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ES2599056B2 - Dispositivo para ensayar una muestra de células - Google Patents

Dispositivo para ensayar una muestra de células Download PDF

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ES2599056B2
ES2599056B2 ES201500574A ES201500574A ES2599056B2 ES 2599056 B2 ES2599056 B2 ES 2599056B2 ES 201500574 A ES201500574 A ES 201500574A ES 201500574 A ES201500574 A ES 201500574A ES 2599056 B2 ES2599056 B2 ES 2599056B2
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Abstract

Dispositivo para ensayar una muestra de células que comprende un primer depósito (1) fijado a un bastidor (38) que se apoya en una superficie de apoyo (39), un segundo depósito (2) fijado también al bastidor (38) que se apoya en la superficie de apoyo (39), un conducto plano (3) formado por dos cristales, que comunica el primer depósito (1) y el segundo depósito (2), una cámara de presión (16), un imán (40) que se mueve al menos en paralelo al conducto plano (3), una cámara (47) que recorre el conducto plano (3) en su totalidad, un alimentador (14), un elemento de presión (15), y un microcontrolador (60) que maneja los distintos elementos del dispositivo, donde el primer depósito (1), el conducto plano (3), la cámara de presión (16) y el segundo depósito (2) forman un circuito cerrado tal que una muestra puede ser llevada a cualquier punto del circuito cerrado.

Description

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DISPOSITIVO PARA ENSAYAR UNA MUESTRA DE CELULAS
DESCRIPCIQN
SECTOR DE LA TECNICA
La invention se encuadra en el sector de la tecnica de cualquiera de las siguientes industrias: biomedica, biotecnologica, farmaceutica y toda aquella que utilice celulas para investigar, diagnosticar o tratar con ellas.
ANTECEDENTES DE LA INVENCION
La separation y clasificacion de celulas, a partir de soluciones en las que se encuentran diferentes tipos de celulas es necesaria para realizar tratamientos y ensayos, es decir para realizar ensayos sobre celulas y poder aplicar tratamientos especificos a determinadas celulas es necesario separar dichas celulas determinadas y en ocasiones es importante tener information adicional de las celulas como es la rugosidad de las celulas, el tamafio, moleculas de superficie para poder clasificarlas e identificarlas ...
Existe una tecnica para clasificacion de celulas activadas por fluorescencia, que es un tipo especializado de citometria de flujo. Esta tecnica provee un metodo para la clasificacion y selection de celulas provenientes de una mezcla de varias poblaciones en dos o mas contenedores pero celula a celula, segun las caracteristicas particulars de dispersion y fluorescencia de cada celula.
Es un instrumento cientifico de gran utilidad ya que provee un metodo de grabacion de datos provenientes de las senales de fluorescencia de cada celula que es a la vez rapido, objetivo y cuantitativo; adembs permite la separation fisica de aquelias celulas pertenecientes a una poblacibn de interes.
En la tecnica de clasificacibn de cblulas activadas por fluorescencia la suspensibn de celulas es arrastrada hacia el centra de una corriente de llquido estrecha, que fluye rapidamente. El flujo esta dispuesto de manera que no existe una gran separation entre celulas en relation con su diametro por lo que el flujo debe de estar extremadamente ajustado. Un mecanismo de vibration provoca que la corriente de liquido conteniendo las celulas se rompa en pequenas gotitas. El sistema se ajusta de modo que haya una baja probabilidad de que mas de una celula quede contenida en cada gota. Justo antes de que la corriente se rompa en gotitas, el
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flujo pasa a traves de una estacibn de medicibn de fluorescencia y de otras caracteristicas de las cblulas como son el tamano, la rugosidad), donde se mide el carbcter fluorescente de interes de cada celula (y las otras caracteristicas singulares de cada celula que sean de interes). (Jn anillo capaz de adquirir una carga electrica se coloca justo en el punto donde la corriente se rompe en gotitas.
Segun la medicibn de la fluorescencia recogida para cada celula, el sistema entrega una determinada carga electrica al anillo, como consecuencia las gotitas se cargan electricamente con un signo contrario al del anillo mientras se desprenden de la corriente de liquido. Las gotitas cargadas luego caen a traves de un sistema de deflexibn electrostatics que desvia las gotas en los contenedores dependiendo de su carga. En algunos sistemas, la carga se aplica directamente a la corriente de liquido, y como resultado la gotita que se desprende retiene carga del mismo signo que la aplicada. Luego de que la gotita se desprende, el anillo recupera una carga neutra.
