ES2348140T3

ES2348140T3 - Combinación de un análogo de mostaza nitrogenada y de imatinib para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica.

Info

Publication number: ES2348140T3
Application number: ES03772561T
Authority: ES
Inventors: Lawrence Carl Panasci; Raquel Silvia Aloyz
Original assignee: Jewish General Hospital
Current assignee: Jewish General Hospital
Priority date: 2002-11-12
Filing date: 2003-11-10
Publication date: 2010-11-30
Anticipated expiration: 2023-11-10
Also published as: CN100475212C; JP4854198B2; DE60332762D1; US20060122186A1; US8492383B2; CN1711090A; WO2004043466A1; BR0316126A; JP2006508118A; CA2504665C; US20090312290A1; CA2504665A1; ATE468855T1; AU2003280191A1; EP1578426A1; EP1578426B1

Abstract

Una combinación para el uso simultáneo, por separado o secuencial, que comprende (a) un análogo de mostaza nitrogenada seleccionado de clornafazina, estramustina, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida y mostaza de uracilo y (b) 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2ilamino)fenil]-benzamida que tiene la siguiente fórmula **(Ver fórmula)** en la cual los ingredientes activos (a) y (b) están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

Description

5 La invención se relaciona con una combinación que comprende (a) un análogo de mostaza nitrogenada seleccionado de clornafazina, estramustina, mecloretamina, óxido de clorhidrato de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida o mostaza de uracilo y (b) 4(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]-benzamida (en lo sucesivo: "Compuesto I"); una composición farmacéutica que comprende dicha combinación y

10 opcionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable para uso simultáneo, por separado

o secuencial, en particular para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica (CLL); el uso de dicha combinación para la preparación de un medicamento para el tratamiento de CLL; un producto o empaque comercial que comprende dicha combinación; y con un método de tratamiento de un animal de sangre caliente, especialmente un humano.

15 Adicionalmente, esta invención se relaciona con el uso de una combinación para uso simultáneo, por separado o secuencial que comprende, (a) un análogo de mostaza nitrogenada seleccionado de clorambucil, clornafazina, estramustina, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida y mostaza de uracilo y (b) 4(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]-benzamida que

20 tiene la siguiente fórmula

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en la cual los ingredientes activos (a) y (b), están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, y en donde (a) y (b) están presentes en una cantidad efectiva terapéuticamente en forma conjunta, para la preparación de un medicamento para el

25 tratamiento de la leucemia linfocítica crónica, particularmente para el tratamiento de la leucemia, que es una leucemia linfocítica crónica resistente al clorambucil. La leucemia linfocítica crónica (CLL), es la forma más frecuente de leucemia en adultos que representa el 25% de todas las leucemias (aproximadamente 10.000 nuevos casos de CLL anualmente en los Estados Unidos (EE. UU.)). En los EE. UU., 95% de los casos de CLL son la leucemia fenotipo

30 de las células B. Aproximadamente el 50% de los pacientes con CLL, son asintomáticos en el diagnóstico. La etapa de la enfermedad se correlaciona con el pronóstico; etapa O que tiene una supervivencia media de >10 años mientras la etapa I-II tiene una supervivencia media de 7 años. El tratamiento usualmente se inicia cuando los pacientes son sintomáticos.

Existen dos grupos principales de los fármacos utilizados en el tratamiento de CLL: (1) los 35 agentes alquilantes como clorambucil (CLB) o ciclofosfamida y (2) análogos de la purina como la fludarabina. Estos agentes producen respuestas en el 60-75% de los pacientes.

2 Recientes pruebas aleatorizadas probaron una proporción de respuesta más alta para la fludarabina en comparación con CLB pero ninguna diferencia en la supervivencia. Cualquier agente es aceptable como terapia de primera línea en CLL. Otros agentes son disponibles para la terapia. Eventualmente, todos los pacientes se vuelven resistentes a los fármacos. No existe una terapia capaz 5 de curar esta enfermedad (Kalil, N. and Cheson, B.D. The Oncologist 4:352-369, 1999). Virchis et al (Blood, Vol. 96, no 11 part 1, page 82a, November 2000) revela la combinación del clorambucil y el compuesto (b) (STI571) que se aplica a la células CLL obtenidas a partir de 9 pacientes con CLL. Se afirma que “En 8/9 muestras, la adición de ST1571 10 micro molar, un inhibidor selectivo de la proteína c-Abl tirosina quinasa, inhibe la apoptosis inducida por el 10 clorambucil en una media del 23 % (rango 4-50%)”. El clorambucil se administra a pacientes con CLL con el objetivo de inducir la apoptosis en la célula de CLL. Como en casi todas las muestras analizadas el efecto deseado del clorambucil fue inhibido por STI571, Virchis F. et al constituye una clara enseñanza para que alguien de habilidad en el oficio evite la administración combinada de STI571 y el clorambucil en pacientes con CLL. 15 WO 03094904 revela la combinación del clorambucil y el compuesto (b), las composiciones farmacéuticas que comprenden dicha combinación y el uso de la combinación para el tratamiento de la insuficiencia del injerto que resulta de la hiperplasia neointimal. No hay enseñanza del uso de la combinación para el tratamiento de CLL. Ugo et al (Bulletin Du Cancer, Vol 89, no.1, pages 75-88, 2002), revela que la combinación 20 de STI571 con quimioterapia parece ser el futuro para el tratamiento de CML. De Witte et al, revelan el uso del clorambucil para el tratamiento de CLL. Esta además revela el uso de STI571 en combinación con quimioterapia para el tratamiento de ALL. Soubeyran (Oncologie, (2002) 4:373375), revela el uso del clorambucil para el tratamiento de CLL. Esta además presenta STI571 como el fármaco del futuro para el tratamiento del lifoproliferaciones crónicas. Sin embargo ninguna de las 25 publicaciones mencionadas revela la combinación reivindicada, ni proporcionan la motivación o expectativa razonable de éxito para utilizar la combinación reivindicada en el tratamiento de la CLL. El patrón de combinación (b) Compuesto I es la 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]-benzamida que tiene la siguiente fórmula

