ES2363339T3

ES2363339T3 - INHIBITOR OF C-KIT CINASA.

Info

Publication number: ES2363339T3
Application number: ES04719054T
Authority: ES
Inventors: Yuji Yamamoto; Tatsuo Watanabe; Masayuki Okada; Akihiko Tsuruoka
Original assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Current assignee: Eisai R&D Management Co Ltd
Priority date: 2003-03-10
Filing date: 2004-03-10
Publication date: 2011-08-01
Anticipated expiration: 2024-03-10

Abstract

Un compuesto para su uso en un procedimiento de tratamiento de un cáncer que expresa excesiva c-Kit cinasa o una c-Kit cinasa mutante seleccionado de la leucemia mielógena aguda, la leucemia de mastocitos, un cáncer de pulmón microcítico, tumores del estroma gastrointestinal (GIST), un cáncer testicular y el neuroblastoma, o para su uso es un procedimiento de tratamiento de la mastocitosis, la alergia o el asma, en el que dicho compuesto es un compuesto representado por la fórmula general (I), una de sus sales o un hidrato de los anteriores: (en la que R 1 representa metilo, 2-metoxietilo o un grupo representado por las fórmulas (II): (en las que R a3 representa metilo, ciclopropilmetilo o cianometilo; R a1 representa hidrógeno, flúor o hidroxilo; y R a2 representa 1-pirrolidinilo, 1-piperidinilo, 4-morfolinilo, dimetilamino o dietilamino); R 2 representa ciano o -CONHR a4 (en el que R a4 representa hidrógeno, alquilo C1-6, cicloalquilo C3-8, alcoxi C1-6 o cicloalcoxi C3-8); R 3 representa hidrógeno, metilo, trifluorometilo, cloro o flúor; y R 4 representa hidrógeno, metilo, etilo, n-propilo, ciclopropilo, 2-tiazolilo o 4-fluorofenilo).A compound for use in a cancer treatment procedure that expresses excessive c-Kit kinase or a mutant c-Kit selected from acute myelogenous leukemia, mast cell leukemia, a small cell lung cancer, gastrointestinal stromal tumors ( GIST), a testicular cancer and neuroblastoma, or for use is a method of treatment of mastocytosis, allergy or asthma, in which said compound is a compound represented by the general formula (I), one of its salts or a hydrate of the foregoing: (wherein R 1 represents methyl, 2-methoxyethyl or a group represented by formulas (II): (where R a3 represents methyl, cyclopropylmethyl or cyanomethyl; R a1 represents hydrogen, fluorine or hydroxyl; and R a2 represents 1-pyrrolidinyl, 1-piperidinyl, 4-morpholinyl, dimethylamino or diethylamino); R 2 represents cyano or -CONHR a4 (where R a4 represents hydrogen, C1-6 alkyl, C3-8 cycloalkyl, C1-6 alkoxy or C3-8 cycloalkoxy); R 3 represents hydrogen, methyl, trifluoromethyl, chlorine or fluorine; and R 4 represents hydrogen, methyl, ethyl, n-propyl, cyclopropyl, 2-thiazolyl or 4-fluorophenyl).

Description

Technical field

La presente invención se refiere a un inhibidor de la c-Kit cinasa, un agente terapéutico para una enfermedad causada por activación excesiva de la c-Kit cinasa que comprende un inhibidor de la c-Kit cinasa como ingrediente activo. The present invention relates to a c-Kit kinase inhibitor, a therapeutic agent for a disease caused by excessive activation of c-Kit kinase that comprises a c-Kit kinase inhibitor as an active ingredient.

Prior art

La transducción de señales intracelulares por el receptor tirosina cinasa contribuye a la proliferación, diferenciación y metabolismo de las células; como resultado, es responsable de varias enfermedades que incluyen los cánceres (Kolibaba K. S. y col., B.B.A. 1333, F217-F248, 1997; y Sheijen B. y col. Oncogene 21, 3314-3333, 2002). The transduction of intracellular signals by the receptor tyrosine kinase contributes to cell proliferation, differentiation and metabolism; As a result, he is responsible for several diseases that include cancers (Kolibaba K. S. et al., B.B.A. 1333, F217-F248, 1997; and Sheijen B. et al. Oncogene 21, 3314-3333, 2002).

La c-Kit cinasa, uno de los receptores tirosina cinasa, se une al SCF (factor celular germinal) que es un ligando específico para la cinasa. Esto provoca la dimerización de la cinasa misma y la posterior activación de la actividad cinasa. Por consiguiente, una diversidad de sustratos de la c-Kit cinasa en las células serán fosforilados (Blume-Jensen P. y col., EMBO J. 10, 4121-4128, 1991; y Lev S. y col., EMBO J., 10, 647-654, 1991). The c-Kit kinase, one of the tyrosine kinase receptors, binds to SCF (germ cell factor) which is a specific kinase ligand. This causes the dimerization of the kinase itself and the subsequent activation of the kinase activity. Consequently, a variety of c-Kit kinase substrates in the cells will be phosphorylated (Blume-Jensen P. et al., EMBO J. 10, 4121-4128, 1991; and Lev S. et al., EMBO J. , 10, 647-654, 1991).

La activación anormal de la c-Kit cinasa genera una señal de proliferación en ciertos tipos de células cancerosas (a continuación se describen ejemplos representativos), que es considerada la causa de la diferenciación cancerosa o transformación neoplásica. The abnormal activation of c-Kit kinase generates a proliferation signal in certain types of cancer cells (representative examples are described below), which is considered the cause of cancer differentiation or neoplastic transformation.

(1) (one): Leucemia mielógena aguda (LMA): se encontró expresión de c-Kit cinasa en una cantidad de pacientes (60-80%) que padecían leucemia mielógena aguda y la proliferación de blastocitos obtenidos de los pacientes era estimulada por el SCF. Además, en 13 de 18 pacientes se observó activación de la c-Kit cinasa sin estimulación por SCF. Entonces se pensó que las mutaciones activadoras de la c-Kit cinasa se presentaban en estos pacientes (Lev S. y col., EMBO J., 10, 647-654, 1991; Wang C y col., Leukemia 3, 699-702, 1989; Kanakura Y. y col., Leuk. Lymph. 10, 35-41, 1993; Ikeda H. y col., Blood, 78, 2962-2968, 1991; e Ikeda H. y col., Exp. Hematol. 21, 1686-1694, 1993). Acute myelogenous leukemia (AML): c-Kit kinase expression was found in a number of patients (60-80%) suffering from acute myelogenous leukemia and the proliferation of blasts obtained from patients was stimulated by the SCF. In addition, in 13 of 18 patients, c-Kit kinase activation was observed without SCF stimulation. It was then thought that c-Kit kinase activating mutations occurred in these patients (Lev S. et al., EMBO J., 10, 647-654, 1991; Wang C et al., Leukemia 3, 699-702 , 1989; Kanakura Y. et al., Leuk. Lymph. 10, 35-41, 1993; Ikeda H. et al., Blood, 78, 2962-2968, 1991; and Ikeda H. et al., Exp. Hematol 21, 1686-1694, 1993).

(2) (2): Leucemia de mastocitos o células cebadas: se presentó un informe que indicaba la presencia de mutaciones activadoras de la c-Kit cinasa en la línea celular de la leucemia de mastocitos que había desarrollado un paciente con mastocitosis (Furitsu T. y col., J. Clin. Invest., 92, 1736-1744, 1993). Mast cell or mast cell leukemia: a report was presented indicating the presence of c-Kit kinase activating mutations in the cell line of mast cell leukemia that a patient with mastocytosis had developed (Furitsu T. et al., J. Clin. Invest., 92, 1736-1744, 1993).

(3) (3): Cáncer de pulmón microcítico (CPM): mientras que se observó expresión de nivel alto c-Kit cinasa en más del 70% de las líneas celulares del CPM, los niveles de expresión de c-Kit cinasa en las líneas celulares de cáncer de pulmón no microcítico fueron bajos o por debajo del límite de detección. El SCF, ligando de la c-Kit cinasa, también se expresa en las líneas celulares del CPM. Esto sugiere que posiblemente se haya producido la promoción de la proliferación por vía autocrina (Hibi K. y col., Oncogene, 6, 2291-2296, 1991; y Sekido Y. y col., Cancer Res., 51, 2416-2419, 1991). Microcytic lung cancer (CPM): While high-level c-Kit kinase expression was observed in more than 70% of CPM cell lines, c-Kit kinase expression levels in non-lung cancer cell lines Microcytic were low or below the detection limit. The SCF, ligand of the c-Kit kinase, is also expressed in the CPM cell lines. This suggests that autocrine proliferation promotion may have occurred (Hibi K. et al., Oncogene, 6, 2291-2296, 1991; and Sekido Y. et al., Cancer Res., 51, 2416-2419 , 1991).

