ES2292625T3 - Polisacaridos con actividad antitrombotica que comprenden al menos un enlace covalente con la biotina o un derivado de la biotina. - Google Patents
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Abstract
Polisacáridos sintéticos con actividad antitrombótica y sus sales farmacéuticamente aceptables caracterizados por que presentan al menos un enlace covalente con biotina o un derivado de la biotina.
Description
Polisacáridos con actividad antitrombótica que
comprenden al menos un enlace covalente con la biotina o un derivado
de la biotina.
La presente invención se refiere a nuevos
oligo- y polisacáridos de síntesis que presentan al menos
un enlace covalente con biotina o un derivado de la biotina y que
poseen las actividades farmacológicas anticoagulantes y
antitrombóticas de la heparina.
La heparina cataliza, especialmente mediante la
antitrombina III (AT III), la inhibición de dos enzimas que
intervienen en la reacción de coagulación de la sangre, es decir, el
factor Xa y el factor IIa (o trombina). Las preparaciones de
heparinas de bajo peso molecular (HBPM), contienen las cadenas
formadas por 4 a 30 monosacáridos y tienen la propiedad de actuar
más selectivamente sobre el factor Xa que sobre la trombina.
Se sabe que la inhibición del factor Xa requiere
la fijación de la heparina sobre la AT III mediante el dominio del
enlace con la antitrombina (Dominio-A) y que la
inhibición del factor IIa (trombina) requiere la fijación a la AT
III, mediante el Dominio-A, así como a la trombina
mediante un dominio de enlace menos bien definido
(Dominio-T).
Son conocidos los oligosacáridos de síntesis que
corresponden al dominio Dominio-A de la heparina. Se
describen por ejemplo en las patentes europeas EP 84999 y EP
529715, la solicitud de patente internacional publicada número WO
99/36428 y la publicación Bioorg.
Med. Chem. 1.998,
6,1.509-1.516. Estos oligosacáridos de síntesis
tienen la propiedad de inhibir selectivamente mediante la
antitrombina III, el factor Xa de la coagulación sin ninguna
actividad sobre la trombina. Manifiestan actividad antitrombótica
en la trombosis venosa.
Se han descrito oligosacáridos de síntesis
capaces de inhibir la trombina y el factor Xa mediante la activación
de la AT III, en las solicitudes de patente internacionales
publicadas números WO 98/03554 y WO 99/36443.
En estas solicitudes de patente se describen
nuevos derivados polisacarídicos sulfatados y alquilados
biológicamente activos. Son en particular anticoagulantes y
antitrombóticos. Se ha demostrado en particular que estos
polisacáridos sulfatados y alquilados pueden ser poderosos
antitrombóticos y anticoagulantes según la disposición de los
grupos alquilo y los grupos sulfato soportados por la cadena
glucídica. De manera más general, se ha encontrado que por
realización de secuencias polisacarídicas es posible modular con
precisión las actividades de tipo GAGs para obtener productos muy
activos que presenten las propiedades farmacológicas anticoagulantes
y antitrombóticas de la heparina. Con respecto a la heparina,
presentan la ventaja de tener una estructura determinada y de no
reaccionar con el factor 4 plaquetario, causa de los efectos
trombocitopeniantes de la heparina.
Sin embargo, se puede comprobar que el uso en
terapéutica humana de ciertos productos descritos en las solicitudes
de patente internacionales publicadas números WO 98/03554 y WO
99/36443 y en la patente europea EP 529715 puede ser delicado, en
particular si estos productos poseen una semivida larga. En el campo
de la prevención o del tratamiento de la trombosis con los
productos anteriores, se debe restablecer o mantener la fluidez de
la sangre mientras se evita provocar una hemorragia.
Se sabe bien en efecto que por una causa
accidental cualquiera, se puede desencadenar una hemorragia en un
paciente bajo tratamiento. Se puede necesitar igualmente intervenir
quirúrgicamente a un enfermo en tratamiento antitrombótico. Además,
durante ciertos actos quirúrgicos, se pueden utilizar
anticoagulantes en dosis importantes para impedir la coagulación de
la sangre y es necesario neutralizarlos al final de la intervención.
Es interesante pues tener agentes antitrombóticos neutralizables
para detener la actividad anticoagulante en cualquier momento. O,
los oligosacáridos de síntesis conocidos, descritos anteriormente,
no se pueden neutralizar fácilmente por los antídotos conocidos de
la heparina o de las HBPM, incluido el sulfato de protamina.
La presente invención se refiere a nuevos
polisacáridos de síntesis, de estructura próxima a la de los
compuestos descritos en las solicitudes de patente internacionales
publicadas números WO 98/03554 y WO 99/36443 y en la patente
europea EP 529715: las estructuras de los oligosacáridos de síntesis
objeto de la invención se modifican en el sentido que presenten un
enlace covalente con la biotina (ácido
hexahidro-2-oxo-1H-tieno[3.4-d]imidazol-4-pentanoico)
o con un derivado de la biotina. De manera sorprendente, parece ser
que la introducción de biotina o de un derivado de la biotina no
modifica la actividad farmacológica de los polisacáridos. En efecto,
los nuevos polisacáridos, objeto de la invención, presentan una
actividad antitrombótica comparable con la de los oligosacáridos de
la técnica anterior. Pero poseen además la ventaja de poder ser
neutralizados rápidamente por un antídoto específico, en situación
de urgencia. Este antídoto específico es la avidina (The Merck
Index, Duodécima Edición, 1.996, M.N. 920, páginas
151-152) o la estreptavidina, dos proteínas
tetrámeras de masas respectivas iguales a aproximadamente 66.000 y
60.000 Da, que poseen una afinidad muy fuerte por la biotina.
De manera general, la invención se refiere a los
polisacáridos sintéticos con actividad antitrombótica que presentan
al menos un enlace covalente con la biotina o un derivado de la
biotina.
\newpage
Como derivado de la biotina, se pueden citar los
derivados de la biotina indicados en el catálogo Pierce
1.999-2.000 páginas 62 a 81, por ejemplo el
6-biotinamidohexanoato,
o el
6-(6-biotinamidohexanamido)hexanoato,
o incluso el
2-biotinamidoetanotiol
o incluso los compuestos de las
fórmulas
siguientes:
En particular, la presente invención tiene por
objeto los polisacáridos de fórmula (I):
en la
que:
- -
- el trazo ondulado representa un enlace situado bien por debajo o por arriba del plano del anillo piranósico,
Po representa un polisacárido, que contiene n
unidades monosacáridas idénticas o diferentes, unidas por su
carbono anomérico a Pe,
es una representación esquemática
de una unidad monosacárida con estructura piranósica elegida entre
hexosas, pentosas y los desoxiazúcares correspondientes, estando
unida esta unidad por su carbono anomérico a otra unidad
monosacárida y estando sustituidos los grupos hidroxi de esta unidad
por grupos R_{1} idénticos o diferentes, siendo R_{1} tal como
se define a
continuación,
- -
- Pe representa un pentasacárido de estructura:
- -
- h es igual a 1 ó 2,
- -
- n es un número entero y puede tener cualquier valor de 0 a 25,
- -
- R_{1} representa la agrupación -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{2} representa la agrupación -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{3} representa la agrupación -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}),
- -
- R_{4} representa la agrupación -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-} o bien R_{4} constituye un puente -O-CH_{2}-, estando unido el grupo -CH_{2}-al átomo de carbono portador de la función carboxílica en el mismo ciclo; entendiéndose que al menos uno de los sustituyentes R_{1}, R_{2}, R_{3} o R_{4} representa un grupo -T-Biot,
- -
- W representa un átomo de oxígeno o un grupo metileno,
- -
- T representa una de las secuencias elegida entre: NH,
o
en las que j y k, idénticas o
diferentes, son números enteros que pueden ser cualquier valor de 1
a
10;
- -
- Biot representa el grupo:
así como sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
Como se indicó anteriormente, se observará de
manera general en la presente descripción que un trazo ondulado
representa un enlace situado, bien por debajo o por encima del plano
del ciclo piranósico.
Los monosacáridos contenidos en Po pueden ser
idénticos o diferentes entre sí, pudiendo ser los enlaces
interglicosídicos del tipo \alpha o \beta.
Estos monosacáridos se eligen ventajosamente
entre las hexosas D o L: alosa, altrosa, glucosa, manosa, galosa,
idosa, galactosa, talosa (en este caso h = 2) o entre las pentosas D
o L: ribosa, arabinosa, xilosa, lixosa (en este caso h = 2). Se
pueden utilizar igualmente otros monosacáridos tales como por
ejemplo los desoxiazúcares (h = 1 y/o -CH_{2}R_{1} =
CH_{3}).
La parte polisacárida Po puede estar constituida
por 0 a 25 unidades monosacáridas alquiladas y di-o
trisulfatadas.
La parte polisacárida Po puede estar constituida
igualmente por 0 a 25 unidades monosacáridas alquiladas y
mono-o disulfatadas.
La parte polisacárida Po puede estar constituida
por 0 a 25 unidades monosacáridas alquiladas no cargadas y/o
parcialmente cargadas y/o totalmente cargadas.