Es conocida otra tecnica para clasificacion de celulas, que es la clasificacion mediante separacibn celular magnetics, que es un metodo para la separacion de diversas poblaciones de celulas en funcion de sus antigenos de superficie.
El metodo de clasificacibn mediante separacibn celular magnetica permite que las celulas se separen por incubacibn con particulas magneticas recubiertas con anticuerpos contra un antigeno de superficie en particular. Esto hace que las celulas que expresan este antigeno se unan a los anticuerpos que se unen a su vez a las particulas magneticas. Despues, la solucibn de celulas se transfiere en una columna colocada en un campo magnetico fuerte. En este paso, las celulas unidas a las particulas permanecen en la columna, mientras que otras cblulas fluyen a traves de la columna. Con este metodo, las cblulas se pueden separar de manera positiva o negativamente con respecto al antigeno en particular.
La seleccibn positiva
En la seleccibn positiva de las celulas que expresan el antigeno de interes, lo que unido a la columna magnetica, se lavan a cabo a un recipiente separado, despues de retirar la columna del campo magnetico. Este metodo es util para el aislamiento de un tipo de celula particular.
La seleccibn negativa
En la seleccibn negativa el anticuerpo utilizado es contra el antigeno de superficie que se sabe que esta presente en las celulas que no son de interes. Despubs de la administracion de las
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celulas/solucion de particulas magneticas en la columna las celulas que expresan estos antlgenos se unen a la columna y la fraccion que pasa a traves se recoge, ya que casi no contiene celulas con antlgenos no deseados.
EXPLICACION DE LA INVENCION
Es objeto de la invention un dispositivo para ensayar una muestra de celulas que comprende:
- un primer depbsito y un segundo depbsito fijados a un bastidor, con el bastidor apoyado en una superficie de apoyo,
- un conducto piano formado por dos cristales, que comunica el primer deposito y el segundo deposito,
- una camara de presibn,
- un iman con capacidad de moverse al menos en paralelo al conducto piano,
- una camara con capacidad de recorrer el conducto piano en su totalidad,
- un alimentador,
- un elemento de presion, y
- un microcontrolador que maneja los distintos elementos del dispositivo,
En el dispositivo objeto de la invencion el primer deposito, el conducto piano, la camara de presion y el segundo deposito estan comunicados entre si formando un circuito cerrado tal que una muestra introducida mediante el alimentador puede ser Nevada a cualquier punto del circuito cerrado.
El dispositivo para ensayar una muestra de celulas comprende tambien una primera valvula conectada por un extremo al alimentador y estando conectada por el extremo opuesto a la camara de presion y a una segunda valvula mediante una conexion en“T”, una tercera vblvula que abre y cierra la comunicacion del segundo depbsito con la camara de presion y una cuarta valvula entre el elemento de presibn y la camara de presion, donde la segunda vblvula controla la comunicacibn de la camara de presibn con el primer depbsito y la cuarta valvula controla la entrada de presibn en el circuito.
En el dispositivo para ensayar una muestra de celulas objeto de la invencion el primer depbsito comprende una primera estructura exterior y una primera estructura interior de forma cilindrica con un primer saliente que da lugar a una primera arista que configura una primera salida que comunica con un extremo del conducto piano formado por los dos cristales; y el segundo depbsito comprende una segunda estructura exterior y una segunda estructura interior de forma cilindrica con un segundo saliente que da lugar a una segunda arista que configura una
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segunda salida que comunica con el extremo opuesto del conducto piano.
En el dispositivo para ensayar una muestra de celulas objeto de la invencion la primera salida del primer deposito estd regulada por una primera compuerta deslizable guiada por al menos una primera guia lateral y una primera guia frontal e impulsada por un primer servo-motor y la segunda salida del segundo deposito esta regulada por una segunda compuerta deslizable guiada por al menos una segunda guia lateral y una segunda guia frontal e impulsada por un segundo servo-motor.
El dispositivo para ensayar una muestra de celulas objeto de la invencion comprende:
- un primer mecanismo de agitacion del contenido del primer deposito, el citado primer mecanismo de agitacion comprende unas primeras helices unidas a un primer eje que es movido por un primer motor electrico situado fuera del primer deposito, y
- un segundo mecanismo de agitacion del contenido de dicho segundo deposito, el citado segundo mecanismo de agitacion comprende unas segundas helices unidas a un segundo eje que es movido por un segundo motor electrico situado fuera del segundo deposito.
