ES2958412T3 - Cerdulatinib para el tratamiento de tumores malignos de linfocitos B - Google Patents

Abstract

En el presente documento se proporcionan composiciones y métodos para tratar un cáncer hematológico en recaída o refractario en un paciente humano que lo necesita. Los métodos implican administrar al paciente una dosis diaria de aproximadamente 10 mg a aproximadamente 75 mg de cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde los pacientes padecen uno o más de un cáncer de células B, leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de células B grandes (DLBCL) u otro FL transformado y/o han recaído o no han respondido a una quimioterapia previa. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN

Cerdulatinib para el tratamiento de tumores malignos de linfocitos B

Campo

La presente divulgación se refiere a cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de cánceres hematológicos, que incluyen tumores malignos de linfocitos B y cánceres hematológicos recidivantes o resistentes.

Antecedentes

Los tumores de los tejidos hematopoyéticos y linfoides o tumores malignos hematopoyéticos y linfoides son tumores que afectan a la sangre, la médula ósea, la linfa y el sistema linfático. Como todos los elementos están íntimamente conectados a través de tanto el aparato circulatorio como el sistema inmunitario, una enfermedad que afecta a uno afectará frecuentemente a los otros también, lo que hace que la mieloproliferación y linfoproliferación (y así las leucemias y los linfomas) sean problemas estrechamente relacionados y que frecuentemente se solapen.

Los tumores malignos hematológicos pueden derivar de cualquiera de los dos linajes de glóbulos sanguíneos principales: estirpes celulares mieloides y linfoides. La estirpe celular mieloide produce normalmente granulocitos, eritrocitos, trombocitos, macrófagos y mastocitos; la estirpe celular linfoide produce linfocitos B, T, NK y células plasmáticas. Los linfomas, leucemias linfocíticas y mieloma son de la línea linfoide, mientras que la leucemia mielógena aguda y crónica, los síndromes mielodisplásicos y las enfermedades mieloproliferativas son de origen mieloide.

Los linfomas de linfocitos B son tipos de linfoma que afectan a los linfocitos B. Los linfomas son "cánceres de la sangre" en los ganglios linfáticos. Los linfomas de linfocitos B incluyen tanto linfomas de Hodgkin como la mayoría de los linfomas no hodgkinianos.

El linfoma folicular (FL) es un tipo de cáncer de la sangre. Es el más común de los linfomas no hodgkinianos indolentes (de crecimiento lento) y la segunda forma más común de linfomas no hodgkinianos en general. Se define como un linfoma de linfocitos B del centro del folículo (centrocitos y centroblastos), que tiene al menos un patrón parcialmente folicular.

La leucemia linfocítica crónica de linfocitos B (B-CLL), también conocida como leucemia linfoide crónica (CLL), es el tipo más común de leucemia (un tipo de cáncer de los glóbulos blancos) en adultos. La CLL afecta a los linfocitos B, que se originan en la médula ósea, se desarrollan en los ganglios linfáticos, y normalmente luchan contra la infección produciendo anticuerpos. La CLL es un estadio del linfoma linfocítico pequeño (SLL), un tipo de linfoma de linfocitos B, que se presenta principalmente en los ganglios linfáticos. CLL y SLL se consideran la misma enfermedad preexistente, solo con diferentes presentaciones.

El linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL o DLBL) es un cáncer de linfocitos B, un tipo de glóbulo blanco responsable de producir anticuerpos. El linfoma difuso de linfocitos B grandes engloba un conjunto biológicamente y clínicamente diverso de enfermedades, muchas de las cuales no se pueden separar entre sí por criterios bien definidos y ampliamente aceptados.

Se requiere señalización mediada por el receptor de linfocitos B (BCR) para la patogénesis de la leucemia linfocítica crónica (CLL) y los fármacos que se dirigen a cinasas dentro del complejo de señalización de BCR están revolucionando el tratamiento de esta enfermedad.

Algunos agentes quimioterapéuticos empleados en la terapia de CLL incluyen ibrutinib (IMBRUVICA®), que se dirige a BTK y idelalisib (ZYDELIG®), que se dirige a PI3K5. Sin embargo, estos compuestos suprimen la enfermedad y no son normalmente curativos. Además, pacientes con CLL pueden desarrollar resistencia a estos agentes quimioterapéuticos, ya sea por mutaciones en BTK o proteínas de señalización aguas abajo, u otros mecanismos.

Están limitadas las opciones de tratamiento actuales para los pacientes que fracasan a las terapias habituales para CLL, SLL, DLBCL y FL. Por consiguiente, existe una necesidad de nuevas terapias para tumores malignos hematológicos.

Patel et al., Blood 124:3103 (2014) desvelan un estudio de fase I, abierto, de aumento de dosis múltiple del inhibidor doble Syk/Jak PRT062070 (cerdulatinib) en pacientes con tumores malignos de linfocitos B recidivantes/resistentes.

Sumario

En el presente documento se proporciona cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de un cáncer hematológico en un paciente humano en necesidad del mismo, en donde dicho uso comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde: la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 60 mg y se administra como 30 mg dos veces al día; o la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 50 mg y se administra como 25 mg dos veces al día; o la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 40 mg y se administra como 20 mg dos veces al día; o la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 30 mg y se administra como 15 mg dos veces al día.

El paciente puede tener un cáncer hematológico recidivante o refractario.

En algunas realizaciones, el cáncer hematológico es leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma linfocítico pequeño (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma folicular transformado (tFL), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL) o linfoma de células del manto (MCL).

El paciente en necesidad del mismo puede presentar resistencia al fármaco a y/o una recaída de un cáncer hematológico por varios motivos. Por ejemplo, el paciente puede tener una mutación asociada a recaída y/o una resistencia a un fármaco para tratar un cáncer hematológico. Por ejemplo, el paciente puede tener una mutación del17p, una mutación P53, una mutación ATM, una mutación STAT, una mutación STA 6, una mutación C481S STAT6, una mutación asociada a la vía NOTCH, una mutación asociada a la vía de la cadherina, o una combinación de los mismos. Según algunas realizaciones, el paciente no tiene una mutación en todos de P53, BTK y EP300.

Descripción Breve De Los Dibujos

LaFigura 1proporciona un gráfico de barras que representa la inhibición de la incorporación de EdU por análisis de FACS en una variedad de estirpes celulares de DLBCL a 2 μM de cerdulatinib a las 72 horas. LaFigura 2proporciona un gráfico de barras que representa la inhibición de inducción precedente de la escisión de caspasa 3 por análisis de FACS en una variedad de estirpes celulares de DLBCL a 2 μM de cerdulatinib a las 72 horas.

LaFigura 3proporciona puntuaciones de inflamación de la pata trasera (media ± error estándar de la media ("EEM"); eje y; n=8 por grupo) representadas con el tiempo (eje x) mientras se trata con vehículo o diversos niveles de dosis de cerdulatinib. Las concentraciones plasmáticas promedio (C<máx>) para cada grupo de administración se muestran a la izquierda del gráfico. Los asteriscos indican significación estadística con respecto al vehículo por la prueba de la t de Student (p < 0,05).

LaFigura 4muestra los resultados de los efectos de ibrutinib y cerdulatinib en células TMD8 WT transfectadas con BTK. Se añadió 250 nM de ibrutinib o cerdulatinib al cultivo y se contó diariamente el número de células vivas durante 7 días. Los resultados mostrados son la media ± error estándar ("EE") de 4 experimentos duplicados. Círculo abierto = sulfóxido de dimetilo ("DMSO"); círculo cerrado = ibrutinib ("IBR"); triángulo = cerdulatinib ("Cerd").

LaFigura 5muestra los efectos de ibrutinib y cerdulatinib en células TMD8 transfectadas con BTK<C481S>. Se añadió 250 nM de ibrutinib o cerdulatinib al cultivo y se contó diariamente el número de células vivas durante 7 días. Los resultados mostrados son la media ± EE de 4 experimentos duplicados. Círculo abierto = sulfóxido de dimetilo ("DMSO"); círculo cerrado = ibrutinib ("IBR"); triángulo = cerdulatinib ("Cerd").

LaFigura 6muestra que las células de CLL con IGHV no mutado ("UM") (N=33) son más sensibles a cerdulatinib que IGHV mutado ("M") en CLL (N=27). Se analizaron los datos por la prueba de latde Student. Se representa la media ± EE de CI<50>. P=0,0395.

LaFigura 7muestra la sensibilidad a cerdulatinib de células de CLL con diferentes anomalías citogenéticas. Se indican los números de caso para cada subgrupo. Se analizaron los datos por la prueba de ANOVA, se representan la media ± EE de CI<50>. *, P<0,05.

Descripción Detallada

1. Definiciones

A menos que se defina de otro modo, todos los términos técnicos y científicos usados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente es entendido por un experto habitual en la técnica a la que pertenece la presente divulgación. Como se usa en el presente documento, los siguientes términos tienen los siguientes significados. Se debe observar que, como se usa en el presente documento y en las reivindicaciones adjuntas, las formas en singular "un", "una", "el" y "la" incluyen referentes al plural, a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Por lo tanto, por ejemplo, referencia a "un agente" incluye una pluralidad de agentes.

Como se usa en el presente documento, el término "que comprende" o "comprende" pretende significar que las composiciones y métodos incluyen los elementos citados, pero no excluyen otros. "Que consiste esencialmente en", cuando se usa para definir composiciones y métodos, debe significar que se excluyen otros elementos de cualquier importancia esencial para la combinación para el fin establecido. Por lo tanto, una composición que consiste esencialmente en los elementos que se definen en el presente documento no excluiría otros materiales o etapas que no afectaran materialmente la(s) característica(s) básica(s) y novedosa(s) reivindicadas. "Que consiste en" debe significar que excluye más que oligoelementos de otros componentes y etapas de método sustanciales. Las realizaciones definidas por cada uno de estos términos de transición están dentro del alcance de la presente divulgación.

El término "aproximadamente", cuando se usa antes de una designación numérica, por ejemplo, temperatura, tiempo, cantidad y concentración, incluyendo intervalo, indica aproximaciones que pueden variar por (+) o (-) 10 %, 5 % o 1 %.

