a vacío y se secó a 50 °C para dar un producto (3,7 g, rendimiento en dos etapas: 64 %).
Etapa 3: síntesis de (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindol-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio 5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (1,0 g, 5,643 mmol, 1 eq) en DMF (2,5 ml). Después de enfriar hasta 0 °C, a la disolución se le añadió NaH al 60 % (248 mg, 6,207 mmol, 1,1 eq) en una atmósfera de N2 y se agitó durante 30 min en una atmósfera de N2. Después, se añadió gota a gota una disolución de (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindol-1,3-diona (2,019 g, 6,722 mmol, 1,2 eq) en DMF (2,5 ml) para reaccionar a la temperatura ambiente de 18 °C durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (10 ml) y se extrajo con DCM:MeOH = 10:1 (15 ml * 3). Se lavó la fase orgánica con agua, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente DCM:MeOH = 200:1) para dar un producto (583 mg, rendimiento: 26,2 %).
Etapa 4: síntesis de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (583 mg, 1,478 mmol, 1 eq) en EtOH (15 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina al 85 % (305 mg, 5,174 mmol, 3,5 eq) y se hizo reaccionar a reflujo durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se filtró la disolución de reacción a vacío y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para dar un producto (70 mg, rendimiento: 17,9%).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 8,12 (s, 1H), 6,79-7,00 (d, 1H), 4,70-4,71 (d, 2H), 3,48-3,51 (t, 2H), 3,04-3,05 (d, 2H), 2,75-2,78 (t, 2H), 2,59-2,65 (m, 1H), 0,71-0,76 (m, 2H), 0,59-0,61 (m, 2H).
Fórmula molecular: C13H17FN4O, peso molecular: 264,30, CL-EM (Pos, m/z) = 265,25 [M+H]+.
Ejemplo 2: síntesis de clorhidrato de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A2)
Etapa 1: síntesis de (E)-1-ciclopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se añadió lentamente el material ciclopropilpiperidin-2,4-diona (20 g, 0,130 mol, 1,0 eq) a DMF-DMA (19,9 g, 0,167 mol, 1,28 eq) y se agitó la mezcla a 25 °C durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró el sistema de reacción a 50 °C para dar un producto en bruto que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 2: síntesis de 5-ciclopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (£)-1-ciclopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (27,073 g, 0,130 mol) en MeOH (100 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina al 85 % (8,4 g, 0,143 mol, 1,1 eq) y se hizo reaccionar a reflujo durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción para dar un producto en bruto. Se recristalizó el producto en bruto con EtOH al 95 % y se filtró a vacío y la torta de filtración se secó a 50 °C para dar un producto (16 g, rendimiento: 69,6 %).
Etapa 3: síntesis de (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)isoindol-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio 5-ciclopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-H]piridin-4-ona (2000 mg, 11,286 mmol, 1 eq) en DMF (5 ml). Después de enfriar hasta 0 °C, a la disolución se le añadió NaH al 60 % (496 mg, 12,414 mmol, 1,1 eq) en una atmósfera de N2 y se agitó durante 30 min en una atmósfera de N2. Después, se añadió gota a gota una disolución de (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindol-1,3-diona (4037 mg, 13,543 mmol, 1,2 eq) en DMF (5 ml) para reaccionar a la temperatura ambiente de 19 °C durante la noche. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (20 ml) y se extrajo con DCM:MeOH = 10:1 (30 ml * 3). Se lavó la fase orgánica con agua, se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente DCM:MeOH = 200:1) para dar un producto (100 mg, rendimiento: 2,2 %).
Etapa 4: síntesis de clorhidrato de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)isoindol-1,3-diona (70 mg, 0,177 mmol, 1 eq) en EtOH (1,75 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina al 85 % (36 mg, 0,621 mmol, 3,5 eq) y se hizo reaccionar a reflujo durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se filtró la disolución de reacción a vacío y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para dar un producto en bruto. Se disolvió el producto en bruto en una pequeña cantidad de etanol. A la disolución se le añadió cloruro de hidrógeno en etanol (0,1 ml) y se agitó durante 1 h, de modo que precipitaron los sólidos. Después, se añadieron MTBE y PE, de modo que precipitaron sólidos de color blanco. Se filtró la mezcla resultante a vacío y se secó la torta de filtración para dar un producto (40 mg, rendimiento: 74,9 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,46 (s, 3H), 7,72 (s, 1H), 7,06-7,26 (d, 1H), 4,89 (d, 2H), 3,54-3,57 (t, 2H), 3,43-3,44 (d, 2H), 2,98-3,02 (t, 2H), 2,57-2,62 (m, 1H), 0,71-0,76 (t, 2H), 0,56-0,60 (m, 2H).
Fórmula molecular: C13H18CFN4O, peso molecular: 300,76, CL-EM (Pos, m/z) = 264,8 [M+H]+.
Ejemplo 3: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A6)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((5-etil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo
Se disolvió el producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo (1,0 g, 3,08 mmol, 1,0 eq) en tetrahidrofurano (10 ml). Después, a la disolución se le añadió hidruro de sodio (160 mg, 4,0 mmol, 1,3 eq, 60 %) para reaccionar a temperatura ambiente durante 30 min. A la disolución de reacción se le añadió yodoetano (576 mg, 3,7 mmol, 1,2 eq) y se calentó hasta 60 °C para reaccionar durante 4 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se añadió agua (10 ml) al matraz de reacción y se añadió acetato de etilo (20 ml * 3) para la extracción. Se secó y se concentró la fase orgánica. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (MeOH:DCM = 1:20) para dar un producto (180 mg, rendimiento: 16 %).
Etapa 2: síntesis del compuesto clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etilo-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((5-etil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo (180 mg, 0,51 mmol, 1,0 eq) en etanol (2 ml). Después, a la disolución se le añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (2 ml) para reaccionar durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida, se disolvió con agua y se liofilizó para dar un producto (120 mg, rendimiento: 83 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 8,47 (s, 3H), 8,27 (s, 1H), 7,37 (s, 0,5H), 7,16 (s, 0,5H), 4,93 (s, 2H), 3,52 3,56 (m, 2H), 3,39-3,42 (m, 2H), 3,32-3,33 (d, 2H), 2,81-2,84 (m, 2H), 1,04-1,07 (m, 3H).
Fórmula molecular: C12H17FN4O, peso molecular: 252,29, CL-EM (Pos, m/z) = 253,22 [M+H]+.
Ejemplo 4: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ferc-butil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A7)
Etapa 1: síntesis de 3-(ferc-butilamino)propionato de etilo
Se disolvió ferc-butilamina (87,66 g, 1,20 mol, 1,2 eq) en etanol (400 ml). Después, a la disolución se le añadió lentamente gota a gota acrilato de etilo (100,00 g, 1,00 mol, 1,0 eq) en un baño con hielo para reaccionar a temperatura ambiente durante la noche. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CG, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar un producto (173 g, rendimiento: 99 %).
Etapa 2: síntesis de 3-(ferc-butil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo
Se disolvieron el producto intermediario 3-(ferc-butilamino)propionato de etilo (70,00 g, 0,404 mol, 1,0 eq), malonato de monoetilo (53,37 g, 0,404 mol, 1,0 eq), 4-dimetilaminopiridina (9,88 g, 0,0808 mmol, 0,2 eq) y trietilamina (102,30 g, 1,010 mol, 2,5 eq) en diclorometano (490 ml), y se agitó la disolución en un baño con hielo durante 15 min. Después, se añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (93,02 g, 0,485 mol, 1,2 eq) en lotes y se hizo reaccionar la disolución a temperatura ambiente durante la noche. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, en un baño con hielo, se añadieron agua y ácido clorhídrico concentrado (3:1, 360 ml) al matraz de reacción y se agitó la mezcla durante 15 min, seguido de la separación de líquidos. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (300 ml). Se combinaron las fases orgánicas, se lavaron sucesivamente con una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (800 ml) y una disolución acuosa saturada de cloruro de sodio (800 ml * 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, se filtraron y se concentró el filtrado a presión reducida para dar un producto (114 g, rendimiento: 98,2 %).
Etapa 3: síntesis de 1-ferc-butilpiperidin-2,4-diona
Se disolvieron 3-(ferc-butil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo (114,00 g, 0,397 mol, 1,0 eq) y etóxido de sodio (53,99 g, 0,793 mol, 2,0 eq) en etanol (456 ml) para reaccionar a 80 °C durante 4 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar una sal sódica del producto intermedio 1-ferc-butil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo. Después, se añadió agua y se ajustó el pH de la mezcla a 2 con ácido clorhídrico concentrado. Se realizó la reacción a 85 °C durante 5 h y después a 95 °C durante 1,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se añadió cloruro de sodio hasta que se saturó la disolución de reacción. Se añadió diclorometano (400 ml * 3) para la extracción. Se secó y se concentró la fase orgánica para dar un producto en bruto oleoso. Tras enfriar, precipitaron los sólidos. A continuación, se añadió MTBE y se agitó la mezcla, de modo que precipitó una gran cantidad de sólidos. Se filtró la mezcla resultante a vacío y se enjuagó la torta de filtración con una pequeña cantidad de MTBE y se secó para dar un producto (45,3 g, rendimiento: 67,48 %).
Etapa 4: síntesis de 5-ferc-butil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio 1-ferc-butilpiperidin-2,4-diona (40 g, 0,207 mol, 1,0 eq) en A/,W-dimetilformamida dimetilacetal (35,04 g, 0,265 mol, 1,28 eq) para reaccionar a temperatura ambiente durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto intermedio (E)-1-ferc-butil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona. Se añadieron metanol (200 ml) e hidrato de hidrazina (15,3 g, 0,228 mol, 1,1 eq) al producto intermedio y se hicieron reaccionar a reflujo durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida, se añadió MTBE (300 ml) y se agitó durante la noche, y precipitó una gran cantidad de sólidos. Se filtró la mezcla resultante a vacío y se enjuagó la torta de filtración con MTBE y se secó para dar un producto (40,00 g, rendimiento: 87,7 %).
Etapa 5: síntesis de (E)-2-(2-((5-ferc-butil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió 5-ferc-butil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (1,08 g, 5,59 mmol, 1,0 eq) en DMF (10 ml). Después de enfriar hasta 0 °C, a la disolución se le añadió NaH (fracción en masa: 60 %, 246 mg, 6,147 mmol, 1,1 eq), se agitó durante 30 min y se añadió una disolución de (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (2,00 g, 6,706 mmol, 1,2 eq) gota a gota en DMF (5 ml) para reaccionar a temperatura ambiente durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, a la disolución de reacción se le añadió agua (12 ml) y se extrajo con una mezcla de diclorometano y metanol (10:1, 25 ml * 3), seguido de separación de líquidos. Se combinaron las fases orgánicas, se lavaron a contracorriente con agua, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 3:1-2:1, con trietilamina al 0,5 % añadida) para dar el producto (E)-2-(2-((5-ferc-butil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,3 g, rendimiento: 56,7 %) y el isómero posicional (E)-2-(2-((5-(ferc-butil)-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (350 mg, rendimiento: 15,3 %).
Etapa 6: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ferc-butil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió (E)-2-(2-((5-ferc-butil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1000 mg, 2,438 mmol, 1,0 eq) en EtOH (30 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina (502,4 mg, 8,531 mmol, 3,5 eq, 85 %) y se sometió a reflujo durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se filtró la disolución de reacción a vacío y se concentró el filtrado a presión reducida. A la disolución resultante se le añadió EA (30 ml), se sometió a reflujo y se filtró mientras estaba caliente. Se concentró el filtrado a presión reducida, se diluyó con una pequeña cantidad de etanol, se añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió a la mezcla resultante acetonitrilo y se concentró a presión reducida para dar el producto clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-terc-butil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (747,9 mg, rendimiento: 98 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,51 (s a, 3H), 8,22 (s, 1H), 7,16-7,36 (d, J=82 Hz, 1H), 4,93 (s, 2H), 3,52 3,56 (t, 2H), 3,31-3,32 (d, 2H), 2,73-2,76 (t, 2H), 2,08 (s, 1H), 1,42 (s, 9H).
Fórmula molecular: C14H21FN4O, peso molecular: 280,35, CL-EM (Pos, m/z) = 281,23 [M+H]+.
Ejemplo 5: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclobutil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A9)
Etapa 1: síntesis de 3-(ciclobutilamino)propionato de etilo
Se disolvió el material ciclobutilamina (4,26 g, 59,93 mmol, 1,2 eq) en etanol (50 ml). A continuación, a la disolución se le añadió lentamente gota a gota acrilato de etilo (5,0 g, 49,94 mmol, 1,0 eq) en un baño con hielo para reaccionar durante 12 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida a 80 °C para dar un producto (8,55 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 2: síntesis de 3-(ciclobutil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo
Se disolvió el producto intermedio 3-(ciclobutilamino)propionato de etilo (8,55 g, 49,94 mmol, 1,0 eq) en diclorometano (100 ml). Después, se enfrió la disolución hasta 0 °C en un baño con agua y hielo y se añadió gota a gota malonato de monoetilo (6,6 g, 49,94 mmol, 1,0 eq), y después de la adición, se agitó durante 10 min. Después, se añadieron sucesivamente a la mezcla trietilamina (12,6 g, 124,85 mmol, 2,5 eq), 4-dimetilaminopiridina (609,6 mg, 4,99 mmol, 0,1 eq) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (11,5 g, 59,93 mmol, 1,2 eq) para reaccionar durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió ácido clorhídrico 2,5 mol/l (100 ml) y se agitó durante 10 min, seguido de la separación de líquidos. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (50 ml). Se combinaron las fases orgánicas, se lavaron sucesivamente con una disolución acuosa saturada de carbonato de sodio (50 ml) y agua (50 ml), seguido de la separación de líquidos. Se secó la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado a presión reducida para dar el producto (10,1 g, rendimiento: 71,1 %).
Etapa 3: síntesis de 1-ciclobutil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo
Se disolvió el producto intermedio 3-(ciclobutil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo (10,1 g, 35,40 mmol, 1,0 eq) en etanol (50 ml). A la disolución se le añadió etóxido de sodio (6,0 g, 88,49 mmol, 2,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (8,47 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 4: síntesis de 1-ciclobutilpiperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-ciclobutil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo (8,47 g, 35,40 mmol, 1,0 eq) en agua (20 ml) y ácido clorhídrico concentrado (30 ml) para reaccionar a 120 °C durante 2h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se extrajo con diclorometano (50 ml * 3). Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, y se filtraron, y se concentró el filtrado para dar el producto (3 g, rendimiento: 50,8 %).
Etapa 5: síntesis de 1-ciclobutil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-ciclobutilpiperidin-2,4-diona (3 g, 17,94 mmol, 1,0 eq) en diclorometano (2 ml). A la disolución se le añadió A/,W-dimetilformamida dimetilacetal (2,35 g, 19,74 mmol, 1,1 eq) para reaccionar a temperatura ambiente durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (3.98 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 6: síntesis de 5-ciclobutil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio (£)-1-ciclobutil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (3,98 g, 17,94 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (1,16 g, 19,73 mmol, 1,1 eq) en metanol (4 ml). Después, se calentó la disolución a reflujo durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna (DCM:MeOH = 100: 1-50:1) para dar un producto (2,1 g, rendimiento: 61,2 %).
Etapa 7: síntesis de (E)-2-(2-((5-ciclobutil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió el intermedio 5-ciclobutil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (1,0 g, 5,23 mmol, 1,0 eq) en DMF (5 ml). Se enfrió la disolución en un baño con agua y hielo, se añadió NaH (fracción en masa: 60 %, 230 mg, 5,75 mmol, 1,1 eq), se agitó a temperatura ambiente durante 30 min y después se añadió, gota a gota, una disolución de (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (2,0 g, 6,29 mmol, 1,2 eq) en DMF (5 ml). Después de la adición, se realizó la reacción durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (50 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml * 3). Se lavó la fase orgánica con agua (50 ml * 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (PE:EA = 1:2) para dar un producto (572 mg, rendimiento: 27,2 %).
Etapa 8: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclobutil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(2-((5-ciclobutil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (572 mg, 1,40 mmol, 1,0 eq) en EtOH (10 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina (245 mg, 4,90 mmol, 3,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró a vacío, y se concentró el filtrado. El producto en bruto se suspendió con diclorometano (10 ml) y se filtró y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para dar un líquido oleoso (296 mg). El producto resultante se disolvió en diclorometano (2 ml), se añadió, gota a gota, una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (129 mg), se agitó durante 10 min y se concentró a presión reducida para dar un producto (256 mg, rendimiento: 58 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,43 (s, 3H), 8,26 (s, 1H), 7,36 (s, 0,5H), 7,15 (s, 0,5H), 4,93-4,92 (m, 3H), 3,57-3,54 (m, 2H), 3,34-3,33 (m, 2H), 2,83-2,80 (m, 2H), 2,20-2,13(m, 2H), 2,06-1,99 (m, 2H), 1,67-1,66 (m, 2H). Fórmula molecular: C14H19FN4O, peso molecular: 278,33, CL-EM (Pos, m/z) = 279,19 [M+H]+.
Ejemplo 6: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopentil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A10)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio 3-(ciclopentilamino)propionato de etilo
Se disolvió el material ciclopentilamina (5,1 g, 60 mmol, 1,0 eq) en etanol (10 ml). A continuación, a la disolución se le añadió lentamente gota a gota acrilato de etilo (5,0 g, 50 mmol, 1,0 eq) en un baño con hielo para reaccionar durante 12 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar un producto (9,2 g, rendimiento: 99 %).
Etapa 2: síntesis del producto intermedio 3-(ciclopentil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-(cidopentilamino)propionato de etilo (8,2 g, 44,26 mmol, 1,0 eq), malonato de monoetilo (5,85 g, 44,26 mmol, 1,0 eq), 4-dimetilaminopiridina (1,08 g, 8,85 mmol, 0,2 eq) y trietilamina (10,3 g, 101,8 mmol, 2,3 eq) en diclorometano (100 ml). Después de agitarse durante 5 min, a la disolución se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (8,49 g, 53,11 mmol, 1,2 eq) en lotes para reaccionar durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se añadieron agua y ácido clorhídrico concentrado (3:1, 100 ml) a un matraz de reacción y se agitó la mezcla durante 10 min, seguido de la separación de líquidos. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (100 ml). Se combinaron las fases orgánicas, se lavaron sucesivamente con una disolución acuosa saturada de carbonato de sodio (100 ml) y agua (100 ml * 2), se secaron sobre sulfato de sodio anhidro y se filtraron y se concentró el filtrado a presión reducida para dar un producto (11,5 g, rendimiento: 87 %).
Etapa 3: síntesis del producto intermedio 1-ciclopentil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-(ciclopentil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo (11,5 g, 38,4 mmol, 1,0 eq) y etóxido de sodio (5,23 g, 76,8 mmol, 2,0 eq) en etanol (100 ml) para reaccionar a 80 °C durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (9,73 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 4: síntesis del producto intermedio 1-ciclopentilpiperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-ciclopentil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo (9,72 g, 38,4 mmol, 1,0 eq) en agua (50 ml) y ácido clorhídrico concentrado (20 ml) para reaccionar a 120 °C durante 1,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución hasta temperatura ambiente y se añadió cloruro sódico sólido hasta que se saturó. Se añadió diclorometano (100 ml * 3) para la extracción. Se secó y se concentró la fase orgánica para dar un producto (6,95 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 5: síntesis del producto intermedio 1-ciclopentil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-ciclopentilpiperidin-2,4-diona (6,95 g, 38,4 mmol, 1,0 eq) en N,N-dimetilformamida dimetilacetal (5,04 g, 42,24 mmol, 1,1 eq) para reaccionar durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar un producto (9,07 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 6: síntesis del producto intermedio 5-ciclopentil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio 1-ciclopentil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (9,07 g, 38,4 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (2,114 g, 42,24 mmol, 1,1 eq) en metanol (50 ml) para reaccionar a 60 °C durante 40 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. Se purificó primero el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH = 50:1) y, luego, se suspendió con metil ferc-butil éter (50 ml) y se filtró a vacío para dar un producto (3,1 g, rendimiento: 39 %).
