ES2289274T3 - Derivados de pirrol-2,5-diona y su uso como inhibidores de gsk-3. - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula I en la que: Ar es benzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con R8 y R9, benzofur-4-ilo, quinolin-5-ilo, quinolin-7-ilo, isoquinolin-5-ilo, isoquinolin-3-ilo, imidazo[1, 2-a]piridin-3-ilo, imidazo[1, 2-a]piridin-5-ilo, furo[3, 2-c]piridin-7-ilo, o 2, 3-dihidrobenzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con R8 y R9 y en el anillo dihidrofurilo con alquilo C1-C4; R1a es hidrógeno, alcoxi C1-C4, -(CH2)m-G, -O-(CH2)m-G, halo, alquilo C1-C4 opcionalmente sustituido con uno a tres halo, piperazin-1-ilo opcionalmente sustituido 1-2 veces con -(CO2)n-(alquilo C1-C4), o -(CH2)-O-(CH2)-O-(CH3); R1b es hidrógeno o halo; R1c es hidrógeno o halo; G es independientemente cada vez que aparece hidroxi, NR11R12, o piperidin-4-ilo;

Description

Derivados de pirrol-2,5-diona y su uso como inhibidores de GSK-3.

La glucógeno sintasa quinasa-3 (GSK-3) es una serina/treonina proteína quinasa descubierta por primera vez como una de varias quinasas capaces de fosforilar e inactivar la glucógeno sintasa, la enzima reguladora de la síntesis del glucógeno en mamíferos (Embi, y col., Eur. J. Biochem., 107, 519-527 (1980)). Existiendo en dos isoformas, GSK-3\alpha y GSK-3\beta, GSK-3 fosforila una amplia diversidad de proteínas in vitro. La diversidad de estas proteínas sugiere un papel para GSK-3 en el control del metabolismo, crecimiento, y desarrollo celular.

La diabetes de tipo I se caracteriza por la ausencia de insulina como resultado de la destrucción de las células que producen insulina en el páncreas. La diabetes de tipo II se caracteriza por la secreción y acción deficiente de la insulina. La unión de la insulina a su receptor inicia una cascada de acontecimientos que provocan la fosforilación e inhibición de GSK-3, que contribuye a la estimulación de la síntesis de glucógeno y proteínas inducida por la insulina. Se ha demostrado que los inhibidores de GSK-3 imitan las acciones de la insulina (Coghlan, y col., Chem. Biol., 7, 793-803 (2000)), que incluyen la capacidad de disminuir los niveles de glucosa sanguínea in vivo (Norman, Drug News Perspect., 14, 242-247 (2001)). Estos recientes descubrimientos sugieren que los inhibidores de GSK-3 tienen un papel potencial en el tratamiento de la diabetes.

La enfermedad de Alzheimer se caracteriza por la existencia de la proteína asociada a microtúbulos Tau en un estado anormalmente hiperfosforilado (Cohen y Frame, Nature Reviews: Molecular Cell Biology, 2, 769-776 (octubre 2001) <www.nature.com/reviews/molcellbio>). GSK-3 fosforila muchos de los sitios hiperfosforilados en Tau in vitro, lo que evita que se una a microtúbulos, dejándola disponible para experimentar el ensamblaje aberrante de filamentos que puede ser responsable de la degeneración neuronal observada en la enfermedad de Alzheimer y otros trastornos neurológicos. Se ha demostrado que inhibidores de GSK-3, tales como la insulina e iones litio, inducen una desfosforilación parcial de Tau en células neuronales (Cross, y col., J. Neurochem., 77, 94-102 (2001)). Estos descubrimientos sugieren que los inhibidores de GSK-3 tienen un papel potencial en el tratamiento de trastornos neurológicos degenerativos tales como la enfermedad de Alzheimer.

El documento WO 98/16528 describe derivados de purina, el documento WO 99/65897 describe derivados de pirimidina y piridina, el documento WO 00/38675 describe maleimidas, y el documento WO 01/56567 describe derivados de diaminotiazol que se ha mostrado que son inhibidores de GSK-3. Véase también el documento WO-A-02/10158. Son necesarios inhibidores adicionales de GSK-3 para proporcionar tratamientos para trastornos endocrinos y neurológicos mediados por GSK-3. La presente invención proporciona inhibidores de GSK-3.

La presente invención proporciona compuestos de Fórmula I:

1

en la que:

Ar es benzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con R^{8} y R^{9}, benzofur-4-ilo, quinolin-5-ilo, quinolin-7-ilo, isoquinolin-5-ilo, isoquinolin-3-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-3-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-5-ilo, furo[3,2-c]piridin-7-ilo, o 2,3-dihidrobenzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con R^{8} y R^{9} y en el anillo dihidrofurilo con alquilo C_{1}-C_{4};

R^{1a} es hidrógeno, alcoxi C_{1}-C_{4}, -(CH_{2})_{m}-G, -O-(CH_{2})_{m}-G, halo, alquilo C_{1}-C_{4} opcionalmente sustituido con uno a tres halo, piperazin-1-ilo opcionalmente sustituido 1-2 veces con -(CO_{2})_{n}-(alquilo C_{1}-C_{4}), o -(CH_{2})-O-(CH_{2})-O-(CH_{3});

R^{1b} es hidrógeno o halo;

R^{1c} es hidrógeno o halo;

G es independientemente cada vez que aparece hidroxi, NR^{11}R^{12}, o piperidin-4-ilo;

R^{2} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, -(CH_{2})_{m}-G, tetrahidropiran-4-ilo, 4-(NR^{4}R^{5})ciclohex-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, 2-azabiciclo[3.2.1]oct-5-ilo, el resto

2

el resto

3

ciclohexan-1-on-4-ilo, piridin-4-ilo; y R^{3} es hidrógeno, halo, alquilo C_{1}-C_{4}, o ciclopropilo; o R^{2} y R^{3} tomados en conjunto representan

4

R^{4} es hidrógeno y R^{5} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, o R^{4} y R^{5} tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo pirrolidina;

R^{6} es hidrógeno, bencilo, -CO_{2}(alquilo C_{1}-C_{4}), -C(O)-(alquil C_{1}-C_{4})-NR^{14}R^{15}, -C(O)tetrahidropiran-4-ilo, -C(O)morfolin-4-ilo, -CH_{2}-tetrahidropiran-4-ilo, un resto aminoacídico, -C(O)piridin-2-ilo, -C(O)piridin-3-ilo, -C(O)piridin-4-ilo, -C(O)pirimidin-5-ilo, alquilo C_{1}-C_{4}, -C(O)pirazin-2-ilo, o -CO_{2}-(alquil C_{1}-C_{4})-(alcoxi C_{1}-C_{4});

R^{7} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o-(CH_{2})_{m}-G;

R^{8} es -NHCO_{2}(alquilo C_{1}-C_{4}), -NHSO_{2}(alquilo C_{1}-C_{4}), halo, amino, -O-(CH_{2})_{m}-G, -NHC(O)(alquilo C_{1}-C_{4}), alcoxi C_{1}-C_{4}, hidroxi, -O-R^{10}, alquilo C_{1}-C_{4}, (alquil C_{1}-C_{4})tio, o -(CH_{2})_{m}-G;

R^{9} es halo;

R^{10} es piperidin-3-ilo, piperidin-4-ilo, o pirrolidin-3-ilo;

R^{11} y R^{12} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, ciclopropilmetilo, bencilo, o, tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo piperidina, 4-hidroxipiperidina, 4-(alquil C_{1}-C_{4})piperidina, N-(R^{13})-piperazina, o morfolina;

R^{13} es hidrógeno, C(O)-(alquilo C_{1}-C_{4}), o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{14} y R^{15} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{16} es independientemente cada vez que aparece, hidrógeno, dimetilo geminal, dietilo geminal, un cicloalquilo C_{3}-C_{6} espiro-condensado, o alquilo C_{1}-C_{4} opcionalmente sustituido con hidroxi; y R^{17} representa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o dimetilo geminal, con la condición de que la cantidad total de átomos de carbono entre R^{16} y R^{17} no exceda de cinco;

m es independientemente cada vez que aparece 2, 3, 4 ó 5;

n es independientemente cada vez que aparece 0 ó 1; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, sujeto a las siguiente condiciones:

i) cuando G es hidroxi, no más de dos R^{1a}, R^{2}, R^{7}, o R^{8} puede ser -(CH_{2})_{m}-G, o -O-(CH_{2})_{m}-G; y

ii) cuando G es NR^{11}R^{12}, no más de un R^{1a}, R^{2}, R^{7}, o R^{8} puede ser -(CH_{2})_{m}-G, o -O-(CH_{2})_{m}-G.

La presente invención también proporciona un procedimiento para tratar la diabetes en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I.

La presente invención también proporciona un procedimiento para tratar la enfermedad de Alzheimer en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I.

La presente invención proporciona adicionalmente un procedimiento para inhibir GSK-3 en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I.

La presente invención también proporciona una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de Fórmula I, en combinación con un vehículo, diluyente o excipiente farmacéuticamente aceptable.

La presente invención proporciona adicionalmente un procedimiento para estimular la deposición ósea en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de dicho tratamiento una cantidad eficaz de un inhibidor de GSK-3.

La presente invención también proporciona un procedimiento para estimular la deposición ósea en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de dicho tratamiento una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I.

Además, esta invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para la inhibición de GSK-3.

Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para la inhibición de GSK-3. Además, esta invención proporciona una formulación farmacéutica adaptada para el tratamiento de la diabetes, que contiene un compuesto de Fórmula I. Además, esta invención proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes. Esta invención también proporciona el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer. La presente invención también proporciona una formulación adaptada para estimular la deposición ósea en mamíferos, que contiene un compuesto de Fórmula I. La presente invención proporciona adicionalmente el uso de un compuesto de Fórmula I para la fabricación de un medicamento para estimular la deposición ósea.

Las siguientes definiciones son para explicar el significado y alcance de los diversos términos usados en este documento. Los términos generales usados en este documento tienen sus significados habituales.

El término "GSK-3" se refiere a GSK-3\alpha y/o GSK-3\beta.

El término "diabetes" se adopta para indicar diabetes de tipo I y/o II.

La expresión "cantidad eficaz" como se usa en "una cantidad eficaz de un compuesto de Fórmula I", por ejemplo, se refiere a una cantidad de un compuesto de la presente invención que es capaz de inhibir GSK-3.

Los términos químicos generales usados en este documento tienen sus significados habituales. Por ejemplo, como se usa en este documento, la expresión "alquilo C_{1}-C_{4}", solo o en combinación, indica un grupo alquilo C_{1}-C_{4} de cadena lineal o cadena ramificada constituido por átomos de carbono e hidrógeno, ejemplos del cual son metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilo, sec-butilo, terc-butilo, y similares. La expresión "dimetilo geminal" representa dos grupos metilo unidos en la misma posición de sustitución. La expresión "cicloalquilo C_{3}-C_{6}" se refiere a ciclopropilo, ciclobutilo, ciclopentilo, y ciclohexilo. La expresión "cicloalquilo C_{3}-C_{6} espiro-condensado" se refiere a un grupo cicloalquilo C_{3}-C_{6} definido anteriormente unido a un átomo de carbono a través de un enlace espiro.

La expresión "alcoxi C_{1}-C_{4}", solo o en combinación, indica un grupo alquilo definido anteriormente que está unido mediante un átomo de oxígeno, tal como, por ejemplo, metoxi, etoxi, propoxi, isopropoxi, butoxi, terc-butoxi, y similares. La expresión "(alquil C_{1}-C_{4})tio ", solo o en combinación, indica un grupo alquilo definido anteriormente que está unido mediante un átomo de azufre, e incluye metiltio, etiltio, isobutiltio, y similares.

El término "hidroxi", solo o en combinación, representa un resto -OH. Como se usa en este documento, el término "halo" o "halógeno" representa flúor, cloro, bromo, o yodo.

La expresión "resto aminoacídico" se adopta para indicar un resto aminoacídico seleccionado entre el grupo constituido por alanilo, arginilo, asparaginilo, aspartilo, cisteinilo, glutaminilo, glutamilo, glicilo, histidilo, isoleucilo, leucilo, lisilo, metionilo, fenilalanilo, fenilglicilo, prolilo, serilo, treonilo, triptofanilo, tirosilo, y valilo unido a través de un carbonilo ácido.

Un especialista en la técnica entenderá que la mayoría o todos los compuestos de la presente invención son capaces de formar sales. En todos los casos, las sales farmacéuticamente aceptables de todos los compuestos se incluyen en sus nombres. Los compuestos de la presente invención son aminas, y por consiguiente reaccionan con cualquiera de varios ácidos inorgánicos y orgánicos para formar sales de adición de ácidos farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables preferidas son las formadas con ácido clorhídrico.

