ES2745799T3

ES2745799T3 - Método de selección de pacientes para inflamación

Info

Publication number: ES2745799T3
Application number: ES14864223T
Authority: ES
Inventors: Philip S Low; Lindsay E Kelderhouse
Original assignee: Purdue Research Foundation
Current assignee: Purdue Research Foundation
Priority date: 2013-11-19
Filing date: 2014-11-19
Publication date: 2020-03-03
Anticipated expiration: 2034-11-19
Also published as: EP3865153A1; US20160274090A1; US20220082553A1; WO2015077303A1; EP3574924B1; EP3574924A1; EP3071971A4; EP3071971B1; ES2860173T3; US11162937B2; EP3071971A1

Abstract

Un conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso en un método para seleccionar un paciente para terapia con fármaco antiinflamatorio, comprendiendo el uso la etapa de administración al paciente de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato, y usar dicho conjugado de agente de formación de imágenes-folato para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio, y donde la enfermedad inflamatoria del paciente está seleccionada entre el grupo que consiste en artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, ateroesclerosis, soriasis, isquemia/lesión por reperfusión, fibrosis pulmonar, rechazo al trasplante de órganos, colitis ulcerosa, traumatismo por impacto, osteomielitis, esclerosis múltiple, escleroderma, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjögren, glomerulonefritis, esclerosis sistémica, sarcoidosis y lesión inflamatoria.

Description

DESCRIPCIÓN

Método de selección de pacientes para inflamación

Campo de la invención

La invención se refiere a métodos y composiciones para la selección de pacientes para terapia con un fármaco antiinflamatorio. Más particularmente, la invención se refiere a composiciones que comprenden conjugados de un agente de formación de imágenes de foliato para la selección de pacientes para terapia con un fármaco antiinflamatorio, y métodos y usos del mismo.

Antecedentes y sumario

Las terapias biológicas (etanercept, infliximab, adalimumab, rituximab, abatacept, anakinra, efalizumab, etc.) se han convertido en el método preferido para el tratamiento de muchas enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias, principalmente debido a su mayor eficacia, mayor velocidad de aparición y mayor tolerancia. No obstante, a pesar de estos beneficios obvios, en aproximadamente un cuarenta por ciento de las personas que reciben terapias biológicas se produce fallo de respuesta. Debido a que actualmente no existe marcador clínico para predecir de forma precisa la respuesta a la terapia, los facultativos se han esforzado en usar la base de criterios subjetivos (es decir, evaluación del dolor, coloración e hinchamiento, análisis radiográfico, etc.) para determinar la conveniencia de continuar con un tratamiento concreto o no. Además, debido a los cambios significativos en muchos parámetros subjetivos se considerable fiables únicamente de cuatro a seis meses después del comienzo de la terapia, con frecuencia la identificación de los individuos que no muestran respuesta solo resulta posible tras un daño irreversible o una vez que ha transcurrido la “ventana de oportunidad terapéutica” ideal. Considerando el elevado coste de tratamiento (con frecuencia más de 40.000 dólares/año) y el daño que se puede generar cuando tiene lugar el fallo de una terapia inicial, la capacidad para predecir rápidamente la respuesta final del paciente podría reducir tanto el coste como la morbilidad asociados a un enfoque menos informado del fármaco antiinflamatorio.

Se ha comprobado que los macrófagos proinflamatorios activados constituyen piezas clave en el desarrollo y transcurso de un número de enfermedades inflamatorias y autoinmunitarias, incluyendo artritis reumatoide, ateroesclerosis, soriasis, isquemia/lesión por reperfusión, fibrosis pulmonar, rechazo al trasplante de órganos, colitis ulcerosa, traumatismo por impacto, esclerosis múltiple, escleroderma, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjogren, glomerulonefritis y sarcoidosis. Debido a que el receptor p de folato, una glicoproteína anclada por glicosilfosfatidilinositol, se sobre-expresa únicamente sobre la superficie de estos macrófagos activados, recientemente se han aprovechado los agentes de formación de imágenes dirigidos a receptor de folato para visualizar sitios de acumulación de macrófagos activados tanto en animales como en humanos. Más específicamente, se ha demostrado que 99mTc-EC20, una sustancia radiofarmacéutica selectiva de receptor de folato, es particularmente útil para estas aplicaciones de formación de imágenes ya que se ha observado que la captación de 99mTc-EC20 está directamente correlacionada con la gravedad de los síntomas de artritis.

Sorprendentemente, los solicitantes han descubierto que la reducción de la captación de conjugados de agente de formación de imágenes-folato, tal como 99mTc-EC20, antecede drásticamente a cambios observables en la sintomatología para pacientes con enfermedad inflamatoria que están bajo tratamiento con fármacos antiinflamatorios. Esta reducción de la captación tiene lugar independientemente del fármaco antiinflamatorio específico que se use. Esta observación sorprendente tuvo como consecuencia la invención de los solicitantes que es un método que utiliza un agente de formación de imágenes selectivo de folato, tal como 99mTc-EC20, para predecir una respuesta final a la terapia para enfermedades inflamatorias. Los solicitantes han demostrado que la captación de agentes de formación de imágenes selectivos de receptor de folato en punto de la enfermedad antiinflamatoria poco después del inicio de la terapia puede pronosticar de forma precisa una respuesta posterior a un fármaco antinflamatorio mucho antes de que se puedan detectar cambios clínicos. Por consiguiente, los solicitantes han descubierto que los conjugados de agente de formación de folato son útiles como herramientas clínicas para la selección de pacientes que se benefician finalmente del tratamiento con un fármaco antiinflamatorio particular.

Se describen diversos aspectos de la divulgación por medio de las siguientes cláusulas enumeradas:

1. Un método para seleccionar un paciente para terapia con un fármaco antiinflamatorio, comprendiendo el método las etapas de administrar al paciente un conjugado de agente de formación de imágenes-folato, y usar el conjugado de agente de formación de imágenes-folato para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio. 2. Uso de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato para escoger un paciente para terapia con un fármaco antiinflamatorio donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se administra al paciente y se usa para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio.

3. Uso del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en la preparación de un medicamento para escoger a un paciente para terapia con fármaco antiinflamatorio donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se administra al paciente y se usa para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio.

4. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 3, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato produce una señal detectable en el paciente, donde la señal se detecta, y donde la detección de la señal se usa para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio.

5. El método o uso de la cláusula 4 donde la señal es una señal radioactiva.

6. El método o uso de la cláusula 4 donde la señal se produce por medio de un cromóforo.

7. El método o uso de la cláusula 6 donde el cromóforo es un fluoróforo.

8. El método o uso de la cláusula 7, donde el fluoróforo está seleccionado entre el grupo que consiste en una fluoresceína, una rodamina, una ficoeritrina, un colorante fluorescente de longitud de onda larga y una cianina.

9. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 4 a 8, donde la señal se produce como resultado de unión del conjugado de agente de formación de imágenes-folato a macrófagos activados.

10. El método de uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 9, donde la etapa de administración comprende una primera etapa de administración y una segunda etapa de administración.

11. El método de uso de la cláusula 10, donde la primera y segunda etapas de administración producen una primera señal y una segunda señal, respectivamente.

12. El método o uso de la cláusula 11, donde la primera señal y la segunda señal se cuantifican.

13. El método de uso de la cláusula 11, donde la primera señal se obtiene por medio de administración de un conjugado de agente de formación de folato antes de la administración del fármaco antiinflamatorio.

14. El método o uso de la cláusula 11, donde la primera señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato el mismo día que se inicia el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

15. El método o uso de la cláusula 11, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato tras la administración del fármaco antiinflamatorio.

16. El método o uso de la cláusula 11, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en aproximadamente 21 días después de iniciar la administración del fármaco antiinflamatorio.

17. El método o uso de la cláusula 11, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas o aproximadamente 4 semanas después de iniciar la administración del fármaco antiinflamatorio.

18. El método o uso de la cláusula 11, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en un día cualquiera dentro de aproximadamente 21 días después de iniciar la administración del fármaco antiinflamatorio.

19. El método o uso de la cláusula 11, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en un día cualquiera dentro de aproximadamente 12 semanas después de iniciar la administración del fármaco antiinflamatorio.

20. El método o uso de la cláusula 11, donde la segunda señal se reduce en aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 %o aproximadamente un 100 %, en comparación con la primera señal, y donde la reducción indica que el paciente debería continuar con el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

21. El método uso de la cláusula 11, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 12, aproximadamente 15 o aproximadamente 21 días después de iniciar la administración del fármaco antiinflamatorio.

22. El método uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 21, donde la enfermedad inflamatoria está seleccionada entre el grupo que consiste en artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, ateroesclerosis, soriasis, isquemia/lesión por reperfusión, fibrosis pulmonar, rechazo al trasplante de órganos, colitis ulcerosa, traumatismo por impacto, osteomielitis, esclerosis múltiple, escleroderma, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjogren, glomerulonefritis, esclerosis sistémica, sarcoidosis, lesión antiinflamatoria e inflamación crónica.

23. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 22, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en forma de dosificación parenteral.

24. El método o uso de la cláusula 23, donde la forma de dosificación está seleccionada entre el grupo que consiste en una forma de dosificación intradérmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa e intratecal. 25. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 24, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en una composición y donde la composición además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

26. El método o uso de la cláusula 25, donde el vehículo farmacéuticamente aceptable es un vehículo líquido.

27. El método o uso de la cláusula 26, donde el vehículo líquido está seleccionado entre el grupo que consiste en disolución salina, glucosa, alcoholes, glicoles, ésteres, amidas y una combinación de los mismos.

28. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 27, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se administra en una cantidad eficaz.

29. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ng a aproximadamente 1 mg por kilogramo de peso corporal del paciente.

30. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 500 |jg por kilogramo de peso corporal del paciente.

31. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 jg por kilogramo de peso corporal del paciente.

32. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 jg/m2 a aproximadamente 500 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

33. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 jg/m2 a aproximadamente 300 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

34. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 10 jg/kg a aproximadamente 100 jg/kg del peso corporal del paciente.

35. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 34, que además comprende la etapa de administración de ácido fólico no marcado al paciente.

36. El método o uso de la cláusula 35 donde el ácido fólico no marcado se administra antes de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato.

37. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 5 o 9 a 36, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde M es un radionucleido.

38. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 5 o 9 a 37, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde M es un radionucleido.

39. El método o uso de la cláusula 37 o 38, donde el radionucleido está seleccionado entre el grupo que consiste en un isótopo de galio, un isótopo de indio, un isótopo de cobre, un isótopo de tecnecio y un isótopo de rutenio.

40. El método o uso de la cláusula 39 donde el radionucleido es un isótopo de tecnecio.

41. El método o uso de la cláusula 40, donde el tecnecio es 99mtecnecio.

42. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 5 o 9 a 41, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato es 99mTc-EC20.

43. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 5 o 9 a 42, donde la señal se detecta usando formación de imágenes escintigráficas.

44. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 43, donde el paciente es un paciente humano.

45. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 43, donde el paciente es un paciente veterinario.

46. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 5 o 9 a 45, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene una pureza radioquímica de al menos un 90 %, basado en porcentaje en peso.

47. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 46, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en forma de liofilizado reconstituido.

48. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 47, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato es una solución acuosa estéril carente de pirógeno.

49. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1-5, 9 a 36, o 44 a 48 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

o

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.

50. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1-5, 9 a 36 o 44 a 48, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde F es un ligando de folato, L es un enlazador bivalente opcional; n es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 100, o de 1 aproximadamente 20, o n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8; Ar es un grupo arilo, incluyendo grupos heteroarilo, que incluye uno o más sustituyentes Rf que comprenden un radioforo o un precursor para un radioforo.

51. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1-5, 9 a 36 o 44 a 48, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde F es un ligando de folato; L es un enlazador bivalente opcional; n es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 100, o de 1 aproximadamente 20, o n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8; Rf es como se ha descrito anteriormente; y m es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 3.

52. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1-5, 9 a 36, o 44 a 48, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde L es un enlazador bivalente opcional; n es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 100; Rf es como se ha definido en las diversas realizaciones de la presente memoria; y m es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 3.

53. Un método para seleccionar un paciente para terapia con un fármaco antiinflamatorio, comprendiendo el método las etapas de evaluar si el paciente necesita la terapia con el fármaco antiinflamatorio basándose en los resultados obtenidos por medio de la detección de una señal producida en el paciente por un conjugado de agente de formación de imágenes-folato administrado al paciente; y prescribir o continuar la prescripción del fármado antiinflamatorio para tratar al paciente sometido a evaluación de la necesidad de fármaco antiinflamatorio.

54. El método de la cláusula 54, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato produce una señal detectable en el paciente, donde la señal se detecta, y donde la detección de la señal se usa para evaluar si el paciente necesita la terapia con el fármaco antiinflamatorio.

55. El método de la cláusula 54, donde la señal es una señal radioactiva.

56. El método de la cláusula 54, donde la señal se produce por medio de un cromóforo.

57. El método de la cláusula 56, donde el cromóforo es un fluoróforo.

58. El método de la cláusula 57, donde el fluoróforo está seleccionado entre el grupo que consiste en una fluoresceína, una rodamina, una ficoeritrina, un colorante fluorescente de longitud de onda larga y una cianina. 59. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 58, donde la señal se produce como resultado de la unión del conjugado de agente de formación de imágenes-folato con macrófagos activados.

60. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 59, donde la administración comprende una primera etapa de administración y una segunda etapa de administración.

61. El método de la cláusula 60, donde la primera y segunda etapas de administración producen una primera señal y una segunda señal, respectivamente.

62. El método de la cláusula 61, donde la primera señal y la segunda señal se cuantifican.

63. El método de la cláusula 61, donde la primera señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato antes de la administración del fármaco antiinflamatorio.

64. El método de la cláusula 61, donde la primera señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato el mismo día que da comienzo el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

65. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato tras la administración del fármaco antiinflamatorio.

66. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

67. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas o aproximadamente 4 semanas después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

68. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 21 días después de iniciar la administración del fármaco antiinflamatorio.

69. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 12 semanas después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

70. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal de reduce en aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 % o aproximadamente un 100 %, en comparación con la primera señal, y donde la reducción indica que el paciente debería continuar con el tratamiento de fármaco antiinflamatorio.

71. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 12, aproximadamente 15 o aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

72. El método uso de una cualquiera de las cláusulas 53 a 71, donde la enfermedad inflamatoria está seleccionada entre el grupo que consiste en artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, ateroesclerosis, soriasis, isquemia/lesión por reperfusión, fibrosis pulmonar, rechazo al trasplante de órganos, colitis ulcerosa, traumatismo por impacto, osteomielitis, esclerosis múltiple, escleroderma, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjogren, glomerulonefritis, esclerosis sistémica, sarcoidosis, lesión antiinflamatoria e inflamación crónica.

73. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 72, donde el conjugado de agente de formación de imágenesfolato está en una forma de dosificación parenteral.

74. El método de la cláusula 73, donde la forma de dosificación está seleccionada entre el grupo que consiste en una forma de dosificación intradérmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa e intratecal.

75. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 74, donde conjugado de agente de formación de imágenesfolato está en una composición y donde la composición además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

76. El método de la cláusula 75, donde el vehículo farmacéuticamente aceptable es un vehículo líquido.

77. El método de la cláusula 76, donde el vehículo líquido está seleccionado entre el grupo que consiste en disolución salina, glucosa, alcoholes, glicoles, ésteres, amidas y una combinación de los mismos.

78. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 77, donde el conjugado de agente de formación de folato se administra en una cantidad eficaz.

79. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ng a aproximadamente 1 mg por kilogramo de peso corporal del paciente.

80. El método de la cláusula 78 donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 500 |jg por kilogramo de peso corporal del paciente.

81. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a 25 jg por kilogramo de peso corporal del paciente.

82. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 jg/m 2 a aproximadamente 500 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

83. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 jg/m 2 a aproximadamente 300 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

84. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 10 jg/kg a aproximadamente 100 jg/kg de peso corporal del paciente.

85. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 84 que además comprende la etapa de administrar ácido fólico no marcado al paciente.

86. El método de la cláusula 85 donde el ácido fólico no marcado se administra antes de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato.

87. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 55 o 59 a 86, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde M es un radinucleido.

88. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 55 o 59 a 87, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde M es un radinucleido.

89. El método de la cláusula 87 o 88, donde el radionucleido está seleccionado entre el grupo que consiste en un isótopo de galio, un isótopo de indio, un isótopo de cobre, un isótopo de tecnecio y un isótopo de renio.

90. El método de la cláusula 89, donde el radionucleido es un isótopo de tecnecio.

91. El método de la cláusula 90, donde el tecnecio es 99m-tecnecio.

92. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 55 o 59 a 91 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato es 99mTc-EC20.

93. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 55 o 59 a 92 donde la señal se detecta usando formación de imágenes escintigráfica.

94. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 93 donde el paciente es un paciente humano.

95. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 93 donde el paciente es un paciente veterinario.

96. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 55 o 59 a 95 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene una pureza radioquímica de al menos un 90 % basada en porcentaje en peso.

97. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 96 donde el conjugado de agente de formación de imágenesfolato está en forma de liofilizado reconstituido.

98. El método de una cualquiera de las cláusulas 53 a 97 donde el conjugado de agente de formación de imágenesfolato está en una solución acuosa estéril carente de pirógeno.

99. El método de una cualquiera de las cláusulas 53-55, 59 a 86 o 94 a 98, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

o

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.

100. El método de una cualquiera de las cláusulas 53-55, 59 a 86 o 94 a 98 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde F es un ligando de folato; L es un enlazador bivalente opcional; n es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 100, o de 1 aproximadamente 20, o n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8; Ar es un grupo arilo, incluyendo grupos heteroarilo, que incluye uno o más sustituyentes Rf que comprenden un radioforo o un precursor de un radioforo.

101. El método de una cualquiera de las cláusulas 53-55, 59 a 86 o 94 a 98 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde F es un ligando de folato; L es un enlazador bivalente opcional; n es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 100, o de 1 aproximadamente 20, o n es 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 o 8; Rf es como se ha descrito anteriormente; y m es un número entero de 1 a aproximadamente 3.

102. El método de una cualquiera de las cláusulas 53-55, 59 a 86 o 94 a 98 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde L es un engarce bivalente opcional; n es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 100; Rf es como se ha definido en diversas realizaciones de la presente memoria; y m es un número entero seleccionado entre 1 y aproximadamente 3.

103. Un método para predecir la eficacia de un fármaco antiinflamatorio en un paciente, comprendiendo el método las etapas de administrar al paciente un conjugado de agente de formación de imágenes-folato, y usar el conjugado de agente de formación de imágenes-folato para predecir la eficacia del fármaco antiinflamatorio en el paciente.

104. El método de la cláusula 103 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato produce una señal detectable en el paciente, donde la señal se detecta, y donde la detección de la señal se usa para evaluar si el paciente necesita una terapia con el fármaco antiinflamatorio.

105. El método de la cláusula 104, donde la señal es una señal radioactiva.

106. El método de la cláusula 104, donde la señal se produce por medio de cromóforo.

107. El método de la cláusula 106, donde el cromóforo es un fluoróforo.

108. El método de la cláusula 107, donde el fluoróforo está seleccionado entre el grupo que consiste en una fluoresceína, una rodamina, una ficoeritrina, un colorante fluorescente de longitud de onda larga y una cianina. 109. El método de una cualquiera de las cláusulas 104 a 108, donde la señal se produce como resultado de unión del conjugado de agente de formación de imágenes-folato a macrófagos activados.

110. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 109, donde la etapa de administración comprende una primera etapa de administración y una segunda etapa de administración.

111. El método de la cláusula 110 donde la primera y la segunda etapa de administración producen una primera señal y una segunda señal, respectivamente.

112. El método de la cláusula 111, donde la primera señal y la segunda señal se cuantifican.

113. El método de la cláusula 111 donde la primera señal se obtiene por medio de administración de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato antes de la administración del fármaco antiinflamatorio. 114. El método de la cláusula 111 donde la primera señal se obtiene por medio de la administración de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato el mismo día de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

115. El método de la cláusula 111 donde la segunda señal se obtiene por medio de la administración de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato después de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

116. El método de la cláusula 111 donde la segunda señal se obtiene por medio de la administración de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato dentro de 21 días después de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

117. El método de la cláusula 111 donde la segunda señal se obtiene por medio de la administración de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato dentro de aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, o aproximadamente 4 semanas después de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

118. El método de la cláusula 111 donde la segunda señal se obtiene por medio de la administración de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 21 días después de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

119. El método de la cláusula 111 donde la segunda señal se obtiene por medio de la administración de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 12 semanas después de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

120. El método de la cláusula 111, donde la segunda señal se reduce en aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 % o aproximadamente un 100 %, en comparación con la primera señal, y donde la reducción indica que el paciente debería continuar con el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

121. El método de la cláusula 111, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 12, aproximadamente 15 o aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

122. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 121, donde la enfermedad inflamatoria está seleccionada entre el grupo que consiste en artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, ateroesclerosis, soriasis, isquemia/lesión por reperfusión, fibrosis pulmonar, rechazo al trasplante de órganos, colitis ulcerosa, traumatismo por impacto, osteomielitis, esclerosis múltiple, escleroderma, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjogren, glomerulonefritis, esclerosis sistémica, sarcoidosis, lesión antiinflamatoria e inflamación crónica.

123. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 122, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en forma de dosificación parenteral.

124. El método de la cláusula 123, donde la forma de dosificación está seleccionada entre el grupo que consiste en una forma de dosificación intradérmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa e intratecal. 125. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 124, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en una composición y donde la composición además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

126. El método de la cláusula 125, donde el vehículo farmacéuticamente aceptable es un vehículo líquido.

127. El método de la cláusula 126, donde el vehículo líquido está seleccionado entre el grupo que consiste en disolución salina, glucosa, alcoholes, glicoles, ésteres, amidas y una combinación de los mismos.

128. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 127, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se administra en una cantidad eficaz.

129. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ng a aproximadamente 1 mg por kilogramo de peso corporal del paciente.

130. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 500 |jg por kilogramo de peso corporal del paciente.

131. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 jg por kilogramo de peso corporal del paciente.

132. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 jg/m2 a aproximadamente 500 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

133. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 jg/m2 a aproximadamente 300 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

134. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 10 jg/kg a aproximadamente 100 jg/kg de superficie corporal del paciente.

135. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 134 que además comprende la etapa de administración de ácido fólico no marcado al paciente.

136. El método de la cláusula 135, donde el ácido fólico no marcado se administra antes de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato.

137. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 105 o 109 a 136, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde M es un radionucleido.

138. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 105 o 109 a 137, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde M es un radionucleido.

139. El método de la cláusula 137 o 138, donde el radionucleido está seleccionado entre el grupo que consiste en isótopo de galio, un isótopo de indio, un isótopo de cobre, un isótopo de tecnecio y un isótopo de renio.

140. El método de la cláusula 139 donde el radionucleido es un isótopo de tecnecio.

141. El método de la cláusula 140, donde el tecnecio es 99mtecnecio.

142. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 105 o 109 a 141, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato es 99mTc-EC20.

143. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 105 o 109 a 142, donde la señal se detecta usando formación de imágenes escintigráficas.

144. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 143, donde el paciente es un paciente humano.

145. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 143, donde el paciente es un paciente veterinario. 146. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 105 o 109 a 145, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene una pureza radioquímica de al menos un 90 %, basado en porcentaje en peso.

147. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 146, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en forma de liofilizado reconstituido.

148. El método de una cualquiera de las cláusulas 103 a 147, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato es una solución acuosa estéril carente de pirógeno.

149. El método de una cualquiera de las cláusulas 103-105, 109 a 136, o 144 a 148 donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

o

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.

150. El método de una cualquiera de las cláusulas 103-105, 109 a 136 o 144 a 148, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

151. El método de una cualquiera de las cláusulas 103-105, 109 a 136 o 144 a 148, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

152. El método de una cualquiera de las cláusulas 103-105, 109 a 136, o 144 a 148, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

153. El método de uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 152, donde la parte de folato del conjugado de agente de formación de imágenes-folato comprende un compuesto de fórmula:

154. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1-4, 9-36, 44-45, 47-48, 53-54, 59-86, 94-95, 97-98, 103-104, 109-136 o 144-148, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde:

X es un amino ácido o un derivado del mismo, y

X es un colorante que tiene una excitación de fluorescencia y espectros de emisión en el intervalo de infrarrojo próximo, y dicho compuesto mantiene o mejora la fluorescencia de Y.

155. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1-4, 9-36, 44-45, 47-48, 53-54, 59-86, 94-95, 97-98, 103-104, 109-136 o 144-148, donde el agente Y tiene la fórmula:

donde:

X' está independientemente seleccionado entre el grupo que consiste en O, S, N y C, y

R' está independientemente seleccionado entre el grupo que consiste en CH2 y CH2CH2. En algunas realizaciones, el colorante Y está seleccionado entre el grupo que consiste en LS288, IR800, SP054, S0121, KODAK IRD28, S2076, S4056 y derivados de los mismos.

156. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1-4, 9-36, 44-45, 47-48, 53-54, 59-86, 94-95, 97-98, 103-104, 109-136 o 144-148, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde W, X, Y, Z son cada uno H, Na+, K+ o NH4+.

Breve descripción de los dibujos

La patente o el archivo de solicitud contiene al menos un dibujo ejecutado en color. Las copias de la presente patente o publicación de solicitud de patente con dibujos en color se proporcionan por parte de la Oficina bajo petición y pago de la tasa necesaria.

FIGURA 1. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en ratones CIA tratados con metotrexato o dexametasona. A: Radiomagen de ratones inyectados con 99mTc-EC20 tres días después del inicio del tratamiento con metotrexato (izquierda), disolución salina (medio) o dexametasona (derecha). B y C: Puntuaciones de artritis y mediciones de grosor de pata en ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control de enfermedad (triángulo hacia arriba), metotrexato (diamante), dexametasona (triángulo hacia abajo) y control sano (cuadrado).

FIGURA 2. Análisis de captación de 99mTc-EC20 en ratones CIA tratados con etanercept o abatacept. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC20 tres días después del inicio del tratamiento con etanercept (izquierda), disolución salina (medio) o abatacept (derecha). B y C: Puntuaciones de artritis y mediciones de grosor de pata en ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control de enfermedad (triángulo hacia arriba), etanercept (triángulo hacia abajo), abatacept (diamante) y control sano (cuadrado).