Las unidades cargadas o no cargadas pueden estar
dispersadas a lo largo de la cadena o por el contrario pueden estar
agrupadas en dominios sacáridos cargados o no cargados.
Los enlaces entre las unidades pueden ser 1,2;
1,3; 1,4; 1,5; 1,6 y del tipo \alpha o \beta.
En la presente descripción, se ha elegido
representar las conformaciones ^{1}C_{4} para el ácido
L-idurónico, ^{4}C_{1} para el ácido
D-glucurónico, pero se tiene que destacar que de una
manera general, la conformación en disolución de las unidades
monosacáridas es fluctuante.
Así, el ácido L-idurónico puede
tener la conformación ^{1}C_{4} ^{2}S_{0} o
^{4}C_{1}.
Según uno de sus aspectos, la invención se
refiere a los polisacáridos de fórmula (I.1):
en los
que:
representa una familia particular
de polisacáridos Po, unidos por su carbono anomérico a Pe tal como
se define para
(I),
es tal como se define para
(I),
- -
- los grupos R_{1} son tal como se define para (I) y, para un mismo monosacárido, pueden ser idénticos o diferentes,
- -
- el monosacárido contenido en [ ]_{m} se repite m veces, el monosacárido contenido en [ ]_{t} se repite t veces, el monosacárido contenido en [ ]_{p} se repite p veces,
- -
- m es un número entero que varía de 1 a 5, t es un número entero que varía de 0 a 24 y p es un número entero que varía de 0 a 24, entendiéndose que 1 \leq m+t+p \leq 25,
así como sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
Entre estos polisacáridos de fórmula (I.1), los
polisacáridos en los que uno solo de los sustituyentes R_{1},
R_{2}, R_{3} o R_{4} representa la agrupación
T-Biot, siendo T y Biot tal como se define para (I),
así como sus sales farmacéuticamente aceptables, constituyen otro
aspecto de la invención.
Según un aspecto particular, la invención se
refiere a los hexadecasacáridos de fórmula (1.2):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en los
que:
- -
- T representa una de las secuencias elegida entre: NH,
o
en las que j y k, idénticas o
diferentes, son números enteros que pueden ser cualquier valor de 1
a
10;
- -
- Biot representa el grupo:
- -
- Pe representa un pentasacárido de estructura:
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- -
- R_{1} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{2} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{3} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}),
- -
- R_{4} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-} o bien R_{4} constituye un puente -O-CH_{2}-, estando unido el grupo -CH_{2}-al átomo de carbono portador de la función carboxílica en el mismo ciclo,
- -
- W representa un átomo de oxígeno o un grupo metileno,
así como sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
Según otro de sus aspectos, la invención se
refiere a los pentasacáridos de fórmula (I.3):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en los que R_{1}, R_{2},
R_{3}, R_{4} y W son tal como se definió para (I), así como sus
sales farmacéuticamente
aceptables.
Entre estos pentasacáridos de fórmula (1.3), los
pentasacáridos en los que uno solo de los sustituyentes R_{1},
R_{2}, R_{3} o R_{4} representa la agrupación
-T-Biot, siendo T y Biot tal como se
definió para (I), así como sus sales farmacéuticamente aceptables,
constituyen otro aspecto de la invención.
Entre estos pentasacáridos de fórmula (1.3), la
invención tiene igualmente por objeto los pentasacáridos de fórmula
(1.4):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- -
- T representa una de las secuencias elegida entre: NH,
o
en las que j y k, idénticas o
diferentes, son número enteros que pueden ser cualquier valor de 1 a
10;
- -
- Biot representa el grupo:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
- -
- R_{1} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{2} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{3} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}),
- -
- R_{4} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-} o bien R_{4} constituye un puente -O-CH_{2}-, estando unido el grupo -CH_{2}-al átomo de carbono portador de la función carboxílica en el mismo ciclo,
- -
- W representa un átomo de oxígeno o un grupo metileno, así como sus sales farmacéuticamente aceptables.
Según otro de sus aspectos, la invención se
refiere a los siguientes polisacáridos:
- -
- Sal de sodio de metil(2,3,4,6-tetra-O-sufonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(6-biotinamido-6-desoxi-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-[(2,3,6-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)]_{3}-(6-O-sulfonato-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio de metil(2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(6-[6-(biotinamidohexamido)hexamido]-6-desoxi-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-[(2,3,6-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)]_{3}-(6-O-sulfonato-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosiluró- nico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosilu- rónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio de metil(2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(6-[6-(6-biotanamidohexamido)hexamido]-6-desoxi-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-[(2,3,6-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)]_{3}-(6-O-sulfonato-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosiluró- nico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosilu- rónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio de metil(2-biotinamido-2-desoxi-3,4-di-O-metil-6-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio de metil(2-[N-(6-biotinamido hexanoil)]-2-desoxi-3,4-di-O-metil)-6-O-sulfonato-\alpha-D-gluco- piranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio de metil(2-[6-(6-biotinamidohexamido) hexamido]-2-desoxi-3,4-di-O-metil-6-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido.
La invención incluye los polisacáridos en su
forma ácida o en la forma de una cualquiera de sus sales
farmacéuticamente aceptables. En la forma ácida, las funciones
-COO^{-} y -SO_{3} están respectivamente
en forma -COOH y -SO_{3}H.
Se entiende por sal farmacéuticamente aceptable
de los polisacáridos de la invención, un polisacárido en el que una
o varias de las funciones -COO-o/y
-SO_{3}^{-} están unidas de manera iónica a un catión
farmacéuticamente aceptable. Las sales preferidas según la
invención son aquéllas en las que el catión se elige entre los
cationes de metales alcalinos y más preferiblemente aún aquéllas en
las que el catión es Na^{+} o K^{+}.
Los compuestos de la fórmula (I) anterior
comprenden igualmente aquéllos en los que uno o varios átomos de
hidrógeno o de carbono se han reemplazado con su isótopo radiactivo
por ejemplo el tritio o el carbono-14. De los
compuestos señalados son útiles en los trabajos de investigación,
metabolismo o farmacocinética en los ensayos bioquímicos como
ligandos.
En su principio el procedimiento de preparación
de los compuestos según la invención utiliza sintones de base
di-u oligosacarídica preparados como se indicó
anteriormente en la bibliografía. Se referirá especialmente a las
patentes o solicitudes de patente europeas EP 300099, EP 529715, EP
621282 y EP 649854 así como a los documentos C. van Boeckel, M
Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1.993, 32,
1.671-1.690. Estos sintones se acoplan a
continuación unos con otros de manera que se proporcione un
equivalente totalmente protegido de un polisacárido según la
invención. Este equivalente protegido se transforma a continuación
en un compuesto según la invención.
Uno de los sintones de base evocados
anteriormente contiene una función protegida particular que permite
la introducción ulterior de la biotina o de un derivado de biotina,
por ejemplo, una función amina latente en forma de grupo azido o
protegida en forma de N-ftalimido.
En las reacciones de acoplamiento evocadas
anteriormente, un di-u oligosacárido "donador",
activado en su carbono anomérico, se hace reaccionar con un
di-u oligosacárido "aceptor", que posea un
hidroxilo libre.
La presente invención se refiere a un
procedimiento para la preparación de los compuestos de fórmula (I)
caracterizados porque: en una primera etapa, se sintetiza un
equivalente completamente protegido del polisacárido (I) deseado,
que contiene un precursor protegido del dominio Pe prolongado en su
extremo no reductor por un precursor protegido del polisacárido
sulfatado Po, uno de estos precursores contiene especialmente una
función amina razonablemente protegida por la introducción ulterior
de la biotina o de un derivado de biotina; en una segunda etapa, se
introducen y/o se desenmascaran los grupos cargados negativamente;
en una tercera etapa, se desprotege la función amina, después se
introduce la biotina o el derivado de biotina.
La síntesis de Pe se realiza según los métodos
descritos, en particular en las solicitudes de patente
internacionales publicadas números WO98/03554 y WO99/36443 así como
en la bibliografía (citada anteriormente).
La síntesis de la parte polisacarídica
precursora de Po se realiza según las reacciones bien conocidas por
el experto en la materia, utilizando los métodos de la síntesis de
oligosacáridos (G. J. Boons, Tetrahedron, 1.996, 52,
1.095-1.121, la patente internacional WO98/03554 y
la patente internacional WO99/36443) o un oligosacárido cuando un
oligosacárido donador de enlace glicosídico está acoplado con un
oligosacárido receptor de enlace glicosídico para conducir a otro
oligosacárido cuyo tamaño es igual a la suma de los tamaños de las
dos especies reactivas. Esta secuencia se repite hasta la obtención
del compuesto de fórmula (I) deseado. La naturaleza y el perfil de
la carga del compuesto final deseado determinan la naturaleza de
las entidades químicas utilizadas en las diferentes etapas de la
síntesis, según las reglas bien conocidas por los expertos en la
materia. Se podrá hacer referencia por ejemplo a C. van Boeckel, M.
Petitou, Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 1.993, 32,
1.671-1.690 o también a H. Paulsen, "Advances in
selective chemical syntheses of complex oligosaccharides" Angew.
