ES2638520T3 - Derivados anticancerosos, preparación de los mismos y uso terapéutico de los mismos - Google Patents
Derivados anticancerosos, preparación de los mismos y uso terapéutico de los mismos Download PDFInfo
- Publication number
- ES2638520T3 ES2638520T3 ES11749535.8T ES11749535T ES2638520T3 ES 2638520 T3 ES2638520 T3 ES 2638520T3 ES 11749535 T ES11749535 T ES 11749535T ES 2638520 T3 ES2638520 T3 ES 2638520T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- group
- ethoxy
- alk
- formula
- ethyl
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
- A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
- A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
- A61K31/551—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole having two nitrogen atoms, e.g. dilazep
- A61K31/5513—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine
- A61K31/5517—1,4-Benzodiazepines, e.g. diazepam or clozapine condensed with five-membered rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. imidazobenzodiazepines, triazolam
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
- C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
- C07D207/18—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
- C07D207/20—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D243/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- C07D243/06—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4
- C07D243/10—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having two nitrogen atoms as the only ring hetero atoms having the nitrogen atoms in positions 1 and 4 condensed with carbocyclic rings or ring systems
- C07D243/14—1,4-Benzodiazepines; Hydrogenated 1,4-benzodiazepines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Compuesto de fórmula (I):**Fórmula** en el que: - ---- representa un enlace sencillo o un doble enlace, con la condición de que si ---- representa un enlace sencillo, entonces: - U y/o U', que pueden ser idénticos o diferentes, representan, independientemente entre sí, H; - W y/o W', que pueden ser idénticos o diferentes, representan, independientemente entre sí: OH, -OR, -OCOR, -COOR, -OCOOR, -OCONRR', un carbamato cíclico tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NRCONRR', -OCSNHR, un tiocarbamato cíclico tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3 -, -NRSOOR', -NRR', una amina cíclica tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un grupo trialquilfosfonio o triarilfosfonio; si ---- representa un doble enlace, entonces: - U y U' están ausentes; - W y/o W', que pueden ser idénticos o diferentes, representan, independientemente entre sí, H; - R1, R2, R1', R2', que pueden ser idénticos o diferentes, representan, independientemente entre sí: H, Hal o un grupo alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo, S(O)qR con q >= 0, 1 o 2; o alternativamente - R1 y R2 y/o R1' y R2' forman juntos, respectivamente, un doble enlace >=CH2 o >=CH-CH3; -Y e Y', que pueden ser idénticos o diferentes, representan, independientemente entre sí, H o -OR; - M representa N; - ALK y ALK' son idénticos e indican un grupo CH2; - R y R' representan, independientemente entre sí, H o un grupo alquilo (C1-C6) o arilo opcionalmente sustituido con uno o más sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo; - L1 representa: - el grupo -D-ALK(C1-C6)- ligado al anillo de piridilo a través de D, en el que D representa -O-; - L2 representa: - un grupo -ALK(C1-C6)-; - Q representa un enlace sencillo o el grupo C(>=O); - k representa un número entero que varía de 1 a 5; - G representa un grupo -OMe o un grupo morfolino; - RCG1 representa el grupo -SZa o -C(>=O)-ZbRb; - Za representa SRa; - Ra representa H o un grupo alquilo (C1-C6);**Fórmula** - COZbRb representa -COOH, -COO-alquilo(C1-C6), o
Description
DESCRIPCION
Derivados anticancerosos, preparation de los mismos y uso terapeutico de los mismos
La presente invention se refiere a conjugados de d^eros de pirrolo[1,4]benzodiazepina (PBD), a composiciones 5 que los contienen y a su uso terapeutico, especialmente como agentes anticancerosos. La invencion tambien se refiere al procedimiento para preparar los conjugados y a su uso como agentes anticancerosos y tambien a los propios dimeros.
Campo tecnico
Los d^eros de pirrolo[1,4]benzodiazepina son agentes anticancerosos que actuan al unirse covalentemente a ADN 10 celular. Estos derivados se han descrito en las solicitudes de patente WO 00/12508 y WO 2005/085260 y tambien en las siguientes publicaciones: Eur. J. Med. Chem, 2005, 40, 641-654; Tetrahedron Letters 1988, 29(40), 5105-5108.
La qmmica de los conjugados se conoce desde hace muchos anos y se ha aplicado a varias familias de agentes citotoxicos, a modo de ejemplo maitansinoides (documento WO 04103272), taxanos (documento WO 06061258), 15 leptomicinas (documento WO 07144709), CC-1065 y analogos del mismo (documento WO 2007102069); con respecto a los conjugados, veanse ademas Monneret C. y cols., Bulletin du Cancer 2000, 87(11), 829-38; Ricart A.D. y cols., Nature Clinical Practice Oncology 2007, 4, 245-255; Singh R. y Rickson H.K., Therapeutic Antibodies: Methods and Protocols, 2009, 525, 445-467.
Tecnica anterior
20 Los conjugados de dimeros de pirrolo[1,4]benzodiazepina se han descrito en las solicitudes de patente WO 07085930 y WO 2009/016516. Los dimeros usados tienen las formulas:
25 en las que T puede representar un grupo arilo o heteroarilo sustituido con -G-D-(Z)p-SZa o -G-D-(Z)p-C(=O)ZbRb. G representa un enlace sencillo o doble o alternativamente -O-, -S- o -NR-. D representa un enlace sencillo o uno de los siguientes grupos: -E-, -E-NR-, -E-NR-F-, -E-O-, -E-OF-, -E-NR-CO-, -E-NR-CO-F-, -E-CO-, -CO-E-, -E-CO-F, -E- S-, -E-S-F-, -E-NR-C-S-, -E-NR-CS-F- para los que E y F se eligen de -(OCH2CH2)ialquil(OCH2CH2)j-, -
alquil(OCH2CH2)i-alquilo, -(OCH2CH2)i, -(OCH2CH2)icicloalquil(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)iheterociclil-(OCH2CH2)j-, -
30 (OCH2CH2)iaril(OCH2CH2)j-, -(OCH2CH2)iheteroaril(OCH2CH2)j-, -alquil-(OCH2CH2)ialquil(OCH2CH2)j-, -alquil-
(OCH2CH2V, -alquil-(OCH2CH2)icicloalquil-(OCH2CH2)j-, -alquil(OCH2CH2)iheterociclil(OCH2CH2)j-, -alquil-
(0CH2CH2)iaril-(0CH2cH2)j-, -alquil(OCH2CH2)iheteroaril(OCH2CH2)j-, -cicloalquil-alquil-, -alquilcicloalquil-,
-heterociclil-alquil-, -alquil-heterociclil-, -alquil-aril-, -aril-alquil-, -alquil-heteroaril-, -heteroaril-alquil-. i y j representan numeros enteros que varian de 0 a 2.000. Z representa un grupo alquilo y p es un numero entero igual a 0 o 1. En 35 estos compuestos, la R del grupo NR no comprende una cadena de PEG.
Immunogen describio en noviembre de 2009 en the EORTC Congress (Extracto B-126) el siguiente conjugado:
que se distingue por la naturaleza del enlazador y del compuesto citotoxico. Este compuesto se describio de nuevo en the Sixth Annual PEGS Congress en Boston que tuvo lugar del 17 al 21 de mayo de 2010, y tambien los siguientes precursores:
5
10
15
20
25
30
con R = N-succinimidilo o metilo.
Los siguientes dimeros se describen especialmente, respectivamente, en los documentos WO 07085930 y WO 2009/016516:
(Ej. 28)
(Ej. 5)
Estas tres solicitudes no describen o sugieren los nuevos enlazadores de la invention, que comprenden uno o dos cadenas pegiladas.
Problema tecnico
El problema tecnico que pretende resolver la presente invencion es el de proponer nuevos conjugados de dimeros de pirrolo[1,4]benzodiazepina.
Definiciones
Se aplican las siguientes definiciones:
• conjugado: un agente de union a celulas al que esta ligada covalentemente al menos una molecula de un compuesto citotoxico;
• agente de union a celulas: una molecula que tiene afinidad por una diana biologica: puede ser, por ejemplo, un ligando, una protema, un anticuerpo, mas particularmente un anticuerpo monoclonal, un fragmento de protema o anticuerpo, un peptido, un oligonucleotido o un oligosacarido. El agente de union tiene la funcion de dirigir al compuesto biologicamente activo como un agente citotoxico al agente biologico;
• diana biologica: un antigeno (o grupo de antigenos) situado preferentemente en la superficie de celulas cancerosas o celulas estromaticas asociadas con este tumor; siendo posiblemente estos antigenos, por ejemplo, un receptor de factor de crecimiento, un producto genico u oncogenico "supresor tumoral" mutado, una molecula relacionada con la angiogenesis, una molecula de adhesion;
• enlazador: un grupo de atomos para ligar covalentemente un compuesto citotoxico al agente de union;
• grupo alquilo: un grupo basado en hidrocarburo alifatico saturado obtenido al retirar un atomo de hidrogeno de un alcano. El grupo alquilo puede ser lineal o ramificado. Ejemplos que se pueden mencionar incluyen metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, terc-butilo, pentilo, 2,2-dimetilpropilo, hexilo;
• grupo cicloalquilo: un grupo alquilo ticlico que comprende entre 3 y 8 atomos de carbono acoplados en la estructura anular. Ejemplos que se pueden mencionar incluyen grupos ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo;
5
10
15
20
25
30
35
40
• grupo arilo: un grupo aromatico monodclico o bidclico que no contiene heteroatomos. Particularmente, es un grupo fenilo o naftilo;
• grupo heteroarilo: un grupo aromatico monodclico o bidclico que comprende al menos un heteroatomo (O, S, N) acoplado en el anillo y conectado a los atomos de carbono que forman el anillo. Mas particularmente, es un grupo piridilo, pirrolilo, tienilo, furilo, pirimidinilo otriazolilo;
• grupo heterocicloalquilo: un grupo cicloalquilo que comprende al menos un heteroatomo (O, S, N) acoplado en el anillo y conectado a los atomos de carbono que forman el anillo. Mas particularmente, es un grupo piperacino, N- metilpiperacino, morfolino, piperidino o pirrolidino;
• grupo alcoxi: un grupo -O-alquilo, en el que el grupo alquilo es como se define anteriormente;
• grupo alcanoiloxi: un grupo -O-CO-alquilo, en el que el grupo alquilo es como se define anteriormente;
• grupo alquileno: un grupo divalente saturado de formula empmca -CmH2m-, obtenido al retirar dos atomos de hidrogeno de un alcano. Ejemplos que se pueden mencionar incluyen grupos metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-),
Mb... .,Me
propileno (-CH2CH2CH2-), butileno (-CH2CH2CH2CH2-), isobutileno (~K ) y hexileno (-CH2CH2CH2CH2CH2CH2-).
El grupo alquileno puede ser mas particularmente de formula -(CH2)m-, representado m un numero entero;
• en los intervalos de valores, estan incluidos los lfmites (p. ej. un intervalo del tipo "i que vana de 1 a 6" incluye los lfmites 1 y 6. Por otra parte, el intervalo tambien describe todos los puntos del intervalo; asf, "i que vana de 1 a 6" describe los valores 1, 2, 3, 4, 5 y 6.
Abreviaturas usadas
EtOAc: acetato de etilo; ALK: grupo alquileno; ALK (Cx-Cy): grupo alquileno (Cx-Cy); TLC: cromatograffa en capa fina; MSC: cloruro de metanosulfonilo; DBU: 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno; DCC: N,N'-diciclohexilcarbodiimida; DCM: diclorometano; DEAD: azodicarboxilato de dietilo; DIC: N,N'-diisopropilcarbodiimida; DIPEA: N,N- diisopropiletilamina; DMA: dimetilacetamida; DMAP: 4-dimetilaminopiridina; DME: dimetoxietano; DMF: dimetilformamida; DMSO: dimetilsulfoxido; ewL nm: coeficiente de extincion molar a la longitud de onda WL; EEDQ: 2- etoxi-1-etoxicarbonil-1,2-dihidroquinolina; EDCI: N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida; EDTA: acido etilendiaminotetraacetico; Fmoc: fluorenilmetoxicarbonilo; Hal: atomo de halogeno; HOBt: 1-hidroxibenzotriazol; HEPES: acido 4-(2-hidroxietil)-1-piperacinoetanosulfonico; WL: longitud de onda; Me: metilo; NHS: N- hidroxisuccinimida; NMP: N-metilpirrolidinona; RP: presion reducida; Rf: factor de retencion; SEC: cromatograffa de exclusion esterica; TA: temperatura ambiente; TBDMS: ferc-butildimetilsililo; TEA: trietilamina; TFA: acido trifluoroacetico; TIPS: triisopropilsililo; THF: tetrahidrofurano; tR: tiempo de retencion.
Figuras
Figura 1: modificacion del agente de union mediante SPDP;
Figura 2: modificacion del agente de union mediante un iminotiolano;
Figura 3: espectro de masas de alta resolucion deconvolucionado del conjugado del Ej. 8 despues de la desglicosilacion;
Figura 4: espectro de masas de alta resolucion (HRMS) deconvolucionado del conjugado no desglicosilado del Ej. 9;
Figura 5: espectro de masas de alta resolucion (HRMS) deconvolucionado del conjugado no desglicosilado del Ej. 10;
Figura 6: espectro de masas de alta resolucion (HRMS) deconvolucionado del conjugado no desglicosilado del Ej.
11.
Estas figuras muestra para cada conjugado la distribucion de las especies que tienen de 0 a 8 dfmeros de tomaimicina (Do: son dfmeros; Dx: x dfmeros).
5
10
15
20
25
30
Breve descripcion de la invencion
La invencion se refiere a compuestos de formula (I):
en la que:
• —— representa un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de que
si —— representa un enlace sencillo, entonces:
® U y/o U', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H;
® W y/o W, que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: OH, -OR, -OCOR, -COOR, -OCOOR, -OCONRR', un carbamato dclico tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NRCONRR', -OCSNHR, un tiocarbamato dclico tal que N10 y Cl1 se incluyan en un anillo, -SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3-, -NRSOOR', -NRR', una amina dclica tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un grupo trialquilfosfonio o triarilfosfonio;
si — representa un doble enlace, entonces:
® U y U' estan ausentes;
® Wy/o W, que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H;
• R1, R2, R1', R2', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: H, Hal o un grupo alquilo (Ci-C6) opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo, S(O)qR con q = 0, 1 o 2;
o alternativamente
R1 y R2 y/o R1' y R2' forman juntos, respectivamente, un doble enlace =CH2 o =CH-CH3;
• Y e Y', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H o -OR;
• M representa N;
• ALK y ALK' son identicos e indican un grupo CH2;
• R y R' representan, independientemente entre si, H o un grupo alquilo (C1-C6) o arilo opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo;
• Li representa:
° el grupo -D-ALK(C1-C6)- ligado al anillo de piridilo a traves de D, en el que D representa -O-;
• L2 representa:
° un grupo -ALK(C1-C6)-;
• Q representa un enlace sencillo o el grupo C(=O);
• k representa un numero entero que varia de 1 a 5;
• G representa un grupo -OMe o un grupo morfolino;
• RCG1 representa el grupo -SZa o -C(=O)-ZbRb;
5 • Za representa SRa;
• Ra representa Ho un grupo alquilo (Ci-C6);
• COZbRb representa -COOH, -COO-alquilo(Ci-C6), o Mas particularmente, son compuestos de formula (IA) o (IB):
10
La invention tambien se refiere al procedimiento para preparar un conjugado, que consiste en: (i) poner en contacto y dejar reaccionar una solution acuosa, opcionalmente tamponada, del agente de union, opcionalmente modificado con un agente modificador, y una solucion de un compuesto de formula (I), (ii) y a continuation separar 15 opcionalmente el conjugado formado en la etapa (i) del compuesto de formula (l) y/o el agente de union sin reaccionar y/o los agregados que se puedan haber formado. El grupo qmmico RCG1 del compuesto de formula (I) debe ser reactivo hacia los grupos qmmicos RCG2 presentes en el agente de union, especialmente hacia los grupos amino presentes sobre los anticuerpos, habiendo sido introducidos dichos grupos qmmicos RCG2, cuando sea apropiado, por el agente modificador a fin de ligar el compuesto de formula (I) al agente de union mediante la 20 formation de un enlace covalente.
Description de la invencion
Los investigadores describen compuestos de formula (I):
5
10
15
20
25
30
en la que:
• — representa un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de que
si —— representa un enlace sencillo, entonces:
® U y/o U', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H;
® W y/o W, que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: OH, -OR, -OCOR, -COOR, -OCOOR, -OCONRR', un carbamato dclico tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NRCONRR', -OCSNHR, un tiocarbamato dclico tal que N10 y Cl1 se incluyan en un anillo, -SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3-, -NRSOOR', -NRR', una amina dclica tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un grupo trialquilfosfonio o triarilfosfonio;
si — representa un doble enlace, entonces:
® U y U' estan ausentes;
® Wy/o W, que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H;
• Ri, R2, Ri', R2', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: H, Hal o un grupo alquilo (C1-C6) opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo, S(O)qR con q = 0, 1 o 2;
o alternativamente
Ri y R2 y/o Ri' y R2' forman juntos, respectivamente, un doble enlace =CH2 o =CH-CH3;
• Y e Y', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H o -OR;
• M representa CH o N;
• ALK y ALK' indican un grupo alquileno (Ci-C6);
• R y R' representan, independientemente entre si, H o un grupo alquilo (C1-C6) o arilo opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo;
• Li representa:
° un enlace sencillo; o
° el grupo -(OCH2CH2)i-, ligado al anillo de fenilo o piridilo a traves del atomo de oxigeno, representando i un numero entero que varia de 2 a 40, preferiblemente de 2 a 10, preferiblemente igual a 3;
o
5
10
15
20
25
30
o el grupo -D-ALK(C1-C6)- ligado al anillo de fenilo o piridilo a traves de D, en el que D representa -O-, -NH- o -N-alquil(C1-C4)-;
• L2 representa:
o un grupo -ALK(C1-C6)-; o
o el grupo -(CH2CH2O)j-CH2CH2-, representando j un numero entero que varia de 1 a 40, preferiblemente de 1 a 10, preferiblemente igual al 2 o 3;
o
o un grupo -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-C6)-, ligado al atomo de nitrogeno a traves de la unidad -(CH2CH2O)-, representado j un numero entero que varia de 1 a 40, preferiblemente de 1 a 10, preferiblemente igual a 2 o 3, y representado R” H o un grupo alquilo (C1-C4);
• Q representa un enlace sencillo o el grupo C(=O);
• k representa un numero entero que varia de 0 a 40, preferiblemente de 1 a 40, mejor de 1 a 10;
• G representa un grupo -OR o -NRR', siendo R y R' como se definen previamente o siendo tales que forman, con el atomo de nitrogeno al que estan ligados, un grupo heterocicloalquilo (C4-C10) que puede comprender en el anillo otro heteroatomo elegido de N, O y S y que opcionalmente puede estar sustituido con al menos un sustituyente elegido de un grupo alquilo (C1-C4), un atomo de halogeno y un grupo hidroxilo;
• RCG1 representa el grupo -SZa o -C(=O)-ZbRb;
• Za representa Ac, Ra o SRa;
• Ra representa H, o un grupo alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (C4- C10) opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, NO2, un grupo arilo o heteroarilo;
• Zb representa un enlace sencillo, -O- o -NH- y representado Rb H o un grupo alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (C4-C10) o alternativamente Zb representa un enlace sencillo y Rb representa Hal;
con la condition de que si Li representa un enlace sencillo, entonces RCG1 represente -SZa.