Etapa 7: síntesis del producto intermedio (E)-2-(2-((5-ciclopentil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio 5-ciclopentil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (1,0 g, 4,87 mmol, 1,0 eq) en DMF (5 ml). Después, a la disolución se le añadió hidruro de sodio (214 mg, 5,36 mmol, 1,12 eq, 60 %), se agitó durante 30 min y se añadió, gota a gota, una disolución de (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,74 g, 5,84 mmol, 1,2 eq) en DMF (5 ml) para reaccionar durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, a la disolución de reacción se le añadió agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (50 ml * 2), seguido de la separación de líquidos. Se lavó la fase orgánica con agua (50 ml * 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (eluyente PE:EA = 1:1) para dar un producto (700 mg, rendimiento: 34 %).
Etapa 8: síntesis del compuesto clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopentil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(2-((5-ciclopentil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (700 mg, 1,65 mmol, 1,0 eq) en EtOH (10 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina (290 mg, 5,77 mmol, 3,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se filtró la disolución de reacción a vacío y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1). Se disolvió el aceite obtenido en metanol (2 ml). A la disolución resultante se le añadió gota a gota una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (0,25 ml), se agitó durante 30 min, y se concentró a presión reducida para dar un producto (230 mg, rendimiento: 42 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 8,37 (s, 3H), 8,24 (s, 1H), 7,36 (s, 0,5H), 7,16 (s, 0,5H), 4,91 (s, 3H), 3,42 3,45 (m, 2H), 3,34-3,35 (d, 2H), 2,78-2,81 (m, 2H), 1,69 (s, 4H), 1,54 (s, 4H).
Fórmula molecular: C15H21FN4O, peso molecular: 292,36, CL-EM (Pos, m/z) = 293,20 [M+H]+.
Ejemplo 7: síntesis de (£)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-(ferc-butil)-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-4(2H)-ona (compuesto A13)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio ferc-butilglicinato de etilo
Se añadió, gota a gota, bromoacetato de etilo (10,0 g, 59,88 mmol, 1,0 eq) a una disolución de ferc-butilamina (21,9 g, 299,40 mmol, 5,0 eq) en metil ferc-butil éter (200 ml). Después de la adición, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 40 h. Se filtró la disolución de reacción y se concentró el filtrado. A la disolución concentrada se le añadió metil ferc-butil éter (100 ml), se lavó sucesivamente con agua (30 ml) y salmuera saturada (50 ml) y se filtró, y se concentró el filtrado para dar un producto (8,5 g, rendimiento: 89,2 %).
Etapa 2: síntesis del producto intermedio 3-(ferc-butil(2-etoxi-2-oxoetil)amino)-3-oxopropionato de etilo
Se añadieron sucesivamente ferc-butil glicinato de etilo (6,0 g, 37,68 mmol, 1,0 eq), malonato de monoetilo (5,48 g, 41,15 mmol, 1,1 eq), trietilamina (8,77 g, 86,67 mmol, 2,3 eq) y DMAP (921 mg, 7,54 mmol, 0,2 eq) a DCM (150 ml), y luego se añadió EDCI (8,62 g, 45,22 mmol, 1,2 eq) en lotes a DCM. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Tras terminar la reacción, como se detectó mediante CCF, se vertió la disolución de reacción en ácido clorhídrico 1 mol/l (300 ml), seguido de la separación de líquidos. Se lavó sucesivamente la fase orgánica con agua (50 ml) y salmuera saturada (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado para dar un producto (10,0 g, rendimiento: 97,1 %).
Etapa 3: síntesis del producto intermedio 1-(ferc-butil)-2,4-dioxopirrolidin-3-carboxilato de etilo
Se añadió etóxido de sodio (4,98 g, 73,17 mmol, 2,0 eq) a etanol (100 ml), luego se añadió 3-(ferc-butil(2-etoxi-2-oxoetil)amino)-3-oxopropionato de etilo (10,0 g, 36,59 mmol, 1,0 eq) a la disolución de etóxido de sodio en etanol con agitación a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 4: síntesis del producto intermedio 1-(ferc-butil)pirrolidin-2,4-diona
Se añadió 1-(ferc-butil)-2,4-dioxopirrolidin-3-carboxilato de etilo (8,31 g, 36,57 mmol, 1,0 eq) en lotes a ácido clorhídrico 1 mol/l (150 ml). Después de la adición, se agitó la mezcla a 85 °C durante 4 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se añadió DCM (200 ml), seguido de la separación de líquidos. Se lavó la fase orgánica con agua (50 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado para dar un producto (4,2 g, rendimiento en dos etapas: 74,0 %).
Etapa 5: síntesis del producto intermedio 1-(ferc-butil)-3-((dimetilamino)metilen)pirrolidin-2,4-diona
Se añadió 1-(ferc-but¡l)p¡rrol¡d¡n-2,4-d¡ona (2,20 g, 14,18 mmol, 1,0 eq) a 1,1-d¡metox¡-W,A/-d¡met¡lmet¡lam¡na (1,69 g, 14,18 mmol, 1,0 eq). Después, se ag¡tó la mezcla a temperatura amb¡ente durante 0,5 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se evaporó el metanol a pres¡ón reduc¡da para dar un producto (producto en bruto, calculado según el rend¡m¡ento teór¡co) que se usó d¡rectamente en la s¡gu¡ente etapa.
Etapa 6: síntes¡s del producto ¡ntermed¡o 1-benc¡l-5-(ferc-but¡l)-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-4(1H)-ona
Se añad¡eron suces¡vamente d¡h¡drocloruro de benc¡lh¡draz¡na (2,76 g, 14,17 mmol, 1,0 eq) y 1-(ferc-but¡l)-3-((d¡met¡lam¡no)met¡len)p¡rrol¡d¡n-2,4-d¡ona (2,98 g, 14,17 mmol, 1,0 eq) a etanol (30 ml) y se ag¡tó la mezcla a 20 °C durante 1h. Después, se calentó la mezcla hasta 90 °C para reacc¡onar durante 3 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se enfr¡ó la d¡soluc¡ón de reacc¡ón hasta temperatura amb¡ente, se vert¡ó en una d¡soluc¡ón acuosa saturada de b¡carbonato de sod¡o (50 ml) y se extrajo con DCM (25 ml * 3). Se lavó la fase orgán¡ca con agua (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó sobre sulfato de sod¡o anh¡dro y se f¡ltró, y se concentró el f¡ltrado. Se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce (éter de petróleo:acetato de et¡lo = 1:1) para dar un producto (3,0 g, rend¡m¡ento en dos etapas: 78,6 %).
Etapa 7: síntes¡s del producto ¡ntermed¡o 5-(ferc-but¡l)-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-C]p¡razol-4(2H)-ona
Se d¡solv¡ó el producto ¡ntermed¡o 1-benc¡l-5-(ferc-but¡l)-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-4(1H)-ona (3,0 g, 11,14 mmol, 1,0 eq) en metanol (45 ml). Después, a la d¡soluc¡ón se le añad¡eron ác¡do clorhídr¡co concentrado (1,0 ml) y palad¡o sobre carbono húmedo (1,0 g) para reacc¡onar en una atmósfera de h¡drógeno durante 40 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se f¡ltró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón a través de Cel¡te y se concentró el f¡ltrado para dar un producto (1,8 g, rend¡m¡ento: 90,2 %).
Etapa 8: síntes¡s del producto ¡ntermed¡o (E)-2-(2-((5-(ferc-but¡l)-4-oxo-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-2(4H)-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona
Se añad¡eron 5-(ferc-but¡l)-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-4(2H)-ona (359 mg, 2,01 mmol, 1,2 eq), carbonato de ces¡o (1,20 g, 3,69 mmol, 2,2 eq) y (E)-2-(2-(bromomet¡l)-3-fluoroal¡l)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona (500 mg, 1,68 mmol, 1,0 eq) a DMAc (10 ml). Después, se ag¡tó la mezcla a 55 °C durante 16 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se f¡ltró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón y se enjuagó la torta de f¡ltrac¡ón con acetato de et¡lo (30 ml). Se lavó la fase orgán¡ca con agua (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó sobre sulfato de sod¡o anh¡dro y se f¡ltró, y se concentró el f¡ltrado. Se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en capa f¡na preparat¡va (acetato de et¡lo) para dar un producto (320 mg, 0,81 mmol, rend¡m¡ento: 48,0 %) y un ¡sómero pos¡c¡onal (E)-2-(2-((5-(ferc-but¡l)4-oxo-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-1(4H)-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)¡so¡ndol-1,3-d¡ona (100 mg, rendimiento: 15,0 %). Etapa 9: síntesis del compuesto (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-(terc-but¡l)-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-4(2H)-ona
Se añad¡eron sucesivamente el producto ¡ntermed¡o (E)-2-(2-((5-(terc-but¡l)-4-oxo-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-2(4H)-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona (320 mg, 0,81 mmol, 1,0 eq) e h¡drato de h¡draz¡na al 85 % (190 mg, 3,23 mmol, 4,0 eq) a etanol (8,0 ml). Después, se agitó la mezcla a 40 °C durante 15 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se enfr¡ó la d¡soluc¡ón de reacc¡ón hasta temperatura amb¡ente y se f¡ltró, y se enjuagó la torta de f¡ltrac¡ón con una pequeña cant¡dad de etanol. Se concentró el f¡ltrado, se añad¡ó etanol absoluto (4 ml) y se f¡ltró, y se concentró el f¡ltrado resultante. Se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en capa f¡na preparat¡va (d¡clorometano:metanol, 5:1, v/v) para dar un producto (85 mg, rend¡m¡ento: 39,54 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,05 (s, 1H), 6,87-7,08 (d, 1H), 4,83 (d, 2H), 4,43 (s, 2H), 3,16 (s, 2H), 3,10 (d, 2H), 1,43 (s, 9H).
Fórmula molecular: C13H19FN4O, peso molecular: 266,32, CL-EM (m/z) = 267,24 [M+H]+.
Ejemplo 8: síntes¡s de clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-(4-fluorofen¡l)-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡na (compuesto A14)
Etapa 1: síntes¡s del producto ¡ntermed¡o (E)-(3-fluoro-2-((5-(4-fluorofen¡l)-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)al¡l)carbamato de terc-but¡lo
Se d¡solv¡ó el producto ¡ntermed¡o (E)-(3-fluoro-2-((4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)al¡l)carbamato de terc-but¡lo (200 mg, 0,62 mol, 1,0 eq) en A/,W-d¡met¡lacetam¡da (2 ml). Después, a la d¡soluc¡ón se le añad¡ó 1-fluoro-4-yodobenceno (412,9 mg, 1,86 mmol, 3,0 eq), carbonato de potas¡o anh¡dro (171,1 mg, 1,24 mmol, 2,0 eq) y yoduro cuproso (11,8 mg, 0,06 mmol, 0,1 eq), y se calentó hasta 130 °C en una atmósfera de n¡trógeno para reacc¡onar durante 16 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se enfr¡ó la d¡soluc¡ón de reacc¡ón hasta temperatura amb¡ente, se añad¡ó agua (20 ml) y se extrajo con acetato de et¡lo (20 ml * 3), segu¡do de la separac¡ón de líquidos. Se comb¡naron las fases orgán¡cas, se secaron sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro, y se f¡ltraron, y se concentró el f¡ltrado a pres¡ón reduc¡da. Se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en capa f¡na preparat¡va (MeOH:DCM = 1:20) para dar un producto (97 mg, rend¡m¡ento: 40,5 %). Etapa 2: síntes¡s del compuesto clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-(4-fluorofen¡l)-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡na
Se disolvió el producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((5-(4-fluorofenil)-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo (97 mg, 0,23 mmol, 1,0 eq) en una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol al 30 % (2 ml). Después, se agitó la disolución a temperatura ambiente durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de fase inversa (eluido con una disolución acuosa de ácido trifluoroacético al 0,5 %) y se liofilizó para dar un producto (25 mg, rendimiento: 30,6 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,37-8,35 (s, 4H), 7,39-7,34 (m, 2,5H), 7,25-7,19 (m, 2,5H), 4,94 (m, 2H), 3,96-3,93 (m, 2H), 3,39-3,38 (m, 2H), 3,00-2,97 (m, 2H).
Fórmula molecular: C16H16F2N4O, peso molecular: 318,33, CL-EM (Pos, m/z) = 319,13 [M+H]+.
Ejemplo 9: síntesis de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2-(3-fluorofenil)-1,2,6,7-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-c]piridin-3,4(5H)-diona (compuesto A19)
Etapa 1: síntesis de 5-ciclopropil-2-(3-fluorofenil)-1,2,6,7-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-c]piridin-3,4(5H)-diona
Se añadieron alcóxido de 1-ciclopropil-5-(etoxicarbonil)-6-oxo-1,2,3,6-tetrahidropiridin-4-sódico (1,0 g, 4,05 mmol) y clorhidrato de m-fluorofenilhidrazina (656,3 mg, 4,05 mmol) a etanol (10 ml). A continuación, se calentó la mezcla hasta 80 °C para reaccionar durante la noche. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió una disolución acuosa de ácido cítrico para ajustar el pH a 6-7. Se extrajo la fase acuosa con acetato de etilo. Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre sulfato de sodio anhidro, y se filtraron, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH = 40: 1-20:1) para dar un producto (440,0 mg, rendimiento: 37,8 %).
Etapa 2: síntesis de (E)-5-ciclopropil-1-(2-((1,3-dioxoisoindolin-2-il)metil)-3-fluoroalil)-2-(3-fluorofenil)-1,2,6,7-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-c]piridin-3,4(5H)-diona
Se añadieron 5-ciclopropil-2-(3-fluorofenil)-1,2,6,7-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-c]piridin-3,4(5H)-diona (440,0 mg, 1,54 mmol), (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (551,0 mg, 1,85 mmol) y carbonato de potasio (425,6 mg, 3,08 mmol) a DMA (8 ml). A continuación, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 12 h y se filtró a vacío, y se concentró el filtrado a presión reducida, se añadió acetato de etilo (50 ml), se lavó con agua (10 ml * 4) y salmuera saturada (10 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró. Se concentró el filtrado a presión reducida y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH = 200:1-40:1) para dar un producto (450,0 mg, rendimiento: 58,0 %).
Etapa 3: síntesis de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2-(3-fluorofenil)-1,2,6,7-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-c]piridin-3,4(5H)-diona
Se añadió (E)-5-ciclopropil-1-(2-((1,3-dioxoisoindolin-2-il)metil)-3-fluoroalil)-2-(3-fluorofenil)-1,2,6,7-tetrahidro-3H-pirazolo[4,3-c]piridin-3,4(5H)-diona (450,0 mg, 0,893 mmol) a etanol (5 ml) e hidrato de hidrazina (49 % en peso, 446,8 mg, 8,93 mmol). Después, se agitó la mezcla durante la noche a temperatura ambiente. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se filtró la disolución de reacción y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para dar un producto (100,0 mg, rendimiento: 29,9 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 7,95 (s, 2H), 7,57-7,47 (m, 3H), 7,38 (s, 0,5H), 7,29-7,24 (m, 1H), 7,18 (s, 0,5H), 5,19-5,18 (d, 2H), 3,61-3,58 (t, 2H), 3,57-3,51 (d, 2H), 2,85-2,81 (t, 2H), 2,73-2,69 (m, 1H), 0,79-0,76 (m, 2H), 0,69-0,66 (m, 2H).
Fórmula molecular: C19H20F2N4O2, peso molecular: 375,24, CL-EM (Pos, m/z) = 375,22 [M+H]+.
Ejemplo 10: síntesis de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-(ferc-butil)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A21)
Etapa 1: síntesis de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-(ferc-butil)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió (E)-2-(2-((5-(ferc-butil)-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (350 mg, 0,853 mmol, 1,0 eq) preparado en el ejemplo 4 en EtOH (15 ml). Después, se añadió hidrato de hidrazina (175,8 mg, 2,984 mmol, 3,5 eq) y se sometió a reflujo la reacción durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se filtró la disolución de reacción a vacío y se concentró el filtrado a presión reducida. A la disolución resultante se le añadió EA (20 ml), se sometió a reflujo y se filtró mientras estaba caliente. Después de enfriar, se filtró el filtrado a vacío y se concentró el filtrado resultante a presión reducida para dar el producto (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-(terc-butil)-1,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (192,2 mg, rendimiento: 80,0 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 7,63 (s, 1H), 6,78-6,99 (d, J=84 Hz, 1H), 4,70 (d, 2H), 3,56-3,59 (t, 2H), 3,04 3,05 (d, 2H), 2,90-2,94 (t, 2H), 1,43 (s, 9H).
Fórmula molecular: C14H21FN4O, peso molecular: 280,35, CL-EM (Pos, m/z) = 281,22 [M+H]+.
Ejemplo 11: síntesis de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (compuesto A22)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio 1-ciclopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se añadió 1-ciclopropilpiperidin-2,4-diona (2,50 g, 16,33 mmol, 1,0 eq) a 1,1-dimetoxi-A/,W-dimetilmetilamina (2,14 g, 17,95 mmol, 1,1 eq). Después, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 0,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se evaporó el exceso de 1,1-dimetoxi-A/,W-dimetilmetilamina a presión reducida para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 2: síntesis del producto intermedio ((1-ciclopropil-2,4-dioxopiperidin-3-iliden)metil)glicina
Se añadieron el producto en bruto 1-ciclopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (3,40 g, 16,33 mmol, 1,0 eq) obtenido en la etapa anterior, glicina (1,23 g, 16,33 mmol, 1,0 eq) y acetato de sodio (1,61 g, 19,59 mmol, 1,2 eq) a etanol (50 ml). A continuación, se agitó la mezcla a 50 °C hasta que se terminó la reacción. Se concentró la disolución de reacción para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 3: síntesis del producto intermedio 2-acetil-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se añadió ((1-ciclopropil-2,4-dioxopiperidin-3-iliden)metil)glicina (3,89 g, 16,33 mmol, 1,0 eq) a anhídrido acético (40 ml). Después, se agitó la mezcla a 120 °C durante 5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción y se vertió en una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (100 ml). Se añadió acetato de etilo (30 ml * 2) para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada (40 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 4: síntesis del producto intermedio 5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se añadieron sucesivamente 2-acetil-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (3,55 g, 16,33 mmol, 1,0 eq) y carbonato de potasio (4,51 g, 32,66 mmol, 2,0 eq) a un disolvente mixto de metanol (30 ml) y agua (30 ml). Después, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción, se añadió acetato de etilo (100 ml), se lavó sucesivamente con agua (30 ml) y salmuera saturada (30 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:1-0:1, v/v) para dar un producto (950 mg, rendimiento en cuatro etapas: 33,1 %).
Etapa 5: síntesis del producto intermedio (Z)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[3,4-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se añadieron 5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (900 mg, 5,11 mmol, 1,0 eq), carbonato de cesio (2,50 g, 7,66 mmol, 1,5 eq) y (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,67 g, 5,62 mmol, 1,1 eq) a acetonitrilo (30 ml). Después, se agitó la mezcla a 55 °C durante 16 h. Cuando quedó una pequeña cantidad de materiales, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró, y se lavó la torta de filtración con acetato de etilo (15 ml) y se concentró. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 1:1-0:1, v/v) para dar un producto (1,05 g, 2,67 mmol, rendimiento: 52,3 %).
Etapa 6: síntesis del compuesto (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se añadieron sucesivamente (Z)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirrolo[3,4-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (600 mg, 1,53 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina al 85 % (898 mg, 15,25 mmol, 10 eq) a etanol (15 ml). Después, se agitó la mezcla a 40 °C durante 5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró, y se lavó la torta de filtración con una pequeña cantidad de etanol. Se concentró el filtrado, se añadió etanol absoluto (10 ml) y se filtró, y se concentró el filtrado resultante. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (diclorometano:metanol, 5:1, v/v) para dar un producto (105 mg, rendimiento: 26,2 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 8,09 (s a, 2H), 7,30 (s, 1H), 7,31-7,10 (d, 1H), 6,66 (s, 1H), 4,70 (s, 2H), 3,37-3,41 (m, 2H), 3,20 (s, 2H), 2,60-2,63 (m, 3H), 0,69-0,74 (m, 2H), 0,55-0,56 (m, 2H).
Fórmula molecular: C14H18FN3O, peso molecular: 263,32, CL-EM (m/z) = 264,20 [M+H]+.
