ES2319101T3 - Sistema y procedimiento de manipulacion de particulas magneticamente sensibles en muestras de fluido para extraer el adn o el arn de una muestra. - Google Patents
Sistema y procedimiento de manipulacion de particulas magneticamente sensibles en muestras de fluido para extraer el adn o el arn de una muestra. Download PDFInfo
- Publication number
- ES2319101T3 ES2319101T3 ES01937472T ES01937472T ES2319101T3 ES 2319101 T3 ES2319101 T3 ES 2319101T3 ES 01937472 T ES01937472 T ES 01937472T ES 01937472 T ES01937472 T ES 01937472T ES 2319101 T3 ES2319101 T3 ES 2319101T3
- Authority
- ES
- Spain
- Prior art keywords
- tube
- magnet
- particles
- magnets
- tubes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 239000002245 particle Substances 0.000 title claims abstract description 107
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 50
- 239000012530 fluid Substances 0.000 title description 7
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 54
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 53
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 53
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims description 33
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 claims 13
- 230000005415 magnetization Effects 0.000 claims 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 24
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 abstract description 12
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 abstract description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 abstract description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 5
- 238000001816 cooling Methods 0.000 abstract description 3
- 230000002934 lysing effect Effects 0.000 abstract description 3
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 78
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 37
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 20
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 15
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 12
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 10
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 9
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 3
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000007599 discharging Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000005294 ferromagnetic effect Effects 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 2
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 2
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000014413 iron hydroxide Nutrition 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000011330 nucleic acid test Methods 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 2
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 2
- 229910052779 Neodymium Inorganic materials 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- -1 acids nucleic acid Chemical class 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017525 heat dissipation Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N neodymium atom Chemical compound [Nd] QEFYFXOXNSNQGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001172 neodymium magnet Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L7/00—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices
- B01L7/52—Heating or cooling apparatus; Heat insulating devices with provision for submitting samples to a predetermined sequence of different temperatures, e.g. for treating nucleic acid samples
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C1/00—Magnetic separation
- B03C1/02—Magnetic separation acting directly on the substance being separated
- B03C1/28—Magnetic plugs and dipsticks
- B03C1/288—Magnetic plugs and dipsticks disposed at the outer circumference of a recipient
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
- C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
- C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
- B03C2201/00—Details of magnetic or electrostatic separation
- B03C2201/26—Details of magnetic or electrostatic separation for use in medical or biological applications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/10—Devices for transferring samples or any liquids to, in, or from, the analysis apparatus, e.g. suction devices, injection devices
- G01N2035/1027—General features of the devices
- G01N2035/103—General features of the devices using disposable tips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/0098—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor involving analyte bound to insoluble magnetic carrier, e.g. using magnetic separation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/0099—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor comprising robots or similar manipulators
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N35/00—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor
- G01N35/02—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a plurality of sample containers moved by a conveyor system past one or more treatment or analysis stations
- G01N35/028—Automatic analysis not limited to methods or materials provided for in any single one of groups G01N1/00 - G01N33/00; Handling materials therefor using a plurality of sample containers moved by a conveyor system past one or more treatment or analysis stations having reaction cells in the form of microtitration plates
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/25—Chemistry: analytical and immunological testing including sample preparation
- Y10T436/25375—Liberation or purification of sample or separation of material from a sample [e.g., filtering, centrifuging, etc.]
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Sistema (100) para manipular partículas magnéticamente sensibles, con moléculas de ácidos nucleicos unidas a las mismas y que están en una solución contenida en al menos un tubo (120), comprendiendo dicho sistema: un receptor de tubos (118) con al menos una abertura para tubos adaptada para recibir dicho tubo en su interior; al menos un primer imán (166); un dispositivo de desplazamiento de imanes (104), adaptado para desplazar selectivamente dicho primer imán entre un primer emplazamiento respecto de dicho tubo para atraer dichas partículas magnéticamente sensibles hacia una pared interna de dicho tubo, y un segundo emplazamiento respecto de dicho tubo para permitir que dichas partículas magnéticamente sensibles se suspendan en dicha solución; y un segundo imán (178) adaptado para aplicar un campo magnético a dichas partículas magnéticamente sensibles cuando dicho primer imán se posiciona en dicho segundo emplazamiento, para eliminar una magnetización impuesta sobre dichas partículas magnéticamente sensibles por dicho primer imán.
Description
Sistema y procedimiento de manipulación de
partículas magnéticamente sensibles en muestras de fluido para
extraer el ADN o el ARN de una muestra.
La presente invención se refiere a un sistema y
un procedimiento para manipular partículas magnéticas en una
muestra de fluido y extraer eficazmente ADN o ARN que se ha unido a
las partículas. Más particularmente, la presente invención se
refiere a un sistema y un procedimiento empleando imanes amovibles
para retener y liberar partículas magnéticas en una muestra de
fluido de manera que el ADN o ARN unido a las partículas magnéticas
se pueda separar de la muestra de fluido.
Diversas metodologías de biología molecular
tales como la secuenciación de ácidos nucleicos, la detección
directa de secuencias particulares de ácidos nucleicos por
hibridación de ácidos nucleicos, y técnicas de ampliación de
secuencias de ácidos nucleicos, requieren que los ácidos nucleicos
(ADN o ARN) se separen de los componentes celulares restantes. Este
procedimiento incluye generalmente las etapas de recoger las células
en un tubo de muestra y lisar las células con calor y reactivo que
hace que las células estallen y liberen los ácidos nucleicos (ADN o
ARN) en la solución en el tubo. El tubo se coloca entonces en una
centrifugadora, y la muestra se centrifuga de manera que los
diversos componentes de las células se separan en capas de densidad
dentro del tubo. La capa de los ácidos nucleicos se puede retirar de
la muestra con una pipeta o cualquier instrumento apropiado. A
continuación, las muestras se pueden lavar y tratar con reactivos
apropiados, tales como sondas de fluoresceína, de manera que se
puedan detectar los ácidos nucleicos en un aparato tal como el
sistema DBProbeTec^{TM} ET, fabricado por Becton Dickinson and
Company y descrito en la patente de los Estados Unidos nº 6.043.880
de Andrews et al., cuyo contenido íntegro se incorpora a la
presente memoria por referencia. Aunque las técnicas existentes
para separar los ácidos nucleicos de muestras de células pueden ser
generalmente adecuadas, tales procedimientos son típicamente
complejos y conllevan un gran gasto de tiempo. Además, aunque el
procedimiento de centrifugado es generalmente eficaz en la
separación de los ácidos nucleicos de los otros componentes
celulares, algunas impurezas con la misma o similar densidad que los
ácidos nucleicos también pueden ser recogidos en la capa de ácidos
nucleicos, y se deben retirar de la muestra de células con los
ácidos nucleicos.
Recientemente se ha desarrollado una técnica que
puede separar más eficazmente los ácidos nucleicos del resto de
componentes de células. Esta técnica implica el uso de partículas
paramagnéticas, y se describe en la patente de los Estados Unidos
nº 5.973.138 de Mathew P, Collis, cuyo contenido íntegro se
incorpora a la presente memoria descriptiva por referencia.
En esta técnica, las partículas paramagnéticas
se colocan en una solución tampón junto con muestras de células.
Después de lisar las muestras de células para liberar los ácidos
nucleicos, se mezcla una solución ácida con las partículas y los
ácidos nucleicos se unen reversiblemente a las partículas
paramagnéticas. Las partículas paramagnéticas se pueden, entonces,
separar del resto de la solución por técnicas conocidas tales como
la centrifugación, filtración o fuerza magnética. Las partículas
paramagnéticas a las cuales están unidos los ácidos nucleicos se
pueden, entonces, retirar de la solución y disponer en una solución
tampón apropiada, lo cual hace que los ácidos nucleicos se separen
de las partículas magnéticas. Las partículas paramagnéticas se
pueden entonces separar de los ácidos nucleicos por cualquiera de
las técnicas anteriormente descrita.
Se describen ejemplos de sistemas y
procedimientos de manipulación de partículas magnéticas en las
patentes de los Estados unidos nº 3.988.240, 4.985.650, 4.936.687,
5.681.478, 5.804.067 y 5.567.326 en la solicitud de patente europea
nº EP905520A1, y en la solicitud PCT WO 96/09550, incorporándose el
contenido íntegro de cada uno de dichos documentos a la presente
memoria descriptiva por referencia.
Aunque las técnicas de manipulación de
partículas magnéticas o paramagnéticas pueden ser eficaces en la
separación y recogida de ácidos nucleicos a partir de muestras de
células, existe la necesidad de una técnica mejorada de
manipulación de las partículas magnéticas o paramagnéticas para
proporcionar un procedimiento de separación aun más eficaz.
Un objeto de la presente invención es
proporcionar un sistema y un procedimiento mejorados para manipular
partículas magnéticamente sensibles, tales como partícula de óxido
de hierro, partículas magnéticas, ferromagnéticas o paramagnéticas
o cualesquiera otras partículas que sean sensibles a un campo
magnético, a las cuales se unen moléculas de ácidos nucleicos en
una solución para separar eficazmente las moléculas de ácidos
nucleicos del resto de componentes de la solución.
\newpage
Otro objeto de la presente invención es
proporcionar un sistema y un procedimiento capaces de alterar la
temperatura de una solución de células para llevar a cabo una
técnica de lisis que permite que permite que las moléculas de
ácidos nucleicos se unan a partículas magnéticamente sensibles en la
solución, así como capaces de manipular las partículas
magnéticamente sensibles para separar apropiadamente las moléculas
de ácidos nucleicos del resto de los componentes de la
solución.
