[go: up one dir, main page]

ES2597554T3 - Métodos de utilización de micro-ARN de fluidos corporales para el diagnóstico y control del deterioro cognitivo leve - Google Patents

Métodos de utilización de micro-ARN de fluidos corporales para el diagnóstico y control del deterioro cognitivo leve Download PDF

Info

Publication number
ES2597554T3
ES2597554T3 ES10779376.2T ES10779376T ES2597554T3 ES 2597554 T3 ES2597554 T3 ES 2597554T3 ES 10779376 T ES10779376 T ES 10779376T ES 2597554 T3 ES2597554 T3 ES 2597554T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
mir
rna
small
mirna
methods
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
ES10779376.2T
Other languages
English (en)
Inventor
Samuil Umansky
Kirsa S. SHEINERMAN
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DiamiR LLC
Original Assignee
DiamiR LLC
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DiamiR LLC filed Critical DiamiR LLC
Application granted granted Critical
Publication of ES2597554T3 publication Critical patent/ES2597554T3/es
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Un método para el diagnóstico de una enfermedad neurodegenerativa en un sujeto, en donde la enfermedad neurodegenerativa es un deterioro cognitivo leve, cuyo método que comprende: a. determinar el nivel de un ARN pequeño de sinapsis o neuritas en una muestra de fluido corporal del sujeto, en donde el fluido corporal se selecciona del grupo que consiste en plasma sanguíneo, suero, orina y saliva, y en donde el ARN pequeño de sinapsis o neuritas es un miARN seleccionado del grupo que consiste en miR-7, miR-125b, miR-128, miR-132, miR-134, miR-323-3p, y miR-874; b. determinar el nivel de un ARN pequeño de la misma muestra de fluido corporal del sujeto, en donde el ARN pequeño es un miARN que no se expresa en el cerebro o un miARN seleccionado del grupo que consiste en miR-181a, miR-491-5p, miR-10b y miR-141; c. determinar la razón de los niveles de los ARN pequeños determinada en las etapas (a) y (b); d. comparar la razón de los niveles de los ARN pequeños determinada en la etapa (c) con una razón de control correspondiente, y e. (i) identificar el sujeto por estar afectados por la enfermedad neurodegenerativa cuando la razón de los niveles de los ARN pequeños determinada en la etapa (c) es superior a la razón de control correspondiente o (ii) identificar el sujeto por no estar afectado por la enfermedad neurodegenerativa cuando la razón de los niveles de los ARN pequeños determinada en la etapa (c) no es mayor que la razón de control correspondiente.