Ejemplo 12: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A23)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio (E)-2-(2-((5-(ferc-butil)-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio 5-(ferc-butil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (5,0 g, 25,87 mmol, 1,0 eq) en DMF (20 ml). En una atmósfera de nitrógeno, se enfrió la disolución hasta -10 °C y se añadió hidruro de sodio (1,14 g, 28,46 mmol, 1,1 eq, 60 %) para reaccionar durante 30 min. Después, a la disolución de reacción se le añadió lentamente gota a gota una disolución de (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (9,3 g, 31,04 mmol, 1,2 eq) en DMF (10 ml) para reaccionar durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, a la disolución de reacción se le añadió una disolución acuosa saturada de cloruro de amonio (100 ml) y se extrajo con acetato de etilo (100 ml * 3). Se lavó la fase orgánica con agua (100 ml * 3), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 1:1) para dar un producto (5,9 g, rendimiento: 59 %).
Etapa 2: síntesis del producto intermedio (E)-2-(3-fluoro-2-((4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(2-((5-(ferc-butil)-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (6,3 g, 15,34 mmol, 1,0 eq) en ácido clorhídrico concentrado (30 ml) y etanol (30 ml) para reaccionar a 60 °C durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. El producto en bruto se suspendió con acetato de etilo (50 ml) y se filtró a vacío para dar un producto (5,4 g, rendimiento: 99 %).
Etapa 3: síntesis del producto intermedio (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio (E)-2-(3-fluoro-2-((4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)isoindolin-1,3-diona (5,4 g, 15,24 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (3,05 g, 60,96 mmol, 4,0 eq) en etanol (100 ml) para reaccionar a 80 °C durante 1,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró. Se concentraron las aguas madres a presión reducida para dar un producto (3,4 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 4: síntesis del producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo
Se disolvieron el producto intermedio (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (3,4 g, 15,24 mmol, 1,0 eq), dicarbonato de di-ferc-butilo (6,65 g, 30,48 mmol, 2,0 eq), 4-dimetilaminopiridina (171 mg, 1,52 mmol, 0,1 eq) y trietilamina (2,31 g, 22,86 mmol, 1,5 eq) en diclorometano (50 ml) para reaccionar durante 2,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, a la disolución de reacción se le añadió una disolución acuosa saturada de carbonato de sodio (50 ml) y se extrajo con diclorometano (50 ml * 3). Se secó y se concentró la fase orgánica. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH:DCM = 1:60) para dar un producto (2,57 g, rendimiento: 51 %).
Etapa 5: síntesis del compuesto clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo (200 mg, 0,61 mmol, 1,0 eq) en etanol (2 ml). Después, a la disolución se le añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (2 ml) para reaccionar durante 2,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se suspendió el producto en bruto con acetato de etilo (5 ml) y se filtró a vacío, y se secó la torta de filtración para dar un producto (150 mg, rendimiento: 93 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 8,55 (s, 3H), 8,30 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,37 (s, 0,5H), 7,17 (s, 0,5H), 4,97 (s, 2H), 3,35-3,38 (m, 2H), 3,31-3,33 (d, 2H), 2,72-2,76 (m, 2H).
Fórmula molecular: C10H13FN4O, peso molecular: 224,24, CL-EM (Pos, m/z) = 225,16 [M+H]+.
Ejemplo 13: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-metil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A24)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((5-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo
Se disolvió el producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo (500 mg, 1,54 mmol, 1,0 eq) en tetrahidrofurano (5 ml). Después, a la disolución se le añadió hidruro de sodio (80 mg, 2,0 mmol, 1,3 eq, 60 %) para reaccionar a temperatura ambiente durante 30 min. A la disolución de reacción se le añadió yodometano (263 mg, 1,85 mmol, 1,2 eq) para reaccionar durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se añadió agua (5 ml) al matraz de reacción y se añadió acetato de etilo (10 ml * 3) para la extracción. Se secó y se concentró la fase orgánica. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH:DCM = 1:80) para dar un producto (100 mg, rendimiento: 19 %).
Etapa 2: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-(3-fluoro-2-((5-metil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)carbamato de ferc-butilo (100 mg, 0,29 mmol, 1,0 eq) en etanol (1 ml). Después, a la disolución se le añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (1 ml) para reaccionar durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar un producto (55 mg, rendimiento: 69 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,41 (s, 3H), 8,25 (s, 1H), 7,37 (s, 0,5H), 7,16 (s, 0,5H), 4,91-4,92 (d, 2H), 3,52-3,56 (m, 2H), 3,33-3,35 (d, 2H), 2,92 (s, 3H), 2,83-2,85 (m, 2H).
Fórmula molecular: C11H15FN4O, peso molecular: 238,27, CL-EM (Pos, m/z) = 239,19 [M+H]+.
Ejemplo 14: síntesis de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (compuesto A25)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio 3-(etilamino)propionato de etilo
Se disolvió una disolución acuosa de etilamina al 65 % (29,1 g, 419,51 mmol, 1,4 eq, 65 %) en etanol (100 ml). Después, a la disolución se le añadió gota a gota (1,5 h) una disolución de acrilato de etilo (30,00 g, 299,65 mmol, 1,0 eq) en etanol (20 ml). Después de la adición, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 1 h. Se concentró la disolución de reacción para dar un producto (42,0 g, rendimiento: 96,5 %).
Etapa 2: síntesis del producto intermedio 3-((3-etoxi-3-oxopropil)(etil)amino)-3-oxopropionato de etilo
Se añadieron sucesivamente el producto intermedio 3-(etilamino)propionato de etilo (20,0 g, 137,74 mmol, 1,0 eq), malonato de monoetilo (18,20 g, 137,74 mmol, 1,0 eq), trietilamina (32,06 g, 316,80 mmol, 2,3 eq) y DMAP (3,37 g, 27,55 mmol, 0,2 eq) a D<c>M (500 ml), y a continuación se añadió EDCI (31,69 g, 165,29 mmol, 1,2 eq) en lotes. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante la noche. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se vertió la disolución de reacción en agua (300 ml) y se ajustó el pH a 3-4 con ácido clorhídrico 3 mol/l, seguido de la separación de líquidos. Se lavó la fase orgánica sucesivamente con agua (150 ml * 2) y salmuera saturada (300 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado para dar un producto (29,0 g, rendimiento: 81,2 %).
Etapa 3: síntesis del producto intermedio 1-etil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo
Se añadió sodio (5,14 g, 223,68 mmol, 2,0 eq) a etanol (150 ml) y se agitó la mezcla hasta que se terminó la reacción. A continuación, se añadió 3-((3-etoxi-3-oxopropil)(etil)amino)-3-oxopropionato de etilo (29,0 g, 118,84 mmol, 1,0 eq) a la disolución de etóxido de sodio en etanol. Después de la adición, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 4: síntesis del producto intermedio 1-etilpiperidin-2,4-diona
Se añadió en lotes 1-etil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo (23,85 g, 111,84 mmol, 1,0 eq) a ácido clorhídrico 2 mol/l (300 ml). Después, se calentó la mezcla hasta 100 °C para reaccionar durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se extrajo con DCM (150 ml * 3). Se lavó la fase orgánica sucesivamente con agua (100 ml) y salmuera saturada (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado para dar un producto (12,0 g, rendimiento en dos etapas: 76,0 %).
Etapa 5: síntesis del producto intermedio 1-etil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se añadió el producto intermedio 1-etilpiperidin-2,4-diona (6,00 g, 42,50 mmol, 1,0 eq) a 1,1-dimetoxi-A/,W-dimetilmetilamina (5,32 g, 44,63 mmol, 1,05 eq). Después, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 0,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 6: síntesis del producto intermedio ((1-etil-2,4-dioxopiperidin-3-iliden)metil)glicina
Se añadieron el producto intermedio 1-etil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (8,85 g, 42,49 mmol, 1,0 eq), glicina (3,19 g, 42,49 mmol, 1,0 eq) y acetato de sodio (4,18 g, 50,99 mmol, 1,2 eq) a etanol (100 ml). A continuación, se agitó la mezcla a 50 °C hasta que se terminó la reacción. Se concentró la disolución de reacción para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 7: síntesis del producto intermedio 2-acetil-5-etil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se añadió el producto intermedio ((1-etil-2,4-dioxopiperidin-3-iliden)metil)glicina (10,12 g, 42,49 mmol, 1,0 eq) a anhídrido acético (80 ml). Después, se agitó la mezcla a 120 °C durante 5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción y se vertió el residuo en una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 ml). Se añadió acetato de etilo (50 ml * 3) para la extracción. Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada (100 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado para dar un producto en bruto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 8: síntesis del producto intermedio 5-etil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se añadieron sucesivamente el producto intermedio 2-acetil-5-etil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (8,76 g, 42,49 mmol, 1,0 eq) y carbonato de potasio (11,74 g, 84,98 mmol, 2,0 eq) a un disolvente mixto de metanol (50 ml) y agua (50 ml). Después, se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción, se añadió acetato de etilo (200 ml), se lavó sucesivamente con agua (50 ml) y salmuera saturada (50 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo:éter de petróleo, 1:1-1:0, v/v) para dar un producto (2,2 g, rendimiento en cuatro etapas: 31,53 %).
Etapa 9: síntesis del producto intermedio (Z)-2-(2-((5-etil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirrolo[3,4-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se añadieron 5-etil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (1,5 g, 9,13 mmol, 1,0 eq), carbonato de cesio (4,46 g, 13,70 mmol, 1,5 eq) y (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (3,00 g, 10,05 mmol, 1,1 eq) a DMA (20 ml). Después, se agitó la mezcla a 55 °C durante 16 h. Cuando quedó una pequeña cantidad de materiales, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró, y se enjuagó la torta de filtración con acetato de etilo (40 ml). Se lavó la fase orgánica sucesivamente con agua (20 ml * 2) y salmuera saturada (20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo) para dar un producto (1,45 g, rendimiento: 41,6 %).
Etapa 10: síntesis del compuesto (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se añadieron sucesivamente (Z)-2-(2-((5-et¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroalil)isoindoMn-1,3-diona (1,45 g, 3,80 mmol, 1,0 eq) e h¡drato de h¡draz¡na al 85 % (1,12 g, 19,01 mmol, 5 eq) a etanol (20 ml). Después, se ag¡tó la mezcla a 40 °C durante 15 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se enfr¡ó la d¡soluc¡ón de reacc¡ón hasta temperatura amb¡ente y se f¡ltró, y se enjuagó la torta de f¡ltrac¡ón con una pequeña cant¡dad de etanol. Se concentró el f¡ltrado, se añad¡ó etanol absoluto (10 ml) y se f¡ltró, y se concentró el f¡ltrado resultante para dar un producto en bruto (750 mg) y se pur¡f¡caron 375 mg del producto en bruto med¡ante cromatografía en capa f¡na preparat¡va (d¡clorometano: metanol, 5:1, v/v) para dar un producto (85 mg, rend¡m¡ento: 17,8 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 7,22 (s, 1H), 6,96-7,17 (d, 1H), 6,61 (s, 1H), 4,58 (d, 2H), 3,37-3,44 (m, 4H), 3,13 (d, 2H), 2,65-2,68 (t, 2H), 1,02-1,06 (t, 3H).
Fórmula molecular: C13H18FN3O, peso molecular: 251,31, CL-EM (m/z) = 252,28 [M+H]+.
Ejemplo 15: síntes¡s de (E)-1-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-(terc-but¡l)-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-4(1H)-ona (compuesto A26)
Etapa 1: síntes¡s del compuesto (E)-1-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-(terc-but¡l)-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-4(1H)-ona
Se añad¡eron suces¡vamente (E)-2-(2-((5-(terc-but¡l)-4-oxo-5,6-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-1(4H)-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)¡so¡ndol-1,3-d¡ona (100 mg, 0,25 mmol, 1,0 eq) preparado en el ejemplo 7 e h¡drato de h¡draz¡na al 85 % (59 mg, 1,01 mmol, 4,0 eq) a etanol (5,0 ml). Después, se ag¡tó la mezcla a 40 °C durante 5 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se enfr¡ó la d¡soluc¡ón de reacc¡ón hasta temperatura amb¡ente y se f¡ltró, y se enjuagó la torta de f¡ltrac¡ón con una pequeña cant¡dad de etanol. Se concentró el f¡ltrado, se añad¡ó etanol absoluto (3,0 ml) y se f¡ltró, y se concentró el f¡ltrado resultante. Se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en capa f¡na preparat¡va (d¡clorometano:metanol, 5:1, v/v) para dar un producto (35 mg, rend¡m¡ento: 52,1 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 7,58 (s, 1H), 7,02-7,23 (d, 1H), 4,85 (d, 2H), 4,54 (s, 2H), 3,26 (d, 2H), 1,43 (m, 9H).
Fórmula molecular: C13H19FN4O, peso molecular: 266,32, CL-EM (m/z) = 267,22 [M+H]+.
Ejemplo 16: síntes¡s de clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-¡soprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-4-ona (compuesto A27)
Etapa 1: síntesis de 3-(isopropilamino)propionato de etilo
Se disolvió el material isopropilamina (7,09 g, 0,12 mol, 1,2 eq) en etanol (20 ml). A continuación, a la disolución se le añadió lentamente gota a gota acrilato de etilo (10 g, 0,1 mol, 1,0 eq) en un baño con hielo para reaccionar durante 12 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar un producto (15 g, rendimiento: 94 %).
Etapa 2: síntesis de 3-(isopropil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-(isopropilamino)propionato de etilo (15 g, 94,2 mmol, 1,0 eq), malonato de monoetilo (12,44 g, 94,2 mmol, 1,0 eq), 4-dimetilaminopiridina (2,3 g, 18,84 mmol, 0,2 eq) y trietilamina (21,9 g, 220 mmol, 2,3 eq) en diclorometano (150 ml), y se agitó la disolución durante 10 min. Después, se añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (21,66 g, 113 mmol, 1,2 eq) en lotes en un baño con hielo. Después de la adición, la disolución se hizo reaccionar a temperatura ambiente durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadieron agua y ácido clorhídrico concentrado (4:1, 150 ml) y se agitó la mezcla durante 10 min, seguido de la separación de líquidos. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (100 ml x 2). Se combinaron las fases orgánicas, se lavaron sucesivamente con una disolución acuosa saturada de carbonato de sodio (150 ml) y agua (150 ml x 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado a presión reducida para dar un producto (17,25 g, rendimiento: 67 %).
Etapa 3: síntesis de 1-isopropil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-(isopropil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo (17,25 g, 63,11 mmol, 1,0 eq) y etóxido de sodio (8,59 g, 126 mmol, 2,0 eq) en etanol (100 ml) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (14,34 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 4: síntesis de 1-isopropilpiperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-isopropil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo (14,23 g, 63,11 mmol, 1,0 eq) en agua (80 ml) y ácido clorhídrico concentrado (20 ml) para reaccionar a 110 °C durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se extrajo con diclorometano (100 ml *3). Se secó y se concentró la fase orgánica para dar un producto (7,14 g, rendimiento: 72 %).
Etapa 5: síntesis de 1-isopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-isopropillpiperidin-2,4-diona (7,14 g, 46 mmol, 1,0 eq) en W,A/-dimetilformamida dimetilacetal (6,03 g, 50,6 mmol, 1,1 eq) para reaccionar durante 0,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar un producto (9,67 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 6: síntesis de 5-isopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio 1-isopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (9,67 g, 46 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (2,506 g, 50,06 mmol, 1,1 eq) en metanol (50 ml) para reaccionar a 60 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. Se recristalizó el producto en bruto con acetato de etilo (80 ml) y se filtró a vacío, y se secó la torta de filtración para dar un producto (4,5 g, rendimiento: 54 %).
Etapa 7: síntesis de (E)-2-(2-((5-isopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio 5-isopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (300 mg, 1,67 mmol, 1.0 eq) en DMF (1,5 ml). Después, a la disolución se le añadió NaH (87 mg, 2,21 mmol, 1,3 eq), se agitó durante 30 min y, luego se añadió gota a gota una disolución de (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (599 mg, 2.0 mmol, 1,2 eq) en DMF (1,5 ml) para reaccionar durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, a la disolución de reacción se le añadió agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml * 2). Se lavó la fase orgánica con agua (20 ml * 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 1:2) para dar un producto (200 mg, rendimiento: 30 %).
Etapa 8: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-isopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(2-((5-isopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (200 mg, 0,5 mmol, 1,0 eq) en EtOH (2 ml). Después, a la disolución se le añadió hidrato de hidrazina (88 mg, 1,75 mmol, 3,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se filtró la disolución de reacción y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para dar un líquido oleoso. Al líquido oleoso se le añadió metanol (2 ml), seguido de una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (0,15 ml), se agitó durante 5 min y se concentró a presión reducida para dar un producto (60 mg, rendimiento: 39 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,24 (s, 3H), 8,20 (s, 1H), 7,36 (s, 0,5H), 7,16 (s, 0,5H), 4,86-4,87 (d, 2H), 4,73-4,80 (m, 1H), 3,40-3,44 (m, 2H), 3,34 (s, 2H), 2,77-2,79 (m, 2H), 1,11 (s, 3H), 1,09 (s, 3H).
Fórmula molecular: C13H20CFN4O, peso molecular: 302,78, CL-EM (Pos, m/z) = 267,28 [M+H]+.
Ejemplo 29: preparación de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A28) y clorhidrato de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-1,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A29)
Etapa 1: síntesis de 4-cloro-2-(4-metoxibencil)-2H-pirazolo[4,3-c]piridina
Se disolvieron los materiales 4-cloro-2H-pirazolo[4,3-c]piridina (5,0 g, 32,55 mmol, 1,0 eq), cloruro de 4-metoxibencilo (5,58 g, 35,81 mmol, 1,1 eq) y carbonato de potasio (8,98 g, 65,1 mmol, 2,0 eq) en DMF (30 ml) para reaccionar a temperatura ambiente durante 1,5 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CL-EM, se vertió la disolución de reacción en agua (50 ml) y se añadió acetato de etilo (80 ml * 2) para la extracción, y se lavó la fase orgánica con agua (100 ml * 2), se secó y se concentró para dar el producto (8,9 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 2: síntesis del producto intermedio 2-(4-metoxibencil)-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio 4-cloro-2-(4-metoxibencil)-2H-pirazolo[4,3-c]piridina (8,9 g, 32,51 mmol, 1,0 eq) en ácido acético (80 ml) y agua (20 ml) para reaccionar a 100 °C durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida, se suspendió el producto en bruto con metil ferc-butil éter (100 ml) y se filtró a vacío para dar el producto (8,3 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 3: síntesis de 5-etil-2-(4-metoxibencil)-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio 2-(4-metoxibencil)-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (8,3 g, 32,51 mmol, 1,0 eq) e hidruro de sodio (1,95 g, 48,76 mmol, 1,5 eq) en DMF (80 ml). Se agitó la mezcla durante 30 min y se añadió gota a gota yodoetano (7,6 g, 48,76 mmol, 1,5 eq) para reaccionar a 60 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se añadió lentamente agua (80 ml) al frasco y se realizó la extracción con acetato de etilo (100 ml * 4). Se lavó la fase orgánica con agua (200 ml * 4), se secó y se concentró a presión reducida, y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 1:1) para dar el producto (5,0 g, rendimiento: 54 %).
Etapa 4: síntesis del producto intermedio 5-etil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio 5-etil-2-(4-metoxibencil)-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (5,0 g, 17,64 mmol, 1,0 eq) en ácido trifluoroacético (50 ml) para reaccionar a 75 °C durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó primero el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 1:1), luego se suspendió con metil ferc-butil éter (10 ml) y se filtró a vacío para dar el producto (1,1 g, rendimiento: 38 %).
Etapa 5: síntesis de (E)-2-(2-((5-etil-4-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona y (E)-2-(2-((5-etil-4-oxo-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio 5-etil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (500 mg, 3,06 mmol, 1,0 eq) en DMF (3 ml). A la disolución se le añadió NaH (159 mg, 3,98 mmol, 1,3 eq), se agitó durante 30 min y, después, se añadió gota a gota una disolución de (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,004 g, 3,37 mmol, 1,1 eq) en DMF (2 ml) para reaccionar durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, a la disolución de reacción se le añadió agua (10 ml) y se extrajo con acetato de etilo (20 ml * 2), seguido de la separación de líquidos. Se lavó la fase orgánica con agua (20 ml * 2), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró y se concentró a presión reducida. Se suspendió el producto en bruto con metil ferc-butil éter (10 ml) y se filtró a vacío para dar una mezcla de (E)-2-(2-((5-etil-4-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona y (E)-2-(2-((5-etil-4-oxo-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)-isoindolin-1,3-diona (390 mg).