En el dispositivo para ensayar una muestra de c&lulas segun tanto el primer deposito como el segundo deposito comprenden una pluralidad de orificios conectados con valvulas para introducir o extraer de su interior diferentes compuestos.
El dispositivo para ensayar una muestra de c&lulas objeto de la invencion comprende una estructura de apoyo para el iman.
La mencionada estructura de apoyo para el iman esta apoyada en una pareja de carriles que guian un movimiento horizontal del im£n, esta unida a un tomillo sinfln horizontal unido a un primer motor paso a paso, esta unida a una primera pareja de tornillos sinfln verticales unidos a dos segundos motores paso a paso y en dicha estructura de apoyo para el iman el primer motor paso a paso y el tornillo sinfln horizontal mueven la estructura de apoyo en horizontal y la primera pareja de tornillos sinfln verticales con los dos segundos motores paso a paso mueven la estructura de apoyo en vertical.
La camara para ensayar una muestra de celulas objeto de la invencion comprende un objetivo, un cuerpo de microscopio y una fuente de iluminacion que apunta hacia la zona del conducto piano que se esta fotografiando.
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En el dispositivo para ensayar una muestra de celulas objeto de la invencion la camara se situa en una estructura de sujecion de la camara, donde la estructura de sujecion de la camara se apoya en la superficie de apoyo.
La citada estructura de sujecion de la camara comprende:
- dos columnas de guia, sobre las que se desplazan verticalmente una pieza de guiado por cada columna de guia,
- dos carriles uniendo las piezas de guiado, sobre los que se desplaza una pletina de fijacion a la que se fija el microscopio de la camara,
- una segunda pareja de tornillos sinfin verticales que atraviesan las piezas de guiado,
En la estructura de sujecion de la c£mara cada tomillo sinfin vertical gira unido a un tercer motor paso a paso proporcionando movimiento vertical a las piezas de guiado y la pletina de fijacion estd unida a un cuarto motor paso a paso que a su vez esta unido a un sinfin horizontal que pasa por una de las piezas de guiado proporcionando mediante el giro del sinfin horizontal movimiento horizontal a la cdmara.
En el dispositivo para ensayar una muestra de celulas objeto de la invencion la fuente de iluminacion esta situada en el objetivo de la camara mediante una estructura en forma de revolver o de anillo.
La fuente de iluminacidn del dispositivo para ensayar una muestra de celulas objeto de la invencion comprende al menos tres leds distintos cada led con una longitud de onda especifica.
BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS
Para complementar la descripcion que se esta realizando y con objeto de ayudar a una mejor comprension de las caracteristicas de la invencidn, se acompafia como parte integrante de dicha descripcidn, un juego de dibujos en donde con car£cter ilustrativo y no limitativo, se ha representado lo siguiente:
Figura 1Muestra una vista en perspectiva desde un lateral del dispositivo de la invencion. Figura 2.- Muestra una vista en perspectiva del dispositivo de la invencion desde otro lateral distinto al de la figura 1.
Figura 3.- Muestra una vista en perspectiva del dispositivo objeto de la invencion sin el imdn
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ni la estructura que lo sostiene.
Figura 4.- Muestra una vista en perspectiva del iman con la estructura que lo sostiene y tambien aparecen los depositos como referenda.
Figura 5.- Muestra una vista en perspectiva de la camara del dispositivo objeto de la invencion con la estructura que la sostiene.
Figura 6.- Muestra una vista en perspectiva de la camara del dispositivo objeto de la invencion desde otra perspectiva distinta a la de la figura 5.
Figura 7.- Muestra una vista en perspectiva de los depositos del dispositivo objeto de la invencidn desde un lateral.
Figura 8.- Muestra una vista en perspectiva de los mecanismos de agitacion del interior de los depositos del dispositivo objeto de la invencion.
Figura 9.- Muestra una vista de los depositos enfrentados habiendo retirado el conducto piano, mostrando las dos salidas de los depositos.
