ES2569608T3 - Procedimientos de regulación del reordenamiento del citoesqueleto de actina y formación de espacios intercelulares - Google Patents

Abstract

Un procedimiento realizado durante la isquemia fría para prevenir o reducir la formación de espacios intercelulares en una célula pulmonar en tejidos u órganos extracorpóreos o en tejidos u órganos que están siendo trasplantados a partir de un tejido u órgano donante a un receptor del trasplante, en el que dichos 5 tejidos u órganos no se localizan en un organismo vivo, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la célula, tejido u órgano durante la isquemia fría con una cantidad eficaz de un compuesto representado por la fórmula (I):**Fórmula** donde: n es un número entero de 1 a 6; X1 es O o S; X2 es O o S; R1, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16 , donde al menos uno de R1, R2 y R3 es acilo C2-C7 ; R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(>=O)NH2 y -(CH2)mC(>=O)OH, donde m es un número entero de 0 a 2; y R5, R6, and R7 son independientemente alquilo C10-C12 , o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

Description

DESCRIPCION

Procedimientos de regulacion del reordenamiento del citoesqueleto de actina y formacion de espacios intercelulares 5 SOLICITUDES RELACIONADAS

[0001] Esta solicitud reivindica el beneficio de la solicitud de patente de EE. UU. N.° de serie 61/043 586, presentada el 9 de abril de 2008, cuya description se incorpora en su totalidad en este documento por referencia.

10 CAMPO TECNICO

[0002] La materia descrita actualmente se refiere a procedimientos y composiciones para prevenir o evitar el reordenamiento del citoesqueleto de actina y la formacion de espacios intercelulares. Los procedimientos pueden utilizarse para prevenir el reordenamiento del citoesqueleto de actina que se produce en respuesta a un

15 acontecimiento de isquemia o a una lesion de isquemia reperfusion.

ABREVIATURAS

[0003]

20

°C AGP SDRA ATP 25 IF CO2 HMVEC h

LIR 30 LDH

kg

pmol mg min 35 O2 PBS SRIS IC

= grados centlgrados = fosfato de aminoalquil glucosaminida = slndrome de dificultad respiratoria del adulto = trifosfato de adenosina = isquemia frla = dioxido de carbono

= celulas endoteliales microvasculares pulmonares humanas = horas

= lesion por isquemia reperfusion = lactato deshidrogenasa = kilogramo = micromol = miligramo = minutos = oxlgeno

= solution salina tamponada con fosfato = slndrome de respuesta inflamatoria sistemica = isquemia caliente

40 ANTECEDENTES

[0004] La lesion pulmonar aguda de una caracterlstica de la septicemia, la respuesta inflamatoria sistemica y

el slndrome de dificultad respiratoria del adulto. El edema pulmonar no cardiogenico y la alteration del intercambio gaseoso son consecuencias de la lesion pulmonar aguda, independientemente de su etiologla. Los mecanismos

45 causantes del edema pulmonar debido a lesion pulmonar aguda no se conocen bien. La lesion por isquemia reperfusion (LIR), una forma aguda de lesion pulmonar que se produce inmediatamente despues del trasplante pulmonar, es una complication frecuente que provoca morbilidad y mortalidad. Vease King y col., Ann. Thorac. Surg., 69, 1681-1685 (2000).

50 [0005] La reperfusion tras un intervalo de isquemia tiene como resultado una respuesta inflamatoria que

afecta a componentes del sistema inmunitario innato, incluidos el complemento y las cascadas de coagulation. Tanto las celulas parenquimatosas como las mieloides elaboran radicales libres, oxido nltrico y citocinas pro y antiinflamatorias. Vease de Perrot y col., Am. J. Respir. Crit. Care Med., 167(4), 490-511 (2003); de Groot y Rauen, Transplant Proc., 39(2), 481-484 (2007) y Mollen y col., Shock, 26(5), 430-437 (2006).

55

[0006] Un mejor conocimiento de la LIR pulmonar es probablemente de relevancia para muchos tipos de

lesiones pulmonares agudas y puede ser beneficioso para un numero considerable de pacientes ademas de para los receptores de un trasplante de pulmon. Este conocimiento tambien puede usarse potencialmente para facilitar la recuperation de los pulmones de donantes sin latido cardlaco para el trasplante y/o ayudar al rescate de pulmones

de calidad subtrasplante, vease Steen y col. Ann Thorac Surg., 83, 2191-2195 (2007) abordando de este modo la crltica escasez de pulmones para trasplante. Vease Egan y col., Ann. Thorac. Surg., 52, 1113-1121 (1991) y Egan, J. Heart Lung Transplant., 23(1), 3-10 (2004).

5 RESUMEN

[0007] En algunas realizaciones, la materia descrita actualmente proporciona un procedimiento de prevencion

o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina en una celula, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la celula con una cantidad eficaz de un compuesto de formula (I):

10

imagen1

donde:

15 n es un numero entero de 1 a 6;

X1 es O o S;

X2 es O o S;

R1, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16, donde al menos uno de R1, R2 y R3 es acilo C2-C7;

R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(=O)NH2 y -(CH2)mC(=O)OH, donde m es 20 un numero entero de 0 a 2; y

R5, R6 y R7 son independientemente alquilo C10-C12, o

una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

25 [0008] En algunas realizaciones, n es 1. En algunas realizaciones, X1 y X2 son cada uno O. En algunas

realizaciones, R4 es -C(=O)OH. En algunas realizaciones, R1, R2 y R3 son cada uno acilo C2-C7. En algunas realizaciones, el compuesto de formula (I) es un compuesto donde n es 1; X1 es O; X2 es O; R1, R2 y R3 son cada uno -C(=O)(CH2)4CH3; R4 es -C(=O)OH; y R5, R6 y R7 son cada uno -(CH2)10CH3, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

30

[0009] En algunas realizaciones, la celula es una celula de mamlfero. En algunas realizaciones, la celula es una celula endotelial.

[0010] En algunas realizaciones, la prevencion o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina 35 previene o reduce la formacion de espacios intercelulares entre la celula y una o mas celulas que rodean a la celula.

[0011] En algunas realizaciones, la puesta en contacto con la celula se produce antes de un acontecimiento isquemico o de reperfusion isquemica relacionado, durante la isquemia o despues de un intervalo de isquemia, y prevenir o reducir el reordenamiento del citoesqueleto de actina comprende prevenir o reducir el reordenamiento del

40 citoesqueleto de actina relacionado con un acontecimiento isquemico o de reperfusion isquemica relacionado.

[0012] En algunas realizaciones, la materia descrita actualmente proporciona un procedimiento de prevention o reduction del reordenamiento del citoesqueleto de actina en una o mas celulas en un sujeto, comprendiendo el procedimiento administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula (I) o una sal farmaceuticamente

5 aceptable del mismo.

[0013] En algunas realizaciones, la prevencion o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina en una o mas celulas en el sujeto previene o alivia una enfermedad o afeccion asociada con un aumento del reordenamiento del citoesqueleto de actina, o un slntoma del mismo, en el sujeto. En algunas realizaciones, el sujeto

10 es un mamlfero.

[0014] Es un objeto de la materia descrita actualmente proporcionan procedimientos y composiciones para prevenir o reducir el reordenamiento del citoesqueleto de actina.

15 [0015] Un objeto de la materia descrita actualmente como se ha establecido anteriormente en este

documento, y que se consigue por completo o en parte mediante la materia descrita actualmente, otros objetos resultaran evidentes a medida que avance la description cuando se haga referencia a los ejemplos acompanantes y los dibujos como la mejor descripcion a continuation en este documento.

20 BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

[0016]

La figura 1A es una serie de fotograflas de celulas endoteliales microvasculares pulmonares humanas (HMVCE) 25 tenidas con faloidina en la que muestra el efecto de la isquemia caliente simulada sin hipoxia sobre el reordenamiento del citoesqueleto de actina y sobre la formation de espacios en la monocapa endotelial microvascular pulmonar humana. Las HMVEC se crecieron hasta confluencia en placas P30 con cubreobjetos integrales y se incubaron con CRX-526 a 1 pg/ml o vehlculo antes de 1 hora de isquemia caliente (IC) simulada. Las fotograflas muestran celulas tratadas con CRX-526 y con vehlculo antes de la IC (Control), despues de 15 o 30 60 min de IC y despues de 15, 60 o 240 min de reperfusion simulada (rep). Los experimentos se realizaron por

triplicado.

La figura 1 B es una grafica del % de area de espacios en la monocapa de las celulas mostradas en la figura 1A. Se analizaron tres campos independientes de cada una de las tres placas P30 (n = 9 fotos/punto temporal). El % de area de espacios en la monocapa se cuantifico mediante el software MetaMorph® (MDS Analytical 35 Technologies, Inc., Sunnyvale, California, Estados Unidos de America). Los datos de las celulas tratadas con vehlculo se muestran como barras sombreadas. Los datos de las celulas tratadas con CRX-526 se muestran como barras blancas. * = p<0,05, f = p<0,01, $ = p<0,001 prueba t no pareada.

La figura 1 C es una grafica del % de actina anomala en las celulas mostradas en la figura 1A. Debido a la variabilidad considerable en el citoesqueleto de actina de las celulas endoteliales microvasculares pulmonares 40 humanas (HMVEC), las celulas se marcaron como con una distribucion de actina "normal" o "anomala" en las imagenes (n = 9 fotos/punto temporal), sin tener en cuenta el grado de intensidad de la anomalla. La evaluation fue realizada por un observador que desconoce la identidad del grupo o del momento de la muestra. A continuacion, se calcularon las relaciones de las poblaciones. Los datos de las celulas tratadas con vehlculo se muestran como barras sombreadas. Los datos de las celulas tratadas con CRX-526 se muestran como barras 45 blancas. $= p<0,001 prueba t no pareada.