Aunque todos los compuestos de Fórmula l son inhibidores de GSK-3 útiles, se prefieren ciertos compuestos. Los siguientes párrafos definen clases preferidas.

a) Ar es benzofur-7-ilo.

b) Ar es 2,3-dihidrobenzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con halo.

c) Ar es 2,3-dihidro-6-fluorobenzofur-7-ilo.

d) Ar es imidazo[1,2-a]piridin-3-ilo.

e) R^{1a} es-(CH_{2})_{m}-G.

f) R^{1a} es -O-(CH_{2})_{m}-G.

g) R^{1b} es hidrógeno.

h) R^{1b} es fluoro.

i) R^{1c} es hidrógeno.

j) R^{1c} es fluoro.

k) G es hidroxi.

l) G es NR^{11}R^{12}

m) G es piperidin-4-ilo.

n) R^{2} es -(CH_{2})_{m}-G.

o) R^{2} es 1-(R^{6})-piperidin-4-ilo.

p) R^{2} es 1-(R^{6})-piperidin-4-ilo adicionalmente sustituido con metilo.

q) R^{3} es halo.

r) R^{2} y R^{3} tomados en conjunto representan

5

s) R^{6} es hidrógeno.

t) R^{6} es -C(O)morfolin-4-ilo.

u) R^{6} es -C(O)pirazin-2-ilo.

v) R^{7} es metilo.

w) R^{7} es -(CH_{2})_{m}-G.

x) R^{8} es -O-(CH_{2})_{m}-G.

y) R^{8} es halo.

z) R^{8} es fluoro.

aa) R^{8} es metoxi.

bb) R^{8} es hidroxi.

cc) R^{9} es fluoro.

dd) R^{9} es cloro.

ee) R^{11} es hidrógeno.

ff) R^{11} es metilo.

gg) R^{11} es etilo.

hh) R^{12} es hidrógeno.

ii) R^{12} es metilo.

jj) R^{12} es etilo.

kk) R^{13} es hidrógeno.

ll) R^{14} y R^{15} son ambos hidrógeno.

mm) R^{14} es hidrógeno y R^{15} es metilo.

nn) R^{16} es metilo.

oo) R^{16} es dimetilo geminal.

pp) R^{17} es dimetilo geminal.

qq) El compuesto es una base libre.

rr) El compuesto es una sal.

ss) El compuesto es la sal clorhidrato.

Los párrafos precedentes pueden combinarse para definir clases preferidas adicionales de compuestos.

Los compuestos de Fórmula I son inhibidores de GSK-3. Por tanto, la presente invención también proporciona un procedimiento para inhibir GSK-3 en un mamífero, que comprende administrar a un mamífero en necesidad de dicho tratamiento una cantidad inhibidora de GSK-3 de un compuesto de Fórmula I. Se cree que los presentes compuestos son útiles para tratar la diabetes de tipo I y/o tipo II. Además, se cree que los compuestos de la presente invención son útiles en el tratamiento de trastornos neurológicos tales como demencias, especialmente demencia del tipo del Alzheimer. También se cree que los compuestos de la presente invención son útiles para el tratamiento del trastorno bipolar.

Una realización adicional de la presente invención es el uso de inhibidores de GSK-3 para la rápida deposición ósea. Esta capacidad de estimular la rápida deposición ósea proporciona un nuevo medio para tratar una diversidad de patologías y afecciones en las que sería beneficioso que creciera hueso nuevo. Estas patologías incluyen osteoporosis y fragilidad así como pérdida ósea debido a enfermedad periodontal. Los compuestos que muestran esta actividad también serán útiles para promover la curación de heridas y la reparación de fracturas óseas. También se contempla que la deposición ósea mediada por un inhibidor de GSK-3 mejorará los resultados del paciente en cirugía de reemplazo de articulaciones potenciando la unión de la prótesis articular al hueso del paciente. Se prefiere el uso de los compuestos de la presente invención para la inducción de la rápida deposición ósea. Se prefiere que el mamífero a tratar por la administración de los compuestos de Fórmula I sea un ser humano.

El especialista en la técnica apreciará que la introducción de ciertos sustituyentes creará asimetría en los compuestos de Fórmula I. La presente invención contempla todos los enantiómeros y mezclas de enantiómeros, incluyendo racematos. Se prefiere que los compuestos de la invención que contienen centros quirales sean enantiómeros sencillos.

Los compuestos de la presente invención pueden prepararse por una diversidad de procedimientos, algunos de los cuales se ilustran en los siguientes Esquemas. Un especialista en la técnica reconocerá que las etapas individuales de los siguientes esquemas pueden variarse para proporcionar los compuestos de Fórmula I. El orden particular de las etapas necesarias para producir los compuestos de Fórmula I depende del compuesto particular que se está sintetizando, el compuesto de partida, y la inestabilidad relativa de los restos sustituidos. Algunos sustituyentes - tales como R^{1a}, R^{1b}, y R^{1c} - se han eliminado en los siguientes esquemas por claridad y no se pretende que limiten el contenido de los esquemas de ningún modo.

Esquema I

6

El Esquema I representa procedimientos sintéticos para la formación de las bisarilmaleimidas de Fórmula I mediante los Procedimientos A y B. Esta reacción es bien conocida en la técnica. Véase, por ejemplo, Faul, y col., J. Org. Chem. 63, 6053-6058 (1998). Los ésteres de ácido oxoacético de fórmula (1) o (4), se hacen reaccionar con las acetamidas de fórmula (2) o (3), respectivamente, en un disolvente adecuado, tal como dimetilformamida o tetrahidrofurano, en presencia de una base adecuada tal como hidruro sódico o preferiblemente terc-butóxido potásico. La reacción se realiza de 0ºC a temperatura ambiente, y los reactivos se agitan durante 1-24 horas. La mezcla de reacción se trata con un ácido adecuado, tal como ácido clorhídrico, después de lo cual la mezcla se agita a aproximadamente temperatura ambiente durante 1-24 horas. Las maleimidas resultantes de Fórmula I pueden aislarse por técnicas convencionales, y purificarse por cristalización o cromatografía según se necesite o desee.

Los ésteres de ácido oxoacético necesarios de fórmulas (1) y (4) pueden prepararse a partir de los indoles y grupos arilo apropiadamente sustituidos. La formación de ésteres de ácido oxoacético se representa en los Esquemas IIa y IIb.

Esquema IIa

7

Esquema IIb

700

Los ésteres del ácido 3-indoliloxoacético de fórmula (1) están disponibles en el mercado o pueden prepararse como se representa en el Esquema IIa. Se hace reaccionar un indol apropiadamente sustituido con un haluro de oxalilo, tal como cloruro de oxalilo, en presencia de una base orgánica, tal como 2,6-lutidina o trietilamina, en un disolvente apropiado, tal como diclorometano o éter dietílico, para dar un compuesto de fórmula (1). La reacción se realiza a bajas temperaturas, y la mezcla se agita durante 1-24 h. Cuando se usa un haluro de oxalilo, la mezcla se enfría adicionalmente a aproximadamente -78ºC y se añade una fuente de alcóxido, tal como metóxido sódico, con un disolvente apropiado, tal como metanol. El éster de ácido oxoacético resultante puede aislarse por técnicas convencionales y purificarse por cristalización o cromatografía según se necesite o desee. La formación de fórmula (1) en el Esquema II es bien conocida en la técnica; véase, por ejemplo, Faul, y col., J. Org. Chem. 63, 6053-6058(1998).

En el Esquema IIb, los compuestos de fórmula (4) se preparan a partir de arilos halogenados apropiadamente sustituidos de fórmula (11) en la que X es halo. Un compuesto de fórmula (11) se somete a un intercambio de litio-halógeno, después de lo cual se inactiva el anión litio por un oxalato, tal como un oxalato de dialquilo, como se describe en el Esquema IIa, para dar compuestos de fórmula (4). El especialista en la técnica también reconocería el uso de un reactivo de Grignard inactivado con el oxalato a bajas temperaturas como un procedimiento sintético alternativo.

La formación de acetamidas se representa en el Esquema III.

Esquema IIIa

8

Esquema IIIb

800

En el Esquema IIIa, los compuestos de fórmula (11) se convierten en compuestos de fórmula (12) en la etapa i por intercambio de litio-halógeno, seguido de inactivación con N,N'-dimetilformamida. Los compuestos de fórmula (13) se forman en la etapa f, mediante una cianohidrina fosforilada formada in situ a partir de la reacción de compuestos de fórmula (12), dietilcianofosfonato, y cianuro de litio en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano. Para ejemplos similares de esta conversión véase, Yoneda, y col., Tetrahedron Lett., 30, 3681-3684 (1989); Yoneda, y col., J. Org. Chem., 56, 1827-1832 (1991). La hidrólisis básica del grupo acetonitrilo, etapa g, da las acetamidas de fórmula (3).

Además, el especialista en la técnica apreciaría, como procedimiento alternativo, el uso de bromuro de 2-etoxi-2-oxoetilzinc, con un catalizador de paladio, en un disolvente adecuado, tal como tetrahidrofurano, para dar compuestos de fórmula (14) mediante la etapa j. Los compuestos de fórmula (14) después pueden someterse a condiciones de hidrólisis básica en la etapa k para dar compuestos de fórmula (15). Los compuestos de fórmula (15) se convierten en compuestos de fórmula (2) en la etapa I en condiciones de acoplamiento convencionales en presencia de una fuente de amonio, tal como hidróxido de amonio o gas amoniaco. Los reactivos de acoplamiento adecuados incluyen N,N'-carbonildiimidazol (CDI), N,N'-diciclohexilcarbodiimida (DCC), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), y 1-(3-(1-pirrolidinil)propil)-3-etilcarbodiimida (PEPC). Catalizadores opcionales adecuados para la reacción de acoplamiento incluyen N,N-[dimetil]-4-aminopiridina (DMAP). Todos los reactivos se combinan en un disolvente adecuado - típicamente diclorometano, cloroformo, tetrahidrofurano, dioxano, o éter dietílico - y se agitan durante 1 a 72 horas a una temperatura de ambiente a aproximadamente la temperatura de reflujo del disolvente. El producto deseado puede aislarse por técnicas de extracción y cristalización convencionales, y purificarse por cromatografía o cristalización según se necesite o desee.

Como alternativa, en la etapa m, el especialista en la técnica apreciaría que los compuestos de fórmula (14) pueden hacerse reaccionar para formar compuestos de fórmula (2) directamente. Un compuesto de fórmula (14) en un disolvente adecuado, tal como metanol, que se ha saturado con gas amoniaco, se coloca en un recipiente precintado y se hace reaccionar a temperaturas elevadas para formar compuestos de fórmula (2).

Los intermedios de arilo necesarios para la formación de fórmula (2) ó (4) están disponibles en el mercado o pueden prepararse sintéticamente como se describe en este documento.

Las conversiones de los compuestos de fórmula (10) en compuestos de fórmula (3) - que implican hidrólisis básica de un acetonitrilo de indol apropiadamente sustituido, similar a la etapa g del Esquema IIIa - son bien conocidas y apreciadas en la técnica; véase, por ejemplo Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2ª Ed., John Wiley & Sons, New York, pág. 1988-1989 (1999). La 3-indolilacetamida resultante de fórmula (3) puede aislarse por técnicas convencionales y puede purificarse por cristalización o cromatografía según se necesite o desee. Esta reacción produce indoles apropiadamente 3-sustituidos.

Esquema IV

9

Los benzofuranos de fórmula (18) pueden obtenerse de compuestos de fórmula (16). Como se muestra en la etapa n, se O-alquilan fenoles apropiadamente sustituidos con bromoacetaldehído y una base adecuada tal como carbonato potásico. La ciclación se consigue en un disolvente adecuado, en el que el agua puede ser un azeótropo, tal como clorobenceno a temperaturas de reflujo en la etapa o.

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Esquema V

10

Los compuestos de fórmula (21) pueden formarse como se muestra en el Esquema V. La etapa p representa una ciclación [2+3] de 2-aminopiridina opcionalmente sustituida con oxibutenoato de etilo en acetonitrilo en condiciones de reflujo para producir compuestos de fórmula (20). La fórmula (20) puede transformarse en la acetamida, fórmula (21), como se ha descrito previamente en la etapa m.

Esquema VI

11

El procedimiento del Esquema VI es una conversión de N-metil-pirrol-2,5-dionas, fórmula (5), en la correspondiente furan-2,5-diona, fórmula (6). Esta reacción, como se muestra en la etapa b, puede realizarse por una base adecuada en la que las dos fórmulas (5) y (6) son intermedios sintéticos estables usados para la manipulación de los grupos sustituyentes R. Las furandionas de fórmula (6) pueden convertirse en las 1H-pirrol-2,5-dionas de Fórmula (I) en la etapa c por el uso de un reactivo de alquil-disilazano. Las conversiones de este tipo son bien conocidas en la técnica; véase, por ejemplo, Davis, y col., Tetrahedron Lett., 31 (36), 5201-5204 (1990); y Mayer, y col., Tetrahedron Lett., 37 (26), 4483-4486 (1996).

Los indoles necesarios para los Esquemas IIa y IIIb están disponibles en el mercado o pueden prepararse por procedimientos bien conocidos en la técnica. Las síntesis de indol se describen en Robinson, The Fischer Indole Synthesis, John Wiley & Sons, New York (1983); Hamel, y col., J. Org. Chem., 59, 6372 (1994); y Russell, y col., Org. Prep, and Procedures Intl., 17, 391 (1985).

Muchos de los compuestos de la presente invención no son solamente inhibidores de GSK-3, sino que también son intermedios útiles para la preparación de compuestos adicionales de la presente invención. Por ejemplo, pueden acilarse, alquilarse o acoplarse aminas secundarias con ácidos carboxílicos simples o aminoácidos en condiciones convencionales. Además, pueden reducirse restos éster en los alcoholes correspondientes. Estos alcoholes después pueden activarse y desplazarse por varios nucleófilos para proporcionar otros compuestos de la invención.

Un especialista en la técnica reconocería varias transformaciones diferentes que pueden aplicarse al procedimiento sintético para la producción de intermedios útiles y reactivos para la preparación de compuestos adicionales de la presente invención. Dichas transformaciones incluyen, aunque sin limitación, desplazamiento nucleófilo de halógeno con una amina apropiada (véase Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2ª Ed., John Wiley &Sons, New York, pág. 779-780 (1999)), alquilación o acilaciones de la amina apropiada, O-alquilación de los intermedios hidroxi, o intercambio de hidroxi-halógeno (Larock, Comprehensive Organic Transformations, 2ª Ed., John Wiley & Sons, New York, pág. 689-697 (1999)). Además, los compuestos pueden hacerse reaccionar con un reactivo apropiado para introducir un grupo protector de amino adecuado tal como un grupo formilo, grupo acetilo, o preferiblemente un resto terc-butoxicarbonilo. Las técnicas para la introducción de estos grupos son bien conocidas para los especialistas en la técnica.