Los compuestos de formula (I) pueden existir asi en la forma:
La divulgation tambien se refiere a compuestos de formula (I'):
5
10
15
20
25
30
en la que:
• — representa un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de que -— representa un enlace sencillo, entonces:
® — representa un enlace sencillo;
® U y/o U', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre s^ H;
® W y/o W, que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: OH, -OR, -OCOR, -cOoR, -OCOOR, -OCONRR', un carbamato dclico tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NRCONRR', -OCSNHR, un tiocarbamato dclico tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3-, -NRSOOR', -NRR', una amina dclica tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un grupo trialquilfosfonio o triarilfosfonio;
• R1, R2, R1', R2', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: H, Hal o un grupo alquilo (Ci-C6) opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo, S(O)qR con q = 0, 1 o 2;
o alternativamente
Ri y R2 y/o Ri' y R2' forman juntos, respectivamente, un doble enlace =CH2 o =CH-CH3;
• Y e Y', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H o -OR;
• M representa CH o N;
• ALK y ALK' indican un grupo alquileno (C1-C6);
• R y R' representan, independientemente entre si, Ho un grupo alquilo (C1-C6) o arilo opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo;
• Li representa:
° un enlace sencillo;
o
° el grupo -(OCH2CH2)i-, ligado al anillo de fenilo o piridilo a traves del atomo de oxigeno, representando i un numero entero que varia de 2 a 40, preferiblemente de 2 a 10;
o
° el grupo -D-ALK(C1-C6)- ligado al anillo de fenilo o piridilo a traves del anillo D, en el que D representa -O-, -NH- o -N-alquil(C1-C4)-;
• L2 representa:
5
10
15
20
o un grupo -ALK(Ci-C6)-;
o
o el grupo -(CH2CH2O)j-CH2CH2-, representado j un numero entero que varia de 1 a 40, preferiblemente de 1 a 10;
o
o un grupo -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-C6)-, ligado al atomo de nitrogeno a traves de la unidad -(CH2CH2O)-, representado j un numero entero que varia de 1 a 40, preferiblemente de 1 a 10, y representado R" Ho un grupo alquilo (C1-C4);
• Q representa un enlace sencillo o el grupo C(=O);
• k representa un numero entero que varia de 0 a 40, preferiblemente de 1 a 40, mejor de 1 a 10;
• G representa un grupo -OR o -NRR', siendo R y R' como se definen previamente o siendo tales que forman, con el atomo de nitrogeno al que estan ligados, un grupo heterocicloalquilo (C4-C10) que puede comprender en el anillo otro heteroatomo elegido de N, O y S y que opcionalmente puede estar sustituido con al menos un sustituyente elegido de un grupo alquilo (C1-C4), un atomo de halogeno y un grupo hidroxilo;
• RCG1 representa el grupo -SZa o -C(=O)-ZbRb;
• Za representa Ac, Ra o SRa;
• Ra representa H, o un grupo alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (C4- C10) opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, NO2, un grupo arilo o heteroarilo;
• Zb representa un enlace sencillo, -O- o -NH- y representando Rb Ho un grupo alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C8), arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (C4-C10) o alternativamente Zb representa un enlace sencillo y Rb representa Hal;
con la condition de que si Li representa un enlace sencillo, entonces RCG1 represente -SZa.
25 El termino L indica el enlazador definido por
Mas particularmente, si Li representa un CH2CH2NR"-ALK(C1-C6)- y/o k#2.
30 Mas particularmente, cuando M representa N, -D-ALK(C1-C6)- representa mejor -O-ALK(C1-C6)-. Mas particularmente, los dos grupos ALK y aLk' ligados al nucleo de fenilo o piridilo definen ambos un grupo metileno.
Mas particularmente, D representa -O-, -NH- o -NMe-.
35 La divulgation se refiere a las formulas (I) y (I') anteriores, en las que cada grupo alquileno (asi, por ejemplo, los dos grupos ALK y ALK') ligado al nucleo de fenilo o piridilo puede ser identico o diferente; segun otro ejemplo, el grupo ALK de -D-ALK(C1-C6)- puede ser identico a o diferente del grupo ALK ligado al nucleo de fenilo o piridilo. ALK se puede elegir, por ejemplo, de uno de los siguientes: -CH2-, -CH2CH2-, CH2CMe2-, -CH2CH2CH2-.
40 Y e Y' representan mas particularmente un grupo alcoxi (C1-C4), especialmente el grupo metoxi.
R y R' pueden representar mas particularmente, independientemente entre si, Ho un grupo alquilo (C1-C6).
Segun una realization particular, U=U' y/o W=W y/o Ri=Ri' y/o R2=R2' y/o Y=Y' y/o ambos grupos ALK y ALK' 45 ligados al nucleo de fenilo o piridilo son identicos (dimero simetrico, que es mas facil de preparar).
enlace sencillo, L2 representa -(CH2CH2O)j-CH2CH2- o -(CH2CH2O)j-
5
10
15
20
25
30
35
40
Mas particularmente, W y W son identicos o diferentes y representan OH, OMe, OEt, NHCONH2, SMe.
R” puede representar Ho un grupo alquilo (C1-C4), especialmente Me.
M representa mas particularmente un atomo de nitrogeno (N).
Mas particularmente, R1 y R2 y/o R1' y R2' forman juntos, respectivamente, un doble enlace =CH2 o =CH-CH3, mas espedficamente =CH-CH3.
G puede representar un grupo -OR, mas particularmente un grupo -OH o -O-alquilo(Ci-C6), especialmente -OMe. G tambien puede representar un grupo -NrR' en el que R y R' representan, independientemente entre si, Ho un grupo alquilo (C1-C6). Mas particularmente, G puede representar asi un grupo -NH2, -NH-alquilo(C1-C6) o -N-alquilo(C1- C6)2, especialmente -N(CH3)2. G tambien puede representar un grupo -NRR' en el que R y R' forman, junto con el atomo de nitrogeno al que estan ligados, un grupo heterocicloalquilo (C4-C10) que puede comprender en el anillo otro heteroatomo elegido de N, O y S y que opcionalmente puede estar sustituido con al menos un sustituyente elegido de un grupo alquilo (C1-C4), un atomo de halogeno y un grupo hidroxilo. El grupo heterocicloalquilo se puede elegir especialmente de piperacino, N-metilpiperacino, morfolino, piperidino y pirrolidino.
k representa un numero entero que varia de 0 a 40. k puede tomar el valor 0 (sin cadena de PEG que termina con G ligado al atomo de nitrogeno). Entre los compuestos de la invention, se puede hacer una distincion para los que comprenden una cadena de PEG que termina con G ligado al atomo de nitrogeno y k varia de 1 a 40, mejor de 1 a 10, mejor de 1 a 5. Tambien se puede hacer una distincion para los que comprenden al menos una cadena de PEG, es decir aquellos para los que k varia de 1 a 40, preferiblemente de 1 a 10, mejor de 1 a 5, y/o L1= -(OCH2CH2)i- y/o L2= -(CH2CH2OVCH2CH2- o alternativamente -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(C1-C6)-.
Los compuestos de las formulas (I) y (I'), incluyendo los dados como ejemplos, pueden existir en la forma de bases o de sales por adicion con acidos farmaceuticamente aceptables, y tambien en la forma de hidratos o solvatos de estas bases o de estas sales.
Mas particularmente, se hace una distincion para los de formula (IA) o (IB):
Por otra parte, se distinguen los siguientes:
■ un primer subgrupo de compuestos para los que L1= -D-ALK(C1-C6)- y L2= -ALK(C1-C6)-;
■ un segundo subgrupo de compuestos para los que L1= -(OCH2CH2)i- y L2= -ALK(C1-C6)-;
■ un tercer subgrupo de compuestos para los que L1= enlace sencillo y L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(C1- C6)-;
■ un cuarto subgrupo de compuestos para los que L1= -D-ALK(C1-C6)-, y L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(C1- C6)-;
■ un quinto subgrupo de compuestos para los que L1= -D-ALK(C1-C6)- y L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2-.
5
10
15
20
25
30
Tambien se pueden distinguir los siguientes grupos de compuestos:
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=1-10, G=OR, RCG1=-SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=1-10, G=OR, RCG1=-SZa;
■ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=1-10, G=OR, RCG1=-SZa;
■ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=OR, RCGi=-SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=NRR', RCGi=-SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=NRR', RCGi=-SZa;
■ Li= enlace sencillo, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=OR, RCGi = -SZa;
■ Li= enlace sencillo, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=OR, RCGi=-SZa;
■ Li= enlace sencillo, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=0-i0, G=NRR', RCGi=- SZa;
■ Li= enlace sencillo, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=0-i0, G=NRR', RCGi=-SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=0-i0, G=NRR', RCGi=-SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=0-i0, G=NRR', RCGi=-SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2=-(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=OR, RCGi=- SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2=-(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=OR, RCGi=-SZa;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=OR, RCGi =-C(=O)ZbRb;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=OR, RCGi = -C(=O)ZbRb; ■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=NRR', RCGi =-C(=O)ZbRb;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=NRR', RCGi = -C(=O)ZbRb; ■ Li= -(OCH2CH2)i-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=OR, RCGi =-C(=O)ZbRb;
■ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=OR, RCGi = -C(=O)ZbRb; ■ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=NRR', RCGi =-C(=O)ZbRb;
■ Li= -(OCH2CH2);-, L2= -ALK(Ci-Ca)-, Q=CO, k=i-i0, G=NRR', RCGi = -C(=O)ZbRb; ■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2-, Q = enlace sencillo, k=i-i0, G=OR, RCGi = -C(=O)ZbRb;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2-, Q=CO, k=i-i0, G=OR, RCGi =-C(=O)ZbRb;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2-, Q = enlace sencillo, k=0-i0, G=NRR', RCGi = -C(=O)ZbRb;
■ Li= -D-ALK(Ci-Ca)-, L2= -(CH2CH2O)j-CH2CH2-, Q=CO, k=0-i0, G=NRR', RCGi =-C(=O)ZbRb.
En los grupos de compuestos definidos anteriormente:
i representa mas particularmente un numero entero que vana de 2 a i0, especialmente un numero entero igual a 3;
j representa mas particularmente un numero entero que varia de 1 a 10, especialmente un numero entero igual a 2 o
3;
k representa mas particularmente un numero entero igual a 0, o que varia de 1 a 5.
La Tabla I describe enlazadores L particulares y tambien ejemplos de compuestos correspondientes a los mismos. 5 Cada compuesto de esta tabla puede existir en la forma con M=CH (benceno) o alternativamente M=N (piridina). Los compuestos con M=N son mas hidrosoluble. En esta tabla, los ejemplos se dan en una forma (IA) pero tambien pueden existir en una forma (IB). L, L1, L2, k y G se pueden elegir de los descritos en la Tabla I o entre los ejemplos. Los ejemplos de la Tabla 1 que estan fuera del alcance de las presentes reivindicaciones son solamente para referencia.
10
Tabla I
- Li
- L2 Q G Compuesto de formula (IA) n°
- -D-ALK-
- ALK OR S'-Za HT- ,pY°' 0 1 1 0 1
- -D-ALK-
- ALK CO OR 0 0 () 0 0 npN 'p0-Yp- Npp ^ jOw ' O 0 1 1 0 2
- -D-ALK-
- ALK OR -N —N-^S'28 „ ? ?" ^ /-N0^ " 0 1 1 0 3
- -D-ALK-
- ALK CO OR 0 0 o 0 0 y\-N-/-s'Za ^ ' 0 O ' ' ' 0 1 'o'' 4
- -(OCH2CH2)i-
- ALK OR 0 0 0 N s Za H pN .pp-O-JNi.Opp. Npp ^ JTW "^"9 0"' ;;^nX. ^ 0 1 1 0 5
- -(OCH2CH2)i-
- ALK CO OR O' 0 ~ r 0 0 O N s Zn 0 1 1 0 6
- -D-ALK-
- ALK - NRR' 7
- Li
- L2 Q G Compuesto de formula (IA) n°
- ^ ^' 0 ~ 0 ^ ■v. ^ '9 9 ^ /^Ow 0 1 1 0
- -D-ALK-
- ALK CO NRR' 0— N-:-S'Za Hr- N ^ .XX; ^ "0 0' ^ ;rNX,./ 0 1 1 0 8
- -D-ALK-
- ALK OR 0 0 0 0 0 Za ^ ^ N=v XX. '? 9 ^ /r^X, 0 1 1 0 9
- -D-ALK-
- ALK CO OR 0 0 0 0 0 0 0 ' 0^-N^-s'Za '.x 0 1 1 0 10
- enlace sencillo
- -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK- OR 0 0 0 N ° 0 N s /n XN ■|pY0‘^^°T^' Nxi ^ N—v, O ' >^N „ " 0 1 1 0 " 11
- enlace sencillo
- -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK- CO OR 0 1 ' 0 0 0 0 N ° 0 N S Z; H.^OsAA,0^. N XX;"""" ? 9" ^ xX. / 0 1 1 0 12
- -D-ALK-
- -(CH2CH2O)-CH2CH2NR"-ALK- OR 0 0 0 O ' - N -' O ''' ■ ° -N S 2 ^ X-A ^ "9 o' ^ /r-nX ^ 0 1 1 0 13
- -D-ALK-
- -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK- CO OR 0 0 0 0 0 ' 0 N O 0 N 3 , xN Nx 0 1 1 0 14
- enlace sencillo
- -(CH2CH2O)-CH2CH2NR"-ALK- - NRR' 15
- Li
- L2 Q G Compuesto de formula (IA) n°
- N N ° O N S A' ^ ^"<? v" ^ aCk/ 0 1 1 0
- enlace sencillo
- -(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK- CO NRR' 0 1 ■ ^N^°^0"-N^s'a h/=n ■fi^0'^^^°Y^'N=Vl 9^/rKX^ 0 1 1 0 16
- -D-ALK-
- -(CH2CH2O)-CH2CH2NR"-ALK- NRR' N S 0 N O ° N S / XK; "? ?" ^ /^N>v - 0 1 1 0 17
- -D-ALK-
- -(CH2CH2O)-CH2CH2NR"-ALK- CO NRR' ' - r 0 N 0 0 N s / A 1 ' -.AVr^o 0 1 1 0 18
- -D-ALK-
- ALK NRR' °-J 0 N s 23 nr- .p,0siN^0Y^- N=yn ^ AA "0 0' /7-nX, / 0 1 1 0 19
- -D-ALK-
- ALK OR 0 0 0 0 0 ' N Zb Rb /NS . AA "? ?" ;r-NCk- - ~ 0 1 0 ' 20
- -D-ALK-
- ALK OR 0 0 0 0 '\, ,,^^-ZbRb A 0 . aa "? ?" ^ / ~ 0 1 0 ' 21
- -D-ALK-
- ALK CO OR 0 0 0 0 0 0 ZbRb -fA^H . .OA "0 0' ^ rOi. ^ 0 1 1 0 22
- -D-ALK-
- ALK CO OR 23
- Li
- L2 Q G Compuesto de formula (IA) n°
- o 0 0 0 0 O^N^ZbRb rS 0 Hr- n=ah x ^ "0 0"^ rOv- ~ ' 0 1 0 '
- -D-ALK-
- ALK OR 0 xx ' ZbRb ' ? ?' ;rN0^,/ 0 1 1 0 24
- -D-ALK-
- ALK CO OR 0 0 0 0 0 0 '' N N ZbRb N x. .xCW ^ "0 0" ^ x o' 1 0 25
- -(OCH2CH2)i-
- ALK OR 0 0 0 0 00 xx^- 0 xx x N x xx^x a R b 0 1 1 0 26
- -(OCH2CH2)i-
- ALK CO OR 0 0 ' °o' ' ■ N ' -" ' - ' ZbRb 0 1 1 0 27
- -D-ALK-
- ALK NRR' '' N ''" v'00 '"'^ 0 0 '''x'N x-XX-X^-ZbRb ^N'/Y°J'N^0'^VNV x xxON'' "" "9 ?"^ .^Ox X 0 1 1 0 28
- -D-ALK-
- ALK CO NRR' "N^o^o^o-^o 0 0-JxX.x "ZbRb Hr- Xxoii^ N x ,ijx;'' 9 0" ^ rOx x ~ ' 0 1 0 ' 29
- -D-ALK-
- ALK OR ' 0 "X ' 0 ' X' Q xx^ 0 ^ XX Q Xx. 0 0 XXx N xXXX x zb Rb x xOx 0 9" rOx x 0 1 1 0 30
- -D-ALK-
- ALK CO OR 31
- Li
- L2 Q G Compuesto de formula (IA) n°
- 0 0 0 0 o 0 0 0 J-L O ZbRb " O 1 1 0 "
- -D-ALK-
- -(CH2CH2O)j-CH2CH2- OR 0 0 0 0 0 n 0 0 0 , N ,pY 0 0 y'' |i ■N 0 1 1 0 32
- -D-ALK-
- -(CH2CH2O)j-CH2CH2- CO OR 0 ° 0 ° ° 0 h^n - 0 1 1 0 33
- -D-ALK-
- -(CH2CH2OVCH2CH2- NRR' N S 0 0 N 0 0 0 , H/=N /y ° y, N=y 0 1 1 0 34
- -D-ALK-
- -(CH2CH2OVCH2CH2- CO NRR' 0 ^y°-yx N=v x XK; ^ 0 0 W xOx O 1 1 O 35
- -D-ALK-
- ALK CO NRR' Y ' N ' ' ° -'' 0 ''''' ° ° 0 Hf* (yo,JJ^or N. ^ xCX ^ "0 o' ^ ;rOx 0 1 1 0 36
Los compuestos descritos comprenden un grupo qmmico reactivo (RCG1) que es reactivo hacia un grupo qmmico reactivo (RCG2) presente en el agente de union. La reaction entre RCG1 y RCG2 realiza la ligation del compuesto de formula (I) al agente de union mediante la formation de un enlace covalente. Asi, los compuestos de formula (I) 5 se pueden conjugar a un agente de union.
RCG1 representa:
(i) el grupo reactivo -SZa para el que Za representa Ho el grupo -SRa y Ra representando un grupo alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C7), arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (C4-C10);
10 (ii) el grupo reactivo -C(=O)-ZbRb para el que Zb representa un enlace sencillo, -O- o -NH-, mas particularmente -O-, y Rb representando H o un grupo alquilo (C1-C6), cicloalquilo (C3-C7), arilo, heteroarilo o heterocicloalquilo (C4-C10).
5
10
15
20
25
30
35
40
Mas particularmente, -SZa puede representar -SH o -SS-alquilo(Ci-C6), especialmente -SSMe, o -SS-heteroarilo,
especialmente s N o s N (definiendose posteriormente en la presente Xi y X2). Mas particularmente, -SZa puede representar -SH o -SS-alquilo(Ci-C6), especialmente -SSMe.
Mas particularmente, -ZbRb puede representar -OH (funcion acido), -O-alquilo(C1-C6), especialmente -OCH3, -OCH2CH3, -OCH2CH=CH2 (funcion ester) 0 alternativamente -ZbRb puede representar
0 el grupo en el que IG representa al menos un grupo
electroinductor tal como -NO2 0 -Hal, especialmente -F. Puede ser, por ejemplo, uno de los siguientes grupos:
Otro tipo de grupo -C(=O)ZbRb es el siguiente:
. Los grupos reactivos -SH y
muestran buena reactividad.
Mas particularmente, -ZbRb puede representar -OH (funcion acido), -0-alquiio(Ci-C6), especialmente -OCH3,
o
-OCH2CH3, 0 alternativamente -ZbRb puede representar
Mas particularmente, RCG1 se puede elegir de uno de los descritos en los ejemplos.