La figura 2A es una serie de fotograflas (de izquierda a derecha) de celulas endoteliales microvasculares pulmonares humanas (HMVEC) en medio de cultivo celular templado (37 °C) (Control), de HMVEC tras cuatro horas de isquemia frla (IF) en medio de cultivo celular a 4 °C (Medio 4 h IC), de HMVEC tras cuatro horas de isquemia frla en solution de conservation pulmonar PERFADEX™ (Vitrolife, Kungsbacka, Suecia) a 4 °C 50 (Vehlculo 4 h IC) y HMVEC que se hablan preincubados con CRX-526 y se sometio a cuatro horas de isquemia frla en PERFADEX™ (Vitrolife, Kungsbacka, Suecia) a 4 °C con CRX-526 (CRX-526 4 h IC). Las fotograflas representan 9 imagenes tomadas de cada conjunto de condiciones.

La figura 2B es una grafica del % de area de espacios en la monocapa de celulas endoteliales microvasculares pulmonares humanas (HMVEC) en medios de cultivo celular (Medio), vehlculo (es decir, PERFADEX™ [Vitrolife, 55 Kungsbacka, Suecia]) o un vehlculo tras 1 hora de tratamiento previo con CRX-526 y seguido de cuatro horas de isquemia frla (4 h IC), 1 hora de isquemia frla (IF) o seguido de 1 hora de isquemia frla y 15 min, 1 h o 4 h de reperfusion (15 min rep, 1 h rep, 4 h rep, respectivamente). Los datos de las HMVEC en medio de cultivo celular sin vehlculo se muestran como barras blancas. Los datos de las HMVEC en medio suplementado con vehlculo pero sin compuesto se muestran como barras sombreadas oscuras. Los datos de celulas pretratadas con CRX-

526 se muestran como barras sombreadas claras. El % de area de espacios se cuantifico mediante el software MetaMorph® (MDS Analytical Technologies, Inc., Sunnyvale, California, Estados Unidos de America). * = p<0,01.

DESCRIPCION DETALLADA 5

[0017] La materia descrita actualmente se describira ahora en mayor detalle en este documento en referencia a los ejemplos acompanantes, en los que se muestran realizaciones representativas. Sin embargo, la materia descrita actualmente puede realizarse de diferentes formas y no debe interpretarse como limitada a las realizaciones mostradas en este documento. Mas bien, estas realizaciones se proporcionan para que esta descripcion sea

10 minuciosa y completa, y transmitira completamente el alcance de las realizaciones a los expertos en la materia.

[0018] Siempre que no se defina lo contrario, todos los terminos tecnicos y cientlficos usados en este documento tienen el mismo significado que normalmente entiende un experto en la materia a la que pertenece esta materia descrita actualmente. Todas las publicaciones, solicitudes de patente, patentes y otras referencias

15 mencionadas en este documento se incorporan en su integridad por referencia.

[0019] A lo largo de toda la memoria descriptiva y las reivindicaciones, una formula o nombre qulmico determinado abarcara todos los isomeros opticos y estereoisomeros, as! como las mezclas racemicas, cuando existan tales isomeros y mezclas.

20

I. Definiciones

[0020] Aunque se considera que los siguientes terminos pueden ser bien entendidos por un experto normal en la materia, se establecen las siguientes definiciones para facilitar la explicacion de la materia describe

25 actualmente.

[0021] Siguiendo la convencion de la ley de patentes existente desde hace anos, los terminos "un, una" y "el, la" se refieren a "uno o mas" cuando se usan en esta aplicacion, incluso en las reivindicaciones. Por tanto, por ejemplo, la referencia a "un compuesto" o "una celula" incluye una gran variedad de estos compuestos o celulas, etc.

30

[0022] Segun se usa en este documento el termino "alquilo" se refiere a cadenas de hidrocarburos lineales (es decir, "de cadena recta"), ramificadas o clclicas, saturadas o al menos parcialmente y en algunos casos completamente insaturadas C1-20 inclusive, (es decir, alquenilo y alquinilo), incluyendo, por ejemplo grupos metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, isobutilo, ferc-butilo, pentilo, hexilo, octilo, etenilo, propenilo, butenilo, pentenilo,

35 hexenilo, octenilo, butadienilo, propinilo, butinilo, pentinilo, hexinilo, heptinilo y alenilo. "Ramificado" se refiere a un grupo alquilo en el que un grupo alquilo inferior, como metilo, etilo o propilo, esta unido a una cadena alquilo lineal. "Alquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo con de 1 a aproximadamente 6 atomos de carbono (es decir, un alquilo C1-7), por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o 6 atomos de carbono. "Alquilo superior" se refiere a un grupo alquilo con de aproximadamente 8 a aproximadamente 20 atomos de carbono, por ejemplo, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 40 19 o 20 atomos de carbono.

[0023] Los grupos alquilo pueden estar opcionalmente sustituidos (un "alquilo sustituido") con uno o mas sustituyentes del grupo alquilo, que pueden ser el mismo o diferentes. El termino "sustituyente de grupo alquilo" incluye, entre otros, alquilo, alquilo sustituido, halo, arilamino, acilo, hidroxilo, ariloxilo, alcoxilo, alquiltio, ariltio,

45 aralquiloxilo, aralquiltio, carboxilo, alcoxicarbonilo, oxo y cicloalquilo. Opcionalmente pueden tener insertados a lo largo de la cadena alquilo uno o mas atomos de oxlgeno, azufre o nitrogeno sustituidos o no sustituidos donde el sustituyente de nitrogeno es hidrogeno, alquilo inferior (tambien denominado en este documento como "alquilaminoalquilo") o arilo.

50 [0024] Por tanto, segun se usa en este documento, el termino "alquilo sustituido" incluye grupos alquilo, como

se define en este documento, en el que uno o mas atomos o grupos funcionales del grupo alquilo estan sustituidos con otro atomo o grupo funcional, incluidos por ejemplo, alquilo, alquilo sustituido, halogeno, arilo, arilo sustituido, alcoxilo, hidroxilo, nitro, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfato y mercapto.

55 [0025] El termino "alquenilo" se refiere a un grupo alquilo que comprende uno o mas enlaces dobles carbono-

carbono.

[0026] El termino "arilo" se usa en este documento para referirse a un sustituyente aromatico que puede ser

un anillo aromatico simple o anillos aromaticos multiples que se fusionan entre si, estan unidos covalentemente o

estan unidos a un grupo comun como, pero sin limitaciones, un resto metileno o etileno. El grupo de union comun tambien puede ser un carbonilo, como en la benzofenona, u oxlgeno, como en el difenileter, o nitrogeno, como en la difenilamina. El termino "arilo" abarca especlficamente compuestos aromaticos heteroclclicos. Los anillos aromaticos pueden comprender fenilo, naftilo, bifenilo, difenileter, difenilamina y benzofenona, entre otros. En realizaciones en 5 particular, el termino "arilo" significa un compuesto aromatico clclico que comprende de aproximadamente 5 a aproximadamente 10 atomos de carbono, por ejemplo, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 atomos de carbono, e incluye anillos aromaticos de hidrocarburos y heteroclclicos de 5 y 6 atomos.

[0027] El grupo arilo puede estar opcionalmente sustituido (un "arilo sustituido") con uno o mas sustituyentes 10 de grupo arilo, que pueden ser el mismo o diferentes, donde el "sustituyente de grupo arilo" incluye alquilo, alquilo

sustituido, arilo, arilo sustituido, aralquilo, hidroxilo, alcoxilo, ariloxilo, aralquiloxilo, carboxilo, acilo, halo, nitro, alcoxicarbonilo, ariloxicarbonilo, aralcoxicarbonilo, aciloxilo, acilamino, aroilamino, carbamoilo, alquilcarbamoilo, dialquilcarbamoilo, ariltio, alquiltio, alquileno y -NR'R'', donde R' y R'' pueden ser cada uno independientemente hidrogeno, alquilo, alquilo sustituido, arilo, arilo sustituido y aralquilo.

15

[0028] Por tanto, segun se usa en este documento, el termino "arilo sustituido" incluye grupos arilo, como se define en este documento, en el que uno o mas atomos o grupos funcionales del grupo arilo estan sustituidos con otro atomo o grupo funcional, incluidos por ejemplo, alquilo, alquilo sustituido, halogeno, arilo, arilo sustituido, alcoxilo, hidroxilo, nitro, amino, alquilamino, dialquilamino, sulfato y mercapto.

20

[0029] Entre los ejemplos especlficos de grupos arilo se incluyen, pero sin limitaciones, ciclopentadienilo, fenilo, furano, tiofeno, pirrol, pirano, piridina, imidazol, benzimidazol, isotiazol, isoxazol, pirazol, pirazina, triazina, pirimidina, quinolina, isoquinolina, indol, carbazol y similar.

25 [0030] "Alquileno" se refiere a un grupo de hidrocarburo alifatico bivalente lineal o ramificado con de 1 a

aproximadamente 20 atomos de carbono, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20 atomos de carbono. El grupo alquileno puede ser lineal, ramificado o clclico. El grupo alquileno tambien puede ser opcionalmente insaturado y/o estar sustituido con uno o mas "sustituyentes de grupo alquilo". Opcionalmente puede tener insertados a lo largo del grupo alquileno uno o mas atomos de oxlgeno, azufre o nitrogeno sustituido o 30 no sustituido (tambien denominado en este documento como "alquilaminoalquilo"), donde el sustituyente de nitrogeno es alquilo como se describio previamente. Entre los ejemplos de grupos alquileno se incluyen metileno (- CH2-); etileno (-CH2-CH2-); propileno (-(CH2)3-); ciclohexileno (-C6H10-); -CH=CH-CH=CH-; -CH=CH-CH2-; -(CH2)q- N(R)-(CH2)r-, donde cada uno de q y r es independientemente un numero entero de 0 a aproximadamente 20, por ejemplo, 0, 1, 2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20, y R es hidrogeno o alquilo inferior; 35 metilendioxilo (-O-CH2-O-) y etilendioxilo (-O-(CH2)2-O-). Un grupo alquileno puede tener de aproximadamente 2 a aproximadamente 3 atomos de carbono y puede ademas tener de 6 a 20 carbonos.