Además, para sustituir derivados de alcohol con una amina correspondiente, el especialista en la técnica apreciaría que los intermedios necesarios incorporarían ciertos grupos salientes apropiados. Dichos grupos salientes incluyen aunque sin limitación haluros, iones oxonio, percloratos de alquilo, ésteres de amonioalcanosulfonato, fluorosulfonatos de alquilo, nonaflatos, tresilatos, triflatos, y ésteres sulfónicos, preferiblemente el mesilato o tosilato. Las técnicas para la introducción de estos grupos son bien conocidas para los especialistas en la técnica; véase, por ejemplo, March, Advanced Organic Chemistry, 5ª Ed., John Wiley and Sons, New York, pág. 445-449 (2001). Los especialistas en la técnica apreciarán que los grupos protectores de nitrógeno pueden retirarse en cualquier punto conveniente en la síntesis de los compuestos de la presente invención. Los procedimientos de formación y retirada de un grupo protector de amino son bien conocidos en la técnica; véase, por ejemplo, Greene y Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3ª Ed., John Wiley and Sons, New York, Capítulo 7 (1999).

Los especialistas en la técnica también apreciarán que no todos los sustituyentes en los compuestos de Fórmula I tolerarán ciertas condiciones de reacción empleadas para sintetizar los compuestos. Estos restos pueden introducirse en un punto conveniente en la síntesis, o pueden protegerse y después desprotegerse según se necesite o desee. Además, los especialistas en la técnica apreciarán que en muchas circunstancias, el orden en que se introducen los restos no es crítico. El orden particular de las etapas necesarias para producir los compuestos de Fórmula I depende del compuesto particular que se está sintetizando, el compuesto de partida, y la inestabilidad relativa de los restos sustituidos.

Las siguientes preparaciones y ejemplos ilustran adicionalmente la preparación de compuestos de la presente invención y no deben considerarse de ningún modo como limitantes del alcance. Los especialistas en la técnica reconocerán que pueden hacerse diversas modificaciones sin alejarse del espíritu y alcance de la invención. Todas las publicaciones mencionadas en la memoria descriptiva son indicativas del nivel del especialista en la técnica a la que esta invención pertenece.

Las expresiones y abreviaturas usadas en las presentes Preparaciones y Ejemplos tienen sus significados normales salvo que se indique de otro modo. Por ejemplo "ºC", "N", "mmol", "g", "ml", "M", "HPLC", "IR", "EM (DC)", "EM (NI)", "EM (AIF)", "EM (BAR)", "EM (IE)", "EM (EN)", "UV", y "^{1}H RMN", se refieren a grados Celsius, normal o normalidad, milimol o milimoles, gramo o gramos, mililitro o mililitros, molar o molaridad, cromatografía líquida de alta resolución, espectrometría de infrarrojos, espectrometría de masas por desorción de campo, espectrometría de masas por nebulización iónica, espectrometría de masas por análisis de inyección en flujo, espectrometría de masas por bombardeo con átomos rápidos, espectrometría de masas por impacto electrónico, espectrometría de masas por electronebulización, espectrometría ultravioleta, y espectrometría de resonancia magnética nuclear de protones respectivamente. Además, los máximos de absorción enumerados en los espectros IR son solamente los de interés y no todos los máximos observados.

Preparación de intermedios de éster metílico del ácido oxoacético

Preparación 1

2-(1H-Indol-7-il)-etanol a) 2-(2-nitrofenil)-1-(terc-butildimetilsililoxi) etano

Se añade 2-nitrofenetil alcohol (20 g, 120 mmol) e imidazol (11,4 g, 167 mmol) a diclorometano (200 ml). Se enfría a 0ºC y se añade cloruro de terc-butildimetilsililo sólido (23,4 g, 155 mmol). Se agita la mezcla a 20ºC durante 2 horas y se diluye con acetato de etilo:éter dietílico 1:1. Se lava con agua destilada, ácido acético al 3% acuoso, hidrogenocarbonato sódico 0,5 molar acuoso, y cloruro sódico saturado. Se seca sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida dando 32,4 g (96%) del compuesto del título en forma de un aceite amarillo claro. ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,89 (dd, 1H, J = 8,0, 1,2 Hz), 7,50 (dt, 1H, J = 7,2, 1,6 Hz), 7,37 (m, 2H), 3,89 (t, 2H, J = 6,4 Hz), 3,12 (t, 2H, J = 6,4 Hz), 0,83 (s, 9H), 0,06 (s, 6H).

b) 2-(1H-Indol-7-il)etanol

Se añade lentamente una solución 1,0 molar de bromuro de vinil-magnesio en tetrahidrofurano (430 ml, 430 mmol) a una solución agitada de 2-(2-nitrofenil)-1-(terc-butildimetilsililoxi)etano (27,4, 97,3 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (300 ml) en atmósfera de nitrógeno, manteniendo la temperatura interna de la reacción entre -48ºC y -43ºC. Se agita a -45ºC durante 45 minutos. Se vierte en 1,5 litros de cloruro de amonio saturado acuoso en agitación y se extrae con hexano al 50%, éter dietílico al 50%. Se seca sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida. La cromatografía en sílice ultrarrápida usando un gradiente de hexano neto a acetato de etilo al 7% en hexa-
no da 14,4 g de un aceite pardo, que es una mezcla del producto protegido terc-butildimetilsililo y material de partida.

Se disuelve el aceite pardo en tetrahidrofurano (500 ml), se añade agua destilada (100 ml), y se enfría la mezcla a 15ºC. Se añade ácido clorhídrico acuoso 1 M (100 ml), después se agita a 15ºC durante 2 horas. Se añade hidrogenocarbonato sódico sólido hasta que la mezcla de reacción es básica, y se satura añadiendo cloruro sódico sólido. Se separa, se filtra, y se concentra a presión reducida obteniendo 9,3 de un aceite pardo, que es una mezcla del compuesto del título y 2-nitrofenetil alcohol.

Se disuelve el aceite pardo en tetrahidrofurano (100 ml), se añade etanol absoluto (50 ml), después se añade paladio al 10% sobre carbono, y la mezcla se agita en atmósfera de hidrógeno (1 atm.) a 20ºC, durante 2 horas. Se diluye la mezcla con acetato de etilo y se filtra a través de una capa de Celite®. Se lava con ácido clorhídrico acuoso 0,2 M, hidrogenocarbonato sódico saturado acuoso, y cloruro sódico saturado. Se seca sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, se concentra a presión reducida. La cromatografía en sílice ultrarrápida usando acetato de etilo, hexano da 6,9 g (44%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. EMAR (M+H) = 162,0924.

Preparación 2

1-(1,4-Dioxa-espiro[4,5]dec-8-il)-4-fluoro-1H-indol a)N-(endo-8-Carbetoxi-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-indol

Se disuelve N-carbetoxi-4-tropinona (11,97 g, 60,71 mmol) y 2-(2,2-dimetoxietil)fenilamina (10,0 g, 55,19 mmol) en ácido acético (60 ml) y se trata con triacetoxiborohidruro sódico (17,54 g, 82,78 mmol). Se agita durante 4 días a temperatura ambiente y después a 70ºC durante 6 h. Se lava con agua (400 ml) e hidróxido sódico, extrayendo con acetato de etilo. Se seca la fase orgánica sobre sulfato sódico y se evapora. Se purifica el aceite restante por cromatografía ultrarrápida (diclorometano/etanol 95:5) produciendo 13,36 g (34%) del compuesto del título en forma de cristales blancos. EM: 299,1 M^{+}+1.

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b) 1-(1,4-Dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-4-fluoro-1H-indol

Se disuelve 2-(2',2'-dimetoxietil)-3-fluorofenilamina (10 g, 50,2 mmol) y 1,4-ciclohexanodiona monocetal (8,62 g, 55,2 mmol) en ácido acético glacial (100 ml), se añade triacetoxiborohidruro sódico (15,96 g, 75,3 mmol) y se calienta la mezcla a 70ºC durante 20 h. Se enfría la mezcla de reacción en un baño de hielo y se hace básica con solución de hidróxido sódico 5 N. Se extrae la mezcla con cloruro de metileno, se lava con agua y salmuera y se seca sobre sulfato sódico produciendo un aceite amarillo pardo (14 g). La cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos produce el producto puro en forma de un sólido (11,14 g, 77,14%). EMEN m/z (intensidad relativa) 276,2 (M^{+}+1, 100).

Preparación 3

1-(2,2-Dimetoxietil)-3-metil-2-nitrobenceno

Se combina 2-nitro-meta-xileno (5 ml, 0,037 mol), N,N-dimetilformamida dimetilacetal (5,4 ml, 1,1 equiv.) y N,N-dimetilformamida (60 ml) en un matraz y se lleva a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante 2 días. Se deja enfriar a temperatura ambiente, después se concentra a aproximadamente la mitad del volumen. Se añade metanol (40 ml) y trimetilsililcloruro (6,6 ml, 1,4 equiv.). Se lleva a reflujo durante una noche. Se diluye con acetato de etilo después de enfriar a temperatura ambiente, después se extrae con bicarbonato sódico saturado seguido de salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (hexanos:acetato de etilo 9:1) da 1,15 g (14%) del producto en forma de un aceite amarillo claro. ^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 2,23 (s, 3H), 2,80 (d, J = 5,36 Hz, 2H), 3,19 (s, 6H), 4,45 (m, 1H), 7,32 (m, 2H), 7,42 (m, 1H).

Preparación 4

2-(2,2-Dimetoxietil)-6-metilanilina

Se añade a un matraz de fondo redondo que contiene 1-(2,2-dimetoxietil)-3-metil-2-nitrobenceno (1,1 g) en metanol (50 ml), paladio al 10% sobre carbono (0,13 g). Se purga con nitrógeno, después se coloca en atmósfera de hidrógeno usando un globo de hidrógeno. Se agita durante una noche a temperatura ambiente. Se filtra a través de Celite, se lava con metanol. Se concentra dando el producto (0,98 g, 103%) en forma de un aceite transparente. ^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 2,05 (s, 3H), 2,71 (d, J = 5,36 Hz, 2H), 3,23 (s, 6H), 4,52 (m, 3H), 6,42 (m, 1H), 6,80 (d, J = 7,31 Hz, 2H).

Preparación 5

Bromuro de 1-etoxi-2-oxoetilzinc

Se mezcla polvo de zinc lavado en ácido (3,28 g, 50,06 mmol) y cloruro cuproso (0,5 g, 5,06 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (10 ml) y se lleva a reflujo durante 40 min. Se calienta a temperatura ambiente y se añade bromoacetato de etilo (2,09 g, 1,4 ml, 12,52 mmol). Se agita la mezcla durante 1 h y se deja reposar (sin agitación) durante una noche para facilitar la sedimentación del zinc. Se filtra la solución de reactivo antes de su uso.

Preparación 6

5-Metil-1H-indol-7-carboxaldehído a) 5-Metil-2-nitrobenzaldehído

Se disuelve (5-metil-2-nitrofenil)metanol (10 g, 59,88 mmol) en diclorometano (210 ml). Se añaden tamices moleculares de 3 \ring{A} (54 g) y dicromato de piridinio (22,53 g, 59,88 mmol). Se agita a temperatura ambiente durante 6 horas. Se pasa la mezcla de reacción en bruto a través de una columna corta de gel de sílice, y se retira a presión reducida. La purificación del residuo por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo al 10-20%:hexano) da 7,84 g (79%) del compuesto del título en forma de un aceite incoloro.^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 10,41 (m, 1H), 8,02 (m, 1H), 7,69 (s, 1H), 7,53 (d, 1H), 2,51 (s, 3H).

b) 2-Dibutoximetil-4-metil-1-nitrobenceno

Se disuelve 5-metil-2-nitrobenzaldehído (7,84 g, 47,52 mmol), 1-butanol (10,55 g, 142,6 mmol) y ácido tolueno-4-sulfónico (0,5 g) en tolueno (200 ml). Se calienta a reflujo, y se retira el agua usando un aparato Dean-Stark. Se calienta durante 3 horas. Se añade agua, y se extrae la fase acuosa con acetato de etilo. Se combinan las fases orgánicas, se secan sobre sulfato sódico, se filtran, se concentran a presión reducida, y se purifican por cromatografía ultrarrápida (gel de sílice tamponado con trietilamina al 1% v/v, acetato de etilo al 5%/hexano) dando 14 g (99%) del compuesto del título en forma de un aceite incoloro.

c) 5-Metil-1H-indol-7-carboxaldehído

Se disuelve 2-dibutoximetil-4-metil-1-nitrobenceno (13,957 g, 47,373 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (474 ml) en atmósfera de nitrógeno, y se enfría a -40ºC. Se añade bromuro de vinil-magnesio (190 ml, 190 mmol, 1,0 M en tetrahidrofurano) a -40ºC con agitación. Se agita durante 40 minutos y se añade cloruro de amonio acuoso saturado. Se extrae la fase acuosa con acetato de etilo. Se combinan las fases orgánicas, se secan sobre sulfato sódico, se filtran, y se concentran. El producto en bruto se toma en la siguiente etapa sin purificación.

Se disuelve el producto en bruto anterior en tetrahidrofurano (160 ml) y se enfría a 0ºC. Se añade ácido clorhídrico 0,5 molar acuoso (20 ml) y se agita la mezcla a 0ºC durante 1 hora. Se añade hidrogenocarbonato sódico acuoso saturado (200 ml) y se extrae la fase acuosa con acetato de etilo (3 x 200 ml). Se combinan las fases orgánicas, se secan sobre sulfato sódico anhidro, se filtran, se concentran a presión reducida, y se purifican por cromatografía en columna ultrarrápida (gel de sílice, acetato de etilo al 5%/hexano) dando 4,04 g (54% durante 2 etapas) del compuesto del título en forma de un sólido blanco. ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta 10,10 (s, 1H), 10,06 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 7,40 (s, 1H), 7,28 (m, 1H), 6,54 (m, 1H), 2,50 (s, 3H).