Las referencias numericas empleadas en las figuras se corresponden con los siguientes elementos:
1. primer deposito,
2. segundo deposito,
3. conducto piano,
4. primera estructura exterior,
5. primera estructura interior,
6. primer saliente,
7. primera arista,
8. primera salida,
9. segunda estructura exterior,
10. segunda estructura interior,
11. segundo saliente,
12. segunda arista,
13. segunda salida,
14. elemento alimentador,
15. elemento de presion,
16. camara de presion,
17. primera valvula,
18. segunda valvula,
19. tercera valvula,
20. cuarta valvula,
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21. pluralidad de orificios,
22. primera compuerta,
23. primera guia lateral
24. primera gula frontal,
25. primer servo-motor,
26. segunda compuerta,
27. segunda guia lateral
28. segunda guia frontal,
29. segundo servo-motor,
30. primer mecanismo de agitacion,
31. primeras helices,
32. primer eje,
33. primer motor electrico,
34. segundo mecanismo de agitacion,
35. segundas helices,
36. segundo eje,
37. segundo motor electrico,
38. bastidor,
39. superficie de apoyo,
40. iman,
41. estructura de apoyo del iman,
42. carriles,
43. tomillo sinfln horizontal,
44. primer motor paso a paso,
45. primera pareja de tomillos sinfin verticales,
46. segundo motor paso a paso,
47. c^mara,
48. cuerpo de microscopio,
49. objetivo,
50. fuente de iluminacidn,
51. estructura de sujecion de la camara,
52. columnas de guia,
53. pieza de guiado,
54. carril de la camara,
55. pletina de fijacion,
56. tomillo sinfin vertical,
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57. tercer motor paso a paso,
58. cuarto motor paso a paso,
59. tornillo sinfin horizontal, y
60. microcontrolador.
REALIZACION PREFERENTE DE LA INVENCION
El dispositivo objeto de la invencion comprende un primer deposito (1) y un segundo deposito (2) comunicados mediante un conducto piano (3) formado por dos cristales enfrentados, y separados, donde el espacio libre entre los cristales genera el citado conducto piano (3).
El primer deposito (1) comprende una primera estructura exterior (4) y una primera estructura interior (5) de forma cilindrica con un primer saliente (6) que da lugar a una primera arista (7) que configura una primera salida (8) que comunica con un extremo del conducto piano (3) formado por los dos cristales. El segundo deposito (2) comprende una segunda estructura exterior (9) y una segunda estructura interior (10) de forma cilindrica con un segundo saliente (11) que da lugar a una segunda arista (12) que configura una segunda salida (13) que comunica con el extremo opuesto del conducto piano (3).
El dispositivo objeto de la invencion comprende un elemento alimentador (14) a traves del que se introduce en el dispositivo objeto de la invencion una muestra que se desea ensayar, y a traves del que se extrae la muestra una vez ensayada.
Para manejar la circulation de la muestra entre los depositos (1, 2), el dispositivo comprende un elemento de presion (15) que introduce presion en un circuito cerrado generado por el primer deposito (1), el segundo deposito (2), el conducto piano (3) y el elemento de presion (15) comunicados todos entre si. Ademas el dispositivo objeto de la invencion comprende una camara de presion (16) conectada con los otros dos depdsitos (1,2), con el elemento de presion (15) y con el elemento alimentador (14).
Para controlar la entrada de cualquier muestra, el dispositivo objeto de la invencion comprende una primera v£lvula (17) conectada por un extremo al elemento alimentador (14) y estando conectada por el extremo opuesto a la camara de presion (16) y a una segunda valvula (18) mediante una conexion en “T”, donde la segunda valvula (18) controla la comunicacion de la camara de presion (16) con el primer deposito (1). El segundo deposito (2) se comunica con la camara de presion (16) mediante una tercera valvula (19) que abre y cierra la comunicacion del segundo deposito (2) con la camara de presion (16). Entre el
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elemento de presion (15) y la camara de presion (16) el dispositivo objeto de la invencion comprende una cuarta valvula (20) que controla la presion que entra en el circuito.
El elemento de presion (15) junto con las valvulas (17, 18,19, 20) maneja la presion sobre el circuito cerrado del dispositivo objeto de la invencion, pudiendo hacer circular la muestra introducida en el dispositivo objeto de la invencion en el sentido que se desee, de un deposito (1, 2) a otro, retener la muestra en la camara de presion (16), retener partes de una muestra en un deposito (1, 2), partes en otro deposito (1, 2) o extraer una parte de la muestra o la totalidad por el elemento alimentador (14).
Tanto el primer deposito (1), como el segundo deposito (2) tienen una pluralidad de orificios (21) para introducir o extraer de su interior diferentes compuestos, de manera que los dos depositos (1, 2) pueden ser acomodados a diferentes condiciones de pH, gases o nutrientes asi como otras moleculas. Esto permite que los dos depositos (1,2) puedan actuar como una incubadora de celulas en las que se puede variar las condiciones de las celulas contenidas en su interior, para realizar el ensayo que se desee.