[0031] "Hidroxi" e "hidroxilo" se refieren al grupo -OH.

40 [0032] El termino "hidroxialquilo" se refiere a un grupo alquilo terminado en hidroxi. En algunas realizaciones,

el grupo hidroxialquilo tiene la estructura -(CH2)nOH.

[0033] El termino "acido carboxllico" se refiere al grupo -C(=O)OH. El termino "carboxilato" se refiere al anion

formado cuando se elimina el H del grupo de acido carboxllico. Por tanto, "carboxilato" se refiere al grupo -C(=O)O'. 45 Los carboxilatos pueden formar sales (es decir, sales de carboxilato) con grupos cationicos. Los terminos "carboxilato de alquileno" y "acido carboxllico alquileno" se refieren a grupos monovalentes formados por la union de un acido carboxllico o grupo carboxilato a un punto de union abierto en un grupo alquileno (p. ej., los grupos - (CH2)nC(=O)OH y -(CH2)nC(=O)-).

50 [0034] Segun se usa en este documento, el termino "acilo" se refiere al grupo -C(=O)R, donde R es un grupo

alquilo o arilo segun se definio anteriormente en este documento. En algunas realizaciones, la R del grupo acilo es

alquilo C1-C16. En algunas realizaciones, el grupo alquilo del resto acilo es alquilo o alquenilo de cadena lineal. En algunas realizaciones la R del grupo acilo es alquilo C1-C16 de cadena lineal.

55 [0035] El termino "fosfato" se refiere al grupo -P(=O)(OH)2. El termino "fosfato" tambien incluye especies

anionicas formadas por la eliminacion de uno o mas atomos de hidrogeno del grupo fosfato.

[0036] El termino "tiol" se refiere a un grupo con la estructura -S-R, donde R es alquilo, acilo o arilo. El

termino "tiol" puede referirse tambien a un compuesto de estructura H-S-R, donde R es alquilo, acilo o arilo.

[0037] El termino "amino" se refiere a un grupo con la estructura -NR1R2, donde Ri y R2 se seleccionan

independientemente a partir del grupo H, alquilo, acilo y arilo.

5 [0038] El termino "carbamoilo" se refiere al grupo -C(=O)NH2.

[0039] El termino "monosacarido" se refiere a una unidad monomerica de hidratos de carbono de formula (CH2O)n+m basada en una forma de cadena abierta de un compuesto con la estructura qulmica H(CHOH)nC(=O)(CHOH)mH, donde la suma de n + m es un numero entero entre 2 y 8. Por tanto, entre las unidades

10 monomericas pueden incluirse triosas, tetrosas, pentosas, hexosas, heptosas, nonosas y sus mezclas. El monosacarido puede estar en una forma clclica de la estructura qulmica. Por tanto, en algunas realizaciones, el compuesto comprendera un hemiacetal o un hemicetal. En algunas realizaciones, el termino "monosacarido" se refiere a una unidad monomerica clclica basada en un compuesto con una estructura qulmica H(CHOH)nC(=O)(CHOH)mH donde n + m es 4 o 5. Por tanto, entre los monosacaridos se incluyen, pero sin 15 limitaciones, aldohexosas, aldopentosas, cetohexosas y cetopentosas como arabinosa, lixosa, ribosa, xilosa, ribulosa, xilulosa, alosa, altrosa, galactosa, glucosa, gulosa, idosa, manosa, talosa, fructosa, psicosa, sorbosa y tagatosa.

[0040] El termino "analogo de monosacarido" se refiere a un monosacarido donde uno o mas grupos hidroxilo 20 del monosacarido se sustituyen por otro grupo qulmico, como, pero sin limitaciones, un fosfato, una amina, un tiol o

un grupo alquilo.

[0041] El termino "aminoazucar" se refiere a un analogo de monosacarido donde uno o mas grupos hidroxilo de un monosacarido se sustituyen por una amina. Un ejemplo de aminoazucar es la glucosamina (es decir, 2-deoxi-

25 2-amino-a-D-glucopiranosa).

[0042] El termino "fragmento" segun se usa en este documento en relacion con un compuesto, se refiere a un compuesto cuya estructura es cualquier parte de la estructura del compuesto denominado originalmente que es menos que la totalidad del compuesto denominado originalmente. Por tanto, un fragmento es mas pequeno que el

30 compuesto original, aunque, en general, retiene parte o toda la actividad biologica del compuesto original.

[0043] "Farmaceuticamente aceptable" se refiere a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas de administracion, dentro del alcance del juicio medico, adecuados para el contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritacion, respuesta alergica, u otros problemas o complicaciones

35 acorde con una relacion beneficio/riesgo razonable. Por tanto, en algunas realizaciones, los compuestos, materiales, composiciones y/o formas de administracion descritos actualmente son farmaceuticamente aceptables para su uso en humanos.

[0044] En general, el termino "reduciendo" se refiere a procedimientos para tratar una afeccion o enfermedad 40 preexistente, por ejemplo, reduciendo o aliviando los slntomas o efectos de la afeccion o enfermedad en cualquier

grado.

[0045] "Previniendo" se refiere a procedimientos para evitar que una posible afeccion, enfermedad, trastorno o lesion futura, o sus slntomas, se produzcan en cualquier grado. "Previniendo" puede referirse a procedimientos

45 para disminuir los efectos de una afeccion o lesion futura, de modo que los efectos de la afeccion o lesion futura sean de menor magnitud o mas corta duracion que los efectos que podrlan producirse en ausencia de la accion preventiva, as! como a los procedimientos para evitar por completo que se produzcan los efectos. Por tanto, "previniendo" se refiere a procedimientos profilacticos de tratamiento medico y veterinario.

50 [0046] "Isquemia" se refiere a un flujo sangulneo inadecuado hacia un tejido u organo biologico, que tiene

como resultado la incapacidad del organo o tejido para cumplir con la demanda metabolica. La reperfusion (recuperacion del flujo sangulneo) hacia el organo o tejido isquemico puede llevar a la produccion de cantidades excesivas de especies reactivas de oxlgeno (ERO) y especies reactivos de nitrogeno (ERN), produciendo de este modo estres oxidativo que tiene como resultado una serie de acontecimientos como alteraciones de la fosforilacion 55 mitocondrial oxidativa, deplecion de ATP (que tambien se produce durante y como resultado de la isquemia), aumento del calcio intracelular y activacion de protelna quinasas, fosfatasas, proteasas, lipasas y nucleasas que llevan a una perdida de la funcion o integridad celular.

[0047] La lesion por isquemia reperfusion (LIR) se refiere a una lesion que se produce despues de reiniciar la

circulacion sangulnea en un tejido organico sometido a isquemia (p. ej., cuando un organo se extirpa mediante intervencion quirurgica y se reimplanta, como sucede en un trasplante o autotrasplante). A modo de ejemplo adicional y no de limitacion, esta lesion tambien se produce cuando se reinicia la circulacion sangulnea despues de que se haya detenido para el trasplante de un organo; despues de que una arteria coronaria se trate con 5 angioplastia coronaria transluminal percutanea (ACTP), stent o derivacion tras un infarto de miocardio, y tras la administracion de un trombolltico a un paciente de ictus. Otro ejemplo es cuando el flujo sangulneo hacia el corazon se detiene temporalmente debido a una cirugla cardlaca, a menudo mediante la administracion previa de soluciones cardioplegicas. Otro ejemplo es la interrupcion del flujo sangulneo hacia una extremidad para una cirugla sin sangre por un cirujano ortopedico cuando se infla un torniquete en la extremidad. Esta lesion puede producirse en muchos 10 tejidos, como rinon, hlgado, pulmones, pancreas, musculo esqueletico, tejido blando de musculo liso, piel e intestinos, as! como en el corazon y el cerebro. Por tanto, la LIR puede incluir, pero sin limitaciones, lesion por isquemia reperfusion cerebral, retinal, hepatica, renal, pancreatica, de medula espinal, mesenterica, de extremidades, intestinal, cerebral, miocardica, del sistema nervioso central o pulmonar, o una combinacion de las mismas. En especial, la lesion por isquemia reperfusion es un problema grave en el trasplante de organos debido a 15 que el organo recogido se retira del cuerpo de un donante, se alsla de la fuente de sangre y, por tanto, se desprovee de nutrientes y, a menudo de oxlgeno, durante un periodo de tiempo normalmente prolongado.

[0048] "Edema" se refiere a un aumento del llquido intersticial en un tejido u organo. En el pulmon, "edema" tambien puede referirse a un aumento del llquido alveolar. En algunas realizaciones, el edema se asocia con una

20 afeccion que conlleva aumento de la permeabilidad de las celulas endoteliales.

[0049] "Aumento de la permeabilidad endotelial" se refiere a un aumento de la permeabilidad de los vasos sangulneos en un organo o tejido al llquido y/o protelnas de la sangre, lo que da lugar a un edema que puede producirse en diversos escenarios cllnicos como, pero sin limitaciones, el slndrome de dificultad respiratoria del

25 adulto (SDRA) y el slndrome de respuesta inflamatoria sistemica (SRIS), y en el ambito de la infeccion con diversas bacterias.

II. Consideraciones generales

30 [0050] El citoesqueleto endotelial, especialmente las fibras de tension de actina, tienen una funcion

importante en la regulacion de la permeabilidad vascular pulmonar. Vease Dudek y Garcia, J. Appl. Physiol., 91(4), 1487-1500 (2001). Tambien se ha postulado que el citoesqueleto puede actuar como un sistema de comunicacion intracelular o de andamiaje de la senalizacion. Vease Ingber, Faseb J., 20(7), 811-827, (2006). La materia descrita actualmente se refiere a la observacion de que un fosfato de aminoalquil glucosaminida, CRX-526, reduce el 35 reordenamiento del citoesqueleto tras una isquemia simulada.