Preparación 7

(5-hidroxibenzofur-7-il)acetonitrilo

Se disuelve [5-(tetrahidropiran-2-iloxi)benzofur-7-il]acetonitrilo (3,89 g, 0,015 mol) en metanol (100 ml) y se añade ácido para-tolueno sulfónico monohidrato (0,288 g, 0,1 equivalente). Después de 20 minutos se extrae con acetato de etilo frente a agua, después se lava con salmuera. La concentración al vacío produce 2,5 g (95,5%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. EMAR (m/z): Calc. 173,0465 Encontrado 173,0477.

Preparación 8

5-Bromoimidazo[1,2-a]piridina

Se añade 2-bromo-1,1-dietoxietano (3,64 g, 18,48 mmol) a una solución de 6-bromopiridin-2-ilamina (1,0 g, 5,77 mmol) en n-butanol (40 ml). Se lleva a reflujo durante una noche y se enfría. La filtración de la mezcla de reacción da 1,3 g (81%) de bromhidrato de 5-bromoimidazo[1,2-a]piridina en forma de un sólido blanco. EMEN (M^{+}+1): 198,9 m/z.

Se añade bicarbonato sódico saturado (300 ml) a una suspensión de bromhidrato de 5-bromoimidazo[1,2-a]piridina (13,0 g, 46,96 mmol) en acetato de etilo. Se separa la fase orgánica, se lava con bicarbonato sódico saturado, se seca sobre sulfato de magnesio, y se concentra a presión reducida dando 9,7 g (100%) del compuesto del título en forma de un sólido blanco.

Preparación 9

2-{4-[2-(Tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]benzofur-7-il}acetamida a) 7-Bromo-4-[2-(tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]benzofurano

Se añade carbonato potásico (6,399 g, 46,299 mmol) a una solución de 7-bromobenzofur-4-ol (3,266 g, 15,331 mmol) en DMF (30 ml) en atmósfera de nitrógeno. Se introduce 2-(2-bromoetoxi)tetrahidropirano (2,22 ml, 18,386 mmol) y se lleva a reflujo a 80ºC durante 16 horas. La mezcla se diluye con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato sódico, se filtra, y se concentra. La purificación por cromatografía ultrarrápida y eluyendo con hexano:acetato de etilo da 3,538 g (68%) del compuesto del título en forma de un aceite. EM (EN) (m/z) 211 (M^{+}-1-129), 255 (M^{+}-1-85).

b) Éster etílico del ácido {4-[2-(tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]benzofur-7-il}acético

Se combina 7-bromo-4-[2-(tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]benzofurano (2,598 g, 7,61 mmol), bis(dibencilideno-acetona)paladio (0,461 g, 0,802 mmol), y 2-diciclohexilfosfino-2-(N,N-dimetilamino)bifenilo (0,308 g, 0,783 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) en atmósfera de nitrógeno. Se añade bromo(2-etoxi-2-oxoetil)zinc (2 equiv.), y se calienta la mezcla a 80ºC durante 16 horas. (Knochel, P.; Honed, P.; Eds. Organozinc Reagents: A Practical Approach; Oxford University Press, Inc: London, 1999). Se enfría la mezcla a temperatura ambiente, se filtra a través de un tapón de sílice eluyendo con éter etílico, y se concentra. Se purifica por cromatografía ultrarrápida y se eluye con hexano:acetato de etilo dando 1,422 g (54%) del compuesto del título en forma de un aceite. Espectro de masas: electronebulización (m/z) 265 (M^{+}+1-85).

c) Ácido {4-[2-(tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]benzofur-7-il}acético

Se añade a una solución enfriada (0ºC) de éster etílico del ácido {4-[2-(tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]-benzofur-7-il}acético (1,363 g, 3,912 mmol) en dimetilformamida (20 ml) hidróxido sódico acuoso 2 M (10 ml), y se agita la mezcla durante 1½ horas a temperatura ambiente. Se diluye la mezcla con acetato de etilo y se extrae con agua. Se diluye con cloruro de metileno (50 ml) y se neutraliza usando ácido clorhídrico acuoso 0,1 M (100 ml). Se separan las fases y se extrae la fase acuosa con cloruro de metileno. Se combinan las fases de cloruro de metileno, se secan sobre sulfato sódico, se filtran, y se concentran obteniendo 0,920 g (68%) del compuesto del título en forma de un aceite. Espectro de masas: electronebulización (m/z) 319 (M-1).

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d) 2-{4-[2-(Tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]benzofur-7-il}acetamida

Se combina ácido {4-[2-(tetrahidropiran-2-iloxi)etoxi]benzofur-7-il}acético (0,920 g, 2,872 mmol), y 1,1'-carbonildiimidazol (2,365 g, 14,585 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml), y se agita durante 1 hora en atmósfera de nitrógeno. Se enfría la mezcla a 0ºC, y se añade hidróxido de amonio acuoso concentrado (2 ml). Se retira el baño de hielo, y se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Se diluye la mezcla con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato sódico, se filtra, y se concentra. La purificación usando cromatografía ultrarrápida y eluyendo con hexano:acetato de etilo da 0,732 g (80%) del producto del título en forma de un sólido blanco. Espectro de masas: electronebulización (m/z) 236 (M^{+}+1 -85).

Preparación 10

2-(Benzofur-4-il)acetamida

Se añade 1,1'-carbonildiimidazol (2,3 g, 14,2 mmol) a una solución de ácido benzofur-4-ilacético (2,5 g, 14,2 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (12 ml) en atmósfera de nitrógeno y se agita a 20ºC durante 4 horas. Se burbujea amoniaco anhidro a través de la solución, se diluye con tetrahidrofurano anhidro (10 ml), y se agita a 20ºC durante 18 horas. Se concentra a presión reducida, y se lava el sólido con hidrogenosulfato sódico acuoso y agua destilada. Se seca al vacío obteniendo 2,3 g (93%) del compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido. Espectro de masas (EN, m/z) (M+H) = 176,1.

Preparación 11

N-(7-Cianometilbenzofur-4-il)acetamida a) 2-(2,2-Dimetoxietoxi)-1-metil-4-nitrobenceno

Se añade bromoacetaldehído dimetilacetal (30,3 g, 179 mmol) a 2-metil-5-nitrofenol (25 g, 163 mmol) y carbonato potásico (50 g, 362 mmol) en dimetilformamida (200 ml). Se agita la mezcla y se lleva a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante 2,5 horas. Se enfría la mezcla a 20ºC y se añade hidróxido sódico acuoso (200 ml, 1 M). Se diluye la mezcla con hexano y éter dietílico (1:1), después se lava con hidróxido sódico acuoso 0,2 M y cloruro sódico saturado acuoso. Se seca sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida. La precipitación del producto a partir de hexano da 30,6 g (77%) del compuesto del título, en forma de un sólido de color castaño. ^{1}H RMN (400 MHz, CDCl_{3}) \delta 7,78 (dd, 1 H, J = 8,4, 2,4 Hz), 7,66 (d, 1 H, J = 2,4 Hz), 7,26 (dd, 1 H, J = 8,4, 0,8 Hz), 4,76 (t, 1 H, J = 4,8 Hz), 4,09 (d, 2 H, J = 5,2 Hz), 3,48 (s, 6 H), 2,32 (s, 3 H).

b) 7-Metil-4-nitrobenzofurano

Se añade resina de intercambio iónico Amberlyst® 15 (36 g) a clorobenceno (700 ml), y se calienta la mezcla a reflujo y se extrae el agua formando un azeótropo, para secar la resina. Se disuelve 2-(2,2-dimetoxietoxi)-1-metil-4-nitrobenceno (34,8 g, 144 mmol) en clorobenceno (125 ml), y se añade esta mezcla gota a gota a la mezcla de reacción en agitación, a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante un periodo de 15 minutos. Se continúa el reflujo durante 1,5 horas, después se enfría a temperatura ambiente. Se filtra para retirar la resina y se concentra a presión reducida. Se disuelve el residuo en hexano y éter dietílico (1:1), después se lava con hidróxido sódico acuoso 0,5 M y cloruro sódico saturado acuoso. Se seca sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida. La cromatografía en sílice ultrarrápida usando hexano y acetato de etilo (9:1) y la precipitación de hexano y tolueno (1:1) produjo 9,7 g (42%) del compuesto del título en forma de un sólido amarillo (42%). ^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 8,36 (d, 1 H, J = 2,0 Hz), 8,12 (d, 1 H, J = 8,4 Hz), 7,44 (d, 1 H, J = 2,4 Hz), 7,38 (d, 1 H, J = 8,8 Hz), 2,59 (s, 3 H).

c) Dimetil[2-(4-nitrobenzofur-7-il)vinil]amina

Se añade 7-metil-4-nitrobenzofurano (3,5 g, 19,7 mmol) a terc-butoxibis(dimetilamino)metano (10,3 g, 59,1
mmol), y se lleva a reflujo la mezcla en atmósfera de nitrógeno durante 40 minutos. Se concentra a presión reducida, se disuelve en xilenos (50 ml), se concentra a presión reducida, y se seca al vacío obteniendo 4,9 g (100%) del compuesto del título en forma de un sólido rojo-pardo oscuro.

EMAR (M+H) = 233,0928.

d) (4-Nitrobenzofur-7-il)acetonitrilo

Se añade dimetil[2-(4-nitrobenzofur-7-il)vinil]amina (4,8 g, 20,6 mmol) y ácido hidroxilamina-O-sulfónico (4,6 g, 40,6 mmol) a dimetilformamida (45 ml) y se agita a temperatura ambiente durante 15 minutos. Se calienta a 100ºC en atmósfera de nitrógeno durante 1 hora, se enfría a temperatura ambiente, se diluye con éter dietílico, y se lava con agua y cloruro sódico saturado acuoso. Se seca sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida. La cromatografía en sílice ultrarrápida usando hexano al 85%, acetato de etilo al 15% da 2,9 g (64%) del compuesto del título en forma de un sólido pardo claro. Espectro de masas (EN, m/z) (M-1) = 200,9.

e)N-(7-Cianometilbenzofur-4-il)acetamida

Se añade (4-nitrobenzofur-7-il)acetonitrilo (600 mg, 2,96 mmol), anhídrido acético (600 mg, 5,88 mmol), y paladio al 5% sobre carbono (300 mg) a tetrahidrofurano (25 ml). Se agita en atmósfera de hidrógeno (1 atm.) durante 45 minutos. Se diluye con acetato de etilo, se filtra a través de una capa de Celite®, y se concentra a presión reducida. La cromatografía en sílice ultrarrápida usando acetato de etilo al 75%, hexano al 25% da 430 mg (67%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. EMAR (M+H) = 215,0816.

Formación de Ácido Oxoacético

Preparación 12

Éster metílico del ácido {5-[3-(terc-butildimetilsililoxi)propoxi]-1-isopropil-1H-indol-3-il}oxoacético

Se disuelve 5-[3-(terc-butildimetil-sililoxi)propoxi]-1-isopropil-1H-indol (0,43 g, 0,124 mmol) en tetrahidrofurano (40 ml). Se añade 2,6-lutidina (0,43 ml, 3 equiv.) y se enfría a 0ºC. Se añade cloruro de oxalilo gota a gota y se agita durante 1,5 horas, después se enfría a -78ºC, se añade metanol (0,1 ml, 2 equiv.) y se trata con metóxido sódico (25% p/p en metanol, 22,5 ml). Se agita durante 1 hora, después se diluye con acetato de etilo y se extrae con bicarbonato sódico saturado, después salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (hexanos:acetato de etilo 4:1) produce el compuesto del título en forma de un aceite amarillo claro. EM (EN, m/z): 434,3 (M+1).

Los siguientes compuestos se preparan de una manera similar:

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13

Preparación 23

Éster etílico del ácido (5-fluorobenzofur-7-il)oxoacético

Se disuelve 7-bromo-5-fluorobenzofurano (2 g, 9,3 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano en atmósfera de nitrógeno. Se añaden limaduras de magnesio (0,25 g, 1,1 equivalentes) y se calienta a reflujo para facilitar la formación de Grignard. En un matraz diferente se coloca oxalato de dietilo (1,3 ml, 2 equivalentes) en 3 ml de tetrahidrofurano, y se enfría a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. Cuando se completa la formación de Grignard, se añade mediante una cánula a la solución de oxalato de dietilo. Se agita la reacción durante 2-4 horas calentando lentamente a 20ºC. Se extrae con éter dietílico. Se lava la fase orgánica con salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra hasta un aceite amarillo claro. La purificación por cromatografía en columna (hexanos:acetato de etilo 4:1) produce 1,74 g (79%) de un aceite que solidifica después de un periodo de reposo. EM (EN, m/z): 237,0 (M+1).

Los siguientes compuestos pueden prepararse de una manera similar:

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14

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Preparación 33

Éster metílico del ácido {1-[3-(terc-butildimetil-sililoxi)propil]-1H-indol-4-il}-oxoacético

Se añade terc-butillitio (88,1 ml, 149,8 mmol, 1,7 M en hexano) a una solución de 4-bromo-1-[3-(terc-butildimetil-sililoxi)propil]-1H-indol (22,0 g, 59,92 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml) a -78ºC. Se agita la reacción a -78ºC durante 20 min. Se transfiere la mezcla en una solución de oxalato de dimetilo (24,8 g, 209,72 mmol) en tetrahidrofurano (400 ml) a -40ºC mediante una cánula enfriada con hielo seco. Después de la adición completa, se agita la reacción a -78ºC durante 15 minutos y se calienta lentamente a temperatura ambiente. Se interrumpe la reacción con cloruro de amonio acuoso saturado y se extrae en acetato de etilo. Se combinan las fases orgánicas, se secan sobre sulfato de magnesio, y se concentran a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida y eluyendo con gradiente de acetato de etilo:hexano (hexano al 100% a acetato de etilo al 15%:hexano en 90 minutos) da el compuesto del título (16,89 g, 75%), en forma de un aceite pardo claro. EMEN (M^{+}+1): 376,2 m/z.