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30 Este se puede preparar y administrar como se describe en WO 99/03854. La sal de adición de ácido monometanosulfónico del Compuesto I (en lo sucesivo "Sal I") y una forma de cristal preferida de esta, se describen en WO 99/03854 publicada el 28 de enero, 1999. La estructura de los agentes activos citados se puede tomar de la edición actual del compendio estándar "The Merck Index" o a partir de bases de datos, por ejemplo Patentes

35 Internacionales, por ejemplo IMS World Publications. El contenido correspondiente del mismo se incorpora aquí por referencia. Cualquier experto en el oficio está completamente habilitado, basándose en estas referencias, para la fabricación y prueba de las indicaciones y propiedades farmacéuticas en modelos estándar de prueba, tanto in vitro como in vivo. Se entenderá que las referencias a los patrones de combinación (a) y (b) se entenderá que también incluyen sus respectivas sales farmacéuticamente aceptables. Si el patrón de combinación tiene al menos un grupo básico, puede formar sales de adición de ácido. El patrón de combinación que tiene un grupo ácido, por ejemplo COOH, también puede formar sales con bases. El patrón de combinación (a) o (b) o una sal farmacéuticamente aceptable de esta, también se puede utilizar en la forma de un hidrato o incluir otros solventes utilizados para la cristalización. La 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino) fenil]-benzamida, i.e. patrón de combinación (b), preferiblemente se utiliza en la presente invención en la forma de su sal monometanosulfonato, por ejemplo la forma beta cristal de la sal monometanosulfonato.

El compuesto I, se utiliza como un tratamiento de primera línea de la leucemia mielógena crónica (CML) y la leucemia linfoblástica aguda (ALL) de cromosoma Filadelfia positivo. Virtualmente, todos los casos de CML expresan una quinasa c-able, activa constitutivamente como una consecuencia de la translocación t(9, 22) (q34, 11). En contraste, en pacientes con CLL, las translocaciones BCR/ABL no han sido reportadas. Inesperadamente, se ha encontrado que el efecto anti-proliferativo en células a partir de pacientes con leucemia linfocítica crónica de una combinación que comprende un análogo de mostaza nitrogenada, especialmente, clorambucil y el Compuesto I es mayor del efecto máximo que se pueda lograr con cualquier tipo de ingrediente solo.

La presente invención reporta, que una combinación que comprende un análogo de mostaza nitrogenada seleccionado de clorambucil, clornafazina, estramustina, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida o mostaza de uracilo, particularmente clorambucil (CLB) y el Compuesto I, pueden producir un efecto terapéutico que es mayor de aquel obtenido mediante la administración de una cantidad efectiva terapéuticamente de, ya sea un único análogo de mostaza nitrogenada, en particular clorambucil o el Compuesto I único.

La presente invención se refiere a una combinación para uso simultáneo, por separado o secuencial, como una preparación combinada o una combinación fija farmacéutica, que comprende (a) un análogo de mostaza nitrogenada y (b) el Compuesto I en la cual los ingredientes activos (a) y (b) están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, y opcionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable.

El término "una preparación combinada", como se utiliza en este documento se define especialmente un "kit de partes" en el sentido que los patrones de combinación (a) y (b) como se definen anteriormente, se pueden dosificar de forma independiente de cada otro o por el uso de diferentes combinaciones fijas con cantidades distinguidas de los patrones de combinación (a) y (b),

i.e. de manera simultánea o en diferentes momentos. Las partes del kit de partes luego, por ejemplo pueden ser administradas de manera simultánea o cronológicamente escalonadas, es decir en diferentes momentos y con igual o diferentes intervalos de tiempo de cualquier parte del kit de partes. Muy preferiblemente, los intervalos de tiempo se eligen de manera que el efecto en la enfermedad tratada en el uso combinado de las partes es mayor que el efecto que se debería obtener por el uso de solo cualquiera de los patrones de combinación (a) y (b). La relación de las cantidades totales del patrón de combinación (a) con el patrón de combinación (b), para ser administrada en la preparación combinada se puede variar, por ejemplo con el fin de hacer frente a las necesidades de una sub-población de pacientes que se tratan o las necesidades de un único paciente con diferentes necesidades, se puede deber a la edad, sexo, peso corporal, etc. de los pacientes. Preferiblemente, existe al menos un efecto benéfico, por ejemplo una mejora mutua del efecto de los patrones de combinación (a) y (b), en particular una sinergia, por ejemplo, un efecto más aditivo, efectos ventajosos adicionales, menos efectos secundarios, un efecto terapéutico combinado en una dosificación no-efectiva de uno o ambos de los patrones de combinación (a) y (b), y muy preferiblemente una fuerte sinergia de los patrones de combinación (a) y (b).