Como ejemplos de RCG2, se pueden mencionar los grupos £-amino de lisinas soportadas por las cadenas laterales de residuos de lisina que estan presentes en la superficie de un anticuerpo, los grupos sacaricos de la region de bisagra o los tioles de cistemas mediante la reduction de enlaces disulfuro intracatenarios (Garnett M.C. y cols., Advanced Drug Delivery Reviews 2001, 53, 171-216). Mas recientemente, se han considerado otros enfoques, tales como la introduction de cistemas mediante mutation (Junutula J.R. y cols., Nature Biotechnology 2008, 26, 925-932; documento WO 09026274) o la introduccion de aminoacidos no naturales que permiten otros tipos de qmmica (de Graaf A.J. y cols., Bioconjugate Chem. 2009, Fecha de Publication (Web): 3 de febrero de 2009 (Revision); DOI: 10.1021/bc800294a; documento WO 2006/069246 y segun Chin J.W. y cols., JACS 2002, 124, 9026-9027 (tecnologia ReCode®)). Estos modos de ligation usados con anticuerpos son aplicable a todos los agentes de election de diana conocidos como una funcion de su estructura.
Tambien es posible modificar qmmicamente el agente de eleccion de diana a fin de introducir nuevos grupos qmmicos reactivos RCG2. Asi, es bien conocido por los expertos en la tecnica como modificar un anticuerpo usando un agente de modification (vease especialmente la pagina 14 del documento WO 2005/077090). La modification hace posible mejorar la reaction de conjugation y usar una variedad mas amplia de grupos RCG1.
Agentes modificadores para introducir grupos disulfuro
o
0 "r\
R^-S-(CrC6)ALK-lL ,N / b 0 \\
El agente modificador puede ser un ester activado NHS de formula o en la que R representa
un grupo alquilo (C1-C6), arilo, heteroarilo, cicloalquilo (C3-C7), heterocicloalquilo (C4-C10); por ejemplo, es posible usar ditiopropionato de N-piridilo (SPDP) o piridiltiobutirato de N-succinimidilo (SPDB o el ester N- hidroxisuccinimidflico de acido 4-(2-piridilditio)butanoico) a fin de introducir grupos reactivos ditiopiridilo RCG2 (vease Bourdon M.A. y cols., Biochem. J. 1978, 173, 723-737; US 5208020) que a continuation se pueden hacer reaccionar con un grupo qmmico reactivo RCG1 del tipo -SH presente sobre el enlazador del dimero de pirrolo[1,4]benzodiazepina a fin de formar un nuevo enlace -S-S- (vease el Ej. 1) para un conjugado que soporta un enlace disulfuro. El grupo N-hidroxisuccinimida reacciona preferentemente en los grupos amino presentes en el anticuerpo a fin de formar enlaces amida. Otro ejemplo de un agente modificador se describe en el documento WO
5
10
15
2004/016801 de formula piridilditio)pentanoato de
por ejemplo, es posible usar 4-(5-nitro-2- N-succinimidilo (SNPP), o un analogo pegilado de formula
descrito en el documento WO 2009/134976 o un analogo sulfonico de
formula o descrito en el documento WO 2009/134977, formulas en las que:
- X3, X4, X5, X6 representan H o un grupo alquilo (C1-C6),
- X1 y X2 representan -H, -CONX8X9, -NO2, X y representando X9 H o un grupo alquilo (C1-C6),
- X7 representa -SO3M o Ho alternativamente un grupo amonio cuaternario;
- a indica un numero entero que varia de 0 a 4 y b indica un numero entero que varia de 0 a 2000, preferiblemente entre 1 y 200; ay b pueden tomar todos los valores entre, respectivamente, 0y 4 o entre 0 y 2000.
Preferiblemente, entre los compuestos de formula X1=X4=X5=X6=X7=H).
Agentes modificadores para introducir grupos maleimido
, a=1, X3=Me y X2=NO2 y
Otro agente modificador puede ser un ester activado NHS de formula o “ en la que R representa un grupo -(CH-, -(CH2)n-ciclohexil-, -ciclohexil-(CH2)n- y n representa un numero entero que varia de 1 a 10; por ejemplo, es posible usar 4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo (SMCC) (segun el documento EP 0306943) 0 un sulfo-SMCC (4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de sulfosuccinimidilo).
Otros ejemplos que se pueden mencionar incluyen:
succinimidilo;
tales como 3-maleimidopropanoato de N-
a modo de ejemplo 6-(3-maleimidopropionamido)hexanoato de N-
succinimidilo; 0 o/ siendo b un numero entero entre 0 y 2000, preferiblemente entre 1 y 200
(b puede tomar todos los valores entre 0 y 2000), a modo de ejemplo 3-(2-{2-[3-maleimidopropionilamino]-
etoxi}etoxi)propanoato de N-succinimidilo o SM(PEG)2;
a modo de ejemplo N-
5
10
15
20
25
succinimidilsuccinato de maleimidoetilo;
a modo de ejemplo 4-(4-maleimidofenil)butanoato
de N-succinimidilo o a modo de ejemplo 3-maleimidobenzoato de N-succinimidilo.
Agentes modificadores para introducir grupos tiol
Otro ejemplo de un agente modificador descrito en el documento WO 90/06774 tiene la formula la que:
- Hal representa un atomo de halogeno;
- X10 representa un atomo de halogeno o el grupo COOX14, nitro, alquilo (C1-C8) no sustituido (C1-C8) no sustituido o halogenado, alquenilo (C2-C8) no sustituido o halogenado, alquinilo (C2-C8) no sustituido o halogenado, cicloalquilo (C3-C8) no sustituido, arilo que no esta sustituido o esta sustituido con de uno a tres sustituyentes seleccionados de amino, un atomo de halogeno, un grupo alquilo (C1-C8) no sustituido o halogenado o un alcoxi (C1-C8) no sustituido o halogenado;
- cada uno de los grupos X11, X12, X13 representa independientemente un atomo de hidrogeno o alternativamente puede representar X10;
o X10 y X11 forman juntos un anillo de alquileno (C2-C5), que no esta sustituido o esta sustituido con de uno a cinco grupos alquilo (C1-C4);
o X10 o X11 forman, junto con X12, un anillo de alquileno (C1-C5), que no esta sustituido o esta sustituido con de uno a cinco grupos alquilo (C1-C4);
y X14 es -H o un grupo alquilo (C1-C8);
o X10=Xh=X12=X13=H.
Preferiblemente, Hal representa un atomo de cloro o bromo. Posibilidades para X10-X13 se encontraran en la tabla posterior:
en
o halogenado, alcoxi
- X10
- X11 X12 X13 Hal
- Me
- H H H Cl
- Ph
- H H H Cl
- t-Bu
- H H H Cl
- Me
- Me
- H H Cl
- (-CH2(CH2)3CH2-)
- H H Cl
- H
- (-CH2(CH2)3CH2-) H Cl
- Et
- H H H Br
- Et
- Me H H Cl
- ~ch~ch2~ch 1___Li
- H H H Cl
- Me
- H Me H Cl
- H
- H
- Me Me Cl
- Ph
- Me H H Cl
5
10
15
20
- X10
- X11 Xl2 X13 Hal
- 4-ClPh
- H H H Cl
- 3-furanilo
- H H H Cl
- i-Pr
- H H H Cl
- Me
- Me
- Me
- Me
- Cl
- O G) X
- H H H Cl
- CH2Br
- H H H Cl
- CFs
- H H H Cl
- CH=CH2
- H H H Cl
- 2-NH2Ph
- H H H Cl
Un ejemplo de un iminotiolano preferido es el siguiente:
Agentes modificadores para introducir grupos haloacetamido
Otro ejemplo de un agente modificador es 4-(N-yodoacetil)aminobenzoato de succinimidilo (SIAB)
o compuestos similares, incluyendo N-yodoacetato de succinimidilo (SIA) > N-
bromoacetato de succinimidilo (SBA) o 3-(N-bromoacetamido)propionato de succinimidilo (SBAP) o un compuesto
pegilado similar descrito en el documento WO 2009/134976 > siendo b como se describe
previamente. Las Figuras 1 y 2 ilustran la modificacion de un grupo amino de un agente de union con SPDP o alternativamente el iminotiolano preferido anterior.
Asf, es posible introducir en el agente de union grupos RCG2 disulfuro (-SSR), especialmente de tipo disulfuro de
piridilo
en el caso en el que RCG1 representa -SH. De forma similar, es posible
introducir en el agente de union grupos RCG2 tiol (-SH), por ejemplo con un iminotiolano, en el caso en el que RCG1
representa disulfuro (es decir RCG1= -SZa con Za#H, por ejemplo - s N /■ Tambien es posible modificar
estos grupos RCG2 tiol (-SH) en grupos RCG2 disulfuro (-SSR), especialmente de tipo disulfuro de piridilo
mediante reaccion con los correspondientes disulfuros aromaticos
En ambos casos, el enlace covalente que se forma mediante la reaccion entre RCG1 y RCG2 es un enlace disulfuro escindible.
Tambien es posible, en el caso en el RCG1 representa -SH, introducir en la superficie del agente de union RCG2
En este caso, el
grupos de tipo maleimido ( o ) o haloacetamido (p. ej. bromo- o yodoacetamido
enlace covalente que se forma mediante la reaccion entre RCG1 y RCG2 es un enlace disulfuro no escindible. Asr
5
10
15
20
25
■ en presencia de un derivado de formula (I) que comprende un grupo qmmico reactivo RCG1 del tipo -SZa, el agente de union comprende:
■ grupos qmmicos disulfuro en el caso en el que RCG1 representa -SH;
■ grupos qmmicos tiol en el caso en el que RCG1 representa -SZa con Za#H;
■ grupos qmmicos maleimido o haloacetamido en el caso en el que RCG1 representa -SH;
■ en presencia de un derivado de formula (I) que comprende un grupo qmmico reactivo RCG1 del tipo -C(=O)-ZbRb, el derivado de formula (I) se hace reaccionar con las funciones amino del agente de union, especialmente los grupos £-amino soportados por las cadenas laterales de los residuos de lisina (Lys) de un anticuerpo.
Mas particularmente,
■ cuando el grupo qmmico reactivo RCG1 es del tipo -SH, y cuando el agente de union soporta funciones amino, especialmente grupos £-amino soportados por las cadenas laterales de los residuos de lisina de un anticuerpo, el ultimo se modifica por medio de un agente modificador elegido de un compuesto de formula:
en la que R representa un grupo alquilo (C1-C6), arilo, heteroarilo, cicloalquilo (C3-C7),
heterocicloalquilo (C4-Ci0);
un analogo pegilado de formula:
0 un analogo sulfonico de formula 6 en la que X3 X4,
X5, X6 representan H o un grupo alquilo (C1-C6), X1 y X2 representan -H, -CONX8X9, -NO2, X8y representando X9 H o un grupo alquilo (C1-C6), X7 representa -SO3-M+ o Ho alternativamente un grupo amonio cuaternario y a indica un numero entero que varia de 0 a 4 y b indica un numero entero que varia de 0 a 2000; o se elige de 4-(N- maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de succinimidilo; 4-(N-maleimidometil)ciclohexano-1-carboxilato de
sulfosuccinimidilo; 1 en el que R representa un grupo -(CH2)n-(CH2)n-ciclohexil-,
-ciclohexil-(CH2)n- y n representa un numero entero que varia de 1 a 10;
2000;
succinimidilo;
siendo b un numero entero entre 0 y
N-bromoacetato de succinimidilo; 3-(N-bromoacetamido)propionato de
siendo b un numero entero entre 0 y 2000.
■ cuando el grupo qmmico reactivo RCG1 es del tipo -SZa con Za#H, y cuando el agente de union soporta funciones amino, especialmente grupos £-amino soportados por las cadenas laterales de los residuos de lisina de un
anticuerpo, el ultimo se modifica por medio de un agente modificador de formula previamente.
Hal-
descrito
■ cuando el grupo qmmico reactivo RCG1 es del tipo -SH, y cuando el agente de union contiene funciones tiol, especialmente despues de la introduccion de cistemas mediante la mutacion o mediante la modificacion qmmica de un agente de union que contiene funciones amino, el agente de union se modifica de modo que sus funciones tiol se conviertan en funciones disulfuro. Es posible, porejemplo, usarun agente modificador elegido de un compuesto de
en la que Xi y X2 representan -H, -CONX8X9 o -NO2,
formula " o
representando X8 y X9 H o un grupo alquilo (C1-C6).
5
La Tabla II posterior ilustra la modificacion de un grupo amino de un agente de union segun los metodos 10 precedentes. Por simplicidad, se usan las siguientes abreviaturas:
Tabla II: ejemplos de modificaciones de agentes de union cuando RCG1=-SZa
Agente modificador
Ejemplo despues de la reaccion en un grupo amino, especialmente lisina, de un anticuerpo, indicado MAb
Conjugado
Agente modificador
Ejemplo despues de la reaccion en un grupo amino, especialmente lisina, de un anticuerpo, indicado MAb
Conjugado
g: numero de funciones RCG2 en un agente de union modificado; d: numero de dimeros de pirrolo[1,4]benzodiazepina en el agente de union Mab L* representa -LrN(Q-CH2CH2O)k-CH2CH2-G)-L2-
5
10
15
20
25
Los compuestos segun la invention se pueden usar asi para la preparation de un agente de union al que esta ligado covalentemente en la position para de M el dimero de formula:
Mas particularmente, el agente de union es un anticuerpo. Mas particularmente, el dimero tiene la formula:
Procedimiento para preparar los compuestos de formula (I)
Los compuestos de formula (I) se pueden preparar segun el Esquema 1:
Los compuestos Pi, P'i y P2 se hacen reaccionar entre si para dar P3. LG y LG' indican un grupo de salida. El termino "grupo de salida" indica un atomo o un grupo de atomos que, en la reaction heterolrtica entre P2 y P1 o P'1, sale tomando el par solitario de electrones del enlace covalente que conecta ALKy LG o LG'. El grupo de salida se elige mas particularmente de un atomo de halogeno, especialmente cloro o bromo, un grupo mesilato, tosilato o nosilato o -OPPh3+. Los compuestos P2 intermedios tambien forman parte de la invencion.
En la preparacion de un compuesto de formula (I) que comprende el grupo RCG1, X' puede representar dicho grupo RCG1, en cuyo caso P3 representa un compuesto de formula (I). X' tambien puede ser un precursor de dicho grupo RCG1 del tipo -SZa o alternativamente -C(=O)ZbRb y, en este caso, es necesario convertirX' en RCG1 por medio de una o mas reacciones qmmicas. Segun una variante, la conversion X' ^ RCG1 tambien se puede realizar sobre P2.
Asi, para la preparacion de un compuesto P3 (o segun la variante P2) para el que Za=H, se prefiere introducir un grupo X'=-SZa para el que Za=-S-alquilo(Ci-C6) usando el precursor del enlazador correspondiente, y a continuation reducir la funcion disulfuro -SS-alquilo(C1-C6) hasta una funcion tiol -SH. Para hacer esto, se puede hacer uso, por ejemplo, de tris(2-carboxietil)fosfina: vease a este respecto Burns J.A. y cols., J. Org. Chem. 1991, 56(8), 2648-2650. Esta conversion -SS-alquilo(Ci-C6) ^ -SH se puede aplicar especialmente a los compuestos 1 a 19 de la Tabla I.
5
10
15
20
25
30
En el caso de la preparation de un compuesto de formula (I) a partir de P3 segun la conversion X' ^ RCG1 de modo que RCG1 represente el grupo -SH, tambien se puede formar un compuesto P3, de modo que X' tambien pueda
representar el grupo -SZa con funcion imina.
De forma similar, para la production de un compuesto de formula (I) que comprende un grupo RCG1= -C(=O)ZbRb, es posible convertir un grupo X'= -C(=0)ZbRb en un grupo RCG1= -C(=0)ZbRb por medio de una 0 mas reacciones
quimicas. En particular, en el caso en el que -^(=u;z.bKb= , es posible introducir en un compuesto P3
(o segun la variante P2) el grupo X' = -C(=O)O-alquilo(Ci-C4) o -C(=O)O-alilo, que a continuation se convierte en un grupo -C(=O)OH, que finalmente reacciona con carbonato de N-N'-disuccinimidilo o NHS. La conversion -cOoalquilo/alilo en -COOH se puede realizar mediante tratamiento con una base tal como LiOH o un catalizador de paladio, por ejemplo tetraquis(trifenilfosfina)paladio en presencia de un “eliminador” de amina, por ejemplo morfolina. La reaction con N,N'-disuccinimidilo se realiza en presencia de una base, por ejemplo DIPEA; la reaction con NHS se realiza en presencia de un agente de acoplamiento, por ejemplo DCC. De forma similar, en el caso en el que
-C(=0)ZbRb=
> es posible introducir un grupo -C(=0)ZbRb= -COOH, que a continuacion reacciona con N,N'-carbonildiimidazol (JACS 1958, 80, 4423; JACS 1960, 82, 4596). Esta conversion X' = -C(=0)ZbRb —> RCG1 = - C(=O)ZbRb se puede aplicar especialmente a los compuestos de los Ejemplos 20 a 36 de la Tabla I.
Los compuestos Pi y P'1 se describen en las solicitudes de patente WO 00/12508, WO 00/12507, WO 2005/040170, WO 2005/085260, Wo 07085930 o WO 2009/016516 o son accesibles a traves de smtesis total (Mori M. y cols., Tetrahedron, 1986, 42, 3793-3806). En el caso en el que Pi y/o P'i represente(n) tomaimicina de formula:
Tomaimicina
la ultima se puede preparar con la ayuda de la cepa Streptomyces croceus al seguir la ensenanza del documento FR 1516743 o alternativamente mediante smtesis total (vease J. Antibiotics 1983, XXXVI(3), 276-282 Z. Tozuka "Studies on tomaymycin. Total syntheses of the antitumor antibiotics E- y Z- tomaymycins"). Tambien existen compuestos Pi/P'i comerciales.
Para la introduction de los grupos W/W', la funcion imina = doble enlace) es capaz de anadir diversos compuestos HW/HW' (por ejemplo H2O, alcohol ROH).
Caso en el que Q = enlace sencillo
5
10
15
20
25
Preparacion de P2
i. reaction nucleofila entre la funcion amina secundaria -NH- de P4 y un reactivo de formula LG"-(CH2CH2O)k- CH2CH2-G (LG" = grupo de salida) en presencia de una base, a modo de ejemplo K2CO3 en un disolvente polar tal como DMF o THF.
El reactivo LG"-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G se obtiene a partir de un compuesto de formula HO-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G al reemplazar el grupo -OH por el grupo de salida LG" por medio de reacciones qmmicas conocidas por los expertos en la tecnica. Por ejemplo, en el caso en el que LG" representa un grupo mesilato, se hace uso de cloruro de metanosulfonilo en presencia de una base tal como una amina terciaria (por ejemplo TEA). En el caso en el que LG" representa I, el mesilato esta sustituido con I, por ejemplo usando yoduro sodico, segun D. Marquis y cols. J. Org. Chem. 1995, 24, 7984-96.
Los PEG-alcoholes de formula HO(CH2CH2O)k-CH2CH2OCH3 estan disponibles comercialmente (vease, por ejemplo, el catalogo de la compania americana QuantaBioDesign, Ltd.). Otros PEG-alcoholes HO(CH2CH2O)k- CH2Ch2OR con R#Me estan disponibles comercialmente o alternativamente estan disponibles de HO(CH2CH2o)k- CH2CH2OH por medio de reacciones qmmicas conocidas por los expertos en la tecnica. De forma similar, ciertos compuestos para los que G=NRR' y k>=1 estan disponibles comercialmente, por ejemplo:
ii. introduction de LG y LG'. En el caso de un grupo mesilato, se hace uso de MSC en presencia de una base tal como una amina terciaria (por ejemplo TEA).
Caso en el que Q=-C(=O)
Esquema 4
Preparation de P2
i. Reaction de amidacion entre P4 y un derivado de acido carboxflico de formula T-C(=O)-(CH2CH2O)k-CH2CH2-G.