III. Mimeticos del lipido A

[0051] En algunas realizaciones, la materia descrita actualmente se refiere al uso de compuestos mimeticos 40 del lipido A que comprenden monosacaridos o analogos de monosacaridos. En algunas realizaciones, el analogo de

monosacarido es un aminoazucar. En algunas realizaciones, el aminoazucar es glucosamina. En algunas realizaciones, la materia descrita actualmente se refiere al uso de fosfatos de aminoalquil glucosaminida (AGP) o sus sales farmaceuticamente aceptables.

45 III. A. Compuestos de formula (I)

[0052] En general, los AGP son mimeticos del lipido A sinteticos (es decir, sintetizados quimicamente) y pueden tener una estructura de formula (I):

imagen2

donde:

5 n es un numero entero de 1 a 6;

Xi es O o S;

X2 es O o S;

Ri, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16;

R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(=O)NH2 y -(CH2)mC(=O)OH, donde m es 10 un numero entero de 0 a 2; y

R5, R6 y R7 son independientemente alquilo C10-C12 alquilo, o

una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

15 [0053] En general, el AGP de uso en la materia descrita actualmente incluye al menos una cadena acilo

secundaria (es decir, R1, R2 o R3) que tiene menos de ocho carbonos. Por tanto, en algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2 y R3 es - C(=O)Rs, donde Rs es alquilo C1-C6 (es decir, al menos uno de R1, R2 y R3 es acilo C2-C7). En algunas realizaciones, al menos dos de R1, R2 y R3 son acilo C2-C7. En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2 y R3 es -C(=O)Rs, donde Rs es alquilo C5. En algunas realizaciones, R5, R6 y R7 son cada uno alquilo C10-C12 20 de cadena lineal completamente saturada.

[0054] En algunas realizaciones, el compuesto es CRX-526, es decir, el compuesto de formula (I) donde n es 1; X1 y X2 son cada uno O; R1, R2 y R3 son cada uno -C(=O)(CH2)4CH3; R4 es -C(=O)OH y R5, R6 y R7 son cada uno -(CH2)1oCH3, o una sal farmaceuticamente aceptables del mismo.

25

[0055] Se han descrito previamente la slntesis y actividad de diversos AGP. Vease, por ejemplo, Cluff y col., Infection and Immunity, 73(5), 3044-3052 (2005); Stover y col., J. Biol. Chem., 279(6), 4440-4449 (2004) y las referencias citadas en estas. Vease tambien la patente de EE. UU. N.° 6 113 918 de Johnson y col.

30 [0056] Los compuestos de formula (I) tienen atomos de carbono asimetricos y, por tanto, pueden mostrarse

como enantiomeros o diastereomeros. Las mezclas diasteromericas pueden separarse en sus diastereomeros individuales en funcion de sus diferencias fisicoqulmicas mediante procedimientos conocidos per se, por ejemplo, mediante cromatografla y/o cristalizacion fraccionada. Los enantiomeros pueden separarse convirtiendo la mezcla enantiomerica en una mezcla diasteromerica mediante reaccion con un compuesto opticamente apropiado (p. ej., 35 alcohol), separando los diastereomeros y convirtiendo (p. ej., hidrolizando) los diastereomeros individuales en los correspondientes enantiomeros puros. Todos estos isomeros, incluyendo diastereomeros, enantiomeros y sus mezclas se consideran como parte de la material descrita actualmente.

III. B. Sales farmaceuticamente aceptables

[0057] La expresion "sal farmaceuticamente aceptable" segun se usa en este documento en relacion con los compuestos de la materia descrita actualmente (p. ej., los compuestos de formula (I)) incluye las sales cationicas farmaceuticamente aceptables. La expresion "sales cationicas farmaceuticamente aceptables" pretende definir, pero

5 sin limitaciones, a aquellas sales que son sales de metales alcalinos (p. ej., sodio y potasio), sales de metales alcalinoterreos (p. ej., calcio y magnesio), sales de aluminio, sales de amonio y sales con aminas organicas como benzatina (N,N'-dibenziletilendiamina), colina, etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, etilendiamina, meglumina (N-metilglutamina), benetamina (N-bencilfenetilamina), etanolamina, dietilamina, piperazina, trietanolamina (2-amino- 2-hidroximetil-1,3-propanodiol) y procaina. En algunas realizaciones, el termino "sal farmaceuticamente aceptable"

10 segun se usa en este documento se refiere a sales que son farmaceuticamente aceptables en humanos.

[0058] Las sales farmaceuticamente aceptables de los compuestos de formula (I) se preparan facilmente mediante la reaccion de la forma de acido libre de dichos compuestos con una base apropiada, normalmente uno o mas equivalentes, en un cosolvente. Entre los cosolventes se pueden incluir, pero sin limitaciones, dietileter, diglima

15 y acetona. Entre las bases se pueden incluir, entre otras, hidroxido sodico, metoxido sodico, etoxido sodico, hidruro sodico, metoxido de potasio, hidroxido de magnesio, hidroxido de calcio, benzatina, colina, etanolamina, dietanolamina, piperazina y trietanolamina. La sal se alsla mediante concentracion hasta sequedad o adicion de un no solvente. En muchos casos, las sales pueden prepararse mezclando una solucion del acido con una solucion de una sal diferente del cation (p. ej., etilhexanoato de sodio o potasio, oleato de magnesio) y empleando un

20 cosolvente, como se describio anteriormente, a partir del que precipita la sal cationica deseada, o puede aislarse de otro modo mediante concentracion.

IV. Procedimientos de prevencion o reduction del reordenamiento del citoesqueleto de actina en una celula

25 [0059] En algunas realizaciones, la materia descrita actualmente se refiere a procedimientos para prevenir o

reducir el reordenamiento del citoesqueleto de actina. En algunas realizaciones, la materia descrita actualmente proporciona un procedimiento de prevencion o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina en una celula, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la celula con una cantidad eficaz de un compuesto de formula (I);

30

imagen3

donde:

35 n es un numero entero de 1 a 6;

Xi es O o S;

X2 es O o S;

R1, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16;

R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(=O)NH2 y -(CH2)mC(=O)OH, donde m es 40 un numero entero de 0 a 2; y

R5, R6 y R7 son independientemente alquilo C10-C12 alquilo, o

una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

[0060] En algunas realizaciones, al menos uno de Ri, R2 y R3 es -C(=0)Rb, donde Re es alquilo C5 de cadena 5 lineal completamente saturada. En algunas realizaciones, R5, R6 y R7 son cada uno alquilo C10-C12 de cadena lineal

completamente saturada.

[0061] En algunas realizaciones, n es 1. En algunas realizaciones, Xi y X2 son cada uno O. En algunas realizaciones, R4 es -C(=O)OH. En algunas realizaciones, Ri, R2 y R3 son cada uno acilo C2-C7.

10

[0062] En algunas realizaciones, el compuesto es CRX-526, es decir, el compuesto de formula (I) donde n es 1; X1 y X2 son cada uno O; R1, R2 y R3 son cada uno -C(=O)(CH2)4CH3; R4 es -C(=O)OH; y R5, R6 y R7 son cada uno -(CH2)1oCH3, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

15 [0063] La celula de los procedimientos descritos actualmente puede ser cualquier celula adecuada. Entre las

celulas adecuadas se incluyen, pero sin limitaciones, osteoblastos, osteoclastos, condrocitos, adipocitos, fibroblastos, celulas endoteliales, celulas epiteliales, celulas mesenquimales, celulas hematopoyeticas, celulas sensoriales, celulas glandulares endocrinas y exocrinas, celulas de la glia, neuronas, oligodendrocitos, celulas sangulneas, celulas intestinales, celulas cerebrales, celulas cardlacas, celulas pulmonares, celulas hepaticas, 20 celulas renales, celulas musculares y celulas pancreaticas. En algunas realizaciones, la celula es una celula eucariota. En algunas realizaciones, la celula es una celula de mamlfero. En algunas realizaciones, la celula es una celula humana.

[0064] En algunas realizaciones, la celula es una celula endotelial. En algunas realizaciones, la materia 25 descrita actualmente se refiere a la regulacion de la permeabilidad de las celulas endoteliales. Por tanto, en algunas

realizaciones, la materia descrita actualmente proporciona un procedimiento de regulacion de la permeabilidad de las celulas endoteliales, donde el procedimiento comprende poner en contacto una celula endotelial con un compuesto de formula (I). La regulacion de la permeabilidad celular puede dar lugar al mantenimiento de niveles normales del llquido intersticial (y/o llquido alveolar) que rodea a la celula en contacto o a una disminucion del 30 llquido intersticial (y/o llquido alveolar). En algunas realizaciones, la regulacion de la permeabilidad celular evita un aumento del llquido intersticial o del llquido alveolar que de otra manera se hubiera producido como resultado de una enfermedad o acontecimiento (como infeccion o una lesion de isquemia reperfusion).

[0065] En algunas realizaciones, el procedimiento de prevention o reduction del reordenamiento del 35 citoesqueleto de actina previene o reduce la formation de espacios intercelulares entre la celula y una o mas celulas

adicionales que rodean a la celula.

