ES2615131T3

ES2615131T3 - Polipéptido expresado en la capa córnea y su utilización

Info

Publication number: ES2615131T3
Application number: ES11723513.5T
Authority: ES
Inventors: Nathalie Jonca; Eve Toulza; Gaëlle Saintigny; Guy Serre; Marina Weber Vivat
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite Toulouse III Paul Sabatier
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS; Universite de Toulouse
Priority date: 2010-04-27
Filing date: 2011-04-27
Publication date: 2017-06-05
Anticipated expiration: 2031-04-27
Also published as: JP6244595B2; EP2563807B1; WO2011135253A1; JP2016196464A; JP2013531472A; US20150299260A1; US9085635B2; FR2959230A1; JP6300329B2; US9617307B2; US20130053327A1; EP2563807A1; FR2959230B1

Abstract

Utilización cosmética de una cantidad eficaz de un polipéptido aislado, natural o sintético, que pertenece a la familia de proteínas tardías de la envoltura córnea (LCE), seleccionándose dicho polipéptido entre: - los fragmentos de la secuencia SEQ ID N° 2, que tiene una longitud de al menos 5 aminoácidos consecutivos, presentando dichos fragmentos al menos un dominio de glutamina (Gln) - lisina (Lys) que sirve de sustrato para las transglutaminasas; y - los análogos de dichos fragmentos de la secuencia SEQ ID N° 2 que presentan al menos 80 % de homología con uno de dichos fragmentos de la secuencia SEQ ID N° 2, presentando dichos análogos al menos un dominio de glutamina (Gln) - lisina (Lys) que sirve de sustrato para las transglutaminasas, para prevenir y/o tratar los signos de sequedad cutánea.

Description

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total de la composición;

-uno o más agentes tensioactivos, preferentemente emulsionantes, que sean no iónicos, aniónicos, catiónicos o anfóteros, y en particular los ésteres de ácidos grasos y de polioles tales como los ésteres de ácidos grasos y de 5 glicerol oxialquilenados (más particularmente polioxietilenados), los ésteres de ácidos grasos y de sorbitán oxialquilenados, los ésteres de ácidos grasos oxialquilenados (oxietilenados y/u oxipropinelados) como la mezcla estearato de PEG-100 /estearato de glicerilo comercializado, por ejemplo, por la compañía Croda con la denominación Arlacel® 165 y los ésteres de ácidos grasos y de sacarosa como el estearato de sacarosa; los éteres de alcohol graso y de azúcar, particularmente los alquilpoliglucósidos (APG) tales como el decilglucósido y el laurilglucósido, el cetoestearilglucósido opcionalmente mezclado con alcohol cetoestearílico, comercializado por ejemplo con la denominación Montanov® 68 por la compañía Seppic, así como el araquidil glucósido, por ejemplo en forma de mezcla de alcoholes araquídico y behénico y de araquildilglucósido comercializado con la denominación Montanov® 202 por la compañía Seppic; los éteres de alcoholes grasos y de polietilenglicol; los polisiloxanos modificados con poliéteres; la betaína y sus derivados, los policuaternios; las sales de sulfato de

15 alcoholes grasos etoxilados; los sulfosuccinatos; los sarcosinatos; los alquil y dialquilfosfatos y sus sales; y los jabones de ácidos grasos. Dicho agente tensioactivo puede estar presente en la composición en una cantidad del orden de 0,1 a 8 %, preferentemente de 0,5 a 3 % en peso, con respecto al peso total de la composición;

-: uno o más co-tensioactivos tales como los alcoholes grasos lineales de larga cadena carbonada (C14-C20) y en particular los alcoholes cetílico y estearílico, estando dicho agente tensioactivo presente en la composición a razón de 0,1 a 5 %, preferentemente de 0,5 a 2 % en peso, con respecto al peso total de la composición;

-: uno o más cuerpos grasos líquidos a temperatura ambiente, comúnmente denominados aceites, volátiles o no volátiles, hidrocarbonados, siliconados, lineales, cíclicos o ramificados, por ejemplo, los aceites de silicona tales