El término "tratamiento" comprende la administración de los patrones de combinación a un animal de sangre caliente con necesidad de dicho tratamiento con el objetivo de curar la enfermedad o tener un efecto en la regresión de la enfermedad o en el retraso de la progresión de una enfermedad.

El término "retraso de la progresión" como se utiliza en este documento significa que la progresión de la enfermedad es al menos ralentizada o impedida mediante el tratamiento y que los pacientes presentan tasas de supervivencia más altas que los pacientes que no se trataron o que se trataron con la monoterapia.

Por "análogo de mostaza nitrogenada" se entiende el clorambucil, clornafazina, estramustina, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida, mostaza de uracilo.

El término "leucemia linfocítica crónica resistente al clorambucil" como se utiliza en este documento se define especialmente una leucemia linfocítica crónica en la cual el clorambucil ya no es eficiente o muestra una reducción de su efectividad terapéutica.

El clorambucil se puede preparar de acuerdo con el proceso descrito en la patente EE. UU. 3,046,301.

Una combinación que comprende (a) un análogo de mostaza nitrogenada, preferiblemente clorambucil y (b) el Compuesto I, en la cual los ingredientes activos están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable y opcionalmente al menos un portador farmacéuticamente aceptable, se denominará en lo sucesivo como una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN.

Las COMBINACIONES DE LA INVENCIÓN, inhiben la leucemia linfocítica crónica. Adicionalmente, las COMBINACIONES DE LA INVENCIÓN muestran efectos benéficos en el tratamiento de leucemia linfocítica crónica. En una modalidad preferida de la invención, la enfermedad proliferativa que se trata con una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN es la leucemia linfocítica crónica y preferiblemente la leucemia linfocítica crónica resistente al clorambucil. Tanto más sorprendente es el hallazgo experimental que in vivo en humanos, la administración de una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN en comparación con una monoterapia aplicando solo uno de los ingredientes activos farmacéuticamente utilizados en la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN resulta no solo en un efecto más benéfico, especialmente sinérgico, por ejemplo efecto antiproliferativo, por ejemplo en relación con el retraso de progresión de la enfermedad de la leucemia, sino también en otros sorprendentes efectos benéficos, por ejemplo menos efectos secundarios y un descenso de la mortalidad y la morbilidad. Las COMBINACIONES DE LA INVENCIÓN son apropiadas en particular en el tratamiento de leucemia linfocítica crónica refractaria a los quimioterapéuticos conocidos con agentes anti-cáncer, como leucemia linfocítica crónica refractaria al tratamiento con el análogo de mostaza nitrogenada, especialmente refractaria al tratamiento con clorambucil.

Un beneficio adicional es que, se pueden utilizar dosis más bajas de los ingredientes activos de la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, por ejemplo, que las dosificaciones necesarias no solo ser frecuentemente más pequeñas, sino también se aplican menos frecuentemente, o se pueden utilizar con el fin de disminuir la incidencia de efectos secundarios, por ejemplo diarrea o nauseas, observadas con uno de los patrones de combinación solo. Esto está de acuerdo con los deseos y necesidades de los pacientes que se tratan.

5 Se puede demostrar mediante modelos de prueba establecidos que una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN resulta en los efectos benéficos descritos en este documento anteriormente. El experto en el oficio pertinente está plenamente habilitado para seleccionar un modelo de prueba pertinente para probar dichos efectos benéficos. La actividad farmacológica de una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, por ejemplo, se puede probar en un estudio clínico o en un procedimiento de prueba como esencialmente se describe a partir de ahora. Los estudios clínicos apropiados son, en particular, estudios aleatorizados, doble ciego, paralelos en pacientes con cáncer con fase avanzada de la enfermedad. Tales estudios son, en particular, apropiados para comparar los efectos de una mono-terapia utilizando los ingredientes activos y una terapia que utiliza una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, y para probar en particular la sinergia de los ingredientes activos de las COMBINACIONES DE LA INVENCIÓN. Los criterios de valoración primarios en tales estudios pueden ser el efecto en las puntuaciones de dolor, uso analgésico, estado funcional, puntuaciones de Calidad de Vida o tiempo de progresión de la enfermedad. La evaluación de los tumores en intervalos de tiempo regulares, por ejemplo cada 4, 6 o 8 semanas, es un enfoque apropiado para determinar el efecto de la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN. En un apropiado diseño de estudio, los pacientes, por ejemplo, se reciben por ciclo de tratamiento de 2 semanas, El Compuesto I diariamente a una dosis que va desde 50 a 1000 mg de la sustancia activo y clorambucil a una dosis que oscila de 0.2 a 1 mg/kg/día. La duración mínima de dicho estudio debería ser aproximadamente, por ejemplo, 4 semanas. Es un objetivo de esta invención, proporcionar una composición farmacéutica que comprende una cantidad, que es en forma conjunta efectiva terapéuticamente contra la leucemia linfocítica crónica que comprende la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN. En esta composición, los patrones de combinación (a) y (b) se pueden administrar juntos, uno tras otro o por separado en una forma de dosificación de unidad combinada o en dos formas de dosificación de unidad por separado. La forma de dosificación por unidad también puede ser una combinación fija. Las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la invención se pueden preparar de una manera conocida per se y son aquellas apropiados para una administración enteral, como vía oral o rectal, y parenteral a los mamíferos (animales de sangre caliente), incluyendo el hombre, que comprende una cantidad efectiva terapéuticamente de al menos un patrón de combinación farmacológicamente activo solo o en combinación con uno o más portadores farmacéuticamente aceptables, especialmente apropiados para la aplicación enteral o parenteral. En una modalidad de la invención, uno o más de los ingredientes activos se administran por vía oral. La composición farmacéutica novedosa contiene, por ejemplo, de aproximadamente 10 % a aproximadamente 100 %, preferiblemente de aproximadamente 20 % a aproximadamente 60 %, de los ingredientes activos. Las preparaciones farmacéuticas para la terapia de combinación para la administración enteral o parenteral son, por ejemplo, aquellas en formas de dosificación por unidad, dichas tabletas cubiertas de azúcar, tabletas, cápsulas o supositorios, y adicionalmente ampollas. Si no se indica de otra manera, estas se preparan de una manera conocida per se, por ejemplo por medio de procesos convencionales de mezclado, granulación, recubrimiento de azúcar, disolución o liofilización. Será apreciado que el contenido por unidad de un patrón de combinación contenido en una dosis individual de cada forma de dosificación, no necesita por si mismo constituir una cantidad efectiva ya que la cantidad efectiva necesaria se puede alcanzar mediante la administración de una pluralidad de unidades de dosificación. En particular, una cantidad efectiva terapéuticamente de cada uno de los patrones de combinación de la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, se puede administrar de manera