FIGURA 3. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en ratones CIA tratados con naproxeno. A: Radioimagen de ratones inyectados con 99mTc-EC20 tres días después del inicio del tratamiento con naproxeno (izquierda), o disolución salina (derecha). B y C: Puntuaciones de artritis y mediciones de grosor de pata en ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control de enfermedad (triángulo hacia arriba), naproxeno (triángulo hacia abajo) y control sano (cuadrado).

FIGURA 4. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en ratones con colitis ulcerosa tratados con cimetidina o sulfasalazina. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC20 cuatro días después del inicio del tratamiento. De izquierda a derecha, control sano, tratamiento con disolución salina, tratamiento con cimetidina y tratamiento con sulfasalazina. B: Se registraron diariamente las puntuaciones clínicas de colitis de ratones para cada grupo de tratamiento: control de enfermedad (triángulo hacia arriba), cimetidina (diamante) sulfasalazina (triángulo hacia abajo) y control sano (cuadrado). C. Se eliminaron cólones después de 4 días de tratamiento (columnas izquierdas) y 8 días de tratamiento (columnas derechas) y se midieron las longitudes usando calibres.

FIGURA 5. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en seno aórtico de ratones ApoE-/- tratados con valsartan o fluvastatina. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC203 semanas después del inicio del tratamiento. De izquierda a derecha, control sano (C57BL/6), ratón ApoE-/- tratado con valsartan, ratón ApoE-/- tratado con fluvastatina. B. Tinción H&E de paredes arteriales de seno aórtico de cada ratón sometido a toma de imágenes directamente en cabecera. RBCs = eritrocitos.

FIGURA 6. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en ratones con fibrosis pulmonar tratados con etanercept o dexametasona. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC20 después de seis días de tratamiento. De izquierda a derecha, control sano, tratamiento con disolución salina, tratamiento con dexametasona y tratamiento con etanercept. B: contenido pulmonar de hidroxiprolina en pulmones analizados después de 15 días de tratamiento. C: Cuentas totales de células de fluido de lavado broncoalveolar después de 15 días de tratamiento. D. Tinción H&E de tejido pulmonar, de izquierda a derecha: control sano, tratamiento con disolución salina, tratamiento con dexametasona y tratamiento con etanercept.

FIGURA 7. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en ratones CIA tratados con metotrexato o dexametasona. A: Radioimagen de ratones inyectados con 99mTc-EC20 11 días después del inicio del tratamiento con metotrexato (izquierda), disolución salina (medio) o dexametasona (derecha).

FIGURA 8. Análisis de captación de 99mTc-EC20 en ratones CIA tratados con etanercept o abartacept. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC20 11 días después del inicio del tratamiento con etanercept (izquierda), disolución salina (medio) o abatacept (derecha).

FIGURA 9. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en ratones con colitis ulcerosa tratados con cimetidina o sulfasalazina. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC208 días después del inicio del tratamiento. De izquierda a derecha, control sano, tratamiento con disolución salina, tratamiento con cimetidina y tratamiento con sulfasalazina.

FIGURA 10. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en seno aórtico de ratones ApoE-/- tratados con valsartan o fluvastatina. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC203 semanas después del inicio del tratamiento. De izquierda a derecha, ratón sano (C57BL/6), ratón ApoE-/- tratado con disolución salina, ratón ApoE-/- tratado con valsartan, ratón ApoE-/-tratado con fluvastatina.

FIGURA 11. Análisis de acumulación de 99mTc-EC20 en ratones con fibrosis pulmonar tratados con etanercept o dexametasona. A: Radioimágenes de ratones inyectados con 99mTc-EC20 después de 15 días de tratamiento. De izquierda a derecha, ratón de control sano, ratón tratado con disolución salina, ratón tratado con dexametasona y ratón tratado con etanercept.

FIGURA 12. Análisis citométrico de flujo de la acumulación de macrófagos en ratones con colitis ulcerosa tratados con cimetidina o sulfasalazina.

FIGURA 13. Análisis de acumulación de OTL-38 en ratones CIA tratados con orencia o dexametasona. Las puntuaciones clínicas se muestran para ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control sano, control de enfermedad, orencia y dexametasona.

FIGURA 14. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 3) en ratones CIA tratados con orencia o dexametasona. Las puntuaciones clínicas se muestran para ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control sano, control de enfermedad, orencia y dexametasona.

FIGURA 15. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 11) en ratones CIA tratados con orencia o dexametasona. Las puntuaciones clínicas se muestran para ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control sano, control de enfermedad, orencia y dexametasona.

FIGURA 16. Análisis de acumulación de OTL-38 en ratones CIA tratados con orencia o dexametasona. Se muestran las mediciones de grosor de pata de ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control sano, control de enfermedad, orencia y dexametasona.

FIGURA 17. Análisis de acumulación de OTL-38 en ratones CIA tratados con orencia o dexametasona. Se muestran imágenes de ratones inyectados con OTL-38 tres días después del inicio del tratamiento: dexametasona (izquierda), disolución salina (medio) u orencia (derecha).

FIGURA 18. Análisis de acumulación de OTL-38 en ratones CIA tratados con orencia o dexametasona. Se muestran imágenes de ratones inyectados con OTL-38 once días después del inicio del tratamiento: dexametasona (izquierda), disolución salina (medio) u orencia (derecha).

FIGURA 19. Análisis de acumulación de OTL-38 en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestran las puntuaciones clínicas para ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento: control sano, control de enfermedad, sulfasalazina y cimetidina.

FIGURA 20. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 4) en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestran las imágenes de ratones inyectados con OTL-38 cuatro días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda) cimetidina (medio derecha) y sulfasalazina (extremo derecho).

FIGURA 21. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 4) en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestran las imágenes de cólones de ratones inyectados con OTL-38 cuatro días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda) cimetidina (medio derecha) y sulfasalazina (extremo derecha).

FIGURA 22. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 4) en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestran las imágenes de cólones de ratones inyectados con OTL-38 cuatro días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda) cimetidina (medio derecha) y sulfasalazina (extremo derecha).

FIGURA 23. Análisis de acumulación de OTL-38 en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestra la longitud de colon para los ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento en el día 4 de tratamiento: control sano, control de enfermedad, sulfasalazina y cimetidina.

FIGURA 24. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 10) en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestran las imágenes de ratones inyectados con OTL-38 diez días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda), cimetidina (medio derecha) y sulfasalazina (extremo derecha).

FIGURA 25. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 10) en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestran las imágenes de cólones de ratones inyectados con OTL-38 diez días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda), cimetidina (medio derecha) y sulfasalazina (extremo derecha).

FIGURA 26. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 10) en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestran las imágenes de cólones de ratones inyectados con OTL-38 diez días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda), cimetidina (medio derecha) y sulfasalazina (extremo derecha).

FIGURA 27. Análisis de acumulación de OTL-38 en ratones con colitis ulcerosa tratados con sulfasalazina o cimetidina. Se muestra la longitud de colon para ratones en cada uno de los siguientes grupos de tratamiento en el día 10 del tratamiento: control sano, control de enfermedad, sulfasalazina y cimetidina.

FIGURA 28. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 21) en ratones con ateroesclerosis tratados con valsarían o fluvastatina. Se muestran las imágenes de ratones inyectados con OTL-38 21 días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda), valsartan (medio derecha) y fulvastatina (extremo derecha).

FIGURA 29. Análisis de acumulación de OTL-38 (Día 6) en ratones con fibrosis pulmonar tratados con etanercept o dexametasona. Se muestran las imágenes de ratones inyectados con OTL-38 6 días después del comienzo del tratamiento: control sano (extremo izquierda), control de enfermedad (medio izquierda), etanercept (medio derecha) y dexametasona (extremo derecha).

Definiciones

Tal y como se usa en la presente memoria, el término “señal” significa cualquier señal detectable producida por medio de un agente médico de formación de imágenes que sea susceptible de detección usando un procedimiento médico de formación de imágenes. Los ejemplos de los procedimientos médicos de formación de imágenes incluyen, pero sin limitarse, el uso de agentes radioactivos de formación de imágenes en procedimientos de formación de imágenes, el uso de agentes fluorescentes de formación de imágenes u otros tipos de colorantes en la formación de imágenes médicas, tomografía de emisión de positrones, formación de imágenes de resonancia magnética, tomografía computerizada, formación de imágenes escintigráficas, formación de imágenes ópticas, ultrasonidos y similares.

Tal y como se usa en la presente memoria, las cláusulas “seleccionar un paciente para terapia con un fármaco antinflamatorio”, “selección de un paciente para terapia con un fármaco antiinflamatorio”, “selección de pacientes para terapia con un fármaco antiinflamatorio” y cláusulas similares significan que la determinación se lleva a cabo de manera que un paciente se debería tratar con o debería continuar con el tratamiento, en particular con el fármaco antiinflamatorio.

Tal y como se usa en la presente memoria, “predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio” significa que la determinación se realiza tanto si cabe esperar que el paciente se beneficie del inicio del tratamiento o continuación del tratamiento con un fármaco antiinflamatorio como si no cabe esperar beneficio alguno del inicio o continuación del tratamiento con un fármaco antiinflamatorio.

Tal y como se usa en la presente memoria, “conjugado de agente de formación de imágenes-folato” significa un ligando de folato ligado a un agente de formación de imágenes.

Descripción detallada de las realizaciones ilustrativas

Se describen diversos aspectos de la divulgación por medio de las siguientes cláusulas enumeradas y cada de las realizaciones descritas en la presente sección de Descripción Detallada de la presente solicitud aplican a cada una de las siguientes realizaciones:

7. El método o uso de la cláusula 6 donde el cromóforo es un fluoróforo.

8. El método o uso de la cláusula 7, donde el fluoróforo está seleccionado entre el grupo que consiste en una fluoresceína, una rodamina, una ficoeritrina, un colorante fluorescente de longitud de onda larga y una cianina. 9. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 4 a 8, donde la señal se produce como resultado de unión del conjugado de agente de formación de imágenes-folato a macrófagos activados.

24. El método o uso de la cláusula 23, donde la forma de dosificación está seleccionada entre el grupo que consiste en una forma de dosificación intradérmica, subcutánea, intramuscular, intraperitoneal, intravenosa e intratecal.

25. El método o uso de una cualquiera de las cláusulas 1 a 24, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en una composición y donde la composición además comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

29. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ng a aproximadamente

1 mg por kilogramo de peso corporal del paciente.

30. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 500 ^g por kilogramo de peso corporal del paciente.

31. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 ^g por kilogramo de peso corporal del paciente.

32. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ^g/m2 a aproximadamente 500 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

33. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ^g/m2 a aproximadamente 300 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

34. El método o uso de la cláusula 28, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 10 ^g/kg a aproximadamente 100 ^g/kg del peso corporal del paciente.

donde M es un radionucleido.

donde M es un radionucleido.

41. El método o uso de la cláusula 40, donde el tecnecio es 99mtecnecio.

o

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.

55. El método de la cláusula 54, donde la señal es una señal radioactiva.

57. El método de la cláusula 56, donde el cromóforo es un fluoróforo.

66. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato dentro de aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

67. El método de la cláusula 61, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato dentro de aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas o aproximadamente 4 semanas después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

80. El método de la cláusula 78 donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 500 i^g por kilogramo de peso corporal del paciente.

81. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a 25 ^g por kilogramo de peso corporal del paciente.

82. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ^g/m2 a aproximadamente 500 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

83. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 ^g/m2 a aproximadamente 300 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

84. El método de la cláusula 78, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 10 ^g/kg a aproximadamente 100 Lig/kg de peso corporal del paciente.

donde M es un radinucleido.

91. El método de la cláusula 90, donde el tecnecio es 99m-tecnecio.

o

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.

105. El método de la cláusula 104, donde la señal es una señal radioactiva.

107. El método de la cláusula 106, donde el cromóforo es un fluoróforo.

130. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 500 pg por kilogramo de peso corporal del paciente.

131. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 100 ng a aproximadamente 25 pg por kilogramo de peso corporal del paciente.

132. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 pg/m2 a aproximadamente 500 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

133. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 1 pg/m2 a aproximadamente 300 mg/m2 de superficie corporal del paciente.

134. El método de la cláusula 128, donde la cantidad eficaz varía de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 100 pg/kg de superficie corporal del paciente.

donde M es un radionucleido.

donde M es un radionucleido.

141. El método de la cláusula 140, donde el tecnecio es 99m-tecnecio.

o

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.

150. El método de una cualquiera de las cláusulas 103-105, 109 a 136 o 144 a 148, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

donde:

X es un amino ácido o un derivado del mismo, e

Y es un colorante que tiene una excitación de fluorescencia y espectros de emisión en el intervalo de infrarrojo próximo, y dicho compuesto mantiene o mejora la fluorescencia de Y.

donde:

donde W, X, Y, Z son cada uno H, Na+, K+ o NH4+. El presente compuesto se denomina en la presente memoria OTL-38 o OTL-0038.

La invención se refiere a composiciones para uso en un método para la selección de pacientes para terapia con un fármaco antiinflamatorio. Más particularmente, la invención se refiere a composiciones que comprenden conjugados de agente de formación de imágenes-folato para uso en la selección de pacientes para terapia con un fármaco antiinflamatorio, cuyo alcance se encuentra estrictamente limitado por el contenido de las reivindicaciones adjuntas.