Otro objeto de la presente invención es
proporcionar un sistema y un procedimiento para su uso en un sistema
de preparación de ensayo de ácidos nucleicos, que es capaz de
calentar y enfriar apropiadamente soluciones de muestras para
llevar a cabo una técnica de lisis, y que es, además, capaz de
manipular partículas magnéticamente sensibles a las cuales se unen
moléculas de ácidos nucleicos de las muestras de células lisadas, es
decir el sistema de preparación de ensayo puede lavar
apropiadamente las moléculas de ácidos nucleicos y disponer las
moléculas de ácidos nucleicos en un ensayo de muestra.
Estos y otros objetos se consiguen esencialmente
proporcionando un sistema y un procedimiento para manipular
partículas magnéticamente sensibles unidas a ácidos nucleicos en una
solución de muestra para separar las moléculas del resto de
componentes en la solución. El sistema y el procedimiento incluyen
un receptor de tubo para recibir al menos un tubo de muestra que
contiene una solución de células, partículas magnéticamente
sensibles tales como partículas de óxido de hierro, y una solución
ácida. El receptor de tubo se adapta para ser usado con un sistema
para preparar ensayos de ácidos nucleicos, tales como un elemento
termoeléctrico, que puede calentar la solución de células para
lisar la célula y permitir que las moléculas de ácidos nucleicos se
unan a las partículas magnéticamente sensibles. Los elementos
termoeléctricos se pueden usar para enfriar rápidamente la solución
si fuese necesario. El receptor de tubo incluye, además, imanes
amovibles que se pueden desplazar a proximidad de la pared exterior
de los tubos para atraer las partículas magnéticamente sensibles
unidas a moléculas a los lados del tubo, mientras que el sistema de
preparación de ensayo retira el resto de la solución de células y
lava las partículas. Los imanes amovibles se pueden entonces alejar
de los tubos para que de este modo las partículas magnéticamente
sensibles unidas a moléculas se liberan de las paredes de los tubos,
de manera que el sistema de preparación de ensayo pueda expulsar un
reactivo de elusión, tal como una solución tampón apropiada, que
hace que las moléculas de ácidos nucleicos se separen de las
partículas magnéticamente sensibles. El receptor de tubo incluye,
además, electroimanes que se activan para proporcionar un campo
magnético alterno a los tubos para desgausar las partículas
magnéticamente sensibles para permitir que las partículas
magnéticamente sensibles se mezclen con el reactivo de elusión. Los
imanes amovibles se pueden entonces desplazar a proximidad de los
tubos de muestra para adherir las partículas magnéticamente
sensibles a las paredes de los tubos de muestras mientras el
sistema de preparación de ensayo aspira las moléculas de ácidos
nucleicos de los tubos de muestras. El sistema de preparación de
ensayo puede, entonces, disponer las moléculas de ácidos nucleicos
en las bandejas de microvaloración apropiadas para ser leídas por un
sistema lector de ensayo.
Estos y otros objetos, ventajas y nuevas
características de la invención serán fácilmente apreciadas a partir
de la siguiente descripción detallada cuando se lee junto con los
dibujos anexos, en los cuales:
La figura 1 es un diagrama de un ejemplo de un
sistema de preparación de ensayos de ácidos nucleicos empleando un
extractor de moléculas de ácidos nucleicos según una realización
de la presente invención;
La figura 2 es una vista en perspectiva del
extractor de moléculas de ácidos nucleicos mostrado en la figura
1.
La figura 3 es una vista superior del extractor
de moléculas de ácidos nucleicos mostrado en la figura 2.
La figura 4 es una vista en perspectiva de
despiece ordenado de un ejemplo de un tubo usado con el extractor
de moléculas de ácidos nucleicos en las figuras
1-3.
La figura 5 es una vista detallada de un ejemplo
de la forma de una de las aberturas en el tubo mostrado en
la
figura 4.
figura 4.
La figura 6 es una vista en sección transversal
del extractor de moléculas de ácidos nucleicos tomada a lo largo de
las líneas 6-6 en la figura 3.
La figura 7 es una vista detallada de la parte
del extractor de moléculas de ácidos nucleicos designado en
la
figura 6.
figura 6.
La figura 8 es una vista en perspectiva de
despiece ordenado que muestra un ejemplo de la relación entre los
bloques de tubo, los electroimanes y los dispositivos
termoeléctricos incluidos en el extractor de moléculas de ácidos
nucleicos mostrado en las figuras 1-3, 6 y 7.
La figura 9 es una vista lateral de la tarjeta
de circuito impreso de electroimanes mostrado en la figura 8.
La figura 10 es una vista esquemática que
ilustra la relación del lado fijo y la leva deslizante del extractor
de moléculas de ácido nucleicos mostrado en las figuras
1-3, 6 y 7 cuando los imanes amovibles se posicionan
como se muestra en las figuras 6 y 7.
La figura 11 es una vista esquemática que
ilustra la relación entre el lado fijo y la leva deslizante del
extractor de moléculas de ácidos nucleicos mostrado en las figuras
1-3, 6 y 7 cuando los imanes se están alejando de
los tubos en una dirección descendente.
La figura 12 es una vista esquemática que
ilustra la relación entre el lado fijo y la leva deslizante del
extractor de moléculas de ácidos nucleicos mostrado en las figuras
1-3, 6 y 7 cuando los imanes amovibles se
posicionan en la posición más inferior alejada de los tubos.
La figura 13 es un diagrama de flujo que ilustra
un ejemplo de la secuencia de operaciones llevadas a cabo por el
sistema de preparación y, en particular, el extractor mostrado en
las figuras 1-3, 6 y 7.
La figura 14 es una vista en perspectiva de otro
ejemplo del extractor de moléculas de ácidos nucleicos mostrado en
la figura 1.
La figura 15 es una vista superior del extractor
de moléculas de ácidos nucleicos mostrado en la figura 2.
La figura 16 es una vista en perspectiva de
despiece ordenado de un ejemplo de un tubo usado con el extractor
de moléculas de ácidos nucleicos mostrado en las figuras 14 y
15.
La figura 17 es una vista en perspectiva de un
tubo ensamblado mostrado en la figura 16.
La figura 18 es una vista superior del tubo
mostrado en las figuras 16 y 17.
La figura 19 es una vista lateral del tubo
mostrado en las figuras 16 y 17,
La figura 20 es una vista lateral del extractor
mostrado en las figuras 14 y 15.
La figura 21 es una vista en sección transversal
del extractor de moléculas de ácidos nucleicos tomada a lo largo de
las líneas 21-21 en la figura 15; y
La figura 22 es una vista detallada de la parte
del extractor de moléculas de ácidos nucleicos designado en
la
figura 21.
figura 21.
La figura 1 ilustra un sistema 100 de
preparación de ensayos de muestras para el cual se adapta para su
uso un extractor 102 de moléculas de ácidos nucleicos. El sistema
100 incluye un robot 104 tal como un robot fabricado por Adept
Corp. de San Jose, California, o cualquier otro robot apropiado. El
robot incluye un mecanismo de sujeción de pipeta 106, que se puede
acopla amoviblemente a una pluralidad de puntas de pipeta (no
mostrado) almacenadas en soportes de puntas de pipeta 108. El robot
108 incluye, además, un mecanismo de aspiración (no mostrado) que
se puede activar para crear un vacío para retirar el fluido de
dentro de las puntas de pipeta, o para crear presión para expulsar
el fluido de las puntas de pipeta por razones mencionadas más en
detalle más adelante.
Como se muestra en la figura 1, una pluralidad
de tubos 112 de entrada de muestras en un soporte de tubos de
muestras se posicionan en un emplazamiento predeterminado respecto
del área de movimiento del robot 104. Además, se sitúan unos
recipientes 114 de reactivos en bruto, que incluyen diferentes
reactivos mencionados más en detalle en lo sucesivo, y una
pluralidad de bandejas 116 de microvaloración en una posición
predeterminada respecto del robot 104.
Se muestras más detalles del extractor 102 en
las figuras 2-9 que se van a describir. El extractor
102 incluye un soporte amovible 118 en el cual se puede colocar una
pluralidad de tubos 120 que contienen partículas magnéticamente
sensibles tales como óxido de hierro o las descritas en la patente
de los Estados Unidos nº 5.973.138, referenciada anteriormente.
Para los fines de esta descripción, el término "partículas
magnéticamente sensible" se refiere a partículas de óxido de
hierro, partículas magnéticas, partículas ferromagnéticas,
partículas paramagnéticas, cualquiera de estos tipos de partículas
que se han revestido con un revestimiento polimérico, cualquier
partícula descrita en la patente de los Estados Unidos nº 5.973.138
o cualquier partícula sensible a un campo magnético. En este
ejemplo, cada tubo 120 tiene una capacidad de 2 ml y contiene una
suspensión secada de partículas de óxido de hierro e hidróxido de
potasio.
El extractor 102 incluye, además, lados fijos
122 y discos de leva 124 que se extienden en paralelo o
esencialmente en paralelo a los lados fijos 122 mostrados. El
extractor incluye, además, un motor paso a paso 126 conectado a un
husillo 128 que se controla mediante un controlador (no mostrado)
del sistema 100 para hacer deslizar los discos de leva 124 respecto
de los lados fijos 112 por las razones mencionadas más en detalle en
lo sucesivo. Como se muestra, en particular, en la figura 3, el
extractor 102 incluye un detector doméstico 130 que se conecta al
controlador (no mostrado). El detector doméstico detecta la posición
de un indicador doméstico 132 para indicar al controlador la
posición de los discos de leva 124 respecto de los lados fijos 122
por razones mencionadas en lo sucesivo.