simultánea o secuencialmente y en cualquier orden, y los componentes se pueden administrar por separado o como una combinación fija. Por ejemplo, el método de retraso de la progresión o el tratamiento de una enfermedad proliferativa de acuerdo con la invención puede comprender (i) administración del primer patrón de combinación en forma libre o de una sal farmacéuticamente aceptable y (ii) administración del segundo patrón de combinación en forma libre o de una sal farmacéuticamente aceptable, de manera simultánea o secuencialmente en cualquier orden, en cantidades de forma conjunta efectiva terapéuticamente, preferiblemente en cantidades sinérgicamente efectivas, por ejemplo en dosis diarias que corresponden a las cantidades descritas en este documento. Los patrones de combinación individuales de la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN se pueden administrar por separado en momentos diferentes durante el curso de la terapia o concurrentemente en formas únicas o divididas de combinación. Adicionalmente, el término administración también abarca el uso de un pro-fármaco de un patrón de combinación que se convierte in vivo al patrón de combinación como tal. Por consiguiente, la invención instantánea, se debe entender como que abarca todos estos regímenes de tratamiento simultáneo o alterno y el término "administración" se debe interpretar según el caso.

La dosificación efectiva de cada uno de los patrones de combinación empleados en la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, puede variar dependiendo del compuesto particular o la composición farmacéutica empleado, el modo de administración, la condición que padece, la severidad de la condición que se padece. De esta manera, el régimen de dosificación de la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, se selecciona de acuerdo con una variedad de factores incluyendo la ruta de administración y la función renal y hepática del paciente. Un físico, clínico o veterinario de ordinaria habilidad puede determinar y prescribir fácilmente la cantidad efectiva de los ingredientes activos únicos necesarios para prevenir, contrarrestar o detener el progreso de la condición. La precisión óptima en el logro de la concentración de los ingredientes activos dentro del rango que produce la eficacia sin toxicidad, requiere un régimen basado en la cinética de la disponibilidad de los ingredientes activos a los sitios diana. Esto implica una consideración de la distribución, el equilibrio, y eliminación de los ingredientes activos.

El clorambucil, de ahora en adelante denominado también CLB, se puede administrar a un rango de dosis de 0.1 a 1 mg/kg/día, preferiblemente a un rango de dosis de 0.2 a 0.8 mg/kg/día, más preferiblemente, CLB se puede administrar a una dosis preferida de 0.3 a 0.6 mg/kg/día, por ejemplo

0.3 mg/kg/día. El clorambucil se puede administrar por vía oral. El clorambucil se puede administrar, por ejemplo, por 5 días consecutivos cada cuatro semanas, por ejemplo a una dosis de 0.3 mg/kg de peso corporal.

En la combinación de la invención, el Compuesto I, por ejemplo Sal I, se puede administrar por un día antes del CLB y por 5 días después de completar con CLB. En una modalidad de la invención, CLB se puede administrar continuamente y el Compuesto I, por ejemplo, la Sal I, se pueden administrar diariamente. En otra modalidad de la combinación de la invención, el Compuesto I y CLB se administran por vía oral diariamente. En una modalidad de la invención, CLB y el Compuesto I se administran a una dosis diaria de 400 a 800 mg por día y CLB se administran diariamente a una dosis de 0.1 mg/kg del peso corporal por día.

En otro aspecto de la invención, el Compuesto I, por ejemplo la Sal I, y CLB se administran como una combinación fija. Otra modalidad de la invención se refiere a una combinación fija de CLB y el Compuesto I, por ejemplo la Sal I.