La comunicacion del primer deposito (1) con el conducto piano (3) a traves de la primera salida (7), es regulable, es decir el dispositivo objeto de la invencion comprende una primera compuerta (22) que se desliza impulsada por dos primeros servomotores (25) y es guiada a lo largo de dos primeras guias laterales (23) unidas a los primeros servomotores (25) y con una primera gula frontal (24), de modo que la primera compuerta (22) puede abrir y cerrar en mayor o menor medida la primera salida (7) del primer deposito (1) al conducto piano (3). La primera gula frontal (24) facilita que la primera compuerta (22) al final de su recorrido vaya a su lugar cubriendo en mayor o menor medida la primera salida (8).
La comunicacidn del segundo deposito (2) con el conducto piano (3) a traves de la segunda salida (13), es regulable, es decir el dispositivo objeto de la invencion comprende una segunda compuerta (26) que se desliza impulsada por dos segundos servomotores (29) y es guiada a lo largo de dos segundas guias laterales (27) unidas a los segundos servomotores (29) y con una segunda gula frontal (28), de modo que la segunda compuerta (26) puede abrir y cerrar en mayor o menor medida la segunda salida (13) del segundo deposito (2) al conducto piano (3). La segunda gula frontal (28) facilita que la segunda compuerta (26) al final de su recorrido vaya a su lugar cubriendo en mayor o menor medida la segunda salida (13).
En el interior del primer deposito (1) se localiza un primer mecanismo de agitacion (30) del
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contenido de dicho primer deposito (1), el citado primer mecanismo de agitacion (30) comprende unas primeras helices (31) unidas a un primer eje (32) que es movido por un primer motor electrico (33) situado fuera del primer deposito (1).
En el interior del segundo deposito (2) se localiza un segundo mecanismo de agitacion (34) del contenido de dicho segundo deposito (2), el citado segundo mecanismo de agitacion (34) comprende unas segundas helices (35) unidas a un segundo eje (36) que es movido por un segundo motor electrico (37) situado fuera del segundo deposito (2).
Los dos depositos (1, 2) estan unidos a un bastidor (38) que sostiene los dos depositos (1, 2) en posicion paralela entre ellos. El bastidor (38) se apoya en una superficie de apoyo (39) sobre la que se situan todos los componentes del dispositivo objeto de la invencibn.
El dispositivo objeto de la invention comprende un iman (40), que en la realization preferente de la invencion es un iman de neodimio, que esta sostenido en una estructura de apoyo (41) que a su vez se une a la superficie de apoyo (39) del dispositivo. La estructura de apoyo (41) esta apoyada en una pareja de carriles (42) que gulan un movimiento horizontal del iman (40), y esta unida a un tomillo sinfln horizontal (43) unido a un primer motor paso a paso (44) tal que el primer motor paso a paso (44) y el tomillo sinfln horizontal (43) mueven la estructura de apoyo (41) en horizontal, haciendo que el iman (40) pueda alejarse y/o acercarse al conducto piano (3).
La estructura de apoyo (41) tambien esta unida a una primera pareja de tornillos sinfln verticales (45) que en colaboracibn con dos segundos motores paso a paso (46) mueven la estructura de apoyo (41) en vertical y consecuentemente producen el movimiento en vertical del iman (40).
El movimiento en vertical junto con el movimiento en horizontal del iman (40), hace que el citado iman (40) pueda acercarse y alejarse de la primera arista (7) del primer deposito (1) y del conducto piano (3) lo que hace que se pueda regular la intensidad con la que se atrae a la muestra que se encuentra en el interior de dicho primer deposito (1) y del conducto piano (3).
Aunque en la realizacion preferente de la invencion, el iman (40) es un iman (40) de neodimio, con un campo electromagneticofijo, el iman (40) puede ser un electroiman que este conectado a una fuente de alimentation de modo que la fuente de alimentation varia la intensidad de
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corriente que hace pasar por el iman (40), permitiendo modificar el campo electromagnetico que ejerce el iman (40) lo que se traduce en que el iman (40) puede hacer que, a una misma distancia del primer deposito (1) o del conducto piano (3), aumente o reduzca la fuerza de atraccion ejercida sobre la muestra de celulas cargadas con anticuerpos monoclonales magneticos de la muestra heterogenea que se encuentra o distribuida por el conducto piano (3), en el primer deposito (1) o en el segundo deposito (2).