Como se ha mencionado anteriormente, el
extractor 102 incluye y se puede adaptar para su uso con un soporte
118, cuyos detalles se muestran más específicamente en las figuras 4
y 5. En particular, el soporte 18 incluye una parte inferior 134 y
una parte superior 136. La parte inferior 134 incluye una pluralidad
de patillas 138, un mango 140 y una pluralidad de aberturas 142 en
la misma. Como se muestra en la figura 5, las aberturas 142
incluyen bordes 144 que se configuran para acoplarse con las
proyecciones 146 en el exterior de los tubos 120 para prevenir que
los tubos giren dentro de las aberturas 142 cuando, por ejemplo, se
rosca una caperuza (no mostrada) sobre una parte superior del tubo
120.
Como se muestra en la figura 4, la parte
inferior 134 del soporte 118 incluye dos aberturas, poseyendo cada
una grapa de fijación 148 insertada en su interior. Cada grapa
recibe la parte fileteada de un tornillo de palomilla cautivo 150
que asegura la parte superior 136 del soporte 118 a la parte
inferior 134 después de haber insertado los tubos 120 dentro de la
abertura 142. La parte superior 136 topa contra un saliente 152 que
está posicionado a proximidad de las partes superiores de los tubos
120, y de este modo previene que los tubos 120 caigan fuera del
soporte 118, o que se salgan accidentalmente del soporte por las
puntas de pipeta anteriormente mencionadas, cuando el robot 104
está añadiendo o retirando una solución a o de los tubos 120.
Se muestras otros detalles del extractor 102 en
las figuras 6-9 que se describirán a continuación.
Como se ilustra, el extractor 102 incluye una pluralidad de bloques
disipadores de calor 154 dispuestos entre los lados fijos 122, y de
este modo, en el interior del extractor 102. En este ejemplo, el
extractor incluye seis bloques disipadores de calor 154. Los
bloques disipadores de calor van soportados por una placa base 156
del extractor 102 mostrado, en particular, en la figura 6. Cada
lado fijo 122 incluye una ranura guía 158 que se extiende en una
dirección vertical o esencialmente vertical. Las ranuras guía
reciben tornillos de resalto 160 (véase las figuras 2 y 3) que
pasan a través de las ranuras guías angulares 162 (véase la figura
2) y a través de las respectivas ranuras guía fijas 158. En este
ejemplo, las ranuras guías angulares 162 se extienden formando un
ángulo de o aproximadamente 45º respecto de la vertical. Como se
escribe más en detalle en lo sucesivo, cada par de tornillos de
resalto 160 (dos tornillos de resalto alineado sobre lados opuestos
de la extracción 102) se acoplan a un soporte 164 de imanes
respectivo que puede por ejemplo, ser una única barra metálica, tal
como una barra de aluminio en la que va montada al menos un imán
permanente 166. Los imanes 166 pueden, por ejemplo, ser imanes de
neodimio. En este ejemplo, el extractor 102 incluye siete pares de
tornillos de resalto 160 y siete soportes de imanes correspondientes
164 y sus imanes respectivos 166. Los tornillos de resalto 160 se
insertan dentro de los extremos respectivos de los soportes 164 de
imanes mostrados. Como se ilustra también, se coloca un manguito de
nylon 167 alrededor de cada tornillo de resalto 160 para reducir la
fricción entre el tornillo de resalto 160 y los bordes de los lados
fijos 122 y los discos de leva 124 que forman las ranuras guías
fijas 158 y las ranuras guías angulares 162, respectivamente. Como
se menciona más en detalle en lo sucesivo, cuando el motor paso a
paso 126 que se conecta al montaje del motor 125 y los discos de
leva 124, desplaza los discos de leva 124 en una dirección
horizontal o esencialmente horizontal respecto de los lados fijos
122, las ranuras guías angulares 162 fuerzan los tornillos de
resalto 160 a desplazarse en una dirección vertical a lo largo de
las ranuras guías fijadas 158 y por lo tanto elevar o bajar los
soportes 164 de imanes y sus respectivos imanes 166 por las razones
mencionadas más adelante.
Como se ilustra en las figuras 6 y 7, se monta
un dispositivo termoeléctrico 168 en la parte superior de cada uno
de los bloques disipadores de calor 154. Un bloque de tubo
respectivo 170 se posiciona sobre la parte superior de cada uno de
los dispositivos termoeléctricos 168 ilustrados.
Como se muestra en las figuras 8 y 9, cada
bloque de tubo 170 respectivo incluye una pluralidad de aberturas
172, que cada una se adapta para recibir un tubo respectivo 120.
Igualmente, en este ejemplo, tres dispositivos termoeléctricos 168
se asocian a cada bloque de tubo 170 y por lo tanto, tres
dispositivos termoeléctricos se montan en la parte superior de cada
bloque disipar de calor 154 respectivo. Los dispositivos
termoeléctricos 168 se pueden controlar aplicando calor al bloque
de tubo 170 o para extraer calor del tubo 170, como lo puede
apreciar un experto en la técnica, bajo el control del controlador
(no mostrado). Cada bloque de tubo 170 también tiene un detector
resistivo 174 de dispositivo de temperatura (RTP) para detectar la
temperatura del bloque de tubo y proporcionar una señal al
controlador de manera que el controlador pueda controlar
apropiadamente los dispositivos termoeléctricos 168.
Como se ilustra, cada bloque de tubo 170 tiene
una abertura ranurada 176 dentro de la cual se recibe una tarjeta
de circuito electromagnético 178 con una pluralidad de electroimanes
180 montado sobre la misma. Los electroimanes 180 incluyen cada uno
una bobina preformada 182 que rodea un núcleo electromagnético 184,
y se acoplan en serie líneas de tarjetas de circuito impreso 186,
que se acoplan por terminales de conexión 188 al controlador (no
mostrado). Como se menciona más en detalle en lo sucesivo, el
controlador aplica una corriente a los electroimanes 180 que hacen
que los electroimanes generen un campo magnético de corriente
alterna (CA).
Como se muestra en las figuras 6 y 7, los
bloques de tubo adyacente 170 están separados por una distancia
suficiente para permitir que los soportes de imanes 164 y los imanes
permanentes 166 se deslicen a proximidad de las aberturas de tubo
172 y por lo tanto a proximidad de los tubos 120 confines
mencionados más en detalle en lo sucesivo. En este ejemplo, cada
bloque de tubo 170 incluye filas de tubos, teniendo cada una ocho
aberturas 172. El extractor 102 incluye seis bloques de tubo 170.
De este modo el extractor 102 incluye 96 aberturas 172.
A continuación se describirá el funcionamiento
del extractor 102 respecto del sistema 100 con referencia a las
figuras 1-3, 6, 7 y 10-13.
inicialmente, las muestras que contienen células se proporcionan en
tubos 112 de entrada de muestras. Estas muestras pueden ser de
cualquier tipo, incluyendo fluidos biológicos tales como sangre,
orina y fluido cerebroespinal, homogenados tisulares y muestras
medioambientales, que se han de ensayar para ácidos nucleicos (ADN
o ARN) de interés. Después de la etapa de inicio 1000, en primer
lugar se controla el robot 104 en la etapa 1010 para desplazar lo a
los soportes de puntas de pipeta 108 para coger una pluralidad de
puntas de pipeta, por ejemplo, cuatro puntas de pipeta (no
mostrado). A continuación, en robot 104 se controla para posicionar
las puntas de pipeta sobre un número respectivo de tubos de muestras
112 y retirar las muestras de dentro de las puntas de pipeta
respectivas. A continuación, el robot desplaza las puntas de pipeta
sobre el extractor 102, y libera las muestras las muestras dentro
de los respectivos tubos de muestras 120 que se han cargado por
adelantando dentro del soporte 118 posicionado sobre el extractor
102.
Cada tubo de muestras 120 se ha suministrado
previamente con partículas magnéticamente sensibles. Aunque se
puede usar cualquier tipo de partícula magnéticamente sensible,
incluyendo las partículas que tienen revestimientos poliméricos, se
prefieren las partículas descritas en la patente de los Estados
Unidos nº 5.973.138 referenciada anteriormente. Cada uno de los
tubos de muestra 112 también tiene una solución de lisis que lisa
las muestras de células.
El procedimiento anterior sigue hasta que todas
las muestras de los tubos de entrada de muestras 112 se hayan
insertado dentro de los tubos 112 correspondientes en el extractor
102. Se ha de subrayar que el número de muestras extraídas cada vez
(por ejemplo, cuatro muestras en este ejemplo) puede variar a
voluntad. Se ha de subrayar también que cada vez el robot extrae
sus muestras del interior de los tubos 112 de muestras de dentro de
las puntas de pipeta y a continuación dispensa estas muestras dentro
de los tubos 120 correspondientes, el robot se desplaza a una
posición de descarte para descartar las puntas de pipeta. El robot
104 selecciona entonces cuatro puntas de pipeta para transferir
cuatro nuevas muestras desde los tubos de entrada 112 a los tubos
120.
Una vez que todas las muestras se han cargado
dentro de los respectivos tubos de muestras 120, el controlador
controla los dispositivos termoeléctricos 168 en la etapa 1020 para
aplicar calor a las soluciones en los tubos 120 para lisar las
muestras. En este ejemplo, las soluciones en los tubos 120 se
calientan a una temperatura de o aproximadamente 70ºC. Una vez
completada la lisis, el controlador controla el dispositivo
termoeléctrico 168 para extraer calor de los bloques de tubos 170,
los tubos de muestras 120 y las soluciones contenidas en su
interior, para enfriar las soluciones a temperatura esencialmente
ambiente.