[0066] El reordenamiento del citoesqueleto de actina puede asociarse con edema, incluido edema pulmonar o edema en otros organos. El edema puede asociarse con inflamacion, infeccion, traumatismo (p. ej., cirugla),

40 inhalation de una toxina, trastorno circulatorio o exposition a altitudes elevadas. En algunas realizaciones, la prevencion o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina comprende prevenir o reducir el reordenamiento del citoesqueleto de actina que se asocia con una afeccion caracterizada por un aumento de la permeabilidad endotelial. En algunas realizaciones, el edema que se va a prevenir o reducir se asocia con isquemia reperfusion, como ocurre durante el trasplante de organos, la embolectomla pulmonar (elimination de sangre 45 coagulada de las arterias pulmonares) o la tromboendarterectomla pulmonar (eliminacion quirurgica de un coagulo organizado y fibrina de la vasculatura pulmonar).

[0067] En algunas realizaciones, la celula se pone en contacto con una cantidad eficaz del compuesto de formula (I) antes de un acontecimiento isquemico o de isquemia reperfusion simulado o previsto (p. ej., extraction de

50 tejido para trasplante de organos, trasplante de tejidos, cardioplegia, aplicacion de un torniquete, etc.) para evitar o reducir el reordenamiento del citoesqueleto de actina durante la isquemia o reperfusion posterior. En algunas realizaciones, la celula puede ponerse en contacto con el compuesto de formula (I) durante la isquemia. En algunas realizaciones, la celula puede ponerse en contacto con el compuesto de formula (I) tras un intervalo de isquemia (p. ej., durante la reperfusion).

55

[0068] En algunas realizaciones, el acontecimiento de isquemia reperfusion esta relacionado con el infarto de miocardio o el ictus. En algunas realizaciones, el acontecimiento de isquemia reperfusion esta relacionado con la cardioplegia (es decir, cuando se detiene intencionadamente la actividad cardiaca) durante la cirugia cardiaca o con la isquemia en el musculo esqueletico como resultado de una cirugia ortopedica (p. ej., cuando se aplica un

torniquete a una pierna para reducir la sangre en el campo quirurgico).

[0069] En algunas realizaciones, la materia descrita actualmente se refiere a procedimientos in vitro o ex vivo donde la celula no se localiza en un organismo vivo. Por ejemplo, la celula puede estar presente en un cultivo celular

5 o en un tejido u organo ex vivo. En algunas realizaciones, estos procedimientos in vitro o ex vivo pueden usarse para determinar la capacidad relativa de los compuestos para prevenir o reducir el reordenamiento del citoesqueleto de actina o determinar la dosis de un compuesto en particular en un tipo de celulas en particular. En algunas celulas, puede usarse un procedimiento ex vivo para tratar una celula presente en un tejido u organo destinado al trasplante.

10 V. Procedimientos de prevencion o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina en un sujeto

[0070] En algunas realizaciones, la celula esta presente en un organismo vivo. Por tanto, en algunas realizaciones, la materia descrita actualmente proporciona un procedimiento de prevencion o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina en una o mas celulas de un sujeto, comprendiendo el procedimiento

15 administrar al sujeto una cantidad eficaz de un compuesto de formula (I):

imagen4

donde:

20

n es un numero entero de 1 a 6;

Xi es O o S;

X2 es O o S;

Ri, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16;

25 R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(=O)NH2 y -(CH2)mC(=O)OH, donde m es un numero entero de 0 a 2; y

R5, R6 y R7 son independientemente alquilo C10-C12, o

una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

30

[0071] En algunas realizaciones, al menos uno de R1, R2 y R3 es -C(=O)Rs, donde Rs es alquilo C5 de cadena

lineal completamente saturada. En algunas realizaciones, R5, R6 y R7 son cada uno alquilo C10-C12 de cadena lineal completamente saturada.

35 [0072] En algunas realizaciones, n es 1. En algunas realizaciones, X1 y X2 son cada uno O. En algunas

realizaciones, R4 es -C(=O)OH. En algunas realizaciones, R1, R2 y R3 son cada uno acilo C2-C7.

[0073] En algunas realizaciones, el compuesto es CRX-526, es decir, el compuesto de formula (I) donde n es

1; X1 y X2 son cada uno O; R1, R2 y R3 son cada uno -C(=O)(CH2)4CH3; R4 es -C(=O)OH; y R5, R6 y R7 son cada uno

-(CH2)ioCH3, o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

[0074] En algunas realizaciones, la prevencion o reduccion del reordenamiento del citoesqueleto de actina en una o mas celulas del sujeto previene o alivia una enfermedad o afeccion asociada con un aumento del

5 reordenamiento del citoesqueleto de actina, o un slntoma del mismo, en el sujeto. La enfermedad o afeccion puede ser cualquier enfermedad o afeccion caracterizada por edema. En algunas realizaciones, el edema se asocia con aumento de la permeabilidad de las celulas endoteliales. Por ejemplo, la enfermedad o afeccion es SDRA o SRIS.

[0075] En algunas realizaciones, la enfermedad o afeccion se asocia con LIR. Por consiguiente, la 10 enfermedad o afeccion puede estar relacionada con una LIR asociada con el trasplante de organos o tejidos

(incluido xenotrasplante o autotrasplante), cardioplegia, infarto de miocardio, ictus, cirugla ortopedica programada, ciruglas hepaticas que conlleven maniobra de Pringle u otras ciruglas en las que se limita el flujo sangulneo a un tejido. En algunas realizaciones, la afeccion puede estar relacionada con una LIR asociada con el trasplante pulmonar.

15

[0076] La administracion del compuesto de formula (I) puede realizar a traves de cualquier via adecuada (es decir, oral, intravenosa, parenteral, a traves de las vlas respiratorias, etc.). El contacto puede tener lugar antes de un acontecimiento isquemico, durante la isquemia o tras un intervalo de isquemia (p. ej., durante la reperfusion).

20 [0077] En algunas realizaciones, el sujeto es un mamlfero. En algunas realizaciones, el sujeto es un humano.

En algunas realizaciones, la celula o celulas estan presenten en un organo o tejido seleccionado a partir del grupo que incluye, pero sin limitaciones, un rinon o parte del mismo, un hlgado o parte del mismo, un corazon o parte del mismo, una retina, un pancreas o parte del mismo, un intestino o parte del mismo, tejido cerebral, musculo esqueletico o un pulmon o parte del mismo.

25

VI. Composiciones farmaceuticas

[0078] Segun se usa en este documento el termino "compuesto activo" se refiere a cualquier compuesto que puede inhibir el reordenamiento del citoesqueleto y/o la formacion de espacios intercelulares. En particular, el

30 termino se refiere a compuestos de formula (I) y a sus sales. El compuesto activo puede ponerse en contacto con la celula o administrarse al sujeto mediante cualquier tecnica adecuada. Segun se usa en este documento, el termino "cantidad eficaz" se refiere a una cantidad de un compuesto activo o compuestos activos que son capaces de inhibir o prevenir diversas afecciones patologicas y sus secuelas, descritas en este documento. Los terminos "inhibe" o "inhibiendo" se refieren a prohibir, prevenir, tratar, aliviar, mejorar, detener, restringir, reducir, ralentizar o revertir la 35 progresion, o reducir la gravedad de la enfermedad, como, sin limitaciones, una afeccion relacionada o resultante de un dano tisular (p. ej., dano del tejido pulmonar) en sujetos que estan en riesgo de enfermedades o afecciones relacionadas con el aumento del reordenamiento del citoesqueleto. Como tal, los procedimientos descritos actualmente de administracion de compuestos activos incluyen tanto administracion medica terapeutica (aguda) como profilactica (prevencion), si procede.

40

[0079] La cantidad y momento de aplicacion del compuesto activo administrado puede, por supuesto, depender del sujeto que se va a tratar, la gravedad de la afliccion, la forma de administracion y el criterio del medico que prescribe la dosis. Por tanto, debido a la variabilidad entre sujetos, las dosis proporcionada a continuation supone una directriz y el medico puede titular la dosis del compuesto para conseguir el tratamiento que el medico

45 considere apropiado para el sujeto. Considerando el grado de tratamiento deseado, el medico puede balancear diversos factores como la edad del sujeto, la presencia de enfermedad preexistente as! como la presencia de otras enfermedades. Las formulaciones farmaceuticas pueden prepararse para su administracion oral, intravenosa o aerosol como se describe a continuacion con mayor detalle.

50 [0080] La administracion terapeuticamente eficaz de cualquier compuesto activo especlfico, cuyo uso esta

dentro del alcance de las realizaciones descritas en el presente documento, puede variar algo de un compuesto a otro, y entre sujetos, y puede depender de la afeccion del sujeto y la via de administracion Como propuesta general, una dosis de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 50 mg/kg puede tener eficacia terapeutica, calculandose todos los pesos en funcion del peso del compuesto activo, incluidos los casos donde se emplea una sal. Los 55 problemas de toxicidad al nivel mas alto pueden limitar la administracion intravenosa a un nivel menor, como hasta aproximadamente 10 mg/kg, calculandose todos los pesos en funcion del peso de la base activa, incluidos los casos donde se emplea una sal. Puede emplearse una dosis de aproximadamente 10 mg/kg a aproximadamente 50 mg/kg para su administracion oral. Tlpicamente, puede emplearse una dosis de aproximadamente 0,5 mg/kg a 5 mg/kg para su inyeccion intramuscular. En algunas realizaciones, la dosis puede ser de aproximadamente 1 pmol/kg a

aproximadamente 50 pmol/kg, u, opcionalmente, entre aproximadamente 22 pmol/kg y aproximadamente 33 pmol/kg del compuesto para su administration intravenosa u oral.

[0081] Los ensayos in vitro e in vivo descritos en este documento proporcionan una tecnica donde pueden 5 compararse las actividades de los compuestos. Los resultados de estas comparaciones son utiles para determinar

los niveles de dosis en mamlferos, incluidos humanos, para inducir la protection frente al reordenamiento del citoesqueleto de actina. Estos ensayos proporcionan la comparacion de las actividades de los compuestos de formula I y otros compuestos. Los resultados de estas comparaciones son utiles para determinar dichos niveles de dosis.