5 El derivado de acido carboxflico puede ser un haluro de acilo (T = -Hal). Segun una variante, se hace uso de un ester activado (por ejemplo T = -ONHS) o alternativamente el acido carboxflico (T = -OH) en presencia de un agente de acoplamiento. Los PEG-acidos de formula HOC(=O)-(CH2CH2O)k-CH2CH2OR se pueden preparar a partir de los correspondientes PEG-alcoholes de formula HO-(CH2CH2O)k-i-CH2CH2OR, que estan disponibles comercialmente para k= 1 a 11, mediante la adicion de acrilato sodico, segun J. Huskens, J.A. Peters, H. van Bekkum, Tetrahedron 10 1993, 15, 3149-64. Asimismo, este es el caso cuando G es el grupo NRR' para k>=1 partiendo de los
correspondientes compuestos de formula H-(OCH2CH2)k-1-CH2CH2NRR'. De forma similar, los compuestos HOC(=O)-(CH2CH2)-NRR' (k=0) estan disponibles comercialmente.
ii. introduction de LG y LG'. En el caso de un grupo mesilato, se hace uso de MSC en presencia de una base tal como una amina terciaria (por ejemplo TEA).
15 Preparacion de P4
Caso en el que X'= -C(=O)-ZbRb
i. introduccion del grupo protector PG". En el caso de un grupo nosilato, se hace uso de cloruro de 220 nitrobencenosulfonilo en presencia de una base tal como una amina terciaria (por ejemplo TEA) o piridina;
ii. desproteccion de los grupos PG y PG'. Por ejemplo, en presencia de acido clorhidrico o TFA cuando los grupos PG y PG' son TBDMS.
Segun una variante, en el caso en el que ALK=ALK'=-CH2-, P5 puede representar 0 0 . La etapa de
desproteccion se reemplaza a continuation por una etapa de reduction de la funcion ester hasta un -CH2oH, por 25 ejemplo como borohidruro sodico; para hacer esto, se pueden aplicar las condiciones de reduccion dadas en las paginas 62-63 del documento WO 2007/085930. Segun se describe posteriormente, esta variante que consiste en usar un diester y a continuacion aplicar una reduccion se puede generalizar al otro P5. Por otra parte, la reduccion de las funciones ester se puede realizar sobre un P4 pero opcionalmente tambien, segun una variante, sobre un P5.
iii. Reaccion nucleofila entre la funcion amina protegida -NH(PG") y un reactivo de formula LG-L2-C(=O)-ZbRb en 30 presencia de una base, a modo de ejemplo K2cO3 en un disolvente polar tal como DMF o THF.
Para el caso en el que L2=ALK(C1-C6), estan disponibles comercialmente los esteres bromoalquflicos de formula Br- ALK(C1-C6)-C(=O)-OMe. Para el caso en el que L2=-(CH2CH2O)j-CH2CH2-, LG se puede introducir partiendo de los
correspondientes PEG-alcoholes de formula HO-(CH2CH2O)j-CH2CH2-C(=O)ZbRb. Estos compuestos estan disponibles comercialmente o alternativamente se pueden obtener a partir de los correspondientes PEG-dioles de formula HO-(CH2CH2O)j-H, que estan disponibles comercialmente para j= 1 a 11, mediante la adicion de acrilato sodico, segun J. Huskens, J.A. Peters, H. van Bekkum, Tetrahedron 1993, 15, 3149-64.
5
iv. desproteccion del grupo PG". Por ejemplo en presencia de tiofenol y una base tal como carbonato de cesio cuando PG" es el grupo nosilato.
Caso en el que X'= -SZa
Caso en el que L2=ALK(CrCe)
i. desproteccion de los grupos protectores PG y PG', preferiblemente en medio acido, por ejemplo en presencia de acido clorhidrico o TFA cuando los grupos PG y PG' son TBDMS.
Segun una variante, en el caso en el que ALK=ALK'=-CH2-, P5 puede representar 0 0 . La etapa de
15 desproteccion de las funciones alcohol se reemplaza a continuation por una reaction de reduction de la funcion ester hasta una funcion -CH2OH, por ejemplo con borohidruro sodico, seguida por una etapa de desproteccion de la funcion amina; para hacer esto, se pueden aplicar las condiciones de reaccion dadas en las paginas 62-63 del documento wO 2007/085930.
ii. aminacion reductiva con el aldehido de formula HC(=O)-ALK-SZa;
20 iii. la amina intermedia se reduce in situ con un agente reductor, a modo de ejemplo triacetoxiborohidruro sodico segun A.F. Abdel-Magid y cols., J. Org. Chem. 1996, 61, 3849-62, preferiblemente en acido acetico.
Caso en el que L2=-(CH2CH2O)j-CH2CH2NR"-ALK-
i. introduction del grupo protector PG". En el caso de un grupo nosilato, se hace uso de cloruro de 2- nitrobencenosulfonilo en presencia de una base tal como una amina terciaria (por ejemplo TEA) o piridina;
ii. desproteccion de los grupos PG y PG'. Por ejemplo en presencia de acido clorhidrico o TFA cuando los grupos PG y PG' son TBDMS.
I -NH
5 Segun una variante, en el caso en el que ALK=ALK'=-CH2-, Ps puede representar 0 0 . A
continuation, la etapa de desproteccion se reemplaza por una etapa de reduction de la funcion ester hasta una funcion -CH2OH, por ejemplo con borohidruro sodico; para hacer esto, se pueden aplicar las condiciones de reduccion dadas en las paginas 62-63 del documento WO 2007/085930.
iii. reaction nucleofila entre la funcion amina protegida -NH(PG") y un reactivo de formula LG-(CH2CH2O)jCH2CH2N3 10 en presencia de una base, a modo de ejemplo K2CO3 en un disolvente polar tal como DMF o ThF. Estos
compuestos se pueden obtener segun el documento WO 07/085930, partiendo de los correspondientes PEG-dioles de formula HO-(CH2CH2O)j+i-H, que estan disponibles comercialmente para j= 0 a 10.
iv. reduccion del grupo azido, por ejemplo a traves de la reaccion de Staudinger en presencia de trifenilfosfina y agua.
15 v. aminacion reductiva con el aldehido de formula HC(=O)-ALK-SZa;
vi. la amina intermedia se reduce in situ con un agente reductor, a modo de ejemplo triacetoxiborohidruro sodico, segun A.F. Abdel-Magid y cols., J. Org. Chem. 1996, 61,3849-62, preferiblemente en acido acetico.
vii. alquilacion de la funcion amina secundaria.
viii. desproteccion del grupo PG". Por ejemplo en presencia de tiofenol y una base tal como carbonato de cesio 20 cuando PG" es el grupo nosilato.
Preparation de P5
Caso en el que L1=-D-ALK(C1-C6)-, D = O o NH
25 i. reaccion nucleofila entre la funcion -DH y una bromoamina protegida con boc de formula Br-ALK(C1-C6)-NHboc en presencia de una base, a modo de ejemplo K2CO3 en un disolvente polar tal como DMF o THF (veanse, por ejemplo, las condiciones de la pagina 63 del documento WO 07085930).
ii. desproteccion selectiva de la amina, preferiblemente en medio acido, por ejemplo en presencia de acido clorhidrico o TFA. Para los casos en los que no se puede realizar una desproteccion selectiva, por ejemplo cuando 30 los grupos PG y PG' son TBDMS, es necesaria una etapa de reproteccion selectiva de los alcoholes.
5
10
15
20
Segun una variante, en el caso en el que ALK=ALK'=-CH2-,
DH
EtO
bromoamina con un diester de formula:
D-(CrC6)ALK-NH2
EtO. JL .c'J-.. ,-OEt M 'y'
o o que se usa en la forma que se obtiene, para
Caso en el que L1=-N(alquil(C1-C4))-ALK(C1-C6)-
es posible realizar la sustitucion nucleofila de la
a fin de obtener un compuesto P5 de formula
la preparation de P4.
i. reaction nucleofila entre la funcion -NH- y un haluro de alquilo de formula R*-Hal con R* = alquilo (C1-C4) en presencia de una base, a modo de ejemplo K2CO3 en un disolvente polar tal como DMF o THF.
Segun una variante, en el caso en el que ALK=ALK'=-CH2-, es posible realizar la sustitucion nucleofila del haluro de
alquilo con un diester de formula:
a fin de obtener un compuesto P5 de formula
que se usa en la forma que
Caso en el que L1= -(OCH2CH2)i
se obtiene, para la preparacion de P4.
i. reaccion nucleofila entre una de las funciones -OH (estando las dos otras protegidas con PG que indica un grupo protector) y un reactivo de azido-PEG de formula LG-(CH2CH2)-(OCH2CH2)i-1-N3 que soporta un grupo nucleofugo (LG) tal como Hal o mesilato, en presencia de una base, a modo de ejemplo K2CO3 en un disolvente polar tal como DmF o THF (veanse, por ejemplo, las condiciones de la pagina 63 del documento WO 07085930).
ii. reduction del grupo azido, por ejemplo con trifenilfosfina en presencia de agua en un disolvente polar tal como THF.
5
10
15
20
25
30
Segun una variante, en el caso en el que ALK=ALK'=-CH2-, es posible realizar una sustitucion nucleofila del reactivo
de azido-PEG con el hidroxidiester de formula: 0 0 , a fin de obtener un compuesto P5 de formula
que se usa en la forma que se obtiene, para la preparation de P4. Caso en el que Li = enlace sencillo
Esquema 11
i. protection de los grupos alcohol
P5 se puede obtener a partir del halo-diol de formula ALK ALIV . Un ejemplo de una halodiol y del correspondiente diol protegido se describe en el Esquema 1 en la pagina 48 del documento WO 2009/016516 (compuestos 2 y 3 del Esquema 1). Dos ejemplos de dioles protegidos son los de N° CAS 181225-40-1 y 181225-412. El halodiol se puede obtener mediante la reduction del correspondiente compuesto de diacido o diester, por ejemplo el de N° CAS 193010-40-1. Vease tambien en el caso de una piridina (M=N): Liebigs Annalen der Chemie 1991, 10, 987-988 o Tetrahedron 2005, 61(7), 1755-1763 (compuesto 3 del Esquema 1).
Un experto en la tecnica puede ser inspirado por las condiciones operativas de los ejemplos descritos posteriormente que se dan para los enlazadores particulares Li y L2 y pueden adaptarlas a los otros enlazadores Li y L2.
Procedimiento para preparar el conjugado
El conjugado se obtiene a traves del procedimiento que consiste en:
(i) poner en contacto y dejar reaccionar una solution acuosa, opcionalmente tamponada, del agente de union, opcionalmente modificado con un agente modificador, y una solucion de un compuesto de formula (I);
(ii) y a continuation opcionalmente separar los conjugados formados en la etapa (i) del compuesto de formula (I) y/o el agente de union sin reaccionar y/o cualesquiera agregados que se puedan haber formado.
El grupo qmmico RCG1 del compuesto de formula (I) debe ser reactivo hacia los grupos qmmicos RCG2 presentes en el agente de union, especialmente hacia los grupos amino presentes en anticuerpos, habiendo sido introducidos dichos grupos qmmicos RCG2, cuando sea apropiado, por el agente modificador, a fin de ligar el compuesto de formula (I) al agente de union a traves de la formation de un enlace covalente.
Segun una variante, en la etapa (ii) el conjugado formado en la etapa (i) se separa del agente de union sin reaccionar y de cualesquiera agregados que puedan estar presentes en la solucion. Segun otra variante, en la etapa (ii) el conjugado procedente de la etapa (i) se separa solamente del compuesto de formula (I) sin reaccionar y de los agregados que se puedan haber formado, y cualquier agente de union sin reaccionar se deja en solucion.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
La solution acuosa del agente de union se puede tamponar con al menos un tampon, a modo de ejemplo fosfato potasico o acido N-2-hidroxietilpiperacino-N-2-etanosulfonico (tampon de HEPES). El tampon depende de la naturaleza del agente de union. El compuesto de formula (I) se disuelve en un disolvente organico polar, por ejemplo DMSO o DMA.
La reaction tiene lugar a una temperatura generalmente de entre 20 y 40°C. El tiempo de reaction puede variar entre 1 y 24 horas. La reaccion entre el agente de union y el compuesto de formula (I) se puede verificar mediante SEC con un detector refractometrico y/o ultravioleta, a fin de determinar su avance. Si el grado de injerto es insuficiente, la reaccion se puede dejar durante mas tiempo y/o se puede anadir compuesto de formula (I). Se puede hacer referencia al metodo general dado en la seccion de ejemplos para detalles adicionales referentes a las condiciones particulares que se pueden usar para la conjugation.
Un experto en la tecnica tiene a su disposition diversas tecnicas cromatograficas para la separation de la etapa (ii): el conjugado se puede purificar, por ejemplo, mediante cromatografia de exclusion esterica (SEC), mediante cromatografia de adsorcion (tal como intercambio ionico, IEC), mediante cromatografia de interaction hidrofoba (HIC), mediante cromatografia de afinidad, mediante cromatografia sobre soportes mixtos tales como hidroxiapatito ceramico, o mediante HPLC. Tambien se puede usar la purification mediante dialisis o diafiltracion.
El termino "agregados" significa asociaciones que se pueden formar entre dos o mas agentes de union, posiblemente habiendose modificado los agentes de union mediante conjugacion. Los agregados son capaces de formarse bajo la influencia de un gran numero de parametros tales como alta concentration del agente de union en la solucion, el pH de la solucion, altas fuerzas de cizalladura, el numero de dimeros injertados y su naturaleza hidrofoba, la temperatura (veanse las referencias citadas en la introduction de J. Membrane Sci. 2008, 318, 311316), ocasionalmente no explicandose con precision la influencia de algunos de ellos. En el caso de las protemas o los anticuerpos, se puede hacer referencia a AAPS Journal, "Protein Aggregation and Bioprocessing" 2006, 8(3), E572-E579. El contenido de agregados se puede determinar por medio de tecnicas conocidas tales como SEC (vease a este respecto Analytical Biochemistry 1993, 212(2), 469-480). Despues de la etapa (i) o (ii), la solucion del conjugado puede sufrir una etapa (iii) de ultrafiltracion y/o diafiltracion. El conjugado en la solucion acuosa se obtiene asi despues de estas etapas.
Anticuerpo
El anticuerpo (vease a este respecto Janeway y cols. "Immunobiology", 5a edition, 2001, Garland Publishing, Nueva York) se puede elegir de los descritos especialmente en las solicitudes de patente WO 04043344, WO 08010101, WO 08047242, WO 05009369 (anti-CA6). El anticuerpo puede ser especialmente monoclonal, policlonal o multiespetifico. Tambien puede ser un fragmento de anticuerpo. Tambien puede ser un anticuerpo murino, humano, humanizado o quimerico.
Conjugado
Una conjugado comprende generalmente de aproximadamente 1 a 10 dimeros de pirrolo[1,4]benzodiazepina ligados al agente de union (este es el grado de injerto o la “relation de farmaco a anticuerpo" (o "DAR")). Este numero varia como una funcion de la naturaleza del agente de union y del dimero, y tambien de las condiciones operativas usadas para la conjugacion (por ejemplo el numero de equivalentes de dimero con relacion al agente de union, el tiempo de reaccion, la naturaleza del disolvente y de cualquier codisolvente). Poner en contacto el agente de union y el dimero conduce a una mezcla que comprende: varios conjugados que se distinguen individualmente entre si por diferentes DAR; posiblemente en agente de union sin reaccionar (en el caso de una reaccion incompleta); posiblemente agregados. La DAR, que se determina sobre la solucion final, por ejemplo mediante espectroscopia UV, corresponde asi a una DAR media.
En el caso en el que el agente de union es un anticuerpo, la espectroscopia UV puede ser un metodo usado para
determinar la DAR. Este metodo esta inspirado por el presentado en Antony S. Dimitrov (ed), LLC, 2009,
"Therapeutic Antibodies y Protocols", vol. 525, 445, Springer Science. Consiste en medir la absorbancia de una solucion de conjugado despues de la etapa de separacion (ii) a dos longitudes de onda senaladas WL1 y WL2. Se usan los siguientes coeficientes de extincion molar del anticuerpo puro y del dimero de pirrolo[1,4]benzodiazepina antes de la conjugacion.
Las absorbancias de la solucion de conjugado a WL1 y WL2 (AWLi) y (AWL2) se miden bien en el pico
correspondiente del espectro de SEC (lo que hace posible calcular una "DAR(SEC)") o bien al usar un
espectrofotometro UV estandar (lo que hace posible calcular una "DAR(UV)"). Las absorbancias se pueden expresar en la forma:
Awli = (cd x eowLi)+ (ca x Bawli)
10
15
20
25
30
35
AwL2 - (Cd X Bd WL2) + (Ca X 6AWL2) ecuaciones para las que:
• cD y cA indican, respectivamente, las concentraciones en la solution de la parte del conjugado relacionada con el d^ero de pirrolo[1,4]benzodiazepina y la parte del conjugado relativa al anticuerpo;
• eD WLi y eD WL2 indican, respectivamente, los coeficientes de extincion molar del dimero de pirrolo[1,4]benzodiazepina antes de la conjugation a las longitudes de onda WL1 y WL2;
• eA WL1 y eA WL2 indican, respectivamente, los coeficientes de extincion molar del anticuerpo puro a las dos longitudes de onda WL1 y Wl2.
El termino "anticuerpo puro" significa el anticuerpo al que no esta ligada pirrolo[1,4]benzodiazepina, es decir, el anticuerpo antes de la etapa de conjugacion.
La resolucion de estas dos ecuaciones conduce a:
cD = [(eA WL1 X Awi_2) - (eAWL2X Awu)] / [(eDWL2X BAWLl) - (eAWL2X Bdwli)]
La DAR media corresponde entonces a cD/cA. En el caso de los dimeros de pirrolo[1,4]benzodiazepina, las dos longitudes de onda consideradas son: WL1= 280 nm y WL2= 320 nm. La DAR media esta preferiblemente entre 1 y 10, y preferiblemente entre 1,5 y 7.
El conjugado se puede usar como un agente anticanceroso. En virtud de la presencia del agente de union, el conjugado se hace muy selectivo hacia celulas tumorales en vez de celulas sanas. Esto hace posible dirigir el compuesto de formula (I) que tiene actividad anticancerosa a un ambiente cercano a estas celulas tumorales o directamente a las mismas (veanse a este respecto las siguientes publicaciones que describen el uso de conjugados de anticuerpos monoclonales en el tratamiento del cancer: "Antibody-drug conjugates for cancer therapy" Carter P.J. y cols., Cancer J. 2008, 14, 154-169; "Targeted cancer therapy: conferring specificity to cytotoxic drugs" Chari R., Acc. Chem. Res. 2008, 41, 98-107). Es posible trata canceres solidos o fiquidos.
El conjugado se formula en la forma de una solucion acuosa tamponada a una concentration generalmente de entre 1 y 10 mg/ml. Esta solucion se puede inyectar en forma de perfusion como tal, o se puede rediluir para formar una solucion de perfusion.
Ejemplos
Metodo A: Cromatografia de fiquidos de alta presion - Espectrometria de masas (LMSC)
Los espectros de adquirieron en una maquina Waters UPLC-SQD en modo de ionization por electropulverizacion positivo y/o negativo (ES+/-). Condiciones cromatograficas: columna: ACQUITY BEH C18- 1,7 ^m - 2,1x50 mm; disolventes: A: H2O (0,1% de acido formico) B: CH3CN (0,1% de acido formico); temperatura de la columna: 50°C; caudal: 1 ml/min; gradiente (2 min): de 5 a 50% de B en 0,8 min; 1,2 min: 100% de B; 1,85 min: 100% de B; 1,95: 5% de B.