Chem. lnt. Ed. Engl. 21, 155-173
(1.982).
(1.982).
Los compuestos de la invención se obtienen a
partir de sus precursores polisacarídicos protegidos completamente
utilizando la siguiente secuencia de reacciones:
- -
- las funciones alcohol que deben ser transformadas en un grupo O-sulfo y los ácidos carboxílicos son desprotegidos por la eliminación de los grupos protectores utilizados durante la elaboración del esqueleto después,
- -
- se introducen los grupos sulfo a continuación,
- -
- se desprotege la función amina que permite introducir la biotina o el derivado de biotina,
- -
- la biotina o el derivado de biotina se introduce por una reacción clásica de acoplamiento amino/ácido.
Los compuestos de la invención se pueden
preparar naturalmente utilizando diferentes estrategias conocidas
por el experto en la materia de la síntesis de los
oligosacáridos.
El procedimiento descrito anteriormente es el
procedimiento preferido de la invención. Sin embargo, los compuestos
de fórmula (I) se pueden preparar por otros métodos bien conocidos
de la química de los azúcares descritos por ejemplo en
Monosaccharides, Their chemistry and their roles in natural
products, P. M. Collins y R. J. Ferrier, J. Wiley & Sons, 1.995
y en G. J. Boons, Tetrahedron, 1.996, 52,
1.095-1.121.
Los pentasacáridos Pe se pueden obtener pues a
partir de sintones disacarídicos de la manera descrita en la
publicación de C. van Boeckel, M. Petitou, Angew. Chem. lnt. Ed.
Engl. 1.993, 32, 1.671-1.690.
Los grupos protectores utilizados en el
procedimiento de preparación de los compuestos (I) son los
utilizados comúnmente en la química de los azúcares, por ejemplo en
Protective Groups in Organic Synthesis, TW Greene, John Wiley &
sons, Nueva York, 1.981.
Los grupos protectores se eligen ventajosamente,
por ejemplo entre los grupos: acetilos, halogenometilos, benzoílos,
levulinilos, bencilos, bencilos sustituidos, tritilos eventualmente
sustituidos, tetrahidropiranilos, alilos, pentenilos,
terc-butildimetilsililos (tBDMS) o
trimetilsililetilos.
Los grupos activadores son los utilizados
clásicamente en la química de los azúcares según por ejemplo G. J.
Boons, Tetrahedron, 1.996, 52, 1.095-1.121. Estos
grupos activadores se eligen, por ejemplo, entre: imidatos,
tioglicósidos, pentenilglicósidos, xantatos, fosfitos o
halogenuros.
En lo que se refiere a la manera en que se une
la biotina al oligosacárido así como la naturaleza del derivado de
biotina, la bibliografía química ofrece otras posibilidades que es
posible emplear por los juegos de grupos protectores bien conocidos
por el experto en la materia. Se utilizará preferentemente una
función amina o incluso una función tiol o incluso una función
ácido carboxílico o incluso una función aldehído que le hará
reaccionar con un derivado de biotina que conste de un grupo
reactivo del tipo éster activado, maleimida, yodoacetilo o amina
primaria, haciéndose la reacción en las condiciones descritas en la
bibliografía (cf. Savage et al.,
Avidin-Biotin Chemistry: A Handbook, Pierce Chemical
Company, 1.992).
El procedimiento descrito anteriormente permite
obtener los compuestos de la invención en forma de sales. Para
obtener los ácidos correspondientes, se ponen en contacto los
compuestos de la invención en forma de sales, con una resina de
intercambio de cationes en forma ácida.
Los compuestos de la invención en forma de
ácidos se pueden neutralizar a continuación por una base para
obtener la sal deseada. Para la preparación de las sales de los
compuestos de fórmula (I), se puede utilizar cualquier base mineral
u orgánica, que proporcione con los compuestos de fórmula (I), sales
farmacéuticamente aceptables. Se utiliza preferentemente como base
el hidróxido de sodio, potasio, calcio o magnesio. Las sales de
sodio y de calcio de los compuestos de fórmula (I), son las sales
preferidas.
Los compuestos según la invención han sido
objeto de estudios bioquímicos y farmacológicos.
Se ha estudiado la actividad antitrombótica
global de estos productos y su neutralización, en un modelo de
trombosis venosa constituido por una inyección de factor tisular
seguido por una estasis de la vena cava en ratas, tal como se
describe por J.-M. Herbert et al., Blood, 1.998, 91,
4.197-4.205. En este modelo, se obtiene una
inhibición del 60% de la trombosis después de la inyección
intravenosa de 0,1 a 30 mmoles/kg de los compuestos.
La inyección de avidina en una relación molar de
1 a 1.000 reduce enormemente el efecto antitrombótico de estos
compuestos, pudiendo ser la reducción obtenida superior al 50%.
Paralelamente, la actividad prohemorrágica de los compuestos se
neutraliza por inyección de avidina en las dosis citadas
previamente. Igualmente, la actividad circulante de los
oligosacáridos, medida por la actividad anti-Xa y/o
la actividad anti-IIa, se neutraliza por inyección
de
avidina.
avidina.
Así, la presente invención tiene por objeto
igualmente un procedimiento que emplea avidina o estreptavidina
caracterizado porque permite neutralizar los polisacáridos según la
invención. Se puede utilizar avidina o estreptavidina para la
preparación de medicamentos destinados a neutralizar los
polisacáridos según la presente invención.
Gracias a su actividad bioquímica y
farmacéutica, los oligosacáridos de la presente invención
constituyen medicamentos muy interesantes. Su toxicidad es
perfectamente compatible con esta utilización. Son igualmente muy
estables y son pues particularmente apropiados para constituir el
principio activo de las especialidades farmacéuticas.
Se pueden utilizar en diversas patologías
consecutivas con una modificación de la homeostasis del sistema de
la coagulación que aparecerá en particular durante los trastornos
del sistema cardiovascular y cerebrovascular como los trastornos
tromboembólicos asociados con la ateroesclerosis y la diabetes tales
como: angina inestable, ataque cerebral, reestenosis después de
angioplastia, endarterectomía, la colocación de prótesis
endovasculares o los trastornos tromboembólicos asociados con la
retrombosis después de la trombolisis, infarto, demencia de origen
isquémico, enfermedades arteriales periféricas, hemodiálisis,
fibrilaciones auriculares o incluso durante la utilización de
prótesis vasculares de puentes aortocoronarios.
Se pueden utilizar estos productos por otro lado
para el tratamiento o la prevención de patologías tromboembólicas
de origen venoso tales como las embolias pulmonares. Se pueden
utilizar o para prevenir o para tratar las complicaciones
trombóticas observadas por ejemplo después de operaciones
quirúrgicas, desarrollos tumorales o desajustes de la coagulación,
inducidas por activadores bacterianos, víricos o enzimáticos. En el
caso de su utilización durante la colocación de prótesis, los
compuestos de la presente invención pueden recubrir las prótesis y
hacerlas así hemocompatibles. En particular, se pueden fijar a
prótesis intravasculares (endoprótesis). En este caso, se pueden
modificar químicamente eventualmente por introducción en el extremo
no reductor o reductor de un brazo apropiado, como se describe
según la patente europea EP 649854.
Los compuestos de la presente invención se
pueden utilizar igualmente como adyuvantes durante la
endarterectomía realizada con globos porosos.
Los compuestos según la invención se pueden
utilizar para la preparación de medicamentos destinados a tratar
las enfermedades anteriores.
Según otro de sus aspectos, la presente
invención tiene pues por objeto una composición farmacéutica que
contiene como principio activo, un polisacárido de síntesis según
la invención o una de sus sales farmacéuticamente aceptables,
eventualmente en asociación con uno o varios excipientes inertes y
apropiados.
Dichos excipientes se eligen según la forma
farmacéutica y el modo de administración deseados: oral, sublingual,
subcutáneo, intramuscular, intravenoso, transdérmico, transmucoso,
local o rectal.
El principio activo se puede presentar
igualmente en forma de complejo con una ciclodextrina, por ejemplo
\alpha, \beta o \gamma ciclodextrina,
2-hidroxipropil-\beta-ciclodextrina
o metil-\beta-ciclodextrina.
Se puede liberar el principio activo igualmente
por un globo que lo contenga o por un extensor endovascular
introducido en los vasos sanguíneos. La eficacia farmacológica del
principio activo no se ve así afectado.
En cada unidad de administración, el principio
activo está presente en las cantidades adaptadas a las dosis
diarias pretendidas con el fin de obtener el efecto profiláctico o
terapéutico deseado. Cada unidad de administración puede contener
de 0,1 a 100 mg de principio activo, preferentemente 0,5 a 50 mg.
Estas dosis de compuestos anticoagulantes se podrían neutralizar
por las dosis de avidina o de estreptavidina que van de 1 a 1.000 mg
en inyección iv (intravenosa), inyección intravenosa rápida o
vascularización.
Los compuestos según la invención se pueden
utilizar igualmente en asociación con uno u otros varios principios
activos útiles para la terapéutica deseada tal como por ejemplo:
antitrombóticos, anticoagulantes, antiagregantes plaquetarios tales
como por ejemplo: dipiridamol, aspirina, ticlopidina, clopidogrel o
los antagonistas del complejo de la glicoproteína IIb/IIIa.