Una vez completada los procedimientos de lisis y
enfriamiento, se controla el robot 104 en la etapa 1030 para
transferir una solución ácida apropiada, tal como se describe en la
patente de los Estados Unidos nº 5.973.138, dentro de los tubos de
muestras 120. Para esto, el robot 104 se mueve hacia delante y hacia
atrás entre los soportes de puntas de pipeta 108, los recipientes
de reactivo bruto 114, el extractor 102 y la sección de desecho de
pipetas (no mostrada) para transferir la solución ácida, por
ejemplo, a cuatro tubos 120 de una vez. El robot 104 transfiere la
solución ácida a cuatro tubos correspondientes 120. En este momento,
el controlador controla los electroimanes 178 para generar un campo
magnético CA, que desmagnetiza (desgausa) las partículas 190 de
manera que las partículas puedan mezclarse libremente con la
solución ácida. En este ejemplo, el campo magnético CA se aplica a
una velocidad de o aproximadamente 60 veces por segundo. El robot
104 mezcla entonces la solución en los tubos 120 retirando la
solución de dentro de las puntas de pipeta y descargando la solución
de nuevo en los tubos 120 de una manera controlada, mientras se
levantan y bajan las puntas de pipeta dentro y fuera de los tubos
120 de una manera controlada para mantener una inmersión mínima de
las puntas.
Una vez que el robot 104 ha transferido la
solución ácida a cuatro tubos 120 correspondientes y ha realizado
las operaciones de mezclado, el controlador inactiva los
electroimanes para retirar el campo magnético CA. La solución ácida
que se ha añadido al tubo de muestras de células 120 hace que las
moléculas de ácido nucleico se unan a las partículas magnéticamente
sensibles 190. Una vez que se han añadido soluciones ácidas a las
muestras en los tubos ácidos 120, el controlador controla el motor
paso a paso 126 en la etapa 1040 para desplazar los discos de leva
124 en una dirección indicada por la flecha A en la figura 10. Esto
acciona el tornillo de resalto 160 en una dirección ascendente a lo
largo de las ranuras guía 158 de manera que los imanes 166 se
posicionen a proximidad de los tubos 120. Por lo tanto, las
partículas unidas a moléculas 190 son atraídas por los imanes 166 y
se adhieren a los lados de los tubos 120 como se muestra, por
ejemplo, en la figura 7.
A continuación se controla el robot 104 en la
etapa 1050 para usar las puntas de pipeta para retirar la solución
de los tubos 120 y descartar la solución en un recipiente de desecho
(no mostrado). Como en las operaciones mencionadas anteriormente,
cada vez que el robot 104 utiliza las puntas de pipeta para retirar
solución de los tubos 120 respectivos, el robot 104 descarta las
puntas de pipeta y utiliza nuevas puntas de pipeta antes de repetir
el proceso sobre el resto de tubos 120.
A continuación, el robot 104 es controlado en la
etapa 1060 para añadir una solución de lavado a cada uno de los
tubos 120. Cuando la solución de lavado se está añadiendo a los
tubos 120, el controlador controla los discos de lleva 124 para
desplazarse en la dirección indicada por la flecha B en las figuras
11 y 12, que hace que los tornillos de resalto 160 accionen los
soportes de imanes 164 y, por lo tanto los imanes permanentes 166,
en una dirección descendente en sus respectivas ranuras guías fijada
158. Cuando los imanes 166 se alejan de los tubos 120, las
partículas 190 retroceden dentro de las partes inferiores de los
tunos 120. En este momento, el controlador controla los
electroimanes 178 en la etapa 1070 para generar un campo magnético
CA, que desmagnetiza las partículas 190 para que de este modo las
partículas se puedan mezclar libremente con la solución de lavado
que se está añadiendo a los tubos 120. Una secuencia rápida de
diversos ciclos de aspiración y dispensación (por ejemplo 5 a 30
ciclos, o cualquier número apropiado) se usa para realizar la mezcla
de las partículas con la solución de lavado. Una vez que el robot
104 ha terminado de mezclar la solución de lavado, el controlador
inactiva los electroimanes para retirar el campo magnético CA.
Después de haber añadido la solución de lavado y
de mezclarla con las partículas, el controlador controla el motor
paso a paso 126 en la etapa 1080 para desplazar los discos de leva
124 en la dirección a lo largo de la flecha A mostrada en la figura
10, para accionar los imanes 166 en la dirección ascendente para
aproximarse a los tubos 120. Los imanes 166 aseguran de nuevo, de
este modo las partículas unidas a moléculas 190 a los lados del
tubo como se muestra en la figura 7. A continuación el robot 104 se
controla para usar las puntas de pipetas (no mostradas) para
retirar la solución de lavado de los tubos 120. esta etapa de lavado
se puede repetir tantas veces como sea necesario lavar las
partículas, por ejemplo, dos veces, como se ha decidido en la etapa
1090.
A continuación el robot 104 se controla en la
etapa 1100 para añadir un reactivo de elusión, tal como los
descritos en la patente de los Estados Unidos nº 5.973.138
referenciada más arriba, a los tubos 120. Durante este tiempo, el
controlador controla los discos de leva 124 para desplazarse en la
dirección indicada por la flecha B en las figuras 11 y 12, haciendo
que los tornillos de resalto 160 accionen los soportes de imanes
164 y de este modo, los imanes permanentes 166, en una dirección
descendente en sus ranuras guías fijas respectivas 158. Cuando los
imanes 166 se alejan de los tubos 120, las partículas 190 retroceden
dentro de las partes inferiores de los tubos 120 dentro de la
solución de elusión. La solución de elusión hace que las moléculas
de separen de las partículas 190. Igualmente, el controlador puede
controlar los electroimanes 178 para generar un campo magnético CA,
que desmagnetiza las partículas 190 para que de este modo las
partículas se puedan mezclar libremente con la solución de elusión
que se está añadiendo a los tubos 120. De manera similar a la
descrita anteriormente, el robot 104 utiliza nuevas puntas de
pipetas para cada grupo de tubos 120 a los cuales se está añadiendo
la solución de elusión desde el depósito de reactivo bruto 114.
Después de haber añadido la solución de elusión
a y mezclarla dentro de todos los tubos 120, el motor paso a paso
126 se controla en la etapa 1120 para desplazar los discos de leva
124 a lo largo de la dirección A, como se muestra en la figura 10,
para desplazar los imanes 166 a proximidad de los tubos 120. A
continuación, el robot 104 se controla para usar las puntas de
pipeta para transferir la solución de elusión que contiene las
moléculas de ácido nucleico que se han liberado de las partículas
190 dentro de las bandejas de microvaloración 116. Como con las
operaciones descritas, el robot 104 utiliza grupos nuevos de puntas
de pipetas para transferir cada grupo de muestra a los respectivos
pocillos iniciadores y las bandejas de microvaloración 116. Una vez
que todas las muestras se han transferido a los pocillos
iniciadores, el robot 104 utiliza nuevos grupos de puntas de
pipetas para transferir las muestras a los pocillos de ampliación y
las bandejas de microvaloración (no mostradas). Una vez que todas
las muestras se han transferido dentro de los pocillos de
ampliación, las bandejas de microvaloración se pueden disponer en
un dispositivo lector apropiado, tal como el sistema
BDProbeTec^{TM} ET descrito anteriormente, y el procedimiento se
completa en la etapa 1140. En una realización alternativa, el robot
puede transferir las muestras directamente desde los pocillos
iniciadores a la fase de ampliación del sistema BDProbeTec^{TM}
ET eliminando la necesidad de desplazar o transportar las bandejas
de microvaloración.
A continuación se describe otra realización del
extractor en referencia a las figuras 14-22. El
extractor 202 mostrado en estas figuras incluye un soporte amovible
218, que es similar al soporte 118 mencionado anteriormente porque
puede recibir una pluralidad de tubos 220 que contienen partículas
magnéticamente sensibles tales como las descritas anteriormente. En
este ejemplo, cada tubo 120 tiene una capacidad de 2 ml y contiene
una suspensión secada de partículas de óxido de hierro e hidróxido
de potasio.
El extractor 202 incluye, además, como se
muestra, lados fijos 222 y discos de leva 224 que se extienden en
paralelo o esencialmente en paralelo a lados fijos 222. El extractor
incluye, además, un motor paso a paso 226 conectado a un husillo
228 que va controlado por un controlador (no mostrado) del sistema
100 para deslizar los discos de leva 224 respecto de los lados
fijos 222 de una manera similar a los discos de leva 124 como se
han mencionado anteriormente. Como el extractor 102, el extractor
202 incluye un detector doméstico (detector de posición baja de
imanes permanentes) 230 que se conecta al controlador no mostrado.
El detector doméstico 230 detecta el indicador doméstico 232 para
indicar al controlador que los discos de leva 224 están posicionados
respecto de los lados fijos 222 de manera que los imanes
permanentes 266 (véase las figuras 21 y 22) estén en la posición
baja.
Como se ha mencionado anteriormente, el
extractor 202 incluye y se puede adaptar para ser usado con el
soporte 218, cuyos detalles se muestran más específicamente en las
figuras 16-19. En particular, el soporte 218 incluye
una parte inferior 234 y una parte superior 236. La parte inferior
234 incluye una pluralidad de patillas 238, mangos 240 y una
pluralidad de aberturas 242 en su interior.
Como se muestra, además, en la figura 16, la
parte inferior 234 del soporte 218 incluye cuatro ranuras 246 en su
interior (dos de las cuales no se muestran). Cada tuerca recibe una
parte de acoplamiento 248 de un dispositivo de fijación de soporte
de tubo respectivo 250 que asegura la parte superior 236 del soporte
218 a la parte inferior 234 después de haber insertado los tubos
230 dentro de las aberturas 242. La parte superior 236 topa contra
las partes superiores 252 de los tubos 220, de este modo se previene
que los tubos 220 se caigan del soporte 218, o salgan
accidentalmente del soporte por las puntas de pipetas anteriormente
mencionadas, cuando el robot 104 está añadiendo o retirando la
solución a y de los tubos 220. La parte superior 236 también
incluye aberturas 253 que proporcionan el acceso a los tubos
220.