Como se usa en el presente documento, el término "sal farmacéuticamente aceptable" se refiere a cualquier ácido o sal de adición de base cuyos contraiones no son tóxicos para el paciente en las dosis farmacéuticas de las sales. Se conoce bien en el campo farmacéutico una multitud de sales farmacéuticamente aceptables. Si se utilizan sales farmacéuticamente aceptables de los compuestos de la presente divulgación en estas composiciones, las sales derivan preferentemente de ácidos y bases inorgánicos u orgánicos. Entre dichas sales de ácido están las siguientes: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benceno sulfonato, bisulfato, butirato, citrato, canforato, alcanfor sulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, glucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, 2-hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, pamoato, pectinato, persulfato, 3-fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato, hidrohaluros (por ejemplo, clorhidratos y bromhidratos), sulfatos, fosfatos, nitratos, sulfamatos, malonatos, salicilatos, metilen-bis-bhidroxinaftoatos, gentisatos, isetionatos, di-p-toluoiltartratos, etanosulfonatos, ciclohexilsulfamatos, quinatos y similares. Sales de adición de base farmacéuticamente aceptables incluyen, sin limitación, las derivadas de bases de metales alcalinos o alcalinotérreos o bases orgánicas convencionales, tales como trietilamina, piridina, piperidina, morfolina, N-metilmorfolina, sales de amonio, sales de metales alcalinos, tales como sales de sodio y potasio, sales de metales alcalinotérreos, tales como sales de calcio y magnesio, sales con bases orgánicas, tales como sales de diciclohexilamina, N-metil-D-glucamina, y sales con aminoácidos, tales como arginina, lisina, etc.

Además, los grupos que contienen nitrógeno básico pueden ser cuaternizados con agentes como haluros de alquilo inferior, tal como cloruros, bromuros y yoduros de metilo, etilo, propilo y butilo; sulfatos de dialquilo, tales como sulfatos de dimetilo, dietilo, dibutilo y diamilo, haluros de cadena larga, tales como cloruros, bromuros y yoduros de decilo, laurilo, miristilo y estearilo; haluros de aralquilo, tales como bromuros de bencilo y fenetilo, y otros. De esta manera se obtienen productos dispersables en agua o solubles en aceite o dispersables.

"Profármacos" de cerdulatinib u otros compuestos descritos en el presente documento también están englobados y son aquellos compuestos que experimentan fácilmente cambios químicos en condiciones fisiológicas para proporcionar los compuestos de la presente divulgación. Además, los profármacos se pueden convertir en los compuestos de la presente divulgación por métodos químicos o bioquímicos en un entornoex vivo.Por ejemplo, los profármacos pueden ser convertidos lentamente en los compuestos de la presente divulgación cuando se ponen en un depósito de parche transdérmico con una enzima o reactivo químico adecuado. Los profármacos son frecuentemente, pero no necesariamente, farmacológicamente inactivos hasta que se conviertan en el fármaco activo. Los profármacos se obtienen normalmente enmascarando un grupo funcional en el fármaco que se cree que se requiere en parte para la actividad con un progrupo (definido más adelante) para formar un prorresto que experimenta una transformación, tal como escisión, en las condiciones especificadas de uso para liberar el grupo funcional, y por tanto el fármaco activo. La escisión del prorresto puede avanzar espontáneamente, tal como a modo de una reacción de hidrólisis, o se puede catalizar o inducir por otro agente, tal como por una enzima, por luz, por ácido o base, o por un cambio de o exposición a un parámetro físico o medioambiental, tal como un cambio de temperatura. El agente puede ser endógeno a las condiciones de uso, tales como una enzima presente en las células a las que se administra el profármaco o las condiciones ácidas del estómago, o se puede suministrar exógenamente.

"Progrupo" se refiere a un tipo de grupo protector que, cuando se usa para enmascarar un grupo funcional dentro de un fármaco activo para formar un prorresto, convierte el fármaco en un profármaco. Los progrupos están fijados normalmente al grupo funcional del fármaco por enlaces que son escindibles en condiciones especificadas de uso. Por lo tanto, un progrupo es la porción de un prorresto que se escinde para liberar el grupo funcional en las condiciones especificadas de uso. Como ejemplo específico, un prorresto de amida de fórmula -NH-C(O)CH<3>comprende el progrupo -C(O)CH<3>.

Se conoce bien en la técnica una amplia variedad de progrupos, además de prorrestos resultantes, adecuados para enmascarar grupos funcionales en los compuestos descritos en el presente documento para dar profármacos. Por ejemplo, un grupo funcional amino puede ser enmascarado como un prorresto amida, carbamato, imina, urea, fosfenilo, fosforilo o sulfenilo, que se pueden hidrolizarin vivopara proporcionar el grupo amino. La divulgación incluye los ésteres y grupos acilo conocidos en la técnica para modificar las características de solubilidad o hidrólisis para su uso como formulaciones de liberación sostenida o de profármaco. Otros ejemplos específicos de progrupos adecuados y sus prorrestos respectivos serán evidentes para los expertos en la técnica.

Como se usa en el presente documento, un "inhibidor" se refiere a un agente o molécula que inhibe o se une a, bloquea parcialmente o totalmente la estimulación o actividad, disminuye, cierra, previene, retarda la activación o actividad enzimática, inactiva, desensibiliza o regula por disminución la actividad de un receptor.

El término "vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable" significa un vehículo o excipiente que es útil en la preparación de una composición farmacéutica que, en general, es segura, no tóxica y ni es biológica ni de otro modo no deseable, e incluye un vehículo o excipiente que es aceptable para uso veterinario, así como uso farmacéutico humano. Un "vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable", como se usa en el presente documento, incluye tanto uno como más de uno de dicho vehículo o excipiente.

El término "administrar" se refiere a administración por vía oral, administración como un supositorio, contacto tópico, administración intravenosa, intraperitoneal, intramuscular, intralesional, intranasal o subcutánea, o la implantación de un dispositivo de liberación lenta, por ejemplo, una minibomba osmótica, a un sujeto. La administración es por cualquier vía, que incluye parenteral y transmucosa (por ejemplo, yugal, sublingual, palatal, gingival, nasal, vaginal, rectal o transdérmica). La administración parenteral incluye, por ejemplo, intravenosa, intramuscular, intrarterial, intradérmica, subcutánea, intraperitoneal, intraventricular e intracraneal. Otros modos de administración incluyen, pero no se limitan a, el uso de formulaciones liposomales, infusión intravenosa, parches transdérmicos, etc.

"Paciente" se refiere a animales humanos y no humanos, especialmente mamíferos. Los ejemplos de pacientes incluyen, pero no se limitan a, seres humanos, vacas, perros, gatos, cabras, ovejas, cerdos y conejos.

Los términos "tratan", "tratar", "tratamiento" y variaciones gramaticales de los mismos, como se usa en el presente documento, incluyen retrasar, aliviar, mitigar o reducir parcialmente o completamente la intensidad de uno o más síntomas concomitantes de un trastorno o afección y/o aliviar, mitigar o impedir una o más causas de un trastorno o afección. Las sustancias para su uso en tratamientos como se describe en el presente documento se pueden aplicar preventivamente, profilácticamente, paliativamente o correctivamente.

Los términos "previenen", "prevenir", "prevención" y variaciones gramaticales de los mismos, como se usa en el presente documento, se refiere a retrasar o evitar parcialmente o completamente la aparición o reaparición de un trastorno o afección y/o uno o más de sus síntomas concomitantes o impedir que un sujeto adquiera o readquiera un trastorno o afección o reducir el riesgo de que un sujeto adquiera o readquiera un trastorno o afección o uno o más de sus síntomas concomitantes.

En el presente contexto, el término "terapéuticamente eficaz" o "cantidad eficaz" indica que un compuesto o material o cantidad del compuesto o material cuando se administra es suficiente o eficaz para prevenir, aliviar o mejorar uno o más síntomas de una enfermedad, trastorno o afección médica que está tratándose, y/o para prolongar la supervivencia del sujeto que está tratándose. La cantidad terapéuticamente eficaz variará dependiendo del compuesto, la enfermedad, el trastorno o la afección y su gravedad y la edad, peso, etc., del mamífero que se va a tratar. La dosis puede ser administrada convenientemente, por ejemplo, en dosis divididas hasta cuatro veces al día o en la forma de liberación sostenida.

Como se usa en el presente documento, "dosis diaria" se refiere a una cantidad total de una sustancia terapéutica que se toma en 24 horas.

Las composiciones descritas en el presente documento se usan en terapia para sujetos humanos. Otros sujetos animales incluyen vertebrados no humanos, por ejemplo, mamíferos, tales como primates no humanos, animales deportivos y comerciales, por ejemplo, equinos, bovinos, porcinos, ovinos, roedores y mascotas, por ejemplo, caninos y felinos.

2. Usos

Los linfocitos B malignos reciben señales de supervivencia que se originan a partir de un tumor en sí, así como de células no tumorales que residen en el microentorno. El receptor del antígeno de linfocitos B (BCR) y los receptores de citocinas contribuyen a la supervivencia.

Subconjuntos de linfomas de linfocitos B demuestran una dependencia de la señalización de BCR y/o citocina JAK/STAT para la supervivencia. SYK está situado aguas arriba de BTK, PI3K5 y PLCy2 en la vía de señalización de BCR, lo que hace que sea una posible diana terapéutica. El apoyo adicional a la supervivencia parece estar mediado por las vías JAK/STAT inducidas por citocinas, que se pueden activar por bucles de señalización autocrina de tumores, o por citocinas proinflamatorias que se originan a partir de leucocitos no infiltrantes de tumor presentes en el microentorno tumoral.

Se observan elevadas concentraciones en suero de varias citocinas en CLL y linfoma no hodgkiniano ("NHL"), y predicen una progresión más agresiva de la enfermedad. La fuente de estas citocinas puede derivar del tumor en sí en un modo de estimulación autocrina, o de leucocitos no tumorales que han organizado una respuesta inmunitaria ineficaz dentro del microentorno tumoral. Experimentalmente, se ha mostrado que IL4 promueve la supervivencia de linfocitos B de CLL en cultivo y los protege de la muerte mediante tratamiento con fludarabina y clorambucilo. El mecanismo subyacente a este apoyo de la supervivencia parece ser la regulación por incremento inducida por citocinas de miembros de la familia de BCL2.