119.5 mg de Sal I, corresponden a 100 mg del Compuesto I (base libre) como sustancia activa. Dependiendo de la especie, edad, condición individual, modo de administración, y el cuadro clínico en cuestión, las dosis efectivas de Sal I, por ejemplo dosis diarias correspondientes a aproximadamente 50 a 1000 mg del Compuesto I, preferiblemente 50 a 600 mg, se administran a animales de sangre caliente de aproximadamente 70 kg de peso corporal. Para pacientes adultos con leucemia linfocítica crónica, una dosis inicial de 400 mg diarios se puede recomendar. Para pacientes con una respuesta inadecuada después de una evaluación de respuesta a la terapia con 400 mg diarios, el aumento de la dosis puede ser considerada segura y los pacientes se pueden tratar siempre y cuando se beneficien del tratamiento y en la ausencia de toxicidades limitantes.

La invención se relaciona también con un método de administración a un sujeto humano que padece de leucemia linfocítica crónica, el Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable de este, que comprende la administración diaria de una cantidad efectiva farmacéuticamente del Compuesto I

o una sal farmacéuticamente aceptable de este, a dicho sujeto humano durante un periodo que excede 3 meses. La invención se relaciona especialmente con dicho método en donde una dosis diaria de 50 a 800 mg del Compuesto I, preferiblemente se administran, 50 a 400 mg.

Cuando los patrones de combinación empleados en la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, se aplican en la forma como se comercializan como fármacos individuales, su dosificación y modo de administración se puede llevar acabo de acuerdo con la información proporcionada en el prospecto del paquete del respectivo fármaco comercializado, con el fin de dar lugar al efecto benéfico descrito en este documento, si no se menciona en este documento de otra manera.

La COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, puede ser una preparación combinada o una composición farmacéutica.

Por otra parte, la presente invención se relaciona con un método para tratar un animal de sangre caliente que tiene una leucemia linfocítica crónica que comprende la administración a dicho animal de una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, en una cantidad que es en forma conjunta efectiva terapéuticamente contra dicha leucemia y en la cual los patrones de combinación también pueden estar en la forma de sus sales farmacéuticamente aceptables. En una modalidad de la invención, en dicho método la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN es co-administrada con un agente antidiarreico. Adicionalmente, el tratamiento puede comprender la radioterapia, crioterapia e inmunoterapia.

Adicionalmente, la presente invención se refiere al uso de una COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica y para la preparación de un medicamento para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica.

Adicionalmente, la presente invención se refiere al uso de clorambucil en combinación con el Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable de este, por ejemplo la Sal I, para la preparación de un medicamento para el tratamiento de leucemia linfocítica crónica.

La presente invención también se refiere al uso del Compuesto I o una sal farmacéuticamente aceptable por consiguiente, por ejemplo la Sal I, en combinación con clorambucil para la preparación del medicamento, para el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica resistente al clorambucil.

Por otra parte, la presente invención proporciona un envase comercial que comprende como ingredientes activos, la COMBINACIÓN DE LA INVENCIÓN, junto con las instrucciones para el uso simultáneo, por separado o secuencial de este, en el tratamiento de leucemia linfocítica crónica.

Ejemplo I: Compuesto I sensibiliza los linfocitos CLL a CLB A-Materiales y Métodos

8 A-1) Aislamiento de Linfocitos de CLL y Linfocitos del cultivo celular se aíslan a partir de la sangre periférica de pacientes con CLL, por sedimentación centrifugación en Ficoll Hypaque (Pharmacia, Uppsala, Sweden) como se describe previamente, por ejemplo en Christodoulopolis G. et al., Cancer Research, 1999, 5:2178-84. Las alícuotas que contienen 1x106 células/ml se envían para el análisis de linfocitos-T. El porcentaje de los linfocitos-T que contaminan se determina utilizando un análisis de clasificación de células activadas por fluorescencia con el anticuerpo CD3. El porcentaje de contaminación del linfocito-T en la población de linfocitos-B aislados, determinado por el análisis FACS y expresado como un % media ± SE es 6.4±1.8. La línea celular WSU es una línea celular B linfocítica derivada de un paciente CLL (Mohammad R.M., et al., Leukemia, 1996, 10:130-7). La línea celular I83 es un línea celular de leucemia linfocítica crónica del tipo-B (Carlsson M. et al., Eur.

J. Immunol., 1989, 19:913-21).

A-2) Eficiencia de la preparación de cultivos en placas y Dosificación. Los linfocitos y WSU y los linfocitos I83 CLL se siembran en placas de 96-pozos en suspensiones de 200 µl que contiene 1.5x106 linfocitos/ml y 1.25x105 células/ml respectivamente en RPMI suplementado con FBS al 10%. Solamente respuestas de dosis con eficiencias lineales de placas se analizaron. Los linfocitos luego se incuban a 37°C en la presencia de varias concentraciones del Compuesto I (0-100 µM) solo, CLB (0100 µM) solo, o varias concentraciones de ambos fármacos juntos.