Description

imagen1
imagen2
imagen3
imagen4
imagen5
imagen6
5
15
25
35
45
55
En otra realización relacionada, la descripción proporciona un método para controlar la eficacia de un tratamiento de una patología neuronal (p. ej., una patología neuronal asociada con una enfermedad neurodegenerativa u otro trastorno neurológico) en un sujeto mediante la determinación de cambios en el nivel de uno o más ARN pequeños de sinapsis y/o neuritas en muestras de fluidos corporales del sujeto, en donde dichas muestras se han obtenido antes del inicio del tratamiento y en diferentes puntos de tiempo (p. ej., cada semana, 2 semanas, 1 mes, 3 meses, 6 meses, 12 meses, 24 meses, 36 meses, 48 meses) en el curso o después del tratamiento. Específicamente, este método comprende (a) determinar el nivel de al menos un ARN pequeño de sinapsis y/o neuritas en una muestra de fluido corporal del sujeto obtenida antes del inicio del tratamiento; (b) determinar el nivel del ARN pequeño en una o más muestras de fluido corporal del sujeto obtenidas en el curso de o después del tratamiento, y (c) comparar el nivel del ARN pequeño determinado en las etapas (a) y (b), y opcionalmente entre diferentes muestras en la etapa (b). Si el nivel del ARN pequeño ha disminuido en el transcurso de o después del tratamiento, esto es indicativo de que el tratamiento es eficaz. Si el nivel del ARN pequeño no ha disminuido en el transcurso de o después del tratamiento, esto es indicativo de que el tratamiento no es eficaz. Este método también puede incluir la comparación con los pacientes tratados con placebo u otros controles relevantes.
Los métodos de diagnóstico y control de la descripción son útiles para detectar y controlar cualquier fase del desarrollo de una patología neuronal (p. ej., una patología neuronal asociada con una enfermedad neurodegenerativa u otro trastorno neurológico) y ofrecen la ventaja de un análisis simple y mínimamente invasivo (o no invasivo). Como se señaló anteriormente, a diferencia de los métodos conocidos en la técnica, los métodos de la descripción permiten el diagnóstico y control de patologías neuronales antes de la aparición de importantes cambios morfológicos y/o muerte masiva de células neuronales asociadas con tales patologías.
Los métodos de la presente descripción se pueden utilizar para diagnosticar y controlar diversas patologías neuronales que incluyen, sin limitación, enfermedades neurodegenerativas (p. ej., enfermedad de Alzheimer (EA), enfermedad de Parkinson (EP), demencia por cuerpos de Lewy, enfermedad de Huntington (EH), demencia frontotemporal (DFT), demencia vascular, trastornos neurocognitivos asociados al VIH (TNAV), deterioro cognitivo leve (DCL), demencia mixta, enfermedad de Creutzfeldt-Jakob (ECJ), hidrocefalia de presión normal, síndrome de Wernicke-Korsakoff, esclerosis múltiple (EM), esclerosis lateral amiotrófica (ELA), enfermedades priónicas, diferentes ataxias, etc.), diversas encefalopatías (p. ej., encefalopatías víricas tales como demencia por SIDA) y neuropatías (p. ej., glaucoma [neuropatía óptica], atrofia muscular de la espina, etc.). En una realización separada de la presente descripción, se puede analizar un espectro de diferentes ARN pequeños (p. ej., varios miARN) para el diagnóstico diferencial de diversas enfermedades neurodegenerativas con síntomas clínicos similares, por ejemplo, diferentes formas de demencia.
Los ARN pequeños de neuritas y/o sinapsis útiles en los métodos de la presente descripción incluyen, sin limitación, los miARN tales como miR-7; miR-9; miR-9*; miR-25; miR-26a; miR-26b; miR-98; miR-124; miR-125b; miR-128; miR-132; miR-134; miR-138; miR-146; miR-182; miR-183; miR-200b; miR-200c; miR-213; miR-292-5p; miR-297; miR-322; miR-323-3p; miR-325; miR-337; miR-339; miR-345; miR-350; miR-351; miR-370; miR-425; miR-429; miR433-5p; miR-446; miR-467; miR-874 (véanse Schratt et al., Nature 439: 283-289, 2006; Lugli et al., J Neurochem. 106:650-661, 2008; Bicker y Schratt, J Cell Mol Med. 12: 1466-1476, 2008; Smalheiser y Lugli, Neuromolecular Med. 11:133-140, 2009; Rajasethupathy, Neuron, 63:714-716, 2009; Kye, RNA, 13: 1224-1234, 2007; Yu, et al., Exp Cell Res. 314:2618-2633, 2008; Cougot et al., J Neurosci. 