Se proporciona un método para escoger un paciente para terapia con un fármaco antiinflamatorio. El método comprende las etapas de evaluar si el paciente necesita la terapia con el fármaco antiinflamatorio basándose en los resultados obtenidos por medio de la detección de una señal producida en el paciente mediante un conjugado de agente de formación de imágenes-folato administrado al paciente; y prescribir o continuar con la prescripción del fármaco antiinflamatorio para tratar al paciente evaluado que necesita el fármaco antiinflamatorio.

El conjugado de agente de formación de imágenes-folato produce una señal detectable en el paciente, la señal se detecta, y se usa la detección de la señal para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio. Sin quedar ligado a teoría alguna, la señal se puede producir como resultado de la unión de conjugados de agente de formación de imágenes-folato a macrófagos activados en el sitio de inflamación, y/o puede ser el resultado de la acumulación de conjugados de agente de formación de imágenes-folato en macrófagos activados en el sitio de inflamación.

En todas las realizaciones descritas anteriormente, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se administra al paciente y se usa para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio. La etapa de administración puede comprender una primera etapa de administración y una segunda etapa de administración. La primera y segunda etapas de administración pueden producir una primera señal y una segunda señal, respectivamente.

En otro aspecto ilustrativo, la primera señal y la segunda señal se pueden cuantificar, y se pueden comparar una con otra para determinar si existe una reducción de la intensidad de la segunda señal en comparación con la primera señal. En estas realizaciones, una reducción de la intensidad de la segunda señal en comparación con la primera señal puede indicar que el paciente se aprovecha de la continuidad del tratamiento con el fármaco antiinflamatorio. El paciente se puede tratar a continuación con el fármaco antiinflamatorio, o el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio puede continuar, si el paciente ya está siendo tratado con el fármaco antiinflamatorio.

En una realización, la primera señal se obtiene por medio de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato antes de la administración del fármaco antiinflamatorio para obtener un nivel de "control” de la intensidad de señal antes del tratamiento con el fármaco antiinflamatorio. En otra realización, la primera señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato el mismo día de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio para obtener un nivel de "control” de intensidad de señal. La segunda señal se puede obtener por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato después de la administración del fármaco antiinflamatorio para determinar el nivel de intensidad de señal después del tratamiento con el fármaco antiinflamatorio durante un período de tiempo. Sin quedar ligado a teoría alguna, una reducción de la intensidad de la segunda señal en comparación con la primera señal puede reflejar una reducción del número de células inflamatorias capaces de unirse a los conjugados de agente de formación de imágenes-folato, tal como macrófagos activados, en el sitio de inflamación, inactivación de las células inflamatorias en el sitio de inflamación, reducción de la capacidad de las células inflamatorias para unirse a los conjugados de agente de formación de imágenes-folato, reducción de la acumulación de conjugados de agente de formación de imágenes-folato en las células inflamatorias en el sitio de inflamación, o cualquier otra respuesta provocada por el fármaco antiinflamatorio que reduzca la intensidad de señal producida por los conjugados de agente de formación de imágenes-folato en el sitio de inflamación.

En una de estas realizaciones descritas anteriormente, la segunda señal se obtiene por medio de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato tras la administración del fármaco antiinflamatorio. En una realización ilustrativa, la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato dentro de aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio. En otra realización, la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio. En otro aspecto, la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato dentro de aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas, aproximadamente 4 semanas, aproximadamente 5 semanas, aproximadamente 6 semanas, aproximadamente 7 semanas, aproximadamente 8 semanas, aproximadamente 9 semanas, aproximadamente 10 semanas, aproximadamente 11 semanas o aproximadamente 12 semanas después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio. En otra realización ilustrativa, se obtiene la segunda señal por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 12 semanas tras comenzar la administración del fármaco antinflamatorio. En otra realización, la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en el día 1, día 2, día 3, día 4, día 5, día 6, día 7, día 8, día 9, día 10, día 11, día 12, día 13, día 14, día 15, día 16, día 17, día 18, día 19, día 20, día 21, día 22, día 23 o día 24 después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio. El día de administración del fármaco antiinflamatorio comienza el día 0. Se pueden obtener señales adicionales mediante el uso de una tercera, cuarta, etc. etapa de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato. Se puede llevar a cabo cualquier administración adicional del conjugado de agente de formación de imágenes-folato en cualquier momento descrito en el presente párrafo.

Tal y como se describe en la presente memoria, la primera señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato antes de la administración del fármaco antiinflamatorio, o en el mismo día de comenzar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio, para obtener un nivel de “control” de la intensidad de señal antes del tratamiento con el fármaco antiinflamatorio. La segunda señal se puede obtener por medio de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato después de la administración del fármaco antiinflamatorio para determinar el nivel de intensidad de señal tras el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio durante un período de tiempo. La primera y segunda señal se pueden cuantificar, y se pueden comparar una con la otra para determinar si existe una reducción de la intensidad de la segunda señal en comparación con la primera señal. En estas realizaciones, una reducción de la intensidad de la segunda señal en comparación con la primera señal puede indicar que el paciente se aprovecha del tratamiento continuado con un fármaco antiinflamatorio, o no se aprovecha de continuar el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio. Si se determina que el paciente no se aprovecha del tratamiento con un fármaco antiinflamatorio particular, se puede usar un fármaco antiinflamatorio diferente. Los métodos y usos descritos en la presente memoria se pueden usar para determinar si el nuevo fármaco antiinflamatorio resulta beneficioso para el paciente.

En diversas realizaciones, la segunda señal se puede reducir en aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 % o aproximadamente un 100 %, en comparación con la primera señal. Para cualquiera de estas realizaciones, la reducción puede indicar que el paciente debería continuar con el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

En una realización alternativa, los métodos y usos descritos en la presente memoria se pueden usar para predecir la respuesta de un paciente a un fármaco antiinflamatorio determinando si cabe esperar que el paciente se aproveche del inicio del tratamiento, en lugar de continuar con el tratamiento, con el fármaco antiinflamatorio, o cabe esperar que el paciente no se aproveche del inicio del tratamiento con el fármaco antiinflamatorio. En tales realizaciones, se administran conjugados de agente de formación de imágenes-folato, en ausencia de tratamiento con un fármaco antiinflamatorio, y se usa la intensidad de señal obtenida para determinar si cabe esperar que el paciente se aproveche del inicio del tratamiento con un fármaco antiinflamatorio, o no cabe esperar que el paciente se aproveche del inicio del tratamiento con un fármaco antiinflamatorio.

Los métodos y usos descritos en la presente memoria son aplicables a cualesquiera fármacos antiinflamatorios usados para tratar un paciente con una enfermedad antiinflamatoria. Los fármacos antiinflamatorios incluyen, pero sin limitación, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (NSAID), analgésicos, glucocorticoides, fármacos anti reumáticos, inhibidores de dihidrofolato reductasa, inhibidores de TNF-a, modificadores de respuesta biológica, agentes hormonales y combinaciones de los mismos. Otros fármacos antiinflamatorios a modo de ejemplo incluyen corticoesteroides, hidrocortisona, prednisolona, prednisona, alopurinol, aspirina, indometacina, fenilbutazona, etanercept, infliximab, adalimumab, rituximab, abatacept, anakinra, efalizumab, metotrexato, dexametasona, naproxeno y combinaciones de los mismos.

En las diversas realizaciones descritas en la presente memoria, los métodos o usos descritos en la presente memoria son aplicables a enfermedades antiinflamatorias, incluyendo, pero sin limitación, enfermedades antiinflamatorias seleccionadas entre el grupo que consiste en artritis, artritis reumatoide, ateroesclerosis, soriasis, isquemia/lesión por reperfusión, fibrosis pulmonar, rechazo al trasplante de órganos, colitis ulcerosa, traumatismo por impacto, esclerosis múltiple, escleroderma, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjogren, glomerulonefritis, esclerosis sistémica, sarcoidosis, lesión inflamatoria e inflamación crónica.

Los métodos y usos descritos en la presente memoria, se pueden usar para aplicaciones tanto de medicina clínica humana como veterinaria. De este modo, el paciente puede ser humano o, en el caso de aplicaciones veterinarias, puede ser un animal de laboratorio, agrícola, doméstico o salvaje. Los métodos y usos descritos en la presente memoria se pueden aplicar a humanos, animales de laboratorio tales como roedores (por ejemplo, ratones, ratas, hámster, etc.), conejos, monos, chimpancés, animales domésticos tales como perros, gatos y conejos, animales agrícolas tales como vacas, caballos, cerdos, ovejas, cabras y animales salvajes en cautividad tales como osos, pandas, leones, tigres, leopardos, elefantes, cebras, jirafas, gorilas, delfines y ballenas.

Tal y como se usa en la presente memoria, “conjugado de agente de formación de imágenes-folato” para los métodos y usos descritos en la presente memoria, significa un ligando de folato ligado a un agente de formación de imágenes. De este modo, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato comprende un ligando de folato ligado a un agente de formación de imágenes. Los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritos a continuación proporcionan un medio para detectar una señal en un paciente tratado con un conjugado de agente de formación de imágenes-folato.

En diversas realizaciones, el ligando de folato ligado al agente de formación de imágenes en el conjugado de agente de formación de imágenes-folato puede incluir, pero sin limitación, folato, ácido fólico, ácido pteropoliglutámico y pteridinas de unión a receptor de folato tal como tetrahidropterinas, dihidrofolatos, tetrahidrofolatos y sus análogos didesaza y desaza. Los términos de análogos “desaza” y “didesaza” se refieren a análogos reconocidos en la materia que tienen un átomo de carbono sustituido por uno o dos átomos de nitrógeno en la estructura de ácido fólico de origen natural, o análogo o derivado del mismo. Por ejemplo, los análogos desaza incluyen análogos 1-desaza, 3-desaza, 5-desaza, 8-desaza y 10-desaza de folato, ácido folínico, ácido pteropoliglutámico y pteridinas de unión a receptor de folato tales como tetrahidropteridinas, dihidrofolatos y tetrahidrofolatos. Los análogos didesaza incluyen, por ejemplo, análogos 1,5-didesaza, 5,10-didesaza, 8,10-didesaza y 5,8-didesaza de folato, ácido folínico, ácido pteropoliglutámico y pteridinas de unión a receptor de folato tal como tetrahidropterinas, dihidrofolatos y tetrahidrofolatos. Otros folatos útiles para formar conjugados de agente de formación de imágenes-folato para su uso en los métodos y usos descritos en la presente memoria son análogos de unión a receptor de folato aminopterina, ametopterina (también conocido como metotrexato), N10-metilfolato, 2-desamino-hidroxifolato, análogos desaza tales como desazametopterina o 3-desazametopterina y ácido 3',5'-dicloro-4-amino-desoxi-N10-metilpteroglutámico (diclorometotrexato). Los siguientes “folatos” se unen a receptores de folato.

Los ligandos de folato adicionales que se pueden usar en los conjugados de agente de formación de imágenesfolato tienen la fórmula general:

donde X e Y están seleccionados cada uno independientemente entre el grupo que consiste en halo, R2, OR2, SR3 y NR4R5;

U, V y W representan restos divalentes cada uno de ellos seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en -(R6a)C=, -N=, -(R6a)C(R7a)- y -N(R4a)-; Q está seleccionado entre el grupo que consiste en C y CH; T está seleccionado entre el grupo que consiste en S, O, N y -C=C;

-A1 y A2 están cada uno seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en oxígeno, azufre, -C(Z)-, -C(Z)O-, -OC(Z)-, -N(R4b)-, -C(Z)N(R4b)-, -N(R4b)C(Z)-, -OC(Z)N(R4b)-, -N(R4b)C(Z)O-, -N(R4b)C(Z)N(R5b)-, -S(O)-, -S(O)2-, -N(R4a)S(O)2-, -C(R6b)(R7b)-, -N(CECH)-, -N(CH2C^eCH)-, alquileno C1-C12 y alquenoxi C1-C12, donde Z es oxígeno o azufre;

R1 está seleccionado entre el grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-C12 alcoxi C1- C12; R2, R3, R4, R43, R4b, R5, R5b, R6b y R7b están cada uno seleccionados independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-C12, alcoxi C1-C12, alcanoílo C1-C12, alquenilo C1-C12, alquinilo C1-C12, (alcoxi C1-C12)carbonilo y (alquil C1-C12 amino)carbonilo;

R6 y R7 están seleccionados cada uno independientemente entre el grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-C12 y alcoxi C1-C12; o R6 y R7 se toman juntos para formar un grupo carbonilo; R6a y R7a están cada uno independientemente seleccionados entre el grupo que consiste en hidrógeno, halo, alquilo C1-C12 y alcoxi C1-C12; o R6a y R7a se toman de manera conjunta para formar un grupo carbonilo;

L es un enlazador divalente como se describe en la presente memoria;

n, p, r, s y t son cada uno independientemente 0 o 1; y

donde * indica el punto de unión al resto del conjugado.

Se aprecia que los ligandos de folato anteriores pueden estar presentes en una o más formas tautoméricas.