Metodo B: Cromatografia de fiquidos de alta presion - Espectrometria de masas (LMSC)
Los espectros de adquirieron en una maquina Waters ZQ en modo de electropulverizacion positivo y/o negativo (ES+/-) con un detector U.V. DAD 200<WL<400 nm. Condiciones cromatograficas: columna: Fenomenex Kinetex C18 100A 3x50 mm, diametro de parficula 2,6 ^m; disolventes: A: H2O (0,1% de acido formico) B: CH3CN; temperatura de la columna: 50°C; caudal: 1 ml/min; gradiente (6 min): 6% de B durante 0,80 min; de 6 a 100% de B en 3,9 min; 4,80 min: 100% de B; 5 min: 6% de B; 6 min: 6% de B.
Metodo C: Cromatograffa de ffquidos de alta presion - Espectrometna de masas (LMSC)
Los espectros de adquirieron en una maquina Waters ZQ en modo de electropulverizacion positivo y/o negativo (ES+/-) con un detector U.V. DAD 200<WL<400 nm. Condiciones cromatograficas: columna: columna Phenomenex Kinetex C18 3x100 mm, diametro de parffcula 2,6 pm; disolventes: A: H2O (0,1% de acido formico) B: CH3CN; 5 temperatura de la columna: 50°C; caudal: 0,8 ml/min; gradiente (8,2 min): 4% de B durante 0,15 min; de 6 a 100%
de B en 6,85 min; 7,1 min: 100% de B; 7,4 min: 4% de B; 8,2 min: 4% de B.
Metodo D: desglicosilacion y espectrometna de masas (HRMS) de un conjugado
La desglicosilacion es una tecnica de digestion enzimatica que usa glicosidasa. Se realiza partiendo de 500 pl de conjugado + 100 pl de tampon Tris HCl 50 mM + 10 pl de enzima glicanasa-F (100 unidades de enzima 10 liofilizada/100 pl de agua). La mezcla se somete a turbulencia y se mantiene durante la noche a 37°C. La muestra desglicosilada esta entonces lista para ser analizada mediante HRMS. Dependiendo del caso, el analisis de HRMS de la muestra se puede realizar sin desglicosilacion previa. En ambos casos, los espectros de masas se obtuvieron en una maquina Waters Xevo Q-Tof en el modo de electropulverizacion positivo (ES+). Condiciones cromatograficas: columna Acquity UPLC Waters BEH 300 C4 2,1x150 mm, diametro de parffcula 1,7 pm; 15 disolventes: A: H2O + 0,1% de acido formico: B: CH3CN + 0,1% de acido formico; temperatura de la columna 70°C:
caudal 0,5 ml/min; gradiente (10 min): 20% de B durante 2 min 50 s; de 20 a 80% de B en 2 min 5 s; 8 min 50 s: 80%
de B; 8 min 55 s: 20% de B; 10 min: 20% de B.
Metodo E: Cromatograffa de ffquidos de alta presion - Espectrometna de masas (LMSC)
Los espectros de adquirieron en un conducto Waters UPLC-SQD en modo de ionizacion por electropulverizacion 20 positivo y/o negativo (ES+/-) con un detector U.V. DAD 210<WL<400 nm. Condiciones cromatograficas: columna: ACQUITY UPLC BEH C18- 1,7 pm - 2,1x30 mm; disolventes: A: H2O (0,1% de acido formico) B: CH3CN (0,1% de acido formico); temperatura de la columna: 45°C; caudal: 0,6 ml/min; gradiente (2 min): de 5 a 50% de B en 1 min; de 50 a 100% de B en 0,3 min; 1,45 min: 100% de B; de 100 a 5% de B en 0,3 min; 2 min: 100% de B.
Metodo F: Cromatograffa de ffquidos de alta presion - Espectrometna de masas (LMSC)
25 Los espectros de adquirieron en un conducto Waters ZQ en modo de electropulverizacion positivo y/o negativo (ES+/-) con un detector U.V. DAD 200<WL<400 nm. Condiciones cromatograficas: columna: XSelect CsH Waters C18 3x75 mm, diametro de parffcula 3,5 pm; disolventes: A: H2O (0,1% de acido formico) B: CH3CN (0,1% de acido formico); temperatura de la columna: 50°C; caudal: 0,8 ml/min; gradiente (6 min): 6% de B durante 0,80 min; de 6 a 100% de B en 3,9 min; 4,80 min: 100% de B; 5 min: 6% de B; 6 min: 6% de B.
30 Metodo G: Cromatograffa de ffquidos de alta presion - Espectrometna de masas (LMSC
Los espectros de adquirieron en una maquina Waters UPLC-SQD en modo de ionizacion por electropulverizacion positivo y/o negativo (ES+/-). Condiciones cromatograficas: columna: ACQUITY BEH C18- 1,7 pm - 2,1x50 mm; disolventes: A: H2O (0,1% de acido formico) B: CH3CN (0,1% de acido formico); temperatura de la columna: 50°C; caudal: 0,8 ml/min; gradiente (2,5 min): de 5 a 100% de B en 1,8 min; 2,40 min: 100% de B; 2,45 min: 100% de B; de 35 100 a 5% de B 0,05 min.
Se usa el anticuerpo hu2H11 (tambien conocido como hu53 2H11 en la pagina 15 del documento WO 2008010101; es un anticuerpo que comprende una Vh que tiene la secuencia de aminoacidos SEQ ID N° 24) o el anticuerpo hu2H11 R35R74 obtenido mediante la mutagenesis dirigida de hu53 2H11 (mencionado en la pagina 20 del 40 documento WO 2011039721; es un anticuerpo que comprende una Vh que tiene la secuencia de aminoacidos SEQ ID N° 18 y una VI que tiene la secuencia SeQ N° 16).
5
10
15
20
25
30
35
CapUulo 1: Nuevos derivados de tomaimicina Ejemplo de referencia 1:
1.1. 4-{2-[{2-[2-(2-Metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-(2-metil-2-mercapto-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)- iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1,4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]piridina
Se anade una solution de 17,5 mg de hidrocloruro de tris(2-carboxietil)fosfina y 15,8 mg de NaHCO3 en 370 ^l de agua a 20 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et- (E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,ic][1,4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridina disuelta en 900 ^l de MeOH y 400 ^l de DMF. La mezcla obtenida se agita durante 1 hora a temperatura ambiente y a continuation se concentro bajo presion reducida y se purifico mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Interchrom Puriflash Silica 15/35U 2G), usando un gradiente de 0 a 10% de MeOH en una mezcla de DCM/acetonitrilo 9:1. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se usan asi 7 mg de 4-{2-[metil-(2-metil-2-mercapto-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridina: LC/MS (A): tR= 1,06 min; [M+H]+: m/z 941; [M+H2O+H]+: m/z 959.
1.2. 4-{2-[{2-[2-(2-Metoxi-etoxi)-etoxil-etil}-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7- dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]piridina
Se anaden 19,4 ^l de MSC a una solucion de 30 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-2- metildisulfanil-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina y 65,5 ^l de diisopropiletilamina en 200 ^l de DCM enfriado hasta -20°C. Despues de agitar durante 20 minutos, la mezcla se hidroliza y la fase organica se lava con agua y a continuacion se seca sobre MgSO4 y se concentra bajo presion reducida. El residuo obtenido (36 mg) disuelto en 400 ^l de DMF se anade a una solucion de 26 mg de tomaimicina en 425 ^l de DMF, junto con 39,6 mg de K2CO3 y 15,8 mg de Kl. La mezcla se agita durante 12 horas a 30°C y a continuacion se hidroliza hasta que tiene lugar la precipitation. La materia insoluble se retira mediante filtration sobre un embudo sinterizado, se lava con DCM y a continuacion las fases organicas combinadas se concentran bajo presion reducida y se purifican mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF25-8g) usando un gradiente de 0 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida, se recogen en una mezcla de dioxano/agua 1/1 y se concentran de nuevo bajo presion reducida. Se obtienen asi 23 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis- [(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridina. 1H RMN (500 MHz, cloroformo-d): senales anchas: 1,20 a 1,78 (m, 12 H); 2,40 (s, 3 H); 2,70 a 3,10 (m, 10 H); 3,34 (m, 4 H); 3,49 a 3,70 (m, 8 H); 3,71 (s, 3 H); 3,91 (m, 2 H); 4,00 (s, 6 H); 4,27 (m, 4 H); 5,27 (m, 4 H); 5,60 (m, 2 H); 6,86 (s, 2 H); 7,00 (m, 2H); 7,56 (s, 2 H); 7,65 (d, J=4,4 Hz, 2 H). LC/MS (A): tR= 0,81 min; [M+H]+: m/z 987.
5
10
15
20
25
30
35
40
1.3. 4-{2-[{2-[2-(2-Metoxi-etoxi)-etoxil-etil}-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina
Se anaden 99 mg de 1-yodo-2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etano (B. Ben Aroya Bar Nir, J.F. Kadla Carbohydrate Polymers, 2009, 76, 60-67) y 54 mg de K2CO3 a una solution de 100 mg de 4-[2-(2-metil-2-metildisulfanil- propilamino)-etoxi]-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina en 2 ml de DMF. Despues de 12 horas a 60°C, la mezcla se complementa con 40 mg de 1-yodo-2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etano y 55 mg adicionales de K2CO3. La mezcla obtenida se agita durante 24 horas mas a 80°C. Despues de la concentration bajo presion reducida, el producto en bruto asi obtenido se disuelve en una cantidad minima de MeOH y se aplica sobre Mega BE-SCX, 1GM 6ML (Varian). Despues de lavar la fase con MeOH, el producto de interes se eluye con una solucion 2 N de amomaco en MeOH. La fase de MeOH se concentra bajo presion reducida y a continuation se reaplica sobre Mega BE-SCX, 2GM 12ML (Varian) segun el mismo protocolo. Las fases de metanol/NH3 se concentran bajo presion reducida y el residuo obtenido se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (columna de 10 g Merck SuperVarioFlash, Si60 15-40 ^m), usando un gradiente de 0 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen asi 30 mg de 4-{2-[{2-[2-(2- metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina. 1H RmN (400 MHz, DMSO-da): 1,27 (s, 6 H); 2,40 (s, 3 H); 2,75 (s, 2 H); 2,80 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 3,00 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 3,23 (s, 3 H); 3,40 (m, 2 H); 3,47 a 3,55 (m, 8 H); 4,12 (t, J=5,9Hz, 2 H); 4,45 (d, J=5,9 Hz, 4 H); 5,30 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 6,85 (s, 2 H). LC/MS (A): tR= 0,44 min; [M+H]+: m/z 479; [M-H+HCO2H]-: m/z 523.
1.4. 4-[2-(2-Metil-2-metildisulfanil-propilamino)-etoxil-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina
Se anaden 270 ^l de 2-(metilditio)-isobutiraldehido y 730 ^l de isopropoxido de titanio a una suspension de 390 mg de 4-[2-amino-etoxi]-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina (preparada despues de la desproteccion del grupo boc de 4-(2- terc-butoxicarbonilamino-etoxi)-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina descrita en la pagina 101 del documento WO 07085930) en 2 ml de THF. Despues de 20 min, se anaden 270 ^l mas de 2-(metilditio)-isobutiraldehido y 730 ^l de isopropoxido de titanio y la mezcla se agita durante 2 horas a temperatura ambiente. A continuacion, la mezcla se complementa con 6 ml de etanol, se agita durante 20 min a temperatura ambiente y a continuacion se complementa con 124 mg de cianoborohidruro sodico. Despues de agitar durante 45 minutos, se anaden 124 mg de cianoborohidruro sodico y, despues de agitar durante 1 hora, la mezcla se concentra bajo presion reducida y se diluye con EtOAcy agua. El precipitado resultante se separa por filtration y se disuelve en solucion acuosa de HCl 1 M. La fase acuosa obtenida se lleva hasta pH basico con solucion acuosa de hidroxido sodico 5 M, se extrae 3x con DCM y las fases organicas combinadas se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 322 mg de 4-[2-(2-metil-2- metildisulfanil-propilamino)-etoxi]-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 1,26 (s, 6 H); 1,81 (m ancho, 1 H); 2,39 (s, 3 H); 2,67 (s ancho, 2 H); 2,94 (t ancho, J=5,7 Hz, 2 H); 4,11 (t, J=5,7 Hz, 2 H); 4,45 (d, J=5,5 Hz, 4 H); 5,32 (t, J=5,5 Hz, 2 H); 6,85 (s, 2 H). LC/MS (A): tR= 0,24 min; [M+H]+: m/z 347.
Ejemplo 2
2.1. Acido 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,1a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8- iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etil}-amino)-butanoico
Se anaden 32 ^l de una solucion acuosa de hidroxido de litio 1 M a una solucion de 28 mg de 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et- (E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2- metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-butanoato de etilo en 527 ^l de THF y 61 ^l de agua. La mezcla se agita durante 1 hora 30 minutos a temperatura ambiente y se anaden a la misma 5 |jl adicionales de solucion acuosa de hidroxido de litio 1 M. Despues de agitar durante 1 hora 30 minutos a temperatura ambiente, la mezcla se acidifica hasta un
5
10
15
20
25
30
35
pH cercano a 3 al anadir 800 ^l de tampon de fosfato potasico (pH=3) y a continuation se extrae 5x con DCM. Las fases organicas se combinan, se secan sobre MgSO4, se concentran bajo presion reducida y se purifican mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF10-4g), usando un gradiente de 3 a 20% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 10,2 mg de acido 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirrolo[2,1c][1.4]benzo-diazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)- butanoico. LC/Ms (B): tR= 3,08min; [M+H]+: m/z 939.
2.2. 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]- piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etil}-amino)-butanoato de etilo
Se anaden 77 mg de K2CO3, 30,7 mg de yoduro potasico y 67 mg de 4-([2-(2,6-bis-metanosulfoniloximetil-piridin-4- iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-butirato de etilo a una solution de 50,4 mg de (S)-2-et-(E)-iliden-8- hidroxi-7-metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2.1-c][1.4]benzodiazepin-5-ona en 4 ml de DMF. La mezcla se calienta durante 18 horas a 30°C y a continuacion se enfria hasta temperatura ambiente, se filtra a traves de una membrana de 0,45 ^m, se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF15-12g), usando un gradiente de 0 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 51 mg de 4-([2- (2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4- iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi] etil}-amino)-butanoato de etilo. lC/MS (B): tR= 3,20 min; [M+H]+: m/z 967.
2.3. ([2-(2,6-bis-metanosulfoniloximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-butirato de etilo
Se anaden 110 ^l de diisopropiletilamina y 34 ^l de MSC a una solucion de 51 mg de 4-([2-(2,6-bis-hidroximetil- piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-butanoato de etilo en 5 ml de DCM, preenfriada hasta - 25°C. La mezcla se agita durante 1 hora a -15°C y a continuacion se lava con 5 ml de agua. La fase acuosa se extrae con 5 ml de DCM. Las fases organicas se combinan, se secan sobre MgSO4 y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 69 mg de 4-([2-(2,6-bis-metanosulfoniloximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]- etil}-amino)-butirato de etilo. LC/MS (B): tR= 2,87 min; [M+H]+: m/z 615.
2.4. 4-([2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etil}-amino)-butanoato de etilo
Se anaden 207 mg de 1-yodo-2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etano y 192 ^l de diisopropiletilamina a una solucion de 180 mg de 4-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-butanoato de etilo en 18 ml de acetonitrilo. La mezcla se calienta durante 3 dias a 80°C y a continuacion se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (columna de 15 g Merck SuperVarioFlash, Si60 15-40 ^m), usando una mezcla de DCM/MeOH/agua (40/5/0.5). Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 51 mg de 4-([2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi- etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-butanoato de etilo. LC/MS (B): tR= 0,70 min; [M+H]+: m/z 459.
5
10
15
20
25
30
2.5. 4-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-butanoato de etilo
Se anaden 766 mg de carbonato de cesio y 160 ^l de tiofenol a una solution de 390 mg de 4-[[2-(2,6-bis- hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(2-nitrobencenosulfonil)-amino]-butanoato de etilo en 10 ml de acetonitrilo, bajo argon. La mezcla se agita durante 17 horas a temperatura ambiente y a continuation se filtra a traves de un sinterizado de porosidad 4. La torta se lava con EtOAc y el filtrado se concentra bajo presion reducida y se purifica en un cartucho Mega BE-SCX, 2GM 12ML (Varian), usando un lavado con MeOH y separation del producto esperado con una solucion 2 N de amomaco en MeOH. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 183 mg de 4-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]- butanoato de etilo. LC/MS (B): tR= 0,68 min; [M+H]+: m/z 313.
2.6. 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(2-nitro-benceno-sulfonil)-amino]-butanoato de etilo
Se anaden 344 ^l de 3-bromo-butirato de etilo y 1,38 g de K2CO3 a una solucion de 767 mg de N-[2-(2,6-bis- hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-2-nitrobencenosulfonamida en 15 ml de DMF, bajo argon. La mezcla se agita durante aproximadamente 20 horas a 40°C y a continuacion se filtra a traves de un sinterizado de porosidad 4. La torta se lava con EtOAc y el filtrado se concentra bajo presion reducida. El producto en bruto se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (columna de 90 g Merck SuperVarioPrep, Si60 15-40 ^m), usando un gradiente de 0 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 395 mg de 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(2-nitro- bencenosulfonil)-amino]-butanoato de etilo. LC/MS (B): tR= 2,72 min; [M+H]+: m/z 498; [M+HcO2H-H]-: m/z 542.
2.7. N-[2-(2,6-Bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-2-nitro-bencenosulfonamida
Se anaden sucesivamente 315 mg de borohidruro sodico y 941 mg de CaCl2 a una solucion de 1,3 g de 4-[2-(2-nitro- bencenosulfonilamino)-etoxi]-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo en 200 ml de etanol. La mezcla se agita durante 1 hora 30 minutos a temperatura ambiente y a continuacion se anaden a la misma 50 ml de agua. El etanol se retira bajo presion reducida y se anaden 50 ml de agua al residuo obtenido; la fase acuosa se extrae 3x con EtOAc. Las fases organicas se combinan, se lavan con solucion saturada de NaCl, se secan sobre MgSO4 y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 1,06 g de N-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-2-nitro-bencenosulfonamida. LC/MS (A): tR= 0,57 min; [M+H]+: m/z 384.
5
10
15
20
25
30
35
40
2.8. 4-[2-(2-Nitro-bencenosulfonilamino)-etoxi]-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo
Se anaden 798 mg de cloruro de 2-nitrobencenosulfonilo a una solution de 957 mg de monohidrocloruro de 4-(2- amino-etoxi)-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo en 30 ml de DCM y 734 ^l de piridina, preenfriados hasta aproximadamente 5°C. La mezcla se calienta hasta temperatura ambiente y se agita durante 2 horas. A continuation, se anaden a la misma 244 ^l de piridina y 665 mg de cloruro de 2-nitrobencenosulfonilo adicionales y la agitation se continua durante 15 horas. La mezcla se lava con 25 ml de agua y la fase acuosa se extrae 2x con 25 ml de DCM. Las fases organicas se combinan, se secan sobre MgSO4, se concentran bajo presion reducida y se purifican mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (columna de 150 g Merck EasyVarioPrep, Si60 1540 ^m), usando un gradiente de 0 a 10% de EtOAc en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 960 mg de 4-[2-(2-nitro-bencenosulfonilamino)-etoxi]- piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 1,35 (t, J=7,2 Hz, 6H); 3,41 (t, J=5,2 Hz, 2 H); 4,22 (t, J=5,2 Hz, 2 H); 4,39 (c, J=7,2 Hz, 4 H); 7,50 (s, 2 H); 7,80 (m, 2 H); 7,92 (m, 1 H); 8,04 (m, 2 H); 8,40 (m, 1 H). LC/MS (C): tR= 3,50 min; [M+H]+: m/z 468.