Los métodos, las preparaciones y los esquemas
siguientes ilustran la síntesis de diferentes compuestos intermedios
útiles para la obtención de polisacáridos según la invención.
Se utilizan las abreviaturas siguientes:
- Bn: bencilo; Bz: benzoílo; CCF: cromatografía en capa fina. Ts: tosilo; Lev: levulinilo; Et: etilo; Ph: fenilo; Me: metilo; Ac: acetilo; SE: trimetilsililetilo; ESI: son las siglas Ionización por Electropulverización en inglés; Biotina: Ácido hexahidro-2oxo-1H-tieno[3.4-d]imidazol-4-pentanoico; Z: benziloxicarbonilo.
A continuación, se detallan como ilustración los
ejemplos de síntesis de los compuestos de la invención.
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(Esquema pasa a página
siguiente)
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Esquema
1
Síntesis del trisacárido
9
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\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
1
A una disolución del compuesto 1 (15,8 g; 42,8
mmoles) (preparada según K. Jansson et al., J. Org. Chem.,
1.988, 53, 5.629-5.647) y yoduro de metilo (20 ml;
319 mmoles) en tetrahidrofurano (350 ml), se añaden, a 0ºC, en
pequeñas cantidades de hidruro de sodio (18 g). Se agita durante 4
horas la mezcla de reacción a temperatura ambiente. El exceso de
hidruro de sodio se elimina con metanol y se vierte la mezcla de
reacción en agua fría (1,5 l). Después de extracción con acetato de
etilo, se lava la fase orgánica con una disolución saturada de
cloruro de sodio, agua, se seca sobre sulfato de sodio, después se
concentra al vacío. La purificación del residuo se efectúa por
cromatografía de columna sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de
etilo 15/1 (v/v)) para dar 16,8 g del compuesto 2.
[\alpha]_{D} = -41º (c = 0,69,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
2
A una disolución del compuesto 2 (16 g; 40,3
mmoles) en tetrahidrofurano (600 ml), se añaden sucesivamente tamiz
molecular 3\ring{A} en polvo (82 g), naranja de metilo (indicador
coloreado), cianoborohidruro de sodio (34 g; 526 mmoles) después
gota a gota una disolución saturada de ácido clorhídrico en dietil
éter hasta obtener una coloración rosa. Después de filtración y
extracción con acetato de etilo, se lava la fase orgánica con una
disolución saturada de hidrogenocarbonato de sodio, agua, se seca
sobre sulfato de sodio, después se concentra al vacío. Una
cromatografía de columna sobre gel de sílice (tolueno/acetato de
etilo 3/1 (v/v)) permite obtener 12,5 g del compuesto 3.
[\alpha]_{D} = -42º (c = 1,2,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
3
Una mezcla de tioglicósido 4 (16,52 g; 16,60
mmoles) (obtenido según la preparación 1 de la solicitud de patente
internacional publicada número WO 99/36443), compuesto 3 (6,0 g;
15,05 mmoles) y tamiz molecular 4\ring{A} en polvo (16,7 g) en
tolueno (300 ml) se agita en atmósfera de argón durante 1 hora.
Después la mezcla se enfría a - 20 C. Se
añade gota a gota a la mezcla de reacción una disolución de
N-yodosuccinimida (3,9 g; 17,4 mmoles) y
ácido trifluorometanosulfónico (0,17 ml; 1,97 mmoles) en una mezcla
de diclorometano/dioxano 1/1 (v/v) (86 ml). Después de 10 minutos,
se filtra la mezcla de reacción, se diluye con diclorometano, se
lava sucesivamente con una disolución de tiosulfato de sodio 1 M,
una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10% y agua, se
seca sobre sulfato de sodio, después se concentra al vacío. La
purificación del residuo se efectúa por cromatografía de columna
sobre gel de sílice (tolueno/acetato de etilo 6/1 (v/v)) para dar
18,8 g del trisacárido 5.
[\alpha]_{D} = +34º (c = 1,26,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
4
A una disolución del compuesto 5 (18,7 g; 14
mmoles) en una mezcla de metanol-dioxano 1/1 (v/v)
(140 ml) se añade terc-butilato de potasio
(3,15 g). Se agita durante 2 horas a temperatura ambiente. La mezcla
de reacción se neutraliza con la resina Dowex® 50WX4 H^{+}, se
filtra y se concentra al vacío. La purificación del residuo se
efectúa por cromatografía de columna sobre gel de sílice
(diclorometano/metanol 20/1 (v/v)) para dar 10,0 g del
compuesto
6.
6.
[\alpha]_{D} = +29º (c = 1,11,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
5
A una mezcla enfriada (0ºC) del compuesto 6
(9,93 g; 12,24 mmoles), yoduro de metilo (9,0 ml; 138 mmoles) en
tetrahidrofurano anhidro (100 ml), se añaden, en pequeñas
cantidades, hidruro de sodio (5,2 g; 216 mmoles) en atmósfera de
argon. La mezcla se agita durante 20 horas a temperatura ambiente.
Se elimina el exceso de hidruro de sodio con metanol y se vierte la
mezcla de reacción en agua helada (500 ml). Después de extracción
con acetato de etilo, se lava la fase orgánica con una disolución
saturada de cloruro de sodio, se seca sobre sulfato de sodio,
después se concentra al vacío para dar 11 g del compuesto 7, que se
utiliza en la etapa siguiente sin purificación.
CCF: Rf = 0,38, gel de sílice, tolueno/acetato
de etilo 3/2 (v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
6
Se disuelve el compuesto 7 (11 g) en ácido
acético al 60% (180 ml) y se agita durante 1 hora 30 a 80ºC. Se
concentra y se coevapora la mezcla con tolueno. Se purifica el
residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice
(tolueno/acetona 2/1 (v/v)) para dar 8,46 g del compuesto 8.
CCF: Rf = 0,36, gel de sílice, tolueno/acetona
1/1 (v/v)
\newpage
Preparación
7
A una disolución del compuesto 8 (8,41 g; 10,6
mmoles) en diclorometano (110 ml), se añaden
1-benzoiloxi-1H-benzotriazol
(5,36 g; 22,4 mmoles) y trietilamina (3,32 ml). Se agita la mezcla
durante 20 horas a temperatura ambiente, después se diluye con
diclorometano, se lava con una disolución saturada de
hidrogenocarbonato de sodio y agua, se seca sobre sulfato de sodio,
después se concentra al vacío. Se purifica el residuo por
cromatografía de columna sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato
de etilo/etanol 5/0,5/0,25 (v/v/v)) para dar 8,40 g del compuesto
9.
[\alpha]_{D} = +15º (c = 2,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
2
Síntesis del pentasacárido
14
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
8
Se transforma el compuesto 9 en compuesto 10
según el modo de operación descrito en la Preparación 3.
[\alpha]_{D} = +42º (c = 2,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
9
Se transforma el compuesto 10 en compuesto 11
según el modo de operación descrito en la Preparación 4.
CCF: Rf= 0,35, gel de sílice,
diclorometano/metanol 10/1 (v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
10
Se transforma el compuesto 11 en compuesto 12
según el modo de operación descrito en la Preparación 5.
CCF: Rf = 0,11, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo 1/2 (v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
11
Se transforma el compuesto 12 en compuesto 13
según el modo de operación descrito en la Preparación 6.
CCF: Rf = 0,33, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo/etanol 2/0,5/0,5 (v/v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
12
Se transforma el compuesto 13 en compuesto 14
según el modo de operación descrito en la Preparación 7.
CCF: Rf = 0,16, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo/etanol 3/0,5/0,5 (v/v/v)
\newpage
Esquema
3
Síntesis del heptasacárido
19
Preparación
13
La reacción de acoplamiento del compuesto 14 con
el disacárido 4 se realiza según el modo de operación descrito en
la Preparación 3, para proporcionar el compuesto 15.
[\alpha]_{D} = +52º (c = 1,1,
diclorometano).
Preparación
14
Se transforma el compuesto 15 en compuesto 16
según el modo de operación descrito en la Preparación 4.
CCF: Rf = 0,31, gel de sílice,
diclorometano/metanol 10/1 (v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
15
Se transforma el compuesto 16 en compuesto 17
según el modo de operación descrito en la Preparación 5.
CCF: Rf = 0,46, gel de sílice,
diclorometano/metanol 10/1 (v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
16
Se transforma el compuesto 17 en compuesto 18
según el modo de operación descrito en la Preparación 6.
CCF: Rf = 0,42, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo/etanol 1/0,5/0,5 (v/v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
17
Se transforma el compuesto 18 en compuesto 19
según el modo de operación descrito en la Preparación 7.