Ahora se describirán otros detalles del
extractor 202. Como se ha ilustrado en las figuras 21 y 22, el
extractor 202 incluye una pluralidad de bloques de tubos 254
dispuestos entre los lados fijos 222 y de este modo, en el interior
del extractor 202. En este ejemplo, el extractor incluye ocho
bloques de tubos 254 que corresponden a las ocho filas de tubos. Un
dispositivo calentador resistivo 255 similar al dispositivo
termoeléctrico 168 anteriormente mencionado, pero que solamente
calienta y no enfría, se acopla a cada bloque de tubos 254 para
calentar su bloque de tubos 254 para realizar la operación de lisis
como se ha mencionado anteriormente. Sin embargo, si se desea, el
dispositivo calentador resistivo 255 se puede alternativamente
configurar como un dispositivo termoeléctrico similar al
dispositivo termoeléctrico 168 que puede calentar y enfriar. Cada
bloque de tubos 254 incluye también una pluralidad de aberturas de
tubos 256 para recibir los tubos 220. Además, cada bloque de tubos
254 incluye un RTD que proporciona lecturas de temperatura al
controlador (no mostrado) de manera que el controlador puede
controlar los dispositivos calentadores resistivos 255 cuando es
necesario para mantener la temperatura apropiada.
Cada lado fijo 222 va soportado por una placa
base 257 e incluye una ranura guía 258 (véase las figura 20 y 22)
que se extiende en una dirección vertical o esencialmente vertical.
Las ranuras guías reciben tornillos de resalto 260 que pasan a
través de las ranuras guías 262 y hacia las respectivas ranuras
guías 258. En este ejemplo, las ranuras guías 262 se extienden
formando un ángulo de o aproximadamente 45º respecto de la vertical.
Como se describe más en detalle en lo sucesivo, cada par de
tornillos de resalto 260 (dos tornillos de resalto alineados 260
alineados sobre lados opuestos del extractor 202) se acoplan a un
soporte respectivo de imanes 264 que puede ser, por ejemplo, una
única barra de metal, tal como una barra de aluminio sobre la cual
se monta al menos un imán permanente 266. Los imanes 266 pueden
ser, por ejemplo, imanes de neodimio. En este ejemplo, el extractor
202 incluye nueve pares de tornillos de resalto 260 y nueve soportes
respectivos de imanes 264 y sus imanes respectivos 266. Los
tornillos de resalto 260 se insertan, como se muestra, dentro de
los extremos respectivos de los soportes de imanes 264.Como se
ilustra, se coloca un manguito de nylon 267 alrededor de cada
tornillo de resalto 260 y puede girar alrededor del tornillo de
resalto 260 para reducir la fricción entre el tornillo de resalto
260 y los bordes de los lados fijos 222 y los discos de leva 224
que forman las ranuras guías 258 y las ranuras guías 262,
respectivamente. De manera similar a la anteriormente mencionada
respecto del extractor 102, cuando el motor paso a paso 226 que se
conecta al montaje de motor 225 y los discos de leva 224, desplaza
los discos de leva 224 en una dirección horizontal o esencialmente
horizontal respecto de los lados fijos 222, las ranuras guías 262
obligan a los tornillos de resalto 260 a desplazarse en una
dirección vertical a lo largo de las ranuras guías 258 fijas y por
lo tanto suben o bajan los soportes de imanes 264 y sus respectivos
imanes 266 por las razones anteriormente mencionadas.
Como se ha ilustrado, una tarjeta de circuito
electromagnético 268 con una pluralidad de electroimanes 270
montados sobre la misma se posiciona por debajo de cada bloque de
tubos 254. Los electroimanes 270 incluyen cada uno conexiones 272
que se acoplan al controlador (no mostrado). Como se ha mencionado
anteriormente en referencia a los electroimanes 178, el controlador
aplica una corriente a los electroimanes 270 que hace que los
electroimanes generen un campo magnético de corriente alterna
(CA).
Como también se muestra, los bloques de tubos
254 adyacentes están separados por una distancia suficiente para
permitir que los soportes 265 de imanes y los imanes permanentes 266
deslicen a proximidad de las aberturas de tubos 256 y por lo tanto
a proximidad de los tubos 220 con los fines anteriormente
mencionados respecto de los imanes permanentes 166. En este
ejemplo, cada bloque de tubo 254 incluye una fila de tubos,
comprendiendo cada una doce aberturas 256. Como se ha mencionado
anteriormente, el extractor 202 incluye ocho bloques de tubos 254.
De este modo, el extractor 202 incluye 98 abertura 254.
El funcionamiento del extractor 202 respecto del
sistema 100 es similar al del extractor 102 anteriormente
mencionado, y que ahora se describirá con referencia a las figuras
1, 10-14 y 20-22. Inicialmente, se
proporcionan muestras que contienen células en tubos de entrada de
muestras 112 (véase la figura 1). Estas muestras pueden ser de
cualquier tipo, incluyendo fluidos biológicos tales como sangre,
orina y fluido cerebroespinal, homogenados tisulares y muestras
medioambientales, que se han de ensayar para ácidos nucleicos (ADN o
ARN) de interés. Después de la etapa inicial 1000 (véase la figura
13), se controla en primer lugar el robot en la etapa 1010 para
desplazarse a los soportes de puntas de pipetas 108 para recoger una
pluralidad de puntas de pipetas, por ejemplo, cuatro puntas de
pipetas (no mostradas). A continuación el robot 104, se controla
para posicionar las puntas de pipetas sobre un número respectivo de
tubos de muestras 112 y retirar las muestras del interior de las
respectivas puntas de pipetas. El robot desplaza entonces las puntas
de pipetas al extractor 202, y libera las muestras en el interior
de los respectivos tubos de muestras 220 que se han cargado
previamente dentro del soporte 218 posicionado sobre el extractor
202.
Cada tubo de muestra 220 se ha suministrado
previamente con partículas magnéticamente sensibles 190 similares a
las descritas anteriormente. Cada uno de los tubos de muestras 112
contiene también solución de lisis que lisa las muestras de
células.
El anterior procedimiento sigue hasta que todas
las muestras de los tubos de entrada de muestras 112 se han
insertado dentro de los tubos 220 correspondientes en el extractor
202. Hay que subrayar que el número de muestras extraídas cada vez
(es decir, seis muestras en este ejemplo) puede variar si se desea.
Hay que subrayar también que cada vez el robot extraer sus muestras
de los tubos de muestras 112 dentro de puntas de pipetas y a
continuación dispensa estas muestras dentro de los tubos 220
correspondientes, el robot se desplaza a una posición de descarte
para descartar las puntas de pipetas. El robot 104 selecciona
entonces seis nuevas puntas de pipetas para transferir seis nuevas
muestras de los tubos de entrada 112 a los tubos 220.
Una vez que las muestras se han cargado dentro
de los respectivos tubos 220 de muestras, el controlador controla
los dispositivos 255 calentadores resistivos en la etapa 1020 para
aplicar calor a las soluciones en el tubo 120 para lisar las
muestras. En este ejemplo, las soluciones en los tubos 220 se
calientan a una temperatura de o aproximadamente 70ºC. una vez que
se ha completado la lisis, el controlador inhabilita los
dispositivos calentadores resistivos 255 para permitir la
convección natural para enfriar los bloques de tubos 254, los tubos
de muestras 220 y las soluciones contenidas en su interior a una
temperatura inferior a la temperatura de lisis.
Una vez que los procedimientos de lisis y
enfriamiento se completan, se controla el robot 104 en la etapa
1030 para transferir una solución ácida apropiada, tal como la
descrita en la patente de los Estados Unidos nº 5.973.138 dentro de
los tubos de muestras 120. Para esto, el robot 104 se desplaza hacia
delante y hacia atrás entre los soportes 108 de puntas de pipetas,
los recipientes 114 de reactivos brutos, el extractor 202, y la
sección de eliminación de pipetas (no mostrada) para transferir la
solución ácida, por ejemplo, a seis tubos 220 a la vez. El robot
104 transfiere la solución ácida a seis tubos 220 correspondientes
220. En este momento, el controlador controla los electroimanes 270
para generar un campo magnético CA, que desmagnetiza las partículas
190 de manera que las partículas se puedan mezclar libremente con la
solución ácida. En este ejemplo, el campo magnético CA se aplica a
una velocidad de o aproximadamente 60 veces por segundo. A
continuación el robot 104 mezcla la solución en los tubos 220
retirando la solución de las puntas de pipeta y descargando la
solución de nuevo en los tubos 220 de una manera controlada,
mientras se subes y bajas las puntas de pipeta dentro y fuera de
los tubos 220 de una manera controlada para mantener una mínima
inmersión de las puntas.
Una vez que el robot 104 ha transferido la
solución ácida a seis tubos correspondientes 220 y ha realizado las
operaciones de mezclado, el controlador desactiva los electroimanes
para eliminar el campo magnético CA. La solución ácida que se ha
añadido al tubo 220 de muestras de células hace que las moléculas de
ácido nucleico se unan a las partículas magnéticamente responsivas
190. Una vez que se han añadido las soluciones ácidas a las
muestras en los tubos de muestras 220, el controlador controla el
motor paso a paso 226 en la etapa 1040 para desplazar los discos de
leva 224 en una dirección indicada por la flecha A en la figura 10.
Esto acciona el tornillo de resalto 260 en una dirección ascendente
a lo largo de las ranuras guías fijas 258 de manera que los imanes
264 se posicionen a proximidad de los tubos 220. Por lo tanto, las
partículas unidas a moléculas 190 son atraídas por los imanes 264 y
se unen a los lados de los tubos 220 como se muestra, por ejemplo,
en la figura 22.