Etapa 6: preparación de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona y clorhidrato de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-1,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron (E)-2-(2-((5-et¡l-4-oxo-4,5-d¡h¡dro-2H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡din-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona y (E)-2-(2-((5-et¡l-4-oxo-4,5-d¡h¡dro-1H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-1-¡l)met¡l)-3-fluoroalil)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona (390 mg, 1,o2 mmol, 1,0 eq) en EtOH (8 ml). A la disolución se le añadió hidrato de hidrazina (178 mg, 3,57 mmol, 3,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró a vacío, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó primero el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) y al producto obtenido se le añadió metanol (1 ml) para su disolución. Después, a la disolución se le añadió gota a gota una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (0,015 ml), se agitó durante 5 min, y se concentró a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (diclorometano:¡sopropanol:amoníaco = 10:1:0,5) para dar clorhidrato de (E)-2-(2-(aminomet¡l)-3-fluoroalil)-5-et¡l-2,5-dih¡dro-4H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡din-4-ona (18 mg, rendimiento: 6,1 %) con un valor Rf bajo, que es un clorhidrato del compuesto A28,
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,65 (s, 1H), 8,27 (s, 3H), 7,44 (s, 0,5H), 7,35-7,37 (d, 1H), 7,24 (s, 0,5H), 6,48-6,50 (m, 1H), 5,07-5,08 (d, 2H), 3,88-3,90 (m, 2H), 3,38-3,39 (m, 2H), 1,17-1,21 (m, 3H).
Fórmula molecular: C12H16CFN4O, peso molecular: 286,74, CL-EM (Pos, m/z) = 251,21 [M+H]+.
y clorhidrato de (E)-1-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-etil-1,5-d¡h¡dro-4H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-4-ona (13 mg, rendimiento: 4,4 %) con un valor Rf alto, que es un clorhidrato del compuesto A29.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 8,38 (s, 3H), 8,10 (s, 1H), 7,62-7,64 (d, 1H), 7,36 (s, 0,5 H), 7,16 (s, 0,5H), 6,90-6,91 (d, 1H), 5,06-5,10 (d, 2H), 3,95-3,97 (m, 2H), 3,38-3,39 (m, 2H), 1,19-1,23 (m, 3H).
Fórmula molecular: C12H16CFN4O, peso molecular: 286,74, CL-EM (Pos, m/z) = 251,19 [M+H]+.
Ejemplo 30: síntesis de clorhidrato de (E)-1-(2-(am¡nometil)-3-fluoroal¡l)-5-et¡l-4,5-d¡h¡drop¡rrolo[3,4-c]p¡razol-6(1H)-ona (compuesto A31)
Etapa 1: síntesis (E)-2-(2-carbamoilhidrazono)propionato de etilo
Se disolvieron los materiales 2-oxopropionato de etilo (21 g, 0,18 mol, 1,0 eq) y clorhidrato de semicarbazida (20 g, 0,18 mol, 1,0 eq) en agua (150 ml). A la disolución se le añadió acetato de sodio (29 g, 0,35 mol, 1,9 eq) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se filtró la disolución de reacción a vacío y se lavó la torta de filtración con una pequeña cantidad de agua y se secó para dar el producto (29 g, rendimiento: 94 %) que se utilizó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 2: síntesis de 4-fonri¡MH-p¡razol-5-carbox¡lato de etilo
En un baño con hielo, se añadió gota a gota oxicloruro de fósforo (32,8 ml) a DMF (71,3 ml). Después de la adición, se retiró el baño con hielo y se incubó la mezcla a temperatura ambiente y se agitó durante 30 min. Se calentó la disolución de reacción hasta 40 °C y se añadió (£)-2-(2-carbamoilhidrazono)propionato de etilo (26,6 g, 0,154 mol, 1,0 eq). Después de la adición, se calentó la mezcla hasta 80 °C para reaccionar durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se vertió la disolución de reacción en agua con hielo y se ajustó el pH de la disolución a 10 con una disolución acuosa de hidróxido de sodio (fracción en masa: 50 %) con agitación. Se calentó la disolución acuosa hasta 50 °C hasta que se produjo una disolución completa, se ajustó el pH de la disolución a 7 con ácido clorhídrico concentrado en un baño con hielo y se realizó la extracción con acetato de etilo (2 * 200 ml). Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron, y se suspendió el producto en bruto con DCM para dar el producto (14 g, rendimiento: 66 %).
Etapa 3: síntesis de 4-form¡l-1-(4-metox¡benc¡l)-1H-p¡razol-5-carbox¡lato de etilo
Se disolvió el producto intermedio 4-formil-1H-pirazol-5-carboxilato de etilo (10,5 g, 0,06 mol, 1,0 eq) en DMF (60 ml). A la disolución se le añadieron carbonato de potasio (25,9 g, 0,18 mol, 3,0 eq) y cloruro de p-metoxibencilo (12,2 g, 0,078 mol, 1,3 eq) y se agitó a temperatura ambiente durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (200 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 * 200 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada (2 * 200 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró a vacío y se concentró, y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (EA:PE = 0-1:2) para dar el producto (12,5 g, rendimiento: 69 %).
Etapa 4: síntesis de 4-((et¡lam¡no)met¡l)-1-(4-metox¡benc¡l)-1H-p¡razol-5-carbox¡lato de etilo
Se disolvió clorhidrato de etilamina (4,0 g, 48,4 mmol, 4,0 eq) en MeOH (20 ml). A la disolución se le añadió trietilamina (4,9 g, 48,4 mmol, 4,0 eq) y se agitó durante 10 min. A la disolución de reacción se le añadieron 4-formil-1-(4-metox¡benc¡l)-1H-p¡razol-5-carbox¡lato de etilo (3,5 g, 12,1 mmol, 1,0 eq) y ácido acético (0,5 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. A la disolución de reacción se le añadió cianoborohidruro de sodio (2,3 g, 36,3 mmol, 3,0 eq) para reaccionar a temperatura ambiente durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se ajustó el pH de la disolución a 10 con una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se realizó la extracción con DCM (2 * 30 ml). Se lavó la fase orgánica con salmuera saturada (2 * 20 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró a vacío y se concentró para dar el producto (4,3 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 5: síntesis de ácido 4-((et¡lam¡no)met¡l)-1-(4-metox¡benc¡l)-1H-p¡razol-5-carboxíl¡co
Se disolvió el producto intermedio 4-((et¡lam¡no)met¡l)-1-(4-metox¡benc¡l)-1H-p¡razol-5-carbox¡lato de etilo (4,3 g de producto en bruto, 13,5 mmol, 1,0 eq) en MeOH (20 ml) y agua (20 ml). A la disolución se le añadió hidróxido de litio monohidrato (1,7 g, 40,6 mmol, 3,0 eq) y se agitó a 50 °C durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se ajustó el pH de la disolución a 2 con 2 mol/l de disolución acuosa de ácido clorhídrico y se realizó la liofilización para dar el producto (5 g de producto en bruto, rendimiento: 100 %).
Etapa 6: síntesis de 5-etil-1-(4-metoxibencil)-4,5-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-6(1H)-ona
Se disolvió el producto intermedio ácido 4-((etilamino)metil)-1-(4-metoxibencil)-1H-pirazol-5-carboxílico (5,0 g de producto en bruto, 17,28 mmol, 1,0 eq) en d Mf (30 ml). A la disolución se le añadieron HATU (8,5 g, 22,46 mmol, 1,9 eq) y DIPEA (6,7 g, 51,84 mmol, 3,0 eq) y se agitó durante 1,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, a la disolución de reacción se le añadió agua (50 ml), se extrajo con acetato de etilo (2 * 50 ml) y se concentró, y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 20:1) para dar el producto (1,4 g, rendimiento en tres etapas: 30 %).
Etapa 7: síntesis de 5-etil-4,5-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-6(1H)-ona
Se disolvió el producto intermedio 5-etil-1-(4-metoxibencil)-4,5-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-6(1H)-ona (1,4 g, 5,16 mmol, 1,0 eq) en TFA (8 ml). A la disolución se le añadió anisol (0,15 ml) y se agitó a 80 °C durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 20:1) para dar el producto (560 mg, rendimiento: 72 %).
Etapa 8: síntesis de (E)-2-(2-((5-etil-6-oxo-5,6-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-1(4H)-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvió el producto intermedio 5-etil-4,5-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-6(1H)-ona (560 mg, 3,7 mmol, 1,0 eq) en DMF (10 ml). A la disolución se le añadieron carbonato de potasio (1,5 g, 11,1 mmol, 3,0 eq) y (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,3 g, 4,4 mmol, 1,2 eq) y se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (30 ml) y se extrajo con acetato de etilo (2 * 30 ml). Se secó la fase orgánica sobre sulfato de sodio anhidro, se filtró a vacío y se concentró, y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 20:1) para dar el producto (300 mg, rendimiento: 22 %).
Etapa 9: Síntesis de clorhidrato de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-etil-4,5-dihidropirrolo[3,4-c]pirazol-6(1H)-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(2-((5-etil-6-oxo-5,6-dihidropirrol[3,4-c]pirazol-1(4H)-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (300 mg, 0,814 mmol, 1,0 eq) en EtOH (5 ml). A la disolución se le añadió hidrato de hidrazina (203,8 mg, 4,072 mmol, 5,0 eq) y se agitó a 45 °C durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente. Se separó por filtración el sólido y se concentró el filtrado. Se separó por filtración nuevamente el sólido y se concentró el filtrado. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 5:1). Se disolvió el aceite obtenido en DCM (3 ml) y a la disolución se le añadió gota a gota una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (1 ml). Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución para dar el producto (90 mg, rendimiento: 40 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-cfe) 8 (ppm): 8,35 (s, 3H), 7,54 (s, 1H), 7,31 (s, 0,5H), 7,11 (s, 0,5H), 4,99 (d, 2H), 4,23 4,29 (d, 2H), 3,46-3,47 (d, 4H), 1,16 (m, 3H).
Fórmula molecular: C11H16CFN4O, peso molecular: 238,27, CL-EM (m/z) = 239,21 [M+H]+.
Ejemplo 31: síntesis de clorhidrato de(E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-1-bromo-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (compuesto A32)
Etapa 1: síntesis del producto intermedio 1-ciclopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se añadió 1-ciclopropilpiperazin-2,4-diona (50 g, 326,6 mmol, 1 eq) a 1,1-dimetoxi-W,A/-dimetilmetilamina (42,8 g, 359 mmol, 1,1 eq) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 0,5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se usó la disolución de reacción directamente en la siguiente etapa.
Etapa 2: síntesis del producto intermedio ((1-ciclopropil-2,4-dioxopiperidin-3-iliden)metil)glicina
Se disolvió la disolución de 1-ciclopropil-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona obtenida en la etapa anterior en etanol (1000 ml). A la disolución se le añadieron glicina (24,5 g, 326,6 mmol, 1 eq) y acetato de sodio (32,2 g, 391,8 mmol, 1,2 eq) y se calentó hasta 50 °C para reaccionar durante 6 h. Tras terminar la reacción, se realizó la concentración para dar el producto que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 3: síntesis del producto intermedio 2-acetil-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se añadió el producto en bruto ((1-ciclopropil-2,4-dioxopiperidin-3-iliden)metil)glicina obtenido en la etapa anterior a anhídrido acético (1000 ml) y se calentó la mezcla hasta 120 °C para reaccionar durante 5 h. Tras terminar la reacción, se eliminó el anhídrido acético por concentración, se vertió el concentrado en una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio y se ajustó el pH para que fuera neutro. Se realizó la extracción con acetato de etilo (300 ml * 4). Se combinaron las fases orgánicas, se secaron y se concentraron para dar el producto (calculado según el rendimiento teórico) que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 4: síntesis del producto intermedio 5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto en bruto 2-acetil-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona en metanol (300 ml). A la disolución se le añadió una disolución de carbonato de potasio (33,9 g, 464,3 mmol, 1,5 eq) en agua (300 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 20 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se realizó la concentración para eliminar el metanol, se ajustó el pH a una acidez débil y se realizó la extracción con acetato de etilo. Se combinaron las fases orgánicas, se secaron y se concentraron para dar un producto en bruto (37,8 g). Se sometió el producto en bruto a cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo:éter de petróleo, 1:1-1:0, v/v) para dar el producto (13,05 g, rendimiento en cuatro etapas: 21,4 %).
Etapa 5: síntesis del producto intermedio 1-bromo-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se disolvió 5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (3 g, 17 mmol, 1 eq) en DCM (50 ml). A la disolución se le añadió NBS (3 g, 17 mmol, 1 eq) lote a lote en un baño con agua y hielo para reaccionar a 0 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se lavó secuencialmente la disolución de reacción con agua (50 ml) y salmuera saturada (50 ml). Se secó y se concentró la fase orgánica para dar un producto en bruto (4,47 g) que se sometió a cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 3:1, v/v) para dar el producto (2,82 g, rendimiento: 65,6 %).
Etapa 6: síntesis del producto intermedio (E)-(2-((1-bromo-5-ciclopropil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirrolo[3,4-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)carbamato de ferc-butilo
Se disolvió 1-bromo-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (2,14 g, 8,37 mmol, 1 eq) en THF anhidro (40 ml). Se añadió lentamente NaH (670 mg, 16,74 mmol) lote a lote en un baño de agua con hielo. Después de la adición, se agitó la mezcla a 0 °C durante 30 min y se añadió (£)-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)carbamato de ferc-butilo (2,34 g, 8,74 mmol, 1,05 eq) para reaccionar a temperatura ambiente durante 40 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se añadió una disolución acuosa saturada de cloruro de amonio para extinguir la reacción. Se lavó secuencialmente la fase orgánica con agua y salmuera saturada, se secó y se concentró para dar un producto en bruto (3,89 g). Se sometió el producto en bruto a cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de etilo = 4:1 -3:1, v/v) para dar un producto (1,77 g, rendimiento: 47,8 %).
Etapa 7: síntesis del compuesto clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-1-bromo-5-ciclopropil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se disolvió (E)-(2-((1-bromo-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroalil)carbamato de ferc-but¡lo (350 mg, 0,791 mmol, 1 eq) en una d¡soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en etanol (12 ml) y se agitó la mezcla hasta que se term¡nó la reacc¡ón. Se concentró la d¡soluc¡ón de reacdón y se real¡zó la l¡of¡l¡zac¡ón para dar el producto (134 mg, rend¡m¡ento: 49,6 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,41 (s a, 3H), 7,55 (s, 1H), 7,30-7,02 (d, 1H), 4,76 (d, 2H), 3,42-3,47 (m, 2H), 3,29-3,30 (m, 2H), 2,56-2,65 (m, 3H), 0,71-0,77 (m, 2H), 0,56-0,60 (m, 2H).
Fórmula molecular: C-MH-izBrFNaO, peso molecular: 342,21, CL-EM (m/z) = 343,92 [M+H]+.
Ejemplo 32: síntes¡s de clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-1,3-d¡bromo-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (Compuesto A33)
Etapa 1: síntes¡s de 1,3-d¡bromo-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona
Se d¡solv¡ó 5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (3 g, 17 mmol, 1 eq) en DCM (50 ml). A la d¡soluc¡ón se le añad¡ó NBS (6 g, 34 mmol, 2 eq) lote a lote en un baño con agua y h¡elo para reacc¡onar a temperatura amb¡ente durante 20 m¡n. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se lavó secuenc¡almente la d¡soluc¡ón de reacc¡ón con agua (50 ml) y salmuera saturada (50 ml). Se secó y se concentró la fase orgán¡ca para dar un producto en bruto (6,03 g) que se somet¡ó a cromatografía en columna de gel de síl¡ce (éter de petróleo:acetato de et¡lo = 5:1-4:1, v/v) para dar el producto (3,33 g, rend¡m¡ento: 58,4 %).
Etapa 2: síntes¡s de (E)-(2-((1,3-d¡bromo-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de terc-but¡lo
Se d¡solv¡ó 1,3-d¡bromo-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (3,83 g, 11,4 mmol, 1,0 eq) en THF anh¡dro (60 ml). Se añad¡ó lentamente NaH (912 mg, 22,8 mmol, 2,0 eq) en un baño con agua y h¡elo. Después de la ad¡c¡ón, se agitó la mezcla a 0 °C durante 30 m¡n y se añad¡ó (E)-(2-(bromomet¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de ferc-but¡lo (3,06 g, 11,4 mmol, 1,0 eq) para reacc¡onar a temperatura amb¡ente durante 40 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se añad¡ó una d¡soluc¡ón acuosa saturada de cloruro de amon¡o para ext¡ngu¡r la reacc¡ón. Se lavó secuenc¡almente la fase orgán¡ca con agua y salmuera saturada, se secó y se concentró para dar un producto en bruto (6,17 g). Se somet¡ó el producto en bruto a cromatografía en columna de gel de sílice (éter de petróleo:acetato de et¡lo = 4:1-2:1, v/v) para dar el producto (3,98 g, rend¡m¡ento: 67,5 %).
Etapa 3: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-1,3-d¡bromo-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-pirrolo[3,4-c]piridin-4-ona
Se d¡solv¡ó (E)-(2-((1,3-d¡bromo-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de terc-but¡lo (400 mg, 0,767 mmol, 1 eq) en una d¡soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en etanol (12 ml) y se ag¡tó la mezcla hasta que se term¡nó la reacc¡ón. Se concentró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón y se real¡zó la l¡of¡l¡zac¡ón para dar el producto (103 mg, rend¡m¡ento: 31,9 %).
1H-RMN(300 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,53 (s a, 3H), 6,58-6,85 (d, 1H), 4,81-4,82 (d, 2H), 3,43-3,45 (m, 4H), 2,60 2,62 (m, 3H), 0,71 -0,78 (m, 2H), 0,56-0,61 (m, 2H).
Fórmula molecular: C-<m>H-^B^F^O, peso molecular: 421,11, CL-EM (m/z) = 421,94 [M+H]+.
Ejemplo 33: síntes¡s del compuesto clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-c¡cloprop¡l-1-met¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (Compuesto A35)
Etapa 1: síntes¡s del producto ¡ntermed¡o (E)-(2-((5-c¡cloprop¡l-1-met¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de terc-but¡lo
Se colocaron (E)-(2-((1-bromo-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de terc-but¡lo (500 mg, 1,13 mmol, 1 eq), fosfato de potas¡o (720 mg, 3,39 mmol, 3 eq), ác¡do met¡lborón¡co (271 mg, 4,52 mmol, 4 eq) y tr¡c¡clohex¡lfosf¡na (31,7 mg, 0,113 mmol, 0,1 eq) en un tubo de m¡croondas y se añad¡ó tolueno (30 ml). Después de real¡zar el burbujeo con N2 durante 5 m¡n, se añad¡ó Pd2(dba)3 (52 mg, 0,0565 mmol, 0,05 eq). Se llevó a cabo la reacc¡ón bajo el efecto de m¡croondas a 120 °C durante 1 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, se concentró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón, se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en columna de fase ¡nversa (CH3CN:H2O = 1:4) y se real¡zó la l¡of¡l¡zac¡ón para dar el producto (230 mg, rend¡m¡ento: 53,9 %).
Etapa 2: síntes¡s del compuesto clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-c¡cloprop¡l-1-met¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona
Se disolvió (E)-(2-((5-c¡cloprop¡l-1-met¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroalil)carbamato de terc-but¡lo (230 mg, 0,609 mmol, 1 eq) en una d¡soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en etanol (10 ml) y se ag¡tó la mezcla hasta que se term¡nó la reacc¡ón. Se concentró la d¡soluc¡ón de reacdón y se real¡zó la l¡of¡l¡zac¡ón para dar el producto (134,7 mg, rend¡m¡ento: 79,7 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,62 (s a, 3H), 7,33 (s, 1H), 6,87-7,14 (d, 1H), 4,74 (s, 2H), 3,37-3,41 (m, 2H), 3,24 (m, 2H), 2,52-2,63 (m, 3H), 2,07 (s, 3H), 0,68-0,72 (m, 2H), 0,55-0,58 (m, 2H).
Fórmula molecular: C15H21CFN3O, peso molecular: 277,34, CL-EM (m/z) = 278,09 [M+H]+.