Usando un procedimiento similar al anterior pueden prepararse y aislarse los siguientes compuestos:

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Preparación 40

Éster metílico del ácido (isoquinolin-5-il)oxoacético

Se disuelve 5-aminoisoquinolina (20 g, 139 mmol) en ácido bromhídrico (48%, 100 ml) en un matraz de fondo redondo de 500 ml, y después se añade con cautela una solución de nitrito sódico (9,6 g, 139 mmol) en agua (50 ml) a 0ºC. La suspensión blanca se vuelve roja brillante después de la adición completa de la sal, y después esta solución se transfiere a otro recipiente de 500 ml que contiene CuBr (25 g, 174 mmol) agitando en ácido bromhídrico (48%, 200 ml) a 75ºC. Esta transferencia se realiza lenta y cuidadosamente. Después de la adición completa, la mezcla se deja en agitación a 75ºC durante una hora, después se enfría a temperatura ambiente, y se mantiene en agitación durante una noche. La mezcla después se coloca en un baño de hielo y se añade algo de hielo a la solución, después se basifica usando solución de hidróxido sódico acuoso (20%, 250 ml). La suspensión se filtra y después el filtrado se extrae con éter dietílico. El sólido y el extracto después se combinan y se sonican durante una hora en cloroformo. Este sedimento se filtra a través de un lecho de Celite, y se retira el cloroformo por evaporación rotatoria. El compuesto final se obtiene en forma pura por cromatografía en columna en cloroformo con rendimiento del 36%, 10,4 g (50 mmol) de 5-bromo-isoquinolina. EM (EN, m/z): 208,0 (M^{+}(^{79}Br)+1), 210,0 (M^{+}(^{81}Br)+1).

Se añade terc-BuLi (pentano 1,7 M, 27,2 ml, 46,3 mmol) a THF seco (195 ml) a -78ºC, después de unos pocos minutos, se añade gota a gota una solución de 5-bromo-isoquinolina (6,42 g, 30,86 mmol) en THF (5 ml) mediante una jeringa. La solución resultante se deja en agitación a -78ºC durante 45 minutos, después se añade oxalato de dimetilo (11 g, 93 mmol) en una porción. Después de 30 min. a -78ºC, la reacción se interrumpe usando solución de cloruro de amonio saturado, se diluye con 200 ml de EtOAc, y después se retira el THF por evaporación rotatoria. El residuo se diluye con solución de cloruro de amonio saturado, se extrae con EtOAc (2 X 200 ml). Las fases orgánicas se combinan y se lavan con 1X75 ml de agua y 1X75 ml de salmuera, se secan sobre sulfato sódico anhidro, después se concentran. El material después se purifica usando cromatografía en columna ultrarrápida, EtOAC al 20%/Hexanos, produciendo 3,91 g, 59% de éster metílico del ácido isoquinolin-5-iloxoacético. EM (EN, m/z): (M^{+}+1) 216,1

Preparación 42

Éster etílico del ácido (5-metoxibenzofur-7-il)acético

Se disuelve 7-bromo-5-metoxibenzofurano (6,0 g, 26,43 mmol), bis(dibencilidenoacetona)paladio (1,32 g, 2,3 mmol) y 2-diciclohexilfosfino-2'-(N,N-dimetilaznino)bifenilo (2,7 g, 6,86 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (36 ml), se añade bromuro de 2-etoxi-2-oxoetilzinc en tetrahidrofurano recién preparado (66 ml). Se calienta a 50-60ºC durante 5h. Se enfría y se filtra la mezcla a través de celite y se evapora hasta un aceite rojo-pardo espeso (30 g). La purificación por cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos produce el compuesto puro en forma de un aceite amarillo espeso (6,2 g, cuant.). EMEN m/z (intensidad relativa) 235,2 (M+ + H+, 10), 161,1
(M+ -CO2Et + H+, 100).

Formación de Acetamida

Preparación 43

4,5-Difluorobenzofur-7-carboxaldehído

Se disuelve 7-bromo-4,5-difluorobenzofurano (5,0 g, 23,5 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (15 ml) en atmósfera de nitrógeno y se añaden limaduras metálicas de magnesio (712 mg, 29,3 mmol). Se agita y se calienta la reacción a 50ºC para iniciar la formación de reactivo de Grignard. Después de remitir la reacción exotérmica, se lleva a reflujo durante 30 minutos. Se diluye la solución con tetrahidrofurano (15 ml) y se enfría a 25ºC. Se añade gota a gota el reactivo de Grignard mediante una cánula a una solución en agitación de N,N-dimetilformamida (10,2 g, 139 mmol) en tetrahidrofurano (25 ml) a -78ºC en atmósfera de nitrógeno. Se agita la reacción a 0ºC durante 1 hora y se interrumpe con cloruro de amonio saturado acuoso. Se diluye con éter dietílico, se lava con agua destilada, y cloruro sódico saturado acuoso. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida. Se somete a cromatografía en sílice ultrarrápida usando un gradiente de hexano neto a acetato de etilo al 50% en hexano obteniendo 2,65 g (69%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. EMAR (M+)=182,0179.

Usando procedimientos similares pueden prepararse y aislarse los siguientes aldehídos:

18

Preparación 49

1-[3-(terc-Butildimetilsililoxi)propil]-1H-indol-4-carboxaldehído

Se añade terc-butillitio (27,07 ml, 46,03 mmol, 1,7 M en pentano) a una solución de 4-bromo-1-[3-(terc-butildime-
tilsililoxi)propil]-1H-indol (6,76 g, 18,41 mmol) en tetrahidrofurano anhidro (100 ml) a -78ºC. Se agita la reacción a
-78ºC durante 30 min., se interrumpe con N,N-dimetilformamida (4,7 ml, 64,45 mmol), se calienta a 0ºC, se interrumpe con tampón de pH 7, y se extrae en acetato de etilo. Se combinan las fases orgánicas, se secan sobre sulfato de magnesio, y se concentran a presión reducida. La purificación por cromatografía ultrarrápida y eluyendo con gradiente de acetato de etilo:hexano (hexano al 100% a acetato de etilo al 50%:hexano durante 45 minutos) da el compuesto del título (4,81 g, 82%) en forma de un aceite transparente. EMEN (M++1): 318,2 m/z.

Usando procedimientos similares pueden prepararse y aislarse los siguientes aldehídos:

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Preparación 56

{1-[3-(terc-Butildimetilsililoxi)propil]-1H-indol-4-il}acetonitrilo

Se añade 1-[3-(terc-butildimetilsililoxi)propil]-1H-indol-4-carboxaldehído (2,34 g, 14,4 mmol) y complejo de cianuro de litio y tetrahidrofurano (LiCN * 1,5 THF, 204 mg, 1,44 mmol) a tetrahidrofurano (40 ml) en atmósfera de nitrógeno. Se añade gota a gota cianofosfonato de dietilo neto (2,8 ml, 18,4 mmol) a la mezcla de reacción en agitación. Se agita a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 60 horas. Se añade 2-metil-2-propanol (1,4 ml, 14,6 mmol). Se añade la mezcla de reacción mediante una cánula a una solución 0,1 molar agitada de yoduro de samario(ll) en tetrahidrofurano (360 ml, 36,0 mmol) a 25ºC en atmósfera de nitrógeno. Si la mezcla de reacción resultante no está azul oscuro se añade solución de yoduro de samario(ll) adicional hasta que persiste el color azul oscuro. Se agita la reacción a 25ºC durante 1 hora. Se concentra a presión reducida, se diluye con acetato de etilo, éter dietílico (1:1), se lava con ácido clorhídrico 0,1 molar acuoso, y cloruro sódico saturado acuoso. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida. Se somete a cromatografía en sílice ultrarrápida usando un gradiente de hexano neto a acetato de etilo al 25% en hexano obteniendo 2,1 g (84%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d_{d}) 7,43 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,14 (m, 1H), 7,0 (d, J = 8 Hz, 1H), 6,54 (m, 1H), 4,23 (t, J = 7, 2H), 4,18 (s, 3H), 3,5 (t, J = 7 Hz, 2H), 1,9 (m, 2H), 0,85 (s, 9H), 0,0 (s, 6H).

Usando el procedimiento similar al anterior pueden prepararse y aislarse los siguientes nitrilos:

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22

Preparación 68

2-{1-[3-(terc-Butildimetilsililoxi)propil]-1H-indol-4-il}acetamida

Se añade {1-[3-{terc-butildimetilsililoxi)propil]-1H-indol-4-il}acetonitrilo (1,9 g, 11,0 mmol) a 2-metil-2-propanol (20 ml). Se calienta a reflujo en atmósfera de nitrógeno y se añaden gránulos de hidróxido potásico (7,4 g, 132 mmol). Se agita y se lleva a reflujo en atmósfera de nitrógeno durante 30 minutos. Se vierte de la solución el exceso de hidróxido potásico y se diluye con acetato de etilo. Se lava con una mezcla 1:1 de cloruro sódico saturado acuoso, hidrogenocarbonato sódico saturado acuoso. Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtra, y se concentra a presión reducida. Se aclara el sólido con éter dietílico frío y se seca al vacío obteniendo 1,62 g (77%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. EMEN (M^{+}+1): 347,2.

Usando procedimientos similares al anterior se preparan y aíslan las siguientes acetamidas:

23

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Preparación 84

2-(8-Hidroximetil-6,7,8,9-tetrahidropirido[1,2-a]indol 10-il)acetamida

Se disuelve el indol (3,54 mmol) y cloruro de N,N-dimetilmetilenoamonio (0,372 g, 4,00 mmol) en diclorometano (15 ml), se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 24-72h en atmósfera de nitrógeno. Se lava con agua (5 ml), seguido de la adición de base para neutralizar el ácido (3,6 ml, NaOH 1 M). Se extrae con acetato de etilo (2X100 ml), se lava con NaCl saturado, después se seca sobre sulfato de magnesio anhidro. Se retira el disolvente al vacío dando (1H-indol-3-ilmetil)-dimetilamina.

Se disuelve una mezcla de la (1H-indol-3-ilmetil)-dimetilamina (3,54 mmol), cianuro sódico (0,500 g, 10,62 mmol), y acetato de etilo (1,7 ml, 17,7 mmol) en dimetilsulfóxido seco (12 ml) y se calienta a 80ºC en atmósfera de nitrógeno durante 3h. Se enfría la mezcla de reacción a temperatura ambiente, se diluye con acetato de etilo (150 ml), y se lava con agua (50 ml). Se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio anhidro, y se retira el disolvente al vacío produciendo 0,850 g (96%) de (1H-indol-3-il)-acetonitrilo.

Se disuelve (1H-indol-3-il)acetonitrilo (3,40 mmol) en dimetilsulfóxido seco (3,0 ml), se enfría en un baño de hielo, se combina con carbonato potásico anhidro (0,200 g) y peróxido de hidrógeno al 30% (0,6 ml), manteniendo la temperatura de reacción por debajo de 20ºC. Se calienta a temperatura ambiente, se añade agua (10 ml) y se filtra el sólido resultante, se seca al vacío. EM (EN, m/z): 257,3(M+-1).

Preparación 85

2-(Imidazo[1,2-a]piridin-3-il)acetamida a) Éster etílico del ácido imidazo[1,2-a]piridin-3-ilacético

Se añade etil(E)oxibutenoato (14,3 g, 111,66 mmol) a 2-amino-piridina (10,0 g, 106,4 mmol) en acetonitrilo (270 ml). Se calienta la reacción a 80ºC durante 6 horas. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. La purificación del aceite resultante por cromatografía ultrarrápida y eluyendo con un gradiente de hexano al 100% a acetato de etilo al 95%:metanol da el compuesto del título, éster etílico del ácido imidazo[1,2-a]piridin-3-ilacético (10,95 g, 50,0% - determinado por RMN) y 2-aminopiridina (co-elución), en forma de un sólido pardo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 83 (m, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,9 (m, 1H), 6,42 (m, 1H), 4,1 (c, J = 7 Hz, 2H), 1,15 (t, J = 7 Hz, 3H).

b) 2-(Imidazo[1,2-a]piridin-3-il)acetamida

Se burbujea amoniaco a través de una solución de éster etílico del ácido (imidazo[1,2-a]piridin-3-il)acético (10,0 g, 48,96 mmol) en metanol (30 ml) a 0ºC. Se calienta la mezcla de reacción en un tubo precintado a 100ºC durante 2 horas. Se concentra la mezcla de reacción a presión reducida. La trituración en acetato de etilo da el compuesto del título (5,0 g, 58,2%), en forma de un sólido blanco. EMEN (M^{+}+1): 176,1 m/z.