A continuación se controla el robot 104 en la
etapa 1050 para usar las puntas de pipetas para retirar la solución
de los tubos 220 y descartar la solución en un recipiente de desecho
(no mostrado). Como en las operaciones anteriormente mencionados,
cada vez que el robot 104 utiliza puntas de pipetas para eliminar la
solución de los tubos 220 respectivos, el robot 104 descarta las
puntas de pipetas y utiliza nuevas puntas de pipetas antes de
repetir el procedimiento sobre el resto de tubos 220.
A continuación, se controla el robot 104 en la
etapa 1060 para añadir una solución de lavado a cada uno de los
tubos 220. Cuando la solución de lavado se está añadiendo a los
tubos 220, el controlador controla los discos de leva 224 para
desplazarse en la dirección indicada por la flecha B en las figuras
11 y 12, que hace que los tornillos de resalto 260 accionen los
soportes de imanes 265 y de este modo, los imanes permanentes 266,
en una dirección descendente en sus respectivas ranuras guías fijas
258. Cuando los imanes 266 se alejan de los tubos 220, las
partículas 190 caen dentro de las partes inferiores de los tubos
220. En este momento, el controlador controla los electroimanes 270
en la etapa 1070 para generar un campo magnético CA, que
desmagnetiza las partículas 190 para que de este modo las
partículas se puedan mezclar libremente con la solución de lavado
que se añade a los tubos 220. Una rápida secuencia de diversos
ciclos de aspiración y dispensación (por ejemplo, 5 a 30 o
cualquier número apropiado) se usa para realizar la mezcla de las
partículas con la solución de lavado. Una vez que el robot 104 ha
terminado de mezclar la solución de lavado, el controlador inactiva
los electroimanes 270 para eliminar el campo magnético CA.
Después de haber añadido la solución de lavado y
de mezclarla con las partículas, el controlador controla el motor
paso a paso 226 en la etapa 1080 para desplazar los discos de leva
224 en la dirección a lo largo de la flecha A mostrada en la figura
10, para accionar los imanes 226 en la dirección ascendente para
aproximarse a los tubos 220. Los imanes 226 aseguran de este modo
las partículas unidas a moléculas 190 a los lados de los tubos de
nuevo como se muestra en la figura 22. Se controla entonces el robot
104 para usar las puntas de pipetas (no mostradas) para eliminar la
solución de lavado de los tubos 220. esta etapa de lavado se puede
repetir tantas veces como sea necesario lavar las partículas, por
ejemplo, dos veces, como se determina en la etapa 1090.
A continuación, se controla el robot 104 en la
etapa 1100 para añadir un reactivo de elusión, tal como los
descritos en la patente de los Estados Unidos nº 5.973.138
referenciado anteriormente, a los tubos 220. Durante este tiempo,
el controlador controla los discos de leva 224 para desplazarlas en
la dirección indicada por la flecha B en las figuras 11 y 12, que
hace que los tornillos de resalto 260 para accionar los soportes de
imanes 264 y, de este modo, los imanes permanentes 266, en una
dirección descendente en sus respectivas ranuras guías fijas 158.
cuando los imanes 166 se alejan de los tubos 220, las partículas 190
caen dentro de las partes inferiores de los tubos 220 dentro de la
solución de elusión. La solución de elusión hace que las moléculas
se separen de las partículas 190. Igualmente, el controlador puede
controlar los electroimanes 270 para generar un campo magnético CA,
que desmagnetiza las partículas 190 de manera que las partículas se
puedan mezclar libremente con la solución de elusión que se está
añadiendo a los tubos 220. De manera similar a la descrita
anteriormente, el robot 104 utiliza nuevas puntas de pipetas para
cada grupo de tubos 220 a los cuales se está añadiendo la solución
de elusión desde el depósito de reactivos brutos.
Después de haber añadido la solución de elusión
a, y mezclada dentro de, todos los tubos 220, el motor paso a paso
226 se controla en la etapa 1120 para desplazar los discos de leva
224 a lo largo de la dirección A, como se muestra en la figura 10,
para desplazar los imanes 266 a proximidad de los tubos 220. A
continuación, el robot 104 se controla para usar las puntas de
pipetas para transferir la solución de elusión que contiene las
moléculas de ácido nucleico que se han liberado de las partículas
190 dentro pocillos iniciadores y de las bandejas de
microvaloración 116.
Una vez que todas las muestras se han
transferido a los pocillos iniciadores, el robot 104 utiliza nuevos
grupos de puntas de pipetas para transferir las muestras a los
pocillos de ampliación y las bandejas de microvaloración (no
mostradas). Una vez que todas las muestras se han transferido dentro
de los pocillos de ampliación, las bandejas de microvaloración se
pueden disponer en un dispositivo lector apropiado, tal como el
sistema BDProbeTec^{TM} ET descrito anteriormente, y el
procedimiento se completa en la etapa 1140. En una realización
alternativa, el robot puede transferir las muestras directamente
desde los pocillos iniciadores a la fase de ampliación del sistema
BDProbeTec^{TM} ET eliminando la necesidad de desplazar o
transportar las bandejas de microvaloración.
Aunque solamente se han descrito en detalle
anteriormente dos realizaciones ejemplares de la invención, los
expertos en la técnica apreciarán que son posibles muchas
modificaciones en las realizaciones ejemplares sin salirse de las
nuevas enseñanzas y ventajas de la presente invención. Tales
modificaciones están destinadas a estar incluidas dentro del
alcance de la presente invención, tal como se define en las
siguientes reivindicaciones.
Claims (28)
1. Sistema (100) para manipular partículas
magnéticamente sensibles, con moléculas de ácidos nucleicos unidas
a las mismas y que están en una solución contenida en al menos un
tubo (120), comprendiendo dicho sistema:
un receptor de tubos (118) con al menos una
abertura para tubos adaptada para recibir dicho tubo en su
interior;
al menos un primer imán (166);
un dispositivo de desplazamiento de imanes
(104), adaptado para desplazar selectivamente dicho primer imán
entre un primer emplazamiento respecto de dicho tubo para atraer
dichas partículas magnéticamente sensibles hacia una pared interna
de dicho tubo, y un segundo emplazamiento respecto de dicho tubo
para permitir que dichas partículas magnéticamente sensibles se
suspendan en dicha solución; y
un segundo imán (178) adaptado para aplicar un
campo magnético a dichas partículas magnéticamente sensibles cuando
dicho primer imán se posiciona en dicho segundo emplazamiento, para
eliminar una magnetización impuesta sobre dichas partículas
magnéticamente sensibles por dicho primer imán.
2. Sistema según la reivindicación 1, en el
cual:
dicho segundo imán comprende un electroimán CA,
y dicho campo magnético comprende un campo magnético CA.
\vskip1.000000\baselineskip
3. Sistema según la reivindicación 1, en el
cual:
dicho segundo imán es esencialmente estacionario
respecto de dicho tubo.
\vskip1.000000\baselineskip
4. Sistema según la reivindicación 1, en el
cual:
dichos primer y segundo imanes se disponen sobre
lados esencialmente opuestos de dicho tubo.
\vskip1.000000\baselineskip
5. Sistema según la reivindicación 1, en el cual
dicho dispositivo de desplazamiento de imanes comprende:
una leva (124) y un impulsor de leva (126),
estando dicho impulsor de leva adaptado para accionar dicha primer
leva para desplazar dicho primer imán entre dicho primer y segundo
emplazamientos.
6. Sistema según la reivindicación 1, en el cual
dicho dispositivo de desplazamiento de imanes comprende:
al menos un primer panel (134) que tiene una
primera abertura en su interior;
al menos un segundo panel (136) que tiene al
menos una segunda abertura en su interior, que se extiende
transversalmente respecto a dicha primera abertura; y
una extensión que se acopla a dicho primer imán
y pasa a través de dicha primera y segunda aberturas;
estando dicho segundo panel adaptado para
desplazarse respecto de dicho primer panel para aplicar una fuerza
motriz a dicha extensión para hacer que dicha extensión se mueva a
lo largo de dicha primera y segunda aberturas entre dicho primer y
segundo emplazamientos.
7. Sistema según la reivindicación 6, que
comprende, además:
un motor adaptado para impulsar dicho segundo
panel para desplazarse respecto de dicho primer panel.
\vskip1.000000\baselineskip
8. Sistema según la reivindicación 1, en el
cual:
dicho receptor de tubos (118) tiene una
pluralidad de dichas aberturas de tubos para recibir una pluralidad
de dichos tubos en su interior;
dicho sistema comprende una pluralidad de dichos
primeros imanes (166), estando cada uno posicionado respecto de al
menos una de dichas aberturas de tubos; y dicho dispositivo de
desplazamiento de imanes (104) está adaptado para desplazar dicha
pluralidad de dichos primeros imanes entre los respectivos primer y
segundo emplazamientos.
\newpage
9. Sistema según la reivindicación 8, que
comprende, además,
una pluralidad de segundos imanes (178), estando
adaptado cada uno para aplicar un campo magnético a dichas
partículas magnéticamente sensibles en al menos uno de dichos tubos
cuando uno respectivo de dichos primeros imanes se posiciona en
dicho respectivo segundo emplazamiento para eliminar esencialmente
una magnetización impuesta sobre dichas partículas magnéticamente
sensibles por dicho respectivo primer imán.
10. Sistema según la reivindicación 1, que
comprende, además,
un elemento térmico (168), adaptado para al
menos una de entre aplicar energía térmica a dicha solución en
dicho tubo y extraer energía térmica de dicha solución en dicho
tubo.