La importancia de la señalización mediada por el receptor de linfocitos B (BCR) en la patogénesis de la leucemia linfocítica crónica (CLL) ha llegado a ser incluso más evidente en los últimos años, y los fármacos que se dirigen a las cinasas dentro del complejo de señalización de BCR están revolucionando el tratamiento de esta enfermedad. Los agentes recientemente autorizados para CLL recidivante/resistente incluyen ibrutinib (inhibidor de BTK) y idelalisib (inhibidor de PI3K5). Hasta la fecha, estos compuestos no han demostrado ser curativos, que puede estar mediado en parte por señales del tumor. Y, lo que es más importante, una proporción de pacientes están desarrollando resistencia a estos nuevos agentes, ya sea a través de mutaciones en BTK o PLCy para ibrutinib o debido a mecanismos desconocidos hasta la fecha. La tirosina cinasa del bazo (SYK) pertenece a la familia de SYK/ZAP70 de cinasas no receptoras y desempeña una función central en la transmisión de la activación de señales aguas abajo de los receptores BCR, de quimiocina e integrina dentro de los linfocitos B, y sigue siendo una diana interesante para el tratamiento de ciertos tumores malignos de linfocitos B y enfermedad autoinmunitaria.

Las células de CLL dependen de señales de diversas células que constituyen el microentorno. Las señales de IL-4 en linfocitos derivan predominantemente a través del receptor de IL-4 de tipo 1 (IL-4R) por proteína tirosina cinasas de Janus JAK1 y JAK3 dando como resultado la fosforilación de STAT6 (pSTAT6).

Las opciones de tratamiento actuales para pacientes que fracasan a las terapias habituales para la leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma linfocítico pequeño (SLL) y linfoma folicular (FL) están limitadas.

Cerdulatinib es un inhibidor reversible de molécula pequeña y que compite con ATP de miembros de la familia tanto de SYK como de JAK. Cerdulatinib, que se ha descrito previamente (véase, por ejemplo, el documento de patente U.S. 8.138.339 ), tiene el nombre químico 4-(ciclopropilamino)-2-(4-(4-(etilsulfonil)piperazin-1-il)fenilamino)pirimidin-5-carboxamida, y tiene la fórmula:

Como se usa en el presente documento, el cerdulatinib también se puede referir a una sal o profármaco farmacéuticamente aceptable del mismo.

Se contempla que el cerdulatinib puede ser útil para pacientes que habían recibido varios tratamientos con anterioridad y/o cánceres hematológicos recidivantes/resistentes, que incluyen, pero no se limitan a, CLL, FL, NHL y DLBCL. El cerdulatinib también induce la apoptosis en CLL primaria, con actividad preferencial en casos de mal pronóstico, tales como IGHV no mutado, CD49d alto, ZAP-70 o expresión de IgM de superficie.

En el presente documento se proporciona cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de un cáncer hematológico en un paciente humano en necesidad del mismo, en donde dicho uso comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de cerdulatinib, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en donde: la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 60 mg y se administra como 30 mg dos veces al día; o la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 50 mg y se administra como 25 mg dos veces al día; o la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 40 mg y se administra como 20 mg dos veces al día; o la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 30 mg y se administra como 15 mg dos veces al día. Cerdulatinib o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo se puede administrarse en una composición farmacéutica que comprende además un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

El cáncer hematológico puede ser un cáncer hematológico recidivante o refractario.

El paciente puede tener una mutación asociada a recaída y/o una resistencia a un fármaco para tratar un cáncer hematológico.

El paciente puede ser que padezca uno o más de un linfoma no hodgkiniano (NHL) de linfocitos B, leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma folicular (FL), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL) u otro FL transformado.

El paciente puede sufrir uno o más de tumor maligno de linfocitos B, leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma folicular (FL) o FL transformado.

El paciente puede padecer un tumor maligno avanzado.

El paciente puede haber recaído o no responder a una quimioterapia anterior. El paciente puede haber fracasado a al menos dos terapias anteriores. El paciente puede haber fracasado a al menos una terapia anterior.

El paciente puede tener un tumor maligno de linfocitos B. En algunas realizaciones, cerdulatinib o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa para tratar un cáncer hematológico, tal como leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma linfocítico pequeño (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma folicular transformado (tFL), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL) y/o linfoma de células del manto (MCL). En algunas realizaciones, cerdulatinib o la sal farmacéuticamente aceptable del mismo se usa para tratar un cáncer hematológico, tal como linfoma no hodgkiniano (NHL), leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma linfocítico pequeño (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma folicular transformado (tFL), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL) y/o linfoma de células del manto (MCL).

Según algunas realizaciones, el cáncer hematológico es CLL. Según algunas realizaciones, el cáncer hematológico es DLBCL. Según algunas realizaciones, el cáncer hematológico es FL. Según algunas realizaciones, el cáncer hematológico es SLL. Según algunas realizaciones, el cáncer hematológico es NHL. Según algunas realizaciones, el cáncer hematológico es tFL. Según algunas realizaciones, el cáncer hematológico es MCL.

Algunos quimioterapéuticos sufren resistencia a fármacos en un paciente, por ejemplo, debido a señalización mediada por las vías de activación de IL-4 de BCR y/o BCR, que son protectoras del cáncer hematológico. Cerdulatinib puede vencer estos mecanismos protectores, que conducen a resistencia al fármaco.

El paciente en necesidad del mismo puede presentar resistencia a fármacos a y/o una recaída de un cáncer hematológico por varios motivos. Por ejemplo, el paciente puede tener una mutación asociada a recaída y/o una resistencia a un fármaco para tratar un cáncer hematológico. Por ejemplo, el paciente puede tener una mutación del17p, una mutación P53, una mutación ATM, una mutación STAT, una mutación STA 6, una mutación C481S STAT6, una mutación asociada a la vía NOTCH o una mutación asociada a la vía de la cadherina.

El paciente puede tener una mutación S86A en STAT.

El paciente puede tener una mutación del17p, mutación del11q, una mutación P53, una mutación ATM, una mutación STAT, una mutación STA 6, una mutación C481S STAT6, una mutación asociada a la vía NOTCH, una mutación asociados a la vía de la cadherina, o una combinación de las mismas.

Según algunas realizaciones, el paciente no tiene una mutación en cada uno de P53, BTK y EP300.

El paciente puede tener una mutación MYD88, una mutación CARD11 o una mutación A20. El paciente puede tener anomalías genéticas de alto riesgo que incluyen del11q, trisomía 12 y del17p. El paciente puede tener una mutación del17p. El paciente puede tener una mutación del11q.

En algunas realizaciones, el paciente tiene una mutación BTK.

El paciente puede tener un mal pronóstico, tal como IGHV no mutado, CD49d alto, ZAP-70, o expresión de IgM superficial.

El paciente puede tener resistencia a un fármaco, que no es cerdulatinib. Los ejemplos no limitantes de estos fármacos son un anticuerpo anti-CD20, un inhibidor de BCL-2, un inhibidor de BTK, un inhibidor de P13K5, rituximab, un fármaco basado en platino, un antimetabolito, ibrutinib, idelalisib, fludarabina (fosfato de fludarabina, FLUDARA®), antraciclinas, un inhibidor de la vía BCR, ABT-199 (Venetoclax), u otro agente quimioterapéutico usado para tratar un cáncer hematológico. Otros ejemplos no limitantes de agentes quimioterapéuticos incluyen agentes alquilantes, disruptores citoesqueléticos, epotilonas, inhibidores de la histona deacetilasa, inhibidores de la topoisomerasa I, inhibidores de la topoisomerasa II, análogos de nucleótidos y análogos de precursores, antibióticos, agentes basados en platino, retinoides, alcaloides de la vinca, o una combinación de los mismos.

El paciente puede tener resistencia a un anticuerpo anti-CD20, un inhibidor de BCL-2, un inhibidor de BTK, un inhibidor de P13K5, rituximab, un fármaco basado en platino, un antimetabolito, una antraciclina, un inhibidor de la vía BCR, u otro agente quimioterapéutico usado para tratar un cáncer hematológico. El paciente puede tener resistencia a un fármaco seleccionado del grupo que consiste en ABT-199 (venetoclax), rituximab, ibrutinib, idelalisib y fludarabina (fosfato de fludarabina, FLUDARA®). El paciente puede tener resistencia a ibrutinib.

El paciente puede haber sido administrado previamente con un fármaco para tratar un cáncer hematológico. Los ejemplos no limitantes del fármaco incluyen un agente alquilante, un anticuerpo anti-CD20, un inhibidor de BCL-2, un inhibidor de BTK, un inhibidor de P13K5, rituximab, un fármaco basado en platino, un antimetabolito, ibrutinib, idelalisib, fludarabina (fosfato de fludarabina, FLUDARA<®>), antraciclinas, un inhibidor de la vía BCR, ABT-199 (venetoclax) y otros agentes usados para tratar un cáncer hematológico. Otros ejemplos no limitantes de agentes quimioterapéuticos incluyen disruptores citoesqueléticos, epotilonas, inhibidores de la histona deacetilasa, inhibidores de la topoisomerasa I, inhibidores de la topoisomerasa II, análogos de nucleótidos y análogos de precursores, antibióticos, agentes basados en platino, retinoides, alcaloides de la vinca, o una combinación de los mismos.

En algunas realizaciones, el paciente fue administrado previamente con un fármaco seleccionado del grupo que consiste en un agente alquilante, un anticuerpo anti-CD20, un inhibidor de BCL-2, un inhibidor de BTK, un inhibidor de P13K5, un fármaco basado en platino, un antimetabolito, una antraciclina, un inhibidor de la vía BCR y otro agente quimioterapéutico usado para tratar un cáncer hematológico. En algunas realizaciones, el paciente fue administrado previamente con un fármaco seleccionado del grupo que consiste en venetoclax, rituximab, ibrutinib, idelalisib y fludarabina. El fármaco puede ser R-CHOP (rituximab; ciclofosfamida; clorhidrato de doxorubicina; Oncovin (vincristina); prednisona). El fármaco puede ser R-CVP (rituximab; ciclofosfamida; vincristina; prednisona). El fármaco puede ser bevacizumab. El fármaco puede ser una combinación de fludarabina y rituximab, una combinación de bendamustina y rituximab, o una combinación de bevacizumab y rituximab.