28:13793-13804, 2008; Kawahara, Brain Nerve, 60:1437-1444, 2008), y otros ARN pequeños tales como ARN BC200 (Brain Cytoplasmic RNA 200 nucleótidos; Dahm et al., Seminars in Cell Dev. Biol. 18:216-223, 2007; Mus et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 104: 10679-10684, 2007). Otros ARN pequeños útiles en los métodos de la descripción se pueden identificar, por ejemplo, basándose en su enriquecimiento en las neuronas (y en ciertas regiones del cerebro dependiendo de la enfermedad) y en la localización intracelular en los axones y/o dendritas y/o espinas y/o sinapsis. Si se seleccionan muestras de orina para la realización de métodos de diagnóstico de la descripción, Los ARN pequeños preferidos para la detección serían aquellos ARN pequeños que no se expresan de manera significativa en las células del sistema urinario. Del mismo modo, si se utilizan muestras de sangre (p. ej., suero o plasma) para la realización de métodos de diagnóstico de la descripción, Los ARN pequeños preferidos para la detección serían aquellos ARN pequeños que no se expresan o están presentes a niveles muy bajos en las células sanguíneas.
Los métodos de la presente descripción se basan en la medición de los niveles de ciertos ARN pequeños en los fluidos corporales. El uso de fluidos corporales que se pueden obtener por técnicas no invasivas o mínimamente invasivas (p. ej., en oposición a la detección en el cerebro o LCR) permite un procedimiento de diagnóstico barato y mínimamente invasivo o no invasivo. Los fluidos corporales preferidos para su uso en los métodos de la descripción son plasma sanguíneo, suero, orina y saliva. Sin embargo, también se puede utilizar cualquier otro fluido corporal.
Los ejemplos de los métodos útiles para la medición del nivel de ARN pequeño en los fluidos corporales incluyen la hibridación con sondas selectivas (p. ej., mediante transferencia Northern, citometría de flujo basada en cuentas, microchips de oligonucleótidos [micromatrices], o análisis de hibridación en solución, tales como el kit de detección de miRNA mirVana Ambion), la detección basada en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) (p. ej., reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa-tallo bucle [RT-PCR], el método de la matriz basada en RT-PCR cuantitativa [qPCR-matriz]), o la secuenciación directa por medio de una de las tecnologías de secuenciación de nueva generación (p. ej., secuenciación de ARN pequeño Helicos, miARN BeadArray (Illumina), Roche 454 (FLX-Titanium), y ABI SOLiD). Para una revisión de las técnicas aplicables adicionales véanse, p. ej., Chen et al., BMC
8 5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
Genomics, 2009, 10: 407; Kong et al., J Cell Physiol. 2009; 218: 22-25.
En algunas realizaciones, los ARN pequeños se purifican antes de la cuantificación. Los ARN pequeños (p. ej., los miARN) se pueden aislar y purificar a partir de fluidos corporales por varios métodos, incluyendo el uso de kits comerciales (p. ej., miRNeasy kit [Qiagen], kit de aislamiento de ARN mirVana [Ambion/ABI], MiRACLE [Agilent], kit de aislamiento de miARN High Pure [Roche], y kit de Purificación de miARN [Norgen Biotek Corp.]), la extracción con Trizol (véase el Ejemplo 1, más adelante), la concentración y la purificación sobre intercambiadores aniónicos, cuentas magnéticas cubiertas por sustancias de unión a ARN, o la adsorción de ciertos miARN sobre oligonucleótidos complementarios.
En algunas realizaciones, la degradación del ARN pequeño en muestras de fluidos corporales y/o durante la purificación del ARN pequeño se reduce o elimina. Los métodos útiles para reducir o eliminar la degradación del ARN pequeño, incluyen, sin limitación, la adición de inhibidores de ARNasa (p. ej., RNasin Plus [Promega], SUPERase-In [ABI], etc.), el uso de cloruro de guanidina, isotiocianato de guanidina, N-lauroilsarcosina, dodecil sulfato de sodio (SDS), o una combinación de los mismos. Asimismo, cuando se trabaja con muestras de orina, se puede lograr un menor riesgo de degradación del ARN cuando la muestra se ha mantenido en la vejiga durante un tiempo más corto (p. ej., menos de 4 horas). La reducción de la degradación del ARN pequeño en muestras de fluidos corporales es particularmente importante cuando se requiere el almacenamiento y el transporte de muestras antes de la cuantificación del ARN pequeño.
Para tener en cuenta las posibles pérdidas de un ARN pequeño dado durante la purificación, la inhibición potencial de RT-PCR, pequeños contaminantes de ARN derivados de células de sangre u orina muertas o dañadas durante el aislamiento y el tratamiento de la muestra, las variaciones en la filtración del riñón, etc., se pueden emplear diversos métodos de normalización de datos experimentales. Por ejemplo, se pueden utilizar los siguientes métodos de normalización en la presente descripción:
a) La concentración de un ARN pequeño diana se puede normalizar a uno de los miARN ubicuos (p. ej., el miR-16), los ARN pequeños nucleolares (ARNpno), los miARN que no se expresan en las neuronas (p. ej., miR-122a, miR-10b, miR-141), los ARN pequeños nucleares U6 (ARN U6), o los miARN de cuerpos neuronales (p. ej., el miR-137, miR-181a, miR-491-5p, miR-298, miR-339 [Kye, ARN, 13:1224-1234, 2007], y otros).
b) Se pueden sintetizar y utilizar oligonucleótidos de ARN pequeño sintéticos (p. ej., miARN) como controles para las pérdidas durante la purificación y la inhibición de RT-PCR (mediante su inclusión en muestras de fluido corporal antes de la purificación del ARN).
c) Para tener en cuenta las variaciones en la filtración renal (cuando se trabaja con muestras de orina), se puede normalizar la concentración de ARN pequeño en la orina a nivel de creatinina y/o albúmina.
Definiciones
El término "cuerpo de célula neuronal" se refiere a la porción de una célula nerviosa que contiene el núcleo rodeado por el citoplasma y la membrana plasmática, pero no incorpora las dendritas o axones.
El término "neurita" según se utiliza en la presente memoria se refiere a cualquier proyección desde el cuerpo celular de una neurona. Esta proyección puede ser un axón, una dendrita, o una espina.
El término "axón" se refiere a una proyección larga, delgada de una neurona que conduce los impulsos eléctricos lejos del cuerpo celular de la neurona o soma. Los axones se distinguen de las dendritas por varias características, incluyendo la forma (las dendritas a menudo se estrechan mientras que los axones suelen mantener un radio constante), la longitud (las dendritas se restringen a una pequeña región en torno al cuerpo de la célula, mientras que los axones pueden ser mucho más largos), y la función (las dendritas generalmente reciben señales, mientras que los axones normalmente las transmiten). Los axones y las dendritas hacen contacto con otras células (por lo general, otras neuronas pero a veces células de músculos o glándulas) en uniones denominadas sinapsis.
El término "dendrita" se refiere a una proyección ramificada de una neurona que actúa para llevar a cabo la estimulación electroquímica recibida de otras células nerviosas hacia el cuerpo celular de la neurona desde la que se proyectan las dendritas.
Los términos "espina" o "espina dendrítica" se refieren a una pequeña protuberancia membranosa de la dendrita de una neurona que normalmente recibe la entrada de una sola sinapsis de un axón. Las espinas dendríticas sirven como un sitio de almacenamiento de la fuerza sináptica y ayudan a transmitir señales eléctricas al cuerpo de la célula neuronal. La mayoría de las espinas tienen una cabeza bulbosa (la cabeza de la espina), y un cuello delgado que conecta la cabeza de la espina con el eje de la dendrita. Las dendritas de una sola neurona pueden contener cientos o miles de espinas. Además de que las espinas proporcionen un sustrato anatómico para el almacenamiento de memoria y la transmisión sináptica, también pueden servir para aumentar el número de posibles contactos entre neuronas.
9
imagen7
imagen8
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
680-682 (1999); Xu y Gong, BioTech. 26: 639-641 (1999), Patentes de los Estados Unidos Núms. 5.789.166 y 5.932.419, Hogrefe, Strategies 14. 3:74-75 (2001), Patentes de los Estados Unidos Núms. 5.702.931, 5.780.270, y 6.242.222, Angag y Schutz, Biotech. 30: 486-488 (2001), Wang y Wilkinson, Biotech. 29: 976-978 (2000), Kang et al., Biotech. 20: 44-46 (1996), Ogel y McPherson, Protein Engineer. 5: 467-468 (1992), Kirsch y Joly, Nuc. Acids. Res. 26: 1848-1850 (1998), Rhem y Hancock, J. Bacteriol. 178: 3346-3349 (1996), Boles y Miogsa, Curr. Genet. 28: 197-198 (1995), Barrenttino et al., Nuc. Acids. Res. 22: 541-542 (1993), Tessier y Thomas, Meths. Molec. Biol. 57: 229-237, y Pons et al., Meth. Molec. Biol. 67: 209-218.
Ejemplos
La presente invención también se describe y se demuestra por medio de los siguientes ejemplos. Sin embargo, el uso de estos y otros ejemplos en cualquier lugar de la memoria descriptiva es sólo ilustrativo y de ninguna manera limita el alcance y el significado de la invención o de cualquier término ilustrado. Del mismo modo, la invención no se limita a cualquiera de las realizaciones preferidas concretas descritas en la presente memoria. La invención por lo tanto va a estar limitada solamente por los términos de las reivindicaciones adjuntas.