(4) (4): GIST (del inglés GastroIntestinal Stromal Tumors, tumores del estroma gastrointestinal): se define al GIST como un tumor estromal que se desarrolla en el tracto GI y que expresa c-Kit cinasa. En aproximadamente la mitad de los GIST, se encontraron mutaciones activadoras de la c-Kit cinasa y estaban presentes en frecuencia elevada en GIST con alta malignidad. Esto sugiere la posibilidad de que la mutación sea un factor de pronóstico (Lasota J. y col., Am. GIST (GastroIntestinal Stromal Tumors, gastrointestinal stromal tumors): GIST is defined as a stromal tumor that develops in the GI tract and expresses c-Kit kinase. In approximately half of the GIST, activating mutations of the c-Kit kinase were found and were present in high frequency in GIST with high malignancy. This suggests the possibility that the mutation is a prognostic factor (Lasota J. et al., Am.

J. J.: Pathol., 157, 1091-1095, 2000; y Taniguchi M. y col., Cancer Res., 59, 4297-4300, 1999). Pathol., 157, 1091-1095, 2000; and Taniguchi M. et al., Cancer Res., 59, 4297-4300, 1999).

(5) (5): Cáncer testicular: en el cáncer testicular, el carcinoma in situ (CIS), que es considerado una lesión precancerosa, progresa hasta formar tumores que se denominan “seminoma” y “no seminoma”. Se presentaron informes de expresión de alto nivel de c-Kit cinasa en CIS y en seminoma (Stromeyer T. y col., Cancer Res., 51, 1811-1816) 1991. En los últimos años se ha publicado un informe sobre la expresión de c-Kit cinasa que experimentó una mutación activadora en seminoma (Tian Q. y col., Am. J. Pathol., 154, 1643-1647, 1999). Testicular cancer: In testicular cancer, carcinoma in situ (CIS), which is considered a precancerous lesion, progresses to form tumors called "seminoma" and "not seminoma." High-level expression reports of c-Kit kinase were presented in CIS and seminoma (Stromeyer T. et al., Cancer Res., 51, 1811-1816) 1991. In recent years, a report on the expression has been published of c-Kit kinase that underwent an activating mutation in seminoma (Tian Q. et al., Am. J. Pathol., 154, 1643-1647, 1999).

(6) (6): Cáncer de ovario: se ha informado de la siguiente manera: en el epitelio ovárico normal, se expresó SCF pero no se observó expresión de c-Kit cinasa. Sin embargo, tanto la c-Kit cinasa como el SCF se expresaron en el tumor ovárico benigno en una etapa temprana de la diferenciación cancerosa; por el contrario, la expresión de c-Kit cinasa se redujo en el tumor ovárico maligno. Estos resultados sugieren que la c-Kit cinasa desempeñó un papel importante en el desarrollo del cáncer de ovario (Tonary A. T., Int. J. Cancer, 89, 242-250, 2000). Ovarian cancer: has been reported as follows: in the normal ovarian epithelium, SCF was expressed but no expression of c-Kit kinase was observed. However, both c-Kit kinase and SCF were expressed in benign ovarian tumor at an early stage of cancer differentiation; on the contrary, c-Kit kinase expression was reduced in the malignant ovarian tumor. These results suggest that c-Kit kinase played an important role in the development of ovarian cancer (Tonary A. T., Int. J. Cancer, 89, 242-250, 2000).

(7) (7): Cáncer de mamar: hubo un informe que indicó que la expresión de c-Kit cinasa se redujo en el cáncer de mama, en comparación con los tejidos normales circundantes (Natali P. y col., Int. J. Cancer, 52, 713-717, 1992). Sin embargo, en estudios posteriores, la expresión de c-Kit cinasa, que no se había detectado en el tejido normal, se observó en el cáncer de mama y también se detectó la expresión de SCF. Éstas sugieren que la estimulación autocrina promovió la proliferación (Hines S. J. y col., Cell Growth & Differentiation, 6, 769-779, 1995). Breast cancer: there was a report that indicated that c-Kit kinase expression was reduced in breast cancer, compared to surrounding normal tissues (Natali P. et al., Int. J. Cancer, 52, 713- 717, 1992). However, in subsequent studies, c-Kit kinase expression, which had not been detected in normal tissue, was observed in breast cancer and SCF expression was also detected. These suggest that autocrine stimulation promoted proliferation (Hines S. J. et al., Cell Growth & Differentiation, 6, 769-779, 1995).

(8) (8): Cáncer cerebral: se ha informado de la siguiente manera: se observó expresión de c-Kit cinasa en la línea celular y el tejido del glioblastoma que tenía el nivel más elevado de malignidad entre los cánceres cerebrales; y en la línea Brain cancer: it has been reported as follows: c-Kit kinase expression was observed in the cell line and glioblastoma tissue that had the highest level of malignancy among brain cancers; and on the line

celular del glioblastoma que expresa c-Kit cinasa, la estimulación con SCF promovió el crecimiento (Berdel W. E. y col., Cancer Res., 52, 3498-3502, 1992). Cellular glioblastoma expressing c-Kit kinase, SCF stimulation promoted growth (Berdel W. E. et al., Cancer Res., 52, 3498-3502, 1992).

(9) (9): Neuroblastoma: se ha informado de la siguiente manera: se presentó coexpresión de SCF y c-Kit cinasa en muchos casos de líneas celulares y en el tejido de muestras de neuroblastoma, muy conocido como el cáncer que se desarrolla en niños. El anticuerpo anti-c-Kit cinasa suprimió el crecimiento de la línea celular del neuroblastoma y, por consiguiente, el crecimiento estaba promovido por un mecanismo autocrino (Cohen P. S., Blood, 84, 3465-3472, 1994). Neuroblastoma: It has been reported as follows: Coexpression of SCF and c-Kit kinase occurred in many cases of cell lines and in the tissue of neuroblastoma samples, well known as cancer that develops in children. The anti-c-Kit kinase antibody suppressed the growth of the neuroblastoma cell line and, therefore, the growth was promoted by an autocrine mechanism (Cohen P. S., Blood, 84, 3465-3472, 1994).

(10) (10): Cáncer colorrectal: se observó coexpresión de c-Kit cinasa y de su ligando, SCF, en tejido de cáncer colorrectal, mientras que no se observó expresión de ninguno en el tejido mucosal normal. La estimulación con SCF promovió la proliferación de la línea celular del cáncer colorrectal. (Bellone G. y col., J. Cell. Physiol., 172,1-11, 1997). Colorectal cancer: Coexpression of c-Kit kinase and its ligand, SCF, was observed in colorectal cancer tissue, while no expression was observed in normal mucosal tissue. Stimulation with SCF promoted the proliferation of the colorectal cancer cell line. (Bellone G. et al., J. Cell. Physiol., 172,1-11, 1997).

Se informó que la activación de la c-Kit cinasa por estimulación con SCF era esencial para la proliferación y diferenciación de mastocitos (Hamel y col., J. Neuro-Onc., 35, 327-333, 1997; y Kitamura y col., Int. Arch. Aller. Immunol., 107, 54-56, 1995). Se pensó, por consiguiente, que la activación excesiva de la c-Kit cinasa era responsable de las anomalías inmunológicas (tales como la mastocitosis, el asma y la rinitis crónica) que tienen como causa la excesiva cantidad de mastocitos. It was reported that the activation of c-Kit kinase by SCF stimulation was essential for mast cell proliferation and differentiation (Hamel et al., J. Neuro-Onc., 35, 327-333, 1997; and Kitamura et al. , Int. Arch. Aller. Immunol., 107, 54-56, 1995). It was thought, therefore, that excessive activation of c-Kit kinase was responsible for immunological abnormalities (such as mastocytosis, asthma and chronic rhinitis) that cause excessive mast cells.

(1) (one): Mastocitosis: mastocitosis es un término general para la patología de varias afecciones caracterizadas por el crecimiento excesivo de las células cebadas o mastocitos (Metcalf, J. Invest. Derm. 93, 2S-4S, 1991; y Golkar y col., Lancet, 349, 1379-1385, 1997). Lo siguiente se ha informado en pacientes con mastocitosis: 1) la excesiva expresión de c-Kit cinasa (Nagata y col., Mastocytosis Leuk., 12, 175-181, 1998); 2) un aumento en la cantidad de SCF soluble (Longley y col., New Engl. J. Med., 328, 1302-1307, 1993); y 3) mutaciones activadoras de c-Kit cinasa (Nagata y col., Mastocytosis Leuk., 12, 175-181, 1998; y Longley y col., Nat. Gen., 12, 312-314, 1996). Se cree que éstas activan de manera excesiva la c-Kit cinasa y de este modo provocan la mastocitosis. Mastocytosis: Mastocytosis is a general term for the pathology of several conditions characterized by the overgrowth of mast cells or mast cells (Metcalf, J. Invest. Derm. 93, 2S-4S, 1991; and Golkar et al., Lancet, 349 , 1379-1385, 1997). The following have been reported in patients with mastocytosis: 1) the excessive expression of c-Kit kinase (Nagata et al., Mastocytosis Leuk., 12, 175-181, 1998); 2) an increase in the amount of soluble SCF (Longley et al., New Engl. J. Med., 328, 1302-1307, 1993); and 3) c-Kit kinase activating mutations (Nagata et al., Mastocytosis Leuk., 12, 175-181, 1998; and Longley et al., Nat. Gen., 12, 312-314, 1996). It is believed that these excessively activate c-Kit kinase and thus cause mastocytosis.