El paciente puede tener 60 años o más y haber recaído después de una terapia de primera línea para el cáncer. El paciente puede tener 18 años o más y haber recaído o ser resistente después de una terapia de segunda línea para el cáncer. El paciente puede tener 60 años o más y tener resistencia primaria a una terapia de primera línea para el cáncer. El paciente puede tener 70 años o más y previamente no ha sido tratado. El paciente puede tener 70 años o más y no cumplir los requisitos y/o es poco probable que se beneficie de la terapia para el cáncer.

Las cantidades de diversos compuestos a administrar se pueden determinar por procedimientos convencionales teniendo en cuenta factores tales como la CI<50>del compuesto, la semivida biológica del compuesto, la edad, el tamaño y el peso del sujeto, y la indicación que está tratándose. La importancia de estos y otros factores es bien conocida por los expertos habituales en la técnica. Generalmente, una dosis será entre aproximadamente 0,01 y 50 mg/kg, o 0,1 y 20 mg/kg del sujeto que está tratándose. Se pueden usar dosis múltiples.

En algunas realizaciones, la dosis diaria de cerdulatinib es 30 mg o 50 mg. La dosis diaria de cerdulatinib es 30 mg, 40 mg, 50 mg, o 60 mg. La administración es dos veces al día.

La cantidad terapéuticamente eficaz de cerdulatinib puede ser 20 o 30 mg por dosis. La cantidad terapéuticamente eficaz de cerdulatinib es 30, 40, 50 o 60 mg por día.

La cantidad terapéuticamente eficaz de cerdulatinib es 15 mg, 20 mg, 25 mg o 30 mg, y se administra dos veces al día.

En algunas realizaciones, la cantidad eficaz de cerdulatinib es 25 mg dos veces al día.

La cantidad terapéuticamente eficaz de cerdulatinib, tanto sola como en combinación con otro agente, se puede administrar a 25 mg o 30 mg, una dosis, dos veces al día.

Cerdulatinib, tanto solo como en combinación con otro agente, se puede administrar a 15 mg dos veces al día.

En algunas realizaciones, la cantidad eficaz de cerdulatinib, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, es 30 mg administrado dos veces al día.

Se puede administrar al sujeto una cantidad eficaz de una composición que comprende cerdulatinib en combinación con una o varias de otras terapias o procedimientos médicos eficaces en el tratamiento del cáncer. Otras terapias o procedimientos médicos incluyen terapia para el cáncer adecuada (por ejemplo, farmacoterapia, terapia por vacunas, genoterapia, terapia fotodinámica) o procedimiento médico (por ejemplo, cirugía, tratamiento con radiación, calentamiento de hipertermia, trasplante de médula ósea o de células madre). La una o más terapias contra el cáncer o procedimientos médicos adecuados se pueden seleccionar de tratamiento con un agente quimioterapéutico (por ejemplo, fármaco quimioterapéutico), tratamiento con radiación (por ejemplo, rayos X, rayos y, o haces de electrones, protones, neutrones o partículas), calentamiento de hipertermia (por ejemplo, microondas, ultrasonidos, ablación por radiofrecuencia), terapia por vacunas (por ejemplo, vacuna para carcinoma hepatocelular del gen AFP, vacuna con vector adenovírico de AFP, AG-858, vacuna para el cáncer de mama con secreción de GM-CSF alógeno, vacunas peptídicas de células dendríticas), genoterapia (por ejemplo, vector Ad5CMV-p53, adenovector que codifica MDA7, factor de necrosis tumoral alfa de adenovirus 5), terapia fotodinámica (por ejemplo, ácido aminolevulínico, motexatin lutecio), cirugía, o trasplante de médula ósea y células madre.

3. Composiciones farmacéuticas y kits

Algunas realizaciones proporcionadas en el presente documento comprenden el uso de composiciones farmacéuticas que comprenden una cantidad eficaz de cerdulatinib y al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable.

Se pueden usar vehículos o excipientes para producir las composiciones. Los vehículos o excipientes se pueden elegir para facilitar la administración del compuesto, tal como cerdulatinib. Los ejemplos de vehículos incluyen carbonato cálcico, fosfato de calcio, diversos azúcares, tales como lactosa, glucosa, o sacarosa, o tipos de almidón, derivados de celulosa, gelatina, aceites vegetales, polietilenglicoles y disolventes fisiológicamente compatibles. Los ejemplos de disolventes fisiológicamente compatibles incluyen disoluciones estériles de agua para inyectables (WFI), solución salina y dextrosa.

Las formas farmacéuticas adecuadas dependen, en parte, del uso o la vía de administración, por ejemplo, oral, transdérmica, transmucosa, inhalante o por inyección (parenteral). Dichas formas farmacéuticas deben permitir al compuesto llegar a las células diana. Se conocen bien en la técnica otros factores, e incluyen consideraciones tales como toxicidad y formas farmacéuticas que retardan que el compuesto o la composición ejerzan sus efectos. Se pueden encontrar técnicas y formulaciones, en general, en The Science and Practice of Pharmacy, 21.a edición, Lippincott, Williams and Wilkins, Filadelfia, PA, 2005.

El cerdulatinib se puede administrar por diferentes vías, que incluyen intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular, oral, transmucosa, rectal, transdérmica, o inhalante. El cerdulatinib se puede administrar por administración por vía oral. Para administración por vía oral, por ejemplo, el cerdulatinib se puede formular en formas farmacéuticas orales convencionales, tales como cápsulas, comprimidos y preparaciones líquidas, tales como jarabes, elixires y gotas concentradas.

Para inhalantes, el cerdulatinib se puede formular como polvo seco o una disolución, suspensión o aerosol adecuado. Los polvos y las disoluciones se pueden formular con aditivos adecuados conocidos en la técnica. Por ejemplo, los polvos pueden incluir una base de polvo adecuada, tal como lactosa o almidón, y las disoluciones pueden comprender propilenglicol, agua estéril, etanol, cloruro sódico y otros aditivos, tales como ácido, álcali y sales de tampón. Dichas disoluciones o suspensiones se pueden administrar por inhalación por un espray, bomba, atomizador o nebulizador, y similares. El cerdulatinib también se puede usar en combinación con otras terapias inhaladas, por ejemplo, corticosteroides, tales como propionato de fluticasona, dipropionato de beclometasona, triamcinolona acetónido, budesonida y furoato de mometasona; agonistas beta, tales como albuterol, salmeterol y formoterol; agentes anticolinérgicos, tales como bromuro de ipratropio o tiotropio; vasodilatadores, tales como treprostinal e iloprost; enzimas, tales como DNAsa; proteínas terapéuticas; anticuerpos de inmunoglobulina; un oligonucleótido, tal como ADN o ARN mono- o bicatenario, ARNip; antibióticos, tales como tobramicina; antagonistas de los receptores muscarínicos; antagonistas de leucotrieno; antagonistas de citocinas; inhibidores de la proteasa; cromolín sódico; nedocromil sódico; y cromoglicato de sodio.

Las preparaciones farmacéuticas para uso oral se pueden obtener, por ejemplo, combinando cerdulatinib con excipientes sólidos, opcionalmente triturando una mezcla resultante, y procesando la mezcla de gránulos, después de añadir auxiliares adecuados, si se desea, para obtener comprimidos o núcleos de comprimidos recubiertos de azúcar. Excipientes adecuados son, en particular, cargas tales como azúcares, que incluyen lactosa, sacarosa, manitol o sorbitol; preparaciones de celulosa, por ejemplo, almidón de maíz, almidón de trigo, almidón de arroz, almidón de patata, gelatina, goma tragacanto, metil celulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, carboximetilcelulosa de sodio (CMC) y/o polivinilpirrolidona (PVP: povidona). Si se desea, se pueden añadir agentes disgregantes, tales como la polivinilpirrolidona reticulada, agar o ácido algínico, o una sal del mismo, tal como alginato de sodio.

Se proporcionan núcleos de comprimidos recubiertos de azúcar con recubrimientos adecuados. Para este fin, se pueden usar disoluciones concentradas de azúcar, que pueden contener opcionalmente, por ejemplo, goma arábiga, talco, polivinilpirrolidona, gel de carbopol, polietilenglicol (PEG) y/o dióxido de titanio, disoluciones de laca y disolventes orgánicos adecuados o mezclas de disolventes. Se pueden añadir colorantes o pigmentos a los comprimidos o recubrimientos de comprimidos recubiertos de azúcar para identificación o para caracterizar diferentes combinaciones de dosis de compuesto activo.

Las preparaciones farmacéuticas que se pueden usar por vía oral incluyen cápsulas duras hechas de gelatina ("cápsulas de gelatina"), así como cápsulas selladas blandas hechas de gelatina, y un plastificante, tal como glicerol o sorbitol. Las cápsulas duras pueden contener los principios activos en mezcla con carga, tal como lactosa, aglutinantes tales como almidones, y/o lubricantes tales como talco o estearato de magnesio y, opcionalmente, estabilizadores. En las cápsulas blandas, el cerdulatinib se puede disolver o suspender en líquidos adecuados, tales como aceites grasos, parafina líquida o polietilenglicoles líquidos (PEG). Además, se pueden añadir estabilizadores.

Alternativamente, se puede usar inyección (administración parenteral), por ejemplo, intramuscular, intravenosa, intraperitoneal y/o subcutánea. Para inyección, el cerdulatinib se formula en disoluciones estériles líquidas, tales como en tampones o disoluciones fisiológicamente compatibles, tales como solución salina, disolución de Hank o disolución de Ringer. Además, el cerdulatinib se pueden formular en forma sólida y redisuelto o suspendido inmediatamente antes de uso. También se pueden producir formas liofilizadas.