En diversas realizaciones, la parte de agente de formación de imágenes del conjugado de agente de formación de imágenes-folato puede ser un agente de formación de imágenes útil para formación de imágenes médicas. Por ejemplo, el agente de formación de imágenes puede ser un agente radioactivo de formación de imágenes o un cromóforo, y el cromóforo puede ser un fluoróforo. En una realización ilustrativa, el fluoróforo está seleccionado entre el grupo que consiste en fluoresceína, rodamina, rojo de Texas, ficoeritrina, verde de Oregón, AlexaFluor 488, (Molecular Probes, Eugene, Oregon), Cy3 Cy5 y Cy7.

En otro aspecto, el fluoróforo es un agente fluorescente seleccionado entre agentes fluorescentes de verde de Oregón, incluyendo pero sin limitación, verde de Oregón 488, verde de Oregón 514 y similares, agentes fluorescentes AlexaFluor, incluyendo pero sin limitación AlexaFluor 488, AlexaFluor 647 y similares, fluoresceína, y análogos relacionados, agentes fluorescentes de rodamina, incluyendo pero sin limitación tetrametilrodamina, y similares, agentes fluorescentes de DyLight, incluyendo pero sin limitación DyLight 680 y similares, CW 800, rojo de Texas, ficoeritrina y otros. En otra realización, el fluoróforo está seleccionado entre una fluoresceína, una rodamina, una ficoeritrina, un colorante fluorescente de longitud de onda larga y una cianina. Los fluoróforos ilustrativos se muestran en las siguientes estructuras generales ilustrativas:

donde X es oxígeno, nitrógeno, o azufre, y donde X está ligado al enlazador L; Y es ORa, NRa2 o NRV; e Y' es O, NRa o NRa2+; donde cada R está seleccionado independientemente en cada caso entre H, flúor, ácido sulfónico, sulfonato y sales del mismo, y similares; y Ra es hidrógeno o alquilo, y, en otra realización,

donde X es oxígeno, nitrógeno, o azufre, y donde X está ligado al enlazador L; y cada R está seleccionado independientemente en cada caso entre H, alquilo, heteroalquilo, y similares; y n es un número entero de 0 a aproximadamente 4.

En otra realización, el fluoróforo tiene la fórmula

o una sal del mismo.

donde

W es un enlace o

donde x es un número entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 4;

WA es un enlace doble o

donde y es un número entero de aproximadamente 1 a aproximadamente 4; RC y RD son independientemente hidrógeno o alquilo, o RC y RD y los átomos a los cuales están unidos forman un cicloalqueno;

T es hidrógeno, fluoro, cloro o hidroxi, alquilo, heteroalquilo, alcoxi, arilo, heteroarilo, ariloxi o heteroariloxi, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido, o T es O**, S**, R17N**, donde ** representa el punto de unión al resto del conjugado;

R8 representa de 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados en cada caso entre el grupo que consiste en alquilo, heteroalquilo, alcoxi, alquilhidroxi, fluoro, ácido sulfónico o una sal del mismo, ácido alquilsulfónico, o una sal del mismo, o una amina, y una alquilamina; oo R8 representa 2 o 3 sustituyentes donde al menos dos sustituyentes están sobre carbonos adyacentes y junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo aromático condensado opcionalmente sustituido, y el otro sustituyente, si está presente, es alquilo, heteroalquilo, alcoxi, alquilhidroxi, fluoro, ácido sulfónico, o una sal del mismo, ácido alquilsulfónico, o una sal del mismo, o una amina, y una alquilamina;

R11 representa de 1 a 3 sustituyentes independientemente seleccionados en cada caso entre el grupo que consiste en alquilo, heteroalquilo, alcoxi, alquilhidroxi, fluoro, ácido sulfónico o una sal del mismo, ácido alquilsulfónico, o una sal del mismo, o una amina, y una alquilamina; o R11 representa de 2 a 3 sustituyentes donde al menos dos sustituyentes están sobre carbonos adyacentes y junto con los átomos a los cuales están unidos forman un anillo aromático condensado, y el otro sustituyente, si está presente, es alquilo, heteroalquilo, alcoxi, alquilhidroxi, fluoro, ácido sulfónico, o una sal del mismo, ácido alquilsulfónico, o una sal del mismo, o una amina, y una alquilamina; L1 es un alquileno ligado por medio de un enlazador divalente a un folato;

Het está seleccionado entre el grupo que consiste en

donde * es el punto de unión a W;

R9, R10, R12, R13, R14 y R17 están seleccionados en cada caso independientemente entre el grupo que consiste en alquilo, heteroalquilo, hidroxialquilo, alquilamina, aminoalquilo, tioalquilo, ácido sulfónico o una sal del mismo y ácido alquilcarboxílico o una sal del mismo;

R15 representa de 0 a 3 sustituyentes seleccionados entre el grupo que consiste en fluoro, alquilo, alcoxi, ácido sulfónico o una sal del mismo, y heteroalquilo; y

R16 está seleccionado entre el grupo que consiste en alquilo, heteroalquilo, hidroxialquilo, alquilamina, aminoalquilo, tioalquilo, ácido alquilsulfónico o una sal del mismo y ácido alquilcarboxílico, o una sal del mismo; o R16 es alquileno*** donde *** representa el punto de unión al resto del conjugado por medio de un enlazador divalente. En otras realizaciones, x es un número entero de 0 a 4. En otras realizaciones, y es un número entero de 0 a 4.

En otra realización, la parte de agente de formación de imágenes del conjugado de agente de formación de imágenes-folato puede ser un agente radioactivo de formación de imágenes. Por ejemplo, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato puede ser un compuesto de las fórmulas siguientes donde el agente de formación de imágenes es un quelante metálico, y donde M es un radionucleido:

En estas realizaciones, el radionucleido puede estar seleccionado entre el grupo que consiste en un isótopo de galio, un isótopo de indio, un isótopo de cobre, un isótopo de tecnecio y un isótopo de renio. En otra realización, el radionucleido puede ser un isótopo de tecnecio. En otra realización, el radionucleido puede ser 99m-tecnecio.

En otra realización, el agente de formación de imágenes es tecnecio-99m-marcado EC20 (99mTc-EC20). Se ha desarrollado 99mTc-EC20 y proporciona la detección de tejidos o células que expresan receptores de folato capaces de unirse a folato. 99mTc-EC20 tiene la fórmula

El término EC20 se puede usar para identificar el reactivo no radioactivo que carece de radionucleido.

EC20 tiene la fórmula:

En el contexto de la administración a pacientes para detectar y evaluar tejidos y células que expresan receptores de folato capaces de unirse a folato, se usa “99mTc-EC20” en la presente memoria para indicar la sustancia de fármaco radioactivo, o una sal farmacéuticamente aceptable de la misma. Se aprecia que 99mTc-EC20 puede estar presente en solución o suspensión en una forma ionizada, incluyendo una forma desprotonada. Se usa “EC20” para indicar el reactivo no radioactivo que carece de radionucleido, o una sal farmacéuticamente aceptable de EC20. Se aprecia que EC20 puede estar presente en solución o suspensión en forma ionizada, incluyendo una forma desprotonada.

En aún otra realización, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

o

o

o una sal farmacéuticamente aceptable de cualquiera de estos compuestos.

En otra realización, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

En otra realización del conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula:

En cada una de las realizaciones descritas anteriormente con Rf, se puede preparar un radioforo apropiado usando el isótopo de flúor 18F También se pueden emplear otros isótopos de emisión de positrones útiles, tales como 34Cl, 45Ti, 51Mn, 61Cu, 63Zn, 82Rb, 68Ga, 66Ga, 11C, 13N, 15O y 18F. En una realización ilustrativa, el radioisótopo está seleccionado entre 34Cl, 64Cu, 68Ga, 66Ga o 18F. En un aspecto, Rf es 18F, nitro o -N(CH3)3+.

En otra realización, la parte de ligando de folato del conjugado de agente de formación de imágenes-folato comprende un compuesto de fórmula:

donde:

X es un amino ácido o un derivado del mismo, e

Y es un colorante que tiene un espectro de emisión y excitación de fluorescencia en el intervalo de infrarrojo

próximo, y dicho compuesto mantiene o mejora la fluorescencia de Y.

El amino ácido X puede estar seleccionado entre el grupo que consiste en tirosina, cisteína, lisina, un derivado de tirosina, un derivado de cisteína y un derivado de lisina. En una realización particular, el amino ácido X es tirosina, y en otra realización, el amino ácido X es un derivado de tirosina seleccionado entre el grupo que consiste en:

y mezclas racemicas de los mismos.

En otra realización, el colorante Y puede tener la fórmula:

donde:

X' está seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en O, S, N y C, y

R' está seleccionado independientemente entre el grupo que consiste en CH2 y CH2CH2. En algunas realizaciones, el colorante Y está seleccionado entre el grupo que consiste en LS288, IR800, SP054, S0121, KODAK IRD28, S2076, S0456 y derivados de los mismos.

En otra realización, el conjugado de agente de formación de imágenes tiene la fórmula:

donde W, X, Y, Z son cada uno H, Na+, K+ o NH4+.

El ligando de folato y el agente de formación de imágenes en los conjugados de agente de formación de imágenesfolato pueden estar unidos de cualquier forma químicamente relevante. En una realización, el agente de enlace incluye una cadena de átomos seleccionado entre C, N, O, S, Si y P que une covalentemente el ligando de folato al agente de formación de imágenes. El enlazador puede tener una amplia diversidad de longitudes, tales como dentro del intervalo de aproximadamente 2 a aproximadamente 100 átomos. Los átomos usados en la formación del enlazador se pueden combinar de todas las formas químicamente relevantes, tales como cadenas de átomos de carbono que forman grupos alquileno, alquenileno y alquinileno y similares; cadenas de átomos de carbono y oxígeno que forman éteres, grupos de polioxialquileno, o cuando se combinan con grupos carbonilo formando ésteres y carbonatos, y similares; cadenas de átomos de carbono y nitrógeno que forman aminas, iminas, poliaminas, hidrazinas, hidrazonas o cuando se combinan con grupos carbonilo formando amidas, ureas, semicarbazidas, carbazidas y similares; cadenas de átomos de carbono, nitrógeno y oxígeno que forman alcoxiaminas, alcoxilaminas o cuando se combinan con grupos carbonilo formando uretanos, amino ácidos, aciloxiaminas, ácidos hidroxámicos y similares; y muchos otros. Además, debe entenderse que los átomos que forman la cadena en cada una de las realizaciones ilustrativas anteriores pueden ser bien saturados o bien insaturados, de manera que, por ejemplo, alcanos, alquenos, alquinos, iminas y similares pueden ser radicales que se incluyen en el enlazador. Además, debe entenderse que los átomos que forman el enlazador también se pueden ciclar sobre sí mismo para formar estructuras cíclicas divalentes que forman el enlazador, incluyendo ciclo alcanos, éteres cíclicos, aminas cíclicas, arilenos, heteroarilenos y similares en el enlazador. El enlazador puede ser bivalente. En otra realización, no existe enlazador en el conjugado de agente de formación de imágenes-folato, sino que el ligando de folato y el agente de formación de imágenes se unen de forma directa.

En otras realizaciones de los métodos y usos descritos en la presente memoria, se contemplan sales farmacéuticamente aceptables de los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritas en la presente memoria, para su uso tal y como se reivindica.

Las sales farmacéuticamente aceptables de los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritas en la presente memoria incluyen las sales de adición de base y ácido de los mismos.

Las sales de adición de ácido apropiadas se forman a partir de ácidos que forman sales no tóxicas. Ejemplos ilustrativos incluyen sales de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bisulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edisilato, esilato, formiato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, clorhidrato/cloruro, bromhidrato/bromuro, yodhidrato/yoduro, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfato/hidrógeno fosfato/dihidrógeno fosfato, sacarato, estearato, succinato, tartrato, tosilato y trifluoroacetato. Las sales de base apropiadas de los conjugados descritos en la presente memoria se forman a partir de bases que forman sales no tóxicas. Los ejemplos ilustrativos incluyen la arginina, benzatina, calcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnesio, meglumina, olamina, potasio, sodio, trometamina y sales de cinc. También se pueden formar hemi-sales de ácidos y bases, por ejemplo, sales de hemi-sulfato y hemi-calcio.

En una realización, los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritos en la presente memoria se pueden administrar en forma de una composición en asociación con uno o más vehículos farmacéuticamente aceptables. Los vehículos pueden ser excipientes. La elección del vehículo depende en gran medida de factores tales como el modo particular de administración, el efecto del vehículo sobre la solubilidad y la estabilidad, y la naturaleza de la forma de dosificación. Las composiciones farmacéuticas apropiadas para la administración de los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritos en la presente memoria y los métodos para su preparación resultarán fácilmente evidentes para los expertos en la materia. Dichas composiciones y métodos para su preparación se pueden encontrar, por ejemplo, en Remington: The Science & Practice of Pharmacy, 21a edición (Lippincott Williams & Wilkins, 2005), incorporado por referencia en la presente memoria.