CCF: Rf = 0,25, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo/etanol 3/0,5/0,5 (v/v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Esquema
4
Síntesis del nonasacárido
23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
18
Se agita en atmósfera de argón, durante 1 hora,
una mezcla del tioglicósido 4 (5,2 g; 5,23 mmoles), heptasacárido
19 (4,72 g; 2,75 mmoles) y tamiz molecular 4\ring{A} en polvo en
tolueno. Después se añade gota a gota, a 0ºC, una disolución de
N-yodosuccinimida (1,36 g; 5,85 mmoles) y
ácido trifluorometanosulfónico (0,140 ml; 1,56 mmoles) en
diclorometano/dioxano 1/1 (v/v) (32 ml). Después de 15 minutos, se
filtra la mezcla de reacción, se diluye con diclorometano, se lava
sucesivamente con una disolución de tiosulfato de sodio 1 M, una
disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10% y agua, se seca
sobre sulfato de sodio, después se concentra al vacío. La
purificación del residuo se efectúa por cromatografía de columna
sobre gel de sílice (ciclohexano/acetato de etilo/etanol 3/0,5/0,5
(v/v/v)) para dar 7,13 g del compuesto 20.
[\alpha]_{D} = +65º (c = 1,4,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
19
El compuesto 20 se transforma en compuesto 21
según el modo de operación descrito en la Preparación 4.
CCF: Rf = 0,27, gel de sílice,
diclorometano/metanol 10/1 (v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
20
El compuesto 21 se transforma en compuesto 22
según el modo de operación descrito en la Preparación 5.
CCF: Rf = 0,31, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo/etanol 5/1/1 (v/v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
21
El compuesto 22 se transforma en compuesto 23
según el modo de operación descrito en la Preparación 6.
CCF: Rf = 0,35, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo/etanol 2/1/1 (v/v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Esquema
5
Síntesis del nonasacárido
29
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Preparación
22
Se disuelve en atmósfera de argón el compuesto
23 (1,09 g) en piridina (10 ml), después se añade cloruro de tosilo
(1,03 g). Después de 2 horas de agitación, se diluye con
diclorometano (100 ml). Se lava la fase orgánica sucesivamente con
una disolución de hidrogenosulfato de potasio al 10%, después agua,
se seca y se evapora a sequedad. Después de cromatografía de
columna sobre gel de sílice (tolueno/acetona 2,3/2 (v/v)), se
obtienen 1,77 g del compuesto
24.
24.
CCF: Rf = 0,5, gel de sílice,
ciclohexano/acetato de etilo/etanol 3/1/1 (v/v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
23
A una disolución del compuesto 24 (500 mg; 0,23
mmoles) en N,N-dimetilformamida anhidra (11
ml) que contiene tamiz molecular 4\ring{A} en polvo, se añade
ftalimida de potasio (225 mg; 1,38 mmoles), después éter corona
18-corona-6 (121,5 mg; 0,46 mmoles).
Se agita la mezcla a 80ºC, durante 4 horas. Después de haber
enfriado, se diluye la mezcla de reacción con diclorometano, se
filtra sobre Celite y se concentra. Se purifica el residuo por
cromatografía sobre gel Sephadex® LH20 (3 x 100 cm)
(diclorometano/tanol 1/1 (v/v)) seguido por una cromatografía de
columna sobre gel de sílice (tolueno/etanol 11/2 (v/v)) para dar
417,4 mg del compuesto 25.
CCF: Rf = 0,38, gel de sílice, tolueno/etanol
11/2 (v/v)
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
24
Se agita en atmósfera de argón, durante 1 hora,
una mezcla de tioglicósido 26 (1,515 g; 1,564 mmoles) (preparada
según el compuesto 41, preparación 36 de la patente internacional WO
99/36443), receptor 25 (840 mg; 0,391 mmoles) y tamiz molecular
4\ring{A} en polvo (2,15 g) en tolueno (33 ml). Se enfría la
mezcla de reacción a 0ºC y se introduce en una disolución de
N-yodosuccinimida (387 mg) y ácido
trifluorometanosulfónico (55,4 \mul) en diclorometano/dioxano 1/1
(v/v) (7 ml). Después de 10 minutos, se filtra la mezcla, se diluye
con tolueno, se lava sucesivamente con una disolución de tiosulfato
de sodio 1 M, una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 10%
y agua, se seca sobre sulfato de sodio, después se concentra al
vacío. La purificación del residuo se hace por cromatografía sobre
gel Sephadex® LH20 (diclorometano/etanol 1/1 (v/v)), seguido por
cromatografía de columna sobre gel de sílice (tolueno/acetona 5/4
(v/v)) y conduce a 887 mg del compuesto 27.
[\alpha]_{D} = +70º (c = 0,35,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
25
Una disolución del compuesto 27 (750 mg; 0,245
mmoles) en ácido acético (37 ml) se trata bajo presión de hidrógeno
[5x10^{5} Pa (5 bar)] en presencia de paladio sobre carbono al 10%
(750 mg), durante 2 horas 30. Después de filtración, se concentra
la disolución y la purificación del residuo se efectúa por
cromatografía de columna sobre gel de sílice (tolueno/etanol 6/1
(v/v)) para dar 728 mg del compuesto 28.
CCF: Rf = 0,32, gel de sílice, tolueno/etanol
6/1 (v/v)
\newpage
\global\parskip0.900000\baselineskip
Preparación
26
A una disolución del compuesto 28 (728 mg; 0,245
mmoles) en diclorometano (10 ml) se añade trietilamina (51,1
\mul; 0,368 mmoles), anhídrido acético (32,5 \mul; 0,344 mmoles)
y dimetilaminopiridina (6,0 mg; 0,049 mmoles). Después de 1 hora de
agitación, se diluye con diclorometano, se lava sucesivamente con
una disolución de hidrogenosulfato de potasio al 10%, agua, una
disolución saturada de hidrogenocarbonato de sodio y agua, se seca
sobre sulfato de sodio, después se concentra al vacío. La
purificación del residuo se efectúa por cromatografía de columna
sobre gel de sílice permite obtener 0,618 mg del compuesto 29.
CCF: Rf = 0,37, gel de sílice, tolueno/etanol
6/1 (v/v)
Esquema
6
Síntesis del oligosacárido
31
Preparación
27
Se agita durante 1 hora una disolución del
compuesto 29 (579 mg; 0,192 mmoles) en una mezcla de ácido
trifluoroacético/diclorometano 2/1 (v/v) (11,5 ml). Se diluye con
una mezcla de tolueno/acetato de n-propilo
2/1 (v/v) (69 ml), se concentra y se co-evapora con
tolueno. Se purifica el residuo por cromatografía de columna sobre
gel de sílice (tolueno/etanol 5/1 (v/v)) para obtener 523 mg del
compuesto 30.
CCF: Rf = 0,31, gel de sílice, tolueno/etanol
5/1 (v/v)
Preparación
28
Se añade tricloroacetonitrilo (65,5 \mul; 0,85
mmoles) y carbonato de cesio (88,4 mg; 0,27 mmoles) a una
disolución del compuesto 30 en diclorometano (3 ml). Después de
agitación durante 2 horas, se filtra la mezcla, se concentra. Se
purifica el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice
(tolueno/etanol 6/1 (v/v) + 0,1% de trietilamina) para dar 477 mg
del compuesto 31.
CCF: Rf = 0,35, gel de sílice, tolueno/etanol
6/1 (v/v)
\global\parskip1.000000\baselineskip
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\+#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\+\cr \+\cr
\+\cr}
\newpage
Preparación
29
Se disuelve imidato 31 (370 mg; 0,121 mmoles) y
compuesto 32 (336 mg; 0,242 mmoles), (obtenido según P. Westerduin,
et al. BioOrg. Med. Chem, 1.994, 2, 1.267) en una mezcla de
diclorometano/dietil éter 1/2 (v/v) (5,5 ml). Después de adición de
tamiz molecular 4\ring{A} en polvo, se enfría la mezcla a
- 20ºC y se añade una disolución 0,1 M de
trifluorometanosulfonato de trimetilsililo en diclorometano (181,5
\mul). Después de 25 minutos, se neutraliza la mezcla por adición
de hidrogenocarbonato de sodio sólido. Después de filtración y
concentración, se purifica el residuo por cromatografía sobre gel
Sephadex® LH20, seguido por una cromatografía de columna sobre gel
de sílice (tolueno/acetona 6/5 (v/v)) para dar 302 mg del compuesto
33.
[\alpha]_{D} = +86º (c =1,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
30
Se trata una disolución del compuesto 33 (104
mg; 0,024 mmoles) en ácido acético (5 ml) bajo presión de hidrógeno
[4x10^{5} Pa (4 bar)] en presencia de paladio sobre carbono al 10%
(104 mg), durante 4 horas. Después de filtración, se liofiliza la
disolución para dar el compuesto 34 (87 mg), que se utiliza en la
etapa siguiente sin purificación.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
31
A una disolución del compuesto 34 (80 mg; 0,021
mmoles) en metanol anhidro (6,9 ml) en presencia de tamiz molecular
3\ring{A} en polvo (875 mg), se añade una disolución molar de
metilato de sodio en metanol (140 \mul). Después de 20 horas a
temperatura ambiente, se filtra y se neutraliza con ácido acético.
La disolución se concentra de humedad y se deposita sobre columna
de Sephadex® G-25 fino (3 x 92 cm). Después de
elución por agua y liofilización, se obtiene el compuesto 35 (66
mg).