(2) (2): Alergia y asma: los mastocitos y los eosinófilos son células importantes en el desarrollo de la inflamación, alergia, asma y similares (Thomas y col., Gen. Pharmacol., 27, 593-597, 1996; y Metcalf y col., Physiol. Rev., 77, 1033-1079, 1997). Esto lo sugiere el informe de que los corticosteroides, que actualmente se cree que son más eficaces contra inflamaciones que incluyen rinitis crónica o alergia, disminuyen el número de células cebadas y eosinófilos circulantes e invasores (Naclerio y col., JAMA, 278, 1842-1848, 1997; y Meltzer, Aller., 52, 33-40, 1997). La activación de c-Kit cinasa como resultado de la estimulación con SCF no sólo resultó esencial para la diferenciación, supervivencia y proliferación de los mastocitos, también promovió la inducción de diversos factores provenientes de los mastocitos. Estos factores cumplen una función importante en la diferenciación, supervivencia e invasividad de los eosinófilos (Okayama y col., Int. Arch. Aller. Immunol., 114, 75-77, 1997; Okayama y col., Eur. J. Immunol., 28, 708-715, 1998; Metcalf y col., Proc. Natl. Acad. Sci., 95, 6408-6421, 1998; Kay y col., Int. Arch. Aller. Immunol., 113, 196-199, 1997; Hogaboam y col., J. Immunol. 160, 6166-6171, 1998; y Luckas y col., J. Immunol. 156, 3945-3951, 1996). Por consiguiente, se pensó que la inhibición de la c-Kit cinasa puede suprimir los mastocitos y eosinófilos activados en los pacientes que padecen asma o alergias. Allergy and asthma: mast cells and eosinophils are important cells in the development of inflammation, allergy, asthma and the like (Thomas et al., Gen. Pharmacol., 27, 593-597, 1996; and Metcalf et al., Physiol Rev., 77, 1033-1079, 1997). This is suggested by the report that corticosteroids, which are currently believed to be more effective against inflammations that include chronic rhinitis or allergy, decrease the number of mast cells and circulating and invading eosinophils (Naclerio et al., JAMA, 278, 1842- 1848, 1997; and Meltzer, Aller., 52, 33-40, 1997). The activation of c-Kit kinase as a result of SCF stimulation was not only essential for mast cell differentiation, survival and proliferation, it also promoted the induction of various factors from mast cells. These factors play an important role in the differentiation, survival and invasiveness of eosinophils (Okayama et al., Int. Arch. Aller. Immunol., 114, 75-77, 1997; Okayama et al., Eur. J. Immunol. , 28, 708-715, 1998; Metcalf et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 95, 6408-6421, 1998; Kay et al., Int. Arch. Aller. Immunol., 113, 196-199 , 1997; Hogaboam et al., J. Immunol. 160, 6166-6171, 1998; and Luckas et al., J. Immunol. 156, 3945-3951, 1996). Therefore, it was thought that c-Kit kinase inhibition can suppress activated mast cells and eosinophils in patients suffering from asthma or allergies.

Como se estableció anteriormente, se cree que la c-Kit cinasa está implicada estrechamente en el desarrollo o en la transformación neoplásica de ciertos tipos de cáncer así como en las enfermedades para las cuales la cantidad excesiva de mastocitos se considera la causa. Los inhibidores de la c-Kit cinasa han sido considerados útiles como agentes terapéuticos para tales enfermedades. As stated above, c-Kit kinase is believed to be closely involved in the development or neoplastic transformation of certain types of cancer as well as in diseases for which excessive mast cell count is considered the cause. The c-Kit kinase inhibitors have been considered useful as therapeutic agents for such diseases.

Disclosure of the invention

El problema a resolver por la invención es descubrir compuestos nuevos que exhiban actividad de inhibidor de la c-Kit cinasa y desarrollar un agente terapéutico para las enfermedades causadas por la c-Kit cinasa. The problem to be solved by the invention is to discover new compounds that exhibit c-Kit kinase inhibitor activity and develop a therapeutic agent for the diseases caused by c-Kit kinase.

Se ha informado que los compuestos que tienen una estructura central indolina son los que muestran acción inhibidora de la c-Kit cinasa (documento WO 01/45689). También se presentó un informe con respecto a la acción inhibidora sobre la c-Kit cinasa por los compuestos que tienen una estructura central quinazolina (documento WO 01/47890). También se ha informado que un análogo (KRN633) posee acción inhibidora de la c-Kit cinasa (Kazuo Kubo y col., 22º Symposium on Medicinal Chemistry, Resúmenes, páginas 275-277, 2P-320, 2002). Recientemente, se ha autorizado Gleevec (STI571) en los EEUU, en Europa y Japón como agente terapéutico para GIST en base a la inhibición de c-Kit (Drugs, 63: 513-522, 2003). It has been reported that compounds that have an indoline core structure are those that show inhibitory action of c-Kit kinase (WO 01/45689). A report was also presented regarding the inhibitory action on c-Kit kinase by compounds having a central quinazoline structure (WO 01/47890). It has also been reported that an analogue (KRN633) has a c-Kit kinase inhibitory action (Kazuo Kubo et al., 22nd Symposium on Medicinal Chemistry, Abstracts, pages 275-277, 2P-320, 2002). Recently, Gleevec (STI571) has been authorized in the US, in Europe and Japan as a therapeutic agent for GIST based on c-Kit inhibition (Drugs, 63: 513-522, 2003).

Los inventores han informado que un compuesto representado por la siguiente fórmula general (I) inhibe la actividad cinasa del receptor de VEGF, y que también inhibe la formación de túbulos en células del endotelio vascular estimuladas por VEGF, FGF2 o HGF (documento WO 02/32872). Y, los inventores han descubierto que un compuesto representado por la siguiente fórmula general (I) inhibe no solo la VEGF cinasa sino también la c-Kit cinasa, y que tiene actividad inhibidora frente a la proliferación de células cancerosas que expresan c-Kit cinasa. The inventors have reported that a compound represented by the following general formula (I) inhibits the kinase activity of the VEGF receptor, and also inhibits the formation of tubules in vascular endothelial cells stimulated by VEGF, FGF2 or HGF (WO 02 / 32872). And, the inventors have discovered that a compound represented by the following general formula (I) inhibits not only VEGF kinase but also c-Kit kinase, and that it has inhibitory activity against the proliferation of cancer cells expressing c-Kit kinase .

Específicamente, la invención se refiere al tema sujeto de las reivindicaciones adjuntas. Specifically, the invention relates to the subject matter of the appended claims.

Se ha descubierto un compuesto que presenta potente actividad inhibidora de la c-Kit cinasa, por consiguiente puede proporcionarse un agente terapéutico para suprimir la diferenciación cancerosa y la transformación neoplásica de ciertos tipos de cáncer, o un agente terapéutico para enfermedades que se considera que son causadas por la c-Kit cinasa, tales como la mastocitosis, la alergia o el asma. A compound that has potent c-Kit kinase inhibitory activity has been discovered, therefore a therapeutic agent can be provided to suppress cancerous differentiation and neoplastic transformation of certain types of cancer, or a therapeutic agent for diseases that are considered to be caused by c-Kit kinase, such as mastocytosis, allergy or asthma.

Brief description of the drawings

La Fig. 1 es un gráfico que muestra los resultados de la inmunotransferencia de c-Kit cinasa fosforilada por estimulación con SCF. Fig. 1 is a graph showing the results of the immunoblot of c-Kit kinase phosphorylated by stimulation with SCF.

La Fig. 2 es un gráfico que muestra la relación entre el número de días transcurridos tras el transplante y el volumen tumoral cuando se transplantan células H-526 a un ratón atímico. Fig. 2 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed after the transplant and the tumor volume when H-526 cells are transplanted to an athymic mouse.

La Fig.3 es un gráfico que muestra el resultado de la inmunotransferencia de c-Kit cinasa fosforilada, c-Kit cinasa y β-actina cuando se transplantan células H-526 a un ratón atímico. Fig. 3 is a graph showing the result of the immunoblot of c-Kit phosphorylated kinase, c-Kit kinase and β-actin when H-526 cells are transplanted to an athymic mouse.

Best way to carry out the invention

A continuación se explicarán las formas de realización de la presente invención. The embodiments of the present invention will be explained below.