Ejemplo 1: Comparación de los diferentes métodos utilizados para la purificación de miARN a partir de suero o plasma.
Dado que la mayoría de los kits disponibles en el mercado para el aislamiento de miARN se han desarrollado para la purificación de miRNA de las células y tejidos, se comparan diversos kits con modificaciones propias para ajustarlos para el aislamiento de miARN a partir de suero o plasma. Los kits comerciales incluyen el kit miRNeasy (Qiagen), el kit de aislamiento de ARN mirVana (Ambion/ABI), MirACLE (Agilent), el kit de aislamiento de miARN High Pure (Roche), y el kit de Purificación de miARN (Norgen Biotek Corp.). Además, se han desarrollado técnicas propias basadas en el uso de Trizol (Invitrogen). En algunos experimentos, el miARN es previamente adsorbido sobre intercambiadores aniónicos, tales como Q-Sefarosa, o sobre cuentas magnéticas cubiertas con un material de unión a ARN (Q-Sefarosa (GE Healthcare), PEI-polietilenimina, u otros). Después de la desproteinización con Trizol, el ARN se hace precipitar con alcohol isopropílico o se purifica adicionalmente en columnas de sílice. En algunos experimentos, el ARN purificado se trata con ADNasa libre de ARNasa (Qiagen, ABI, Invitrogen u otro). Las preparaciones de miARN obtenidos por diferentes métodos se comparan mediante RT-PCR. La calidad de las preparaciones de miARN también se evalúa mediante la medición de la inhibición de RT PCR (véase el Ejemplo 3, a continuación).
Se purificó miARN a partir de muestras de plasma y suero obtenidas de los mismos 5 donantes sanos. Se incorporaron 107 copias de miR-159a (ath-miR-159a) de Arabidopsis thaliana por 1 ml de plasma o suero después de la adición de la solución que contenía guanidina para la evaluación del rendimiento de miARN. Se compararon dos técnicas, una basada en el kit mirVana París (Ambion/ABI), y otra basada en la desproteinización con Trizol (Invitrogen), y la posterior purificación en columnas de sílice. Después de la purificación del ARN, se midieron las concentraciones de miARN incorporado y miR-9, miR-16 y miR-134 humanos endógenos en preparaciones finales por medio de RT-PCR. El kit Mirvana Paris fue más eficaz en el aislamiento de miARN que la técnica basada en Trizol y fue seleccionado para futuros experimentos. Aunque todos los miARN analizados fueron detectables en suero y plasma y ambos tipos de muestras son adecuados para los ensayos de miARN, los valores finales de Ct de PCR fueron alrededor de 2 ciclos más bajos para plasma, y este último se utilizó en los experimentos posteriores. Basándose en la medición cuantitativa de ath-miR-159a incorporado, el rendimiento promedio de miARN aislado de plasma con el kit mirVana fue de 71,4%.
Ejemplo 2: Selección de miARN para ensayos.
Los miARN sometidos a ensayo fueron seleccionados inicialmente basándose en datos de la bibliografía sobre su enriquecimiento en los compartimentos del cerebro y su presencia en las neuritas (es decir, los axones y/o dendritas y/o espinas) y/o las sinapsis (Hua et al., BMC Genomics 2009, 10: 214; Liang et al., BMC Genomics. 2007, 8:166; Landgraf et al., Cell. 2007,129: 1401-1414; Lee et al., RNA. 2008, 14: 35-42; Schratt et al., Nature. 439: 283-289, 2006; Lugli et al., J Neurochem. 106: 650-661, 2008; Bicker y Schratt, J Cell Mol Med., 12: 1466-1476, 2008; Smalheiser y Lugli, Neuromolecular Med. 11: 133-140, 2009; Rajasethupathy, Neuron. 63: 714-716, 2009; Kye, RNA
13: 1224-1234, 2007; Yu et al., Exp Cell Res. 314: 2618-2633, 2008; Cougot, et al., J Neurosci. 28: 13793-13804 2008; Kawahara, Brain Nerve. 60: 1437-1444, 2008; Schratt G. Rev Neurosci. 2009; 10: 842-849), así como en su participación en los procesos asociados con neuritas y sinapsis (The miR-Ontology Data Base: disponible en la red en ferrolab.dmi.unict.it/miro/). Para la normalización, además del miARN incorporado, se utilizaron miARN ubicuos, tales como miR-16, y miARN expresado en numerosos tejidos, pero no en el cerebro, tales como miR-10b y miR
141.
Ejemplo 3: Detección de un aumento en los niveles de miARN de sinapsis y/o neuritas en el plasma de pacientes con EA.
Las muestras de plasma se obtuvieron de pacientes a los que se había diagnosticado EA desarrollada por medio de ensayo cognitivo y formación de imágenes del cerebro. Los perfiles de varias neuronas enriquecidas con miARN procedentes del plasma de estos pacientes se analizaron mediante RT-PCR con los cebadores y sondas para cada
12
imagen9
imagen10