2.9. Monohidrocloruro de 4-(2-amino-etoxi)-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo
Se anaden 20,7 ml de acido clorhidrico 4 N a una solucion de 2,64 g de 4-(2-terc-butoxicarbonilamino-etoxi)-piridino- 2,6-dicarboxilato de dietilo (descrito en la pagina 101 del documento WO 07085930) en 27 ml de dioxano. La mezcla se agita durante aproximadamente 20 horas a temperatura ambiente y a continuacion se concentra bajo presion reducida. El residuo de evaporation se recoge en aproximadamente 70 ml de dioxano y a continuacion se concentra de nuevo bajo presion reducida. La operation se repite 3x. La mezcla se recoge en 50 ml de ferc-butil-metil-eter y la suspension obtenida se filtra a traves de un sinterizado de porosidad 4. La torta se lava con ferc-butil-metil-eter y se seca en un desecador bajo presion reducida a temperatura ambiente. Se obtienen 2 g de monohidrocloruro de 4-(2- amino-etoxi)-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 1,35 (t, J=7,2 Hz, 6H); 3,26 (m, 2H); 4,39 (c, J=7,2 Hz, 4 H); 4,45 (m, 2 H); 7,77 (s, 2 H); 8,16 (m ancho, 3 H). LC/MS (C): tR= 2,39 min; [M+H]+: m/z 283.
Ejemplo 3
3.1. Acido 3-([2-(2,6-Bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8- iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etil}-amino)-propanoico
Se anaden 35 ^l de una solucion acuosa de hidroxido de litio 1 M a una solucion de 30 mg de 3-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et- (E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2- metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-propanoato de metilo en 576 ^l de THF y 67 ^l de agua. La mezcla se agita durante 1 hora 30 minutos a temperatura ambiente y a continuacion se recoge en 4 ml de DCM y se acidifica hasta un pH cercano a 3 al anadir 1 ml de tampon de fosfato potasico (pH=3). La mezcla se extrae 4x con DCM y las fases organicas se combinan, se secan sobre MgSO4, se concentran bajo presion reducida y se purifican mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF10-4g), usando un gradiente de 10 a 20% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 13 mg de acido 3-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro- pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)- propanoico. LC/MS (B): tR= 3,07 min; [M+H]+: m/z 925
5
10
15
20
25
30
Se anaden 128 mg de K2CO3, 51 mg de Kl y 110 mg de 3-([2-(2,6-bis-metanosulfoniloximetil-piridin-4-iloxi)-etilH2-[2- (2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-propanoato de metilo a una solution de 84 mg de (S)-2-et-(E)-iliden-8-hidroxi-7- metoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2.1-c][1.4]benzodiazepin-5-ona en 5 ml de DMF. La mezcla se calienta durante 18 horas a 30°C y a continuation se enfria hasta temperatura ambiente, se filtra a traves de una membrana de 0,45 ^m, se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF15-24g), usando un gradiente de 0 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 33 mg de 3-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et- (E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2- metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-propanoato de metilo. LC/MS (B): tR= 3,21 min; [M+H]+: m/z 939
3.3. 3-([2-(2,6-bis-metanosulfoniloximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-propanoato de metilo
Se anaden 183 ^l de diisopropiletilamina y 57 ^l de cloruro de metanosulfonilo a una solucion de 80 mg de 3-([2-(2,6- bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-propanoato de metilo en 8 ml de DCM, preenfriada hasta -25°C,. La mezcla se agita durante 1 hora a -15°C y a continuacion se lava con 5 ml de agua. La fase acuosa se extrae con 5 ml de DCM. Las fases organicas se combinan, se secan sobre MgSO4 y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 110 mg de 3-([2-(2,6-bis-metanosulfoniloximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2- metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-propanoato de metilo. lC/MS (B): tR= 2,67 min; [M+H]+: m/z 587
3.4. 3-([2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-propanoato de metilo
Se anaden 356 mg de 1-yodo-2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etano y 330 ^l de diisopropiletilamina a una solucion de 284 mg de 3-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-propanoato de metilo en 28 ml de acetonitrilo. La mezcla se calienta a 80°C durante 3 dias y a continuacion se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF25-40g), usando un gradiente de 5 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 165 mg de 3-([2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]- etil}-amino)-propanoato de metilo. LC/MS (B): tR= 0,44 min; [M+H]+: m/z 431.
3.5. 3-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-propanoato de metilo
Bajo argon, se anaden 325 mg de carbonato de cesio y 67 ^l de tiofenol a una solucion de 155 mg de 3-[[2-(2,6-bis- hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-propanoato de metilo en 6 ml de acetonitrilo. La mezcla se agita durante 4 horas a temperatura ambiente y a continuacion se filtra a traves de un sinterizado de porosidad 4. La torta se lava con EtOAc y el filtrado se concentra bajo presion reducida y se purifica en un cartucho
Mega BE-SCX, 2GM 12ML (Varian), usando lavado con MeOH y separation del producto esperado con una solution 2 N de amomaco en MeOH. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 82 mg de 3-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-propanoato de metilo. LC/MS (B): tR= 0,33 min; [M+H]+: m/z 285.
5 3.6. 3-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-propanoato de metilo
Se anaden 2 ml de TFA a una solucion de 670 mg de 3-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-propanoato de ferc-butilo en 20 ml de DCM. La mezcla se agita durante 6 horas a temperatura ambiente y a continuation se concentra bajo presion reducida, se recoge en DCM y se concentra de nuevo bajo presion reducida. Se anaden, a 10 5°C, 7 ml de una solucion 2 M de (trimetilsilil)diazometano en hexano al residuo obtenido, disuelto en 10 ml de
MeOH. La mezcla se agita durante 1 hora 30 minutos a 5°C y a continuacion se anaden 200 ^l de acido acetico. La mezcla se recoge en 30 ml de agua y 30 ml de EtOAc. La fase acuosa se extrae 2x con 30 ml de EtOAc. Las fases organicas se combinan, se lavan con solucion saturada de NaCl, se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF15-24g), usando un 15 gradiente de 0 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 155 mg de 3-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]- propanoato de metilo. LC/MS (C): tR= 2,56 min; [M+H]+: m/z 470.
3.7. 3-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-propanoato de ferc-butilo
20 Se anaden sucesivamente 152 mg de borohidruro sodico y 447 mg de CaCl2 a una solucion de 0,8 g de 4-{2-[(2-terc- butoxicarbonil-etil)-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-etoxi}-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo en 80 ml de etanol. La mezcla se agita a temperatura ambiente y a continuacion se anaden 20 ml de agua al final de la reaction. El etanol se retira bajo presion reducida, se anaden 100 ml de agua al residuo obtenido y la fase acuosa se extrae 3x con EtOAc. Las fases organicas se combinan, se lavan con solucion saturada de NaCl, se secan sobre MgSO4 y se 25 concentran bajo presion reducida. Se obtienen 670 mg de 3-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(2- nitrobencenosulfonil)-amino]-propanoato de ferc-butilo. LC/MS (C): tR= 3 min; [M+H]+: m/z 512.
3.8. 4-{2-[(2-terc-butoxicarbonil-etil)-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-etoxi}-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo
Se anaden 16,2 g de K2CO3 y 5,6 g de 4-hidroxi-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo a una solucion de 10,6 g de 330 [(2-metanosulfoniloxi-etil)-(2-nitrobencenosulfonil)-amino]-propionato de ferc-butilo en 220 ml de DMF. La mezcla se calienta durante 20 horas a 60°C y a continuacion se concentra bajo presion reducida y se recoge en 200 ml de agua y 200 ml de EtOAc. La fase acuosa se extrae 2x con EtOAc. Las fases organicas se combinan, se lavan con solucion saturada de NaCl, se secan sobre MgSO4, se concentran bajo presion reducida y se purifican mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (columna de 600 g Merck EasyVarioPrep, Si60 15-40 ^m), usando un 35 gradiente de 0 a 20% de EtOAc en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 6,56 g de 4-{2-[(2-terc-butoxicarbonil-etil)-(2-nitro-bencenosulfonil)- amino]-etoxi}-piridino-2,6-dicarboxilato de dietilo. LC/MS (C): tR= 4,14 min; [M+H]+: m/z 596.
3.9. 3-[(2-Metanosulfoniloxi-etil)-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-propionato de ferc-butilo
Se anaden 8,1 ml de diisopropiletilamina a una solucion de 9,2 g de 3-[(2-hidroxi-etil)-(2-nitro-bencenosulfonil)- amino]-propionato de ferc-butilo en 92 ml de DCM. La mezcla se enfria hasta -5°C y se anade gota a gota una 5 solucion de 2,34 ml de MSC en 10 ml de DCM. Despues de calentar hasta temperatura ambiente, la mezcla se agita durante aproximadamente 2 horas y a continuacion se complementa con 100 ml de agua. La fase acuosa se extrae dos veces con DCM y las fases organicas se combinan, se secan sobre MgSO4, se concentran bajo presion reducida y se purifican mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF40- 240g), usando un gradiente de 0 a 5% de acetato de etilo en DCM. Las fracciones que contienen el producto 10 deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 10,62 g de 3-[(2-metanosulfoniloxi-etil)-(2- nitro-bencenosulfonil)-amino]-propionato de ferc-butilo. LC/MS (C): tR= 3,77 min; [M+Na]+: m/z 475.
3.10. 3-[(2-Hidroxi-etil)-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-propionato de ferc-butilo
Bajo argon, se anaden 8,8 ml de 3-bromopropionato de ferc-butilo y 14,6 g de K2CO3 a una solucion de 8,7 g de N- 15 (2-hidroxi-etil)-2-nitro-bencenosulfonamida (Skerlj, R.T.; Nan, S.; Zhou, Y.; Bridger, G.J. Tefrahedron Leff. 2002 (43) 7569-7571) en 87 ml de DMF. La mezcla se agita durante 15 horas a 40°C y a continuacion se anadieron 5 ml adicionales de 3-bromopropionato de ferc-butilo. La mezcla se calienta a 40°C durante la noche y a continuacion se filtra a traves de un sinterizado de porosidad 4. La torta se lava con acetato de etilo y a continuacion el filtrado se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (columna de 20 400 g Merck EasyVarioPrep, Si60 15-40 pm), usando un gradiente de 0 a 10% de EtOAc en DCM. Las fracciones
que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 9,54 g de 3-[(2- hidroxi-etil)-(2-nitro-bencenosulfonil)-amino]-propionato de ferc-butilo. LC/MS (C): tR= 3,39 min; [M+Na]+: m/z 397.
Ejemplo 4
4.1. 4-[2-((2-Metil-2-metildisulfanil-propil)-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-etoxil-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)- 25 iliden-7-dimetoxi-1,2,3,1a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]piridina
Preparada como para el Ej. 1, partiendo de 4-[2-((2-metil-2-metildisulfanil-propil)-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]- etil}-amino)-etoxi]-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina:
30 1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): 1,22 (s, 6 H); 1,69 (d, J=7,0 Hz, 6 H); 2,28 a 2,44 (m, 6 H); 2,36 (m, 3 H); 2,71 (s, 2
H); 2,77 (t, J=6,7 Hz, 2 H); 2,88 a 3,08 (m, 6 H); 3,42 a 3,55 (m, 12 H); 3,86 (s, 6 H); 3,88 (m, 2 H); 4,10 (s, 4 H); 4,15 (t, J=5,7 Hz, 2 H); 5,17 (d, J=13,2 Hz, 2 H); 5,23 (d, J=13,2 Hz, 2 H); 5,55 (m, 2 H); 6,93 (s, 2 H); 7,06 (s, 2 H); 7,38 (s, 2 H); 7,76 (d, J=4,4 Hz, 2 H). LC/MS (A): tR= 0,68 min; [M+H]+: m/z 1042; [M+2H]2+: m/z 521,5 (pico base)
5
10
15
20
25
30
35
40
4.2. 4-[2-((2-Metil-2-metildisulfanil-propil)-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etil}-amino)-etoxil-2,6-bis-(hidroximetil)- piridina
Preparada como para el Ej. 1, partiendo de 4-{2-[2-(2-yodo-etoxi)-etoxi]-etil}-morfolina y 4-[2-(2-metil-2-metildisulfanil- propilamino)-etoxi]-2,6-bis-(hidroximetil)-piridina:
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 1,26 (s, 6 H); 2,36 (m, 4 H); 2,39 (s, 3 H); 2,43 (t, J= 5,9 Hz, 2 H); 2,74 (s, 2 H); 2,79 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 3,00 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 3,46 a 3,55 (m, 12 H); 4,12 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 4,45 (d, J=5,9 Hz, 4 H); 5,30 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 6,84 (s, 2 H). LC/MS (E): tR= 0,33 min; [M+H]+: m/z 534
4.3. 4-{2-[2-(2-Yodo-etoxi)-etoxil-etil}-morfolina
A una solution de 1,12 g de 2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etanol y 940 pl de diisopropiletilamina en 6 ml de DCM, enfriada a 0°C, se anade una solucion de 440 pl de cloruro de metanosulfonilo en 3 ml de DCM a la misma temperatura. La mezcla se agita durante 1 hora a 0°C y a continuation se lava con 8 ml de agua. La fase organicas se seca sobre MgSO4 y se concentra bajo presion reducida.
El residuo obtenido se disuelve en 30 ml de acetona y a continuacion se complementa con 1,42 g de yoduro sodico. Despues de agitar a reflujo durante 5 horas, la materia insoluble se retira mediante filtration sobre un embudo sinterizado. El filtrado se concentra bajo presion reducida y a continuacion se recoge en diclorometano. La materia insoluble se retira de nuevo mediante filtracion, y el filtrado se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF25-40g), usando un gradiente de 0 a 5% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 1,09 g de 4-{2-[2-(2-yodo-etoxi)-etoxi]-etil}-morfolina 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 2,39 (m, 4 H); 2,45 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 3,32 (t, J=6,4 Hz, 2 H); 3,47 a 3,60 (m, 10 H); 3,67 (t, J=6,4 Hz, 2 H). LC/MS (A): tR= 0,29 min; [M+H]+: m/z 330
Ejemplo 5
5.1. 4-([2-(2,6-Bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]- piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etoxil-propionil)-amino]-butanoato de N-hidroxisuccinimidilo
Se anaden 67 pl de DIPEA y 33 mg de carbonato de N,N'-disuccinimidilo a 65 mg de acido 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et- (E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidro-pirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2- (2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoico disueltos en 3,8 ml de ThF. Despues de 1 hora a temperatura ambiente, se anaden 8 ml de DCM y la fase organica resultante se lava dos veces con agua, se seca sobre MgSO4, se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF10-8g), usando un gradiente de 0 a 7,5% de metanol en DCM. Se obtienen asi 35 mg de 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8- iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de N-
hidroxisuccinimidilo.
LC/MS (F): tR= 3,54 min; [M+H]+: m/z 1108; [M+H2O+H]+: m/z 1126; [M+2H2O+H]+: m/z 1144
5
10
15
20
25
30
35
Preparado como para el Ej. 2, partiendo de 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1 c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]- butanoato de metilo:
LC/MS (E): tR= 1,05 min; [M+H]+: m/z 1011; [M+H2O+H]+: m/z 1029; [M+2H2O+H]+: m/z 1047
5.3. 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]- piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de metilo
Preparado como para el Ej. 2, partiendo de 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)- etoxi]-etoxil-propionil)-amino]-butanoato de etilo:
LC/MS (E): tR= 1,14 min; [M+H]+: m/z 1025; [M+H2O+HP m/z 1043; [M+2H2O+H]+: m/z 1061
5.4. 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de metilo
Se anaden 1.14 ml de TFA a una solucion de 460 mg de 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2- metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de terc-butilo en 7 ml de DCM. La mezcla se agita durante 15 horas a temperatura ambiente y a continuacion se concentra bajo presion reducida. Se anaden, a 5°C, 3,1 ml de una solucion 2 M de (trimetilsilil)diazometano en hexano al residuo obtenido, disuelto en 3,8 ml de MeOH. La mezcla se agita durante 1 hora a 5°C y a continuacion se anaden 100 ^l de acido acetico. Despues de la concentration bajo presion reducida, el residuo obtenido se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF25-40g), usando un gradiente de 2 a 10% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 265 mg de 4-[[2-(2,6-bis- hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de metilo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): mezcla 50%-50% de conformeros con: 1,67 a 1,86 (m, 2 H); 2,27 (t, J=7,3 Hz, 1 H); 2,36 (t, J=7,3 Hz, 1 H); 2,57 (t, J=6,7 Hz, 1 H); 2,66 (t, J=6,7 Hz, 1 H); 3,23 (s, 3 H); 3,31 a 3,75 (m, 21 H); 4,14 (t, J=5,6 Hz, 1 H); 4,19 (t, J=5,6 Hz, 1 H); 4,45 (m, 4 H); 5,30 (m, 2 H); 6,84 (s, 1 H); 6,86 (s, 1 H). LC/MS (G): tR= 0,62 min; [M+H]+: m/z 517; [M-H+HCO2H]-: m/z 561
5.5. 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de ferc-butilo
Se anade una solucion de 658 mg de 3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propanoato de N-hidroxisuccinimidilo (cfr. M.A. Miller, N.B. Malkar, D. Severynse-Stevens, K.G. Yarbrough, M.J. Bednarcik, R.E. Dugdell, M.E. Puskas, R. Krishnan, K.D. James Bioconjugate Chem., 2006, 17, 267-274) en 4 ml de DMF a una solucion de 560 mg de 3-[2- (2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-butanoato de terc-butilo en 4 ml de DMF. La mezcla se agita a temperatura ambiente durante 15 horas y a continuacion se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante
5
10
15
20
25
30
35
40
cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (Analogix Super Flash SiO2 SF40-80g), usando un gradiente de 0 a 10% de una solution al 10% de amomaco en MeOH, en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 460 mg de 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)- etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de ferc-butilo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): mezcla 50%-50% de conformeros con: 1,39 (s, 4,5 H); 1,40 (s, 4,5 H); 1,63 a 1,81 (m, 2 H); 2,16 (t, J=7,3 Hz, 1 H); 2,25 (t, J=7,3 Hz, 1 H); 2,57 (t, J=6,7 Hz, 1 H); 2,66 (t, J=6,7 Hz, 1 H); 3,23 (s, 3 H); 3,31 a 3,74 (m, 18 H); 4,14 (t, J=5,7 Hz, 1 H); 4,19 (t, J=5,7 Hz, 1 H); 4,45 (m, 4 H); 5,30 (m, 2 H); 6,84 (s, 1 H); 6,86 (s, 1 H). LC/MS (G): tR= 0,80 min; [M+H]+: m/z 559; [M-H+HCO2H]-: m/z 603.
5.6. 3-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilaminol-butanoato de ferc-butilo
Preparado como para el Ej. 2, partiendo de 3-bromo-butirato de ferc-butilo y N-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)- etil]-2-nitro-bencenosulfonamida:
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 1,39 (s, 9 H); 1,62 (t, J=7,2 Hz, 2 H); 1,84 (m ancho, 1 H); 2,22 (t, J=7,2 Hz, 2 H); 2,55 (t, J=7,2 Hz, 2 H); 2,86 (t, J=5,7 Hz, 2 H); 4,07 (t, J=5,7 Hz, 2 H); 4,45 (d, J=5,7 Hz, 4 H); 5,29 (t, J=5,7 Hz, 2 H); 6,85 (s, 2 H). LC/MS (A): tR= 0,40 min; [M+H]+: m/z 341; pico base: m/z 156.
Ejemplo 6
6.1. 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]- piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de etilo
Preparado como para el Ej. 5, partiendo de 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)- etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de etilo:
1H RMN (500 MHz, DMSO-d6): mezcla 50%-50% de conformeros con: 1,11 a 1,18 (m, 3 H); 1,54 a 1,82 (m, 8 H); 2,24 (d, J=7,3 Hz, 1 H); 2,32 (d, J=7,3 Hz, 1 H); 2,53 a 2,68 (m, 4 H); 2,87 a 3,07 (m, 4 H); 3,20 (s, 1,5 H); 3,21 (s, 1,5 H); 3,31 a 4,27 (m, 32 H); 5,16 (d, J=13,2 Hz, 2 H); 5,22 (d, J=13,2 Hz, 2 H); 5,55 (c, J=7,0 Hz, 2 H); 6,94 (s, 2 H); 7,08 (s, 2 H); 7,37 (s, 2 H); 7,76 (d, J=4,4 Hz, 2 H). LC/MS (A): tR= 0,86 min; [M+H]+: m/z 1039; pico base: m/z 376.