Varias de las fórmulas estructurales dadas para los compuestos a lo largo de la presente memoria descriptiva representarán un isómero específico por conveniencia, pero la invención no está limitada a tales isómeros específicos y abarca todos los isómeros y las mezclas de isómeros, incluyendo isómeros geométricos, isómeros ópticos derivados de carbonos asimétricos, estereoisómeros y tautómeros, implícitos por las estructuras de los compuestos. Además, los compuestos de la invención también incluyen los que han sido metabolizados en el cuerpo por oxidación, reducción, hidrólisis, conjugación o similar y que aún así presentan la actividad deseada, mientras que la invención además abarca todos los compuestos que son objeto de metabolismo tal como oxidación, reducción, hidrólisis, etc. en el cuerpo para producir los compuestos de la invención. Los solvatos, incluyendo los solvatos con agua, también están comprendidos en la invención. Several of the structural formulas given for the compounds throughout the present specification will represent a specific isomer for convenience, but the invention is not limited to such specific isomers and encompasses all isomers and mixtures of isomers, including geometric isomers, isomers. optics derived from asymmetric carbons, stereoisomers and tautomers, implicit by the structures of the compounds. In addition, the compounds of the invention also include those that have been metabolized in the body by oxidation, reduction, hydrolysis, conjugation or the like and still have the desired activity, while the invention also encompasses all compounds that are subject to metabolism. such as oxidation, reduction, hydrolysis, etc. in the body to produce the compounds of the invention. Solvates, including solvates with water, are also included in the invention.

La expresión "alquilo C1-6" como se usa a lo largo de la presente memoria descriptiva se refiere a un alquilo lineal o ramificado de 1 a 6 carbonos, y como ejemplos específicos pueden mencionarse metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, nbutilo, i-butilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo, i-pentilo, sec-pentilo, t-pentilo, neopentilo, 1-metilbutilo, 2-metilbutilo, 1,1dimetilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, n-hexilo, i-hexilo, 1-metilpentilo, 2-metilpentilo, 3-metilpentilo, 1,1-dimetilbutilo, 1,2dimetilbutilo, 2,2-dimetilbutilo, 1,3-dimetilbutilo, 2,3-dimetilbutilo, 3,3-dimetilbutilo, 1-etilbutilo, 2-etilbutilo, 1,1,2trimetilpropilo, 1,2,2-trimetilpropilo, 1-etil-1-metilpropilo y 1-etil-2-metilpropilo, de preferencia metilo, etilo, n-propilo, ipropilo, n-butilo, i-butilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo, i-pentilo, sec-pentilo, t-pentilo, neopentilo, 1-metilbutilo, 2metilbutilo, 1,1-dimetilpropilo, 1,2-dimetilpropilo, n-hexilo e i-hexilo, de más preferencia metilo, etilo, n-propilo, ipropilo, n-butilo, i-butilo, sec-butilo, t-butilo, n-pentilo, i-pentilo, sec-pentilo, t-pentilo, neopentilo, 1-metilbutilo, 2metilbutilo, 1,1-dimetilpropilo y 1,2-dimetilpropilo, de más preferencia aún metilo, etilo, n-propilo, i-propilo, n-butilo, 1butilo, sec-butilo y t-butilo, y de mayor preferencia metilo, etilo, n-propilo e i-propilo. The term "C1-6 alkyl" as used throughout the present specification refers to a linear or branched alkyl of 1 to 6 carbons, and as specific examples there may be mentioned methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl , n-butyl, i-butyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, i-pentyl, sec-pentyl, t-pentyl, neopentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 1,1-dimethylpropyl, 1,2-dimethylpropyl , n-hexyl, i-hexyl, 1-methylpentyl, 2-methylpentyl, 3-methylpentyl, 1,1-dimethylbutyl, 1,2-dimethylbutyl, 2,2-dimethylbutyl, 1,3-dimethylbutyl, 2,3-dimethylbutyl, 3 , 3-dimethylbutyl, 1-ethylbutyl, 2-ethylbutyl, 1,1,2-trimethylpropyl, 1,2,2-trimethylpropyl, 1-ethyl-1-methylpropyl and 1-ethyl-2-methylpropyl, preferably methyl, ethyl, n -propyl, ipropyl, n-butyl, i-butyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, i-pentyl, sec-pentyl, t-pentyl, neopentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 1,1-dimethylpropyl , 1,2-dimethylpropyl, n-hexyl and i-hexyl, more preferably methyl, ethyl, n-propyl, ipropyl, n-butyl, i-butyl, sec-butyl, t-butyl, n-pentyl, i-pentyl, sec-pentyl, t-pentyl, neopentyl, 1-methylbutyl, 2-methylbutyl, 1,1-dimethylpropyl and 1,2- dimethylpropyl, more preferably still methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, 1-butyl, sec-butyl and t-butyl, and more preferably methyl, ethyl, n-propyl and i-propyl.

La expresión "cicloalquilo C3-8" como se usa a lo largo de la presente memoria descriptiva se refiere a un alquilo ciclilo de 3 a 8 carbonos, y como ejemplos específicos pueden mencionarse ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo y ciclohexilo, siendo de preferencia el ciclopropilo. The term "C3-8 cycloalkyl" as used throughout the present specification refers to a cycloyl alkyl of 3 to 8 carbons, and as specific examples there may be mentioned cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl and cyclohexyl, with cyclopropyl being preferably .

La expresión "alcoxi C1-6" como se usa a lo largo de la presente memoria descriptiva se refiere a un sustituyente en el que el "alquilo C1-6" está unido a oxígeno, y como ejemplos específicos pueden mencionarse metoxi, etoxi, npropoxi, i-propoxi, n-butoxi, i-butoxi, sec-butoxi, t-butoxi, n-pentiloxi, i-pentiloxi, sec-pentiloxi, t-pentiloxi, neopentiloxi, 1-metilbutoxi, 2-metilbutoxi, 1,1-dimetilpropoxi, 1,2-dimetilpropoxi, n-hexiloxi, i-hexiloxi, 1-metilpentiloxi, 2metilpentiloxi, 3-metilpentiloxi, 1,1-dimetilbutoxi, 1,2-dimetilbutoxi, 2,2-dimetilbutoxi, 1,3-dimetilbutoxi, 2,3dimetilbutoxi, 3,3-dimetilbutoxi, 1-etilbutoxi, 2etilbutoxi, 1,1,2-trimetilpropoxi, 1,2,2-trimetilpropoxi, 1-etil-1-metilpropoxi y 1-etil-2-metilpropoxi, de preferencia metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, i-butoxi, sec-butoxi, t-butoxi, npentiloxi, i-pentiloxi, sec-pentiloxi, t-pentiloxi, neopentiloxi, 1-metilbutoxi, 2-metilbutoxi, 1,1-dimetilpropoxi, 1,2dimetilpropoxi, n-hexiloxi e i-hexiloxi, de más preferencia metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, i-butoxi, secbutoxi, t-butoxi, n-pentiloxi, 1-pentiloxi, sec-pentiloxi, t-pentiloxi, neopentiloxi, 1-metilbutoxi, 2-metilbutoxi, 1,1dimetilpropoxi y 1,2-dimetilpropoxi, de más preferencia aún metoxi, etoxi, n-propoxi, i-propoxi, n-butoxi, i-butoxi, secbutoxi y t-butoxi, y de mayor preferencia metoxi, etoxi, n-propoxi y i-propoxi. The term "C1-6 alkoxy" as used throughout the present specification refers to a substituent in which "C1-6 alkyl" is attached to oxygen, and as specific examples there may be mentioned methoxy, ethoxy, npropoxy , i-propoxy, n-butoxy, i-butoxy, sec-butoxy, t-butoxy, n-pentyloxy, i-pentyloxy, sec-pentyloxy, t-pentyloxy, neopentyloxy, 1-methylbutoxy, 2-methylbutoxy, 1,1 -dimethylpropoxy, 1,2-dimethylpropoxy, n-hexyloxy, i-hexyloxy, 1-methylpentyloxy, 2-methylpentyloxy, 3-methylpentyloxy, 1,1-dimethylbutoxy, 1,2-dimethylbutoxy, 2,2-dimethylbutoxy, 1,3-dimethylbutoxy , 2,3-dimethylbutoxy, 3,3-dimethylbutoxy, 1-ethylbutoxy, 2-ethylbutoxy, 1,1,2-trimethylpropoxy, 1,2,2-trimethylpropoxy, 1-ethyl-1-methylpropoxy and 1-ethyl-2-methylpropoxy, of preference methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, n-butoxy, i-butoxy, sec-butoxy, t-butoxy, npentyloxy, i-pentyloxy, sec-pentyloxy, t-pentyloxy, neopentyloxy, 1-methylbutoxy, 2 -methylbutoxy, 1,1-dimethylpropoxy, 1,2-dimethylpropoxy, n-hexyloxy and i-hexyloxy, of m more preferably methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, n-butoxy, i-butoxy, secbutoxy, t-butoxy, n-pentyloxy, 1-pentyloxy, sec-pentyloxy, t-pentyloxy, neopentyloxy, 1-methylbutoxy, 2-methylbutoxy, 1,1-dimethylpropoxy and 1,2-dimethylpropoxy, more preferably still methoxy, ethoxy, n-propoxy, i-propoxy, n-butoxy, i-butoxy, secbutoxy and t-butoxy, and more preferably methoxy, ethoxy, n-propoxy and i-propoxy.