25 como los polidimetilsiloxanos (dimeticonas), los polialquilciclosiloxanos (ciclometiconas) y los polialquilfenilsiloxanos (fenildimeticonas); los aceites sintéticos tales como los aceites fluorados, los alquilbenzoatos y los hidrocarburos ramificados tales como poliisobutileno, isododecano; los aceites minerales (parafina); vegetales (aceite de almendras dulces, de macadamia, de pepita de grosella, de jojoba o incluso de Camelina sativa, tal como el aceite comercializado con la denominación comercial Lipex® Omega 3/6 por la compañía Unipex); los alcoholes grasos, las amidas grasas, los ácidos o los ésteres grasos como el benzoato de alcoholes en C12-C15 comercializado con la denominación comercial Finsolv® TN por la compañía Innospec, los triglicéridos incluyendo los ácidos cáprico/caprílico, el dicaprilil carbonado comercializado con la denominación Cetiol® CC por la compañía Cognis; preferentemente a razón de 0,1 a aproximadamente 10 %, preferentemente de 0,5 a 5 % en peso, con respecto al peso total de la composición;

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- una o más ceras (compuesto sólido o sustancialmente sólido a temperatura ambiente) y cuyo punto de fusión es generalmente superior a 35 °C, tales como la ozoquerita, la cera de polietileno, la cera de abeja o la cera de carnauba, preferentemente a razón de 0,01 a aproximadamente 5 %, preferentemente de 0,5 a 5 % en peso, con respecto al peso total de la composición;

- uno o más elastómeros de silicona obtenidos particularmente por reacción, en presencia de un catalizador, de un polisiloxano que tiene al menos un grupo reactivo (hidrógeno o vinilo, particularmente) y que lleva al menos un grupo alquilo (particularmente metilo) o fenilo, terminal y/o lateral, con un organosilicio tal como un organohidrogenopolisiloxano, preferentemente a razón de 0,1 a aproximadamente 20 %, preferentemente de

45 0,25 a 15 % en peso, con respecto al peso total de la composición;

- uno o más filtros solares, particularmente los filtros orgánicos, tales como los derivados de dibenzoilmetano (como el butil metoxidibenzoilmetano comercializado en particular por DSM con el nombre comercial Parsol® 1789), los derivados de ácido cinámico (como el etilhexil metoxicinamato comercializado en particular por DSM con el nombre comercial Parsol® MCX), los salicilatos, los ácidos para-aminobenzoicos, los β-β’-difenilacrilatos, las benzofenonas, los derivados de benzilideno alcanfor, los fenilbenzimidazoles, las triazinas, los fenilbenzotriazoles y los derivados antranílicos; o los filtros inorgánicos, a base de óxidos minerales en forma de pigmentos o nanopigmentos, recubiertos o no, y en particular a base de dióxido de titanio o de dióxido de cinc; preferentemente a razón de 0,1 a aproximadamente 30 %, mejor, de 0,5 a 20 % en peso, con respecto al peso

55 total de la composición;

- uno o más colorantes hidrosolubles tales como, por ejemplo, la sal disódica de amapola, la sal disódica del verde de alizarina, el amarillo de quinoleína, la sal trisódica de amaranto, la sal disódica de tartrazina, la sal monosódica de rodamina, la sal disódica de fucsina y la xantofila, preferentemente a razón de 0,1 a aproximadamente 2 % en peso, con respecto al peso total de la composición;

- una o más cargas, en particular agentes matificantes o cargas con efecto flotador y en particular los polvos con efecto soft-focus (en español enfoque suave).

65 Por carga, es preciso comprender partículas incoloras o blancas, minerales o sintetizadas, laminares o no laminares, adaptadas para dar cuerpo o rigidez a la composición y/o suavidad, matización y uniformidad inmediata tras la

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depositando en la columna 9 ml de tampón de elución «Gentle Ag/Ab elution buffer» (Pierce) y la reactividad de cada una de las 9 fracciones de elución se analizó por «transferencia de Western» sobre la proteína recombinante GST-LCE6A. La incubación se realizó con una alícuota de cada una de las fracciones de elución diluida a 1/50e, después con un anticuerpo secundario anti inmunoglobulina de conejo acoplado a peroxidasa diluido a 1/10000e (Zymed). El

5 revelado se realizó con el kit ECL (Amersham Pharmacia Biotech). Las fracciones que presentaban la reactividad más fuerte contra la proteína recombinante se reagruparon y dializaron contra 1.000 volúmenes de tampón TBS (Tris 0,05 M, NaCl 0,15 M, pH 7,6) usando budines de diálisis (MWCO 3500) una noche a +4 °C con agitación. El dializado se concentró aproximadamente 20 veces por ultrafiltración (Vivaspin 15R, 30000 MWCO, Vivascience). El dializado concentrado, correspondiente al antisuero purificado, se tituló sobre la proteína recombinante por “transferencia de Western”. Se reconocen 100 ng de GST-LCE6A hasta una dilución de 1/2000e.