En un aspecto ilustrativo, el vehículo farmacéuticamente aceptable puede incluir cualesquiera disolventes, medios de dispersión, revestimientos, agentes antifúngicos y antibacterianos, agentes isotónicos y de retardo de absorción, y similares, y una combinación de los mismos, que sean fisiológicamente compatibles. En algunas realizaciones, el vehículo resulta apropiado para administración parenteral. Los vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen soluciones acuosas estériles o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones inyectables estériles o dispersiones. Los compuestos activos complementarios también se pueden incorporar a las composiciones para uso en los métodos y usos descritos en la presente memoria. Otros posibles vehículos incluyen, por ejemplo, agua, etanol, polietilen glicol, propilen glicol, metilcelulosa, o un aceite apropiado, y uno o más agentes emulsionantes y/o agentes de suspensión. En otra realización, el vehículo farmacéuticamente aceptable es un vehículo líquido y el vehículo líquido puede estar seleccionado entre el grupo que consiste en disolución salina, glucosa, alcoholes, glicoles, ésteres, amidas y una combinación de los mismos. En otra realización, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato está en una disolución acuosa estéril carente de pirógeno.

En una realización, una suspensión acuosa puede contener los materiales activos mezclados con excipientes apropiados. Dichos excipientes son agentes de suspensión, por ejemplo, carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato de sodio, polivinilpirrolidona, goma de tragacanto y goma arábiga; dispersar o humectar agentes que pueden ser fosfatida de origen natural, por ejemplo, lecitina; un producto de condensación de un óxido de alquileno con un ácido graso, por ejemplo, poli(estearato de oxietileno); un producto de condensación de óxido de etileno con un alcohol alifático de cadena larga, por ejemplo, heptadecaetilenoxicetanol; un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial procedente de ácidos grasos y hexitol tal como monooleato de polioxietilen sorbitol; o un producto de condensación de óxido de etileno con un éster parcial procedente de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitán. Las suspensiones acuosas pueden también contener uno o más conservantes, por ejemplo, ácido ascórbico, etilo, npropilo, o p-hidroxibenzoato; o uno o más agentes colorantes.

Los agentes emulsionantes apropiados pueden ser gomas de origen natural, por ejemplo, goma arábiga o goma de tragacanto; fosfatidas de origen natural, por ejemplo, lecitina de soja; y ésteres incluyendo ésteres parciales procedentes de ácidos grasos y anhídridos de hexitol, por ejemplo, mono-oletato de sorbitán, y productos de condensación de dichos ésteres parciales con óxido de etileno, por ejemplo, monooleato de polioxietilen sorbitán. En otras realizaciones, se pueden incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares, polialcoholes tales como manitol, sorbitol o cloruro sódico en la composición. En otra realización, se pueden usar agentes de mejora de la solubilidad. En un aspecto, se pueden administrar conjugados de agente de formación de imágenes-folato de forma parenteral. Las rutas apropiadas para dicha administración parenteral incluyen administración intravenosa, intraperitoneal, intratecal, epidural, intracerebrovascular, intrauretralo, intrasternal, intracraneal, intramuscular y subcutánea. Los medios apropiados para administración parenteral incluyen inyectores de aguja (incluyendo microagujas), inyectores que no contienen aguja y técnicas de infusión.

En un aspecto ilustrativo, las formulaciones parenterales típicamente son soluciones acuosas que pueden contener vehículos o excipientes tales como sales, hidratos de carbono y agentes tampón (preferentemente a un pH de 3 a 9) pero, para algunas aplicaciones, se pueden formular de manera más apropiada en forma de solución no acuosa estéril o en forma seca, para su uso junto con un vehículo apropiado tal como agua estéril carente de pirógeno (por ejemplo, una solución acuosa).

La preparación de formulaciones parenterales en condiciones estériles se puede lograr fácilmente usando técnicas farmacéuticas convencionales bien conocidas por los expertos en la materia. En una realización, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato puede estar presente en forma de un liofilizado reconstituido.

Se puede usar cualquier régimen eficaz para la administración del conjugado de agente de formación de imágenesfolato. Por ejemplo, se puede administrar el conjugado de agente de formación de imágenes-folato en dosis individuales, o se puede dividir y administrar en forma de régimen de dosis múltiples. La cantidad eficaz a administrar al paciente está basada en la superficie específica corporal, y la masa. Las dosis eficaces pueden variar, por ejemplo, de aproximadamente 1 ng/kg a aproximadamente 1 mg/kg, de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 50o pg/kg, y de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 100 pg/kg. Estas dosis se basan en el peso promedio del paciente de aproximadamente 70 kg, y los kg son kg de peso corporal del paciente (masa). El conjugado de agente de formación de imágenes-folato se puede administrar en una dosis de aproximadamente 1,0 ng/kg a aproximadamente 1000 pg/kg, de aproximadamente 10 ng/kg a aproximadamente 1000 pg/kg, de aproximadamente 50 ng/kg a aproximadamente 1000 pg/kg, de aproximadamente 100 ng/kg a aproximadamente 1000 pg/kg, de aproximadamente 500 ng/kg a aproximadamente 1000 pg/kg, de aproximadamente 1 ng/kg a aproximadamente 500 pg/kg, de aproximadamente 1 ng/kg a aproximadamente 100 pg/kg, de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 50 pg/kg, de aproximadamente 1 pg/kg a aproximadamente 10 pg/kg, de aproximadamente 5 pg/kg a aproximadamente 500 pg/kg, de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 100 pg/kg, de aproximadamente 20 pg/kg a aproximadamente 200 pg/kg, de aproximadamente 10 pg/kg a aproximadamente 500 pg/kg, o de aproximadamente 50 pg/kg a aproximadamente 500 pg/kg. La dosis total se puede administrar en dosis individuales o divididas y, según el criterio del facultativo, puede estar fuera del intervalo típico concreto de la presente memoria. Estas dosificaciones se basan en el peso promedio del paciente de aproximadamente 70 kg y “kg” son kilogramos de peso corporal del paciente.

En otra realización, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se puede administrar en una dosis de aproximadamente 1 pg/m2 a aproximadamente 500 mg/m2, de aproximadamente 1 pg/m2 a aproximadamente 300 mg/m2, o de aproximadamente 100 pg/m2 a aproximadamente 200 mg/m2. En otras realizaciones, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se puede administrar en una dosis de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 500 mg/m2, de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 300 mg/m2, de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 200 mg/m2, de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 100 mg/m2, de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 50 mg/m2, o de aproximadamente 1 mg/m2 a aproximadamente 600 mg/m2. La dosis total se puede administrar en dosis individuales o divididas y puede, a criterio del facultativo, estar fuera del intervalo típico concreto de la presente memoria. Estas dosificaciones se basan en m2 de superficie específica corporal.

Los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritos en la presente memoria pueden contener uno o más centros quirales o, por el contrario, pueden existir como estereoisómeros múltiples. Por consiguiente, se debe comprender que la presente invención incluye estereoisómeros puros, así como también mezclas de estereoisómeros, tales como enantiómeros, diastereoisómeros o mezclas enantiomérica o diastereoméricamente enriquecidas. Los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritos en la presente memoria son capaces de existir como isómeros geométricos. Por consiguiente, debe comprenderse que la presente invención incluye isómeros geométricos puros o mezclas de isómeros geométricos.

Se aprecia que los conjugados de agente de formación de imágenes de folato descritos en la presente memoria pueden existir en formas no solvatadas, así como también en forma solvatadas, incluyendo formas hidratadas. En general, las formas solvatadas son equivalentes a las formas no solvatadas y quedan englobadas dentro del alcance de la presente invención. Los conjugados de agente de formación de imágenes-folato descritos en la presente memoria pueden existir en formas cristalinas o amorfas antes de la reconstitución y administración al paciente. En otra realización, el conjugado de agente de formación de imágenes-folato se proporciona en un recipiente o envase estéril.

En otra realización, los conjugados de agente de formación de imágenes-folato que tienen un agente radioactivo de formación de imágenes, tal como 99mTc-EC20, tienen una pureza radioquímica de al menos aproximadamente un 90 %, o aproximadamente un 95 %, o aproximadamente un 96 %, o aproximadamente un 97 %, o aproximadamente un 98 %, o aproximadamente un 99,5 %. Tal y como se usa en la presente memoria, las determinaciones de pureza pueden estar basadas en el porcentaje en peso, porcentaje en moles y similares.

Además, las determinaciones de pureza para los conjugados de agente de formación de imágenes-folato pueden estar basadas en la ausencia o ausencia sustancial de determinados componentes predeterminados, tales como, sin limitación, ácido fólico, productos de oxidación, componentes de disulfuro que no contienen un ligando de folato y similares. En aquellos casos, las mediciones de pureza, incluyendo el porcentaje en peso y las mediciones de porcentaje en moles, están relacionadas con los componentes de la solución, excluyendo el disolvente. Los conjugados de agente de formación de imágenes-folato pueden tener una pureza de al menos aproximadamente un 90 %, o aproximadamente un 95 %, o aproximadamente un 96 %, o aproximadamente un 97 %, o aproximadamente un 98 %, o aproximadamente un 99 %, o aproximadamente un 99,5 %.

La pureza de los conjugados de agente de formación de imágenes-folato se puede medir usando cualquier técnica convencional, incluyendo diversas técnicas de cromatografía o espectroscópicas, tales como, cromatografía de líquidos de alto rendimiento o alta presión (HPLC), espectroscopía de resonancia magnética nuclear, TLC, espectroscopía de absorbancia UV, espectroscopía de fluorescencia y similares.

Se puede usar cualquier tipo de procedimiento médico de formación de imágenes conocido en la materia para detectar la señal producida por el paciente por medio del conjugado de agente de formación de imágenes-folato. Los ejemplos de procedimientos médicos de formación de imágenes incluyen, aunque sin limitación, el uso de agentes radioactivos de formación de imágenes en procedimientos de formación de imágenes, el uso de agentes fluorescentes de formación de imágenes u otros tipos de colorantes en formación de imágenes médicas, tomografía de emisión de positrones (PET), formación de imágenes por resonancia magnética, tomografía computerizada, formación de imágenes escintigráficas, SPECT, SPECT/CT, formación de imágenes planas, formación de imágenes ópticas, ultrasonidos y similares. Las imágenes se pueden cuantificar por medio de cualquier método conocido en la materia para la cuantificación de imágenes médicas, incluyendo sin limitación, densitometría, formación de imágenes por PET cuantitativa y similares.

En una realización específica para 99mTc-EC20, para el procedimiento de formación de imágenes, se inyecta al paciente 0,5 mg de ácido fólico no marcado, seguido en 1 a 3 minutos de 1 a 2 ml de inyección de 0,1 mg de EC20 marcado con 20 a 25 mCi de 99mTc y se lleva a cabo la formación de imágenes de 1 a 2 horas después. En la presente realización, los métodos de formación de imágenes pueden estar seleccionados entre el grupo que consiste en formación de imágenes planas, SPECT y SPECT/CT.

En cualquier realización descrita en la presente memoria, el ácido fólico no marcado se puede administrar al paciente, y, en dichas realizaciones, el ácido fólico no marcado se puede administrar al paciente antes de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato, o en una hora después de la administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato.

Ejemplo 1

M o d e lo s en an im a le s

Todos los procedimientos con aminales fueron aprobados por el Purdue Animal Care and Use Comittee de acuerdo con las recomendaciones de National Institutes of Health. Los ratones se mantuvieron en un entorno de temperatura y humedad controladas con un ciclo de oscuridad-luz de 12 horas con alimento y agua a demanda.

Ejemplo 2

A rtr it is in d u c id a p o r co lá g e n o

Se inició artritis inducida por colágeno (CIA) usando los métodos establecidos en ratones DBA/1 hembra de 6-7 semanas (Jackson Laboratories) mantenidos con una dieta con deficiencia de folato (Harlan-Tekland). Brevemente, se inmunizaron los ratones en la base de la cola con 100 |jg de colágeno de tipo II bovino emulsionado en adyuvante de Freund completo (Chondrex, Inc., Redmond, WA, EE.UU.). Posteriormente, se reforzaron los ratones 21 días después con una inyección similar de 100 jg de colágeno tipo II bovino emulsionado con adyuvante de Freund incompleto. Trascurridos cuatro días, se sincronizó la aparición de artritis en todos los ratones con una inyección intraperitoneal de 25 jg de lipopolisacárido (LPS) disuelto en disolución salina. Tres días después se distribuyeron los ratones igualmente a través de los grupos de control y tratamiento (n = 5). Los ratones sanos y los ratones de control de enfermedad recibieron inyecciones intraperitoneales de 100 j l de disolución salina. Los ratones sometidos a evaluación de respuesta frente a la terapia recibieron inyecciones intraperitoneales de metotrexato (9 mg/kg, cada 3 días), dexametasona (0,5 mg/kg, al día), etanercept (300 jg, al día) o abatacept (300 jg, al día) o una sonda oral con naproxeno (50 mg/kg, 5 x semana). Se evaluaron las puntuaciones de artritis en días alternos por parte de investigadores con anonimato frente a los distintos grupos de tratamiento, usando el siguiente sistema de puntuación: 0 = normal; 1 = hinchazón y enrojecimiento suave pero definido en tobillo o muñeca, o enrojecimiento evidente e hinchazón limitada a dedos individuales, independientemente del número de dedos afectados; 2 = enrojecimiento moderado e hinchazón de tobillo o muñeca; 3 = enrojecimiento grave e hinchazón de toda la pata incluyendo los dedos; 4 = miembro máximamente inflamado con afección de las articulaciones múltiples. Se calculó una puntuación total para cada ratón sumando las puntuaciones para cada una de las cuatro patas, permitiendo una puntuación máxima de 16 por animal. Se midió el grosor de pata con calibres en días alternos, comenzando el primer día de tratamiento. En el día 3 de tratamiento, se anestesiaron los ratones con isoflurano y se sometieron a formación de imágenes con 99mTc-EC20 como se describe a continuación. Los ratones fueron sometidos de nuevo a formación de imágenes y posteriormente se sacrificaron mediante asfixia con CO2 el día 11 de tratamiento.