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
(Esquema pasa a página
siguiente)
\newpage
Preparación
32
Se disuelve el poliol 35 (66,4 mg; 0,021 mmoles)
en N,N-dimetilformamida (1,8 ml). Se añade el
complejo trióxido de azufre-trietilamina (320 mg;
1,77 mmoles) y se agita la mezcla, durante 20 horas, a 55ºC. Se
deposita la disolución sobre una columna de Sephadex®
G-25 fino (3 x 92 cm), se eluye con cloruro de sodio
0,2 M. Se concentran las fracciones que contienen el producto y se
desalan utilizando la misma columna eluida con agua. Después de
liofilización, se obtienen 83 mg del compuesto 36.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química= 4.968,92; masa experimental= 4.966,52 \pm 0,16 u.m.a.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
33
Se disuelve el compuesto 36 (83 mg; 0,017
mmoles) en una mezcla de etanol/agua 2/1 (v/v) (1,67 ml). Se añade
hidrato de hidrazina (81,2 \mul; 1,67 mmoles) y se hace hervir la
mezcla a reflujo durante 20 horas. Se deposita la disolución sobre
una columna de Sephadex® G-25 fino (3 x 92 cm)
eluida con agua. Después de concentración de las fracciones que
contienen el producto, se disuelve el residuo en etanol/agua 2/1
(v/v) (5,00 ml) y se trata de nuevo como en las condiciones
precedentes con hidrato de hidrazina (81,2 \mul) para dar 71 mg
del compuesto 37.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química = 4.838,32; masa experimental = 4.814,6 \pm 0,70
u.m.a.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
9
Síntesis del pentasacárido
39
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
34
Se disuelve el compuesto tricloroacetimidato
de
6-O-acetil-2-azido-2-desoxi-3,4-di-O-metil-\alpha,\beta-D-glucopiranosa
38 (265 mg; 0,631 mmoles) (obtenido según J. Basten, et al.
Bioorg. Med. Chem. Lett. (1.992), 2(9), 901) y compuesto 32
(584 mg; 0,420 mmoles) (obtenido según P. Westerduin, et al.
BioOrg. Med. Chem, 1.994, 2, 1.267) en una mezcla de
diclorometano/dietil éter 1/2 (v/v) (28,5 ml). Después de adición de
tamiz molecular 4\ring{A} en polvo, se enfría la mezcla a
-20ºC y se añade una disolución 0,1 M de
trifluorometanosulfonato de trimetilsililo en diclorometano (94,6
\mul). Después de 10 minutos, se añade de nuevo imidato (53,8 mg),
después una disolución 0,1 M de trifluorometanosulfonato de
trimetilsililo en diclorometano (19,2 \mul). Después de 10
minutos, la mezcla se neutraliza por adición de hidrogenocarbonato
de sodio sólido. Después de filtración y concentración, se purifica
el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice
(tolueno/acetato de etilo 3/1 (v/v)) para dar 499 mg del compuesto
39.
[\alpha]_{D} = +66º (c =1,07,
diclorometano).
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
10
Síntesis del pentasacárido 44
(Procedimiento
I)
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Preparación
35
Se trata una disolución del compuesto 39 (552,6
mg; 0,335 mmoles) en una mezcla de
terc-butanol/acetato de etilo 5/1 (v/v) (16
ml) bajo presión de hidrógeno [1x10^{6} Pa (10 bar)] en presencia
de paladio sobre carbono al 10% (1,10 g) y ácido clorhídrico 1 M
(0,336 ml), durante 4 horas 30. Después de filtración, se concentra
la disolución y da el compuesto 40, que se utiliza en la etapa
siguiente sin purificación.
Preparación
36
Se disuelve el compuesto 40 (324 mg; 0,300
mmoles) en metanol (8,8 ml). Se añade una disolución 5 M de
hidróxido de sodio (2,2 ml) y se agita a temperatura ambiente
durante 16 horas. Se neutraliza con una resina Dowex® 50 H^{+} y
se filtra. Se hace pasar la disolución por una columna de Sephadex®
G-25 fino eluida con agua. Se concentran las
fracciones que contienen el producto y se obtienen 254,2 mg del
compuesto 41. En esta fase se verifica por RMN que se han eliminado
los grupos protectores (bencilos y acetilos).
CCF: Rf = 0,26, gel de sílice, acetato de
etilo/piridina/ácido acético/agua 5/5/1/3 (v/v/v/v)
Preparación
37
Se disuelve el compuesto 41 (241,1 mg; 0,253
mmoles) en agua (12,4 ml) y se añade hidrogenocarbonato de sodio
(63,7 mg), después cloroformiato de bencilo (41 \mul) gota a gota.
Después de 12 horas de agitación, se hace pasar la mezcla de
reacción por una columna de Sephadex® G-25 fino
eluida con agua. Se concentran las fracciones que contienen el
producto. La purificación por cromatografía de columna sobre gel de
sílice (acetato de etilo/piridina/ácido acético/agua 21/17/3,6/10
v/v/v/v) da 221 mg del compuesto 42.
CCF: Rf = 0,63, gel de sílice, acetato de
etilo/piridina/ácido acético/agua 5/5/1/3 (v/v/v/v)
Preparación
38
Se disuelve el poliol 42 (19,6 mg; 0,018 mmoles)
en N,N-dimetilformamida (1,62 ml). Se añade
el complejo trióxido de azufre-trietilamina (114
mg) y se agita la mezcla durante 20 horas, a 55ºC, al abrigo de la
luz. Se deposita la disolución sobre una columna de Sephadex®
G-25 fino eluída con cloruro de sodio 0,2 M. Se
concentran las fracciones que contienen el producto y se desalan
utilizando la misma columna eluida con agua. Después de
liofilización, se obtienen 28,5 mg del compuesto 43.
[\alpha]_{D} = +48º (c = 2,75,
agua).
Preparación
39
Se trata una disolución del compuesto 43 (27,5
mg; 0,015 mmoles) en una mezcla de
terc-butanol (333
\mul)-agua (500 \mul) bajo presión de hidrógeno
[5x10^{5} Pa (5 bar)] en presencia de paladio sobre carbono al 10%
(8,25 mg), durante 16 horas. Después de filtración, se concentra la
disolución y se deposita el residuo sobre columna de Sephadex®
G-25 fino (3 x 92 cm). Después de elución con agua y
liofilización, se obtienen 23,7 mg del compuesto 44.
[\alpha]_{D} = +58º (c = 1,
agua).
\newpage
Esquema
11
Síntesis del tetrasacárido
48
Preparación
40
Se trata una disolución del compuesto 45 (4,50
g; 3,02 mmoles) (obtenido según P. Westerduin, et al. BioOrg.
Med. Chem. 1.994, 2, 1.267) en una mezcla de acetato de
etilo/terc-butanol (72 ml; 1/1, v/v) a
presión de hidrógeno [4x10^{5} Pa (4 bar)] en presencia de
paladio sobre carbono al 10% (9,0 g), durante 6 horas. Después de
filtración y concentración, el compuesto 46 obtenido se emplea
directamente en la etapa siguiente sin purificación.
CCF: Rf = 0,54, acetato de etilo/piridina/ácido
acético/agua 26/22/4,6/17 v/v/v/v.
Preparación
41
A una disolución del compuesto 46 (2,57 g; 2,71
mmoles) en N,N-dimetilformamida anhidra (35
ml) se añade, a 0ºC, hidrogenocarbonato de potasio (2,71 g),
después de yoduro de metilo (3,4 ml). Después de 16 h de agitación
a temperatura ambiente, se enfría el medio de reacción a 0ºC. Se
añaden entonces sucesivamente dimetilaminopiridina (132 mg),
después anhídrido acético 1,5 ml). Se agita la mezcla durante 16 h.
Después de neutralización del exceso de anhídrido acético, se
diluye con acetato de etilo. Se lava la fase orgánica sucesivamente
con una disolución de hidrogenosulfato de potasio al 10% y agua,
después con una disolución saturada de hidrogenocarbonato de sodio
y agua, se seca sobre sulfato de sodio, se filtra, después se
evapora a sequedad. Se purifica el residuo por cromatografía de
columna sobre gel de sílice [ciclohexano/(acetato de etilo/etanol
1/1) 9/5] para dar 2,51 g del compuesto 47.
CCF: Rf = 0,41, tolueno/acetona 2/1 v/v.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
42
Se disuelve el compuesto 47 (2,5 g; 2,56 mmoles)
en una mezcla de tolueno/etanol 1/1 v/v (500 ml). Se añade acetato
de hidrazina (1,01 g). Después de 2 h de agitación a temperatura
ambiente, se concentra a sequedad el medio de reacción. Se disuelve
el residuo en diclorometano. La fase orgánica se lava sucesivamente
con una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 2% y agua, se
seca sobre sulfato de sodio, se filtra, después se evapora a
sequedad. Después de cromatografía de columna sobre gel de sílice
(tolueno/acetato de etilo 1/4 v/v), se obtienen 2,01 g del
compuesto 48.
CCF: Rf = 0,37, tolueno/acetona 2/1 v/v.