Ejemplo 34: síntes¡s del compuesto clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-c¡cloprop¡l-1,3-d¡met¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (compuesto A36)
Etapa 1: síntes¡s de (E)-(2-((5-c¡cloprop¡l-1-met¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de terc-but¡lo
Se colocaron (E)-(2-((1-bromo-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de terc-but¡lo (500 mg, 0,96 mmol, 1 eq), ác¡do met¡lborón¡co (230 mg, 3,84 mmol, 4 eq) y fosfato de potas¡o (1,63 g, 7,68 mmol, 8 eq) en un matraz, se añad¡ó 1,4-d¡oxano (12 ml), se cargó n¡trógeno para reemplazar med¡ante evacuac¡ón y se añad¡ó Pd(PPh3)4 (60 mg, 0,05 mmol, 0,05 eq). Se ag¡tó la mezcla en una atmósfera de n¡trógeno durante 5 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por c Cf , se concentró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón y se añad¡ó acetato de et¡lo. Se usaron secuenc¡almente agua y salmuera saturada para real¡zar el lavado y, después de secar y concentrar, se obtuvo un producto en bruto (570 mg). Se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en columna de fase ¡nversa (cH3CN:H2O = 1:3) para dar el producto (170 mg, rend¡m¡ento: 45,2 %).
Etapa 2: síntes¡s del clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-c¡cloprop¡l-1,3-d¡met¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona
Se d¡solv¡ó clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-c¡cloprop¡l-1,3-d¡met¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (170 mg, 0,434 mmol, 1 eq) en una d¡soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en etanol (10 ml) y se ag¡tó la d¡soluc¡ón hasta que se term¡nó la reacc¡ón. Se concentró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón y se real¡zó la l¡of¡l¡zac¡ón para dar el producto (102,8 mg, rend¡m¡ento: 81,6 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8,62 (s a, 3H), 5,85-6,12 (d, 1H), 4,66 (s, 2H), 3,46 (s, 2H), 3,33-3,46 (m, 2H), 2,51-2,58 (m, 3H), 2,42 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 0,69-0,71 (m, 2H), 0,54 (m, 2H).
Fórmula molecular: C16H23CFN3O, peso molecular: 291,37, CL-EM (m/z) = 292,20 [M+H]+
Ejemplo 35: síntes¡s de clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-1-cloro-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4Hpirrolo[3,4-c]piridin-4-ona (compuesto A42)
Etapa 1: síntesis de 1-cloro-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona
Se disolvió 5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (600 g, 3,4 mmol, 1 eq) en THF (20 ml). A la d¡soluc¡ón se le añad¡ó NCS (455 mg, 3,4 mmol, 1 eq) lote por lote en un baño con agua y h¡elo para reacc¡onar a temperatura amb¡ente durante 30 m¡n. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por c Cf , se evaporó el THF a pres¡ón reduc¡da, se añad¡ó DCM (30 ml) y se usaron secuendalmente agua (30 ml) y salmuera saturada (30 ml) para real¡zar el lavado. Se secó y se concentró la fase orgán¡ca para dar un producto en bruto (820 mg). Se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce (éter de petróleo:acetato de et¡lo = 3:1, 1:1, v/v) para dar el producto (540 mg, rend¡m¡ento: 75,4 %).
Etapa 2: síntes¡s de (E)-(2-((1-cloro-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de ferc-but¡lo
Se d¡solv¡ó 1-cloro-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (500 mg, 2,37 mmol, 1 eq) en THF anh¡dro (20 ml). Se añad¡ó lentamente NaH (190 mg, 4,74 mmol) lote a lote en un baño de agua con h¡elo. Después de la ad¡c¡ón, se ag¡tó la mezcla a 0 °C durante 30 m¡n y se le añad¡ó (E)-(2-(bromomet¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de ferc-but¡lo (668 mg, 2,49 mmol, 1,05 eq) para reacc¡onar a temperatura amb¡ente durante 23 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se añad¡ó una d¡soluc¡ón acuosa saturada de cloruro de amon¡o para ext¡ngu¡r la reacc¡ón. Se lavó la fase orgán¡ca secuendalmente con agua y salmuera saturada, se secó y se concentró para dar un producto en bruto (1,03 g) y se pur¡f¡có el producto en bruto med¡ante cromatografía en columna de gel de síl¡ce (éter de petróleo:acetato de et¡lo = 2,5:1-2:1, v/v) para dar el producto (320 mg, rend¡m¡ento: 34 %).
Etapa 3: síntes¡s de clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-1-cloro-5-c¡cloprop¡l-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona
Se d¡solv¡ó (E)-(2-((1-cloro-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de ferc-but¡lo (320 mg, 0,804 mmol, 1 eq) en una d¡soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en etanol (10 ml) y se ag¡tó la mezcla a temperatura amb¡ente durante 4 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CL-EM, se concentró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón para dar un producto en bruto (200 mg). Se pur¡f¡có el producto en bruto mediante cromatografía en columna C-18 (CH3CN:H2O = 1:4), y se llevó a cabo la liofilización para dar el producto (34 mg, rendimiento: 14,2 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,41 (s a, 3H), 7,55 (s, 1H), 7,02-7,30 (d, 1H), 4,76 (s, 2H), 3,42-3,47 (m, 2H), 3,29-3,30 (m, 2H), 2,61-2,66 (m, 1H), 2,55-2,59 (m, 2H), 0,70-0,77 (m, 2H), 0,52-0,59 (m, 2H).
Fórmula molecular: C14H17CFN3O, peso molecular: 297,10, CL-EM (m/z) = 297,74 [M+H]+.
Ejemplo 36: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A41) y de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-1,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A44)
Etapa 1: síntesis de 5-ciclopropil-2-(4-metoxibencil)-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron 2-(4-metoxibencil)-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (6,4 g, 32,51 mmol, 1,0 eq), ácido ciclopropilborónico (10,77 g, 125,35 mmol, 5,0 eq), acetato de cobre (13,66 g, 75,21 mmol, 3,0 eq) y piridina (9,92 g, 125,35 mmol, 5,0 eq) en tolueno (150 ml) para reaccionar a 100 °C en condiciones al aire durante 47 h. Se concentró la disolución de reacción a presión reducida y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 1:1) para dar el producto (2,0 g, rendimiento: 27 %).
Etapa 2: síntesis de 5-ciclopropil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió 5-ciclopropil-2-(4-metoxibencil)-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (2,0 g, 6,77 mmol, 1,0 eq) en ácido trifluoroacético (20 ml) para reaccionar a 75 °C durante 14 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH:DCM = 1:50) para dar el producto (1,0 g, rendimiento: 84 %). Etapa 3: síntesis de (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona y (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvieron 5-ciclopropil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (1,0 g, 5,71 mmol, 1,0 eq), (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,87 g, 6,28 mmol, 1,1 eq), carbonato de potasio (867 mg, 6,28 mmol, 1,1 eq) y TBAB (184 mg, 0,57 mmol, 0,1 eq) en etanol absoluto (8 ml) para reaccionar durante 19 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 1:1) para dar una mezcla de (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5-dihidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona y (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-4,5-dihidro-1H-pirazolo[4,3-c]piridin-1-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,8 g, rendimiento: 80 %).
Etapa 4: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona y de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-1,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron la mezcla (1,4 g, 3,57 mmol, 1,0 eq) obtenida en la etapa anterior e hidrato de hidrazina (335 mg, 5,35 mmol, 1,5 eq) en EtOH (20 ml) para reaccionar a 80 °C durante 20 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró a vacío, y se concentró el filtrado a presión reducida. Se disolvió el producto en bruto en diclorometano, se filtró la disolución a vacío y se concentró el filtrado a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (diclorometano:isopropanol:amoníaco = 10:1:0,5) para dar (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-2,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona con un valor Rf bajo (350 mg, rendimiento: 37 %), que es el compuesto A41.
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,55 (s, 1H), 6,87-7,02 (d, 1H), 4,91 (s, 2H), 3,18 (s, 1H), 3,05 (s, 2H), 1,60 (s, 2H), 0,96-0,97 (d, 2H), 0,79 (s, 2H).
Fórmula molecular: C13H15FN4O, peso molecular: 262,29, CL-EM (Pos, m/z) = 263,13 [M+H]+.
El compuesto que tenía un valor Rf alto se disolvió en etanol. A la disolución se le añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol, se concentró a presión reducida y se liofilizó para dar clorhidrato de (E)-1-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-1,5-dihidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (220 mg, rendimiento: 20 %), que es el compuesto A44.
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8,48 (s, 3H), 8,08 (s, 1H), 7,44-7,46 (d, 1H), 7,35 (s, 0,5H), 7,08 (s, 0,5H), 6,86-6,88 (d, 1H), 5,10-5,11 (d, 2H), 3,36 (s, 2H), 3,22-3,26 (m, 1H), 0,98-1,00 (d, 2H), 0,81-0,84 (m, 2H).
Fórmula molecular: C13H15FN4O, peso molecular: 262,29, CL-EM (Pos, m/z) = 263,10 [M+H]+.
Ejemplo 41: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-neopentil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A37)
Etapa 1: síntesis de 3-(neopentilamino)propionato de etilo
Se disolvió neopentilamina (31,38 g, 0,36 mol, 1,2 eq) en etanol (100 ml). Se añadió lentamente acrilato de etilo (30 g, 0,3 mol, 1,0 eq), gota a gota, a 10 °C y, una vez completada la adición, se llevó a cabo la reacción a 20 °C durante 3 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (56,18 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 2: síntesis de 3-((3-etoxi-3-oxopropil)(neopentil)amino)-3-oxopropanoato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-(neopentilamino)propionato de etilo (56,18 g, 0,3 mol, 1,0 eq), malonato de etilo y potasio (61,27 g, 0,36 mol, 1,2 eq), 4-dimetilaminopiridina (7,33 g, 0,06 mol, 0,2 eq) y trietilamina (39,46 g, 0,39 mol, 1,3 eq) en diclorometano (300 ml) y se agitó la disolución durante 5 min. A la disolución se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (69,01 g, 0,36 mol, 1,2 eq) lote a lote en un baño con hielo para reaccionar durante 15 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (200 ml), seguido por la separación de líquidos. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (200 ml). Se combinaron las fases orgánicas y concentraron a presión reducida. Se disolvió el producto en bruto en acetato de etilo (200 ml), se ajustó el pH a 5 con ácido clorhídrico y se realizó la separación de líquidos. Se lavó la fase orgánica con una disolución acuosa saturada de bicarbonato de sodio (200 ml), se secó sobre sulfato de sodio anhidro y se filtró, y se llevó a cabo una concentración a presión reducida para dar el producto (85 g, rendimiento: 94 %).
Etapa 3: síntesis de 1-neopentil-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-((3-etoxi-3-oxopropil)neopentil)amino)-3-oxopropionato de etilo (85 g, 0,282 mmol, 1,0 eq) y ferc-butóxido de sodio (32,48 g, 0,338 mol, 1,2 eq) en etanol (400 ml) para reaccionar a 60 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto, que se usó directamente en la siguiente etapa.
Etapa 4: síntesis de 1-neopentilpiperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto en bruto obtenido en la etapa anterior en agua. Se ajustó el pH a 3 y se calentó la disolución hasta 90 °C para reaccionar durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por<c>C<f>, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se le añadió cloruro de sodio sólido hasta que se saturó. Se realizó la extracción con acetato de etilo (300 ml * 3), y se secó y se concentró la fase orgánica. Se suspendió el producto en bruto con MTBE:PE (1:1) y se llevó a cabo filtración a vacío. Se secó la torta de filtración para dar el producto (42 g, rendimiento en dos etapas: 81 %).
Etapa 5: síntesis de 3-((dimetilamino)metilen)-1-neopentilpiperidin-2,4-diona
Se añadió 1-neopentilpiperidin-2,4-diona (5 g, 27,28 mmol, 1,0 eq) a dimetilacetal de W,A/-dimetilformamida (3,58 g, 30 mmol, 1,1 eq) lote a lote para reaccionar durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se realizó la concentración a presión reducida y se trató el producto en bruto con isopropanol para dar el producto (6,5 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 6: síntesis de 5-neopentil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio 3-((dimetilamino)metilen)-1-neopentilpiperidin-2,4-diona (6,5 g, 27,28 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (1,77 g, 30 mmol, 1,1 eq) en isopropanol (30 ml) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida y se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (acetato de etilo) para dar el producto (4,4 g, rendimiento: 77 %).
Etapa 7: síntesis de (£)-2-(3-fluoro-2-((5-neopentil-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2il)metil)alil)isoindolin-1,3-diona
Se disolvieron 5-neopentil-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-pirazolo[4,3-c]p¡nd¡n-4-ona (4,4 g, 21,22 mmol, 1,0 eq), (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (6,96 g, 23,34 mmol, 1,1 eq), carbonato de potasio (3,22 g, 23,34 mmol, 1,1 eq) y TBAB (684 mg, 2,12 mmol, 0,1 eq) en etanol absoluto (50 ml) para reaccionar durante 17 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (PE:EA = 1:1) para dar el producto (4,0 g, rendimiento: 44 %).
Etapa 8: síntesis de clorhidrato de (E^-^am inom etil^-fluoroalil^-neopentil^^^J-te trah idro^H -p irazolo^^-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio (E^-^-fluoro^-^-neopentiM -oxo^^^J-tetrahidro^H-pirazolo^^-cJpirid in-2-¡l)met¡l)al¡l)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona (4,0 mg, 9,42 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (884 mg, 14,13 mmol, 1,5 eq) en EtOH (40 ml) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró a vacío. Se concentró el filtrado a presión reducida. Se suspendió el producto en bruto con acetato de isopropilo (20 ml) y se filtró a vacío. Después, se añadió al filtrado una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol al 20 % (2,06 g, 1,2 eq) en un baño con hielo y se agitó la mezcla durante 10 min. Precipitó una gran cantidad de sólido de color blanco. Se realizó una filtración a vacío y se secó la torta de filtración a 40 °C para dar el producto (2,32 g, rendimiento: 74 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-cfe) 6 (ppm): 8,49 (s, 3H), 8,27 (s, 1H), 7,41 (s, 0,5H), 7,13 (s, 0,5H), 4,94 (d, 2H), 3,55 3,59 (t, 2H), 3,34-3,35 (d, 2H), 3,20 (s, 2H) 2,81-2,85 (t, 2H), 0,91 (s, 9H).
Fórmula molecular: C15H24CFN4O, peso molecular: 330,83, CL-EM (Pos, m/z) = 295,12 [M+H]+.
Ejemplo 44: síntesis de (E^-^am inom etN ^-fluoroalil^-ciclopropil^-fenil^^^J-tetrahidro^H -pirazolo^^-c]piridin-4-ona (compuesto A45)
Etapa 1: síntesis de 3-benzo¡l-1-c¡cloprop¡lp¡per¡d¡n-2,4-d¡ona
Se añadió 1-ciclopropilpiperidin-2,4-diona (50,00 g, 0,33 mol, 1,0 eq) a un matraz de reacción y se añadió THF (500 ml). Se enfriaron los materiales hasta 0 °C, se les añadió ferc-butóxido de sodio (66,60 g, 0,69 mol, 2,1 eq) y se agitaron durante 30 min. Se añadió lentamente cloruro de benzoilo (55,06 g, 0,39 mol, 1,2 eq,), gota a gota, a 0 °C. Después de la adición, se incubó la mezcla a temperatura ambiente durante 5 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua para dilución, se ajustó el pH a 3 y se añadió EA (100 ml x 3) para realizar la extracción. Se realizó el secado con sulfato de sodio anhidro, seguido por concentración a presión reducida. Se separó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH =100:1-50:1) para dar el producto (28,3 g, rendimiento: 33,7 %).
Etapa 2: síntesis de 5-ciclopropil-3-fenil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió hidrato de hidrazina (85 %, 9,72 g, 0,16 mol, 1,5 eq) en etanol (100 ml) y se añadió ácido clorhídrico para ajustar el pH a 3. Se añadió 3-benzoil-1-ciclopropilpiperidin-2,4-diona (28,30 g, 0,11 mol, 1,0 eq) y se ajustó el pH a 6. Se calentó la mezcla a reflujo durante 2 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se separó el producto en bruto primero mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH = 50:1) y luego se recristalizó con etanol absoluto (50 ml) para dar el producto (8,0 g, rendimiento: 28,7 %).
Etapa 3: síntesis de (E)-2-(2-((5-ciclopropil-4-oxo-3-fenil-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se añadieron el producto intermedio 5-ciclopropil-3-fenil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (3,00 g, 0,012 mol, 1 eq), (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (3,89 g, 0,013 mol, 1,1 eq), carbonato de potasio (1,80 g, 0,013 mol, 1,1 eq) y bromuro de tetrabutilamonio (0,39 g, 0,001 mol, 0,1 eq) a etanol absoluto (30 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 72 h. Cuando quedaba una pequeña cantidad de material de pirazol, como se detectó por CCF, se filtró la disolución de reacción a vacío. Se lavó la torta de filtración con etanol. Se combinaron los filtrados, se les añadió MTBE (5 ml), se concentraron hasta la mitad del volumen a presión reducida y se enfriaron hasta temperatura ambiente, y precipitó una gran cantidad de sólido de color blanco. Se realizó filtración a vacío, seguida por secado. Se recristalizó el producto en bruto con etanol (15 ml) para dar el producto (1,8 g, rendimiento: 32,1 %).
Etapa 4: síntesis de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-ciclopropil-3-fenil-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió (E)-2-(2-((5-c¡cloprop¡l-4-oxo-3-fen¡l-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,80 g, 3,83 mmol, 1,0 eq) en EtOH (18 ml), y a la d¡soluc¡ón se le añad¡ó h¡drato de h¡draz¡na (85 %, 0,34 g, 5,74 mmol, 1,5 eq) y se h¡zo reacc¡onar a reflujo durante 1 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, se real¡zó la f¡ltrac¡ón a vacío. Se concentró el f¡ltrado a pres¡ón reduc¡da, se le añad¡ó acetato de ¡soprop¡lo (30 ml), se calentó a reflujo durante 30 m¡n y se enfr¡ó hasta temperatura amb¡ente, y prec¡p¡tó una pequeña cant¡dad de sól¡do. Después se real¡zó una f¡ltrac¡ón a vacío, se concentró el f¡ltrado a pres¡ón reduc¡da y prec¡p¡tó una gran cant¡dad de sól¡do. Se real¡zó una f¡ltrac¡ón a vacío y se lavó la torta de f¡ltrac¡ón con una pequeña cant¡dad de acetato de ¡soprop¡lo, se concentró y se secó para dar el producto (850 mg, rend¡m¡ento: 65,4 %).
1H-RMN (400 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,06-8,08 (m, 2H), 7,32-7,40 (m, 3H), 6,82-7,04 (d, J=84 Hz, 1H), 4,76-4,77 (d, 2H), 3,57-3,60 (t, 2H), 3,32 (s a, 2H), 3,12-3,13 (d, 2H), 2,98-3,02 (t, 2H), 2,60-2,67 (m, 1H), 0,74-0,79 (m, 2H), 0,66-0,72 (m, 2H).
Fórmula molecular: C19H21FN4O, peso molecular: 340,40, CL-EM (Pos, m/z) = 341,12 [M+H]+.
Ejemplo 45: síntes¡s de clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-c¡cloprop¡l-1-(3-fluorofen¡l)-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona (compuesto A46)
Síntes¡s del producto ¡ntermed¡o (E)-(2-((5-c¡cloprop¡l-1-(3-fluorofen¡l)-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de ferc-but¡lo
Se d¡solv¡eron (E)-(2-((1-bromo-5-c¡cloprop¡l-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de ferc-but¡lo (150 mg, 0,339 mmol, 1 eq) y ác¡do m-fluorofen¡lborón¡co (72 mg, 0,509 mmol, 1,5 eq) en 1,4-d¡oxano (5 ml). A la d¡soluc¡ón se le añad¡ó una d¡soluc¡ón acuosa (1 ml) de carbonato de potas¡o (118 mg, 0,848 mmol, 2,5 eq) y Pd(dppf)Ch (28 mg, 0,0339 mmol, 0,1 eq) en una atmósfera de N2. Después de la ad¡c¡ón, se llevó a cabo la reacc¡ón a 90 °C durante 17 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CCF, se f¡ltró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón a través de Cel¡te. Al f¡ltrado se le añad¡ó acetato de et¡lo (20 ml), se lavó secuenc¡almente con agua (20 ml) y salmuera saturada (20 ml), se secó sobre Na2SO4 anh¡dro y se f¡ltró. Se concentró el f¡ltrado para dar un producto en bruto (190 mg) que se pur¡f¡có med¡ante cromatografía en capa f¡na preparat¡va (PE:EA = 1:1) para dar el producto (70 mg, rend¡m¡ento: 45 %).