El funcionamiento del dispositivo objeto de la invention con el primer deposito (1), el conducto piano (3), el segundo deposito (2) junto con el iman (40) y el elemento de presion (15), es como sigue:
- se realiza el ensayo que se desee sobre las celulas distribuidas en el primer deposito
(D.
- el primer deposito (1) contiene una muestra de cSlulas en dispersion en un liquido disolvente,
- algunas de las celulas de la muestra son marcadas con anticuerpos monoclonales magneticos,
- los dos cristales que forman el conducto piano (3) estan separados una distancia pequena que hace que, una vez el primer deposito (1) esta en comunicacion con el conducto piano (3) por efecto de la capilaridad, la muestra de celulas en dispersion suban por el citado conducto piano (3),
- el iman (40) desciende y se aproxima a la primera arista (7) del primer deposito (1) excitando aquellas celulas marcadas con anticuerpos monoclonales magneticos de la muestra que se encontraba en dispersion del primer deposito (1),
- se abre la primera compuerta (22) y se comunica el primer deposito (1) con el conducto piano (3),
- el iman (40) asciende y arrastra las celulas excitadas distribuyendolas a lo largo del conducto piano (3),
- el primer deposito (1) cierra la comunicacion con el conducto piano (3),
- la camara (47) realiza un barrido del conducto piano (3), realizando fotos de todo lo que se encuentra en el conducto piano (3),
- La informacion obtenida de estas fotos es procesada y se obtiene informacion del tipo de celulas que se encuentran en el conducto piano (3),
- se abre la segunda compuerta (26) y se comunica el segundo deposito (2) con el conducto piano (3),
- el iman (40) arrastra las celulas en dispersion desde el conducto piano (3) hasta el segundo deposito (2).
La funcion del iman (40) es asegurar el movimiento de las celulas en dispersion de la muestra heterogenea que se encuentran en el primer deposito (1) o en el segundo deposito (2) ya que el movimiento por capilaridad no asegura una distribution de las celulas marcadas con 5 anticuerpos magneticos en todo el conducto piano (3) y el iman (40), por el contrario si garantiza dicha distribudon.
El dispositivo objeto de la invencion comprende una camara (47) que realiza fotos por sectores del conducto piano (3), para lo que realiza un recorrido por el conducto piano (3) de manera 10 que va sacando fotos de las celulas de la muestra que se encuentran distribuidas a lo largo y ancho de dicho conducto piano (3).
La camara (47) esta conectada a un cuerpo de microscopio (48) en cuyo extremo se localiza el objetivo (49), ademas la camara (47) comprende una fuente de iluminacion (50) que, en 15 una realization de la invencion comprende seis de leds que se localizan alrededor del objetivo
(49) en forma de revolver. Los leds se encuentran enfocando hacia la zona del conducto piano (3) que se est£ fotografiando para irradiar las celulas de la muestra en estudio y que emitan fluorescencia.
20 El que la fuente de iluminacion (50) comprenda seis leds distintos, hace que se puedan irradiar las celulas de la muestra con seis longitudes de onda distintas, y de cada sector que se fotograffa se pueden hacer seis fotos, una foto con cada led encendido, por lo que se pueden marcar diferentes tipos de moleculas que se excitan a diferentes longitudes de onda (muchas celulas pueden compartir moleculas en la superficie celular) celulas y puedo obtener seis 25 parametros de las moleculas de la muestra distribuida en el conducto piano (3), por ejemplo
se puede obtener un dato del porcentaje de pureza o eficacia de separacion asi como garantizar la eficacia y purezas requeridas en la separacion de un tipo de celula para un ensayo concrete, con reproducibilidad y exactitud. Los leds son fuentes de iluminacion con longitudes de onda especlficas que permiten excitar a marcadores unidos a las c&lulas 30 mediante anticuerpos modificados con partlculas fluorescentes (que son magneticos a la vez). La mayoria de anticuerpos tienen patrones de fluorescencia peculiares y unicos.