Preparación 86

(R)-2-[5-(1-Bencilpirrolidin-3-iloxi)benzofur-7-il]acetamida (R)-2-[5-(1-Bencilpirrolidin-3-iloxi)benzofur-7-il]acetamida

Se añade a cloruro de amonio seco (0,26 g, 4,87 mmol) en tolueno anhidro (3 ml) de -5 a -10ºC una solución de trimetilaluminio 2,0 M en tolueno (2,4 ml) y se deja que la mezcla se caliente a temperatura ambiente. Cuando la mezcla de reacción llega a estar transparente, se añade éster etílico del ácido (R)-[5-(1-bencilpirrolidin-3-iloxi)benzofur-7-il]acético (0,51 g, 1,34 mmol) en tolueno (6 ml) y se calienta a 50ºC durante 3 h. Se vierte la mezcla de reacción en una mezcla de ácido clorhídrico concentrado (1 ml) y agua (3 ml), se hace básica con solución de hidróxido sódico 5 N y se extrae con acetato de etilo. Se lavan los extractos orgánicos con agua y salmuera, se secan y se evaporan a sequedad produciendo el producto (0,42 g, 90%), que se usa sin purificación adicional.

b) 2-[4-(2-Hidroxietoxi)benzofur-7-il]acetamida

Se añade a una solución de 2-{4-[2-(tetrahidropiran-2-iloxi]benzofur-7-il}acetamida (0,216 g, 0,676 mmol) en alcohol metílico (7 ml) ácido p-toluenosulfónico monohidrato (cantidad catalítica), y se agita la mezcla durante 1 hora. Se diluye la mezcla con acetato de etilo, se lava con bicarbonato sódico acuoso 1 N, agua, y salmuera, se seca sobre sulfato sódico, se filtra, y se concentra dando 0,05 g (31%) del compuesto del título en forma de un sólido blanquecino. Espectro de Masas: electronebulización (e/z) 236 (M^{+} +1).

Preparación 87

2-[1-(1-Bencilpiperidin-4-il)-1H-indol-3-il]-2-hidroxiacetamida

Se disuelve éster metílico del ácido [1-(1-bencilpiperidin-4-il)-1H-indol-3-il]oxoacético (1,29 g, 3,43 mmol) en amoniaco 2 M:metanol (35 ml) y se agita a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante 1,5 horas. Se concentra hasta un sólido blanco y se suspende en etanol absoluto (40 ml). Se añade borohidruro sódico (0,65 g, 5 equiv.) y se agita 3 horas a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno. El concentrado después se diluye con acetato de etilo y se inactiva con agua. Se lava la fase orgánica con salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra dando el producto en bruto (1,28 g, 103%). EM (EN, m/z): 364,2 (M+1).

Transformación Sintética de Intermedios O-Alquilaciones

Preparación 88

5-(2-(terc-butoxi)etoxi)-1H-indol

Se añade trifenilfosfina (600 mg, 2,29 mmol) a una solución de azodicarboxilato de dietilo (0,36 ml, 2,29 mmol) en cloruro de metileno (10 ml) a 0ºC seguido de etilenglicol mono-t-butil éter (0,30 ml, 2,29 mmol), y se agita la mezcla durante 20 minutos a 0ºC. Se añade 5-hidroxiindol (200 mg, 1,5 mmol), se retira el baño de refrigeración, y se agita durante 5 horas. Se añade agua (2 ml), se transfiere la mezcla resultante a un separador/embudo, y se separan las fases. Se lava la fase orgánica con HCl acuoso 0,1 N y salmuera, después se seca sobre sulfato sódico, se filtra, y se concentra. La purificación por cromatografía ultrarrápida y eluyendo con hexano:acetato de etilo da 127 mg (36%) del compuesto del título en forma de un sólido amarillo claro. Espectro de masas: electronebulización (m/z) 232 (M^{-}-1).

Usando procedimientos similares al anterior pueden prepararse y aislarse los siguientes compuestos:

25

Preparación 93

4-Bromo-1-[3-(terc-butildimetilsililoxi)propil]-1H-indol

Se añade hidruro sódico (4,89 g, 122,4 mmol, dispersión al 60% en aceite mineral) a una solución de 4-bromo-1H-indol (12 g, 61,2 mmol) en dimetilformamida (100 ml). Se enfría la reacción a 0ºC y se añade (2-bromoetoxi)-terc-butildimetil-silano (17,04 g, 67,32 mmol). Se agita la reacción durante 1 hora a temperatura ambiente, se interrumpe con bicarbonato sódico saturado acuoso, y se extrae en acetato de etilo. Se combinan las fases orgánicas y se lavan con cloruro sódico acuoso saturado, se secan sobre sulfato de magnesio. Se concentran a presión reducida obteniendo el compuesto del título (22,45 g, 100%), en forma de un aceite transparente. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 7,48 (d, J = 8,1H), 7,4 (d, J = 3 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 8 Hz, 1H), 7,05 (dd, J = 8, 1 Hz, 1H), 6,4 (d, J = 3 Hz, 1H), 4,25 (t, J = 7 Hz, 2H), 3,49 (t, J = 7 Hz, 2H), 1,9 (quintuplete, 2H), 0,82 (s, 9H), 0,0 (s, 6H).

Usando el procedimiento anterior, pueden prepararse y aislarse los siguientes compuestos.

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(Tabla pasa a página siguiente)

26

Conversión de alcohol en un Bromuro

Preparación 106

3-[1-(4-Bromobutil)-1H-indol-3-il]-4-(4-metoxibenzofur-7-il)pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-[1-(4-hidroxibutil)-1H-indol-3-il]-4-(4-metoxibenzofur-7-il)pirrol-2,5-diona (0,1 g, 0,232 mmol) en 10 ml de diclorometano. Se añade tetrabromuro de carbono (0,077 g, 1 equivalente) y trifenilfosfina (0,061 g, 1 equivalente). Se agita durante 10 min., se añade otro equivalente de ambos reactivos. Se agita 10 min., después se diluye con diclorometano y se lava con agua seguido de salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, después se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (metanol al 2%:diclorometano) produce el compuesto del título. EM (EN, m/z): 493,0 (M-1).

Los siguientes compuestos se preparan de una manera similar:

28

Aminación Reductora

Preparación 122

1-(1-Bencilpiperidin-4-il)-7-metil-1H-indol

Se disuelve 2-(2,2-dimetoxietil)-6-metilfenilamina (0,95 g, 4,9 mmol) en ácido acético (20 ml) y se añade 1-bencilpiperidin-4-ona (1 ml, 1,1 equiv.). Se agita durante 5 minutos, después se añade triacetoxiborohidruro sódico (1,55 g, 1,5 equiv.) y se agita a temperatura ambiente durante 45 minutos. Se une un condensador de reflujo y se calienta a reflujo durante 2,5 horas. Se deja enfriar a temperatura ambiente, después se diluye con acetato de etilo. Se lava con hidróxido sódico 5 N seguido de salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (hexanos:acetato de etilo 1:1) produce 1,26 g de producto (85%) en forma de un aceite transparente. EM (EN, m/z): 305,2 (M+1). Usando un procedimiento similar pueden prepararse los siguientes compuestos:

30

N-Alquilación

Preparación 134

5-[3-(terc-Butildimetilsililoxi)propoxi]-1-isopropil-1H-indol

Se disuelve 5-[3-(terc-butildimetilsililoxi)propoxi]-1H-indol (1,0 g, 0,327 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 ml) en atmósfera de nitrógeno. Se añaden 3,6 ml de terc-butóxido potásico (solución 1 M en THF, 1,1 equiv.) y se agita 10 minutos, después se añade 2-yodopropano (0,36 ml, 1,1 equiv.) y se agita durante 30 minutos. Se diluye con acetato de etilo y se lava con agua, después salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (hexanos a hexanos:acetato de etilo 4:1) produce 0,43 g de producto (38%) en forma de un aceite transparente.^{1}H RMN (400 MHz, DMSO-d_{6}) \delta 0,00 (s, 6H), 0,83 (s, 9H), 1,40 (d, J = 6,83 Hz, 6H), 1,86 (m, 2H), 3,74 (m, 2H), 3,98 (m, 2H), 4,64 (m, 1H), 6,29 (d, J = 2,93 Hz, 1H), 6,71 (m, 1H), 6,99 (d, J = 1,95 Hz, 1H), 7,36 (m, 2H).

Usando un procedimiento similar pueden prepararse los siguientes compuestos:

31

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Reducción de Indoles en Indolinas

Preparación 142

6-Cloro-2,3-dihidro-1H-indol

Se disuelve 6-cloro-1H-indol (2 g, 0,013 mol) en ácido acético (10 ml) en atmósfera de nitrógeno. Se añade cianoborohidruro sódico (1,24 g, 1,5 equiv.) y se agita 20 minutos a temperatura ambiente. Se diluye con acetato de etilo y se extrae con hidróxido sódico (acuoso 5 N). Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra dando 2,35 g (116%) del producto en bruto. EM (EN, m/z): 154,0 (M+1).

Usando un procedimiento similar pueden prepararse los siguientes compuestos:

32

Oxidación de Indolinas en Indoles

Preparación 148

Éster terc-butílico del ácido 4-(6-cloroindol-1-il)piperidina-1-carboxílico

Se disuelve éster terc-butílico del ácido 4-(6-cloro-2,3-dihidroindoi-1-il)-piperidina-1-carboxílico (3,1 g, 9,2 mmol) en tetrahidrofurano (50 ml) y se enfría a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. Se disuelve DDQ (2,1 g, 1 equiv.) en tetrahidrofurano (25 ml) y se añade gota a gota a la reacción durante 15 minutos. Se agita durante 30 minutos a 0ºC. Se diluye con acetato de etilo, después se lava con bicarbonato sódico saturado seguido de salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra dando 3,15 g (102%) del producto en bruto. EM (EN, m/z): 279,1 (M+1, producto - terc butilo).

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Usando un procedimiento similar descrito anteriormente, pueden prepararse los siguientes compuestos:

33

Transformaciones Generales

Preparación 156

Éster etílico del ácido (5-hidroxibenzofur-7-il)acético

Se disuelve éster etílico del ácido 5-metoxibenzofur-7-il)acético (0,20 g, 0,86 mmol) en cloruro de metileno (10 ml) a -78ºC, se añade tribromuro de boro (1,08 g, 0,41 ml, 4,3 mmol) y se deja calentar a temperatura ambiente. Después de 3 h, se vierte la mezcla de reacción en una mezcla de hielo y agua y se extrae con cloruro de metileno. Se lavan los extractos orgánicos con agua y salmuera, se secan sobre sulfato sódico, se filtran y se evaporan a sequedad produciendo el producto (188 mg, cuant.). EMEN m/z (intensidad relativa) 221,0 (M^{+}+H + 85).

Preparación 157

2-[1-(1-Bencilpiperidin-4-il)-1H-indol-3-il]acetamida

Se disuelve cloruro de trimetilsililo (2,1 ml, 6 equiv.) y yoduro sódico (2,5 g, 6 equiv.) en acetonitrilo (15 ml) y se enfría a 0ºC en atmósfera de nitrógeno. Se disuelve 2-[1-(1-bencilpiperidin-4-il)-1H-indol-3-il]-2-hidroxiacetamida (1,0 g, 2,75 mmol) en acetonitrilo (10 ml) y se añade gota a gota a la reacción. Se deja agitar durante una noche y se calienta gradualmente a temperatura ambiente. Se extrae con NaHSO_{3} al 5% frente a acetato de etilo, después se lava con salmuera. Se basifica la fase acuosa con bicarbonato sódico saturado y se lava con acetato de etilo una vez más. Se combinan las fases orgánicas y se secan sobre sulfato de magnesio. Se filtran y se concentran. Se tritura a partir de éter dietílico caliente produciendo el producto (0,64 g, 67%) en forma de un sólido blanco. EM (EN, m/z): 348,0 (M+1).

Preparación 158

2-[4-(2-Dietilaminoetoxi)benzofur-7-il]acetamida

Se combina 2-[4-(2-bromoetoxi)benzofur-7-il]acetamida (0,102 g, 0,342 mmol) con dietilamina neta (3 ml, exceso), y se calienta a 55ºC durante 18 horas. Se diluye la mezcla con acetato de etilo y se lava con agua y salmuera. Se seca sobre sulfato sódico, se filtra, y se concentra dando 0,098 g (99%) del compuesto del título en forma de un sólido pardo. Espectro de masas: electronebulización (m/z) 264 (M^{+}+ 1).

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Preparación 159

3-(5-Benciloxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-pirrolidin-1-ilpropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-{3-[4-(5-benciloxibenzofur-7-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il]indol-1-il}propil éster del ácido metanosulfónico (220 mg, 0,39 mmol) y pirrolidina (411 mg, 5,78 mmol) en 1-metilpirrolidina (6 ml) y se calienta a 55ºC durante 5 horas. Se deja que la reacción se enfríe a temperatura ambiente y se agita durante una noche. Se diluye la reacción en acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, y se seca con sulfato de magnesio. La purificación por cromatografía ultrarrápida da el compuesto del título (200 mg, 95%). EM (EN+): 546,13.

Preparación 160

3-(Benzofur-7-il)-4-[1-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-4-fluoro-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se disuelve 2-(benzofur-7-il)acetamida (632 mg, 3,61 mmol) en dimetilformamida anhidra (DMF) (7,0 ml) y se agita en atmósfera de nitrógeno. Se añade éster metílico del ácido [1-(1,4-dioxaespiro[4,5]dec-8-il)-4-fluoro-1H-indol-3-il]oxoacético (1,56 g, 4,33 mmol) en una porción en forma de un sólido. Después de que la mezcla llegue a ser homogénea, se añade terc-butóxido potásico en tetrahidrofurano (THF) (1,0 M, 14,4 ml) en una porción (adición en bolo). Se calienta la reacción a 60ºC, y la reacción se vuelve de color rojo oscuro. Se calienta la reacción a 60ºC durante 1 h, se deja que se enfríe a temperatura ambiente. La reacción se controla por HPLC y CCF, se diluye con 200 ml de acetato de etilo, se lava con una solución saturada de bicarbonato sódico (1 X 100 ml), agua (1 x 50 ml), y salmuera (1 x 50 ml), se seca sobre sulfato de magnesio anhidro. Se retira el acetato de etilo por evaporación rotatoria, y el concentrado se purifica usando cromatografía en columna ultrarrápida (acetato de etilo/hexanos) produciendo 1,49 g (85%) del compuesto del título. EM (EN, m/z): 487,12 (M^{+}+1), 485,08(M^{+}-1).