Etapa 2: síntes¡s del compuesto clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-c¡cloprop¡l-1-(3-fluorofen¡l)-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-4-ona
Se disolvió (E)-(2-((5-c¡cloprop¡l-1-(3-fluorofen¡l)-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡rrolo[3,4-c]p¡r¡d¡n-2-¡l)met¡l)-3-fluoroal¡l)carbamato de terc-but¡lo (70 mg, 0,153 mmol, 1 eq) en una d¡soluc¡ón de cloruro de h¡drógeno en etanol (5 ml) y se ag¡tó la d¡soluc¡ón durante 3 h. Tras term¡nar la reacc¡ón, como se detectó por CL-EM, se concentró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón y se l¡of¡l¡zó para dar el producto (28 mg, rend¡m¡ento: 51 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,32 (s a, 3H), 7,46-7,52 (m, 2H), 7,19-7,22 (m, 3H), 6,36-6,63 (d, 1H), 4,81 (s, 2H), 3,40-3,44 (t, 2H), 3,12-3,13 (m, 2H), 2,59-2,67 (m, 3H), 0,72-0,78 (m, 2H), 0,58-0,60 (m, 2H).
Fórmula molecular: C20H21F2N3O, peso molecular: 357,17, CL-EM (m/z) = 358,12 [M+H]+.
Ejemplo 46: síntes¡s de clorh¡drato de (E)-2-(2-(am¡nomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-(2-metox¡et¡l)-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-4-ona (compuesto A47)
Etapa 1: síntes¡s de 3-((2-metox¡et¡l)am¡no)prop¡onato de et¡lo
Se d¡solv¡ó el mater¡al 2-metox¡etano-1-am¡na (10 g, 133,14 mmol, 1,0 eq) en etanol absoluto (100 ml). Se añad¡ó lentamente acr¡lato de et¡lo (11,32 g, 113,06 mmol, 0,85 eq), gota a gota, en un baño con h¡elo. Después de la ad¡c¡ón, se llevó a cabo la reacc¡ón durante 2 h. Después de que no quedaran mater¡ales, como se detectó por CCF, se concentró la d¡soluc¡ón de reacc¡ón a pres¡ón reduc¡da a 80 °C para dar un producto en bruto, que se ut¡l¡zó en la s¡gu¡ente etapa según una cant¡dad teór¡ca.
Etapa 2: síntes¡s de 3-((3-etox¡-3-oxoprop¡l)(2-metox¡et¡l)am¡no)-3-oxoprop¡onato de et¡lo
Se d¡solv¡ó el producto ¡ntermed¡o 3-((2-metox¡et¡l)am¡no)prop¡onato de et¡lo (133,14 mmol, 1,0 eq) en d¡clorometano (100 ml). Se enfr¡ó la d¡soluc¡ón hasta 0 °C con agua con h¡elo y se le añad¡eron secuenc¡almente malonato de et¡lo y potas¡o (19,2 g, 133,14 mmol, 1,0 eq), clorh¡drato de 1-(3-d¡met¡lam¡noprop¡l)-3-et¡lcarbod¡¡m¡da (26 g, 135,63 mmol, 1,2 eq), 4-d¡met¡lam¡nop¡r¡d¡na (1,38 g, 11,32 mmol, 0,1 eq) y tr¡et¡lam¡na (17,2 g, 169,98 mmol, 1,5 eq). Después de la ad¡c¡ón, se ¡ncubaron los mater¡ales a temperatura amb¡ente durante 16 h. Después de que no quedaron mater¡ales, como se detectó por CCF, se añad¡ó agua (200 ml), se añad¡ó ác¡do clorhídr¡co concentrado (20 ml), gota a gota, se ajustó el pH a aprox¡madamente 5 y se real¡zó la separac¡ón de líqu¡dos. Se extrajo la fase acuosa con d¡clorometano (100 ml). Se comb¡naron las fases orgán¡cas, se lavaron secuenc¡almente con una d¡soluc¡ón acuosa de b¡carbonato de sod¡o al 5 % (100 ml) y agua (100 ml), se secaron sobre sulfato de magnes¡o anh¡dro y se f¡ltraron. Se concentró el f¡ltrado a pres¡ón reduc¡da para dar un líqu¡do oleoso de color amarillo (26,2 g, rendimiento en dos etapas: 80,3 %).
Etapa 3: síntesis de 1-(2-metoxietil)-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo
Se disolvió el producto intermedio 3-((3-etoxi-3-oxopropil)(2-metoxietil)amino)-3-oxopropionato de etilo (26,2 g, 90,55 mmol, 1,0 eq) en etanol absoluto (100 ml). A la disolución se le añadió etóxido de sodio (15,4 g, 226,38 mmol, 2,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto.
Etapa 4: síntesis de 1-(2-metoxietil)piperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-(2-metoxietil)-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo (90,55 mmol, 1,0 eq) en agua (50 ml). A la disolución se le añadió ácido clorhídrico concentrado (20 ml), gota a gota, y se calentó hasta 80 °C para reaccionar durante 3 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se extrajo con diclorometano (100 ml * 3). Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtraron. Se concentró el filtrado para dar el producto, que se usó en la siguiente etapa según una cantidad teórica.
Etapa 5: síntesis de 3-((dimetilamino)metilen)-1-(2-metoxietil)piperidin-2,4-diona
Se añadió dimetilacetal de A/,W-dimetilformamida (11,8 g, 99,60 mmol, 1,1 eq), gota a gota, al producto intermedio 1-(2-metoxietil)piperidin-2,4-diona (90,55 mmol, 1,0 eq), liberando un calor intenso. Después de la adición, se llevó a cabo la reacción a temperatura ambiente durante 1 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto, que se usó en la siguiente etapa según una cantidad teórica.
Etapa 6: síntesis de 5-(2-metoxietil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio 3-((dimetilamino)metilen)-1-(2-metoxietil)piperidin-2,4-diona (20,4 g, 90,55 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (fracción en masa: 80 %, 6,23 g, 99,60 mmol, 1,1 eq) en metanol (20 ml).
Se calentó la disolución hasta 70 °C para reaccionar durante 0,5 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH =100:1-60:1) para dar el producto (10,6 g, rendimiento en cuatro etapas: 60,2 %).
Etapa 7: síntesis de (E)-2-(3-fluoro-2-((5-(2-metoxiet¡l)-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-2-il)metil)alil)isoindolin-1,3-diona
Se añadieron el producto intermedio 5-(2-metox¡et¡l)-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-pirazolo[4,3-c]p¡r¡d¡n-4-ona (5,0 g, 25,61 mmol, 1,0 eq), (E)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroal¡l)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona (8,4 g, 28,17 mmol, 1,1 eq), carbonato de potasio anhidro (3,9 g, 28,17 mmol, 1,1 eq) y bromuro de tetrabutilamonio (825,6 mg, 2,56 mmol, 0,1 eq) a etanol absoluto (50 ml) y se agitó la disolución a temperatura ambiente durante 20 h. Cuando quedó una pequeña cantidad de materiales, como se detectó por CCF, se llevó a cabo la filtración. Se enjuagó la torta de filtración con acetato de etilo. Se concentró el filtrado a presión reducida, se le añadió acetato de etilo (50 ml) y se filtró. Se concentró el filtrado obtenido a presión reducida para dar un producto en bruto (11 g). Se purificó parte del producto en bruto (2 g) mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 60:1) para dar el producto (907 mg).
Etapa 8: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(am¡nometil)-3-fluoroal¡l)-5-(2-metox¡et¡l)-2,5,6,7-tetrah¡dro-4H-pirazolo[4,3-c]pir¡d¡n-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(3-fluoro-2-((5-(2-metoxiet¡l)-4-oxo-4,5,6,7-tetrah¡dro-2H-p¡razolo[4,3-c]p¡rid¡n-2-¡l)met¡l)al¡l)¡so¡ndol¡n-1,3-d¡ona (900 mg, 2,18 mmol, 1,0 eq) en etanol (10 ml). Se calentó la mezcla para su disolución y se le añadió hidrato de hidrazina (fracción en masa: 85 %, 128,3 mg, 3,27 mmol, 1,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 3 h. Cuando quedó una pequeña cantidad de materiales, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró a vacío. Se enjuagó la torta de filtración con diclorometano. Se concentró el filtrado, se suspendió con diclorometano (10 ml) y se filtró, y el filtrado obtenido de este modo se concentró a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para dar un producto (338 mg). Se añadió diclorometano (5 ml). A la mezcla se le añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (fracción en masa: 20 %, 218 mg), gota a gota, se agitó durante 10 min, y se concentró a presión reducida para dar un producto (317 mg, rendimiento: 45,6 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8,34 (s, 3H), 8,10 (s, 1H), 7,40 (s, 0,5H), 7,13 (s, 0,5H), 4,90-4,89 (d, 2H), 3,62-3,54 (m, 4H), 3,48-3,45 (m, 2H), 3,39 (m, 2H), 3,25 (s, 3H), 2,84-2,79 (m, 2H).
Fórmula molecular: C13H20CFN4O2, peso molecular: 318,78, CL-EM (Pos, m/z) = 283,07 [M+H]+.
Ejemplo 47: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminomet¡l)-3-fluoroal¡l)-5-(c¡cloprop¡lmet¡l)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]pir¡d¡n-4-ona (compuesto A48)
Etapa 1: síntesis de 3-((ciclopropilmet¡l)am¡no)prop¡onato de etilo
Se disolvió el material ciclopropanometanamina (10 g, 99,88 mmol, 1,0 eq) en etanol (30 ml). A la disolución se le añadió acrilato de etilo (12,67 g, 89,89 mmol, 0,9 eq), gota a gota, de manera lenta, en un baño con hielo y, después de la adición, se llevó a cabo la reacción a temperatura ambiente durante 16 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (15,39 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 2: síntesis de 3-(ciclopropilmetil(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-((ciclopropilmetil)amino)propionato de etilo (15,39 g, 89,89 mmol, 1,0 eq), malonato de etilo y potasio (18,36 g, 107,87 mmol, 1,2 eq), 4-dimetilaminopiridina (2,2 g, 17,98 mmol, 0,2 eq) y trietilamina (11,83 g, 116,83 mmol, 1,3 eq) en diclorometano (150 ml). A la disolución se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (20,68 g, 107,87 mmol, 1,2 eq) lote por lote para reaccionar durante 23 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (100 ml) y ácido clorhídrico (50 ml), seguido por la separación de líquidos. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (200 ml). Se combinaron las fases orgánicas y se concentraron a presión reducida para dar el producto (21 g, rendimiento: 81,8 %).
Etapa 3: síntesis de 1-(ciclopropilmetil)-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo
Se disolvieron el producto intermedio 3-((ciclopropilmetil)(3-etoxi-3-oxopropil)amino)-3-oxopropionato de etilo (21 g, 73,59 mmol, 1,0 eq) y ferc-butóxido de sodio (8,49 g, 88,3 mmol, 1,2 eq) en etanol (100 ml) para reaccionar a 80 °C durante 20 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (17,6 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 4: síntesis de 1-(ciclopropilmetil)piperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-(ciclopropilmetil)-2,4-dioxopiperidin-3-carboxilato de etilo (17,6 g, 73,59 mmol, 1,0 eq) en ácido clorhídrico (10 ml) y en agua (100 ml) para reaccionar a 80 °C durante 3 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se le añadió cloruro de sodio sólido hasta que se saturó. Se realizó la extracción con diclorometano (100 ml * 3), y se secó y se concentró la fase orgánica para dar el producto (11 g, rendimiento: 89 %).
Etapa 5: síntesis de 1-(ciclopropilmetil)-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 1-(cidopropilmetil)piperidin-2,4-diona (11 g, 65,78 mmol, 1,0 eq) en dimetilacetal de W,A/-dimetilformamida (8,62 g, 72,36 mmol, 1,1 eq) para reaccionar a temperatura ambiente durante 40 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto (15,08 g, rendimiento: 100 %).
Etapa 6: síntesis de 5-(ciclopropilmetil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio 1-(ciclopropilmetil)-3-((dimetilamino)metilen)piperidin-2,4-diona (15,08 g, 65,78 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (4,26 g, 72,36 mmol, 1,1 eq) en isopropranol (100 ml) para reaccionar a 80 °C durante 30 min. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH:DCM = 1:40) para dar el producto (8,2 g, rendimiento: 65 %).
Etapa 7: síntesis de ('£)-2-(2-((5-(ciclopropilmetil)-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona
Se añadieron el producto intermedio 5-(ciclopropilmetil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (4,2 g, 21,96 mmol, 1,0 eq), (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (7,18 g, 24,16 mmol, 1,1 eq), carbonato de potasio (3,34 g, 24,16 mmol, 1,1 eq) y bromuro de tetrabutilamonio (709 mg, 2,2 mmol, 0,1 eq) en etanol absoluto (30 ml) para reaccionar durante 15 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida y se eliminó el etanol. Se añadió DCM (50 ml), se agitó durante 30 min y se llevó a cabo la filtración a vacío. Se concentraron las aguas madres a presión reducida para dar 8,0 g de gotitas de aceite crudo de color amarillo. Se purificaron 2,0 g de las gotitas del aceite crudo de color amarillo mediante cromatografía en capa fina preparativa (MeOH:DCM = 1:20) para dar el producto (1,3 g, rendimiento: 56 %).
Etapa 8: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-(ciclopropilmetil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio (£)-2-(2-((5-(ciclopropilmetil)-4-oxo-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin2-il)metil)3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (1,3 g, 3,18 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (281 mg, 4,77 mmol, 1,5 eq) en EtOH (20 ml) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Tras terminar la reacción, como se detectó por CL-EM, se enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró a vacío. Se concentró el filtrado a presión reducida. Se disolvió el producto en bruto en acetato de isopropilo y se agitó la disolución durante 30 min y se filtró a vacío. Al filtrado se le añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol en un baño con hielo y se concentró. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (MeOH:DCM = 1:15) para dar el producto (800 mg, rendimiento: 80 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-da) 8 (ppm): 8,47 (s, 3H), 8,28 (s, 1H), 7,40 (s, 0,5H), 7,13 (s, 0,5H), 4,93-4,94 (d, 2H), 3,61-3,65 (m, 2H), 3,33-3,34 (d, 2H), 3,27-3,29 (d, 2H), 2,82-2,86 (m, 2H), 0,96-1,00 (m, 1H), 0,40-0,50 (m, 2H), 0,20-0,30 (m, 2H).
Fórmula molecular: C14H20CFN4O, peso molecular: 314,79, CL-EM (Pos, m/z) = 279,11 [M+H]+.
Ejemplo 48: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-(ferc-pentil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (compuesto A49)
Etapa 1: síntesis de 3-(terc-pentilamino)propanoato de etilo
Se disolvió el material 2-metilbutil-2-amina (7,44 g, 85,35 mmol, 1,0 eq) en etanol absoluto (75 ml). Se añadió lentamente acrilato de etilo (7,26 g, 72,54 mmol, 0,85 eq), gota a gota, en un baño con hielo. Después de la adición, se incubó la mezcla a temperatura ambiente durante 9 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida a 80 °C para dar el producto, que se usó en la siguiente etapa según una cantidad teórica.
Etapa 2: síntesis de 3-((3-etoxi-3-oxopropil)(ferc-pentil)amino)-3-oxopropanoato de etilo
Se disolvió el producto intermedio 3-(ferc-pentilamino)propanoato de etilo (85,35 mmol, 1,0 eq) en diclorometano (150 ml). A la disolución se le añadieron secuencialmente malonato de etilo y potasio (14,5 g, 85,35 mmol, 1,0 eq), trietilamina (12,9 g, 128 mmol, 1,5 eq) y 4-dimetilaminopiridina (1 g, 8,53 mmol, 0,1 eq), se enfrió hasta 0 °C con agua con hielo y se le añadió clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (19,6 g, 102,42 mmol, 1,2 eq). Después de la adición, se incubó la mezcla a temperatura ambiente durante 15 h. Después de que no quedaron materiales, como se detectó por CCF, a la disolución de reacción se le añadió agua (100 ml), se enfrió con agua con hielo y se le añadió ácido clorhídrico concentrado (20 ml, en fracción en masa), gota a gota, para ajustar el pH a aproximadamente 4-5, seguido por la separación de líquidos. Se extrajo la fase acuosa con diclorometano (100 ml). Se combinaron las fases orgánicas y se les añadió agua (100 ml), se añadió carbonato de sodio para ajustar el pH a aproximadamente 8-9 y se realizó la separación de líquidos. Se lavó la fase orgánica con agua (100 ml), se secó sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtró, y se concentró el filtrado a presión reducida para dar el producto (14,5 g, rendimiento en dos etapas: 56,4 %).
Etapa 3: síntesis de 2,4-dioxo-1-(ferc-pentil)piperidin-3-carboxilato de etilo
Se disolvió el producto intermedio 3-((3-etoxi-3-oxopropil)(ferc-pentil)amino)-3-oxopropanoato de etilo (14,5 g, 48,11 mmol, 1,0 eq) en etanol absoluto (100 ml). A la disolución se le añadió etóxido de sodio (8,2 g, 120,2 mmol, 2,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto, que se usó en la siguiente etapa según una cantidad teórica.
Etapa 4: síntesis de 1-(ferc-pentil)piperidin-2,4-diona
Se disolvió el producto intermedio 2,4-dioxo-1-(ferc-pentil)piperidin-3-carboxilato de etilo (48,11 mmol, 1,0 eq) en agua (100 ml). A la disolución se le añadió ácido clorhídrico concentrado (10 ml, en fracción en masa), gota a gota, para reaccionar a 80 °C durante 3 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se enfrió la disolución de reacción hasta 0 °C y se extrajo con diclorometano (100 ml * 3). Se combinaron las fases orgánicas, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se filtraron. Se concentró el filtrado para dar el producto (8,4 g, rendimiento en dos etapas: 95,5 %).
Etapa 5: síntesis de 3-((dimetilamino)metilen)-1-(ferc-pentil)piperidin-2,4-diona
Se añadió dimetilacetal de A/,W-dimetilformamida (6,0 g, 50,42 mmol, 1,1 eq), gota a gota, al producto intermedio 1 (ferc-pentil)piperidin-2,4-diona (8,4 g, 45,84 mmol, 1,0 eq), liberando un calor intenso. Después de la adición, se llevó a cabo la reacción a temperatura ambiente durante 1 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida para dar el producto, que se usó en la siguiente etapa según una cantidad teórica.
Etapa 6: síntesis de 5-(ferc-pentil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvieron el producto intermedio 3-((dimetilamino)metilen)-1-(ferc-pentil)piperidin-2,4-diona (45,84 mmol, 1,0 eq) e hidrato de hidrazina (fracción en masa: 80 %, 3,15 g, 50,42 mmol, 1,1 eq) en isopropanol (100 ml). Se calentó la disolución a reflujo durante 0,5 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, se concentró la disolución de reacción a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en columna de gel de sílice (DCM:MeOH =100:1-50:1) para dar el producto (4,29 g, rendimiento en dos etapas: 45,2 %).
Etapa 7: síntesis de (E)-2-(3-fluoro-2-((4-oxo-5-(ferc-pentil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)isoindolin-1,3-diona
Se añadieron el producto intermedio 5-(ferc-pentil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona (2,0 g, 9,65 mmol, 1,0 eq), (£)-2-(2-(bromometil)-3-fluoroalil)isoindolin-1,3-diona (3,16 g, 10,61 mmol, 1,1 eq), carbonato de potasio anhidro (1,46 g, 10,61 mmol, 1,1 eq) y bromuro de tetrabutilamonio (341,7 mg, 1,06 mmol, 0,1 eq) a etanol absoluto (20 ml) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 48 h. Cuando quedó una pequeña cantidad de materiales, como se detectó por CCF, se llevó a cabo la filtración. Se enjuagó la torta de filtración con acetato de etilo. Se concentró el filtrado a presión reducida para dar un producto en bruto (4,9 g). Se purificó el producto en bruto (2 g) mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 60:1) para dar un líquido oleoso (821 mg).