La expresión "cicloalcoxi C3-8" como se usa a lo largo de la presente memoria descriptiva se refiere a alcoxi cíclico de 3 a 8 carbonos, y como ejemplos específicos pueden mencionarse ciclopropoxi, ciclobutoxi, ciclopentiloxi y ciclohexiloxi, siendo de preferencia el ciclopropoxi. The term "C3-8 cycloalkoxy" as used throughout the present specification refers to cyclic alkoxy of 3 to 8 carbons, and as specific examples there may be mentioned cyclopropoxy, cyclobutoxy, cyclopentyloxy and cyclohexyloxy, preferably cyclopropoxy.

Puede producirse un compuesto representado por la fórmula general (I) mediante el procedimiento que se describe en el documento WO 02/32872. A compound represented by the general formula (I) can be produced by the procedure described in WO 02/32872.

A lo largo de la presente memoria descriptiva, la expresión "sal farmacológicamente aceptable" no se limita a un tipo de sal en particular, y como ejemplos de tales sales pueden mencionarse sales de adición de ácidos inorgánicos tales como clorhidrato, sulfato, carbonato, bicarbonato, bromhidrato y yodhidrato; sales de adición de ácidos carboxílicos orgánicos tales como acetato, maleato, lactato, tartrato y trifluoroacetato; sales de adición de ácidos sulfónicos orgánicos tales como metanosulfonato, hidroximetanosulfonato, hidroxietanosulfonato, bencenosulfonato, toluenosulfonato y sales de taurina; sales de adición de aminas tales como sales de trimetilamina, sales de trietilamina, sales de piridina, sales de procaína, sales de picolina, sales de diciclohexilamina, sales de N,N’dibenciletilendiamina, sales de N-metilglucamina, sales de dietanolamina, sales de trietanolamina, sales de tris (hidroximetilamino)metano y sales de fenetilbencilamina; y sales de adición de aminoácidos tales como sales de arginina, sales de lisina, sales de serina, sales de glicina, aspartato y glutamato. Throughout the present specification, the term "pharmacologically acceptable salt" is not limited to a particular type of salt, and as examples of such salts there may be mentioned addition salts of inorganic acids such as hydrochloride, sulfate, carbonate, bicarbonate , hydrobromide and iohydrate; addition salts of organic carboxylic acids such as acetate, maleate, lactate, tartrate and trifluoroacetate; addition salts of organic sulfonic acids such as methanesulfonate, hydroxymethanesulfonate, hydroxyethanesulfonate, benzenesulfonate, toluenesulfonate and taurine salts; addition salts of amines such as trimethylamine salts, triethylamine salts, pyridine salts, procaine salts, picoline salts, dicyclohexylamine salts, N, N'dibenzylethylenediamine salts, N-methylglucamine salts, diethanolamine salts, salts of triethanolamine, tris (hydroxymethylamino) methane salts and phenethylbenzylamine salts; and amino acid addition salts such as arginine salts, lysine salts, serine salts, glycine salts, aspartate and glutamate.

La dosis de un medicamento de acuerdo con la invención variará en función de la gravedad de los síntomas, de la edad, el sexo y el peso del paciente, de la forma de administración y el tipo de enfermedad, pero la administración será por lo general en el intervalo desde 100 µg hasta 10 g por día para adultos, de una vez o en dosis separadas. The dose of a medicament according to the invention will vary depending on the severity of the symptoms, the age, sex and weight of the patient, the form of administration and the type of disease, but the administration will generally be in the range from 100 µg to 10 g per day for adults, once or in separate doses.

No existen restricciones particulares sobre la forma de administración de un medicamento de acuerdo con la invención, y usualmente puede administrarse por vía oral o por vía parenteral mediante procedimientos convencionales. There are no particular restrictions on the form of administration of a medicament according to the invention, and it can usually be administered orally or parenterally by conventional procedures.

Para la formulación también pueden utilizarse excipientes comunes, aglutinantes, agentes de brillo, agentes colorantes, correctores de sabor y similares y, si es necesario, estabilizantes, emulsivos, promotores de la absorción, tensioactivos y similares, con la inclusión de los componentes utilizados normalmente como materiales de partida para la formulación de preparaciones farmacéuticas por procedimientos comunes. For the formulation, common excipients, binders, gloss agents, coloring agents, flavor correctors and the like and, if necessary, stabilizers, emulsifiers, absorption promoters, surfactants and the like can also be used, including the components normally used as starting materials for the formulation of pharmaceutical preparations by common procedures.

Ejemplos de tales componentes que pueden ser utilizados incluyen aceites animales y vegetales (aceite de soja, sebo de ternera, glicéridos sintéticos, etc.), hidrocarburos (parafina líquida, escualano, parafina sólida, etc.), aceites de ésteres (miristato de octildodecilo, miristato de isopropilo, etc.), alcoholes superiores (alcohol cetoestearílico, alcohol behenílico, etc.), resinas de silicona, aceites de silicona, tensioactivos (ésteres de ácidos grasos y polioxietileno, ésteres de ácidos grasos y sorbitano, ésteres de ácidos grasos y glicerina, ésteres de ácidos grasos y polioxietilensorbitano, aceite de ricino hidrogenado y polioxietileno, copolímero de bloque de polioxietilenpolioxipropileno, etc.), polímeros solubles en agua (hidroxietil celulosa, ácido poliacrílico, polímero carboxivinílico, polietilenglicol, polivinilpirrolidona, metilcelulosa, etc.), alcoholes (etanol, isopropanol, etc.), alcoholes polihídricos (glicerina, propilenglicol, dipropilenglicol, sorbitol, etc.), azúcares (glucosa, sacarosa etc.), polvos inorgánicos (anhídrido silícico, silicato de magnesio y aluminio, silicato de aluminio, etc.), agua purificada y similares. Para ajustar el pH pueden utilizarse ácidos inorgánicos (ácido clorhídrico, ácido fosfórico, etc.), sales de metales alcalinos de ácidos inorgánicos (fosfato de sodio, etc.), bases inorgánicas (hidróxido de sodio, etc.), ácidos orgánicos (ácidos grasos inferiores, ácido cítrico, ácido láctico, etc.), sales de metales alcalinos de ácidos orgánicos (citrato de sodio, lactato de sodio, etc.) y bases orgánicas (arginina, etanolamina, etc.). Si es necesario, también pueden añadirse conservantes, antioxidantes y similares. Examples of such components that can be used include animal and vegetable oils (soybean oil, beef tallow, synthetic glycerides, etc.), hydrocarbons (liquid paraffin, squalane, solid paraffin, etc.), ester oils (octyldodecyl myristate , isopropyl myristate, etc.), higher alcohols (ketostearyl alcohol, behenyl alcohol, etc.), silicone resins, silicone oils, surfactants (fatty acid and polyoxyethylene esters, fatty acid and sorbitan esters, fatty acid esters and glycerin, esters of fatty acids and polyoxyethylene sorbitan, hydrogenated castor oil and polyoxyethylene, polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymer, etc.), water soluble polymers (hydroxyethyl cellulose, polyacrylic acid, carboxyvinyl polymer, polyethylene glycol, polyvinylcellulose, etc.) , alcohols (ethanol, isopropanol, etc.), polyhydric alcohols (glycerin, propylene glycol, dipropylene glycol ol, sorbitol, etc.), sugars (glucose, sucrose etc.), inorganic powders (silicic anhydride, magnesium aluminum silicate, aluminum silicate, etc.), purified water and the like. In order to adjust the pH, inorganic acids (hydrochloric acid, phosphoric acid, etc.), alkali metal salts of inorganic acids (sodium phosphate, etc.), inorganic bases (sodium hydroxide, etc.), organic acids (acids) can be used. lower fatty acids, citric acid, lactic acid, etc.), alkali metal salts of organic acids (sodium citrate, sodium lactate, etc.) and organic bases (arginine, ethanolamine, etc.). If necessary, preservatives, antioxidants and the like can also be added.

[Examples]

La presente invención se explicará a través de los siguientes ejemplos, pero estos ejemplos no son de ninguna manera limitantes de la invención. The present invention will be explained by the following examples, but these examples are by no means limiting the invention.