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
12
Síntesis del pentasacárido
49
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
43
Se disuelve imidato 38 (1,18 g; 2,81 mmoles)
(obtenido según J. Basten et al. Bioorg. Med. Chem. Lett.
(1.992), 2(9), 901) y compuesto 48 (1,83 g; 1,75 mmoles) en
una mezcla de diclorometano/dietil éter 1/2 (v/v) (126 ml). Después
de adición de tamiz molecular 4\ring{A} en polvo, se enfría la
mezcla a - 20ºC y se añade una disolución 1 M
de trifluoro-metanosulfonato de
terc-butildimetilsililo en diclorometano (421
\mul). Después de 30 minutos, se añade una nueva cantidad de
imidato (266 mg) así como una disolución 1 M de
trifluorometanosulfonato de terc-butildimetilsililo
en diclorometano (168 \mul). Después de 10 minutos, la mezcla se
neutraliza por adición de hidrogenocarbonato de sodio sólido y se
filtra. Se continúa con diclorometano, se lava sucesivamente con
una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 2% y agua, se seca
sobre sulfato de sodio, después se concentra al vacío. Se purifica
el residuo obtenido por cromatografía de columna sobre gel de sílice
(diclorometano/acetato de etilo 4/3, después 1/1 v/v) para dar
1,814 g del compuesto 49.
CCF: Rf = 0,57, tolueno/acetato de etilo 3/1
v/v.
[\alpha]_{D} = +93º (c =1,15,
diclorometano).
\newpage
Esquema
13
Síntesis del pentasacárido 44
(Procedimiento
II)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
44
Se añade agua oxigenada al 30% (42 ml), a
- 5ºC, a una disolución del compuesto 49
(845,3 mg) en tetrahidrofurano (104 ml). Después de 5 minutos de
agitación, se añade gota a gota una disolución acuosa 0,7 M de
hidróxido de litio (19,2 ml).
Se agita la mezcla de reacción durante 1 h, a
- 5ºC, después durante 4 h, a 0ºC y finalmente
durante 16 h, a temperatura ambiente. Se neutraliza con una
disolución 1 M de ácido clorhídrico.
Se deposita la disolución sobre una columna de
Sephadex® G-25 fino (5 x 1.000 cm) eluida con agua.
Se reúnen las fracciones que contienen el compuesto esperado, se
concentra y se deposita en una columna de resina Dowex AG 50 WX4
H^{+} (50 ml). Se recoge el compuesto a 0ºC y se concentra para
obtener 618 mg del compuesto 50.
CCF: Rf = 0,56, acetato de etilo/piridina/ácido
acético/agua 26/22/4,6/17 v/v/v/v.
Preparación
45
Justo antes de utilizar el compuesto 50 se
codestila con N,N-dimetilformamida (3 x 29
ml). A una disolución del compuesto 50 (612 mg; 0,624 mmoles) en
N,N-dimetilformamida (58 ml), se añade
complejo de trióxido de azufre-trietilamina (3,84
g).
Se agita la mezcla durante 16 horas, a 55ºC, al
abrigo de la luz. Se enfría la mezcla a 0ºC, se añade gota a gota a
una disolución de hidrogenocarbonato de sodio (5,33 g) en agua (200
ml). Se agita durante 16 h a temperatura ambiente y se concentra a
sequedad.
Se disuelve el residuo en agua y se deposita la
disolución en una columna de Sephadex® G-25 fino
eluida con cloruro de sodio 0,2 M. Se concentran las fracciones que
contienen el producto y se desalan utilizando la misma columna
eluida con agua. Después de liofilización, se obtienen 1,06 g del
compuesto 51.
CCF: Rf = 0,5, acetato de etilo/piridina/ácido
acético/agua 3/5/1/3 v/v/v/v.
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación
46
Esta hidrogenolisis se ha realizado dos veces y
cada vez sobre 534,4 mg del compuesto 51.
Se trata una disolución del compuesto 51 (534,4
mg) en una mezcla de terc-butanol (6,7 ml;
12,6 ml/g)-agua (10 ml; 19 ml/g) bajo presión de
hidrógeno [5x10^{5} Pa (5 bar)] en presencia de paladio sobre
carbono al 10% (160 mg), a 40ºC, durante 4 horas. Después de
filtración (filtro Millipore® LSWP 5 \mum), se concentra la
disolución a sequedad para dar 530 mg del compuesto 44.
CCF: Rf = 0,49, acetato de etilo/piridina/ácido
acético/agua 3/5/1/3 v/v/v/v.
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(Ejemplos pasan a página
siguiente)
\newpage
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\cr
\cr}
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\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr
\cr}
\newpage
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
\cr
\cr}
\newpage
Ejemplo
1
A una disolución del compuesto 37 (18 mg; 3,72
\mumoles) en hidrogenocarbonato de sodio al 0,5% (1,5 ml), se
añade sulfosuccinimida de biotina (16,5 mg).
Después de 16 horas de agitación a temperatura
ambiente, se deposita la mezcla de reacción en columna de Sephade®
G-25 fino eluida con cloruro de sodio.
Se concentran las fracciones que contienen el
producto y se desalan en la misma columna eluida con agua.
Después de liofilización, se obtienen 15,9 mg
del compuesto del Ejemplo 1.
[\alpha]_{D} = +59º (c = 0,78,
agua).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química= 5.065,12; masa experimental= 5.064,18 \pm 1,04 u.m.a.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
2
A una disolución del compuesto 37 (18 mg; 3,72
\mumoles) en hidrogenocarbonato de sodio al 0,5% (1,5 ml), se
añade 6-(biotinamido) hexanoato (16,5 mg). Después de 16 horas de
agitación a temperatura ambiente, se deposita la mezcla de reacción
sobre columna de Sephadex® G-25 fino eluida con
cloruro de sodio.
Se concentran las fracciones que contienen el
producto y se desalan en la misma columna eluida con agua.
Después de liofilización, se obtienen 17,9 mg
del compuesto del Ejemplo 2.
[\alpha]_{D} = +60º (c =1,0,
agua).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química= 5.178,28; masa experimental= 5.176,3 \pm 0,77 u.m.a.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
3
A una disolución del compuesto 37 (17 mg; 3,51
\mumoles) en hidrogenocarbonato de sodio al 0,5% (1,4 ml), se
añade 6-(6-biotinamidohexamido) hexanoato de
sulfosuccinimidilo (23,6 mg).
Después de 16 horas de agitación a temperatura
ambiente, se deposita la mezcla de reacción en columna de Sephadex®
G-25 fino eluida con cloruro de sodio. Se concentran
las fracciones que contienen el producto y se desalan en la misma
columna eluida con agua.
Después de liofilización, se obtienen 17,4 mg
del compuesto del Ejemplo 3.
[\alpha]_{D} = +64º (c = 1,0,
agua).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química= 5.291,44; masa experimental= 5.292,1 \pm 0,83 u.m.a.
Ejemplo
4
A una disolución del compuesto 44 (21,2 mg;
0,012 mmoles) en hidrogenocarbonato de sodio al 0,5% (750 \mul),
se añade una disolución de
N-hidroxisuccinimida de biotina (42 mg) en
N,N-dimetilformamida (750 \mul).
Después de 16 horas de agitación a temperatura ambiente, se deposita
la mezcla de reacción en columna de Sephadex® G-25
fino.
Después de elución con agua y liofilización, se
obtienen 22,3 mg del compuesto del Ejemplo 4.
[\alpha]_{D} = +38º (c = 0,15,
agua).
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química= 1.938,48; masa experimental= 1.937,48 \pm 0,11 u.m.a.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
5
Esta reacción se ha realizado dos veces y cada
vez sobre 494,5 mg del compuesto 44.
El compuesto 44 (494,5 mg; 0,289 mmoles) se
disuelve en una disolución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio al
0,5% (116 ml).
Se añade gota a gota una disolución de
6-(biotinamido) hexanoato de sulfosuccinimida (1,46 g; 2,63 mmoles)
en una disolución de hidrogenocarbonato de sodio al 0,5% (12 ml).
Después de 16 horas de agitación a temperatura ambiente, se añade
una disolución acuosa de hidróxido de sodio 1 M y se agita durante 1
h. Se deposita la mezcla de reacción en una columna de Sephadex®
G-25 fino (5 x 1.000 cm) eluida con cloruro de
sodio.
Se reúnen las fracciones que contienen el
producto y que proceden de las dos reacciones.
Después de liofilización, se obtienen 999,2 mg
del Ejemplo 5.
CCF: Rf = 0,42, acetato de etilo/piridina/ácido
acético/agua 3/5/1/3 v/v/v/v.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química= 2.051,64; masa experimental: 2.051,60 \pm 0,43 u.m.a.
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo
6
Se disuelve el compuesto 44 (30,1 mg; 17,6
\mumoles) en una disolución acuosa de hidrogenocarbonato de sodio
al 0,5% (7 ml). Se añade gota a gota una disolución de
6-(6-biotinamidohexamido) de sulfosuccinimidilo (118
mg; 176 \mumoles) en una disolución de hidrogenocarbonato de
sodio a 0,5% (1 ml) Después de 16 horas de agitación a temperatura
ambiente, se añade una disolución acuosa de hidróxido de sodio 1 M y
se agita durante 1 h. Se deposita la mezcla de reacción en una
columna de Sephadex® G-25 fino (2 x 85 cm) eluida
con cloruro de sodio.