11. Sistema según la reivindicación 1, en el
cual:
Dicho dispositivo de desplazamiento de imanes
(104) está adaptado para desplazar dicho imán entre dicho primer y
dicho segundo emplazamientos en una primera dirección que es
esencialmente paralela a un eje longitudinal de dicho tubo.
12. Sistema según la reivindicación 1, que
comprende, además,
al menos un par de dichos primeros imanes (166);
y en el cual dicho dispositivo de desplazamiento de imanes está
adaptado para desplazar selectivamente cada uno de dicho primer imán
de dicho par de primeros imanes entre dicho respectivos primeros
emplazamiento respecto de dicho tubo para atraer dichas partículas
magnéticamente sensibles hacia una pared interna de dicho tubo, y
dichos respectivos segundos emplazamientos respecto de dicho tubo
para permitir que dichas partículas magnéticamente sensibles se
suspendan en dicha solución.
13. Sistema según la reivindicación 12, en el
cual:
dicho receptor de tubos (118) tiene una
pluralidad de dichas aberturas de tubos para recibir una pluralidad
de dichos tubos en su interior;
dicho sistema comprende una pluralidad de dichos
primeros imanes (166), estando cada uno posicionado respecto de al
menos una de dichas aberturas de tubos; y
dicho dispositivo de desplazamiento de imanes
(104) está adaptado para desplazar dicha pluralidad de dichos pares
de primeros imanes entre los respectivos primer y segundo
emplazamientos.
14. Sistema según la reivindicación 13, que
comprende, además,
una pluralidad de segundos imanes (178), estando
adaptado cada uno para aplicar un campo magnético a dichas
partículas magnéticamente sensibles en al menos uno de dichos tubos
cuando uno respectivo de dichos pares de primeros imanes se
posiciona en dicho respectivo segundo emplazamiento para eliminar
esencialmente una magnetización impuesta sobre dichas partículas
magnéticamente sensibles por dicho respectivo par de dichos
primeros imanes
15. Sistema según la reivindicación 1, en el
cual:
dicho segundo imán es dispuesto por debajo de
una parte inferior de dicha abertura de tubo.
\vskip1.000000\baselineskip
16. Procedimiento para manipular partículas
magnéticamente sensibles que tienen moléculas de ácido nucleico
unidas a las mismas y que están en una solución contenida en al
menos un tubo, comprendiendo dicho procedimiento:
recibir dicho tubo en una abertura de recepción
de tubos de un receptor de tubos;
desplazar selectivamente un primer imán a un
primer emplazamiento respecto de dicho tubo para atraer dichas
partículas magnéticamente sensibles hacia una pared interna de dicho
tubo, y a un segundo emplazamiento respecto de dicho tubo para
permitir que dichas partículas magnéticamente sensibles se suspendan
en dicha solución; y
aplicar un campo magnético a dichas partículas
magnéticamente sensibles cuando dicho primer imán está posicionado
en dicho segundo emplazamiento, para esencialmente eliminar una
magnetización impuesta sobre dichas partículas magnéticamente
sensibles por dicho primer imán.
17. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicho campo magnético comprende un campo
magnético CA.
\newpage
18. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicho primer imán es acoplado a una leva, y
dicha etapa de desplazamiento selectivo comprende la etapa de
impulsar dicha levar para desplazar dicho primer imán entre dicho
primer y dicho segundo emplazamientos.
19. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicho receptor de tubo tiene una pluralidad de
dichas aberturas de tubos para recibir una pluralidad de dichos
tubos en su interior; y
dicha etapa de desplazamiento comprende la etapa
de desplazar una pluralidad de dichos primeros imanes entre dichos
respectivos primer y segundo emplazamientos respecto de dichos
respectivos tubos.
20. Procedimiento según la reivindicación 19, en
el cual:
dicha etapa de aplicación aplica un campo
magnético respectivo a dichas partículas magnéticamente sensibles
en cada uno de dichos tubos cuando uno respectivo de dichos primeros
imanes está posicionado en respectivo dicho segundo emplazamiento
para eliminar esencialmente una magnetización impuesta sobre dichas
partículas magnéticamente sensibles por dicho respectivo primer
imán.
21. Procedimiento según la reivindicación 16,
que comprende, además,
al menos una de entre aplicar energía térmica a
dicha solución en dicho tubo y extraer energía térmica de dicha
solución en dicho tubo.
22. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicha etapa de desplazamiento de imanes desplaza
dicho imán entre dicho primer y dicho segundo emplazamientos en una
primera dirección que es esencialmente paralela a un eje
longitudinal de dicho tubo.
23. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicha etapa de aplicación aplica dicho campo
magnético a dichas partículas magnéticamente sensibles desde un
lado de dicho tubo esencialmente opuesto a un lado adyacente a dicho
primer emplazamiento.
24. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicho etapa de desplazamiento de imanes mantiene
dicho imán en dicho primer emplazamiento durante un tiempo
suficiente para la eliminación de dicha solución de dicho tubo.
25. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicha etapa de desplazamiento selectivo desplaza
selectivamente cada uno de dicho primer imán de un par de primeros
imanes entre dichos respectivos primeros emplazamientos respecto de
dicho tubo para atraer dichas partículas magnéticamente sensibles
hacia una pared interna de dicho tubo, y dichos respectivos segundos
emplazamientos respecto de dicho tubo para permitir que dichas
partículas magnéticamente sensibles se suspendan en dicha
solución.
26. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicho receptor de tubos tiene una pluralidad de
dichas aberturas de tubos para recibir una pluralidad de dichos
tubos en su interior;
dicha etapa de desplazamiento selectivo desplaza
selectivamente dicha pluralidad de dichos pares de primeros imanes
entre los respectivos primero y segundo emplazamientos.
27. Procedimiento según la reivindicación 26, en
el cual:
dicha etapa de aplicación aplica dicho campo
magnético respectivo a dichas partículas magnéticamente sensibles
en cada uno de dichos tubos cuando un respectivo de dichos pares de
dichos primeros imanes se posiciona en un respectivo dicho segundo
emplazamiento para eliminar esencialmente una magnetización impuesta
sobre dichas partículas magnéticamente sensibles por dicho par
respectivo de dichos primeros imanes.
28. Procedimiento según la reivindicación 16, en
el cual:
dicha etapa de aplicación aplica dicho campo
magnético respectivo por debajo de una parte inferior de dicha
abertura de tubos.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US57354000A | 2000-05-19 | 2000-05-19 | |
| US573540 | 2000-05-19 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ES2319101T3 true ES2319101T3 (es) | 2009-05-04 |
Family
ID=24292405
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ES01937472T Expired - Lifetime ES2319101T3 (es) | 2000-05-19 | 2001-05-17 | Sistema y procedimiento de manipulacion de particulas magneticamente sensibles en muestras de fluido para extraer el adn o el arn de una muestra. |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20020008053A1 (es) |
| EP (1) | EP1282469B1 (es) |
| JP (1) | JP4792192B2 (es) |
| AT (1) | ATE419919T1 (es) |
| DE (1) | DE60137323D1 (es) |
| ES (1) | ES2319101T3 (es) |
| WO (1) | WO2001089705A2 (es) |
Families Citing this family (52)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6048734A (en) | 1995-09-15 | 2000-04-11 | The Regents Of The University Of Michigan | Thermal microvalves in a fluid flow method |
| US6692700B2 (en) | 2001-02-14 | 2004-02-17 | Handylab, Inc. | Heat-reduction methods and systems related to microfluidic devices |
| US7010391B2 (en) | 2001-03-28 | 2006-03-07 | Handylab, Inc. | Methods and systems for control of microfluidic devices |
| US7323140B2 (en) | 2001-03-28 | 2008-01-29 | Handylab, Inc. | Moving microdroplets in a microfluidic device |
| US7829025B2 (en) | 2001-03-28 | 2010-11-09 | Venture Lending & Leasing Iv, Inc. | Systems and methods for thermal actuation of microfluidic devices |
| US6852287B2 (en) | 2001-09-12 | 2005-02-08 | Handylab, Inc. | Microfluidic devices having a reduced number of input and output connections |
| US8895311B1 (en) | 2001-03-28 | 2014-11-25 | Handylab, Inc. | Methods and systems for control of general purpose microfluidic devices |
| EP1494814A1 (en) * | 2002-04-12 | 2005-01-12 | Instrumentation Laboratory Company | Immunoassay probe |
| CA2483445C (en) | 2002-04-26 | 2011-04-19 | Abbott Laboratories | Structure and method for handling magnetic particles in biological assays |
| WO2003097808A2 (en) * | 2002-05-17 | 2003-11-27 | Becton, Dickinson And Company | Automated system for isolating, amplyifying and detecting a target nucleic acid sequence |
| SE522099C2 (sv) * | 2002-06-07 | 2004-01-13 | Genovis Ab | Anordning för multipel simultan genöverföring |