A-3) Ensayo Citotóxico. El ensayo MTT se lleva a cabo 72 horas después de la siembra en placas como se describe antes (Christodoulopolis G et al., Cancer Research, 1998, 58:1789-92) por la adición de 20 µl de una solución de 5 mg/ml de MTT (3-[4,5-dimetiltiazol-2-il]2,5-difenil-tetrazolio bromuro) en media RPMI a cada pozo. La LD50 de CLB solo, el Compuesto I solo o CLB en la presencia del Compuesto I, se define como que es la concentración del fármaco necesario para reducir la lectura de absorbancia al 50% del valor control. El porcentaje de células supervivientes después del tratamiento respecto a las células tratadas con el vehículo (control) se calcula como (células tratadas OD /OD células no-tratadas)x100. La sinergia se determina por la fórmula: a/A + b/B = 1 1 donde a es la concentración de CLB necesaria para producir el 50% de los valores control en combinación con el Compuesto I a una concentración b; A es la concentración de CLB que produce una LD50 sin Compuesto I; y B es la concentración del Compuesto I, que produce una LD50 en la ausencia de CLB. De acuerdo con la fórmula, cuando I<1 la interacción es sinérgica, cuando I=1, la interacción es aditiva, y cuando I>1 existe una interacción antagónica.

A-4) Las diferencias del Análisis Estadístico entre los valores media se evalúan mediante un test-t de dos vías. Los análisis de regresión lineal y correlación se llevaron a cabo utilizando el Paquete de Herramientas Estadísticas de EXCEL.

B-Resultados B-1) Compuesto I sensibiliza la línea celular CLL-WSU con el clorambucil. La LD50 se obtiene por la interpolación exponencial. La LD50 de CLB solo o en combinación con el Compuesto I

(5.0 µM o 10 µM) y la LD50 del Compuesto I solo, se determinan como se describe anteriormente. Los resultados se expresan como el valor medio de tres experimentos independientes ± SE (error estándar de la media). El * indica una diferencia significante (p<0.005) entre la LD50 de CLB solo versus LD50 de CLB en la presencia del Compuesto I. El valor I resultante (I <), calculado como se describe anteriormente indica que CLB y el Compuesto I actúan de forma sinérgica.

LD50 en µM: I

CLB solo: 34.00 ± 2.82

Compuesto I solo: 13.72 ± 2.75

CLB + 5 µM Compuesto I: 5.95 ± 0.17* 0.53

CLB + 10 µM Compuesto I: 3.15 ± 1.82* 0.82

Los experimentos llevados a cabo con la línea celular WSU mostraron que el Compuesto I sensibiliza esta células a una citotoxicidad de CLB 10 veces. Las incubaciones con CLB solo necesitan una dosis de 34 µM para producir una LD50 mientras que 13.72 µM del Compuesto I solo 5 produjeron una LD50. Sin embargo, las incubaciones con ambos fármacos de manera simultánea, dieron lugar a una LD50 de 5.95 µM para CLB en la presencia de 5.0 µM del Compuesto I (I=0.53) y

3.15 µM en la presencia de 10 µM del Compuesto I (I=0.82). B-2) Compuesto I sensibiliza los linfocitos de CLL al clorambucil in vitro Para evaluar más afondo el efecto del Compuesto I en citotoxicidad de CLB, se llevaron a

10 cabo estudios in vitro similares, utilizando linfocitos de pacientes con CLL. Los pacientes se clasificaron de la siguiente manera en la tabla 1; 7 pacientes son sin tratar (U1-U7) y 5 pacientes han sido tratados previamente con CLB (T1-T5).

LD50 en µM

CLB: Compuesto I CLB + Compuesto I I

U1: 14.6 55.93 3.35 (5 µM Compuesto I) 0.318

U2: 28.49 29.79 2.96 (5 µM Compuesto I) 0.267

U3: 20.02 36.8 4.7 (5 µM Compuesto I) 0.37

U4: 54.2 101.8 21.20 (5 µM Compuesto I) 0.587

U5: 12.27 44.9 70.10 (10 µM Compuesto I) 5.93

U6: 18.08 47.9 9.80 (20 µM Compuesto I) 1.5

U7: 7.84 46.7 3.04 (5 µM Compuesto I) 0.496

T1: 9.29 33.29 1.09 (10 µM Compuesto I) 0.412

T2: 23.1 16.5 1.10 (10 µM Compuesto I) 0.65

T3: 5.56 53.06 2.67 (10 µM Compuesto I) 0.66

T4: 79.7 32.2 35.20 (10 µM Compuesto I) 0.75

T5: 49.2 34 17.2 (5 µM Compuesto I) 0.497

15 Los resultados indican que ambos fármacos actúan de forma sinérgica en 10 de los 12 pacientes; de los 7 pacientes sin tratar, 5 mostraron efectos sinérgicos con el Compuesto I (U1-U4, U7); los pacientes U5 y U6 con I>1 mostraron resultados antagónicos (1=5.93 y I=1.5 respectivamente). Todos los 5 pacientes quienes han sido tratados previamente con CLB (T1-T5) mostraron efectos sinérgicos. La LD50 de CLB solo varió de 5.56 µM a 79.7 µM. La LD50 del Compuesto I solo varió

20 de 16.5 µM a 101.8 µM. Un rango del Compuesto I a 2.5-10 µM disminuye la concentración de CLB necesaria para producir una LD50 a 1.1 µM -35.5 µM. No hay diferencia significativa entre la LD50 del Compuesto I de los pacientes sin tratar versus los tratados (U7-U4 y U7 versus T1-T5), lo que indica que el Compuesto I sensibiliza los linfocitos de CLL a CLB, independientemente del estado clínico.