10

[0082] De acuerdo con los procedimientos descritos actualmente, los compuestos farmaceuticamente activos como se describe en el presente documento se pueden administrar por via oral como un solido o como un llquido, o pueden administrarse por via intramuscular, por via intravenosa o a traves de las vlas respiratorias (por ejemplo, mediante inhalation) como una solution, suspension o emulsion. En algunas realizaciones, los compuestos o sales

15 tambien pueden administrarse mediante inhalacion, por via intravenosa o intramuscular como una suspension de liposomas. Cuando se administracion mediante inhalacion, el compuesto activo o su sal puede estar en forma de diversas partlculas solidas o gotitas con un tamano de partlcula de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 micrometres, y opcionalmente de aproximadamente 1 a aproximadamente 2 micrometres.

20 [0083] Las formulaciones farmaceuticas pueden comprender un compuesto activo descrito en este

documento o una sal farmaceuticamente aceptable del mismo, en cualquier vehlculo farmaceuticamente aceptable. Si se desea una solucion, el agua es el vehlculo de election con respecto a compuestos o sales solubles en agua. Con respecto a los compuestos o sales solubles en agua, puede ser adecuado un vehlculo organico, como glicerol, propilenglicol, polietilenglicol o mezclas de los mismos. En este ultimo caso, el vehlculo organico puede contener 25 una cantidad sustancial de agua. En cualquiera de los casos, la solucion puede esterilizarse a continuation de una forma adecuada conocida por los expertos en la materia y, tlpicamente, mediante filtration a traves de un filtro de 0,22 micrometros. Despues de la esterilizacion, la solucion puede dispensarse dentro de recipientes adecuados, como viales de vidrio despirogenizados. La dispensation se realiza opcionalmente mediante un procedimiento aseptico. A continuacion pueden colocarse cierres esterilizados en los viales y, si se desea, pueden liofilizarse los 30 contenidos de los viales.

[0084] Ademas de los compuestos activos o sus sales (p. ej., los compuestos de formula (I)), las formulaciones farmaceuticas pueden contener otros aditivos, como aditivos para ajustar el pH. En particular, entre los agentes para ajustar el pH se incluyen acidos, como el acido clorhldrico, bases o tampones, como lactato sodico,

35 acetato sodico, fosfato sodico, citrato sodico, borato sodico o gluconato sodico. Adicionalmente, las formulaciones pueden contener conservantes antimicrobianos. Entre los conservantes antimicrobianos utiles se incluyen metilparabeno, propilparabeno y alcohol bencllico. El conservante antimicrobiano se emplea tlpicamente cuando la formulation se coloca en un vial designado para uso como multidosis. Las formulaciones farmaceuticas descritas en este documento pueden liofilizarse usando tecnicas bien conocidas en la materia.

40

[0085] Para su administracion oral, una composition farmaceutica puede tomar forma de soluciones, suspensiones, comprimidos, plldoras, capsulas, polvos y similares. Los comprimidos que contienen diversos excipientes como citrato sodico, carbonato calcico y fosfato calcico se emplean junto con diversos desintegrantes como almidon (p. ej., almidon de patata o tapioca) y determinados silicatos complejos, junto con agentes de union

45 como polivinilpirrolidona, sacarosa, gelatina y goma de acacia. Adicionalmente, los agentes lubricantes como el estearato de magnesio, dodecil sulfato sodico y calco a menudo son muy utiles para los objetivos de formation de comprimidos. Las composiciones solidas de tipo similar tambien se emplean como cargas en capsulas de gelatina rellenas blandas y duras. Entre los materiales en conexion con esto tambien se incluyen lactosa o azucar de la leche as! como polietilenglicoles de alto peso molecular. Cuando se desean suspensiones y/o elixires acuosos para 50 administracion oral, los compuestos de la materia descrita actualmente pueden combinarse con diversos agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes, agentes emulsionantes y/o agentes de suspension, as! como diluyentes como agua, etanol, propilenglicol, glicerina y diversas combinaciones de los mismos.

[0086] Aun en otra realization de la materia descrita en este documento, se proporciona una formulacion 55 inyectable, estable y esteril que comprende un compuesto activo como se describe en este documento, o una sal del

mismo, en una forma de unidad de dosis en un recipiente sellado. El compuesto o sal se proporciona en forma de un liofilizado, que es capaz de reconstituirse con un vehlculo farmaceuticamente aceptable adecuado para formar una formulacion llquida adecuada para su inyeccion a un sujeto. Cuando el compuesto o sal es sustancialmente insoluble en agua, puede emplearse una cantidad suficiente de agente emulsionante, que sea fisiologicamente

aceptable, en una cantidad suficiente para emulsionar el compuesto o sal en un vehlculo acuoso. Entre los agentes emulsionantes especialmente utiles se incluyen fosfatidilcolinas y lecitina.

[0087] Realizaciones adicionales proporcionadas en este documento incluyen formulaciones de liposomas de 5 los compuestos activos descritos en este documento. La tecnologla para formar suspensiones de liposomas es bien

conocida en la materia. Cuando el compuesto es una sal soluble en agua, usando tecnologla convencional de liposomas, la misma puede incorporarse dentro de vehlculos lipldicos. En tal caso, debido a la solubilidad en agua del compuesto activo, dicho compuesto activo puede ser arrastrado sustancialmente dentro del centro o nucleo hidrofilo de los liposomas. La capa lipldica empleada puede ser de cualquier composicion convencional y puede 10 contener colesterol o no contenerlo. Cuando el compuesto activo de interes es insoluble en agua, empleando de nuevo tecnologla de formacion de liposomas convencional, la sal puede ser arrastrada sustancialmente dentro de la bicapa lipldica hidrofoba que forma la estructura del liposoma. En cualquier caso, los liposomas que se producen pueden tener un tamano reducido, como los que se obtienen mediante el uso de tecnicas de sonicacion y homogeneizacion convencionales. Las formulaciones de liposomas que comprenden los compuestos activos 15 descritos en este documento pueden liofilizarse para obtener un liofilizado, que puede reconstituirse con un vehlculo farmaceuticamente aceptable, como agua, para regenerar la suspension de liposomas.

[0088] Tambien se proporcionan formulaciones farmaceuticas que son adecuadas para su administracion como aerosol mediante inhalacion. Estas formulaciones comprenden una solucion o suspension de un compuesto

20 deseado descrito en este documento o una sal del mismo, o una gran variedad de partlculas solidas del compuesto o la sal. La formulacion deseada puede colocarse en una camara pequena y nebulizarse. La nebulizacion puede conseguirse mediante aire comprimido o mediante energla ultrasonica para formar una gran cantidad de gotitas llquidas o partlculas solidas que comprenden los compuestos o sus sales. Las gotitas llquidas o partlculas solidas deben tener un tamano de partlcula en el intervalo de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 10 micrometros y, 25 opcionalmente, de aproximadamente 0,5 a aproximadamente 5 micrometros. Las partlculas solidas pueden obtenerse mediante el procesamiento del compuesto solido o su sal, en cualquier manera apropiada conocida en la materia, como mediante micronizacion. Opcionalmente, el tamano de las partlculas solidas o las gotitas puede ser de aproximadamente 1 a aproximadamente 2 micrometros. A este respecto, hay disponibles nebulizadores comerciales para conseguir este objetivo. Los compuestos pueden administrarse mediante una suspension en 30 aerosol de partlculas respirables en la forma establecida en la patente de EE. UU. N.° 5 628 984, cuya descripcion se incorpora en su totalidad en este documento por referencia.

[0089] Cuando la formulacion farmaceutica adecuada para su administracion como aerosol esta en forma llquida, dicha formulacion puede comprender un compuesto activo soluble en agua en un vehlculo que comprenda

35 agua. Puede estar presente un tensioactivo que reduce la tension superficial de la formulacion lo suficiente para que se produzca la formacion de gotitas dentro del intervalo de tamano deseado cuando se somete a nebulizacion.

[0090] Como se ha indicado, se proporcionan compuestos activos tanto solubles en agua como insolubles. Segun se usa en este documento, el termino "soluble en agua" pretende definir cualquier composicion que es

40 soluble en agua en una cantidad de aproximadamente 50 mg/ml o superior. Tambien, como se usa en este documento, el termino " insoluble en agua" pretende definir cualquier composicion que tiene una solubilidad en agua de menos de aproximadamente 20 mg/ml. En algunas realizaciones, pueden ser deseables los compuestos o sus sales solubles en agua mientras que en otras realizaciones pueden ser deseables los compuestos o sus sales insolubles en agua.

45

[0091] En un modo de administracion, los compuestos de la materia descrita actualmente pueden administrarse justo antes de una cirugla (p. ej., durante las veinticuatro horas previas a la cirugla, por ejemplo, una cirugla cardlaca o cirugla de trasplante), durante y/o despues de la cirugla (p. ej., durante las veinticuatro horas posteriores a la cirugla) cuando existe riesgo de isquemia. En otro modo de administracion, los compuestos activos

50 se administran con una dosis de carga inicial (p. ej., inyeccion en bolo o infusion) previa a la cirugla seguido de una infusion constante previa, durante o despues de la cirugla. Los compuestos activos tambien pueden administrarse en modo diario prolongado.

[0092] Los procedimientos de preparacion de diversas composiciones farmaceuticas y con determinadas 55 cantidades de compuesto activo son conocidos, o pueden determinarse, a la vista de esta memoria descriptiva, por

los expertos en la materia. Para obtener ejemplos de procedimientos de preparacion de composiciones farmaceuticas, vease Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easter, Pa., 16a Edicion (1980). Las composiciones farmaceuticas segun la materia descrita actualmente pueden contener, por ejemplo, del 0,0001% al 95% de los compuestos activos. En cualquier caso, la composicion o formulacion que se va a administrar

puede contener una cantidad de compuestos activos en una cantidad eficaz para tratar la enfermedad/afeccion del sujeto que esta siendo tratado.