Claims (1)

  1. imagen1
    imagen2
ES10779376.2T 2009-11-04 2010-11-04 Métodos de utilización de micro-ARN de fluidos corporales para el diagnóstico y control del deterioro cognitivo leve Active ES2597554T3 (es)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US25818509P 2009-11-04 2009-11-04
US258185P 2009-11-04
PCT/US2010/055495 WO2011057003A2 (en) 2009-11-04 2010-11-04 Methods of using small rna from bodily fluids for diagnosis and monitoring of neurodegenerative diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2597554T3 true ES2597554T3 (es) 2017-01-19

Family

ID=43431829

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES10779376.2T Active ES2597554T3 (es) 2009-11-04 2010-11-04 Métodos de utilización de micro-ARN de fluidos corporales para el diagnóstico y control del deterioro cognitivo leve

Country Status (5)

Country Link
US (2) US8648017B2 (es)
EP (2) EP2496714B1 (es)
CA (1) CA2780222C (es)
ES (1) ES2597554T3 (es)
WO (1) WO2011057003A2 (es)

Families Citing this family (51)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2767127A1 (en) * 2009-07-01 2011-01-06 Protiva Biotherapeutics, Inc. Novel lipid formulations for delivery of therapeutic agents to solid tumors
US20120015830A1 (en) * 2010-06-21 2012-01-19 Diogenix, Inc. Microrna profiles for evaluating multiple sclerosis
US20120289420A1 (en) * 2011-03-18 2012-11-15 University Of South Florida Microrna biomarkers for airway diseases
CA2833389C (en) 2011-04-18 2022-01-11 Diamir, Llc Mirna-based universal screening test (ust)
CA2870511C (en) * 2011-04-21 2023-08-08 University Of Massachusetts Raav-based compositions and methods for treating alpha-1 anti-trypsin deficiencies
US9771617B2 (en) 2011-06-27 2017-09-26 Eisai R&D Management Co., Ltd. Microrna biomarkers indicative of alzheimer's disease
WO2013036936A1 (en) * 2011-09-09 2013-03-14 Van Andel Research Institute Microrna biomarkers for diagnosing parkinson's disease
US10227593B2 (en) * 2011-12-13 2019-03-12 Henry Ford Health System Methods, systems, and compositions for cell-derived/vesicle-based microRNA delivery
WO2014018650A1 (en) 2012-07-25 2014-01-30 Rush University Medical Center Mirnas as novel therapeutic targets and diagnostic biomarkers for parkinson's disease
WO2014075822A1 (en) 2012-11-16 2014-05-22 Siemens Aktiengesellschaft New diagnostic mirna markers for parkinson disease
EP2733220B1 (en) * 2012-11-16 2017-10-18 Siemens Aktiengesellschaft Novel miRNA as a diagnostic marker for Alzheimer's Disease
EP2733219B1 (en) 2012-11-16 2017-09-20 Siemens Aktiengesellschaft Diagnostic miRNA markers for Alzheimer
EP2757161A1 (en) 2013-01-17 2014-07-23 Splicos miRNA-124 as a biomarker of viral infection
US10308959B2 (en) 2013-01-18 2019-06-04 Henry Ford Health System Methods, systems, and compositions relating to MiRNA-146a
WO2015073972A1 (en) 2013-11-18 2015-05-21 Diamir, Llc METHODS OF USING mIRNAs FROM BODILY FLUIDS FOR DETECTION AND MONITORING OF PARKINSON'S DISEASE (PD)
WO2015106273A2 (en) * 2014-01-13 2015-07-16 Trustees Of Boston University Methods and assays relating to huntingtons disease and parkinson's disease
ES2548299B2 (es) * 2014-03-13 2016-05-13 Universidad De Málaga Firma de microARN como indicador del riesgo de recurrencia temprana en pacientes con cáncer de mama
CN111961725B (zh) * 2014-05-30 2024-03-26 东丽株式会社 胰腺癌的检测试剂盒或装置以及检测方法
EP2974729A1 (en) 2014-07-17 2016-01-20 Abivax Quinoline derivatives for use in the treatment of inflammatory diseases
WO2016020625A1 (fr) * 2014-08-07 2016-02-11 Galderma Research & Development Microarns caractérisant la rosacée et leurs utilisations
WO2016084848A1 (ja) 2014-11-26 2016-06-02 東レ株式会社 小型ｒｎａの発現量の補正方法及び装置
EP3256602B1 (en) 2015-02-11 2019-09-04 QIAGEN GmbH A microrna-based method for early detection of prostate cancer in urine samples
ES2724404T3 (es) * 2015-02-27 2019-09-10 Qiagen Gmbh Un procedimiento basado en microARN para evaluar el pronóstico de un paciente de cáncer de próstata
EP3070178B1 (en) * 2015-03-20 2020-02-12 Albert-Ludwigs-Universität Freiburg Method for diagnosing breast cancer
US10358676B2 (en) * 2015-04-03 2019-07-23 Kaohsiung Chang Gung Memorial Hospital Methods and kits for detecting Kawasaki disease
US10214739B2 (en) * 2015-10-30 2019-02-26 Axagarius Gmbh & Co. Kg RNA binding solution
ITUB20155765A1 (it) * 2015-11-20 2017-05-20 Braindtech S R L Metodi per diagnosi, prognosi e monitoraggio terapeutico di patologie neurologiche, neurodegenerative e infiammatorie basati su microRNA contenuto in microvescicole microglia
US10282875B2 (en) 2015-12-11 2019-05-07 International Business Machines Corporation Graph-based analysis for bio-signal event sensing
ES2734678T3 (es) * 2015-12-22 2019-12-11 Siemens Ag Firmas específicas en enfermedad de alzheimer por perfiles de miarn multicéntricos
US10975436B2 (en) 2016-01-05 2021-04-13 Diamir, Llc Methods of using miRNA from bodily fluids for diagnosis and monitoring of neurodevelopmental disorders
EP3433381B1 (en) 2016-03-21 2024-07-24 Diamir, LLC Methods of using mirnas from bodily fluids for detection and differentiation of neurodegenerative diseases
KR102781810B1 (ko) 2016-03-31 2025-03-18 국립연구개발법인 고쿠리츠간켄큐센터 조기 췌장암 또는 췌장암 전구 병변의 검출 키트 또는 디바이스 및 검출 방법
JP7011605B2 (ja) * 2016-05-06 2022-01-26 ユニシテ エーファウ アクチェンゲゼルシャフト 高血糖症によって引き起こされる線維性疾患の処置における使用のためのｍｉＲＮＡを含有する薬学的担体
US10982214B2 (en) * 2016-07-20 2021-04-20 Thomas Jefferson University Inhibiting microRNA to prevent development of essential hypertension
JP6984415B2 (ja) * 2016-08-09 2021-12-22 東レ株式会社 癌の治療用及び／又は予防用医薬組成物
KR101956771B1 (ko) * 2016-08-10 2019-03-11 서울대학교산학협력단 표적 rna 검출용 그래핀나노센서
US11149275B2 (en) * 2016-10-10 2021-10-19 The Johns Hopkins University Device and method to treat esophageal disorders
US11584932B2 (en) * 2016-11-01 2023-02-21 The Research Foundation For The State University Of New York 5-halouracil-modified microRNAs and their use in the treatment of cancer
US10781487B2 (en) 2017-07-24 2020-09-22 Diamir, Llc miRNA-based methods for detecting and monitoring aging
EP3684463A4 (en) 2017-09-19 2021-06-23 Neuroenhancement Lab, LLC NEURO-ACTIVATION PROCESS AND APPARATUS
CN118615312A (zh) 2017-11-09 2024-09-10 普瑞克斯治疗公司 含有miRNA的癌症治疗用医药组合物
US11717686B2 (en) 2017-12-04 2023-08-08 Neuroenhancement Lab, LLC Method and apparatus for neuroenhancement to facilitate learning and performance
US11478603B2 (en) 2017-12-31 2022-10-25 Neuroenhancement Lab, LLC Method and apparatus for neuroenhancement to enhance emotional response
US10738343B2 (en) * 2018-01-19 2020-08-11 The Trustees Of Indiana University Extracellular vesicle ribonucleic acid (RNA) cargo as a biomarker of hyperglycemia and type 1 diabetes
US11364361B2 (en) 2018-04-20 2022-06-21 Neuroenhancement Lab, LLC System and method for inducing sleep by transplanting mental states
EP3807422A1 (en) * 2018-06-15 2021-04-21 Universitat Autònoma de Barcelona Circulating mirnas as biomarkers for diagnosis of mild cognitive impairment and alzheimer´s disease
US11452839B2 (en) 2018-09-14 2022-09-27 Neuroenhancement Lab, LLC System and method of improving sleep
TWI724578B (zh) * 2018-10-15 2021-04-11 國立陽明大學 酸鹼敏感型脂質奈米粒子用於包覆抗癌藥物和微小核糖核酸及其用途
US20220033906A1 (en) * 2018-12-18 2022-02-03 Hummingbird Diagnostics Gmbh Mirnas as biomarkers for parkinson's syndrome
EP3669873A1 (en) 2018-12-20 2020-06-24 Abivax Quinoline derivatives for use ine the traeatment of inflammation diseases
US11786694B2 (en) 2019-05-24 2023-10-17 NeuroLight, Inc. Device, method, and app for facilitating sleep