2. Detección de la proteína LCE6A por inmunohistología: La expresión y la localización de la proteína LCE6A en la epidermis humana normal se analizó por inmunohistoquímica e inmunofluorescencia usando suero contra el péptido LCE6A. Se fijaron muestras de piel

15 abdominal humana normal en formol durante 24 h y se incluyeron en parafina. La inmunodetección se realizó en las secciones después del desmarcado del antígeno por incubación durante 40 minutos con glicina-HCl 50 mM, pH 3,5 a 95 °C.

En los experimentos de inmunohistoquímica, la inmunodetección se realizó con el kit «Impress rabbit» (Vector Laboratories) siguiendo las instrucciones del fabricante, utilizando el suero contra el péptido LCE6A diluido a 1/250e.

En los experimentos de inmunofluorescencia, se realizó un doble marcado usando suero contra el péptido LCE6A diluido a 1/100e y un anticuerpo monoclonal de ratón dirigido contra la (pro)filagrina (AHF3, Simon et al., J Invest Dermatol 1995, 105 :432) diluido a 1/1000e. Los anticuerpos secundarios son inmunoglobulinas anti inmunoglobulina

25 de ratón acopladas a AlexaFluor488 e inmunoglobulinas anti inmunoglobulina de conejo acopladas a AlexaFluor555 (Invitrogen), utilizadas a 1/1000e.

Resultados:

El marcado obtenido por inmunohistoquímica o inmunofluorescencia con el suero contra el péptido LCE6A apareció tardíamente durante la diferenciación epidérmica, en la transición de la capa granulosa / capa córnea y en la parte basal de la capa córnea. La comparación de los marcados obtenidos con el suero contra el péptido LCE6A y el anticuerpo monoclonal contra la (pro)filagrina en inmunofluorescencia, ha permitido poner de manifiesto que las dos proteínas, la LCE6A y la filagrina, se expresan a nivel de la capa granulosa y basal de la capa córnea de la

35 epidermis humana.

Ejemplo 3: Estudio de la expresión y de la localización de la proteína LCE6A en la epidermis humana soriásica

Protocolo:

1. Antisuero de conejo que reconoce específicamente la proteína LCE6A:

El antisuero de conejo utilizado, que reconoce específicamente la proteína LCE6A humana, es el mismo que el de la 45 producción y purificación que se describen en el ejemplo 2.

2. Detección de la proteína LCE6A por inmunohistología:

La expresión y la localización de la proteína LCE6A en la epidermis humana normal se analizó por inmunofluorescencia indirecta usando suero contra el péptido LCE6A. Las muestras provienen de piel abdominal humana normal o de lesiones soriásicas previamente extraídas de 15 individuos con soriasis. Estas muestras de piel se criofijaron y conservaron a - 80 °C. Se realizaron criosecciones, se secaron al aire libre durante aproximadamente 2 horas, se fijaron con acetona durante 10 minutos y después se conservaron a -80 °C. La inmunodetección se realizó por inmunofluorescencia sobre las secciones después del desmarcado del antígeno por incubación durante

55 20 minutos en la solución «target retrieval solution pH 9, en español solución de recuperación de diana a pH 9» (Dako) a 95 °C. Es suero contra el péptido LCE6A se utilizó a una dilución de 1/250e. El anticuerpo secundario es una inmunoglobulina anti inmunoglobulina de conejo acoplada a AlexaFluor555 (Invitrogen), utilizada a 1/1000e.

Resultados:

La observación de las secciones de piel con lesiones procedentes de 15 individuos con soriasis, muestra una disminución importante de la expresión de LCE6A en la capa granulosa y la basal de la capa córnea de la epidermis en comparación con la piel normal. Parece por tanto que esta patología, que presenta una profunda alteración de la proliferación y de la diferenciación de los queratinocitos, así como un problema importante de la función de la barrera

65 epidérmica, presenta una cantidad de proteína LCE6A, expresada por el queratinocito granuloso después incorporada en la envoltura córnea, considerablemente reducida.

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Claims

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