[0093] En algunas realizaciones, los procedimientos de la materia descrita actualmente pueden usarse para 5 prevenir o reducir el reordenamiento del citoesqueleto de actina y/o la formacion de espacios intercelulares en

tejidos u organos extracorporeos o en tejidos u organos que se han trasplantado de un donante de tejido u organo a un receptor del trasplante. Los tejidos u organos extracorporeos son tejidos u organos que no estan en un individuo (tambien denominados ex vivo). Para el trasplante de tejidos y organos, los tejidos y organos del donante extraldos tambien son susceptibles de lesion por reperfusion durante su recogida, durante el transporte y tras el trasplante en 10 un receptor. Los procedimientos descritos actualmente pueden usarse para aumentar la viabilidad de un tejido u organo trasplantable, por ejemplo, suplementando soluciones utilizadas para mantener o conservar los tejidos u organos trasplantables. Por ejemplo, los procedimientos y composiciones pueden usarse para cubrir el tejido u organo trasplantable durante el transporte o puede ponerse en contacto con el tejido u organo trasplantable antes, durante o despues del trasplante. En algunas realizaciones, las formulaciones de la materia descrita actualmente 15 pueden ponerse en contacto con un tejido u organo mientras que el tejido u organo esta presente en el donante.

[0094] Las soluciones de la materia descrita actualmente puede usarse en dispositivos para perfusion (p. ej., circuitos de perfusion ex vivo). Un dispositivo para perfusion segun se usa en este documento es cualquier dispositivo mecanico que puede usarse para infundir un organo especlfico o la circulacion sistemica con una

20 solucion que comprende un compuesto o composicion. Este dispositivo puede contener uno o mas depositos. El dispositivo puede incluir un tubo, cateter o canula que sale desde el deposito y puede insertarse en un organo, vena o arteria. El dispositivo puede ser un dispositivo electromecanico con bombas electricas y dispositivos para controlar la temperatura, velocidad o volumen de administracion de la solucion. En determinadas realizaciones, el dispositivo es programable de modo que las una o mas soluciones se administran a una temperatura, velocidad o volumen 25 apropiados para una situacion cllnica, peso del organo o tamano del organo (p. ej., cirugla de derivacion cardiopulmonar frente a trasplante renal frente a trasplante hepatico) en particular.

VII. Sujetos

30 [0095] En algunas realizaciones, el sujeto tratado con la materia descrita actualmente es deseablemente un

ser humano, aunque se entendera que los procedimientos descritos en este documento son eficaces con respecto a todas las especies de vertebrados, que se pretende esten incluidos en el termino "sujeto". Los procedimientos descritos en este documento son especialmente utiles en el tratamiento y/o prevencion del reordenamiento del citoesqueleto de actina en celulas de vertebrados de sangre caliente. Por tanto, los procedimientos pueden usarse 35 como tratamiento para mamlferos y pajaros. En algunas realizaciones, el sujeto del procedimiento descrito actualmente es el receptor de un trasplante de organo.

[0096] Mas especialmente, en este documento se proporciona el tratamiento de mamlferos, como humanos, as! como aquellos mamlferos importantes debido al peligro de extincion (como los tigres siberianos), de importancia

40 economica (animales criados en granjas para el consumo humano) y/o de importancia social (animales utilizados como mascotas o mantenidos en zoologicos) para humanos, por ejemplo, carnlvoros distintos a los humanos (como gatos y perros), porcinos (cerdos, puercos y jaballes), rumiantes (como vacas, bueyes, ovejas, jirafas, ciervos, cabras, bisontes y camellos) y caballos. Tambien se proporciona en este documento el tratamiento para pajaros, que incluyen el tratamiento de aquellos tipos de pajaros que estan en peligro de extincion, que viven en zoologicos o se 45 utilizan como mascotas, as! como aves de corral, y mas especialmente, aves de corral domesticadas, es decir, gallinaceas, como pavos, pollos, patos, gansos, pintadas, y similares, ya que tambien tienen importancia economica para los humanos. Por tanto, las realizaciones de los procedimientos descritos en este documento incluyen el tratamiento del ganado, incluyendo, pero sin limitaciones, cerdos domesticados (cerdos y puercos), rumiantes, caballos, aves de corral, y similares.

50

EJEMPLOS

[0097] Los ejemplos siguientes proporcionan realizaciones ilustrativas. A la vista de la presente descripcion y el nivel general de destreza en la tecnica, los expertos pueden apreciar que los siguientes ejemplos pretenden ser

55 tan solo eso y que pueden emplearse numerosos cambios, modificaciones y alteraciones sin apartarse del alcance de la materia descrita actualmente.

EJEMPLO 1

Procedimientos generales

Modelo de cultivo celular de LIR caliente de pulmon

5 [0098] Se desarrollo un modelo normotermico (37 °C) de LIR in vitro en el que se empleo la deplecion de

nutrientes en oxigeno al 100% para reproducir la isquemia, con la reperfusion reproducida suplementando medio recien preparado a placas de cultivo en recipientes de PLEXIGLAS® sellados. Las celulas endoteliales microvasculares pulmonares humanas (HMVEC) (Cambrex Bio Science, Walkersville, Maryland, Estados Unidos de America) mantenidas en CLONETICS® EGM-2MV BULLETKITS® (Cambrex Bio Science, Walkersville, Maryland, 10 Estados Unidos de America), a 37°C en un incubador humidificado en CO2 al 5% se sembraron a 2000 celulas/cm2 en placas con base de vidrio de 30 mm de diametro recubiertas de colageno (Mattek Corp., Ashland, Massachusetts, Estados Unidos de America) y se crecieron hasta una confluencia del 100 %. Los recipientes de PLEXIGLAS® sellados que alojaban las placas de cultivo a 37°C se airearon con O2 al 95 %/CO2 al 5 %. Para reproducir la isquemia caliente (IC), el medio celular se sustituyo subitamente por 2 ml de lactato de Ringer de grado clinico sin 15 nutrientes y libre de pirogenos. Las placas se trataron previamente con CRX-526 a 1 pg/ml (GlaxoSmithKline, Duluth, Minnesota, Estados Unidos de America) o vehiculo (glicerina al 2 %), durante una hora antes de la IC. CRX- 526 o el vehiculo se anadieron siempre que se cambio el medio. Tras una hora de IC simulada, el lactato de Ringer se sustituyo por medio EGM2-MV libre de pirogenos para simular la reperfusion, ventilando la camara con CO2 5% en aire ambiente. Se retiraron placas por triplicado durante la IC y la reperfusion que se fijaron inmediatamente con 20 paraformaldehido al 4 % para realizar la tincion con faloidina. Sirvieron de controles las celulas con inhibidor o vehiculo mantenidas en medio EGM2-MV a 37 °C en el incubador humidificado con CO2 al 5 %. El medio de cultivo se cambio al mismo tiempo que en las placas del experimento. Se insertaron sondas a traves de puertos sellados para registrar de forma continua la temperatura y el pH en una placa representativa en la caja de PLEXIGLAS® usando voltimetros y registrando los datos de salida con el software PicoRecorded (Pico Technology, St. Neots, 25 Reino Unido).

Tincion con faloidina y analisis de las imagenes

[0099] Las HMVEC se fijaron en paraformaldehido al 4 % durante 10 minutos a temperatura ambiente y se 30 lavaron 3 veces con PBS. Las celulas se incubaron durante 1 hora con una dilucion 1/100 de faloidina

ALEXAFLOR® 568 (Invitrogen, Carlsbad, California, Estados Unidos de America) en PBS con BSA al 1 % y Tween- 20 al 0,05 %. Las placas tenidas para actina F se examinaron inmediatamente en un microscopio invertido de fluorescencia/DIC DMIRB de Leica (Leica Microsystems, Inc., Bannockburn, Illinois, Estados Unidos de America) a 20 y 40 aumentos para evaluar los cambios en la forma celular y en el citoesqueleto de actina F. Para cada placa, se 35 obtuvieron tres fotografias de campos contiguos proximos al centro de la placa a 40 aumentos con una camara digital Kodak (Rochester, Nueva York, Estados Unidos de America) con el mismo tiempo de exposicion. Un observador que desconocia el experimento evaluo el patron de fibras de tension de actina de cada celula como normal o anomalo. El analisis cuantitativo de la zona de espacios se realizo mediante el software METAMORPH® (MDS Analytical Technologies, Inc., Sunnyvale, California, Estados Unidos de America).

40

Determinacion de la viabilidad en experimentos de cultivos celulares

[0100] En experimentos independientes realizados por triplicado, las celulas HMVEC crecidas hasta la confluencia en placas P35 se sometieron a LIR simulada. En los mismos puntos temporales, se evaluo la actividad

45 lactato deshidrogenasa (LDH) en las celulas y medios de cultivo celular o lactato de Ringer usando el ensayo de citotoxicidad no radiactivo Cyto Tox96 (Promega, Madison, Wisconsin, Estados Unidos de America) siguiendo las instrucciones del fabricante. Tambien se tomaron muestras control a tiempo cero y a las 24 horas para evaluar la viabilidad celular aparte del modelo experimental. Se usaron el medio de cultivo y lactato de Ringer como controles del fondo para normalizar el valor de absorbancia con respecto a las otras muestras. La citotoxicidad se calculo 50 como la media de la actividad LDH dividida por la actividad LDH total (sedimento celular mas medio). La viabilidad era la inversa y se expresaba como porcentaje de viabilidad en cada punto temporal.

Analisis estadfstico

55 [0101] Todos los datos se notificaron como la media ± ETM. Los grupos se compararon mediante el analisis

ANOVA con una prueba Turkey a posteriori usando STATISTICA® (StatSoft, Inc., Tulsa, Oklahoma, Estados Unidos de America) o mediante pruebas t pareadas o no pareadas.