6.2. 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de etilo
Preparado como para el Ej. 5, partiendo de 3-[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilamino]-butanoato de etilo:
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) mezcla 50%-50% de conformeros con: 1,16 (t, J=7,1 Hz, 1,5 H); 1,17 (t, J=7,1 Hz, 1,5 H); 1,67 a 1,97 (m, 2 H); 2,25 (t, J=7,3 Hz, 1 H); 2,34 (t, J=7,3 Hz, 1 H); 2,57 (t, J=6,8 Hz, 1 H); 2,66 (t, J=6,8 Hz, 1 H); 3,23 (s, 3 H); 3,32 a 3,74 (m, 18 H); 4,04 (c, J=7,1 Hz, 1 H); 4,05 (c, J=7,1 Hz, 1 H); 4,14 (t, J=5,7 Hz, 1 H); 4,19 (t, J=5,7 Hz, 1 H); 4,45 (m, 4 H); 5,30 (m, 2 H); 6,84 (s, 1 H); 6,86 (s, 1 H). LC/MS (A): tR= 0,47 min; [M+H]+: m/z 531; pico base: m/z 376; [M-H+HCO2H]-: m/z 575
5
10
15
20
25
30
35
40
Ejemplo 7
Preparado como para el Ej. 5, partiendo de 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-morfolin-4-il- etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de metilo:
LC/MS (E): tR= 0,88 min; [M+H]+: m/z 1080; [M+H2O+H]+: m/z 1098; [M+2H2O+H]+: m/z 1116
7.2. 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxil-etoxi}-propionil)-amino]-
butanoato de metilo
Preparado como para el Ej. 5, partiendo de 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-morfolin-4-il- etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de ferc-butilo:
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 1,83 (m, 2 H); 2,33 (m, 2 H); 2,42 (m, 4 H); 2,48 (t, J=5,8 Hz, 2 H); 2,61 (m, 2 H); 3,40 (m, 2 H); 3,49 a 3,55 (m, 10 H); 3,56 (m, 4 H); 3,62 (s, 3 H); 3,69 (t ancho, J=6,6 Hz, 4 H); 4,21 (t, J=5,6 Hz, 2 H); 4,49 (d, J=5,3 Hz, 4 H); 4,90 (t, J=5,3 Hz, 2 H); 6,87 (s, 2 H). LC/MS (G): tR= 0,50 min; [M+H]+: m/z 572; pico base: m/z 198; [M-H+HCO2H]-: m/z 616
7.3. 4-[[2-(2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxil-etoxil-propionil)-amino]-
butanoato de ferc-butilo
Preparado como para el Ej. 5, partiendo de 3-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propanoato de N- hidroxisuccinimidilo:
1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 1,42 (s, 9 H); 1,78 (m, 2 H); 2,22 (m, 2 H); 2,42 (m, 4 H); 2,48 (t, J=5,8 Hz, 2 H); 2,61 (m, 2 H); 3,39 (m, 2 H); 3,48 a 3,55 (m, 10 H); 3,56 (m, 4 H); 3,69 (t ancho, J=6,6 Hz, 4 H); 4,21 (t, J=5,6 Hz, 2 H); 4,49 (d, J=5,3 Hz, 4 H); 4,90 (t, J=5,3 Hz, 2 H); 6,87 (s, 2 H). LC/MS (G): tR= 0,65 min; [M+H]+: m/z 614; pico base: m/z 240
7.4. 3-{2-[2-(2-Morfolin-4-il-etoxi)-etoxil-etoxi}-propanoato de N-hidroxisuccinimidilo
Se anaden 1,1 g de carbonato de N,N'-disuccinimidilo y 1,5 ml de DIPEA a 830 mg de acido 3-{2-[2-(2-morfolin-4-il- etoxi)-etoxi]-etoxil-propanoico disuelto en 50 ml de THF. Despues de 24 horas a temperatura ambiente, se anaden 200 ml de DCM y la fase organica resultante se concentra hasta la mitad de su volumen bajo presion reducida y a continuation se lava con agua, se seca sobre MgSO4 y se concentra bajo presion reducida. Se obtienen asi 1,05 g de 3-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propanoato de N-hidroxisuccinimidilo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): 2,39 (m, 4 H); 2,45 (t, J=5,9 Hz, 2 H); 2,81 (s, 4 H); 2,92 (t, J=6,0 Hz, 2 H); 3,45 a 3,57 (m, 14 H); 3,72 (t, J=6,0 Hz, 2 H). LC/MS (G): tR (ELSD) = 0,49 min; [M+H]+: m/z 389.
5
10
15
20
25
30
35
7.5. Acido 3-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxil-etoxi}-propanoico
Se anaden 4 ml de TFA a una solution de 1 g de 3-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etoxil-propanoato de ferc-butilo en 50 ml de DCM. La mezcla se agita durante 10 horas a temperatura ambiente y a continuation se concentra bajo presion reducida y se purifica en un cartucho Mega BE-SCX, 25GM 150ML (Varian), usando lavado con MeOH y separation del producto esperado con una solucion 2 N de amomaco en MeOH. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtienen 830 mg de acido 3-{2-[2-(2- morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propanoico. LC/MS (e): tR (ELSD) = 0,16 min; [M+H]+: m/z 292
7.6. 3-{2-[2-(2-Morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propanoato de ferc-butilo
Se anaden 1,04 mg de sodio a una solucion de 989 mg de 2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etanol en 2,8 ml de THF anhidro. Despues de calentar a 40°C durante 2 horas 15 minutos, se anaden 793 ^l de acrilato de ferc-butilo. Despues de calentar durante dos horas mas a 40°C, la mezcla de reaction se deja durante 20 horas a temperatura ambiente y a continuacion se concentra bajo presion reducida y se purifica mediante cromatografia de desarrollo rapido sobre sflice (columna de 70 g Merck SuperVarioPrep, Si60 15-40 ^m), usando un gradiente de 0 a 6% de MeOH en DCM. Las fracciones que contienen el producto deseado se combinan y se concentran bajo presion reducida. Se obtiene 1 g de 3-{2-[2-(2-morfolin-4-il-etoxi)-etoxi]-etoxil-propanoato de ferc-butilo. LC/MS (E): tR (ELSD) = 0,59 min; [M+H]+: m/z 348
Evaluation de la inhibition de la proliferation de las lmeas celulares MDA-MB-231, MDA-A1 y HCT116 con los compuestos de formula (IA) con RCG1=-SZa (Za=SMe) o RCG1 = -C(=O)ZbRb (ZbRb=OMe)
Celulas MDA-MB-231, MDA-A1 o HCT116 en su fase de crecimiento exponencial se tripsinizan y se resuspenden en su medio de cultivo respectivo (DMEM/F12 Gibco N° 21331, 10% de FCS Gibco N° 10500-056, 2 nM de glutamina Gibco N° 25030 para las celulas MDA; DMEM Gibco N° 11960, 10% de FCS Gibco N° 10500-056, 2 mM de glutamina Gibco N° 25030 para las celulas HCT116). La suspension celular se siembra en placas de cultivo de 96 pocillos Cytostar (GE Healthcare Europe, N° RPNQ0163) en el medio de cultivo completo que contiene suero hasta una densidad de 5000 celulas/pocillo (MDA-MB-231, MDA-A1, HCT116). Despues de la incubation durante 4 horas, diluciones sucesivas de los dimeros de tomaimicina se anaden a los pocillos por triplicado para cada concentration. Las celulas se cultivan durante 3 dias a 37°C bajo una atmosfera de 5% de CO2 en presencia de los agentes citotoxicos. Al cuarto dia, se anaden a cada pocillo 10 ^l de una solucion de 14C-timidina (0,1 ^Ci/pocillo, Perkin Elmer N° NEC56825000). La incorporation de 14C-timidina se mide 96 horas despues del comienzo del experimento con un contador de radiactividad Microbeta (Perkin Elmer). Los datos se expresan en la forma de un porcentaje de supervivencia al determinar la relation entre el recuento obtenido con las celulas tratadas con los agentes citotoxicos y el obtenido con las celulas de los pocillos de control (tratadas con el medio de cultivo solo).
Tabla II
- Inhibicion de la proliferacion (impulso de 14C-timidina a las 96 h)
- IC50 [pM]
- Estructura del compuesto de formula (IA)
- HCT116 MDA-MB231 MDA-A1
- O ^ 0 A 0^N^8'S" JC'n A 9 " /- N0^ - ' 0 1 1 O '
- 61 128 16270
- 0 0 0 0 , ^ "9 ?'^ - 0 1 1 0
- 18 41 3465
5
10
15
20
25
30
- Inhibicion de la proliferation (impulso de 14C-timidina a las 96 h)
- IC50 [pM]
- Estructura del compuesto de formula (IA)
- HCT116 MDA-MB231 MDA-A1
- 0^N^Os A o AA "9 9' ^ - " 0 o "
- 235 384 17849
- A o^N^8'Sn A" I, a°^n^v°T1 n a ^ A?N-X rOx. / ' 0 1 1 0 '
- 48 81 26474
- C) 0 C) 0 0 0 --=^'0 0" ^ / 0 1 1 0
- 4984 5665 >50000
Se encuentra que los compuestos de prueba, para los que RCG1=-SZa, con Za=SMe) o RCG1 = -C(=O)ZbRb, con ZbRb=OMe, tienen una potente actividad anticancerosa; esto sugiere que compuestos similares caracterizados con otro grupo ZbRb son propensos a tener una actividad al menos identica.
Caprtulo 2: Nuevos conjugados de tomaimicina
Ejemplo de referencia 8: preparacion de un conjugado hu2H11 modificado con SPDB con 4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-
etoxi)-etoxil-etil}-(2-metil-(2-metil-2-mercapto-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-
tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]piridina
Se anaden 320 ^g de SPDB (descrito en la pagina 7 del documento WO 2010/076474) disueltos en 62 ^l de DMA con agitation magnetica a 24 mg de hu2H11 (anticuerpo descrito tambien por hu53 2H11 en la pagina 15 del documento WO 2008010101; este es un anticuerpo que comprende una Vh que tiene una secuencia de aminoacidos SED ID N° 24) en 2,37 ml de un tampon acuoso con una concentration de fosfato potasico de 0,05 M, 0,05 M de NaCl y 2 mM de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) de pH = 6.5. Despues de 4 horas a temperatura ambiente, el anticuerpo modificado se purifica mediante filtration en gel sobre Sephadex G25 (columna PD-10 GE) preequilibrada en un tampon acuoso con una concentracion de 0,05 M de acido N-(2-hidroxietil)-piperacin-N-2- etanosulfonico (HEPES), 0,05 M de NaCl y 2 mM de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) de pH = 8. Una parte alicuota del anticuerpo modificado se trata con ditiotreitol (DTT) para escindir los grupos ditiopiridina. El anticuerpo modificado junto con el piridinotiol liberado se ensayan mediante espectrofotometria usando los coeficientes de extincion de piridinotiol (e343 mm= 8080 M"1cm"1), del grupo ditiopiridina (e28o nm= 5100 M"1 cm-1) y hu2H11 (e28o nm= 206941 M"1cm"1): se determino un promedio de 3,2 grupos ditiopiridina por molecula de anticuerpo a una concentracion de 7,08 mg/ml.
Se anaden 713 ^l de DMA y 1,22 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etilH2-metil-(2-metil-2-mercaptopropil)- amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8- iloximetil]-piridina disueltos en 87 ^l de dimetilacetamida (DMA) con agitacion magnetica a 12 mg del anticuerpo modificado anterior en 3,2 ml de un tampon acuoso con una concentracion de 0,05 M de acido N-(2-hidroxietil)- piperacino-N-2-etanosulfonico (HEPES), 0,05 M de NaCl y 2 mM de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) de pH = 8. Despues de 12 horas a 30°C, la mezcla se filtra sobre MillexR-SV 0.45 ^M (PVDF Durapore Millipore) y se purifica en una columna de calidad preparativa Superdex™ 200 (columna Hiload™ 26/60 GE) preequilibrada en un tampon de fosfato salino que contiene 20% de N-metilpirrolidona (NMP). Las fracciones de interes se combinan y se concentran sobre Amicon Ultra-15 (Ultracel 50k Millipore) y a continuation se filtran en Sephadex G-25 (columnas PD10, GE) preequilibradas en un tampon acuoso a pH=6,5, con una concentracion de 10 mM de histidina que contiene 10% de sacarosa y 5% de NMP.
El conjugado obtenido (3,5 ml) se ensaya mediante espectrofotometna usando los coeficientes de extincion e320 nm= 7843M-1 cm-1 y e280 nm= 4436 M-1 cm-1 para 4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-2-metildisulfanil-propil)- amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8- iloximetil]-piridina y e280 nm = 206941 M'1cm'1 para hu2H11: se determino un promedio de 2,9 d^eros de tomaimicina 5 (4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-(2-metil-2-mercaptopropil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-
dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridina) por molecula de anticuerpo a una concentracion de 1,74 mg/ml.
Ejemplo de referencia 9: Preparacion de un conjugado hu2H11R35R74 modificado con SNPP con 4-{2-[{2-[2-(2- metoxi-etoxi)-etoxil-etil}-(2-metil-(2-metil-2-mercapto-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi- 10 1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]piridina
Se anaden 1,3 mg de SNPP (descrito en la pagina 36 del documento WO 2004/016801) disueltos en 186 jl de DMA con agitacion magnetica a 100 mg de hu2H11 R35R74 (Ref en la pagina 20 del documento WO 2011039721) en 8,2 ml de un tampon acuoso con una concentracion de 0,05 M de fosfato potasico, 0,05 M de NaCl y 2 mM de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) de pH = 6,5. Despues de 4 horas a temperatura ambiente, la solucion de 15 anticuerpo modificado se fracciona en cuatro y se purifica mediante filtracion sobre cuatro columnas Sephadex G25 (columna PD-10 GE) preequilibradas en un tampon acuoso con una concentracion de 0,05 M de acido N-(2- hidroxietil)-piperacino-N'-2-etanosulfonico (HEPES), 0,05 M de NaCl y 2 mM de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) de pH = 8. Despues de mezclar y homogeneizar los cuatro filtrados asf obtenidos, el anticuerpo modificado se ensaya mediante espectrofotometna usando los coeficientes de extincion de nitropiridinotiol (e280 nm= 3344 M-1 20 cm-1 y e325 nm= 10964 M'1cm'1) y hu2H11 R35R74 (e280 nm= 219528 M'1cm'1): se determinaba un promedio de 4,47
grupos ditionitropiridina por molecula de anticuerpo a una concentracion de concentracion de 6,27 mg/ml.
Se anaden 4,38 ml de DMA y 17,73 mg de 4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-(2-metil-2-mercaptopropil)- amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8- 25 iloximetil]-piridina disueltos en 1,43 ml de Dimetilacetamida (DMA) con agitacion magnetica a 87 mg del anticuerpo modificado anterior en 23,24 ml de un tampon acuoso con una concentracion de 0,05 M de acido N-(2-hidroxietil)- piperacino-N'-2-etanosulfonico (HEPES), 0,05 M de NaCl y 2 mM de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) de pH = 8. Despues de 17 horas a 30°C, la mezcla se filtra sobre SteriflipR 0.45 jM (PVDF Durapore Millipore)^ se purifica mediante 3 inyecciones en una columna de calidad preparativa Superdex™ 200 (columna Hiload™ 26/60 GE) 30 preequilibrada en un tampon de fosfato salino que contiene 20% de N-metilpirrolidona (NMP). Las fracciones de interes se combinan y se concentran en Amicon Ultra-15 (Ultracel 50k Millipore) y a continuacion se filtran sobre Sephadex G-25 (desalado con HiPrep 26/10, columna GE) preequilibrada en un tampon acuoso de pH = 6,5 con una concentracion de 10 mM de histidina, que contiene 10% de sacarosa y 5% de NMP. El conjugado obtenido (28 ml) se ensaya mediante espectrofotometna usando el coeficiente de extincion e280 nm = 219528 M'W para hu2H11 35 R35R74: se determinaba un promedio de 3,13 dfmeros de tomaimicina (4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-
metil-(2-metil-2-mercapto-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a- tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridina) por molecula de anticuerpo a una concentracion de 1,99 mg/ml.
Ejemplo de referencia 10: preparacion de un conjugado hu2H11R35R74 modificado con SPDB con 4-{2-[{2-[2-(2- 40 metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-(2-metil-2-mercapto-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-
1,2,3,1a-tetrahidropirrolo[2,1c][[1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]piridina
Preparado como para el Ej. 8, partiendo de hu2H11 R35R74: se determinaba un promedio de 2,92 dfmeros de tomaimicina (4-{2-[{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etil}-(2-metil-(2-metil-2-mercapto-propil)-amino]-etoxi}-2,6-bis-[(S)-2-et- (E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridina) por molecula de 45 anticuerpo.
Ejemplo 11: preparacion de un conjugado hu2H11R35R74 con 4-([2-(2,6-bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a- tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)-etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxil-etoxi}- propionil)-amino]-butanoato de N-hidroxisuccinimidilo
Se anaden sucesivamente 6 jl de una solucion acuosa 1 M de HEPES, seguido por 267 jl de un tampon acuoso 50 con una concentracion de 0,05 M de acido N-(2-hidroxietil)-piperacino-N'-2-etanosulfonico (HEPES), 0,05 M de NaCl y 2 mM de acido etilendiaminotetraacetico (EDTA) de pH = 8, 100 jl de DMA y a continuacion 83 jg de 4-([2-(2,6- bis-[(S)-2-et-(E)-iliden-7-dimetoxi-1,2,3,11a-tetrahidropirrolo[2,1c][1.4]benzodiazepin-5-on-8-iloximetil]-piridin-4-iloxi)- etil]-(3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi-propionil)-amino]-butanoato de N-hidroxisuccinimidilo disueltos en 5 jl de DMA a una solucion de 1,59 mg de hu2H11 R35R74 en 150 jl de un tampon acuoso con una concentracion de 55 0,043 M de fosfato potasico de pH=6,6. Despues de 4 horas a 30°C, la mezcla se filtra sobre Sephadex G-25
(columnas NAP-5 GE) preequilibradas en un tampon acuoso de pH = 6,5 con una concentracion de 10 mM de histidina, que contiene 10% de sacarosa y 5% de NMP.
El conjugado obtenido (1 ml) se ensaya mediante espectrofotometria usando los coeficientes de extincion de 4-[[2- (2,6-bis-hidroximetil-piridin-4-iloxi)-etilH3-{2-[2-(2-metoxi-etoxi)-etoxi]-etoxi}-propionil)-amino]-butanoato de etilo (e322 nm= 7971 M-1 cm-1 y e280 nm= 5219 M"1 cm-1): se determino un promedio de 4,18 d^eros de tomaimicina por molecula de anticuerpo a una concentration de 1,14 mg/ml.