La camara (47) del dispositivo objeto de la invencion se situa en una estructura de sujecion de la camara (51) que se apoya en la superficie de apoyo (39) del dispositivo objeto de la 35 invencion. La estructura de sujecion de la camara (51) comprende dos columnas de gula (52),
sobre las que se desplazan verticalmente una pieza de guiado (53) por cada columna de gula
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(52), uniendo las piezas de guiado (53) la estructura de sujecion de la camara (51) comprende dos carriles (54) sobre los que se desplaza una pletina de fijacion (55) a la que se fija la camara (47). Para el movimiento vertical de la camara (47) cada pieza de guiado (53) es atravesada por un tornillo sinfin vertical (56) que gira unido a un tercer motor paso a paso (57), mientras que para el movimiento horizontal de la camara (47), la pletina de fijacion (55) est£ unida a un cuarto motor paso a paso (58) que a su vez esta unido a un sinfin horizontal (59) que pasa por una de las piezas de guiado (53) de modo que el giro del sinfin horizontal (59) arrastra el cuarto motor paso a paso (58), con el cuarto motor paso a paso(58), la pletina de fijacion (55) y con ella la camara (47).
El dispositivo objeto de la invencion comprende un microcontrolador (L) que maneja los distintos elementos del dispositivo, la apertura y cierre de las distintas valvulas, el suministro y extraction a los depositos (1,2) tanto de celulas como diferentes sustancias y componentes, la apertura y cierre de los depositos (1, 2), el funcionamiento de los distintos servomotores (25, 29), motores electricos (33,37) y motores paso a paso (44,46, 57, 58) del dispositivo que realizan la subida y bajada del iman (40) y los movimientos de la camara (47) en su recorrido por el conducto piano (3) o el movimiento de los mecanismos de agitation (30 ,34), asi como el funcionamiento de la camara (47) sacando fotos por sectores del conducto piano (3) y la apertura o cierre de las compuertas que comunican los depositos (1,2) con la c£mara plana (3).
La camara (47) del dispositivo objeto de la invencion esta conectada a un ordenador, que almacena las fotos de la c£mara (47), tal que en el ordenador mediante un programa especificamente disenado y mediante patrones de vision artificial analiza la forma, el tarnaho y la fluorescencia de las celulas.
El an£lisis y procesamiento por un software de estos patrones encontrados en las fotograffas tomadas por la camara, permite identificar que cuerpos estan siendo irradiados con los diferentes leds.
Aunque en la realizacion preferente del dispositivo objeto de la invencion el conducto piano (3) se ha generado por dos cristales cuya distancia permanece fija, es posible modificar este dispositivo e incluiiie un conducto piano (3) con una distancia entre cristales que se pueda modificar, bien de forma manual bien automaticamente.
El desarrollo de la realizacion preferente de la invencion realizado previamente pretende servir
como guia para mostrar un desarrollo particular de la invencidn si bien el alcance de la invention se define mediante las siguientes reivindicaciones.

Claims (11)

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    REIVINDICACIONES
    1. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas caracterizado porque comprende:
    - un primer depbsito (1) fijado a un bastidor (38) que se apoya en una superficie de apoyo (39),
    - un segundo depbsito (2) fijado tambien al bastidor (38) que se apoya en la superficie de apoyo (39),
    - un conducto piano (3) form ado por dos cristales, que comunica el primer deposito (1) y el segundo deposito (2),
    - un iman (40) con capacidad de moverse al menos en paralelo al conducto piano (3),
    - una camara (47) con capacidad de recorrer el conducto piano (3) en su totalidad,
    - un alimentador (14),
    donde el primer deposito (1), el conducto piano (3), la camara de presibn (16) y el segundo depbsito (2) estan comunicados entre si formando un circuito cerrado tal que una muestra introducida mediante el alimentador (14) puede ser Nevada a cualquier punto del circuito cerrado.
  2. 2. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun la reivindicacion 1 caracterizado porque comprende:
    - un elemento de presibn (15),
    - una camara de presion (16), y
    - un microcontrolador (60) que maneja los distintos elementos del dispositivo,
    donde el elemento de presibn (15) y la camara de presibn (16) introducen presion en el circuito cerrado para mover la muestra automaticamente a cualquier punto de dicho circuito cerrado.
  3. 3. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque comprende
    - una primera valvula (17) conectada por un extremo al alimentador (14) y estando conectada por el extremo opuesto a la camara de presibn (16) y a una segunda vblvula (18) mediante una conexibn en “T”, y
    - una tercera valvula (19) que abre y cierra la comunicacibn del segundo deposito (2) con la camara de presibn (16),
    - una cuarta valvula (20) entre el elemento de presibn (15) y la camara de presibn (16), donde la segunda valvula (18) controla la comunicacibn de la camara de presibn (16) con el primer deposito (1) y la cuarta valvula (20) controla la entrada de presibn en el circuito.