Etapa 8: síntesis de clorhidrato de (E)-2-(2-(aminometil)-3-fluoroalil)-5-(ferc-pentil)-2,5,6,7-tetrahidro-4H-pirazolo[4,3-c]piridin-4-ona
Se disolvió el producto intermedio (E)-2-(3-fluoro-2-((4-oxo-5-(ferc-pentil)-4,5,6,7-tetrahidro-2H-pirazolo[4,3-c]piridin-2-il)metil)alil)isoindolin-1,3-diona (821 mg, 1,93 mmol, 1,0 eq) en etanol (10 ml). A la disolución se le añadió hidrato de hidrazina (fracción en masa: 85 %, 398,6 mg, 6,77 mmol, 3,5 eq) para reaccionar a 80 °C durante 1 h. Después de que no quedaran materiales, como se detectó por CCF, enfrió la disolución de reacción hasta temperatura ambiente y se filtró a vacío. Se enjuagó la torta de filtración con etanol. Se concentró el filtrado, se suspendió con diclorometano (10 ml) y se filtró, y se concentró el filtrado obtenido de este modo a presión reducida. Se purificó el producto en bruto mediante cromatografía en capa fina preparativa (DCM:MeOH = 10:1) para dar un producto (329 mg). Se disolvió el producto en diclorometano (10 ml). A la disolución se le añadió una disolución de cloruro de hidrógeno en etanol (fracción en masa: 20 %, 200 mg), gota a gota, y se agitó durante 5 min. Se llevó a cabo la concentración a presión reducida para dar el producto (352 mg, rendimiento: 61,9 %).
1H-RMN (300 MHz, DMSO-d6) 8 (ppm): 8,38 (s, 3H), 8,17 (s, 1H), 7,40 (s, 0,5H), 7,13 (s, 0,5H), 4,89-4,88 (d, 2H), 3,54-3,50 (m, 2H), 3,36-3,35 (m, 2H), 2,76-2,71 (m, 2H), 1,94-1,87 (m, 2H), 1,38 (s, 6H), 0,79-0,74 (m, 3H).
Fórmula molecular: C15H24CFN4O, peso molecular: 330,83, CL-EM (Pos, m/z) = 295,11 [M+H]+.
En los siguientes ejemplos biológicos de la presente invención, todas las dosis se expresan como compuestos de cuerpo libre.
Ejemplo biológico 1: ensayo de actividad enzimática
Muestras: los compuestos de la presente invención se muestran en la tabla 1, los cuales se prepararon según los métodos a modo de ejemplo.
1. Actividad inhibidora de compuestos frente a la enzima rhVAP-1
(1) Instrumento, consumible y reactivo
Lector de microplacas multifuncional (MD, FlexStation3), placa de 96 pocillos con fondo negro no transparente (Corning) y rhVAP-1 (PeproTech).
(2) Preparación de disoluciones de compuestos en gradientes de concentración
Se tomó una cantidad adecuada del compuesto que iba a someterse a prueba, se disolvió en DMSO hasta 10 mM y luego se almacenó. Antes del estudio, se diluyó con DMSO una cantidad apropiada de la disolución madre del compuesto 10 mM que iba a someterse a prueba, de modo que se obtuvo una disolución 1 mM. Luego, se diluyó la disolución en gradientes 3 veces con DMSo , 10 gradientes de concentración en total. Después, se usó PBS para llevar a cabo una dilución de 100 veces, de modo que se prepararon disoluciones de compuesto de series de concentraciones de 10*.
(3) Preparación de disoluciones de enzima
Se añadió una cantidad adecuada de diluyente de proteínas a rhVAP-1 en polvo, obteniendo 1 mg/ml de disolución madre para su almacenamiento. Antes del estudio, se utilizó PBS para diluir y obtener disoluciones de enzima de concentraciones 4*.
(4) Preparación de mezclas de sustrato de concentraciones 2*
Se pesó una cantidad adecuada de bencilamina y se disolvió con PBS para obtener una disolución de bencilamina 200 mM. A la disolución de bencilamina se le añadió disolución madre de Amplex Red 2 mM y disolución madre de HRP 500 U/ml y se diluyó con PBS para obtener mezclas de sustrato de concentraciones 2*.
(5) Método de estudio
En primer lugar, se añadieron 10 pl de disoluciones de compuesto de diferentes concentraciones, 25 pl de disoluciones de enzima rhVAP-1 de concentraciones 4* y 15 pl de PBS en una placa de 96 pocillos, se agitaron para mezclarlas uniformemente y, luego, se incubaron a 37 °C durante 30 min. A continuación, se añadieron 50 pl de mezclas de sustrato de concentraciones 2* en cada pocillo y se usó inmediatamente el lector de microplacas para detectar la intensidad de fluorescencia de cada pocillo con luz de excitación de 565 nm y luz de emisión de 590 nm durante 5 min cada vez, durante 25 min en total. La tasa de inhibición se calculó según la siguiente fórmula:
V(UFR/min) = (Ft(UFR)-Fü(UFR))/(tiempo(min))
Tasa de inhibición (%) = 100 %-Vcomp(UFR/min)/Vmáx(UFR/min) * 100 %
V: tasa de cambio de fluorescencia; Ft: lectura de fluorescencia en el punto de tiempo t; Fa lectura de fluorescencia inicial; tiempo: duración t; Vcomp: tasa de cambio de fluorescencia del compuesto sometido a prueba; Vmáx: tasa máxima de cambio de fluorescencia del orificio.
(6) Ajuste de la curva dosis-respuesta
Con el valor logarítmico de la concentración en el eje X y el porcentaje de la tasa de inhibición en el eje Y, se utilizó la pendiente logarítmica (inhibidor) frente a variable de respuesta del software de análisis GraphPad Prism 5 para ajustar una curva dosis-respuesta, obteniendo así el valor de CI50 de actividad de cada compuesto frente a la enzima.
2. Selectividad de compuestos frente a la enzima rhAOC1
(1) Instrumento, consumible y reactivo
Lector de microplacas (Perkin Elmer, Nivo 5S), placa de 96 pocillos con fondo negro no transparente (Corning) y enzima rhAOC1 (R&D).
(2) Preparación de disoluciones de compuestos en gradientes de concentración
Se tomó una cantidad adecuada del compuesto que iba a someterse a prueba, se disolvió en DMSO hasta 10 mM y luego se almacenó. Antes del estudio, se tomó una cantidad adecuada de disolución madre del compuesto 10 mM que iba a someterse a prueba y se diluyó en gradientes 3 veces con DMSO, 10 gradientes de concentración en total. Después, se diluyó cada gradiente de concentración 10 veces con 0,1 M de PBS.
(3) Preparación de disoluciones de enzima
Se tomó una cantidad adecuada de disolución madre de enzima rhAOC1 a una concentración de 0,441 mg/ml y se diluyó con una cantidad adecuada de disolución de tampón HEPES 50 mM para obtener disoluciones de enzima de concentraciones 4*.
(4) Preparación de mezclas de sustrato de concentraciones 2*
Se pesó una cantidad adecuada de histamina y se disolvió con disolución de tampón HEPES 50 mM para obtener una disolución de histamina 20 mM. A la disolución de histamina se le añadió disolución madre de Amplex Red 2 mM y disolución madre de HRP 500 U/ml y se diluyó con disolución de tampón HEPES 50 mM para obtener mezclas de sustrato de concentraciones 2*.
(5) Método de estudio
En primer lugar, se añadieron 10 pl de disoluciones de compuesto de diferentes concentraciones, 25 pl de disoluciones de enzima rhAOCI de concentraciones 4* y 15 pl de disolución de tampón HEPES 50 mM en una placa de 96 pocillos, se agitaron para mezclarlas uniformemente y, luego, se incubaron a 37 °C durante 30 min. A continuación, se añadieron 50 pl de mezclas de sustrato de concentraciones 2* en cada pocillo y se usó inmediatamente el lector de microplacas para detectar la intensidad de fluorescencia de cada pocillo con luz de excitación de 580 nm (20 nm) y luz de emisión de 620 nm (10 nm) durante 5 min cada vez, durante 30 min en total. La tasa de inhibición se calculó según la siguiente fórmula:
V(UFR/min) = (Ft(UFR)-Fü(UFR))/(tiempo(min))
Tasa de inhibición (%) = 100 %-Vcomp(UFR/min)/Vmáx(UFR/min) * 100 %
V: tasa de cambio de fluorescencia; Ft: lectura de fluorescencia en el punto de tiempo t; Fa lectura de fluorescencia inicial; tiempo: duración t; Vcomp: tasa de cambio de fluorescencia del compuesto sometido a prueba; Vmáx: tasa máxima de cambio de fluorescencia del orificio.
(6) Ajuste de la curva dosis-respuesta
Con el valor logarítmico de la concentración en el eje X y el porcentaje de la tasa de inhibición en el eje Y, se utilizó la pendiente logarítmica (inhibidor) frente a variable de respuesta del software de análisis GraphPad Prism 5 para ajustar una curva dosis-respuesta, obteniendo así el valor de CI50 de actividad de cada compuesto frente a la enzima.
3. Los resultados del estudio se muestran en la tabla 1
Tabla 1
Muestras CI50 de rhVAP-1 (nM) CI50 de rhAOC1 (nM) Compuesto A1 38 22067
Clorhidrato del compuesto A2 73 > 10000
Puede verse en la tabla anterior que los compuestos de la presente invención muestran una excelente inhibición de la enzima rhVAP-1 y una excelente selectividad frente a la enzima rhAOC1. Esto indica que los compuestos de la presente invención se pueden aplicar en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades relacionadas con un aumento de la expresión o un aumento de la actividad de la enzima VAP-1. Además, debido a que los compuestos de la presente invención muestran una excelente inhibición de la enzima VAP-1 y una excelente selectividad frente a la enzima rhAOC1, no se producirán efectos secundarios a partir de la inhibición de la enzima rhAOC1.
Ejemplo biológico 2: ensayo de actividad enzimática
Muestras: los compuestos de la presente invención se muestran en la tabla 2, los cuales se prepararon según los métodos a modo de ejemplo.
1. Actividad inhibidora de compuestos frente a la enzima rhVAP-1
(1) Instrumento, consumible y reactivo
Lector de microplacas (Perkin Elmer, Nivo 5S), placa de 96 pocillos con fondo negro no transparente (Corning) y rhVAP-1 (PeproTech).
(2) Preparación de disoluciones de compuestos en gradientes de concentración
Se tomó una cantidad adecuada del compuesto que iba a someterse a prueba, se disolvió en DMSO hasta 10 mM y luego se almacenó. Antes del estudio, se tomó una cantidad adecuada de disolución madre del compuesto 10 mM que iba a someterse a prueba y se diluyó en gradientes 3 veces con DMSO, 10 gradientes de concentración en total. Después, se diluyó cada gradiente de concentración 100 veces con 0,1 M de PBS.
(3) Preparación de disoluciones de enzima
Se añadió una cantidad adecuada de diluyente de proteínas a rhVAP-1 en polvo, obteniendo 1 mg/ml de disolución madre para su almacenamiento. Antes del estudio, se utilizó PBS para diluir y obtener disoluciones de enzima de concentraciones 4*.
(4) Preparación de mezclas de sustrato de concentraciones 2*
Se pesó una cantidad adecuada de bencilamina y se disolvió con PBS para obtener una disolución de bencilamina 200 mM. A la disolución de bencilamina se le añadió disolución madre de Amplex Red 2 mM y disolución madre de HRP 500 U/ml y se diluyó con PBS para obtener mezclas de sustrato de concentraciones 2*.
(5) Método de estudio
En primer lugar, se añadieron 10 pl de disoluciones de compuesto de diferentes concentraciones, 25 pl de disoluciones de enzima rhVAP-1 de concentraciones 4* y 15 pl de PBS en una placa de 96 pocillos, se agitaron para mezclarlas uniformemente y, luego, se incubaron a 37 °C durante 30 min. A continuación, se añadieron 50 pl de mezclas de sustrato de concentraciones 2* en cada pocillo y se usó inmediatamente el lector de microplacas para llevar a cabo la detección con luz de excitación de 580 nm (20 nm) y luz de emisión de 620 nm (10 nm) durante 5 min cada vez, durante 30 min en total. La tasa de inhibición se calculó según la siguiente fórmula:
V(UFR/min) = (Ft(UFR)-Fü(UFR))/(tiempo(min))
Tasa de inhibición (%) = 100 %-Vcomp(UFR/min)/Vmáx(UFR/min) * 100 %
V: tasa de cambio de fluorescencia; Ft: lectura de fluorescencia en el punto de tiempo t; Fa lectura de fluorescencia inicial; tiempo: duración t; Vcomp: tasa de cambio de fluorescencia del compuesto sometido a prueba; Vmáx: tasa máxima de cambio de fluorescencia del orificio.
(6) Ajuste de la curva dosis-respuesta
Con el valor logarítmico de la concentración en el eje X y el porcentaje de la tasa de inhibición en el eje Y, se utilizó la pendiente logarítmica (inhibidor) frente a variable de respuesta del software de análisis GraphPad Prism 5 para ajustar una curva dosis-respuesta, obteniendo así el valor de CI50 de actividad de cada compuesto frente a la enzima.
2. Selectividad de los compuestos frente a la enzima rhAOC1
(1) Instrumento, consumible y reactivo
Lector de microplacas (Perkin Elmer, Nivo 5S), placa de 96 pocillos con fondo negro no transparente (Corning) y enzima rhAOC1 (R&D).
(2) Preparación de disoluciones de compuestos en gradientes de concentración
Se tomó una cantidad adecuada del compuesto que iba a someterse a prueba, se disolvió en DMSO hasta 10 mM y luego se almacenó. Antes del estudio, se tomó una cantidad adecuada de disolución madre del compuesto 10 mM que iba a someterse a prueba y se diluyó en gradientes 3 veces con DMSO, 10 gradientes de concentración en total. Después, se diluyó cada gradiente de concentración 10 veces con 0,1 M de PBS.
(3) Preparación de disoluciones de enzima
Se tomó una cantidad adecuada de disolución madre de enzima rhAOC1 a una concentración de 0,441 mg/ml y se diluyó con una cantidad adecuada de disolución de tampón HEPES 50 mM para obtener disoluciones de enzima de concentraciones 4*.
(4) Preparación de mezclas de sustrato de concentraciones 2*
Se pesó una cantidad adecuada de histamina y se disolvió con disolución de tampón HEPES 50 mM para obtener una disolución de histamina 20 mM. A la disolución de histamina se le añadió disolución madre de Amplex Red 2 mM y disolución madre de HRP 500 U/ml y se diluyó con disolución de tampón HEPES 50 mM para obtener mezclas de sustrato de concentraciones 2*.
(5) Método de estudio
En primer lugar, se añadieron 10 pl de disoluciones de compuesto de diferentes concentraciones, 25 pl de disoluciones de enzima rhAOC1 de concentraciones 4* y 15 pl de disolución de tampón HEPES 50 mM en una placa de 96 pocilios, se agitaron para mezclarlas uniformemente y, luego, se incubaron a 37 °C durante 30 min. A continuación, se añadieron 50 j l de mezclas de sustrato de concentraciones 2* en cada pocillo y se usó inmediatamente el lector de microplacas para detectar la intensidad de fluorescencia de cada pocillo con luz de excitación de 580 nm (20 nm) y luz de emisión de 620 nm (10 nm) durante 5 min cada vez, durante 30 min en total. La tasa de inhibición se calculó según la siguiente fórmula:
V(UFR/min) = (Ft(UFR)-Fü(UFR))/(tiempo(min))
Tasa de inhibición (%) = 100 %-Vcomp(UFR/min)/Vmáx(UFR/min) * 100 %
V: tasa de cambio de fluorescencia; Ft: lectura de fluorescencia en el punto de tiempo t; Fa lectura de fluorescencia inicial; tiempo: duración t; Vcomp: tasa de cambio de fluorescencia del compuesto sometido a prueba; Vmáx: tasa máxima de cambio de fluorescencia del orificio.
(6) Ajuste de la curva dosis-respuesta
Con el valor logarítmico de la concentración en el eje X y el porcentaje de la tasa de inhibición en el eje Y, se utilizó la pendiente logarítmica (inhibidor) frente a variable de respuesta del software de análisis GraphPad Prism 5 para ajustar una curva dosis-respuesta, obteniendo así el valor de CI50 de actividad de cada compuesto frente a la enzima.
3. Los resultados del estudio se muestran en la tabla 2
Tabla 2
Muestras<CI50 de rhVAP-1>
(nM)1 CI50 de rhAOC1 (nM) Clorhidrato del compuesto A6 23 8946
Clorhidrato del compuesto A7 46 50000
Clorhidrato del compuesto A9 37 911
Clorhidrato del compuesto A10 40 1237
Compuesto A13 58 4181
Compuesto A21 96 4051
Compuesto A22 44 14799
Clorhidrato del compuesto A23 39 N/A
Clorhidrato del compuesto A24 54 4719
Compuesto A25 45 11535
Clorhidrato del compuesto A27 112 9652
Clorhidrato del compuesto A28 33 4058
Clorhidrato del compuesto A29 60 674
Clorhidrato del compuesto A31 53 8281
Clorhidrato del compuesto A32 15 23618
Clorhidrato del compuesto A33 23 >100000
Clorhidrato del compuesto A35 24 7035
Clorhidrato del compuesto A37 8 N/A
Clorhidrato del compuesto A42 17 28909
Compuesto A41 8 9646
Clorhidrato del compuesto A44 13 N/A
Clorhidrato del compuesto A47 20 N/A
Clorhidrato del compuesto A48 12 N/A
Clorhidrato del compuesto A49 17 N/A
NA representa no sometido a prueba.
Puede verse en la tabla anterior que los compuestos de la presente invención muestran una excelente inhibición de la enzima rhVAP-1 y una excelente selectividad frente a la enzima rhAOCI. Esto indica que los compuestos de la presente invención se pueden aplicar en la prevención y/o el tratamiento de enfermedades relacionadas con un aumento de la expresión o un aumento de la actividad de la enzima VAP-1. Además, debido a que los compuestos de la presente invención muestran una excelente inhibición de la enzima VAP-1 y una excelente selectividad frente a la enzima rhAOCI, no se producirán efectos secundarios a partir de la inhibición de la enzima rhAOCI.
Ejemplo biológico 3: selectividad de los compuestos de la presente invención frente a la enzima MAO-A/B
(1) Instrumento, consumible y reactivo
Lector de microplacas (Perkin Elmer, EnVision), placa de 384 pocillos (Perkin Elmer), centrífuga (Eppendorf), MAO-Glo™ (Promega), MAO-A (Active Motif) y MAO-B (Active Motif).
(2) Preparación de disoluciones de compuestos en gradientes de concentración
Se tomó una cantidad adecuada del compuesto que iba a someterse a prueba, se disolvió en DMSO hasta 10 mM y luego se almacenó. Luego, se diluyó la disolución en gradientes 4 veces con DMSO, 6 gradientes de concentración en total.
(3) Preparación de disoluciones de enzima
Se diluyó la disolución madre de MAO-A/B con la disolución de tampón experimental para MAO-A/B para obtener disoluciones de enzima de concentraciones 2*.
(4) Preparación de mezclas de sustrato de concentraciones 2*
Se diluyó la disolución madre de la mezcla de sustrato de MAO-A/B con la disolución de tampón experimental para MAO-A/B para obtener mezclas de sustrato de concentraciones 2*.
(5) Método de estudio
Se añadieron 200 nl de disoluciones de compuestos o disolventes de diferentes concentraciones y 10 pl de disoluciones de enzima MAO-A/B de concentraciones 2* en una placa de 384 pocillos, se centrifugaron a 1000 rpm durante 60 s, se agitaron para mezclarlas uniformemente y, después, se incubaron a temperatura ambiente durante 15 min. Luego, se añadieron 10 pl de mezclas de sustrato de concentraciones 2* en cada pocillo y se inició la reacción. Se centrifugó la placa de 384 pocillos a 1000 rpm durante 60 s, se agitó para lograr una mezcla uniforme y, después, se incubó a temperatura ambiente durante 60 min. Se añadieron 20 pl de disolución de parada de prueba para detener la reacción. Se realizó la centrifugación a 1000 rpm durante 60 s y se agitó para lograr una mezcla uniforme. Después de 30 min en reposo, se utilizó el lector de microplacas para realizar la lectura.
La tasa de inhibición se calculó según la siguiente fórmula:
Tasa de inhibición (%) = (Señal_Máx-Señal_Muestra)/(Señal_Máx-Señal_ min)*100
(6) Ajuste de la curva dosis-respuesta
Con el valor logarítmico de la concentración en el eje X y el porcentaje de la tasa de inhibición en el eje Y, se utilizó la pendiente logarítmica (inhibidor) frente a variable de respuesta del software de análisis GraphPad Prism 5 para ajustar una curva dosis-respuesta, obteniendo así el valor de CI50 de actividad de cada compuesto frente a la enzima.