5 Evaluation de la inhibition de la proliferation de las lmeas celulares MDA-MB-231 con el conjugado citotoxico
hu2H11 (o hu2H11R35R74, respectivamente)
Celulas MDA-MB-231 en su fase de crecimiento exponencial se tripsinizan y se resuspenden en su medio de cultivo (DMEM/F12 Gibco N° 21331, 10% de FCS Gibco N° 10500-056, 2 nM de glutamina Gibco N° 25030). La suspension celular se siembra en placas de 96 pocillos Cytostar (GE Healthcare Europe, N° RPNQ0163) en medio de cultivo 10 entero que contiene suero hasta una densidad de 5000 celulas/pocillo. Despues de la incubation durante 4 horas, se anaden a los pocillos diluciones sucesivas de los inmunoconjugados de anticuerpo-agente citotoxico en concentraciones decrecientes de 10-7 a 10-12 M (por triplicado para cada concentracion). Las celulas se cultivan a 37°C bajo una atmosfera que contienen 5% de CO2 en presencia de los inmunoconjugados de anticuerpo-agente citotoxico durante 3 dias. Al cuarto dia, se anaden a cada pocillo 10 jl de una solution de 14C-timidina (0,1 15 |jCi/pocillo, Perkin Elmer N° NEC56825000). La incorporation de 14C-timidina se mide 96 horas despues del
comienzo del experimento con un contador de radiactividad Microbeta (Perkin Elmer). Los datos se expresan en forma de un porcentaje de supervivencia al determinar la relation entre recuentos obtenidos con las celulas tratadas con el inmunoconjugado y las obtenidas con las celulas de los pocillos de control (tratadas con el medio de cultivo solo). En ciertos experimentos indicados con un asterisco (*), se anadio el anticuerpo puro hu2H11 (o hu2H11 20 R35R74, respectivamente) a los pocillos a una concentracion de 1 jM al principio del experimento y la inhibicion de
la proliferacion se midio como se describe previamente.
Tabla III
- Inhibicion de la proliferacion (impulso de 14C-timidina a las 96 h)
- IC50 [pM]
- Estructura
- Media IC50 Media IC50 (+Ab puro*) relacion de IC50
- '0' '0' ''1 0 n 'x s ^ I hu2H11 O' S' N' 1 H Hf-H 'rpr''0''^1' A-0 N=V o' ^''VOx ^ 0 1 1 0
- 58 760 13
- "o' ''0' X 0 m X s „ I ,hu2H11R35R74 O' "S' 'N' 1 H hxn ,p,'°'"°N=v 0 1 1 0
- 32 502 16
- m X s _ I ,hu2H11R35R74 Y. 1 H *rN iPY0'-■ N'yY| n=v 0 1 1 0
- 72 3550 49
Claims (9)
- 510152025REIVINDICACIONES1. Compuesto de formula (I):en el que:
imagen1 • — representa un enlace sencillo o un doble enlace, con la condicion de quesi —— representa un enlace sencillo, entonces:® U y/o U', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre s^ H;® W y/o W, que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: OH, -OR, -OCOR, -COOR, -OCOOR, -OCONRR', un carbamato dclico tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NRCONRR', -OCSNHR, un tiocarbamato dclico tal que N10 y Cl1 se incluyan en un anillo, -SH, -SR, -SOR, -SOOR, -SO3-, -NRSOOR', -NRR', una amina dclica tal que N10 y C11 se incluyan en un anillo, -NROR', -NRCOR', -N3, -CN, Hal, un grupo trialquilfosfonio o triarilfosfonio;si — representa un doble enlace, entonces:® U y U' estan ausentes;® Wy/o W, que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H;• R1, R2, R1', R2', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si: H, Hal o un grupo alquilo (Ci-C6) opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo, S(O)qR con q = 0, 1 o 2;o alternativamenteR1 y R2 y/o R1' y R2' forman juntos, respectivamente, un doble enlace =CH2 o =CH-CH3;• Y e Y', que pueden ser identicos o diferentes, representan, independientemente entre si, H o -OR;• M representa N;• ALK y ALK' son identicos e indican un grupo CH2;• R y R' representan, independientemente entre si, H o un grupo alquilo (C1-C6) o arilo opcionalmente sustituido con uno o mas sustituyentes elegidos de: Hal, CN, NRR', CF3, OR, un grupo arilo o heteroarilo;• L1 representa:° el grupo -D-ALK(C1-C6)- ligado al anillo de piridilo a traves de D, en el que D representa -O-;• L2 representa:° un grupo -ALK(C1-C6)-;5101520• Q representa un enlace sencillo o el grupo C(=O);• k representa un numero entero que varia de 1 a 5;• G representa un grupo -OMe o un grupo morfolino;• RCG1 representa el grupo -SZa o -C(=O)-ZbRb;• Za representa SRa;• Ra representa H o un grupo alquilo (Ci-C6);COZbRb representa -COOH, -COO-alquilo(Ci-C6), oimagen2 - 2. Compuesto segun la reivindicacion 1, en el que U=U' y/o W=W' y/o Ri=Ri' y/o R2=R2' y/o Y=Y'.
- 3. Compuesto segun la reivindicacion 1, de formula (IA) o (IB):
imagen3 - 4. Compuesto segun la reivindicacion 3, de formula (IA):
imagen4 - 5. Compuesto segun la reivindicacion 1 a 4, en el que Ye Y' representan un grupo alcoxi (C1-C4).
- 6. Compuesto segun la reivindicacion 1, elegido de uno de los siguientes:
imagen5 510152025imagen6 - 7. Procedimiento para preparar un conjugado, que consiste en:(i) poner en contacto y dejar reaccionar:- una solution acuosa opcionalmente tamponada del agente de union, opcionalmente modificado por medio de un agente modificador,y- una solucion de un compuesto de formula (I) segun una de las reivindicaciones 1 a 6;siendo el grupo qmmico RCG1 del compuesto de formula (I) reactivo hacia los grupos qmmicos RCG2 presentes en el agente de union, especialmente hacia los grupos amino presentes en anticuerpos, habiendo sido introducidos dichos grupos qmmicos RCG2, cuando sea apropiado, por el agente modificador,a fin de ligar el compuesto de formula (I) al agente de union con la formation de un enlace covalente(ii) y a continuation opcionalmente separar el conjugado formado en la etapa (i) del compuesto de formula (I) y/o del agente de union sin reaccionar y/o de cualesquiera agregados que se puedan haber formado.
- 8. Procedimiento segun la revindication 7, en el que:■ en presencia de un derivado de formula (I) que comprende un grupo qmmico reactivo RCG1 del tipo -SZa, el agente de union comprende:■ grupos qmmicos tiol en el caso en el que RCG1 representa -SZa■ en presencia de un derivado de formula (I) que comprende un grupo qmmico reactivo RCG1 del tipo -C(=O)-ZbRb, el derivado de formula (I) se hace reaccionar con las funciones amino del agente de union, especialmente los grupos £-amino soportados por las cadenas laterales de los residuos de lisina (Lys) de un anticuerpo.
- 9. Compuesto segun una de las reivindicaciones 1 a 6, para el uso como un agente anticanceroso.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1056103 | 2010-07-26 | ||
| FR1056103A FR2963007B1 (fr) | 2010-07-26 | 2010-07-26 | Derives anticancereux, leur preparation et leur application therapeutique |
| PCT/IB2011/053310 WO2012014147A1 (en) | 2010-07-26 | 2011-07-25 | Anticancer derivatives, preparation thereof and therapeutic use thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2638520T3 true ES2638520T3 (es) | 2017-10-23 |
Family
ID=43027561
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES11749535.8T Active ES2638520T3 (es) | 2010-07-26 | 2011-07-25 | Derivados anticancerosos, preparación de los mismos y uso terapéutico de los mismos |
Country Status (31)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9056914B2 (es) |
| EP (1) | EP2598507B1 (es) |
| JP (1) | JP5814366B2 (es) |
| KR (1) | KR20130094806A (es) |
| CN (1) | CN103140491B (es) |
| AR (1) | AR082341A1 (es) |
| AU (1) | AU2011284339B2 (es) |
| BR (1) | BR112013001978B1 (es) |
| CA (1) | CA2806665A1 (es) |
| CL (1) | CL2013000250A1 (es) |
| CO (1) | CO6650375A2 (es) |
| CR (1) | CR20130035A (es) |
| DO (1) | DOP2013000021A (es) |
| EA (1) | EA201390162A1 (es) |
| EC (1) | ECSP13012404A (es) |
| ES (1) | ES2638520T3 (es) |
| FR (1) | FR2963007B1 (es) |
| GT (1) | GT201300025A (es) |
| MA (1) | MA34469B1 (es) |
| MX (1) | MX2013001069A (es) |
| MY (1) | MY159197A (es) |
| NI (1) | NI201300010A (es) |
| NZ (1) | NZ606246A (es) |
| PE (1) | PE20130489A1 (es) |
| PH (1) | PH12013500154A1 (es) |
| SG (1) | SG187191A1 (es) |
| TW (1) | TW201208689A (es) |
| UA (1) | UA111164C2 (es) |
| UY (1) | UY33531A (es) |
| WO (1) | WO2012014147A1 (es) |
| ZA (1) | ZA201300685B (es) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2949469A1 (fr) * | 2009-08-25 | 2011-03-04 | Sanofi Aventis | Derives anticancereux, leur preparation et leur application en therapeutique |
| WO2014057074A1 (en) | 2012-10-12 | 2014-04-17 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| CN105142674B (zh) * | 2013-03-13 | 2018-11-13 | 麦迪穆有限责任公司 | 吡咯并苯并二氮杂卓和其结合物 |
| EA027910B1 (ru) * | 2013-03-13 | 2017-09-29 | Медимьюн Лимитед | Пирролобензодиазепины и их конъюгаты |
| EP3191135B1 (en) | 2014-09-12 | 2020-08-19 | Genentech, Inc. | Anti-her2 antibodies and immunoconjugates |
| GB201416112D0 (en) | 2014-09-12 | 2014-10-29 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| JP6730261B2 (ja) * | 2014-09-17 | 2020-07-29 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 抗ｈｅｒ２抗体を含む免疫複合体 |
| EP3245213B1 (en) | 2015-01-14 | 2020-03-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Benzodiazepine dimers, conjugates thereof, and methods of making and using |
| CN107231804B (zh) | 2015-01-14 | 2019-11-26 | 百时美施贵宝公司 | 亚杂芳基桥连苯并二氮杂*二聚体、其缀合物及制备和使用方法 |
| EA201792516A1 (ru) | 2015-06-23 | 2018-05-31 | Бристол-Маерс Сквибб Компани | Макроциклические димеры бензодиазепина, их конъюгаты, получение и применение |
| MA43345A (fr) | 2015-10-02 | 2018-08-08 | Hoffmann La Roche | Conjugués anticorps-médicaments de pyrrolobenzodiazépine et méthodes d'utilisation |
| GB201601431D0 (en) | 2016-01-26 | 2016-03-09 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| GB201602359D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| GB201602356D0 (en) | 2016-02-10 | 2016-03-23 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| GB201607478D0 (en) | 2016-04-29 | 2016-06-15 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine Conjugates |
| GB201617466D0 (en) | 2016-10-14 | 2016-11-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| CA3047683C (en) | 2017-02-08 | 2020-03-10 | Adc Therapeutics Sa | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| GB201702031D0 (en) | 2017-02-08 | 2017-03-22 | Medlmmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepine-antibody conjugates |
| AU2018255876B2 (en) | 2017-04-18 | 2020-04-30 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| EP3668874B1 (en) | 2017-08-18 | 2021-12-22 | Medimmune Limited | Pyrrolobenzodiazepine conjugates |
| CN116999573A (zh) | 2017-09-29 | 2023-11-07 | 第一三共株式会社 | 抗体－药物偶联物及其制造方法、药物组合物及其在制备治疗肿瘤的药物中的应用 |
| GB201803342D0 (en) | 2018-03-01 | 2018-04-18 | Medimmune Ltd | Methods |
| GB201806022D0 (en) | 2018-04-12 | 2018-05-30 | Medimmune Ltd | Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof |
| BR112021018260A2 (pt) | 2019-03-15 | 2021-11-23 | Medimmune Ltd | Dímeros de azetidobenzodiazepina e conjugados compreendendo-os para uso no tratamento de câncer |
| CN115466231B (zh) * | 2022-10-23 | 2024-03-08 | 浙江大学 | 管道化制备3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]丙腈的方法 |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR1516743A (fr) | 1966-04-01 | 1968-02-05 | Rhone Poulenc Sa | Nouvel antibiotique et son procédé de préparation par culture de streptomyces croceus |
| US4981979A (en) | 1987-09-10 | 1991-01-01 | Neorx Corporation | Immunoconjugates joined by thioether bonds having reduced toxicity and improved selectivity |
| JPH04502469A (ja) | 1988-12-22 | 1992-05-07 | ゾマ コーポレイション | ヒンダードカップリング剤および方法 |
| US5208020A (en) | 1989-10-25 | 1993-05-04 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use |
| GB9818731D0 (en) | 1998-08-27 | 1998-10-21 | Univ Portsmouth | Compounds |
| US7049311B1 (en) | 1998-08-27 | 2006-05-23 | Spirogen Limited | Pyrrolbenzodiazepines |
| AU2003259163B2 (en) | 2002-08-16 | 2008-07-03 | Immunogen, Inc. | Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs |
| CN1795009B (zh) | 2002-11-07 | 2014-07-09 | 伊谬诺金公司 | 抗-cd33抗体及其用途 |
| AU2004240541B2 (en) | 2003-05-20 | 2009-08-20 | Immunogen, Inc. | Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids |
| DK1660513T5 (da) | 2003-07-21 | 2011-07-18 | Immunogen Inc | CA6 antigen-specifikt, cytotoksisk konjugat og fremgangsmåder til anvendelse heraf |
| AU2004284075A1 (en) | 2003-10-22 | 2005-05-06 | Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Pyrrolobenzodiazepine derivatives, compositions comprising the same and methods related thereto |
| US20050175619A1 (en) | 2004-02-05 | 2005-08-11 | Robert Duffy | Methods of producing antibody conjugates |
| GB0404577D0 (en) * | 2004-03-01 | 2004-04-07 | Spirogen Ltd | Pyrrolobenzodiazepines |
| EP1723152B1 (en) | 2004-03-09 | 2015-02-11 | Spirogen Sàrl | Pyrrolobenzodiazepines |
| EP1669358A1 (en) | 2004-12-07 | 2006-06-14 | Aventis Pharma S.A. | Cytotoxic agents comprising new taxanes |
| US7385028B2 (en) | 2004-12-22 | 2008-06-10 | Ambrx, Inc | Derivatization of non-natural amino acids and polypeptides |
| PT1813614E (pt) | 2006-01-25 | 2012-01-09 | Sanofi Sa | Agentes citotóxicos compreendendo novos derivados de tomaimicina |
| GB2453402B (en) * | 2006-02-13 | 2010-12-22 | Council Scient Ind Res | Novel bis-pyrrolo[2,1.-c] [1,4] benzodiazepine-anthraquinone conjugates and a process for the preparation thereof |
| EP1832577A1 (en) | 2006-03-07 | 2007-09-12 | Sanofi-Aventis | Improved prodrugs of CC-1065 analogs |
| EP1864682A1 (en) | 2006-06-09 | 2007-12-12 | Sanofi-Aventis | Leptomycin derivatives |
| MX2009000709A (es) | 2006-07-18 | 2009-02-04 | Sanofi Aventis | Anticuerpo antagonista contra epha2 para el tratamiento de cancer. |
| EP1914242A1 (en) | 2006-10-19 | 2008-04-23 | Sanofi-Aventis | Novel anti-CD38 antibodies for the treatment of cancer |
| PL2019104T3 (pl) * | 2007-07-19 | 2014-03-31 | Sanofi Sa | Środki cytotoksyczne obejmujące nowe pochodne tomaymycyny i ich zastosowanie terapeutyczne |
| WO2009026274A1 (en) | 2007-08-22 | 2009-02-26 | Medarex, Inc. | Site-specific attachment of drugs or other agents to engineered antibodies with c-terminal extensions |
| KR101764081B1 (ko) | 2008-04-30 | 2017-08-01 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 가교제 및 그 용도 |
| SG189817A1 (en) | 2008-04-30 | 2013-05-31 | Immunogen Inc | Potent conjugates and hydrophilic linkers |
| FR2939795B1 (fr) | 2008-12-17 | 2010-12-17 | Sanofi Aventis | Procede de preparation d'esters actives |
| ES2604668T3 (es) * | 2009-02-05 | 2017-03-08 | Immunogen, Inc. | Nuevos derivados de benzodiacepina |
| TW201117814A (en) | 2009-10-02 | 2011-06-01 | Sanofi Aventis | New maytansinoids and the use of said maytansinoids to prepare conjugates with an antibody |
-
2010
- 2010-07-26 FR FR1056103A patent/FR2963007B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-07-25 JP JP2013521272A patent/JP5814366B2/ja active Active
- 2011-07-25 AU AU2011284339A patent/AU2011284339B2/en not_active Ceased
- 2011-07-25 CN CN201180046298.4A patent/CN103140491B/zh active Active
- 2011-07-25 PH PH1/2013/500154A patent/PH12013500154A1/en unknown
- 2011-07-25 AR ARP110102680A patent/AR082341A1/es unknown
- 2011-07-25 SG SG2013005855A patent/SG187191A1/en unknown
- 2011-07-25 BR BR112013001978-6A patent/BR112013001978B1/pt not_active IP Right Cessation
- 2011-07-25 NZ NZ60624611A patent/NZ606246A/en not_active IP Right Cessation
- 2011-07-25 EA EA201390162A patent/EA201390162A1/ru unknown
- 2011-07-25 MY MYPI2013000240A patent/MY159197A/en unknown
- 2011-07-25 MX MX2013001069A patent/MX2013001069A/es not_active Application Discontinuation
- 2011-07-25 EP EP11749535.8A patent/EP2598507B1/en active Active
- 2011-07-25 ES ES11749535.8T patent/ES2638520T3/es active Active
- 2011-07-25 PE PE2013000135A patent/PE20130489A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-07-25 WO PCT/IB2011/053310 patent/WO2012014147A1/en active Application Filing
- 2011-07-25 CA CA2806665A patent/CA2806665A1/en not_active Abandoned
- 2011-07-25 KR KR1020137004626A patent/KR20130094806A/ko not_active Application Discontinuation
- 2011-07-25 UA UAA201302391A patent/UA111164C2/uk unknown
- 2011-07-25 MA MA35664A patent/MA34469B1/fr unknown
- 2011-07-26 TW TW100126452A patent/TW201208689A/zh unknown
- 2011-07-26 UY UY0001033531A patent/UY33531A/es not_active Application Discontinuation
-
2013
- 2013-01-22 NI NI201300010A patent/NI201300010A/es unknown
- 2013-01-23 GT GT201300025A patent/GT201300025A/es unknown
- 2013-01-24 CO CO13013434A patent/CO6650375A2/es not_active Application Discontinuation
- 2013-01-24 EC ECSP13012404 patent/ECSP13012404A/es unknown
- 2013-01-24 DO DO2013000021A patent/DOP2013000021A/es unknown
- 2013-01-25 CL CL2013000250A patent/CL2013000250A1/es unknown
- 2013-01-25 US US13/750,691 patent/US9056914B2/en active Active
- 2013-01-25 ZA ZA2013/00685A patent/ZA201300685B/en unknown
- 2013-01-29 CR CR20130035A patent/CR20130035A/es unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2638520T3 (es) | Derivados anticancerosos, preparación de los mismos y uso terapéutico de los mismos | |
| ES2484690T3 (es) | Conjugados de dímeros de pirrolo[1,4]benzodiazepina como agentes anticancerígenos | |
| ES2604668T3 (es) | Nuevos derivados de benzodiacepina | |
| US20120276124A1 (en) | Maytansinoids and the use of said maytansinoids to prepare conjugates with an antibody | |
| BRPI0619331A2 (pt) | método para fazer um composto para preparar um análogo de cbi cc-1065, método para preparar um análogo de cbi cc-1065 e composto | |
| AU2023312662A1 (en) | Exatecan derivatives and use thereof | |
| EP4201429A1 (en) | Antibody-drug conjugate intermediate comprising sn38 and preparation method therefor |