Se reúnen las fracciones que contienen el
producto, se concentran y se desalan en una columna de Sephadex®
G-25 fino (2 x 85 cm) eluida con agua.
Después de liofilización, se obtienen 26,5 mg
del compuesto del Ejemplo 6.
Masa: método "ESI", modo negativo: masa
química= 2.164,48; masa experimental: 2.164,29 \pm 0,38 u.m.a.
Claims (16)
1. Polisacáridos sintéticos con actividad
antitrombótica y sus sales farmacéuticamente aceptables
caracterizados porque presentan al menos un enlace covalente
con biotina o un derivado de la biotina.
2. Polisacáridos según la reivindicación 1 de
fórmula:
en la
que:
- -
- el trazo ondulado representa un enlace situado bien por debajo o por encima del plano del anillo piranósico,
Po representa un polisacárido, que contiene n
unidades monosacarídicas idénticas o diferentes, unidas por su
carbono anomérico a Pe,
es una representación esquemática
de una unidad monosacarídica con estructura piranósica elegida
entre: hexosas, pentosas y los desoxiazúcares correspondientes,
estando unida esta unidad por su carbono anomérico a otra unidad
monosacarídica y estando los grupos hidroxi de esta unidad
sustituidos con grupos R_{1} idénticos o diferentes, siendo
R_{1} tal como se define a
continuación,
- -
- Pe representa un pentasacárido de estructura:
- -
- h es igual a 1 ó 2,
- -
- n es un número entero y puede tener cualquier valor de 0 a 25,
- -
- R_{1} representa la secuencia -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo
- -
- OSO_{3}^{-},
- -
- R_{2} representa la secuencia -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo
- -
- OSO_{3}^{-},
- -
- R_{3} representa la secuencia -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}),
- -
- R_{4} representa la secuencia -T-Biot, un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo
- -
- OSO_{3}^{-} o bien R_{4} constituye un puente -O-CH_{2}-, estando unido el grupo -CH_{2}- al átomo de carbono portador de la función carboxílica en el mismo ciclo; entendiéndose que al menos uno de los sustituyentes R_{1}, R_{2}, R_{3} o R_{4} representa un grupo -T-Biot,
- -
- W representa un átomo de oxígeno o un grupo metileno,
- -
- T representa una de las secuencias elegidas entre: NH,
o
en los que j y k, idénticas o
diferentes, son números enteros que pueden ser cualquier valor de 1
a
10;
- -
- Biot representa el grupo:
así como sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
3. Polisacáridos según una de las
reivindicaciones 1 ó 2 de fórmula (I.1):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
\vskip1.000000\baselineskip
representa una familia particular
de polisacáridos Po, unidos por su carbono anomérico a Pe tal como
se define para
(I),
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
es tal como se define para
(I),
- -
- los grupos R_{1} son tal como se define para (I) y, para un mismo monosacárido, pueden ser idénticos o diferentes,
- -
- el monosacárido contenido en [ ]_{m} se repite m veces, el monosacárido contenido en [ ]_{t} se repite t veces, el monosacárido contenido en [ ]_{p} se repite p veces,
- -
- m es un número entero que varía de 1 a 5, t es un número entero que varía de 0 a 24 y p es un número entero que varía de 0 a 24, entendiéndose que 1 \leq m+t+p \leq 25,
así como sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
4. Polisacáridos según la reivindicación 3
caracterizados porque uno solo de los sustituyentes R_{1},
R_{2}, R_{3} o R_{4} representa la secuencia
-T-Biot siendo T y Biot tal como se
define para (I).
5. Hexadecasacáridos según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 4 de fórmula (1.2):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
- -
- T representa una de las secuencias elegida entre: NH,
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
o
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en las que j y k, idénticas o
diferentes, son números enteros que pueden ser cualquier valor de 1
a
10;
\newpage
- -
- Biot representa el grupo:
- -
- Pe representa un pentasacárido de estructura:
en el
que:
- -
- R_{1} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{2} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{3} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}),
- -
- R_{4} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-} o bien R_{4} constituye un puente -O-CH_{2}-, estando unido el grupo -CH_{2} al átomo de carbono portador de la función carboxílica en el mismo ciclo;
- -
- W representa un átomo de oxígeno o un grupo metileno;
así como sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
6. Pentasacáridos según una de las
reivindicaciones 1 ó 2 de fórmula (I.3):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en los que R_{1}, R_{2},
R_{3}, R_{4} y W son como se define para (I), así como sus sales
farmacéuticamente
aceptables.
7. Pentasacáridos según la reivindicación 6
caracterizados porque uno solo de los sustituyentes R_{1},
R_{2}, R_{3} o R_{4} representa la secuencia
-T-Biot siendo T y Biot tal como se
define para (I).
8. Pentasacáridos según una de las
reivindicaciones 6 ó 7 de fórmula (1.3) de fórmula (I.4):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
en la
que:
- -
- T representa una de las secuencias elegida entre: NH,
o
en las que j y k, idénticas o
diferentes, son números enteros que pueden ser cualquier valor de 1
a
10;
- -
- Biot representa el grupo:
- -
- R_{1} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{2} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-},
- -
- R_{3} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}),
- -
- R_{4} representa un grupo alcoxi (C_{1}-C_{6}) o un grupo -OSO_{3}^{-} o bien R_{4} constituye un puente -O-CH_{2}-, estando unido el grupo -CH_{2}- al átomo de carbono portador de la función carboxílica en el mismo ciclo,
- -
- W representa un átomo de oxígeno o un grupo metileno, así como sus sales farmacéuticamente aceptables.
9. Polisacáridos según una de las
reivindicaciones 1 ó 2 elegidos entre:
- -
- Sal de sodio del metil(2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1-4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(6-biotinamido-6-desoxi-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1-4)-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-[(2,3,6-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-metil)-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)]_{3}-(6-O-sulfonato-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopirano-sil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3, 6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosil-urónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio del metil(2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D- glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(6-[6-(biotinamido)hexamido]-6-desoxi-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-[(2,3,6-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)]_{3}-(6-O-sulfonato-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)- (1\rightarrow 4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosiluróni- co)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio del metil(2,3,4,6-tetra-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(6-[6-(6-biotanamidohexamido) hexamido]-6-desoxi-2,3-di-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1 \rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-[(2,3,6-tri-O-metil-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(2,3,6-tri-O-metil-\beta-D-glucopiranosil)- (1\rightarrow4)]_{3}-(6-O-sulfonato-2,3-di-O-metil)-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopi- ranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-ido- piranosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio del metil(2-biotinamido-2-desoxi-3,4-di-O-metil-6-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio del metil(2-[6-(6-biotinamidohexamido) hexamido]-2-desoxi-3,4-di-O-metil-6-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil)-\alpha-L-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido,
- -
- Sal de sodio del metil(2-[N-(6-biotinamido hexanoil)]-2-desoxi-3,4-di-O-metil-6-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-(ácido 2,3-di-O-metil-\alpha-L-idopira-nosilurónico)-(1\rightarrow4)-2,3,6-tri-O-sulfonato-\alpha-D-glucopiranósido.
10. Composiciones farmacéuticas que contienen,
como principio activo, un polisacárido según una cualquiera de las
reivindicaciones 1 a 9 eventualmente en asociación con uno o varios
excipientes inertes y apropiados.
11. Utilización de las composiciones
farmacéuticas según la reivindicación 10 para la fabricación de un
medicamento útil para el tratamiento de patologías consecutivas
para una modificación de la homeostasis del sistema de la
coagulación que aparece durante trastornos del sistema
cardiovascular y cerebrovascular como los trastornos
tromboembólicos asociados con la ateroesclerosis y la diabetes tales
como: angina inestable, ataque cerebral, reestenosis después de
angioplastia, endarterectomía, colocación de prótesis endovasculares
o los trastornos tromboembólicos asociados con la retrombosis
después de trombolisis, infarto, demencia de origen isquémico,
enfermedades arteriales periféricas, hemodiálisis, fibrilaciones
auriculares, durante la utilización de prótesis vasculares de
puentes aorto-coronarios, en el tratamiento o la
prevención de patologías tromboembólicas de origen venoso tales
como embolias pulmonares, para prevenir o para tratar las
complicaciones trombóticas observadas después de operaciones
quirúrgicas, desarrollos de tumores o desarreglos de la coagulación,
inducidos por activadores bacterianos, víricos o enzimáticos.
12. Utilización de un polisacárido según una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 para recubrir prótesis.
13. Utilización de un polisacárido según una
cualquiera de las reivindicaciones 1 a 9 como adyuvantes durante la
endarterectomía realizada con globos porosos.
14. Procedimiento para emplear avidina o
estreptavidina caracterizado porque permite neutralizar los
polisacáridos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a
9.
15. Utilización de avidina o estreptavidina para
la preparación de medicamentos destinados a neutralizar los
polisacáridos según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a
9.
16. Polisacárido según una de las
reivindicaciones 1 ó 2 de fórmula:
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