[Example 1] Effect on SCF stimulated cell proliferation

Se probó el efecto de los compuestos 1, 2, 3 y 4 sobre la proliferación de la línea celular de cáncer de pulmón microcítico H-526 que expresa c-Kit cinasa (adquirido de ATCC: CRL-5811). The effect of compounds 1, 2, 3 and 4 on the proliferation of the H-526 microcytic lung cancer cell line expressing c-Kit kinase (acquired from ATCC: CRL-5811) was tested.

Compuesto 1: 4-(3-Cloro-4-(ciclopropilaminocarbonil)aminofenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida Compound 1: 4- (3-Chloro-4- (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide

Compuesto 2: 4-(3-Cloro-4-(etilaminocarbonil)aminofenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida Compound 2: 4- (3-Chloro-4- (ethylaminocarbonyl) aminophenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide

Compuesto 3: N6-Metoxi-4-(3-cloro-4-(((ciclopropilamino)carbonil)amino)fenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida Compound 3: N6-Methoxy-4- (3-chloro-4 - (((cyclopropylamino) carbonyl) amino) phenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide

Compuesto 4: N6-Metoxi-4-(3-cloro-4-(((etilamino)carbonil)amino)fenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida Compound 4: N6-Methoxy-4- (3-chloro-4 - (((ethylamino) carbonyl) amino) phenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide

A continuación se presentan las estructuras de los Compuestos 1 a 4. The structures of Compounds 1 to 4 are presented below.

imagen1image 1

imagen2image2

El Compuesto 1 se preparó mediante el procedimiento que se describe en el Ejemplo 368 del documento WO 02/32872. El Compuesto 2 se preparó mediante el procedimiento que se describe en el Ejemplo 583 del documento Compound 1 was prepared by the procedure described in Example 368 of WO 02/32872. Compound 2 was prepared by the procedure described in Example 583 of the document

10 WO 02/32872. El Compuesto 3 se preparó mediante el procedimiento que se describe en el Ejemplo 417 del documento WO 02/32872. El compuesto 4 se preparó mediante el procedimiento que se describe en el Ejemplo 702 del documento WO 02/32872. 10 WO 02/32872. Compound 3 was prepared by the procedure described in Example 417 of WO 02/32872. Compound 4 was prepared by the procedure described in Example 702 of WO 02/32872.

Se cultivaron células H-526 en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) utilizando un medio RPMI1640 (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) que contenía FCS al 10% (adquirido de Cell Culture Technologies). Tras el cultivo, las 15 células H-526 se lavaron tres veces con PBS y se suspendieron en medio RPMI1640 que contenía BSA al 0,1% (Sigma Corporation) (en lo sucesivo abreviado "BSA-RPMI1640" en el presente documento) a 1,0 x 105 células/ml. Se inocularon 50 µl de esta suspensión celular a cada pocillo de una placa de 96 pocillos de base redonda, y la suspensión se cultivó en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) durante la noche. Tras cultivar dura nte la noche, se añadió a cada pocillo 50 µl de BSA-RPMI1640 que contenía SCF 200 ng/ml (R&D Co., Ltd.) y 100 µl de BSAH-526 cells were cultured in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) using RPMI1640 medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) containing 10% FCS (purchased from Cell Culture Technologies). After cultivation, the 15 H-526 cells were washed three times with PBS and suspended in RPMI1640 medium containing 0.1% BSA (Sigma Corporation) (hereinafter abbreviated "BSA-RPMI1640" herein) to 1.0 x 105 cells / ml. 50 µl of this cell suspension was inoculated into each well of a round-well 96-well plate, and the suspension was grown in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) overnight. After cultivating overnight, 50 µl of BSA-RPMI1640 containing 200 ng / ml SCF (R&D Co., Ltd.) and 100 µl of BSA were added to each well

20 RPMI1640 que contenía una sustancia de prueba diluida. RPMI1640 containing a diluted test substance.

Al 7º día tras la adición de la sustancia de prueba, se añadieron 20 µl de Cell Counting Kit-8 (Dojin Laboratories) al pocillo y se cultivó en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) durante aproximadamente 2 horas. Tra s el desarrollo del color, se determinó la absorbancia de cada pocillo usando un lector de placas MTP-32 (Colona Electric Co., Ltd.) a un longitud de onda de medición de 450 nm y a una longitud de onda de referencia de 660 nm. A la absorbancia On the 7th day after the addition of the test substance, 20 µl of Cell Counting Kit-8 (Dojin Laboratories) was added to the well and cultured in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) for approximately 2 hours. After color development, the absorbance of each well was determined using an MTP-32 plate reader (Colona Electric Co., Ltd.) at a measurement wavelength of 450 nm and a reference wavelength of 660 nm. To absorbance

25 de cada pocillo se le restó la absorbancia del pocillo sin adición del SCF, y a continuación se determinó la relación de la absorbancia del pocillo con adición de la sustancia de prueba a la relación de la absorbancia del pocillo sin adición de la sustancia de prueba. Esta relación se utilizó para calcular la concentración de la sustancia de prueba necesaria para inhibir el 50% de la proliferación celular (CI50). The absorbance of the well without the addition of the SCF was subtracted from each well, and then the ratio of the absorbance of the well with the addition of the test substance to the ratio of the absorbance of the well without the addition of the test substance was determined. This ratio was used to calculate the concentration of the test substance necessary to inhibit 50% of cell proliferation (IC50).

Por consiguiente, los Compuestos 1, 2, 3 y 4 inhibieron la proliferación celular estimulada por SCF como se muestra Accordingly, Compounds 1, 2, 3 and 4 inhibited SCF stimulated cell proliferation as shown

30 en la siguiente tabla, y se consideró que esos compuestos poseen actividad inhibidora de c-Kit cinasa. Se demostró que la CI50 del compuesto KRN633, que está descrito en Kazuo Kubo y col., 22º Symposium on Medicinal Chemistry, Resúmenes, páginas 275-277, 2P-320, 2002, era de 301 nM y el compuesto mostró sólo actividad débil en comparación con los Compuestos 1, 2, 3 y 4. STI571, inhibidor conocido de c-Kit cinasa, mostró una CI50 de 190 nM. 30 in the following table, and those compounds were considered to possess c-Kit kinase inhibitory activity. The IC50 of compound KRN633, which is described in Kazuo Kubo et al., 22nd Symposium on Medicinal Chemistry, Abstracts, pages 275-277, 2P-320, 2002, was shown to be 301 nM and the compound showed only weak activity in Comparison with Compounds 1, 2, 3 and 4. STI571, known inhibitor of c-Kit kinase, showed an IC50 of 190 nM.

[Tabla 1] [Table 1]

Compuesto Compound

CI50 (nM) IC50 (nM)

Compuesto 1 9,36 Compound 1 9.36

Compuesto 2 12,8 Compound 2 12.8

Compuesto 3 214 Compound 3 214

Compuesto 4 56,3 Compound 4 56.3

35 35

[Example 2] Effect of Compound 1 on phosphorylation of c-Kit kinase by SCF stimulation

Se probó el efecto del Compuesto 1 sobre la fosforilación de la molécula de c-Kit cinasa por estimulación con SCF en la línea celular de cáncer de pulmón microcítico H-526 que expresa c-Kit cinasa. The effect of Compound 1 on the phosphorylation of the c-Kit kinase molecule was tested by SCF stimulation in the H-526 microcytic lung cancer cell line expressing c-Kit kinase.

40 Se cultivaron las células H-526 en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) usando un medio RPMI1640 que contení a FCS al 10%. Tras el cultivo, las células H-526 se lavaron tres veces con PBS y se suspendieron en un medio BSARPMI1640 a 5,0 x 105 células/ml. Se inoculó 1 ml de esta suspensión celular a cada pocillo de una placa de 24 pocillos y la suspensión se cultivó en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) durante 6 horas. Tras 6 horas de cultivo, se añadió a cada pocillo 1 ml de BSA-RPMI1640 que contenía una sustancia de prueba diluida y se llevó a H-526 cells were cultured in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) using RPMI1640 medium containing 10% FCS. After cultivation, the H-526 cells were washed three times with PBS and suspended in a BSARPMI1640 medium at 5.0 x 105 cells / ml. 1 ml of this cell suspension was inoculated into each well of a 24-well plate and the suspension was cultured in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) for 6 hours. After 6 hours of culture, 1 ml of BSA-RPMI1640 containing a diluted test substance was added to each well and brought to

45 cabo el cultivo en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) durante 1 hora. A continuación se rea lizó otro cultivo en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) durante 5 minutos tras la adición de 10 µl de SCF (10 µg/ml, R&D Corporation). Tras cultivar durante 5 minutos, se lavaron las células con PBS y se añadieron 100 µl de tampón de carga de muestra SDS a las células para preparar una muestra de lisado celular. Después de tratar la muestra con 45 culture in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) for 1 hour. Another culture was then reacted in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) for 5 minutes after the addition of 10 µl of SCF (10 µg / ml, R&D Corporation). After culturing for 5 minutes, the cells were washed with PBS and 100 µl of SDS sample loading buffer was added to the cells to prepare a cell lysate sample. After treating the sample with

calor a 94 ºC durante 10 minutos, se crioconservó a -20 ºC. Heat at 94 ° C for 10 minutes, it was cryopreserved at -20 ° C.