| US6856163B2 (en) | 2002-09-25 | 2005-02-15 | Marvell World Trade Ltd. | Power supply decoupling for parallel terminated transmission line |
| US7731906B2 (en) | 2003-07-31 | 2010-06-08 | Handylab, Inc. | Processing particle-containing samples |
| ES2572382T3 (es) * | 2004-05-03 | 2016-05-31 | Handylab Inc | Un dispositivo microfluídico para el procesamiento de muestras que contienen polinucleótidos |
| US8852862B2 (en) | 2004-05-03 | 2014-10-07 | Handylab, Inc. | Method for processing polynucleotide-containing samples |
| US8211386B2 (en) | 2004-06-08 | 2012-07-03 | Biokit, S.A. | Tapered cuvette and method of collecting magnetic particles |
| JP2009511059A (ja) * | 2005-10-11 | 2009-03-19 | ハンディーラブ インコーポレイテッド | ポリヌクレオチドサンプル調製装置 |
| EP3088083B1 (en) | 2006-03-24 | 2018-08-01 | Handylab, Inc. | Method of performing pcr with a mult-ilane cartridge |
| US11806718B2 (en) | 2006-03-24 | 2023-11-07 | Handylab, Inc. | Fluorescence detector for microfluidic diagnostic system |
| US8883490B2 (en) * | 2006-03-24 | 2014-11-11 | Handylab, Inc. | Fluorescence detector for microfluidic diagnostic system |
| US7998708B2 (en) * | 2006-03-24 | 2011-08-16 | Handylab, Inc. | Microfluidic system for amplifying and detecting polynucleotides in parallel |
| US10900066B2 (en) | 2006-03-24 | 2021-01-26 | Handylab, Inc. | Microfluidic system for amplifying and detecting polynucleotides in parallel |
| US8709787B2 (en) * | 2006-11-14 | 2014-04-29 | Handylab, Inc. | Microfluidic cartridge and method of using same |
| US8550523B2 (en) * | 2007-06-22 | 2013-10-08 | Data I/O Corporation | Pick and place system |
| AU2013205252B8 (en) * | 2007-07-13 | 2015-10-22 | Handylab, Inc. | Integrated apparatus for performing nucleic acid extraction and diagnostic testing on multiple biological samples |
| US8182763B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-05-22 | Handylab, Inc. | Rack for sample tubes and reagent holders |
| US9186677B2 (en) * | 2007-07-13 | 2015-11-17 | Handylab, Inc. | Integrated apparatus for performing nucleic acid extraction and diagnostic testing on multiple biological samples |
| US8287820B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-10-16 | Handylab, Inc. | Automated pipetting apparatus having a combined liquid pump and pipette head system |
| US9618139B2 (en) | 2007-07-13 | 2017-04-11 | Handylab, Inc. | Integrated heater and magnetic separator |
| JP5651011B2 (ja) | 2007-07-13 | 2015-01-07 | ハンディーラブ インコーポレイテッド | ポリヌクレオチド捕捉材料およびその使用方法 |
| US8105783B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-01-31 | Handylab, Inc. | Microfluidic cartridge |
| US8133671B2 (en) | 2007-07-13 | 2012-03-13 | Handylab, Inc. | Integrated apparatus for performing nucleic acid extraction and diagnostic testing on multiple biological samples |
| US20090027998A1 (en) * | 2007-07-25 | 2009-01-29 | Abbott Laboratories | Magnetic mixer |
| US20100009351A1 (en) * | 2008-07-11 | 2010-01-14 | Handylab, Inc. | Polynucleotide Capture Materials, and Method of Using Same |
| USD787087S1 (en) | 2008-07-14 | 2017-05-16 | Handylab, Inc. | Housing |
| EP2191900B1 (en) | 2008-11-28 | 2016-03-30 | F. Hoffmann-La Roche AG | System and method for nucleic acids containing fluid processing |
| ES2617599T3 (es) | 2011-04-15 | 2017-06-19 | Becton, Dickinson And Company | Termociclador microfluídico de exploración en tiempo real y métodos para termociclado sincronizado y detección óptica de exploración |
| CN102500460B (zh) * | 2011-09-26 | 2014-04-30 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种气助超顺磁性萃取方法 |
| KR102121853B1 (ko) | 2011-09-30 | 2020-06-12 | 벡톤 디킨슨 앤드 컴퍼니 | 일체화된 시약 스트립 |
| USD692162S1 (en) | 2011-09-30 | 2013-10-22 | Becton, Dickinson And Company | Single piece reagent holder |
| EP2773892B1 (en) | 2011-11-04 | 2020-10-07 | Handylab, Inc. | Polynucleotide sample preparation device |
| BR112014018995B1 (pt) | 2012-02-03 | 2021-01-19 | Becton, Dickson And Company | sistemas para executar ensaio automatizado |
| CN106367311B (zh) * | 2016-12-08 | 2019-07-12 | 湖南圣湘生物科技有限公司 | 一种核酸提取系统及其使用方法 |
| KR20180090543A (ko) * | 2017-02-03 | 2018-08-13 | 주식회사 미코바이오메드 | 생물학적 시료로부터 목적하는 물질을 분리 또는 정제하기 위한 장치 및 방법 |
| US11433402B2 (en) * | 2017-07-19 | 2022-09-06 | Amgen Inc. | Magnetic assisted separation apparatuses and related methods |
| EP3470141B1 (en) * | 2017-10-11 | 2024-04-24 | F. Hoffmann-La Roche AG | Apparatus and method for processing a biological sample with magnetic particles |
| CN107988045B (zh) * | 2018-01-08 | 2024-01-19 | 深圳市朗司医疗科技有限公司 | 一种基于磁珠法的全自动核酸纯化系统 |
| EP3520893B1 (en) * | 2018-02-02 | 2020-07-22 | F. Hoffmann-La Roche AG | System for the thermally controlled processing of a biological sample |
| JP2019148556A (ja) * | 2018-02-28 | 2019-09-05 | シスメックス株式会社 | Ｂｆ分離装置、試料分析装置およびｂｆ分離方法 |
| CN108889627A (zh) * | 2018-07-26 | 2018-11-27 | 天津鹏宇兴业五金制品有限公司 | 一种具有减震功能的钢钉筛选装置 |
| US20220333058A1 (en) * | 2019-09-20 | 2022-10-20 | Siemens Healthcare Diagnostics Inc. | Improved rotor mixer for agitation of fluids during sample preparation |
| CN111896760B (zh) * | 2020-07-15 | 2024-08-13 | 宁波华仪宁创智能科技有限公司 | 封闭空间的控制方法及自动进样方法 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS53136764A (en) * | 1977-05-02 | 1978-11-29 | Fuji Electric Co Ltd | Magnetism separation device |
| US5147529A (en) * | 1988-08-10 | 1992-09-15 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for automatically processing magnetic solid phase reagents |
| GB9323305D0 (en) * | 1993-11-11 | 1994-01-05 | Medinnova Sf | Isoaltion of nucleic acid |
| US5686271A (en) * | 1994-06-09 | 1997-11-11 | Gamera Bioscience Corporation | Apparatus for performing magnetic cycle reaction |
| US6027945A (en) * | 1997-01-21 | 2000-02-22 | Promega Corporation | Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles |
| DE69839294T2 (de) * | 1997-09-29 | 2009-04-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Gerät zur Abscheidung magnetischer Teilchen |
| JPH11326338A (ja) * | 1998-05-18 | 1999-11-26 | Tosoh Corp | 反応テーブル |
| DE59912484D1 (de) * | 1998-07-31 | 2005-10-06 | Tecan Trading Ag Maennedorf | Magnetseparator |
| US5973138A (en) * | 1998-10-30 | 1999-10-26 | Becton Dickinson And Company | Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagnetic particles |
-
2001
- 2001-05-17 JP JP2001585934A patent/JP4792192B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-17 ES ES01937472T patent/ES2319101T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-17 WO PCT/US2001/015882 patent/WO2001089705A2/en active Application Filing
- 2001-05-17 DE DE60137323T patent/DE60137323D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-05-17 AT AT01937472T patent/ATE419919T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-05-17 EP EP01937472A patent/EP1282469B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-09-21 US US09/960,431 patent/US20020008053A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2004515333A (ja) | 2004-05-27 |
| EP1282469B1 (en) | 2009-01-07 |
| WO2001089705A3 (en) | 2002-03-21 |
| ATE419919T1 (de) | 2009-01-15 |
| EP1282469A2 (en) | 2003-02-12 |
| US20020008053A1 (en) | 2002-01-24 |
| DE60137323D1 (de) | 2009-02-26 |
| JP4792192B2 (ja) | 2011-10-12 |
| WO2001089705A2 (en) | 2001-11-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2319101T3 (es) | Sistema y procedimiento de manipulacion de particulas magneticamente sensibles en muestras de fluido para extraer el adn o el arn de una muestra. | |
| JP3676754B2 (ja) | 試料からｄｎａ又はｒｎａを収集するために流体試料内の磁気応答粒子を操作するための装置及び方法 | |
| ES2625468T3 (es) | Dispositivo y método para separar, mezclar y concentrar partículas magnéticas con un fluido y uso del mismo en métodos de purificación | |
| ES2315238T3 (es) | Metodo para mezclar particulas magneticas con un fluido. | |
| US10139012B2 (en) | Integrated heater and magnetic separator | |
| US20170298417A1 (en) | System and Method for Nucleic Acids Containing Fluid Processing | |
| US20090176308A1 (en) | Apparatus and method for the purification of biomolecules | |
| JP5763652B2 (ja) | 磁性サンプルの精製 | |
| WO1996029602A1 (fr) | Procede et dispositif pour le traitement de liquides a l'aide d'un distributeur | |
| KR20090107927A (ko) | 자동정제장치, 멀티 웰 플레이트 키트 및 생물학적 시료로부터 핵산을 추출하는 방법 | |
| ES2395402T3 (es) | Método para procesar una muestra que contiene al menos un elemento biológico | |
| CN104755169A (zh) | 操纵固体载体的方法及操纵固体载体的设备 | |
| Mulberry et al. | Handheld battery-operated sample preparation device for qPCR nucleic acid detections using simple contactless pouring | |
| ES2746567T3 (es) | Procedimiento y sistema de extracción magnética de componentes en una muestra líquida | |
| ES2862393T3 (es) | Procedimiento y sistema de extracción magnética de componentes en una muestra líquida | |
| EP3935163A1 (en) | Preparation methods and apparatus adapted to filter small nucleic acids from biological samples | |
| US20040065593A1 (en) | Automated magnetic sorter | |
| CN118556181A (zh) | 用于磁性提取样本中组分的模块 | |
| CN116547383A (zh) | 用于多核苷酸纯化的系统和方法 |