La administración también puede ser por medios transmucosos, tópicos, transdérmicos o de inhalante. Para administración transmucosa, tópica o transdérmica, se usan penetrantes apropiados a la barrera a atravesar en la formulación. Dichos penetrantes son generalmente conocidos en la técnica, e incluyen, por ejemplo, para administración transmucosa, sales biliares y derivados de ácido fusídico. Además, se pueden detergentes usar para facilitar la permeación. La administración transmucosa, por ejemplo, puede ser a través de espray nasales o supositorios (rectales o vaginales).

Las composiciones tópicas se pueden formular como aceites, cremas, lociones, pomadas y similares, por elección de vehículos apropiados conocidos en la técnica. Los vehículos adecuados incluyen aceites vegetales o minerales, vaselina filante (parafina blanda blanca), grasas o aceites de cadena ramificada, grasas animales y alcohol de alto peso molecular (superior a C<12>). Los vehículos pueden ser aquellos en los que el principio activo es soluble. También se pueden incluir emulsionantes, estabilizadores, humectantes y antioxidantes, así como agentes que confieren color o fragancia, si se desea. Las cremas para administración tópica se formulan a partir de una mezcla de aceite mineral, cera de abeja autoemulsionante y agua en cuya mezcla se mezcla el principio activo, disuelto en una pequeña cantidad de disolvente (por ejemplo, un aceite). Además, la administración por medios transdérmicos puede comprender un parche o apósito transdérmico, tal como una venda impregnada con un principio activo y opcionalmente uno o más vehículos o diluyentes conocidos en la técnica. Para administrar en forma de un sistema de administración transdérmica, la dosis de administración será, por supuesto, continua en vez de intermitente durante toda la pauta posológica.

El cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo o una composición farmacéutica del mismo se puede incluir en un kit. El compuesto o composición se puede envasar, por ejemplo, en un vial, botella, matraz, que puede ser además embalado, por ejemplo, dentro de una caja, sobre o bolsa; el compuesto o composición está autorizado por la Administración de Medicamentos y Alimentos de los EE. UU. o agencia reguladora similar para administración a un mamífero, por ejemplo, un ser humano; el compuesto o composición está autorizado para administración a un mamífero, por ejemplo, un ser humano, para una enfermedad o afección mediada por proteínas cinasas; los kits descritos en el presente documento pueden incluir instrucciones por escrito para su uso y/u otra indicación de que el compuesto o composición es adecuado o autorizado para administración a un mamífero, por ejemplo, un humano, para una enfermedad o afección como se describe en el presente documento, tal como un cáncer hematológico; y el compuesto o composición se puede envasar en forma de dosis unitaria o dosis única, por ejemplo, píldoras de dosis única, cápsulas, o similares.

Ejemplos

Ejemplo de referencia 1: Modelos preclínicos, FC/FD clínica y respuesta tumoral

Materiales y métodos

Ensayos de cinasa purificada: Realizados en Millipore a una concentración fija de ATP 300 nM. Se usó una curva de concentración de 10 puntos para determinar la CI (concentración inhibidora).

Ensayos de sangre completa humana: Se determinó la inhibición de la señalización dependiente e independiente de SYK y JAK estimulando sangre completa humana con diversos agonistas contra receptores BCR y de citocinas. Se estimularon alícuotas de 100 gl de sangre completa humana sana heparinizada como se describe previamente (Coffey et al., J. of Pharm. and Experimental Therapeutics, 351:538-548, 2014) usando una curva de concentración de 8 puntos para determinar las CI<50>. Se determinaron respuestas de señalización y activación por citometría de flujo activada por fluorescencia ("FACS"). Para el ensayo clínico, se recogieron muestras de sangre completa antes y después de la administración. El porcentaje de inhibición se calculó normalizando a la respuesta de estimulación predosis.

Ensayos de viabilidad de la estirpe celular de DLBCL: Estirpes celulares, compradas de ATCC, se cribaron usando el ensayo CellTiterGlo (Promega) en placas de 384 pocillos usando una curva de concentración-respuesta de diez puntos para generar CI<50>. Cada valor de CI<50>es un promedio de al menos cuatro experimentos duplicados. El análisis posterior se realizó usando un kit de detección de la escisión de caspasa 3 basado en FACS (BD Biosciences) e incorporación de EdU.

Artritis inducida por colágeno en la rata: Se determinó la actividad antiinflamatoria in vivo de cerdulatinib usando el modelo de artritis inducida por colágeno en la rata y se realizó exactamente a como se describe en cualquier parte (Coffey et al., J. of Pharm. and Experimental Therapeutics, 340: 350-359, 2012). Se determinaron los títulos de colágeno de anticuerpos por ELISA (R&D Systems). Se determinó la Cmáx sérica en estado estacionario usando espectrometría de masas en tándem con cromatografía de líquidos.

Análisis de citocinas: Se analizó la proteína sérica por Myriad RBM (Austin, TX) usando el mapa de inflamación humano.

Diseño del estudio clínico. Es un estudio de fase I, abierto, de aumento de dosis y multidosis de cerdulatinib en pacientes con CLL/SLL o NHL de linfocitos B recidivante/resistente. El estudio se empezó a 15 mg QD (una vez al día) y la dosis se aumentó en un diseño de 3+3 con una ventana de seguridad de 28 días. Los pacientes recibieron una dosis única en el día 1 durante la evaluación FC de 72 horas. Entonces se inició la administración continua en el día 4.

Resultados

En experimentos ex vivo con adición sangre completa sana, cerdulatinib inhibió selectivamente la señalización de BCR/SYK y de citocinas (IL2, IL4, IL6) JAK/STAT con CI<50>que variaban desde 0,2-0,9 |uM (alcanzadas a dosis clínicas de 15 mg a 40 mg), detuvo la inflamación y la destrucción articular en el modelo de artritis inducida por colágeno en la rata a concentración plasmática promedio de 0,3 |uM (alcanzada a dosis >30 mg) e indujo la apoptosis en la mayoría de las estirpes celulares a 2 |uM (alcanzadas a dosis >40 mg). Las concentraciones plasmáticas superiores a 2 |uM se han alcanzado de forma segura en pacientes con cáncer después de una administración por vía oral una vez al día, mientras se mantiene la Cmín en estado estacionario de ~1 |uM.

Potencia de cerdulatinib y especificidad contra la señalización de SYK y JAK

La Tabla 1 representa las CI<50>de cerdulatinib contra cinasas purificadas que se inhibieron >80 % en una selección de paneles de 270 cinasas (Millipore). A pesar de la inhibición en reacciones enzimáticas, no existe evidencia de inhibición al nivel celular y/o en pacientes para AMPK, JAK2, TBK-1, RSK2y RSK4.

Tabla 1. Ensa os de cinasa purificada

La Tabla 2 es un sumario de CI de cerdulatinib en diversos ensayos de sangre completa humana normal sana. Estos datos demuestran la selectividad por las vías dependientes de s Yk , JAK1/3 y JAK1/TYK2. Es comparable la potencia frente a las vías SYK y JAK1/3/TYK2.

Tabla 2. Ensayos de sangre completa humana normal sana

Cerdulatinib es ampliamente activo contra 15 estirpes celulares de DLBCL a 2 μM.

Cerdulatinib demostró una amplia actividad antitumoral en estirpes celulares de DLBCL, con respecto a agentes más dirigidos. La Tabla 3 a continuación resume valores de CI<50>de cerdulatinib en comparación con otros inhibidores de cinasas relevantes: PRT06318 (inhibidor de Syk, que se describe en la patente de EE. UU. 6.432.963); inhibidor I de JAK InSolution™ (CAS 457081-03-7; "Pan-Jak" en la Tabla 3); CP-690550 (inhibidor de Jak3); idelalisib (inhibidor de PI3K5); IPI-145 (PI3K5 e inhibidor y); y doxorubicina ("Doxo;" antraciclina). Estos inhibidores están comercialmente disponibles o se preparan según métodos de síntesis conocidos por los expertos en la técnica.

Tabla 3

En un panel de 15 estirpes celulares que representan tanto subtipos ABC como GCB, 9 experimentaron apoptosis y 2 adicionales experimentaron parada del ciclo celular. Los efectos cooperativos de la inhibición de SYK y JAK se observaron en 4 de las estirpes celulares, mientras que 3 estirpes celulares fueron sensibles a la inhibición de SYK pero de JAK, y 1 estirpe celular fue sensible a la inhibición de JAK pero no de SYK. Tres de las 15 estirpes celulares (DB, TOLEDO y RC<k>8) fueron resistentes a cerdulatinib.

LaFigura 1yFigura 2representan gráficos de barras que muestran el porcentaje de inhibición de la incorporación de EdU y el porcentaje de inducción de la escisión de caspasa 3 por análisis FACS, respectivamente.

Los datos anteriores demuestran que cerdulatinib es ampliamente activo contra estirpes celulares de DLBCL a 2 μM y actúa predominantemente induciendo la apoptosis.

Cerdulatinib detiene los mecanismos autoinmunes a Cmáx 0,52 μM en ratas.

LaFigura 3muestra datos de un modelo de artritis inducida por colágeno en la rata. Se representan las puntuaciones de inflamación de la pata trasera (media ± EEM; eje y; n=8 por grupo) con el tiempo (eje x) mientras se trataron con vehículo o diversos niveles de dosis de cerdulatinib. Las concentraciones plasmáticas promedio (C<máx>) para cada grupo de administración se muestran en la izquierda del gráfico. Los asteriscos indican significación estadística con respecto al vehículo por la prueba de latde Student (p < 0,05).

Se detuvo completamente la inflamación y generación de autoanticuerpos en ratas a concentraciones plasmáticas de cerdulatinib C<máx>de entre 0,5-0,6 μM (correspondientes a C<promedio>~ 0,3-0,4 μM). Estas exposiciones se alcanzaron de forma segura en seres humanos a la dosis de 30 mg una vez al día, y corresponden a aproximadamente el 50 % de inhibición de SYK y JAK en ensayos de sangre completa periférica. Se observó una clara evidencia de reducción de p2M en suero (y otros marcadores de inflamación) a todos los niveles de dosis probados clínicamente.

Potencia de la inhibición de SYK y JAK tras la administración por vía oral en pacientes.