  4. 4. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque el primer deposito (1) comprende una primera estructura exterior (4) y una primera estructura interior (5) de forma cilfndrica con un primer saliente (6) que da lugar a una primera arista (7) que configura una primera salida (8) que comunica con
    5 un extremo del conducto piano (3) formado por los dos cristales; y donde el segundo deposito
    (2) comprende una segunda estructura exterior (9) y una segunda estructura interior (10) de forma cilindrica con un segundo saliente (11) que da lugar a una segunda arista (12) que configura una segunda salida (13) que comunica con el extremo opuesto del conducto piano
    (3) .
    10
  5. 5. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque la primera salida (8) del primer deposito (1) esta regulada por una primera compuerta (22) deslizable guiada por al menos una primera guia lateral (23) y una primera guia frontal (24) e impulsada por al menos un primer servo-motor (25) y la
    15 segunda salida (13) del segundo deposito (2) esta regulada por una segunda compuerta (26)
    deslizable guiada por al menos una segunda guia lateral (27) y una segunda guia frontal (28) impulsada por al menos un segundo servo-motor (29).
  6. 6. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones 20 anteriores caracterizado porque comprende:
    - un primer mecanismo de agitacion (30) del contenido de dicho primer deposito (1), el citado primer mecanismo de agitacion (30) comprende unas primeras helices (31) unidas a un primer eje (32) que es movido por un primer motor electrico (33) situado fuera del primer deposito (1), y
    25 - un segundo mecanismo de agitacion (34) del contenido de dicho segundo deposito (2),
    el citado segundo mecanismo de agitacion (34) comprende unas segundas helices (35) unidas a un segundo eje (36) que es movido por un segundo motor electrico (37) situado fuera del segundo deposito (2).
    30 7. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones
    anteriores caracterizado porque tanto el primer deposito (1) como el segundo deposito (2) comprenden una pluralidad de orifidos (21) conectados con valvulas para introducir o extraer de su interior diferentes compuestos.
    35 8. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones
    anteriores caracterizado porque comprende una estructura de apoyo (41) para el iman (40),
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    donde la estructura de apoyo (41):
    - esta apoyada en una pareja de carriles (42) que guian un movimiento horizontal del iman (40), y
    - esta unida a un tomillo sinfin horizontal (43) unido a un primer motor paso a paso (44),
    - esta unida a una primera pareja de tornillos sinfin verticales (45) unidos a dos segundos motores paso a paso (46),
    tal que el primer motor paso a paso (44) y el tomillo sinfin horizontal (43) mueven la estructura de apoyo (41) en horizontal y la primera pareja de tornillos sinfin verticales (45) con los dos segundos motores paso a paso (46) mueven la estructura de apoyo (41) en vertical.
  7. 9. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque la camara (47) comprende un objetivo (49), un cuerpo de microscopio (48), y una fuente de iluminacion (50) que apunta hacia la zona del conducto piano (3) que se esta fotografiando.
  8. 10. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque la camara (47) se situa en una estructura de sujecion de la camara (51), donde la estructura de sujecion de la camara (51) se apoya en la superficie de apoyo (39).
  9. 11. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun la reivindicacion 9 caracterizado porque la fuente de iluminacion (25) estd situada en el objetivo (49) de la camara (47) en forma de revolver.
  10. 12. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun cualquiera de las reivindicaciones anteriores caracterizado porque la fuente de iluminacion (47) comprende al menos un led con una longitud de onda especifica.
  11. 13. Dispositivo para ensayar una muestra de celulas segun la reivindicacion 10 caracterizado porque la estructura de sujecion de la camara (51) comprende:
    - dos columnas de guia (52), sobre las que se desplazan verticalmente una pieza de guiado (53) por cada columna de guia (52),,
    - dos carriles (54) uniendo las piezas de guiado (53), sobre los que se desplaza una pletina de fijacion (55) a la que se fija la camara (47),
    - una segunda pareja de tornillos sinfin verticales (56) que atraviesan las piezas de guiado (53),
    donde cada tomillo sinfin vertical (56) gira unido a un tercer motor paso a paso (57)
    proporcionando movimiento vertical a las piezas de guiado (53) y la pletina de fijacion (55) esta unida a un cuarto motor paso a paso (58) que a su vez esta unido a un sinfin horizontal (59) que pasa por una de las piezas de guiado (53) proporcionando mediante el giro del sinfin horizontal (59) movimiento horizontal a la camara (47).
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