A continuación se sometió la muestra de lisado celular, 20 µl, a electroforesis en un gradiente de gel de poliacrilamida del 4 al 20% (Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd.). Tras la electroforesis, la muestra se transfirió a una membrana de PVDF (Amersham Pharmacia Biotech Inc.) durante 3 horas. La membrana transferida se sometió a inmunotransferencia utilizando un anticuerpo fosfo-c-Kit (Tyr719) (Cell Signaling Technology Inc.) como anticuerpo principal y un anticuerpo IgG anti-conejo, unido a HRP (Cell Signaling Technology Inc.) como anticuerpo secundario. Tras lavar la membrana, se desarrolló con un Super Signal (Pierce Biotechnology, Inc.). The cell lysate sample, 20 µl, was then subjected to electrophoresis in a gradient of 4 to 20% polyacrylamide gel (Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd.). After electrophoresis, the sample was transferred to a PVDF membrane (Amersham Pharmacia Biotech Inc.) for 3 hours. The transferred membrane was immunoblotted using a phospho-c-Kit (Tyr719) antibody (Cell Signaling Technology Inc.) as the main antibody and an anti-rabbit IgG antibody, bound to HRP (Cell Signaling Technology Inc.) as a secondary antibody. After washing the membrane, it was developed with a Super Signal (Pierce Biotechnology, Inc.).

Según se muestran los resultados en la Fig. 1, la c-Kit cinasa no se fosforiló (el carril del extremo izquierdo) en ausencia de SCF, y la adición del Compuesto 1 suprimió la fosforilación de la c-Kit cinasa que tendría lugar en presencia de SCF de una manera dependiente a la concentración. La actividad inhibidora de la fosforilación del compuesto STI571, que es un inhibidor conocido de la c-Kit cinasa, fue de aproximadamente una décima parte de la del Compuesto 1. As the results are shown in Fig. 1, the c-Kit kinase was not phosphorylated (the leftmost lane) in the absence of SCF, and the addition of Compound 1 suppressed the phosphorylation of the c-Kit kinase that would take place in presence of SCF in a concentration dependent manner. The phosphorylation inhibitory activity of compound STI571, which is a known inhibitor of c-Kit kinase, was approximately one tenth that of Compound 1.

[Example 3] Effect of Compound 1 on the growth of transplanted H-526 tumor to nude mice

Se cultivaron células H-526 en una incubadora con CO2 al 5% (37 °C) usando un medio RPMI1640 que contenía FCS al 10%. Tras recoger el medio de cultivo, las células H-526 se lavaron dos veces con PBS y se suspendieron en PBS a 5,0 x 107 células/ml. Se transplantó esta suspensión celular (0,1 ml) a la parte subcutánea del flanco derecho de ratones hembra Balb/c nu/nu de 6 semanas (adquiridos de Charles River Laboratories, Inc.). Tras el transplante, se inició la administración de una sustancia de prueba en el momento en que el volumen del tumor alcanzó aproximadamente 150 mm3, y por consiguiente, la administración oral se realizó dos veces al día durante un período de 14 días. La sustancia de prueba se suspendió en una disolución de metilcelulosa al 0,5% (Wako Pure Chemical Industries Co., Ltd.) para administrar una dosis de 0,1 ml/10 g de peso corporal. H-526 cells were cultured in an incubator with 5% CO2 (37 ° C) using RPMI1640 medium containing 10% FCS. After collecting the culture medium, the H-526 cells were washed twice with PBS and suspended in PBS at 5.0 x 107 cells / ml. This cell suspension (0.1 ml) was transplanted to the subcutaneous part of the right flank of 6-week-old female Balb / c nu / nu mice (purchased from Charles River Laboratories, Inc.). After transplantation, the administration of a test substance was initiated at the time when the tumor volume reached approximately 150 mm 3, and therefore, oral administration was performed twice daily for a period of 14 days. The test substance was suspended in a 0.5% methylcellulose solution (Wako Pure Chemical Industries Co., Ltd.) to administer a dose of 0.1 ml / 10 g body weight.

El volumen tumoral se midió con un calibre dos veces por semana durante el período de administración. Se midieron los diámetros corto y largo del tumor con un calibre y el volumen tumoral se calculó según la ecuación: 1/2 x diámetro largo x diámetro corto x diámetro corto. Aquí, el experimento se llevó a cabo en un grupo de 10 animales de control con vehículo (grupo al que se administró disolvente), así como en un grupo de 5 animales a los que se les administró una sustancia de prueba. Tumor volume was measured with a caliber twice a week during the period of administration. The short and long diameters of the tumor were measured with a caliber and the tumor volume was calculated according to the equation: 1/2 x long diameter x short diameter x short diameter. Here, the experiment was carried out in a group of 10 control animals with vehicle (group to which solvent was administered), as well as in a group of 5 animals to which a test substance was administered.

Según se muestran los resultados en la Figura 2, el Compuesto 1 suprimió el crecimiento del tumor de H-526 trasplantado al ratón atímico de una manera dependiente de la dosis. Por otra parte, STI571, un inhibidor de c-Kit cinasa conocido, mostró poco efecto antitumoral incluso cuando se administró en dosis de 160 mg/kg. As the results are shown in Figure 2, Compound 1 suppressed the growth of the H-526 tumor transplanted to the athymic mouse in a dose-dependent manner. On the other hand, STI571, a known c-Kit kinase inhibitor, showed little antitumor effect even when administered in doses of 160 mg / kg.

[Example 4] Effect of Compound 1 on phosphorylation of c-Kit kinase in H-526 tumor transplanted to nude mice.

Se transplantó 0,1 ml de una suspensión de células H-526 preparada a una concentración de 5,0 x 107 células/ml, a la parte subcutánea del lado derecho de ratones Balb/c nu/nu hembras de 6 semanas (adquiridos de Charles River Laboratories, Inc.). A continuación se separaron los animales en un grupo de control con vehículo (grupo al que se administró disolvente) y un grupo al que se administró una sustancia de prueba en el momento en que el volumen del tumor alcanzó 300-1000 mm3: la sustancia de prueba se administró al último grupo. El tumor extirpado se colocó en un tampón de lisado celular (HEPES 50 mM (pH 7,4), NaCl 150 mM, glicerol al 10%, Tritón X-100 al 1%, MgCl2 1,5 mm, EDTA 1 mM, NaF 100 mM, PMSF1 mM, aprotinina 10 µg/ml, leupeptina 50 µg/ml, peptatina A 1 µg/ml, Na3VO4 1 mM, β-glicerofosfato 25 mM y cóctel II inhibidor de fosfatasas) y se homogeneizó. Tras la centrifugación, se cuantificó la proteína del sobrenadante y se añadió tampón de carga de muestra 3 x SDS para preparar una muestra de lisado celular. Posteriormente, el lisado celular se calentó a 94 ºC durante 10 minutos y se crioconservó a -20 ºC. 0.1 ml of a suspension of H-526 cells prepared at a concentration of 5.0 x 107 cells / ml was transplanted to the subcutaneous part of the right side of 6-week-old female Balb / c nu / nu mice (acquired from Charles River Laboratories, Inc.). The animals were then separated in a vehicle control group (group to which solvent was administered) and a group to which a test substance was administered at the time the tumor volume reached 300-1000 mm 3: the substance of test was administered to the last group. The excised tumor was placed in a cell lysate buffer (50 mM HEPES (pH 7.4), 150 mM NaCl, 10% glycerol, 1% Triton X-100, 1.5 mm MgCl2, 1 mM EDTA, NaF 100 mM, PMSF1 mM, 10 µg / ml aprotinin, 50 µg / ml leupeptin, 1 µg / ml peptatin, 1 mM Na3VO4, 25 mM β-glycerophosphate and phosphate inhibitor cocktail II) and homogenized. After centrifugation, the supernatant protein was quantified and 3 x SDS sample loading buffer was added to prepare a cell lysate sample. Subsequently, the cell lysate was heated at 94 ° C for 10 minutes and cryopreserved at -20 ° C.