EJEMPLO 2

CRX-526 previene el reordenamiento del citoesqueleto de actina relacionado con la isquemia caliente simulada y la formacion de espacios en la monocapa endotelial

5 [0102] Se uso un modelo de isquemia in vitro para explorar la inhibicion del reordenamiento del citoesqueleto,

centrandose en las celulas endoteliales microvasculares pulmonares. Estudios previos relacionados con la isquemia mostraron un aumento significativo en el coeficiente de filtracion y en la relacion del peso humedo/seco de los pulmones de las ratas tras una hora de isquemia, que se atribuyo a la disfuncion endotelial (vease Jones y col., J. Appl. Physiol. 83, 247-252 (1997), aunque la alteracion del aclaramiento pulmonar de llquidos tambien puede 10 contribuir al edema pulmonar. Vease Matthay y col., Proc. Am. Thorac. Soc., 2(3), 206-213 (2005). En otros estudios previos se habla empleado hipoxia-reoxigenacion en modelos de cultivo celular de LIR. Vease Powell y Jackson, Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol., 285(1), L189-198 (2003) y Zhang, y col., J. Biol. Chem., 278(2), 1248-1258 (2003). No obstante, se observo acidosis pulmonar a pH 6,8 en los pulmones de ratas dejados in situ a 37 °C durante 1 hora tras parada cardlaca sin hipoxia significativa. Vease Koukoulis y col., J. Heart Lung Transplant, 15 24(12), 2218-2225 (2005). De este modo, no parece que la hipoxia sea una caracterlstica general de la isquemia pulmonar, especialmente en pulmones inflados con oxlgeno al 100%. Por tanto se considera que el modelo in vitro descrito actualmente refleja con precision los acontecimientos in vivo, aunque la depletion de nutrientes y el desarrollo de acidosis serla mas gradual in vivo.

20 [0103] Como se describio en el ejemplo 1, las celulas HMVEC crecidas hasta la confluencia en placas P30

con portaobjetos integrales se incubaron con CRX-526 a 1 |jg/ml o vehlculo y se ventilo en O2 al 95%/CO2 5%. El medio se sustituyo por lactato de Ringer templado (37 °C) y se ventilo con O2 al 100% para estimular la isquemia caliente. Una hora despues, se sustituyo el lactato de Ringer por medio de cultivo celular templado y las camaras se ventilaron con aire ambiente al 95%/CO2 al 5% para estimular la reperfusion. Durante la isquemia caliente simulada, 25 las fibras de tension de actina desapareclan o se haclan mas perifericas en las celulas (veanse las flechas sombreadas de la figura 1A), asociado con la formacion de espacios en la monocapa endotelial (veanse las flechas blancas de la figura 1A). Cuatro horas despues de la reperfusion simulada (240 min rep) y 24 horas despues de la reperfusion simulada (no mostrado), las monocapas eran confluyentes y el patron del citoesqueleto de actina era similar a los controles.

30

[0104] En presencia de CRX-526, el area de espacios en la monocapa se redujo significativamente durante la

isquemia y las monocapas recuperaban la confluencia mas rapidamente tras la reperfusion simulada. Vease la figura 1 B. El porcentaje de celulas con el citoesqueleto de actina alterado tambien disminuyo en las monocapas tratadas con CRX-526. Como se indica en la figura 1C, aproximadamente el 40% de las celulas tiene cierto grado de 35 orientation periferica del citoesqueleto de actina en las placas control recien preparadas. La orientation periferica de la actina se reducla significativamente en presencia de CRX-526 despues de 60 minutos de IC y tras 15 minutos de reperfusion simulada (rep) en comparacion con monocapas expuestas al vehlculo. La vialidad celular, cuantificada mediante el ensayo de LDH, era equivalente en los grupos controles y tratados en todos los puntos temporales.

40 [0105] La sustitucion del medio con lactato de Ringer da lugar al descenso subito del pH de 7,2 a 6,5, que

revierte cuando se sustituye el medio. Para abordar si la formacion de espacios en las monocapas de celulas endoteliales era debida exclusivamente a los cambios en el pH, se realizaron experimentos en los que se altero el pH del medio de cultivo celular durante una hora, mediante aireacion de la camara con CO2 al 10% (pH 6,8) o mediante la adicion de HCl para reducir el pH del medio a 6,5 cuando se ventilaba con O2 al 100% o a 5,6 cuando se 45 ventilaba con CO2 al 5%. Los medios alterados se sustituyeron por medio normal para restablecer bruscamente el pH despues de una hora. No se observaron cambios aparentes en la integridad de la monocapa cuando solo el pH estaba alterado.

EJEMPLO 3

50

LIR fria simulada

[0106] A la vista del sorprendente impacto de CRX-526 sobre el reordenamiento del citoesqueleto de actina y

la formacion de espacios en las HMVEC sometidas a LIR caliente simulada, descrito anteriormente en el ejemplo 2, 55 los efectos de CRX-526 tambien se estudiaron en un modelo simulado de LIR fria. En la figura 2A se muestra el efecto de la sustitucion del medio de cultivo celular templado por PERFADEX™ (Vitrolife, Kungsbacka, Suecia) fria, la solution de conservation del pulmon mas frecuentemente empleada en todo el mundo, sobre las HMVEC. Se necesita aproximadamente una hora por placas de cultivo celular para alcanzar una temperatura de 4°C, por lo que, en la Figura 2A, las fotograflas de las celulas despues de 4 horas de "isquemia" fria (IF) representan la aparicion de

celulas cinco horas despues de la sustitucion de los medios templados por PERFADEX™ (Vitrolife, Kungsbacka, Suecia) frio. Aunque el citoesqueleto de actina esta desordenado en todas las placas, los espacios son mucho menos evidentes en las celulas tratadas con CRX-526. Vease la Figura 2B.

5 [0107] Se entendera que diversos detalles de la materia descrita actualmente pueden cambiarse sin alejarse

del objetivo de la materia descrita actualmente. Ademas, la descripcion anterior es solo con fines ilustrativos, y no con el fin de limitar la patente.

Claims (9)

1. REIVINDICACIONES

   1. Un procedimiento realizado durante la isquemia frla para prevenir o reducir la formacion de espacios

   intercelulares en una celula pulmonar en tejidos u organos extracorporeos o en tejidos u organos que estan siendo 5 trasplantados a partir de un tejido u organo donante a un receptor del trasplante, en el que dichos tejidos u organos no se localizan en un organismo vivo, comprendiendo el procedimiento poner en contacto la celula, tejido u organo durante la isquemia frla con una cantidad eficaz de un compuesto representado por la formula (I):

   imagen1

   10

   donde:

   n es un numero entero de 1 a 6;

   Xi es O o S;

   15 X2 es O o S;

   Ri, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16 , donde al menos uno de R1, R2 y R3 es acilo C2-C7 ;

   R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(=O)NH2 y -(CH2)mC(=O)OH, donde m es un numero entero de 0 a 2; y

   R5, R6, and R7 son independientemente alquilo C10-C12 , o

   20

   una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.

2. 2. El procedimiento de la reivindicacion 1,

3. 25

   3. El procedimiento de la reivindicacion 1,

4. 4. El procedimiento de la reivindicacion 1,

5. 5. El procedimiento de la reivindicacion 1,

   30

6. 6. El procedimiento de la reivindicacion 1

   que:

   en el que n es 1.

   en el que X1 y X2 son cada uno O. en el que R4 es -C(=O)OH. en el que R1, R2 y R3 son cada uno acilo C2-C7 . en el que el compuesto de formula (I) es un compuesto en el

   n es 1;

   35 X1 es O;

   X2 es O; R1, R2 y R3 son cada uno -C(=O)(CH2)4CH3; R4 es -C(=O)OH; y

   R5, R6 y R7 son cada uno -(CH2)1oCH3, o

   una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
7. 7. El procedimiento de la reivindicacion 1, en el que la celula es una celula de mamlfero, opcionalmente en el que la celula es una celula endotelial.

   5
8. 8. Un procedimiento realizado durante la isquemia frla para prevenir o reducir la lesion por isquemia reperfusion previniendo o reduciendo la formacion de espacios intercelulares en una celula pulmonar en tejidos u organos extracorporeos o en tejidos u organos que estan siendo trasplantados a partir de un tejido u organo donante a un receptor del trasplante, en el que dichos tejidos u organos no se localizan en un organismo vivo,

   10 comprendiendo el procedimiento poner en contacto la celula, tejido u organo durante la isquemia frla con una cantidad eficaz de un compuesto representado por la formula (I):

   imagen2

   15 donde:

   n es un numero entero de 1 a 6;

   Xi es O o S;

   X2 es O o S;

   20 R1, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16 , donde al menos uno de R1, R2 y R3 es acilo C2-C7 ;

   R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(=O)NH2 y -(CH2)mC(=O)OH, donde m es un numero entero de 0 a 2; y

   R5, R6 y R7 son independientemente alquilo C10-C12 , o 25 una sal farmaceuticamente aceptable del mismo.
9. 9. Uso de una cantidad eficaz de un compuesto representado por la formula (I):

   imagen3

   donde:

   5 n es un numero entero de 1 a 6;

   Xi es O o S;

   X2 es O o S;

   Ri, R2 y R3 son independientemente acilo C2-C16 , donde al menos uno de Ri, R2 y R3 es acilo C2-C7 ;

   R4 se selecciona a partir del grupo compuesto por H, hidroxilalquilo, -C(=O)NH2 y -(CH2)mC(=O)OH, donde m es 10 un numero entero de 0 a 2; y

   R5, R6, and R7 son independientemente alquilo C10-C12 , o

   una sal farmaceuticamente aceptable del mismo en la sude soluciones utilizada para mantener o conservar los tejidos pulmonares u organos pulmonares extracorporeos trasplantables previniendo o reduciendo la formacion de 15 espacios intercelular.