3. Los resultados del estudio se muestran en la tabla 3
Tabla 3
Muestras CI50 de MAO-A (nM) CI50 de MAO-B (nM) Compuesto A1 67000 >100000
Clorhidrato del compuesto A2 >100000 >100000
Clorhidrato del compuesto A6 89120 >100000
Clorhidrato del compuesto A7 >100000 >100000
Compuesto A22 >100000 >100000
Compuesto A25 >100000 >100000
Clorhidrato del compuesto A28 >100000 >100000
Clorhidrato del compuesto A29 87730 >100000
Clorhidrato del compuesto A32 60970 >100000
Clorhidrato del compuesto A33 55940 >100000
Clorhidrato del compuesto A35 8809 92740
Clorhidrato del compuesto A37 >100000 >100000
Compuesto A41 >100000 >100000
Clorhidrato del compuesto A42 47600 >100000
Clorhidrato del compuesto A44 77430 88900
Puede verse en la tabla 3 anterior que los compuestos de la presente invención muestran una buena actividad inhibidora frente a la enzima rhVAP-1 y una excelente selectividad frente a la monoaminooxidasa (MAO). En resumen, se puede observar en la tabla 1, tabla 2 y tabla 3 anteriores que al tratar y/o prevenir enfermedades relacionadas con la enzima SSAO/VAP-1, los compuestos de la presente invención no producen efectos secundarios provocados por la inhibición de la enzima rhAOC1 y la enzima MAO.
Ejemplo biológico 4: evaluación de los compuestos de la presente invención en la barrera hematoencefálica de ratas (1) Método de administración y toma de muestras en animales:
Se disolvieron el compuesto de estudio A1, el compuesto A41 y PXS-4728 en solución salina normal para preparar disoluciones. Las disoluciones preparadas se administraron por separado mediante administración intragástrica a ratas SD a una dosis de 10 mg/kg. Los puntos de tiempo para la toma de muestras de sangre y tejido cerebral fueron: 0,0167 h, 1 h y 6 h. En cada punto de tiempo, se extrajeron muestras de tres ratas SD.
(2) Extracción de muestras:
El día del estudio, se sujetaron los animales para extraer 0,15 ml de sangre de la vena yugular en cada punto de tiempo establecido, y se colocaron las muestras de sangre completa en tubos de anticoagulación que contenían EDTA-K2. Una vez completadas las tomas de muestras de sangre, se realizó inmediatamente la perfusión cardíaca de los animales y, tras la perfusión cardíaca, se extrajeron muestras de tejido cerebral.
(3) Tratamiento de las muestras:
Después de que las muestras de sangre completa se centrifugaron en condiciones de 1524 g durante 10 min, se extrajeron muestras de plasma sobrenadante en tubos de muestra. Se pesaron las muestras de tejido, se les añadió una disolución acuosa de metanol al 20 % en a una razón de peso-volumen de 1:5 (tejido:homogeneizado) y se homogeneizaron. Se almacenaron las muestras biológicas a de -40 °C a -20 °C para su análisis.
(4) Método de análisis de muestras:
Muestra de plasma: se sacaron las muestras que iban a someterse a prueba del refrigerador, se descongelaron de manera natural a temperatura ambiente y, luego, se agitaron por rotación durante 5 min, y se pipetearon con precisión 20 pl de muestra de plasma en tubos de centrífuga de 1,5 ml. Se añadieron 100 pl de disolución de trabajo de patrón interno (disolución de 5 ng/ml de verapamilo y 50 ng/ml de glibenclamida en acetonitrilo) y se realizó una mezcla uniforme. Después de 1 min de agitación por rotación, se realizó la centrifugación a 13.000 rpm durante 8 min. Se pipetearon con precisión 40 pl de sobrenadante en una placa de 96 pocillos a la que se le añadieron previamente 160 pl de agua/pocillo. Se realizó una mezcla uniforme agitando por rotación durante 10 min seguido por ensayo por<c>L-EM/EM.
Muestra de tejido cerebral: se sacaron las muestras que iban a someterse a prueba del refrigerador, se descongelaron de manera natural a temperatura ambiente y, después, se agitaron por rotación durante 5 min, y se pipetearon con precisión 50 pl de muestra de plasma en tubos de centrífuga de 1,5 ml. Se añadieron 250 pl de disolución de trabajo de patrón interno (disolución de 5 ng/ml de verapamilo y 50 ng/ml de glibenclamida en acetonitrilo) y se realizó una mezcla uniforme. Después de 1 min de agitación por rotación, se realizó la centrifugación a 13.000 rpm durante 8 min. Se pipetearon con precisión 30 pl de sobrenadante en una placa de 96 pocillos a la que se le añadieron previamente 150 pl de agua/pocillo. Se realizó una mezcla uniforme agitando por rotación durante 10 min seguido por ensayo por CL-EM/EM.
(5) Método de procesamiento de datos:
Se utilizó el sistema Analyst 1.6.2 de AB Sciex para generar los resultados de concentración de los compuestos sometidos a prueba. Se utilizó Excel de Microsoft para calcular parámetros, como el valor medio, la desviación estándar y el coeficiente de variación (excluyendo los generados directamente por el sistema Analyst 1.6.2).
(6) Los resultados se muestran en la tabla 4.
Tabla 4
BLOQ significa que la concentración está por debajo del límite de cuantificación; y NA significa incalculable Puede verse en la tabla 4 anterior que los compuestos A1 y A41 de la presente invención, incluso a lo largo del tiempo, tienen concentraciones tan bajas en los tejidos cerebrales que los compuestos están por debajo del límite de detección. Esto indica que los compuestos de la presente invención tienen dificultad para atravesar la barrera hematoencefálica, por lo que el riesgo de toxicidad de los compuestos de la presente invención para el sistema nervioso es muy bajo.
Ejemplo biológico 5: evaluación PK de los compuestos en ratas
Administración a animales y extracción de muestras:
Se disolvieron cada uno de los compuestos del estudio A1, A6, A32, A41 y A42 en solución salina normal para preparar las disoluciones. Las disoluciones de los compuestos se administraron por separado a ratas SD mediante administración intragástrica a una dosis de 5,0 mg/kg. Los puntos de tiempo para la extracción de sangre fueron 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h.
Se disolvieron cada uno de los compuestos del estudio A1, A6, A32, A41 y A42 en solución salina normal para preparar las disoluciones. Las disoluciones de los compuestos se administraron por separado a ratas SD mediante inyección intravenosa a una dosis de 1,0 mg/kg. Los puntos de tiempo para la extracción de sangre fueron 5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h y 24 h.
Se realizó cateterización venosa el día anterior a la administración. Después de la administración, se extrajeron aproximadamente 300 pl de sangre de la vena yugular y se colocaron en tubos de anticoagulación que contenían EDTA-K2. Se realizó la preparación dentro de los 30 min posteriores a la extracción de sangre. Se obtuvieron muestras de plasma mediante centrifugación a 8000 rpm durante 6 min a 4 °C y se almacenaron en un refrigerador a -80 °C antes de realizar las pruebas de plasma.
Método de análisis de muestras:
(1) se sacaron las muestras que iban a someterse a prueba del refrigerador a -80 °C, se descongelaron de manera natural a temperatura ambiente y luego se agitaron por rotación durante 5 min;
(2) se pipetearon con precisión 20 pl de muestra de plasma en un tubo de centrífuga de 1,5 ml;
(3) se añadieron 200 pl de disolución de trabajo de patrón interno (disolución de tolbutamida en metanol) en una concentración de 100 ng/ml y se realizó una mezcla uniforme;
(4) después de 5 min de agitación por rotación, se realizó la centrifugación a 12.000 rpm durante 5 min;
(5) se pipetearon con precisión 50 pl de sobrenadante en una placa de 96 pocillos a la que se le añadieron previamente 150 pl de agua/pocillo;
(6) se realizó una mezcla uniforme agitando por rotación durante 5 min, seguido por un ensayo por CL-EM/EM. Método de procesamiento de datos:
Se utilizó el sistema Analyst 1.6.3 de AB Sciex para generar los resultados de concentración de los compuestos sometidos a prueba. Se utilizó Excel de Microsoft para calcular parámetros, como el valor medio, la desviación estándar y el coeficiente de variación (excluyendo los generados directamente por el sistema Analyst 1.6.3). Se adoptó el software NCA Pharsight Phoenix 6.1 para calcular los parámetros PK (Tmáx era la mediana).
Resultados:
Tabla 5: parámetros PK de compuestos en ratas SD (i.v.: 1 mg/kg, v.o.: 5 mg/kg, n=3)
Compuestotz1/2 i.v./v.o. Vz_Obs i.v. Cl_Obs i.v. Tmáx v.o. AUCinf i.v./v.o.
(h) (l/kg) (l/h/kg) (h) (h*ng/ml)<F%>A1 0,87/1,17 2,31 1,85 2,00 545/2371 87,0 A6 (clorhidrato) 0,73/1,09 2,38 2,27 0,50 445/1697 76,3 A32 (clorhidrato) 0,48/0,75 1,20 1,75 0,25 572/4950 173 A41 0,56/1,79 1,53 1,89 1,00 531/1643 61,9 A42 (clorhidrato) 0,53/1,33 1,29 1,77 1,00 591/4477 151 Nota: TZ1/2: semivida terminal; CI_Obs: tasa de aclaramiento; Vz_Obs: volumen aparente de distribución; Tmáx: tiempo de concentración en plasma máxima observada; AUCinf: área bajo la curva de concentración en plasma-tiempo 0-~; F%: biodisponibilidad absoluta
Puede verse a partir de los resultados de la tabla 5 que los compuestos de la presente invención muestran tasas de aclaramiento bajas y una excelente biodisponibilidad absoluta por vía oral, lo que indica que los compuestos de la presente invención tienen excelentes propiedades farmacocinéticas.
Aplicabilidad industrial
El compuesto de halo-alilamina de la presente invención puede usarse para prevenir y/o tratar enfermedades relacionadas con o mediadas por la proteína SSAO/VAP-1. Además, el compuesto de la presente invención muestra una excelente actividad inhibidora selectiva frente a la enzima VAP-1 en relación con la enzima rhAOC1 y la enzima MAO, y difícilmente puede provocar otros efectos secundarios. Además, en comparación con el medicamento existente, el compuesto de la presente invención tiene dificultad para atravesar la barrera hematoencefálica, por lo que el compuesto de la presente invención tiene un riesgo de toxicidad muy bajo para el sistema nervioso, es decir, la seguridad del compuesto de la presente invención es excelente.
Claims (1)
- REIVINDICACIONES Compuesto de la fórmula I,en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno; R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6 o forman un heterociclo de 5-10 miembros que contiene nitrógeno opcionalmente sustituido con un sustituyente junto con un átomo de N unido a los mismos; R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; L1 está ausente o es -CR'R''-, -N-, -O-, -S-, -SO2-, S(O), -SONR'-, -SO2NR'- o -NR'CONR'-, y R' y R'' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-1), (A-2), (A-3) o (a):(a) ; m es un número entero de desde 0 hasta 3; Y1, Y2, Y3 e Y4 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, NH, O, S y C=O; X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N; cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1.6, alcoxi C1-6-alquilo C1.6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1.6, alquiltio C1-6-alquilo C1.6, alquilamino C1.6, (alquil C1-6)2amino, alquilamino C1-6-alquilo C1.6, alquilaminocarbonilo C1-6, alquilaminocarbonil C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilamino C1-6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1-6, (alquil C1-6)2amino-alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilcarbonil C1-6-alquilo C1-6, alquilaminosulfonilo C1.6, alquilaminosulfonil C1-6-alquilo C1.6, alquilsulfonilamino C1.6, alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1.6, alquilsulfonilo C1.6, alquilsulfonil C1-6-alquilo C1.6, Cy2-, Cy2-alquilo C1.6, Cy2-alcoxilo C1.6, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más Rb, Cy2 es un cicloalquilo de 3-12 miembros, cicloalquenilo de 3-12 miembros, heterociclilo de 3-12 miembros, arilo o heteroarilo de 5-14 miembros; cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo Ci-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1-6, alquilamino C1-6, (alquil C1-6)2amino, alquilaminocarbonilo C1-6, alquilcarbonilamino C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilaminosulfonilo C1-6, alquilsulfonilamino C1-6 y alquilsulfonilo C1-6; = representa un enlace sencillo o un doble enlace; y representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo, o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero o un tautómero del mismo. Compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo según la reivindicación 1,en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno; R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6 o forman un heterociclo de 5-10 miembros que contiene nitrógeno opcionalmente sustituido con un sustituyente junto con un átomo de N unido a los mismos; R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; L1 está ausente o es -CR'R"-, -N-, -O-, -S-, -SO2-, S(O), -SONR'-, -SO2NR'- o -NR'CONR'-, y R' y R'' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-1), (A-2), (A-3) o (a) a continuación:m es un número entero de desde 0 hasta 3; Y1, Y2, Y3 e Y4 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, NH, O, S y C=O; X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N; cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1-6, alcoxi C1-6-alquilo C1-6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1-6, alquiltio C1-6-alquilo C1-6, alquilamino C1-6, (alquil C1-6)2amino, alquilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilaminocarbonilo C1-6, alquilaminocarbonil C1-6-alquilo C1-6, alquilcarbonilamino C1-6, alquilcarbonilamino C1-6-alquilo C1-6, (alquil C1-6)2amino-alquilo C1-6, alquilcarbonilo C1-6, alquilcarbonil C1-6-alquilo C1-6, alquilaminosulfonilo C1-6, alquilaminosulfonil C1-6-alquilo C1-6, alquilsulfonilamino C1-6, alquilsulfonilamino C1-6-alquilo C1-6, alquilsulfonilo C1-6, alquilsulfonil C1-6-alquilo C1-6, Cy2-, Cy2-alquilo C1-6, Cy2-alcoxilo C1-6, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más Rb, Cy2 es un cicloalquilo de 3-12 miembros, cicloalquenilo de 3-12 miembros, heterociclilo de 3-12 miembros, arilo o heteroarilo de 5-14 miembros; cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo C1-6, alquenilo C2-6, alquinilo C2-6, alcoxilo C1.6, alcoxi C1-6-alquilo C1.6, alcoxi C1-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1.6, alquilamino C1.6, (alquil C1-6)2amino, alquilaminocarbonilo C1.6, alquilcarbonilamino C1-6, alquilcarbonilo C1.6, alquilaminosulfonilo C1.6, alquilsulfonilamino C1.6 y alquilsulfonilo C1.6; = representa un enlace sencillo o un doble enlace; y representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo. Compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo según la reivindicación 2, en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno; R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; R5 y R6 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; L1 está ausente, o es -CR'R"-, -N-, -O- o -S-, y R' y R'' se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; Cy1 es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-1), (A-2), (A-3) o (a) a continuación:m es un número entero de desde 0 hasta 3; Y1, Y2, Y3 e Y4 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, NH y C=O; X1, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N; cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alcoxilo C1-6, alcoxi Ci-6-alquilo C1-6, alcoxi Ci-6-alcoxilo C1-6, alquiltio C1-6, alquiltio Ci-6-alquilo C1-6, alquilamino Ci-6, alquilamino Ci-6-alquilo Ci-6, alquilaminocarbonilo Ci-6, alquilaminocarbonil Ci-6-alquilo Ci-6, alquilcarbonilamino Ci-6, alquilcarbonilamino Ci-6-alquilo Ci-6, alquilcarbonilo Ci-6, alquilcarbonil Ci-6-alquilo Ci-6, Cy2, Cy2-alquilo Ci-6, Cy2-alcoxilo Ci-6, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb, Cy2 es un cicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclilo de 5-10 miembros, fenilo o heteroarilo de 5-10 miembros; cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo Ci-6, alcoxilo Ci-6, alcoxi Ci-6-alquilo Ci-6, alcoxi Ci-6-alcoxilo Ci-6, alquiltio Ci-6, alquilamino Ci-6, alquilaminocarbonilo Ci-6, alquilcarbonilamino Ci-6 y alquilcarbonilo Ci-6; y representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo. Compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, éster, estereoisómero o tautómero del mismo según las reivindicaciones 2 o 3, en donde Cyi es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-11), (a-i) o (a-2) a continuación:m es un número entero que es 1 o 2; Yi, Y2 e Y3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH y NH; Xi, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N, NH y C=O, y al menos uno de Xi, X2 y X3 es N; y representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo. Compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo según la reivindicación 4, en donde Cyi es un grupo que no está sustituido o está sustituido con uno o más Ra que se muestra en la fórmula general (A-11) o (a-i) a continuación:m es un número entero que es 1 o 2; Y2 e Y3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH y NH; Xi, X2 y X3 se seleccionan cada uno independientemente de CH2, CH, N y NH, y al menos uno de X1, X2 y X3 es N; y representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo. Compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo según la reivindicación 5, en donde Ri y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y halógeno, y Ri y R2 no son ambos hidrógeno; R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo Ci-a; R5 y Ra se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo Ci-a; Li está ausente; Cyi es uno de los siguientes grupos no sustituidos o sustituidos con uno o más Ra:cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo Ci-a, alcoxilo Ci-a, alcoxi Ci-a-alquilo Ci-a, alcoxi Ci-a-alcoxilo Ci-a, alquilamino Ci-a, alquilamino Ci-a-alquilo Ci-a, alquilaminocarbonilo Ci-a, alquilaminocarbonil Ci-a-alquilo Ci-a, alquilcarbonilamino Ci-a, alquilcarbonilamino Ci-a-alquilo Ci-a, alquilcarbonilo Ci-a, alquilcarbonil Ci-a-alquilo Ci-a, Cy2, Cy2-alquilo Ci-a, Cy2-alcoxilo Ci-a, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb, Cy2 es un cicloalquilo de 3-8 miembros, heterociclilo de 5-i0 miembros, fenilo o heteroarilo de 5-i0 miembros; cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo Cia, alcoxilo Ci-a, alcoxi Ci-a-alquilo Ci-a, alcoxi Ci-a-alcoxilo Ci-a, alquiltio Ci-a, alquilamino Ci-a, alquilaminocarbonilo Ci-a, alquilcarbonilamino Ci-a y alquilcarbonilo Ci-a; representa un doble enlace opcionalmente presente en la estructura del anillo; y preferiblemente Cy2 es cicloalquilo de 3-a miembros, heterociclilo de 5-a miembros, fenilo o heteroarilo de 5-a miembros. Compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo según la reivindicación i, en donde Cyi es uno de los siguientes grupos no sustituidos o sustituidos con uno o más Ra:8aCompuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo según la reivindicación 7, en donde R1 y R2 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y flúor, y R1 y R2 no son ambos hidrógeno; R3 y R4 se seleccionan cada uno independientemente de hidrógeno y alquilo C1-6; R5 y R6 son hidrógeno; L1 está ausente; Cy1 es uno de los siguientes grupos no sustituidos o sustituidos con uno o más sustituyentes Ra:cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6, alcoxilo C1-6, alquilaminocarbonilo C1-6, Cy2, Cy2-carbonilo y Cy2-aminocarbonilo no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb, Cy2 es un cicloalquilo de 3-6 miembros, heterociclilo de 5-6 miembros, fenilo o heteroarilo de 5-6 miembros; cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno, alquilo C1-6 y alcoxilo C1-6; preferiblemente, Cy1 es uno de los siguientes grupos sustituidos con uno o más sustituyentes Ra:preferiblemente, cada Ra se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, carboxilo, ciano, nitro, halógeno y alquilo C1-6 o cicloalquilo de 3-6 miembros no sustituido o sustituido con uno o más sustituyentes Rb; y preferiblemente, cada Rb se selecciona independientemente de hidroxilo, amino, ciano, nitro y halógeno. 9. Compuesto, o sal farmacéuticamente aceptable, estereoisómero o tautómero del mismo según la reivindicación 1, en donde el compuesto se selecciona de:10. Composición farmacéutica que comprende el compuesto o la sal farmacéuticamente aceptable, el estereoisómero o el tautómero del mismo según una cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en donde la composición farmacéutica comprende opcionalmente uno o más portadores farmacéuticamente aceptables. 11. Composición farmacéutica según la reivindicación 10, que se utiliza para prevenir y/o tratar una enfermedad relacionada con o mediada por la proteína SSAO/VAP-1.
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