Tras la administración por vía oral en pacientes, las vías de SYK y JAK se inhibieron con potencia similar a como se observa en experimentos de adiciónex vivoen voluntarios sanos, y >90 % de inhibición de SYK y JAK se ha alcanzado de forma segura para múltiples ciclos de terapia.

La respuesta tumoral como se mide por TAC se correlacionó significativamente con el porcentaje de inhibición de la señalización de SYK y JAK en sangre completa derivada de pacientes, y el porcentaje de inhibición de marcadores de inflamación en suero (por ejemplo, p2M, CRP, IL10, VCAM1, sTNFR, CCL3).

Conclusiones

Las concentraciones de cerdulatinib requeridas para inducir la apoptosis y/o parada del ciclo celular son variables, pero, en general, se observaron a 2 μM. Las concentraciones en estado estacionario de C<mín>a C<máx>1 -2 μM se alcanzan de forma segura a 40 mg QD. Las reducciones tumorales del paciente como se evaluaron por TAC se correlacionan significativamente con el % de inhibición de SYK y JAK, % de inhibición de varios marcadores de inflamación en suero y también se relacionan con la concentración plasmática de cerdulatinib. El aumento de dosis sigue con buena tolerabilidad hasta 100 mg QD.

Basándose en estos resultados, se contempla que el cerdulatinib es útil para el tratamiento de linfomas de linfocitos B, tales como DLBCL.

Ejemplo de referencia 2: Efecto de cerdulatinib sobre células humanas primarias de CLL

Cerdulatinib en 24 muestras primarias de CLL

Aislamiento de células y cultivo de CLL: Se purificaron células de CLL (comercialmente disponibles de ATCC) usando Human B cell Enrichment Cocktail Kit (Stemcell Technologies, Vancouver, BC, Canadá) y se tiñeron con anti-CD5/CD19 para la verificación de la pureza, que fue superior al 95 % para todos los casos. Se cultivaron células de CLL aisladas en RPMI-1640 con 15 % de suero bovino fetal (Gibco, Grand Island, NY, EE. UU.), penicilina (100 UI) y estreptomicina (100 μg/ml), a una densidad de 1x10<7>células/ml en presencia o ausencia de 2,5 mg/ml de CpG, 100 ng/ml de CD40L, 10 ng/ml de IL-4. Se realizó estimulación anti-IgM con anti-IgM unida a placa (10 μg/ml). Las células de CLL se estimularon con 10 ng/ml de IL-6 (R&D Systems, Mineápolis, MN) para detectar la fosforilación de JAK1/JAK2(Cell Signaling Technology, Danvers, MA) y STAT3 (Cell Signaling Technology, Danvers, MA, EE. UU.).

Ensayo de viabilidad celular y determinación de CI<50>: Se incubaron células CD5<+>/CD19<+>aisladas de pacientes con CLL con o sin concentraciones crecientes de cerdulatinib (10<1>-10<5>nM) durante 72 horas y se midió la viabilidad celular por tinción con 2 μg/ml de yoduro de propidio (PI) (Molecular Probe), como se describe previamente. Se contaron diez mil eventos en una puerta de células vivas por un FACS LSR2 (BD Biosciences) y los datos se normalizaron al control de vehículo equiparado para cada espécimen (100 %). Entonces se generó CI<50>usando el programa GraphPad Prism 6 (San Diego, CA, EE. UU.).

Condiciones de cocultivo: Se obtuvo la estirpe celular HS-5 de estroma de médula ósea humana de la ATCC y NK-Tert (NKTert) fue proporcionada amablemente por el Dr. Jan A. Burger (M.D. Anderson), los ensayos de cocultivo de células de CLL y células del estroma se describieron previamente (por ejemplo, Cheng et al., Leukemia.

2014;28(3):649-657). Brevemente, se sembraron células del estroma a una concentración de 5x10<4>células/por pocillo en placas de 24 pocilios y se incubaron durante 24 horas para permitir que las células se adhirieran. Entonces se añadieron células de CLL al cultivo en una relación de 100: 1 (5x10<6>células/ml) sobre capas confluentes de células del estroma en medio RPMI. Se recogieron las células de CLL por pipeteado suave, dejando intacta la capa de células adherentes del estroma.

Muestras primarias de CLL con cerdulatinib diluido en serie y viabilidad celular medida después de 72 horas con citometría de flujo PI/7AAD.

Se trataron veinticuatro muestras primarias de CLL con cerdulatinib, un inhibidor doble de SYK/JAK en presencia o ausencia de IL-4/CD40L y se evaluó la apoptosis usando tinción de yoduro de propidio/anexina V y escisión de PARP. El efecto de cerdulatinib sobre la señalización inducida por el receptor de linfocitos B y el receptor de citocinas se evaluó por inmunotransferencia y citometría de flujo.

Se trataron células de CLL de 24 pacientes con cerdulatinib durante 24, 48 y 72 horas y se evaluó la viabilidad usando tinción con yoduro de propidio y anexina V. Cerdulatinib indujo la apoptosis en un modo dependiente de la concentración y el tiempo.

IGHV no mutado y la alta expresión de CD49d están asociados con enfermedad progresiva y un mal pronóstico en CLL. Y, lo que es más importante, para uso terapéutico, cerdulatinib indujo una apoptosis significativamente mayor en U-CLL en comparación con M-CLL y en células de CLL con elevada expresión de CD49d o ZAP70 (>30 %) en comparación con células de CLL con baja expresión de CD49d o ZAP70 (<30 %).

Se descubrió que el tratamiento de células de CLL con cerdulatinib indujo la escisión/activación de la proteína caspasa 3 proapoptósica y también aumentó los niveles del subfragmento de PARP de 85 kDa, un marcador de apoptosis. La apoptosis inducida por cerdulatinib se inhibió por cotratamiento con el inhibidor de caspasa ZVAD, que indica que la apoptosis inducida por cerdulatinib de células de CLL ocurre por un mecanismo dependiente de caspasa. Además, niveles de la proteína proapoptósica NOxA aumentaron después de 24 horas de tratamiento con cerdulatinib en presencia de ZVAD, mientras que se redujo la proteína antiapoptósica MCL1.

La ligación de BCR en ganglios linfáticos potencia la supervivencia de CLL y la resistencia a quimioterapia. El pretratamiento con cerdulatinib fue capaz de inhibir las vías de señalización inducidas tanto por anti-IgM soluble como por anti-IgM inmovilizado. IL-4 señaliza por la vía de JAK/STAT-6 en células de CLL y se ha mostrado que es importante en mediar en la protección de la quimioterapia. El tratamiento de células de CLL con cerdulatinib suprimió la fosforilación de STAT6 inducida por IL-4. Además, cerdulatinib inhibió el aumento de la expresión de IgM de superficie por IL-4 después de 24 horas en presencia de ZVAD.

En pacientes, sitios de tejido de ganglio linfático proporcionan diversas señales que protegen a las células de CLL de la apoptosis. Por lo tanto, los presentes inventores han usado IL-4 y CD40L para imitar el entorno del ganglio linfáticoin vitro.El tratamiento de IL-4/CD40L después de 24 horas aumentó la viabilidad de células de CLL en comparación con células no tratadas.

Este ejemplo muestra que el tratamiento de células humanas primarias de CLL con cerdulatinib indujo la apoptosis dependiente de caspasa, con elevada potencia en marcadores de mal pronóstico de muestras de CLL; cerdulatinib superó la señalización mediada por BCR e IL-4 a concentraciones logrables en pacientes (~2,2 μM); y cerdulatinib indujo la apoptosis en presencia o ausencia de ayuda de IL-4/CD40L.

Cerdulatinib en 60 muestras de CLL

En 60 muestras de CLL analizadas según los métodos descritos anteriormente, la CI<50>en 60 CLL osciló desde 0,37 hasta 10,02 μM. La CI<50>promedio de cerdulatinib para la cohorte fue 2,57 μM, que es clínicamente lograble.

También se estudió si la destrucción celular por cerdulatinib se diferenciaba entre subgrupos de CLL estratificados por factores de pronóstico conocidos. Se descubrió que las células de CLL con IGHV no mutado (N=33) frente a IGHV mutado (N=27) tienen CI<50>menores y así fueron más sensibles a cerdulatinib (P=0,0395) (datos analizados con la prueba de Student) (Figura 6). Las células de CLL con anomalías genéticas de alto riesgo (incluyendo del (11 q), trisomía 12 y del(17p)) también fueron más sensibles a cerdulatinib que aquellas con del (13q) o que carecen por completo de estas anomalías genéticas específicas (Figura 7). Por lo tanto, las células de CLL son sensibles a cerdulatinib, especialmente en casos con mal pronóstico por IGHV y citogenética.

También se contempla que cerdulatinib también será útil en casos de mal pronóstico como se demuestra por, por ejemplo, Zap70.

Ejemplo 3: Resultados clínicos y correlativos de un estudio de fase I de cerdulatinib

Se llevó a cabo un estudio de cerdulatinib por primera vez en humanos en pacientes con CLL/SLL recidivante/resistente o linfoma no hodgkiniano (NHL) de linfocitos B. Se llevó a cabo un estudio de aumento de dosis de 3+3 con ciclos de 28 días; las dosis estudiadas oscilaron de 15 mg a 65 mg una vez al día y hasta 45 mg dos veces al día. Los pacientes recibieron una dosis única en el día 1 durante la evaluación FC de 72 horas. La administración continua se inició en el día 4. Se administró a 43 pacientes con CLL/SLL o NHL de linfocitos B. La mediana de la edad fue 67 años (intervalo 23-85) y la mediana de terapias anteriores (tx) fue 3 (intervalo 1-8).

Se monitorizaron la farmacocinética ("FC"), la farmacodinámica ("FD") y la seguridad. La respuesta se evaluó por criterios habituales. El nivel de inhibición de SYK y JAK se determinó usando una variedad de ensayos en sangre completa que medían la señalización por receptores para el antígeno de linfocitos B, IL2, IL4, IL6 y GM-CSF. También se midieron marcadores de carga tumoral en suero, que incluyen CCL3, CCL4 y otros marcadores de inflamación (P2M y CRP).