Family Cites Families (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5071743A (en) 1989-10-27 1991-12-10 Her Majesty The Queen In Right Of Canada, As Represented By The National Research Council Of Canada Process for conducting site-directed mutagenesis
US5912410A (en) 1990-06-15 1999-06-15 Scios Inc. Transgenic non-human mice displaying the amyloid-forming pathology of alzheimer's disease
JP3442774B2 (ja) 1991-07-01 2003-09-02 バーレックス ラボラトリーズ，インコーポレイティド 新規な突然変異誘発法および組成物
US5789166A (en) 1995-12-08 1998-08-04 Stratagene Circular site-directed mutagenesis
EP0906420A1 (en) 1996-06-07 1999-04-07 Massachusetts Institute Of Technology Programmed sequential mutagenesis
US5780270A (en) 1996-07-17 1998-07-14 Promega Corporation Site-specific mutagenesis and mutant selection utilizing antibiotic-resistant markers encoding gene products having altered substrate specificity
EP2290067B1 (en) 2004-05-28 2014-12-10 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving microRNA
CA2857881A1 (en) 2004-11-12 2006-12-28 Asuragen, Inc. Methods and compositions involving mirna and mirna inhibitor molecules
US20100286044A1 (en) 2005-12-29 2010-11-11 Exiqon A/S Detection of tissue origin of cancer
WO2008153692A2 (en) * 2007-05-22 2008-12-18 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Microrna expression profiling of cerebrospinal fluid
WO2009002462A1 (en) * 2007-06-22 2008-12-31 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Pre-mirna loop-modulated target regulation
WO2009009457A1 (en) * 2007-07-06 2009-01-15 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Alzheimer's disease-specific micro-rna microarray and related methods
JP2010533503A (ja) 2007-07-18 2010-10-28 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ コロラド，ア ボディー コーポレイト ヒト非不全心とヒト不全心との対比におけるマイクロｒｎａの差次的発現
CA2676113C (en) 2007-07-25 2014-07-08 University Of Louisville Research Foundation, Inc. Exosome-associated microrna as a diagnostic marker
CN101861399B (zh) 2007-08-22 2015-11-25 特罗瓦基因公司 使用miRNA检测体内细胞死亡情况的方法
US7993831B2 (en) * 2007-09-14 2011-08-09 Asuragen, Inc. Methods of normalization in microRNA detection assays
JP5624470B2 (ja) * 2007-09-14 2014-11-12 ジ・オハイオ・ステイト・ユニバーシティ・リサーチ・ファウンデイションＴｈｅ Ｏｈｉｏ Ｓｔａｔｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ヒト末梢血微小胞におけるｍｉＲＮＡの発現およびその使用
EP2225396A4 (en) 2007-11-30 2011-03-02 Univ Ohio State Res Found PROFILING AND SCREENING OF MICRO-RNA EXPRESSION IN PERIPHERAL BLOOD IN LUNG CANCER
WO2009114681A2 (en) 2008-03-13 2009-09-17 Dharmacon, Inc. Identification of mirna profiles that are diagnostic of hypertrophic cardiomyopathy
WO2009132273A2 (en) 2008-04-25 2009-10-29 Merck & Co., Inc. Microrna biomarkers of tissue injury
US20110160290A1 (en) 2008-05-21 2011-06-30 Muneesh Tewari Use of extracellular rna to measure disease
US20100167937A1 (en) 2008-07-08 2010-07-01 Power3 Medical Products, Inc. Multiple forms of Alzheimer's disease based on differences in concentrations of protein biomarkers in blood serum
EP4219760A3 (en) 2008-11-10 2023-09-06 Battelle Memorial Institute Methods, compositions, and devices utilizing microrna to determine physiological conditions
CN102301002A (zh) 2008-11-12 2011-12-28 卡里斯生命科学卢森堡控股有限责任公司 使用外来体来确定表现型的方法和系统
CA2679784A1 (en) 2009-03-05 2010-09-05 Newcastle Innovation Limited Diagnostic, prognostic and treatment methods