La muestra de lisado celular que era equivalente a 30 µg de proteína se sometió a electroforesis en un gradiente de gel de poliacrilamida del 4 al 20% (Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd.). Tras la electroforesis, la muestra se transfirió a una membrana de PVDF (Amersham Pharmacia Biotech Inc.) durante 3 horas. Con el fin de analizar c-Kit fosforilada, c-Kit y β-actina, se llevaron a cabo inmunotransferencias utilizando un anticuerpo fosfo-c-Kit (Tyr719) (Cell Signaling Technology Inc.), un anticuerpo anti c-Kit (Cell Signaling Technology Inc.) y un anticuerpo anti βactina (Sigma) como anticuerpo principal y un anticuerpo IgG anti conejo, unido a HRP, (Cell Signaling Technology Inc.) como anticuerpo secundario. Tras lavar la membrana, se desarrolló con un Super Signal (Pierce Biotechnology, Inc.). The cell lysate sample that was equivalent to 30 µg of protein was electrophoresed on a gradient of 4-20% polyacrylamide gel (Daiichi Pure Chemicals Co., Ltd.). After electrophoresis, the sample was transferred to a PVDF membrane (Amersham Pharmacia Biotech Inc.) for 3 hours. In order to analyze phosphorylated c-Kit, c-Kit and β-actin, immunoblotting was carried out using a phospho-c-Kit antibody (Tyr719) (Cell Signaling Technology Inc.), an anti-c-Kit antibody (Cell Signaling Technology Inc.) and an anti-βactin antibody (Sigma) as the main antibody and an anti-rabbit IgG antibody, bound to HRP, (Cell Signaling Technology Inc.) as a secondary antibody. After washing the membrane, it was developed with a Super Signal (Pierce Biotechnology, Inc.).

Según se muestran los resultados en la Fig. 3, el Compuesto 1 redujo la c-Kit fosforilada en el tejido tumoral cuando se administró a 30 o 100 mg/kg, pero c-Kit y β-actina permanecieron sin cambios. Mientras que el Compuesto 1 inhibió la fosforilación por completo cuando se administró a 30 o 100 mg/kg, STI571, inhibidor de c-Kit cinasa conocido, inhibió parcialmente la fosforilación incluso cuando se administró en dosis de 160 mg/kg. As the results are shown in Fig. 3, Compound 1 reduced the phosphorylated c-Kit in the tumor tissue when administered at 30 or 100 mg / kg, but c-Kit and β-actin remained unchanged. While Compound 1 inhibited phosphorylation completely when administered at 30 or 100 mg / kg, STI571, a known c-Kit kinase inhibitor, partially inhibited phosphorylation even when administered at a dose of 160 mg / kg.

Todos estos resultados mostraron que el Compuesto 1 inhibe la fosforilación de c-Kit in vivo, y se confirma que el Compuesto 1 inhibe la actividad de c-Kit cinasa in vivo y presenta actividad antitumoral. All these results showed that Compound 1 inhibits the phosphorylation of c-Kit in vivo, and it is confirmed that Compound 1 inhibits the activity of c-Kit kinase in vivo and exhibits antitumor activity.

Industrial applicability

Se descubrió que un compuesto representado por la fórmula general (I) muestra una potente actividad inhibidora de c-Kit cinasa, e inhibe la proliferación de células cancerosas activadas por c-Kit cinasa in vitro e in vivo. Por lo tanto, se muestra que el compuesto representado por la fórmula general (I) tiene aplicación como agente contra el cáncer para cánceres con transformación neoplásica por activación de la c-Kit cinasa. Además, se sugiere que un inhibidor de la c-Kit cinasa que comprende como un ingrediente activo el compuesto representado por la fórmula general (I) es eficaz para enfermedades tales como la mastocitosis, la alergia y el asma, que se considera que están causadas por la c-Kit cinasa. It was found that a compound represented by the general formula (I) shows a potent c-Kit kinase inhibitory activity, and inhibits the proliferation of c-Kit kinase activated cancer cells in vitro and in vivo. Therefore, it is shown that the compound represented by the general formula (I) has application as an anticancer agent for cancers with neoplastic transformation by activation of c-Kit kinase. In addition, it is suggested that a c-Kit kinase inhibitor comprising as an active ingredient the compound represented by the general formula (I) is effective for diseases such as mastocytosis, allergy and asthma, which are considered to be caused by the c-Kit kinase.

Claims

1. A compound for use in a cancer treatment procedure that expresses excessive c-Kit kinase or a mutant c-Kit kinase selected from acute myelogenous leukemia, mast cell leukemia, microcytic lung cancer, stromal tumors Gastrointestinal (GIST), a testicular cancer and neuroblastoma, or for use is a method of treatment of mastocytosis, allergy or asthma, wherein said compound is a compound represented by the general formula (I), one of its salts or a hydrate of the above:

image 1

(where R1 represents methyl, 2-methoxyethyl or a group represented by formulas (II):

image 1

(where Ra3 represents methyl, cyclopropylmethyl or cyanomethyl; Ra1 represents hydrogen, fluorine or hydroxyl; and Ra2

represents 1-pyrrolidinyl, 1-piperidinyl, 4-morpholinyl, dimethylamino or diethylamino); R2 represents cyano or -CONHRa4 (where Ra4 represents hydrogen, C1-6 alkyl, C3-8 cycloalkyl, C1-6 alkoxy or C3-8 cycloalkoxy);

R3 represents hydrogen, methyl, trifluoromethyl, chlorine or fluorine; Y R4 represents hydrogen, methyl, ethyl, n-propyl, cyclopropyl, 2-thiazolyl or 4-fluorophenyl).

2. 2.: El compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que R1 representa metilo, R4 representa metilo, etilo o ciclopropilo, R3 representa hidrógeno, cloro o flúor y R2 representa –CONHRa4 (en el que Ra4 representa hidrógeno o metoxi). The compound for use according to claim 1, wherein R1 represents methyl, R4 represents methyl, ethyl or cyclopropyl, R3 represents hydrogen, chlorine or fluorine and R2 represents -CONHRa4 (wherein Ra4 represents hydrogen or methoxy).

3. 3.: El compuesto para su uso según la reivindicación 1, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en: The compound for use according to claim 1, wherein the compound is selected from the group consisting of:

(1) (one): 4-(3-cloro-4-(ciclopropilaminocarbonil)aminofenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida, 4- (3-Chloro-4- (cyclopropylaminocarbonyl) aminophenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide,

(2) (2): 4-(3-cloro-4-(etilaminocarbonil)aminofenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida, 4- (3-Chloro-4- (ethylaminocarbonyl) aminophenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide,

(3) (3): N6-metoxi-4-(3-cloro-4-(((ciclopropilamino)carbonil)amino)fenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida y N6-methoxy-4- (3-chloro-4 - (((cyclopropylamino) carbonyl) amino) phenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide and

(4) (4): N6-metoxi-4-(3-cloro-4-(((etilamino)carbonil)amino)fenoxi)-7-metoxi-6-quinolincarboxamida. N6-methoxy-4- (3-chloro-4 - (((ethylamino) carbonyl) amino) phenoxy) -7-methoxy-6-quinolinecarboxamide.

4. Use of a compound represented by the general formula (I), one of its salts a hydrate of the above:

image 1

(where Ra3 represents methyl, cyclopropylmethyl or cyanomethyl; Ra1 represents hydrogen, fluorine or hydroxyl; and Ra1 represents 1-pyrrolidinyl, 1-piperidinyl, 4-morpholinyl, dimethylamino or diethylamino);

R2 represents cyano or -CONHRa4 (wherein Ra4 represents hydrogen, C1-6 alkyl, C3-8 cycloalkyl, C1-6 alkoxy or C3-8 cycloalkoxy);

R3 represents hydrogen, methyl, trifluoromethyl, chlorine or fluorine; Y

R4 represents hydrogen, methyl, ethyl, n-propyl, cyclopropyl, 2-thiazolyl or 4-fluorophenyl), for the manufacture of a medicament for the treatment of a cancer that expresses excessive c-Kit kinase or a c-Kit kinase mutant selected from acute myelogenous leukemia, mast cell leukemia, microcytic lung cancer, gastrointestinal stromal tumors (GIST), testicular cancer and neuroblastoma, or for use in a procedure for the treatment of mastocytosis, allergy or asthma.

5. 5.: El uso según la reivindicación 4, en el que R1 representa metilo, R4 representa metilo, etilo o ciclopropilo, R3 representa hidrógeno, cloro o flúor y R2 representa -CONHRa4 (en el que Ra4 representa hidrógeno o metoxi). The use according to claim 4, wherein R1 represents methyl, R4 represents methyl, ethyl or cyclopropyl, R3 represents hydrogen, chlorine or fluorine and R2 represents -CONHRa4 (wherein Ra4 represents hydrogen or methoxy).

6. 6.: El uso según la reivindicación 4, en el que el compuesto se selecciona del grupo que consiste en: The use according to claim 4, wherein the compound is selected from the group consisting of:

7. A pharmaceutical composition for use in the treatment of a cancer that expresses excessive c-Kit kinase or a c-Kit kinase mutant selected from acute myelogenous leukemia, mast cell leukemia, microcytic lung cancer, stromal tumors Gastrointestinal (GIST), a testicular cancer and neuroblastoma, or for use in a method of treatment of mastocytosis, allergy or asthma, comprising a compound according to any one of claims 1 to 3 as an active ingredient.