Se observó que la FC era adecuada para administración de una vez al día con una semivida de 12-16 horas y una relación pico-valle de 2:1. En el día 28 del ciclo 1, la inhibición de la saturación de SYK y JAK en linfocitos circulantes (80-90 % de inhibición) y marcadores de inflamación en suero (por ejemplo, p2M, CRP, CCL4; 50-90 % de inhibición) ocurrió a concentraciones plasmáticas de aproximadamente 0,6 a 1 gM, alcanzadas a C<mín>de la dosis de 40 mg. A la dosis de 65 mg, estos parámetros fueron inhibidos el 80-90 % en el día 1 del ciclo 1, que indica un efecto más inmediato en comparación con dosis más bajas. A la dosis de 65 mg, las concentraciones C<mín>y C<máx>en estado estacionario fueron aproximadamente 1 y 2 gM, respectivamente, suficientes para inducir la apoptosis en la mayoría de las estirpes celulares de linfomas de linfocitos B probados.

En general, cerdulatinib ha sido bien tolerado. Diez pacientes en total han permanecido con cerdulatinib durante más de 200 días, que incluye 2 que han estado durante un año o más.

La Tabla 4 resume los datos de la farmacocinética en estado estacionario después de la administración por vía oral donde n = 28.

Tabla 4. FC en estado estacionario después de la administración por vía oral

* Se retiró el valor FC atípico (Cmáx en estado estacionario de 0,15 gM) del grupo.

Donde n = 20, en el grupo de dosis de 45 mg BID, se observó lo siguiente: C<mín>= 1,27 ± 0,6 gM; C<máx>= 2,16 ± 0,5 gM; C<prom>= 1,4 ± 0, 7 gM; ABC_tau = 33,3 ± 15,9 gM*h; T<1/2>- 27,5 ± 22,5 h.

Se observó que la inhibición completa de la señalización de BCR se observó en sangre completa de un paciente con FL después de una dosis única de 65 mg de cerdulatinib.

La Tabla 5 resume los datos FC/FD donde n = 43.

Tabla 5. FC/FD de rupos de dosis

En la revisión de la dosis de 40-100 mg QD, las concentraciones C<mín>y C<máx>promedio en estado estacionario (EE) alcanzaron una meseta a 0,77 ± 0,41 y 1,63 ± 0,56 μM, respectivamente, y se descubrió que la concentración promedio C<prom>en estado estacionario (EE) era 1,07 ± 0,44 μM, el % de inhibición de BCR (C<mín>- C<máx>) era del 92 - 100% y el % de inhibición de IL4 (C<mín>- C<máx>) era del 63 - 78 %. La administración QD de 40-100 mg produjo una inhibición del 50 al 100% (C<mín>a C<máx>en estado estacionario) de la señalización de SYK y JAK en sangre periférica, e inhibición significativa de marcadores de inflamación en suero.

Basándose en estos resultados, se contempla que una dosis diaria de 10 mg a aproximadamente 75 mg de cerdulatinib es útil para el tratamiento de cánceres hematológicos en pacientes en necesidad de la misma.

El grado de inhibición de la señalización de SYK y JAK, así como la inhibición de marcadores de inflamación en suero, se correlacionó significativamente con la respuesta tumoral. Mientras que la FC es adecuada para la administración QD con una t<1/2>de 12-16 horas y una relación pico-valle de 2:1, se contempla que la baja solubilidad dependiente del pH limitó la disolución, y el modelado fisiológico sugirió que la dosis BID aumentaría la exposición global.

Esto se llevó a cabo con la dosis de 45 mg BID, donde se observó la inhibición completa de SYK y JAK a C<mín>EE en ensayos de sangre periférica, de acuerdo con un duplicado aproximado en la exposición. A la dosis de 45 mg BID, C<mín>EE aumentó a aproximadamente 1,5 μM, una concentración suficiente para inducir la apoptosis en modelos tumorales preclínicos usando tanto células primarias como estirpes celulares. La posterior evaluación de dosis de 45 mg BID en pacientes demostró mayores valores de C<mín>, C<máx>y ABC para todos los pacientes tratados a este nivel de dosis y los marcadores FD indicaron inhibición completa de ambas vías.

Los acontecimientos adversos durante el tratamiento ("AE") de > grado 3 parecieron relacionados con el estudio y que ocurren en 2 o más pacientes fueron: cansancio (n=5), anemia y neutropenia (n=3 cada uno), y dolor abdominal, disminución de la cifra de neutrófilos y neumonía (n=2 cada uno). La mayor exposición global se logró a la dosis de 45 mg BID, en la que ocurrieron 2 toxicidades limitantes de la dosis ("DLT"): grado 3 pancreatitis y grado 3 cansancio.

Basándose en el perfil FC/AE, pareció que hubo mayores grados de acontecimientos adversos a C<mín>EE de 1,25-1,5 μM o mayor. El modelado FC indicó que una dosis de 35 mg BID daría una C<mín>EE de 1,02 μM, C<máx>EE de 1,3 μM, C<prom>EE de 1,2 μM, 100 - 100 % de % de inhibición de BCR (C<mín>- C<máx>) y 90 - 95 % de % de inhibición de IL4 (C<mín>-C<máx>), que se predice que es tolerable, eficaz, y proporciona actividad antitumoral coherente.

Se observaron respuestas tumorales coherentes en pacientes con CLL y FL recidivante / resistente con Cmín EE de 0,7 μM.

Se observaron respuestas parciales en 5 pacientes que habían recibido varios tratamientos con anterioridad con CLL, FL y DLBCL transformada a dosis que varían desde 30-65 mg QD. Se observaron dos respuestas parciales en los grupos de dosis de 45 mg BID, una en un paciente con FL y otra con CLL. Las respuestas ocurrieron normalmente después de 2 ciclos de tratamiento. Múltiples pacientes han demostrado reducciones nodales y mantuvieron el beneficio clínico durante más de un año.

Conclusiones

Cerdulatinib ha sido bien tolerado en sujetos con tumores malignos linfoides. Cerdulatinib demostró un perfil FC favorable y buena tolerabilidad a altos niveles de inhibición de SYK y JAK. Los datos FC respaldaron la administración de una vez al día, manteniendo la inhibición sustancial a C<mín>. La inhibición dependiente de la dosis y selectiva de la señalización de SYK/JAK con inhibición máxima fue superior al 80 por ciento; no se detectó inhibición de JAK2o PKC. La vía de señalización de BCR fue inhibida el 90-100 % a C<mín>/C<máx>en estado estacionario, la señalización de JAK/STAT se inhibe el 60-80 % a C<mín>/C<máx>. Los datos FC indicaron una meseta de exposición desde 40 mg hasta 100 mg por vía oral una vez al día, dando como resultado exposición submicromolar (aproximadamente 0,7 μM) a C<mín>en estado estacionario. Se contempla que la solubilidad puede ser el motivo. La administración BID supera esta meseta en la exposición y tiene efectos FD potenciados.

Cerdulatinib redujo significativamente múltiples proteínas séricas en sangre que son marcadores de inflamación, tales como p2M, CRP, TNFR y CCL3/4. Se observaron correlaciones significativas entre la respuesta tumoral y la inhibición de marcadores de inflamación en suero (por ejemplo, (32M y CCL4).

Cerdulatinib tiene una actividad prometedora en pacientes que habían recibido varios tratamientos con anterioridad. Estos datos demostraron la evidencia de la actividad clínica en este estudio de pacientes con tumores malignos de linfocitos B recidivantes/resistentes. Hasta la fecha, se han observado respuestas parciales, que incluyen en pacientes con CLL, FL y DLBCL. Las reducciones tumorales se observaron en múltiples pacientes, que incluyen aquellos cuya enfermedad empeoró con otros inhibidores de la vía de BCR (o que no pudieron tolerarlos). Se observó evidencia de linfocitosis como se observa con otros inhibidores de la vía de BCR. Los resultados también mostraron que cerdulatinib fue bien tolerado en estos pacientes que habían recibido varios tratamientos con anterioridad.

Estos resultados, que incluye respuestas parciales, proporcionan evidencia adicional de que cerdulatinib es activo y bien tolerado en pacientes con cánceres hematológicos recidivantes o resistentes.

Ejemplo de referencia 4: Se descubrió que cerdulatinib bloqueaba la proliferación de células primarias de CLL sensibles a ibrutinib y resistentes a ibrutinib y estirpes celulares transfectadas con BTKC481S.

Se compró ibrutinib de Selleckchem (Houston, TX, EE. UU.).

Aislamiento de células y cultivo: Se purificaron células de CLL usando Human B cell Enrichment Cocktail Kit (Stemcell Technologies, Vancouver, BC, Canadá) y se tiñeron con anti-CD5/CD19 (clon HIB19 y UCHT2, respectivamente, eBioscience, San Diego, CA) para la verificación de la pureza, que fue superior al 95 % para todos los casos. Se cultivaron células de CLL aisladas en RPMI-1640 con 15 % de suero bovino fetal (Gibco, Grand Island, NY, EE. UU.), penicilina (100 UI) y estreptomicina (100 μg/ml), a una densidad de 1x107 células/ml en presencia o ausencia de 2,5 mg/ml de CpG (ODN2006, CpG-ODN estimulante tipo B, específico de humano, comprado de Invivogen (San Diego, CA)), 100 ng/ml de CD40L (Enzo Life Sciences, Plymouth Meeting, PA), 10 ng/ml de IL-4 CD40L (Enzo Life Sciences, Plymouth Meeting, PA). Se realizó estimulación anti-IgM con anti-IgM unida a placa (10 μg/ml).

Ensayos de proliferación celular: Se añadió bromodesoxiuridina (BrdU) en el cultivo de 8 días con estimulación combinada (2,5 μg/ml de CpG, 100 ng/ml de CD40L, 10 ng/ml de IL-4 y 10 μg/ml de anti-IgM unido a placa). El porcentaje de células BrdU se analizó por citometría de flujo usando BrdU Flow kit (BD Biosciences) según las instrucciones del fabricante.