25 Estos resultados sugieren que el Compuesto I, puede demostrar que es benéfico en una práctica clínica, dado que la sinergia se ve a concentraciones factibles (<10 µM) en pacientes con toxicidad mínima (Mauro M.J. and Drucker B.J. The Oncologist 2001, 6:233-238). El hecho de que la

10 sensibilización obtenida utilizando 5 y 10 µM del Compuesto I sea similar, indica que la sinergia entre ambos fármacos no parece ser dependiente de la dosis. Esto se puede deber a la inhibición máxima de la quinasa c-abl a < 5 µM en muestras del paciente. La farmacocinética del Compuesto I, demuestra que después de la administración oral a pacientes, la Cmax (concentración máxima) ocurre a 1-3 horas 5 después de la administración. La Cmax después de una dosis de 400 mg es 2.35 ± 1.0 µg/ml (≈ 4.0 µM) y después una dosis de 600 mg es 7.83 ± 3.8 µg/ml (≈ 13.0 µM). La vida media es aproximadamente 12 horas. La concentración, por ejemplo 10 µM, del Compuesto I utilizado en los experimentos mencionados anteriormente son obtenibles químicamente. Ejemplo 2: Cápsulas con 4-[(4-metil-1-piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-[[4-(3-piridinil)-210 pirimidinil]amino] fenil]benzamida metanosulfonato, forma beta cristal Las cápsulas que contienen 119.5 mg de Sal I correspondiente a 100 mg del Compuesto I (base libre) como la fracción activa se preparan con la siguiente composición:

Composición: Sal I 119.5 mg Celulosa MK GR 92 mg Crospovidona XL 15 mg Aerosil 200 2 mg Estearato de magnesio 1.5 mg

230 mg

15 Las cápsulas se preparan mezclado los componentes y el llenado de la mezcla se hace en cápsulas de gelatina dura, tamaño 1. Ejemplo 3: Cápsulas con 4-[(4-metil-1-piperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-[[4-(3-pyridinyl)-2pyrimidinyoamino] fenil]benzamida metanosulfonato, forma beta cristal Las cápsulas que contienen 119.5 mg de Sal I correspondiente a 100 mg del Compuesto I 20 (base libre) como la fracción activa, se preparan con la siguiente composición:

Composición: Sal I 119.5 mg Avicel 200 mg PVPPXL 15 mg Aerosil 2 mg Estearato de magnesio 1.5 mg

338.0 mg

Las cápsulas se preparan mezclado los componentes y el llenado de la mezcla se hace en cápsulas de gelatina dura, tamaño 1.

25 Ejemplo 5: El material y métodos del ejemplo 5 se proporcionan en el ejemplo 1 B-Resultados B-1) Compuesto I sensibiliza la línea celular I-83 a clorambucil La IC50 CLB solo o en combinación con el Compuesto I (1.5 µM o 3 µM) y el IC50 del

30 Compuesto I solo, se determinan como se describe anteriormente.

imagen2

CLB solo: 40.66 ± 2.80

Compuesto I solo: 33.73 ± 4.19

CLB + 1.5 µM Compuesto I: 17.30 ± 1.00* 0.45

CLB + 3 µM Compuesto I: 25.40 ± 1.53* 0.74

El * indica una diferencia significante (p<0.005) entre la IC50 de CLB solo versus IC50 CLB en la presencia del Compuesto I.

Los experimentos llevados a cabo con la línea celular I83 utilizando el ensayo MTT muestran que el Compuesto I, por ejemplo Sal I, de forma sinérgica sensibiliza estas células a citotoxicidad de CLB 2 veces. La incubación de las células I83 con CLB solo necesita una concentración de 40.66 µM

5 para producir una IC50 mientras que 33.73 µM del Compuesto I solo producen una IC50. Sin embargo la incubación con ambos fármacos de manera simultánea, dio lugar a una IC50 de 17.3 µM para CLB en la presencia de 1.5 µM del Compuesto I (I=0.45) y 24.5 µM en la presencia de 3.0 µM del Compuesto I (I=0.74). B-2) Compuesto I sensibiliza los linfocitos de CLL a clorambucil in vitro

10

LD50 en µM

CLB: Compuesto I CLB + Compuesto I I

U1: 14.6 55.93 3.35 (10 µM Compuesto I) 0.32

U2: 28.49 29.79 2.96 (10 µM Compuesto I) 0.27

U3: 20.02 36.8 4.7 (5 µM Compuesto I) 0.37

U4: 54.2 101.8 21.20 (5 µM Compuesto I) 0.59

U5: 12.27 44.9 79.9 (5 µM Compuesto I) 6.5

U6: 18.08 47.9 11.70 (5 µM Compuesto I) 0.75

U6: 18.08 47.9 13.8 (10 µM Compuesto I) 0.96

T1: 9.29 33.29 1.2 (5 µM Compuesto I) 0.28

T2: 23.1 16.5 3.0 (5 µM Compuesto I) 0.42

T3: 5.56 53.06 3.54 (5 µM Compuesto I) 0.72

T4: 79.7 32.2 59.0 (5 µM Compuesto I) 0.88

El Compuesto I disminuye la concentración de CLB necesaria para producir una IC50 a 1.1

µM-59 µM.

15

20

REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCION

Esta lista de referencias citada por el aspirante es solamente para conveniencia del lector. No forma parte del documento de la patente Europea. Aún cuando se ha tenido gran cuidado en

recopilar las referencias, los errores u omisiones no se pueden excluir y la EPO desconoce toda 5 responsabilidad a este respecto.