Ejemplo 3

C o litis u lce ro sa

Se indujo colitis ulcerosa como se ha descrito previamente en S. Wirtz, C. Neufert, B. Weigmann, M. F. Chemically induced mouse models of intestinal inflammation. ^{Nat. P ro toc.} 2, 541-546 (2007), incorporado por referencia en la presente memoria. Se administró, por medio del agua para beber, sulfato de sodio de dextrano (DSS) al 5 % a ratones Balb/c de siete semanas (Harlan Laboratories) mantenidos con una dieta con deficiencia de folato. Se dividieron los ratones en grupos de tratamiento (n = 10 por grupo). Los ratones sanos y los ratones de control de enfermedad recibieron 100 j l de disolución salina al día por medio de sonda oral. Se trataron diariamente los ratones enfermos con cimetidina (100 mg/kg) o sulfasalazina (150 mg/kg) por medio de sonda oral. Se mantuvieron los ratones sanos con agua normal y, de igual forma, se trataron con disolución salina. Se evaluaron los síntomas de la enfermedad diariamente y se cuantificaron mediante adición de las puntuaciones procedentes de cada uno de los siguientes ensayos: Pérdida de peso: 0 = sin pérdida de peso, 1 = 1-5 % de pérdida de peso, 2 = 6-10 % de pérdida de peso, 3 = 11-15 % de pérdida de peso, 4 = > 15 % de pérdida de peso: Aspecto de heces: 0 = normal, 1 = heces sueltas, 2 = diarrea; Hematocezia (sangre en las deposiciones); 0 = sin sangre, 1 = positiva por medio de papel guaiac, 2 = presencia visual de sangre; Aspecto global: 0 = normal, 1 = piel arrugada/paso alterado, 2 = letárgico, moribundo. El día 4 de la terapia, la mitad de cada grupo de tratamiento (n = 5) recibió una inyección intraperitoneal de 99mTc-EC20. Trascurridas 4 horas, se sacrificó a los ratones inyectados y se retiraron la vejiga y los riñones para reducir la radiación de fondo asociada a 99mTc-EC20 que experimentaba excreción. Posteriormente, se sometió a los ratones a formación de imágenes para evaluar la captación de 99mTc-EC20 en el colon, se retiraron los cólones y se midieron con calibres para evaluar el acortamiento del colon como media de la gravedad de la enfermedad. El día 8, se inyectó 99mTc-EC20 a los ratones restantes y se analizaron de forma similar.

Ejemplo 4

A te ro e s c le ro s is

Se adquirieron ratones ^{A p o E -/-} macho de cinco semanas en Jackson Laboratories y se sometieron a una dieta ajustada en calorías (un 42 % de grasa, Harlan Laboratories). Similarmente, se mantuvieron los ratones de control sanos (C57BL/6) bajo alimentación normal. Se dividieron los ratones en grupos de terapia (n = 5). Los ratones sanos y los ratones de control de enfermedad recibieron 100 j l de disolución salina al día por medio de sonda oral. Se trataron diariamente los ratones enfermos con valsartan (1 mg/kg) o fluvastatina (3 mg/kg) por medio de sonda oral. Después de tres semanas de tratamiento, se sometieron los ratones a formación de imágenes con 300 jC i de 99mTc-EC20. Se sometieron de nuevo los ratones a formación de imágenes con 99mTc-EC20 tras 12 semanas de terapia y posteriormente se sacrificaron por medio de asfixia con CO2. Se diseccionaron las aortas y se llevó a cabo tinción H&E y con rojo O aceite.

Ejemplo 5

F ib ro s is p u lm o n a r

Se indujo fibrosis pulmonar en ratones como se ha descrito previamente en B.B. Moore, C. M. Hogaboam, Murine models of pulmonary fibrosis. ^{A m J P h y s io l L u n g C e ll M o l P hys io l.} 294, L152-160 (2008), incorporado por referencia en la presente memoria. Brevemente, se anestesiaron ratones C57BL/6 hembra de 6 semanas (Harlan Laboratories) mantenidos en bajo una dieta deficiente en folato con isoflurano, y se sometieron a instilación intratecal de 50 |jl de bleomicina (2 U/kg de peso corporal) disuelto en disolución salina en cada ratón. Los ratones de control se sometieron similarmente a instilación intratecal con 50 j l de disolución salina. Posteriormente, se separaron los ratones en grupos de tratamiento (n = 5). Los ratones de control de enfermedad y los ratones sanos recibieron inyecciones intraperitoneales diarias de 100 j l de disolución salina. Se inyectó dexametasona (0,5 mg/kg) o etanercept (300 jg ) por vía intraperitoneal a los ratones enfermos cada día. Se sometieron los ratones a formación de imágenes con 99mTc-EC20 después de 6 días de tratamiento y de nuevo después de 15 días de tratamiento. A continuación, se sacrificaron los ratones por medio de asfixia con CO2 y se recogió el fluido de lavado broncoalveolar y se contaron las células usando un Contador de Partículas y Células Beckman Coluter ZTM Series COULTER COUNTER®. Se fijó el pulmón izquierdo en formalina y se remitió a Purdue Histology & Phenotyping Laboratory para tinción de H&E y se usó el pulmón derecho para el análisis del contenido de hidroxiprolina usando un estuche de ensayo de hidroxiprolina de Sigma-Aldrich (San Louis, MO).

Ejemplo 6

P re p a ra c ió n de 99mT c-E C 20 y fo rm a c ió n de im á g e n e s de s itio s de a cu m u lac ió n de m a c ró fa g o s en ra to n e s in fla m a d o s

Se preparó 99mTc-EC20 como se ha descrito previamente en C. P. Leamon, M. A. Parker, I. R. Vlahov, L. Xu, J. A. Reddy, M. Vetzel, N. Douglas, Synthesis and Biological Evaluation of EC20: A New Folate-Deriveed, 99mTc-Based Radiopharmaceutical. ^{B io co n ju g a te C hem .} 13, 1200-1210 (2002), incorporado por referencia en la presente memoria. También se describe un método para 99mTc-EC20 en la patente de Estados Unidos N°. 7.128.893, incorporada por referencia en la presente memoria. Brevemente, se añadió 1 ml de pertecnato de sodio 15 mCi/ml (Cardinal Health) a 0,1 mg de EC20 (un regalo de Endocyte, Inc.) y se calentó a 100 °C durante 18 minutos. Tras diluir con disolución salina, se inyectaron 100 j l de 99mTc-EC20 (150 jC i (~ 75 nmoles de EC20 por kilogramo para ratones CIA, colitis ulcerosa y fibrosis pulmonar) o 300 jC i (~ 150 nmoles de EC20 por kilogramo para ateroesclerosis)), por vía intraperitoneal en los ratones deseados, y se permitió la eliminación de 99mTc-EC20 no ligado de los tejidos durante 4 horas. Posteriormente, se anestesiaron los ratones con 3 % de isoflurano (ratones CIA, ateroesclerosis y fibrosis pulmonar) o se sacrificaron (ratones con colitis ulcerosa) antes de la adquisición de imágenes usando una Kodak Image Station operada con un soporte lógico de formación de imágenes moleculares Kodak (versión 4,5; Carestream Molecular Imaging). Se adquirieron radioimágenes durante 2 minutos usando un monitor de fósforo radioisotópico, sin fuente de iluminación, almacenamiento 4 x 4, plano focal = 5, FOV = 160 y parada-f = 0. Se adquirieron imágenes claras durante 0,175 segundos con una fuente de transiluminación de luz blanca, sin almacenamiento, plano focal = 5, FOV = 160, y parada-f = 11.

Ejemplo 7

La F o rm a c ió n de im á g e n e s 99mT c-E C 20 p re d ice la re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en un m o d e lo de ra tó n de a rtritis re u m a to id e

Se indujo el desarrollo de artritis inducida por colágeno en ratones (CIA; un modelo bien establecido de artritis reumatoide) y se sometieron 28 días después a tratamiento con metotrexato, dexametasona o disolución salina (control de enfermedad). Tres días después del inicio de la terapia, se inyectaron 150 jC i de 99mTc-EC20 a los ratones y se sometieron a su primer análisis de radioimágenes planificado. Como se puede apreciar en la Figura 1A, los ratones donde se indujo CIA pero no tratados con ningún fármaco antiinflamatorio exhibieron la acumulación de 99mTc-EC20 en sus apéndices inflamados, lo que confirmó la implicación de los macrófagos activados positivos de receptor de folato en la enfermedad autoinmunitaria. Los ratones inflamados inyectados bien con metotrexato o bien con dexametasona mostraron marcadamente menos 99mTc-EC20 en los apéndices afectados, a pesar de no revelar reducción de los síntomas de enfermedad (puntuación de artritis, hinchamiento de patas) en este momento preliminar (Figura 1B & C). Además, trascurridos 11 días de terapia continua, cuando los ratones tratados finalmente respondieron a sus respectivas terapias y se hubo solucionado sustancialmente la inflamación articular (Figura 1B &C), las imágenes de los mismos ratones (Figura 7) confirmaron la captación significativamente reducida de 99mTc-EC20 en los ratones tratados con respecto a los ratones de control. Estos datos muestran que se puede usar la captación de 99mTc-EC20 en las articulaciones inflamadas de ratones CIA poco después del inicio de la terapia para predecir una posible respuesta de los ratones tanto a metotrexato como a dexametasona.

Para explorar si la capacidad de 99mTc-EC20 para predecir la respuesta a metotrexato y dexametasona podría también extenderse a las terapias biológicas, se repitió el estudio anterior, únicamente se sustituyeron metotrexato y dexametasona por etanercept y abatacept. Como se puede apreciar en la Figura 2A, los ratones tratados con las sustancias biológicas anteriormente mencionadas también mostraron una captación significativamente menor de 99mTc-EC20 en el día 3 de la terapia que en el caso de los ratones del grupo de control de enfermedad, incluso aunque se hubiera diferencias significativas en los síntomas clínicos de nuevo medibles en este momento preliminar (Figura 2 B&C). Además, el análisis de los síntomas de enfermedad en el día 11 de la terapia reveló que los ratones tratados no respondieron posiblemente a etanercept y abatacept con una inflamación significativamente reducida. Las radioimágenes de los ratones en el día 11 (Figura 8) demostraron una biodistribución de 99mTc-EC20 similar a las radioimágenes en el día 3. Estos datos muestran que las imágenes adquiridas con 99mTc-EC20 de forma temprana durante el transcurso de la terapia también pueden predecir la respuesta de ratones CIA a la terapia biológica.

Con el fin de evaluar si la formación de imágenes de 99mTc-EC20 podría también resultar útil para la identificación de los pacientes que posiblemente fallen a la hora de responder a una terapia particular, se trataron los ratones CIA con naproxeno, un fármaco antiinflamatorio (NSAID) usado para tratar artritis reumatoide en humanos, pero se encontró previamente que tenía menos eficacia en el modelo CIA de artritis en ratones. De manera importante, las imágenes de 99mTc-EC20 en el día 3 de la terapia no revelaron diferencia significativa en la captación entre los grupos tratados con naproxeno y los de control de enfermedad, lo que muestra que los ratones que son incapaces de responder a la terapia también fallan a la hora de mostrar una disminución de la acumulación de 99mTc-EC20 (Figura 3A). Después de 11 días de terapia con naproxeno, todavía no hubo diferencia significativa en las puntuaciones de artritis o grosor de pata entre los ratones tratados y los de control de enfermedad (Figura 3B & C). Estos datos muestran que las imágenes de 99mTc-EC20 adquiridas antes de que aparezcan los cambios en los síntomas de la enfermedad pueden identificar de forma precisa ratones que posiblemente fallen en cuanto a respuesta a la terapia.

Ejemplo 8

La F o rm a c ió n de im á g e n e s 99mT c -E C 20 p re d ic e la re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en un m o d e lo de ra tó n de co lit is u lce ro sa Se administró sulfato de dextrano sódico (DSS) al 5 % en agua a ratones (n=10/grupo) para inducir colitis ulcerosa y posteriormente se trató diariamente con cimetidina, sulfasalazina o disolución salina (control de enfermedad). Posteriormente, en el día 4, se inyectaron 150 pCi de 99mTc-EC20 a la mitad de los ratones (n= 5/grupo) y se sacrificaron en la preparación para la formación de imágenes posterior de sus cólones. Como se aprecia en la Figura 4A, los ratones tratados con cimetidina y sulfasalazina mostraron una captación de 99mTc-EC20 significativamente menor que los ratones tratados con disolución salina, aunque no hubo diferencia significativa en sus puntuaciones clínicas o longitudes de colon en este momento preliminar (Figura 4B & C). De manera más importante, trascurridos 8 días de terapia continua, se encontró que los ratones tratados tenían puntuaciones clínicas significativamente menores y un menor acortamiento de colon, en comparación con los ratones de control de enfermedad (Figura 4B &C). Y como antes, las radioimágenes permanecieron esencialmente sin cambios con respecto a las recogidas en el momento preliminar (Figura 9). Tomadas de manera conjunta, estos datos muestran que la formación de imágenes con 99mTc-EC20 poco después del inicio de la terapia puede predecir la respuesta al tratamiento en un modelo de ratón de colitis ulcerosa.