Also Published As

Publication number Publication date
WO2011057003A3 (en) 2011-07-21
US20140357507A1 (en) 2014-12-04
US8648017B2 (en) 2014-02-11
EP3118334A1 (en) 2017-01-18
CA2780222A1 (en) 2011-05-12
EP2496714B1 (en) 2016-08-31
EP2496714A2 (en) 2012-09-12
US20120252693A1 (en) 2012-10-04
CA2780222C (en) 2021-11-16
WO2011057003A2 (en) 2011-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2597554T3 (es) Métodos de utilización de micro-ARN de fluidos corporales para el diagnóstico y control del deterioro cognitivo leve
ES2813699T3 (es) Métodos de uso de miARN de fluidos corporales para la detección y monitoreo de la enfermedad de Parkinson (PD)
CN105861712B (zh) 使用来自体液的miRNA来早期检测和监控轻度认知障碍(MCI)和阿尔茨海默病(AD)的方法
CN103003442B (zh) 一种通过微小rna表达水平评估人同种异体移植物状况的方法
AU2021203781B2 (en) Detection of viral infection
ES2993025T3 (en) Methods of using mirnas from bodily fluids for detection and differentiation of neurodegenerative diseases
CN105431153A (zh) 使tau表达沉默的微RNA
CA2679784A1 (en) Diagnostic, prognostic and treatment methods
WO2011012074A1 (zh) 肝癌检测标记物及其检测方法、试剂盒和生物芯片
EP3026121A1 (en) Micro-RNA-based diagnosis of tuberculosis
Jin et al. Comparative studies of two methods for miRNA isolation from milk whey
Mesarosova et al. miR-193b-3p/PGC-1α pathway regulates an insulin dependent anti-inflammatory response in Parkinson's disease
Boroumand et al. Increased circulating miR-10a levels associated with multiple sclerosis
US20200199680A1 (en) MIRNA in Gulf War Illness
EP4023768A1 (en) Methods and kits for detecting a risk for developing neurological or neurophysiological disorders
Wang et al. Silica Particles Trigger Pulmonary Fibrosis Act Through Cell-To-Cell Delivery of Exosomal Mir-107
Vachev et al. Alterations of miR-320 family members as a novel diagnostic biomarkers in peripheral blood of schizophrenia patients
KR20210082951A (ko) 마이크로RNA-24-3p의 억제제를 포함하는 신경아세포에서 신경세포로의 분화 유도용 조성물 및 방법
Mashreghi et al. Direct uptake of Antagomirs and efficient knockdown of miRNA in primary B and T lymphocytes
Hawkins et al. Nidhi S. Dey, 4 Peter Henley, Andrew Randall, Alessandro Rosa, 5, 6 Lawrence W. Stanton, 7 and Akshay Bhinge
Buller Novel roles for microRNA in brain pathologies