Generación de construcciones mutantes de C481S y T316A de BTK: Se compró clon de ADNc de BTK natural (WT) en vector de expresión pCMV6 de ORIGENE (Rockville, MD, EE. UU.). Se generaron vectores mutantes BTK<C481S>y BTK<T316A>usando el kit de mutagénesis dirigida al sitio QuikChange II (Agilent Technologies, Cedar Creek, TX, EE. UU.) siguiendo las instrucciones del fabricante. La identidad de las construcciones mutantes se confirmó por secuenciación de Sanger.

Transfección de células, cifra de células y ensayo de viabilidad: Se transfectaron células TMD8 con construcciones de BTK WT o mutantes BTK<C481S>usando kit V, Program U-13 on Amaxa Nucleofector, según los protocolos del fabricante (Amaxa, Colonia, Alemania). Después de la transfección, las células se cocultivaron con células NKTert en una placa de 24 pocillos durante 24 h para la recuperación. Entonces se añadieron ibrutinib, cerdulatinib y vehículo (DMSO) en las células TMD8 transfectadas y se determinó la viabilidad celular con el kit de recuento y viabilidad Muse™ usando el analizador de células Muse (Millipore, Hayward, CA, EE. UU.).

Citometría de flujo: La tinción celular para el análisis FACS se hizo con una cantidad optimizada de mAb conjugados con fluorocromo como se describe previamente (por ejemplo, Cheng et al., Leukemia. 2014;28(3):649-657). Brevemente, después de lavar dos veces con tampón de lavado (IxPBS, 0,5 % de BSA, 0,1 % de NaN<3>), 1 x 10<6>células se suspendieron en 100 gl de tampón de lavado y se tiñeron con mAb conjugados con fluorocromo y se incubaron durante 20 min a temperatura ambiente. Las células se lavaron dos veces en Perm/tampón de lavado antes del barrido por citómetro de flujo. Para el análisis de flujo de fósforo intracelular, se fijaron inmediatamente células de CLL recién aisladas con 2-4 % de paraformaldehído y se almacenaron a -80 °C. Las células crioconservadas se descongelaron a temperatura ambiente y permearon con 50 % de metanol sobre hielo durante 4 h. Se suspendieron 1 x 10<6>células en 100 gl de tampón de lavado y se tiñeron con mAb conjugados con fluorocromo y se incubaron durante 20 min a temperatura ambiente. Entonces se realizó citometría de flujo con el citómetro de flujo LSR2 (BD Biosciences), y los datos se analizaron usando el software FlowJo (FLOWJO LLC, Ashland, OR, EE. UU.).

Se trataron células primarias aisladas antes de la terapia con ibrutinib de pacientes que respondieron a ibrutinib con o 250 nM de ibrutinib o cerdulatinib en la condición de estimulación combinada. Se midió la incorporación de BrdU en el día 8. Estas células respondieron igual de bien a cualquier fármaco a esta concentración.

También se realizaron experimentos similares en células aisladas de tres pacientes que recayeron con ibrutinib. Estas muestras llevan mutaciones BTK que confieren resistencia a ibrutinib. Dos de los pacientes tuvieron la mutación BTK<C481S>conocida y otro paciente tuvo BTKT<316A>. Se contó diariamente el número de células vivas durante 7 días.

Cuando estas células mutadas se probaron contra ibrutinib y cerdulatinib, siguió un número significativo de células de CLL BrdU<+>después del tratamiento con ibrutinib, mientras que cerdulatinib casi bloqueó completamente la aparición de poblaciones de células BrdU<+>en los tres casos. Estos experimentos demuestran que cerdulatinib no solo bloquea la proliferación celular en células de CLL sensibles a ibrutinib, sino también resistentes a ibrutinib.

Para probar si cerdulatinib suprime directamente el crecimiento de células resistentes a ibrutinib, se construyeron tanto vectores de expresión de BTK<C481S>como BTK natural (WT), se clonaron y luego se transfectaron en la estirpe celular TMD8 de linfoma sensible a ibrutinib. Se evaluó el crecimiento celular tras la exposición a ibrutinib o cerdulatinib.

Se observó que el crecimiento de células TMD8 transfectadas con BTK WT fue inhibido similarmente por tanto ibrutinib como cerdulatinib a 250 nM (Figura 4). Sin embargo, las células transfectadas con BTK<C481S>fueron menos sensibles a ibrutinib, como era de esperar (Figura 5). Mientras tanto, el crecimiento de estas células fue bloqueado eficientemente por cerdulatinib, similar al bloqueo observado en células BTK WT.

Ejemplo 5: Estudios de casos para pacientes con linfoma folicular

ESTUDIO DE CASO 1(Paciente 1): El paciente fue una mujer caucásica de 71 años con linfoma folicular 3B transformado (MYCBCL2BCL6 positivo por IHC). El tumor era CD20+, CD10-, BCL2 (fuerte), cMYC (50 %) y Ki67 (80 %).

Las terapias anteriores del paciente incluyeron: R-CHOP (rituximab; ciclofosfamida; clorhidrato de doxorubicina; Oncovin; prednisona) (noviembre de 2013-febrero de 2014). El paciente tuvo una recaída en febrero de 2015. El paciente empezó con cerdulatinib 65 mg por vía oral una vez al día ("PO QD") en marzo de 2015.

Se observó lo siguiente: C<mín>-C<máx>en estado estacionario fue 0,73-1,74 gM; % de inhibición de la señalización de BCR fue 100 %; % de inhibición de la señalización de IL2, IL4, IL6 fue del 60-100%; y % de inhibición de GM-CSF fue del -20 %. El paciente mostró respuesta parcial a cerdulatinib (69 %) después de 2 ciclos.

El paciente 1 empeoró en agosto de 2015. El paciente 1 tuvo una recaída después de 5 ciclos de terapia.

ESTUDIO DE CASO 2(Paciente 2): El paciente fue una mujer caucásica de 71 años con linfoma folicular.

Las terapias anteriores del paciente incluyeron: clorambucilo (1998; CR), fludarabina/rituxan (1999-2000; CR) y avastin/rituxan (marzo de 2011-enero de 2012). El paciente 2 tuvo una recaída en septiembre de 2014. El paciente 2 empezó con cerdulatinib 45 mg PO QD en octubre de 2014, y la dosis se redujo a 30 mg debido al cansancio.

Se observó lo siguiente: C<mín>-C<máx>en estado estacionario fue 0,25-0,63 gM. % de inhibición de la señalización de BCR; 90 % para pSYK Y525/525, 0 % para pERK Y204; % de inhibición de señalización de IL2, IL4, IL6 fue del 60-100%; % de inhibición GM-CSF fue del 0 %; respuesta parcial a cerdulatinib (56%) después de 2 ciclos y 76 % de reducción nodal después de un año con la terapia.

El paciente 2 sigue con el fármaco.

ESTUDIO DE CASO 3(Paciente 3): El paciente fue un varón caucásico de 79 años con linfoma folicular. El tumor del paciente posee una mutación S86A en STAT.

Terapias anteriores del paciente: R-CVP (rituximab; ciclofosfamida; vincristina; prednisolona) (2006-2007), mantenimiento con R (2006-2008), BR (bendamustina; rituximab) (5/2013-9/2013), ibrutinib (10/2013-4/2014), R-CHOP (12/2013-4/2014). El paciente 3 tuvo una recaída en mayo de 2014. El paciente 3 se administró con cerdulatinib 15 mg por vía oral dos veces al día ("PO BID") en junio de 2014. Se observó enfermedad estable en el paciente 3 durante 6 meses con cerdulatinib (20 % de reducción nodal).

Estos estudios de casos muestran que cerdulatinib ha sido bien tolerado hasta la fecha y tiene una actividad prometedora en pacientes que habían recibido varios tratamientos con anterioridad que tienen linfoma folicular. Las respuestas han sido observadas en otros linfomas no hodgkinianos (NHL).

Claims (13)

REIVINDICACIONES

1. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso en el tratamiento de un cáncer hematológico en un paciente humano en necesidad del mismo, en donde dicho uso comprende administrar al paciente una cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo; en donde:

la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 60 mg y se administra como 30 mg dos veces al día; o

la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 50 mg y se administra como 25 mg dos veces al día; o

la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 40 mg y se administra como 20 mg dos veces al día; o

la cantidad eficaz de cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo es 30 mg y se administra como 15 mg dos veces al día.

2. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según la reivindicación 1, administrado a una dosis diaria de 30, 40 o 50 mg, en donde la administración es dos veces al día.

3. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según la reivindicación 1, administrado a una dosis de 25 mg o 30 mg, dos veces al día.

4. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente tiene una mutación asociada a recaída y/o una resistencia a un fármaco para tratar un cáncer hematológico.

5. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente tiene una mutación del17p, una mutación P53, una mutación ATM, una mutación STAT, una mutación STA 6, una mutación C481S STAT6, una mutación asociada a la vía NOTCH o una mutación asociada a la vía de la cadherina.

6. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente no tiene una mutación en todos de P53, BTK y EP300.

7. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente tiene una mutación BTK.

8. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente tiene una resistencia a ibrutinib.

9. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el cáncer hematológico se selecciona del grupo que consiste en linfoma no hodgkiniano (NHL), leucemia linfocítica crónica (CLL), linfoma linfocítico pequeño (SLL), linfoma folicular (FL), linfoma folicular transformado (tFL), linfoma difuso de linfocitos B grandes (DLBCL) y linfoma de células del manto (MCL).

10. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el cáncer hematológico es linfoma linfocítico pequeño (SLL); o en donde el cáncer hematológico es linfoma folicular (FL); o en donde el cáncer hematológico es linfoma folicular transformado (tFL).

11. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde el paciente se administró previamente con un fármaco seleccionado del grupo que consiste en:

(i) un agente alquilante, un anticuerpo anti-CD20, un inhibidor de BCL-2, un inhibidor de BTK, un inhibidor de P13K5, un fármaco basado en platino, un antimetabolito, una antraciclina, un inhibidor de la vía de BCR y otro agente quimioterapéutico usado para tratar un cáncer hematológico; y/o

(ii) venetoclax, rituximab, ibrutinib, idelalisib y fludarabina.

12. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicho uso comprende administrar cerdulatinib o sal farmacéuticamente aceptable del mismo en una composición farmacéutica que comprende además un excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

13. Cerdulatinib o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su uso según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde cerdulatinib se administra solo.