Los siguientes compuestos se preparan de una manera similar:

34

Preparación 163

3-(benzofur-7-il)-4-{1-[1-[N-(terc-butoxicarbonil)alanil]piperidin-4-il]indol-3-il}pirrol-2,5-diona

Se disuelve la sal clorhidrato de 3-(benzofur-7-il)-4-(1-piperidin-4-il-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (0,179 g, 0,36 mmol) en 7,2 ml de N,N-dimetilformamida en atmósfera de nitrógeno. Se añade EDCl (0,104 g, 1,5 equivalentes), HOBT (0,073 g, 1,5 equivalentes), L-Boc-Ala-OH (0,068 g, 1 equivalente), y trietilamina (0,15 ml, 3 equiv.) y se agita la reacción a 20ºC durante 3 horas. Se extrae con acetato de etilo, se lava con ácido clorhídrico 1 N, bicarbonato sódico saturado, después salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, después se filtra y se concentra dando 0,21 g (100%) del compuesto del título en forma de un sólido naranja. EM (EN, m/z): 583,1 (M+1), 581,2 (M-1).

Transformación de N-metilpirrolodionas en benzofurilo

Preparación 164

3-(benzofur-7-il éster del ácido trifluoro-metanosulfónico)-4-[1-metil-1H-indol-3-il]1-metilpirrol-2,5-diona

Se añade a una solución agitada de 7-[4-(1-metilindol-3-il)-2,5-dioxo-3-pirrolin-3-il]benzo[b]fur-4-il(trifluorometil)sulfonato (400 mg, 0,82 mmol) en N,N-dimetilformamida anhidra (10 ml), carbonato potásico (420 mg) y después yodometano (0,2 ml, 3,0 mmol). Se calienta la reacción a 70ºC durante 15 minutos. Se diluye con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra produciendo el compuesto del título (404 mg, 98%) en forma de un sólido amarillo. EM (EN+): 505,0

Preparación 165

3-(benzofur-4-il éster del ácido trifluoro-metanosulfónico)-4-[1-metil-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se prepara a partir de 7-[4-(1-metilindol-3-il)-2,5-dioxo-3-pirrolin-3-il]benzo[b]fur-4-il(trifluorometil)sulfonato de acuerdo con la Preparación 164. EN (M+1): 491,1.

Preparación 166

3-(5-Metoxibenzofur-7-il)-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se prepara a partir de 3-(5-metoxibenzofur-7-il)-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (6,9 g, 18,6 mmol) de acuerdo con la Preparación 164. EMAR: calculado 387,1345 encontrado 387,1344.

Preparación 167

3-[4-(Benzhidrilidenamino)benzofur-7-il]-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se calienta una mezcla de 7-[1-metil-4-(1-metilindol-3-il)-2,5-dioxo-3-pirrolin-3-il]benzo[b]fur-4-il(trifluorometil)sulfonato (100 mg, 0,2 mmol), benzofenona imina (0,037 ml, 0,22 mmol), tris-(bencilidenacetona)-dipaladio(0) (9 mg, 0,01 mmol), 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo racémico (19 mg, 0,03 mmol), y carbonato de cesio (91 mg, 0,28 mmol) en tolueno anhidro (1 ml) a 80ºC durante 19 horas en atmósfera de nitrógeno. Se deja que la reacción se enfríe a temperatura ambiente, se diluye con éter dietílico, y se filtra a través de Celite. Se lava el filtrado con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (acetato de etilo:hexanos) produce el compuesto del título en forma de un aceite rojo. EM (EN+): 536,1.

Preparación 168

3-[5-(2-Hidroxietoxi)benzofur-7-il]-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se añade a una mezcla de 3-(5-hidroxibenzofur-7-il)-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirroI-2,5-diona (2,5 g, 6,7 mmol) y carbonato potásico (2,78 g, 20,1 mmol) en N,N-dimetilformamida (40 ml), 2-(2-bromoetoxi)tetrahidro-pirano (3,04 ml, 20,1 mmol). Se calienta la mezcla a 80ºC en atmósfera de nitrógeno durante una noche. Se diluye con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra a un sólido rojo. Se disuelve el sólido en metanol (40 ml), se añade ácido p-toluenosulfónico (3 g), se agita durante 20 minutos. Se diluye con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra produciendo el compuesto del título (1,88 g, 67%) en forma de un sólido rojo. EMAR: calculado 417,1450 encontrado 417,1462.

Usando el procedimiento descrito anteriormente se preparan los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

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Preparación 170

3-[5-(2-Bromoetoxi)benzofur-7-il]-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se añade a una solución de 3-[5-(2-hidroxietoxi)benzofur-7-il]-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (1,87 g, 4,49 mmol) en diclorometano (30 ml), trifenilfosfina (1,41 g, 5,39 mmol) y tetrabromuro de carbono (1,79 g, 5,39 mmol). Se agita la reacción durante 15 minutos en atmósfera de nitrógeno. Se añaden otros 2,2 mmol de trifenilfosfina y 2,2 mmol de tetrabromuro de carbono y se agita durante 15 minutos más. Se diluye con diclorometano, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (metanol al 1%:diclorometano) produce el compuesto del título en forma de un sólido naranja. EM (EN+): 479,0, 481,0.

Usando el procedimiento descrito anteriormente pueden prepararse los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

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Preparación 173

3-[5-(2-dietilaminoetoxi)benzofur-7-il]-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se añade a una solución de 3-[5-(2-bromoetoxi)benzofur-7-il]-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (600 mg, 1,25 mmol) en 1-metilpirrolidina (8 ml), dietilamina (0,65 ml, 6,28 mmol). Se agita durante una noche en atmósfera de nitrógeno. Se calienta la reacción a 60ºC durante 4 horas. Se diluye con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra a un aceite rojo. La cromatografía ultrarrápida a través de columna SCX produce el compuesto del título en forma de un aceite rojo. EM (EN+): 472,1; EMAR: calculado 472,2236 encontrado 472,2235.

Usando el procedimiento descrito anteriormente pueden prepararse los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

37

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Preparación 177

3-(1-(3-metanosulfoniloxiprop-1-il)indol-3-il)-4-(5-benciloxibenzofur-7-il)pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-(5-benciloxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-hidroxipropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (380 mg, 0,77
mmol) y trietilamina (0,43 ml, 3,1 mmol) en tetrahidrofurano (15 ml) y se enfría en un baño de hielo. Se añade gota a gota cloruro de metanosulfonilo (0,066 ml, 0,85 mmol), y se agita durante cuatro horas. Se diluye la reacción en acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra dando el compuesto del título (440 mg, 100%). EM (EN+): 571,14.

Preparación 178

3-[5-(2-Dietilaminoetoxi)benzofur-7-il]-4-(1-metil-1H-indol-3-il)fur-2,5-diona

Se calienta una mezcla de 3-[5-(2-dietilaminoetoxi)benzofur-7-il]-1-metil-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (525 mg, 1,12 mmol) y gránulos de hidróxido potásico (625 mg, 11,2 mmol) en etanol absoluto (20 ml) a 60ºC durante 5 horas. Se enfría la reacción, se diluye con acetato de etilo y agua, y se separan las fases. Se acidifica la fase acuosa con ácido clorhídrico 1 N, se concentra a un sólido naranja. Se disuelve el sólido en diclorometano, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato sódico, se filtra y se concentra produciendo el compuesto del título (500 mg, 98%) en forma de una espuma naranja. EM (EN+): 491,3.

Usando el procedimiento descrito anteriormente pueden prepararse los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

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38

Preparación 182

N-{7-[4-(1-Metil-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidrofur-3-il]benzofur-4-il}acetamida a) 3-(4-Aminobenzofur-7-il)-4-(1-metil-1H-indol-3-il)fur-2,5-diona

Se calienta una mezcla de 7-[1-metil-4-(1-metilindol-3-il)-2,5-dioxo-3-pirrolin-3-il]benzo[b]fur-4-il(trifluorometil) sulfonato (60 mg, 0,11 mmol) y gránulos de hidróxido potásico (62 mg, 1,1 mmol) en etanol absoluto (2 ml) a 70ºC durante 3 horas. Se diluye la reacción con diclorometano, se acidifica con ácido clorhídrico 1 N, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra a un sólido rojo. Se disuelve el sólido en bruto en tetrahidrofurano (5 ml) y se añade ácido clorhídrico concentrado (2 gotas). Se agita la reacción durante 5 minutos, se concentra a un aceite. La purificación por cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice produce el compuesto del título (40 mg, 100%) en forma de un sólido rojo oscuro. EM (EN+): 359,0.

b)N-{7-[4-(1-Metil-1H-indol-3-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidrofur-3-il]benzofur-4-il}acetamida

Se añade a una solución de 3-(4-aminobenzofur-7-il)-4-(1-metil-1H-indol-3-il)fur-2,5-diona (40 mg, 0,11 mmol) en diclorometano (1 ml), trietilamina (0,046 ml, 0,34 mmol), y después cloruro de acetilo (0,016 ml, 0,22 mmol). Se agita la reacción en atmósfera de nitrógeno durante 10 minutos, se diluye con diclorometano, se lava con ácido clorhídrico 1 N y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra produciendo el compuesto del título (40 mg, 90%) en forma de un sólido rojo. EM (EN^{+}): 401,0.

Preparación 183

Éster terc-butílico del ácido 10-oxo-7-aza-espiro[4.5]decano-7-carboxílico

Se disuelve 7-aza-espiro[4,5]decan-10-ona (0,43 g, 0,124 mmol) en tetrahidrofurano (40 ml). Se añade hidrogencarbonato sódico (5 ml, solución saturada) y di-terc-butildicarbonato (0,50 g, 0,30 mmol), y se agita durante una noche a temperatura ambiente. Se lava la solución con agua y salmuera, extrayendo con acetato de etilo (3x 25 ml). Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra produciendo el compuesto del título. EN (M^{+}+H): 198.

Preparación 184

1-(1-terc-Butoxicarbonil-3-etil-piperidin-4-il)-1H-indol

Se disuelve 1H-indol (10 g, 50,2 mmol) y éster terc-butílico del ácido 2,6-dimetil-4-oxo-piperidina-1-carboxílico (8,62 g, 55,2 mmol) en ácido acético glacial (100 ml), se añade triacetoxiborohidruro sódico (15,96 g, 75,3 mmol) y se calienta la mezcla a 70ºC durante 20 h. Se enfría la mezcla de reacción en un baño de hielo y se hace básica con solución de hidróxido sódico 5 N. Se extrae la mezcla con cloruro de metileno, se lava con agua y salmuera y se seca sobre sulfato sódico produciendo el compuesto del título. La cromatografía ultrarrápida usando un gradiente de acetato de etilo en hexanos produce el producto puro. EMEN m/z (intensidad relativa) EN (M^{+}+H): 329,1.

Usando el procedimiento descrito anteriormente se preparan los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

39

Preparación 188

Éster terc-butílico del ácido 4-(3-metoxioxalilindol-1-il)-2,6-dimetilpiperidina-1-carboxílico

Se disuelve éster terc-butílico del ácido 4-indol-1-il-2,6-dimetilpiperidina-1-carboxílico (0,43 g, 0,124 mmol) en tetrahidrofurano (40 ml). Se añade 2,6-lutidina (0,43 ml, 3 equiv.) y se enfría a 0ºC. Se añade cloruro de oxalilo gota a gota y se agita durante 1,5 horas, después se enfría a -78ºC, se añade metanol (0,1 ml, 2 equiv.) y se trata con metóxido sódico (25% p/p en metanol, 22,5 ml). Se agita durante 1 hora, después se diluye con acetato de etilo y se extrae con bicarbonato sódico saturado, después salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (hexanos:acetato de etilo 4:1) produce el compuesto del título como el compuesto del título. EM EN (M^{+}+H): 415,2.

Usando el procedimiento descrito anteriormente pueden prepararse los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

41

Preparación 192

Éster terc-butílico del ácido 10-oxo-7-aza-espiro[4.5]decano-7-carboxílico

Se disuelve 7-aza-espiro[4.5]decan-10-ona (0,43 g, 0,124 mmol) en tetrahidrofurano (40 ml). Se añade hidrogencarbonato sódico (5 ml, solución saturada) y di-terc-butildicarbonato (0,50 g, 0,30 mmol), y se agita durante una noche a temperatura ambiente. Se lava la solución con agua y salmuera, extrayendo con acetato de etilo (3x 25 ml). Se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra produciendo el compuesto del título. EN (M^{+}+H):198.

Preparación 193

4-Cloro-2-(2,2-dimetoxietil)-1-nitrobenceno

Se suspende cloruro de (metoximetil)trifenilfosfonio (32,3 g, 93,7 mmol) en tetrahidrofurano (350 ml) y se enfría en un baño de hielo-agua. Se añade gota a gota KOtBu 1,0 M (94 ml, 94 mmol) en solución de tetrahidrofurano a la reacción mediante un embudo de adición. Se agita la reacción durante una hora, después se añade gota a gota 5-cloro-2-nitrobenzaldehído (14,5 g, 78,1 mmol) en forma de una solución en 100 ml de tetrahidrofurano. Se continúa agitando en el baño de hielo durante 20 minutos, después se deja calentar a temperatura ambiente. Se interrumpe con HCl 0,1 N, se extrae con acetato de etilo, se lavan las fases orgánicas con agua y salmuera. Se secan con sulfato sódico, se filtran, se concentran a un aceite pardo. Se purifican por cromatografía ultrarrápida (EtOAc al 1%:Hexanos) dando una mezcla en bruto de tres manchas. Se disuelve el aceite en bruto en metanol (200 ml), se enfría en un baño de hielo, se añade HCl 4 N en dioxano (30 ml), se agita durante una noche, calentando a temperatura ambiente. Se concentra a un aceite pardo. Se purifica por cromatografía ultrarrápida, se eluye con hexanos a un gradiente de EtOAc al 3%:hexanos. Se produce el compuesto del título (3,7 g, 15,1 mmol, 19%).