Ejemplo 9

La F o rm a c ió n de im á g e n e s 99mT c -E C 20 p re d ic e la re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en un m o d e lo de ra tó n de a te ro e sc le ro s is La capacidad para predecir la respuesta a terapia podría ser la más útil cuando se aplica al tratamiento de enfermedades inflamatorias/autoinmunitarias que bien sean intrínsecamente difíciles de controlar o bien cuya respuesta a la intervención terapéutica resulte lenta. Debido a que ateroesclerosis sufre ambas desventajas debido a su ubicación inaccesible en lenta tasa de evolución, se analizó99mTc-EC20 para determinar si podría resultar eficaz para predecir la respuesta a la terapia en un modelo común de ratón de enfermedad cardíaca. A tal fin, se alimentaron ratones ApoE-/- de cinco semanas con una dieta de alto contenido en grasas y se trataron diariamente con valsartan o fluvastatina, mostrando ambos una formación de placas reducida en modelos de ratón de ateroesclerosis. Trascurridas 3 semanas de tratamiento diario, cuando no se pudieron detectar síntomas morfológicos de enfermedad cardíaca, se anestesiaron los ratones y se sometieron a formación de imágenes con 99mTc-EC20. Como se aprecia en la Figura 5A, los ratones ApoE-/-m tratados bien con valsartan o bien con fluvastatina mostraron una captación de 99mTc-EC20 significativamente menor en sus cavidades torácicas que los ratones tratados con disolución salina. Además, tras 12 semanas de terapia diaria, los grupos tratados con valsartan y fluvastatina mostraron un engrosamiento de pared aórtica significativamente menor que las contrapartes tratadas con disolución salina (Figura 5B). Las radioimágenes en la semana 12 revelaron un patrón de captación similar para las imágenes obtenidas en la semana 3 (Figura 10). Estos datos muestran que la formación de imágenes con 99mTc-EC20 poco después del inicio de la terapia también predice la respuesta al tratamiento en modelos de ratón de ateroesclerosis.

Ejemplo 10

La F o rm a c ió n de im á g e n e s 99mT c-E C 20 p re d ice la re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en un m o d e lo de ra tó n de fib ro s is p u lm o n a r

Debido a que los macrófagos activados positivos de receptor de folato que se acumulan en modelos de ratón de artritis reumatoide y colitis ulcerosa consisten principalmente en macrófagos activados de forma clásica (M1), se analizó la formación de imágenes de 99mTc-EC20 para determinar si podría también proporcionar información útil para predecir la respuesta a terapia en enfermedad autoinmunitaria con mediación principal de macrófagos activados de forma alternativa (M2). Debido a que se piensa que la fibrosis pulmonar está accionada principalmente por macrófagos M2, se indujo el desarrollo de una forma aguda de fibrosis pulmonar en ratones C57BL/6 por medio de instilación intratecal de bleomicina. Inmediatamente después de la inducción de la enfermedad, se trataron los ratones diariamente con inyecciones intraperitoneales de dexametasona, etanercept, o disolución salina, y posteriormente se sometieron a formación de imágenes con 99mTc-EC20 seis días después. Como se muestra en la Figura 6A, los ratones tratados con dexametasona y etanercept mostraron una acumulación de 99mTc-EC20 menor en comparación con los controles de enfermedad tratados con disolución salina. Además, en el día 15 de tratamiento, cuando se sometieron de nuevo los ratones a formación de imágenes de 99mTc-EC20 (Figura 11), los ratones tratados con dexametasona y etanercept exhibieron menos cuentas celulares totales en sus fluidos de lavado broncoalveolar, así como también menores contenidos de hidroxiprolina en sus tejidos pulmonares sometidos a resección, en comparación con los controles tratados con disolución salina (Figura 6B & C). El análisis H&E de los pulmones confirmó la menor fibrosis de los ratones tratados con dexametasona o etanercept (Figura 6D). Tomados de forma conjunta, estos resultados indican que la formación de imágenes de 99mTc-EC20 puede predecir de forma satisfactoria la respuesta al tratamiento en una enfermedad inflamatoria mediada por macrófagos activados de forma alternativa, tal como la fibrosis pulmonar.

Ejemplo 11

R a to n e s tra ta d o s q u e tien en m e n o r a cu m u la c ió n de m a c ró fa g o s en un m o d e lo de ra tó n de co lit is u lce ro sa

Se indujo colitis ulcerosa como se ha descrito. Se administró sulfato de dextrano sódico al 5 % (DSS) en el agua usada para beber a ratones Balb/c de siete semanas mantenidos en una dieta con deficiencia de folato. Se mantuvieron los ratones de control sanos con agua normal. Se dividieron los ratones en grupos de tratamiento (n = 3 por grupo). Los ratones sanos y los ratones de control de enfermedad recibieron 100 pl de disolución salina al día por medio de sonda oral. Se trataron diariamente los ratones enfermos con cimetidina (100 mg/kg) o sulfasalazina (150 mg/kg) por medio de sonda oral. Trascurridos 4 días de tratamiento, se sacrificaron los ratones y se retiró el intestino delgado. Se sometieron a digestión ocho pesos iguales de intestino delgado y se formaron suspensiones celulares individuales. Se añadió a las células marcador de macrófago F480-PE y se analizó por medio de citrometría de flujo. Se encontró que los ratones tratados presentaron una menor acumulación de macrófagos en comparación con el grupo de control de enfermedad (Figura 12).

Ejemplo 12

M é to d o de p re p a ra c ió n d e l co m p u e s to

Preparación de Pte-L-Try-S0456 (el compuesto final que se muestra anteriormente). Se combinó Resina Fmoc-Tyr(‘Bu)-Wang con una mezcla de piperidina, diclorometano (DCM) y dimetilformamida (DMF) en un recipiente de síntesis de péptido en fase sólida. Se añadió a la mezcla una disolución de ácido hexafluorofosfato de N10-(trifluoroacetil)pteroico, (2-(7-aza-1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio) (HATU), base de Hunig (di-isopropiletilamina) y dimetilformamida (DMF). Se lavó la resina alternativamente con dimetilformamida (DMF) y alcohol isopropílico (IPA) y (DCM). Se secó el producto de resina bajo argón. Se escindió el compuesto de TFA-Pte-L-Tyr de la resina con TFA:H2O:TIPS (95:2,5:2,5). Se secó el producto escindido en condiciones de vacío. Se suspendió el sólido resultante de TFA-Pte-L-Tyr en agua con colorante fluorescente S0456 (CAS 162093-39-2). Se trató la mezcla con hidróxido de sodio acuoso (NaOH) y se calentó hasta 100 °C durante 30 minutos. Tras enfriar la mezcla a temperatura ambiente, se añadió acetona con agitación para precipitar el Pte-L-Tyr-S0456. Se lavó el sólido con acetona seguido de secado en condiciones de vacío. La purificación posterior del producto sólido se pudo lograr por medio de disolución del sólido en agua, filtración de la disolución, y dilución con i-PrOH. Se recogió el sólido precipitado por medio de filtración, se lavó secuencialmente con i-PrOH y acetona, y se secó en condiciones de vacío.

Ejemplo 13

P re d icc ió n de la re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en ra to n e s con artritis

Se inició artritis inducida por colágeno (CIA) como se ha descrito anteriormente. Se trataron los ratones con etanercept y dexametasona. El día 3, se proporción a los ratones una inyección intraperitoneal (i.p.) de 10 nmoles de colorante OTL-38. Trascurridas 4 horas, se anestesiaron los ratones con isoflurano y se sometieron a formación de imágenes en el IVIS Lumina. El día 11, se proporcionó a los ratones una inyección i.p. de 10 nmoles de colorante OTL-38. Trascurridas 4 horas, se sacrificaron los ratones y se sometieron a formación de imágenes en el IVIS Lumina. Los resultados se muestran en las Figuras 13-19.

Ejemplo 14

P re d icc ió n de re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en ra to n e s con co litis u lce ro sa

Se indujo colitis ulcerosa en ratones como se ha descrito anteriormente. El día 4, se proporcionó a los ratones una inyección intravenosa (i.v.) de 10 nmoles de colorante OTL-38. Se sacrificaron los ratones después de 2 horas. Se vació la vejiga y se retiraron los riñones. El día 10, se proporcionó a los ratones una inyección i.v. de 10 nmoles de colorante OTL. Se sacrificaron los ratones después de 2 horas. Se vació la vejiga y se retiraron los riñones. Los resultados se muestran en las Figuras 20-27.

Ejemplo 15

P re d icc ió n de re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en ra to n e s con a te ro esc le ros is

Se inició ateroesclerosis como se ha descrito anteriormente. Los ratones se trataron con valsarían o fluvastatina. El día 21, se proporcionó a los ratones una inyección intraperitoneal (i.p.) de 10 nmoles de colorante OTL-38. Trascurridas 4 horas, se anestesiaron los ratones con isoflurano y se sometieron a formación de imágenes. Los resultados se muestran en la Figura 28.

Ejemplo 16

P re d icc ió n de re s p u e s ta a l tra ta m ie n to en ra to n e s con fib ro s is p u lm o n a r

Se inició fibrosis pulmonar como se ha descrito anteriormente. Los ratones se trataron con etanercept o dexametasona. El día 6, se proporcionó a los ratones una inyección intraperitoneal (i.p.) de 10 nmoles de colorante OTL-38. Trascurridas 4 horas, se anestesiaron los ratones con isoflurano y se sometieron a formación de imágenes. Los resultados se muestran en la Figura 29.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso en un método para seleccionar un paciente para terapia con fármaco antiinflamatorio, comprendiendo el uso la etapa de administración al paciente de un conjugado de agente de formación de imágenes-folato, y usar dicho conjugado de agente de formación de imágenes-folato para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio, y donde la enfermedad inflamatoria del paciente está seleccionada entre el grupo que consiste en artritis, osteoartritis, artritis reumatoide, ateroesclerosis, soriasis, isquemia/lesión por reperfusión, fibrosis pulmonar, rechazo al trasplante de órganos, colitis ulcerosa, traumatismo por impacto, osteomielitis, esclerosis múltiple, escleroderma, enfermedad de Crohn, síndrome de Sjogren, glomerulonefritis, esclerosis sistémica, sarcoidosis y lesión inflamatoria.

2. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato produce una señal detectable en el paciente, donde la señal se detecta, y donde la detección de la señal se usa para predecir la respuesta del paciente al fármaco antiinflamatorio.

3. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 2, donde la señal es:

(a) una señal radioactiva;

(b) producida por un cromóforo; o

(c) producida como resultado de la unión del conjugado de agente de formación de imágenes-folato con macrófagos activados.

4. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 3(b) donde el cromóforo es un fluoróforo, preferentemente seleccionado entre el grupo que consiste en una fluoresceína, una rodamina, una ficoeritrina, un colorante fluorescente de longitud de onda larga y una cianina.

5. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde la etapa de administración comprende una primera etapa de administración y una segunda etapa de administración.

6. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 5, donde la primera y segunda etapas de administración producen una primera señal y una segunda señal, respectivamente.

7. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde la primera y la segunda señal se cuantifican.

8. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde la primera señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato (a) antes de la administración del fármaco antiinflamatorio; o

(b) el mismo día de inicio de tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

9. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde la segunda señal se obtiene por medio de administración del conjugado de agente de formación de imágenes-folato (a) después de la administración del fármaco antiinflamatorio;

(b) dentro de aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio (c) dentro de aproximadamente 1 semana, aproximadamente 2 semanas, aproximadamente 3 semanas o aproximadamente 4 semanas después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio;

(d) en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antinflamatorio;

(e) en uno cualquiera de los días dentro de aproximadamente 12 semanas después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio; o

(f) aproximadamente 2, aproximadamente 3, aproximadamente 4, aproximadamente 5, aproximadamente 6, aproximadamente 12, aproximadamente 15 o aproximadamente 21 días después de comenzar la administración del fármaco antiinflamatorio.

10. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde la segunda señal se reduce en aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 50 %, aproximadamente un 60 %, aproximadamente un 70 %, aproximadamente un 80 %, aproximadamente un 90 % o aproximadamente un 100 %, en comparación con la primera señal, y donde la reducción indica que el paciente debería continuar con el tratamiento con el fármaco antiinflamatorio.

11. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 6, donde el conjugado de agente de formación de imágenes-folato tiene la fórmula

donde M es un radionucleido.

12. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 11, donde el radionucleido está seleccionado entre el grupo que consiste en un isótopo de galio, un isótopo de indio, un isótopo de cobre, un isótopo de tecnecio y un isótopo de renio.

13. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 12, donde el tecnecio es 99m-tecnecio.

14. El conjugado de agente de formación de imágenes-folato para su uso de acuerdo con la reivindicación 1, donde el conjugado de agente de formación de imágenes de folato es 99mTc-EC20.