Documentos de patentes citadas en la descripción

•: WO 03094904 A [0007]

•: WO 9903854 A [0010] [0011]

•: US 3046301 A [0021]

10 Literatura no-patente citada en la descripción

•: Kalil, N ; Cheson, B.D. The Oncologist, 1999, vol. 4, 352-369 [0005]

•: Virchis et al. Blood, November 2000, vol. 96 (11), 82a [0006]

•: Ugo et al. Bulletin Du Cancer, 2002, vol. 89 (1), 75-88 [0008]

• Soubeyran. Oncologie, 2002, vol. 4, 373-375 [0008] 15 • Christodoulopolis G et al. Cancer Research, 1999, vol. 5, 2178-84 [0045]

•: Mohammad R.M. et al. Leukemia, 1996, vol. 10, 130-7 [0045]

•: Carlsson M. et al. Eur. J. Immunol., 1989, vol. 19, 913-21 [0045]

•: Christodoulopolis G et al. Cancer Research, 1998, vol. 58, 1789-92 [0045]

•: Mauro M.J. ; Drucker B.J. The Oncologist, 2001, vol. 6, 233-238 [0050]

Claims

Reivindicaciones

1. Una combinación para el uso simultáneo, por separado o secuencial, que comprende (a) un análogo de mostaza nitrogenada seleccionado de clornafazina, estramustina, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida y mostaza de uracilo y (b) 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2ilamino)fenil]-benzamida que tiene la siguiente fórmula

imagen1

en la cual los ingredientes activos (a) y (b) están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable.

10 2. La combinación de acuerdo con la reivindicación 1, la cual es una composición farmacéutica combinada fija.
3. La combinación de acuerdo con la reivindicación 1 o 2, en donde (a) y (b) están presentes en una cantidad efectiva terapéuticamente en forma conjunta, para su uso como un medicamento.
4. La combinación para uso simultáneo, por separado o secuencial, de acuerdo con la 15 reivindicación 3 en donde (a) y (b) están presentes en cantidades sinérgicamente efectivas.
5. Uso de una combinación para el uso simultáneo, por separado o secuencial que comprende

(a) un análogo de mostaza nitrogenada seleccionado de clorambucil, clornafazina, estramustina, mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida y mostaza de uracilo y (b) 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3

20 il)pirimidin-2-ilamino)fenil]-benzamida que tiene la siguiente fórmula

imagen1

en la cual los ingredientes activos (a) y (b) están presentes en cada caso en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable, y en donde (a) y (b) están presentes en una cantidad efectiva terapéuticamente en forma conjunta, para la preparación de un medicamento para el

25 tratamiento de leucemia linfocítica crónica.
6.

El uso de una combinación de acuerdo con la reivindicación 5, la cual es una composición farmacéutica combinada fija.
7.

El uso de una combinación de acuerdo con la reivindicación 5 o 6, en donde (a) y (b) están presentes en cantidades sinérgicamente efectivas.
8.

El uso de una combinación de acuerdo con la reivindicación 5, 6 o 7, en donde el análogo de mostaza nitrogenada es el clorambucil.

5 9. El uso de una combinación de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 5-8, en donde dicha leucemia es una leucemia linfocítica crónica resistente al clorambucil.
10. Una composición farmacéutica que comprende una cantidad, la cual es efectiva terapéuticamente en forma conjunta contra la leucemia linfocítica crónica de una combinación que comprende (a) un análogo de mostaza nitrogenada seleccionado de clornafazina, estramustina,

10 mecloretamina, clorhidrato de óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida y mostaza de uracilo y (b) 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3il)pirimidin-2-ilamino)fenil]-benzamida que tiene la siguiente fórmula

imagen1

en la cual los ingredientes activos (a) y (b) están presentes en cada caso en forma libre o en 15 la forma de una sal farmacéuticamente aceptable y al menos un portador farmacéuticamente aceptable.
11. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 10 en donde la leucemia es una leucemia linfocítica crónica resistente al clorambucil.
12. Un envase comercial que comprende una composición farmacéutica de acuerdo con la

reivindicación 10, junto con las instrucciones para el uso simultáneo, por separado o secuencial de 20 esta, en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica.
13. Uso de la 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2ilamino)fenil]-benzamida en forma libre o en la forma de una sal farmacéuticamente aceptable para la fabricación de un medicamento para utilizar en combinación con un análogo de la mostaza nitrogenada, seleccionado de clorambucil, clornafazina, estramustina, mecloretamina, clorhidrato de

25 óxido de mecloretamina, navembiquina, fenestrina, prednimustina, trofosfamida y mostaza de uracilo, en donde la 4-(4-metilpiperazin-1-ilmetil)-N-[4-metil-3-(4-piridin-3-il)pirimidin-2-ilamino)fenil]benzamida y el análogo de la mostaza nitrogenada están presentes en una cantidad efectiva terapéuticamente en forma conjunta, para utilizar en el tratamiento de la leucemia linfocítica crónica.
14. El uso de acuerdo con la reivindicación 13, en donde el análogo de la mostaza 30 nitrogenada es el clorambucil.
15. El uso de acuerdo con la reivindicación 13 o 14, en donde dicha leucemia es una leucemia linfocítica crónica resistente al clorambucil.

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