Preparación 194

Éster terc-butílico del ácido 3-hidroximetil-4-indol-1-ilpiperidina-1-carboxílico

Se disuelve 1-(1-terc-butoxicarbonil-3-etil-piperidin-4-il)-1H-indol (2,86 g, 7,7 mmol) en THF (25 ml) y se agita a temperatura ambiente. Se añade gota a gota una solución 1 M de hidruro de litio y aluminio en THF (8,5 ml, 8,5 mmol) mediante una jeringa. Se agita durante dos horas, después se interrumpe con 0,34 ml de agua, 0,26 ml de hidróxido sódico 5 N, y 1,2 ml de agua. Se filtra a través de una capa de Celite®, se concentra a un aceite. Se purifica por cromatografía ultrarrápida produciendo el compuesto del título (1,15 g, 45%). EN (M^{+}+1): 275,1

Preparación 195

Éster terc-butílico del ácido 3-(terc-butildimetilsililoximetil)-4-indol-1-ilpiperidina-1-carboxílico

Se disuelve éster terc-butílico del ácido 3-hidroximetil-4-indol-1-ilpiperidina-1-carboxílico (1,1 g, 3,3 mmol) en diclorometano (20 ml). Se añade imidazol (340 mg, 5,0 mmol) y cloruro de terc-butildimetilsililo (754 mg, 5,0 mmol) y se agita a temperatura ambiente durante 72 horas. Se diluye con diclorometano, se lava con HCl 1 N, agua y salmuera. Se seca con sulfato sódico, se filtra, y se concentra a un aceite. Se purifica por cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo al 10%:hexanos) produciendo el compuesto del título (1,48 g, 100%). EN (M^{+}+1): 389,2

Preparación 196

Éster metílico del ácido {7-[bencil-(terc-butoxicarbonil)aminometil]-1-(piridin-4-il)-1H-indol-3-ilmetil}oxoacético a) Bencil-(1H-indol-7-ilmetil)amina

Se añade bencilamina (7,5 g, 69,7 mmol), triacetoxiborohidruro sódico (20,7 g, 97,5 mmol) y ácido acético (6,0 ml, 104,6 mmol) a una solución de 1H-indol-7-carboxaldehído (10,1 g, 69,7 mmol) en 1,2-dicloroetano (100 ml). Se agita a temperatura ambiente durante 24 horas. Se diluye con diclorometano y se lava la fase orgánica con agua. Se seca con sulfato de magnesio y se concentra. Se purifica por cromatografía (gel de sílice; acetato de etilo/metanol; 10:0,3 a 10:1) produciendo un sólido amarillo claro (13,5 g, 82%). EM (IEN) m/z 237 (M+H)^{+}.

b) Éster terc-butílico del ácido bencil-(1H-indol-7-ilmetil)carbámico

Se añade trietilamina (24 ml, 172 mmol), di-terc-butildicarbonato (12,4 g, 57,2 mmol) y 4-dimetilaminopiridina (0,7 g, 5,7 mmol) a una solución de bencil-(1H-indol-7-ilmetil)amina (13,5 g, 57,2 mmol) en diclorometano. Se agita a temperatura ambiente durante 2 horas. Se evapora el disolvente y se purifica el residuo por cromatografía (gel de sílice; hexano/acetato de etilo; 1:0 a 1:1) produciendo un sólido (10,0 g, 52%). EM (IEN) m/z 337 (M+H)^{+}.

c) Éster terc-butílico del ácido bencil-(2,3-dihidro-1H-indol-7-ilmetil)carbámico

Se añade cianoborohidruro sódico (3,0 g, 47,6 mmol) a una solución de éster terc-butílico del ácido bencil-(1H-indol-7-ilmetil)carbámico (10,0 g, 29,8 mmol) en ácido acético. Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 3 horas. Se diluye con acetato de etilo y se enfría en un baño de hielo. Se lava la mezcla con hidróxido sódico 3,0 N acuoso hasta que el pH es 8. Se seca la fase orgánica con sulfato de magnesio y se concentra. Se purifica por cromatografía (gel de sílice; hexano/acetato de etilo; 3:1 a 0:1) produciendo un sólido como compuesto del título (5,0 g, 50%). EM (IEN) m/z 339 (M+H)^{+}.

d) Éster terc-butílico del ácido bencil-[1-(piridin-4-il)-2,3-dihidro-1H-indol-7-ilmetil]carbámico

Se burbujea nitrógeno a través de éster terc-butílico del ácido bencil-(2,3-dihidro-1H-indol-7-ilmetil)carbámico (3,7 g, 10,9 mmol) en 1,4-dioxano (50 ml) en un tubo precintado. Se mezcla con clorhidrato de 4-bromopiridina (4,3 g, 21,9 mmol), diacetato de paladio (0,5 g, 2,18 mmol), 2-(diciclohexilfosfino)bifenilo (0,76 g, 2,18 mmol) y terc-butóxido sódico (3,1 g, 32,7 mmol). Se agita la mezcla a 110ºC durante 16 horas. Se enfría y se filtra, después se concentra el filtrado. Se purifica por cromatografía (gel de sílice; hexano/acetato de etilo; 3:1 a 0:1) aislando un sólido como compuesto del título (1,5 g, 33%). EM (IEN) m/z 416 (M+H)^{+}.

e) Éster terc-butílico del ácido bencil-[1-(piridin-4-il)-1H-indol-7-ilmetil]carbámico

Se añade dióxido de manganeso activo (0,8 g, 9,0 mmol) a una solución de éster terc-butílico del ácido bencil-[1-(piridin-4-il)-2,3-dihidro-1H-indol-7-ilmetil]carbámico (0,39 mg, 0,94 mmol) en tolueno. La mezcla se agita a 90ºC durante 16 horas. Se enfría y se filtra, después se concentra el filtrado. Se purifica por cromatografía (gel de sílice; hexano/acetato de etilo; 3:1 a 0:1) aislando un sólido como compuesto del título (200 mg, 50%). EM (IEN) m/z 414 (M+H)^{+}.

f) Éster metílico del ácido {7-[bencil-(terc-butoxicarbonil)aminometil]-1-(piridin-4-il)-1H-indol-3-ilmetil}oxo- acético

Se añaden cinco gotas de diclorometano a éster terc-butílico del ácido bencil-[1-(piridin-4-il)-1H-indol-7-ilmetil]carbámico (700 mg, 1,7 mmol), después se enfría a -10ºC. Se añade cloruro de oxalilo (4,0 ml, 46,6 mmol) lentamente a la mezcla. Se agita la mezcla a temperatura ambiente durante 4 horas. Se diluye con diclorometano y se enfría a -78ºC. Se añade trietilamina (16,3 ml, 0,12 mol) y metanol (15 ml) cuidadosamente. Se lava la fase orgánica con agua, se seca con sulfato de magnesio, y se concentra. Se purifica por cromatografía (gel de sílice; hexano/acetato de etilo; 1:1 a 0:1) aislando un sólido como producto del título (0,36 mg, 42%). EM (IEN) m/z 500 (M+H)^{+}.

Preparación 197

Éster terc-butílico del ácido 4-(7-metoximetoximetil-3-metoxioxalilindol-1-il)piperidina-1-carboxílico a) Éster metílico del ácido 3-(3,3-dimetoxipropil)-2-nitrobenzoico

Comenzado con éster metílico del ácido 3-metil-2-nitrobenzoico, el compuesto del título se prepara esencialmente como la Preparación 3, EN (M^{+}+1) 270.

b) Éster terc-butílico del ácido 4-(7-hidroximetilindol-1-il)piperidina-1-carboxílico

Se hidrogena éster metílico del ácido 3-(3,3-dimetoxipropil)-2-nitrobenzoico (7,8 g, 0,029 mol) en 100 ml de tetrahidrofurano con 0,743 g de Pd al 5%/C a 413,57 kPa (60 psi) durante 24 horas. Se filtra y se concentra. Se disuelve el producto resultante en 30 ml de tetrahidrofurano, y se añade gota a gota a una suspensión de hidruro de litio y aluminio (2,2 g, 0,058 mol) en 100 ml de tetrahidrofurano a 0ºC. Se deja que la reacción se caliente a temperatura ambiente, y se agita durante 2 horas. Se inactiva la mezcla con sal de Rochelle saturada y se extrae con acetato de etilo. Se seca y se concentra. Se disuelve el producto en 30 ml de ácido acético y se añade éster terc-butílico del ácido 4-oxopiperidina-1-carboxílico (6,3 g, 0,032 mol). Después de 10 minutos, se añade cianoborohidruro sódico (9,2 g, 0,032 mol) y se agita la mezcla durante 1 hora. Se calienta la mezcla a 100ºC durante 3 horas, se enfría, y se vierte en agua. Se neutraliza la solución con carbonato potásico y se extrae con acetato de etilo. Se seca y se concentra. Se disuelve la mezcla en bruto en 100 ml de metanol y se trata con 20 ml de hidróxido sódico 1 N durante 3 horas. Se retira el metanol al vacío, y se extrae la mezcla con acetato de etilo. Se seca y se concentra. Se purifica por cromatografía ultrarrápida usando hexanos/acetato de etilo 4:1 dando 4,1 g de éster terc-butílico del ácido 4-(7-hidroximetilindol-1-il)piperidina-1-carboxílico. EM BAR 330.

c) Éster terc-butílico del ácido 4-(7-metoximetoximetil-indol-1-il)piperidina-1-carboxílico

Se disuelve éster terc-butílico del ácido 4-(7-hidroximetilindol-1-il)piperidina-1-carboxílico (0,25 g, 0,76 mmol) en 5 ml de tetrahidrofurano y se añade hidruro sódico (36 mg, 1,5 mmol) a temperatura ambiente. Después de 40 minutos, se añade cloruro de metoximetilo (0,11 ml, 1,5 mmol) y se agita la mezcla durante 4 horas. Se concentra la reacción y se somete a cromatografía ultrarrápida usando hexanos:acetato de etilo 5:1dando 0,23 g del producto. EM BAR 374.

d) Éster terc-butílico del ácido 4-(7-metoximetoximetil-3-metoxioxalilindol-1-il)piperidina-1-carboxílico

Se disuelve éster terc-butílico del ácido 4-(7-metoximetoximetil-indol-1-il)-piperidina-1-carboxílico (0,36 g, 0,96 mmol) en 20 ml de cloruro de metileno, se enfría a 0ºC y se añade cloruro de oxalilo (0,093 ml, 1,1 mmol). Después de 1 hora, se añaden 5 ml de metanol y trietilamina (0,38 g, 4 mmol) y se agita durante una noche. La cromatografía ultrarrápida usando 2:1 de hexanos:acetato de etilo da 0,30 g del compuesto del título.

Ejemplo de referencia 1

3-(1-Metil-1H-indol-4-il)-4-[1-(3-hidroxipropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se añade terc-butóxido potásico (4,1 ml, 4,1 mmol, 1 M en tetrahidrofurano) a una suspensión de 2-[1-(3-hidroxipropil)-1H-indol-3-il]acetamida (0,32 g, 1,38 mmol) y éster metílico del ácido (1-metil-1H-indol-4-il)oxoacético (0,30 g, 1,38 mmol) en dimetilformamida (10 ml). Se agita la reacción a temperatura ambiente durante 12 horas, se interrumpe con HCl 1 N, y se extrae en acetato de etilo. Se lava el extracto orgánico con cloruro de litio acuoso al 5% y cloruro sódico acuoso saturado, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra, y se concentra a presión reducida. Se somete a cromatografía en sílice ultrarrápida usando un gradiente de hexanos netos a acetato de etilo al 100%:hexano obteniendo el compuesto del título (0,3 g, 54%) en forma de un sólido rojo. EN (M^{+}+1) 400,2 EN (M-1) 398,6.

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(Tabla pasa a página siguiente)

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Los siguientes compuestos pueden prepararse esencialmente como se describe en Ejemplo de referencia 1:

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Ejemplo 67 3-(Benzofur-7-il)-4-{1-[1-(2-alaninil)piperidin-4-il]-1H-indol-3-il}pirrol-2,5-diona

Se disuelve éster terc-butílico del ácido(2-{4-[3-(4-(benzofur-7-il)-2,5-dioxo-2,5-dihidro-1H-pirrol-3-il)indol-1-il]piperidin-1-il}-1-metil-2-oxoetil)carbámico (0,21 g, 0,36 mmol) en diclorometano (30 ml) y se añade ácido clorhídrico en dioxano (4 N, 10 ml) en atmósfera de nitrógeno. Después de 3 horas, se diluye con éter dietílico y se retira por filtración el precipitado naranja dando 0,123 g (66%) del compuesto del título. Espec. Mas. Alta Resol. (m/z): Calc. 483,2032 Encontrado 483,2040.

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Los siguientes compuestos pueden prepararse de una manera similar al Ejemplo 67:

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Ejemplo 98 3-(5-Metoxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-dimetilaminopropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-(5-metoxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-hidroxipropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (0,058 g, 0,118 mmol) en 10 ml de diclorometano. Se añade tetrabromuro de carbono (0,077 g, 1 equivalente) y trifenilfosfina (0,061 g, 1 equivalente). Se agita durante 10 min., se añade otro equivalente de ambos reactivos. Se agita 10 min., después se diluye con diclorometano y se lava con agua seguido de salmuera. Se seca sobre sulfato de magnesio, después se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (metanol al 2%:diclorometano) produce la 3-(5-metoxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-bromopropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona. La 3-(5-metoxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-bromopropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona se disuelve en 1,5 ml de 1-metil-2-pirrolidinona y se añade dimetilamina (solución 2 M en tetrahidrofurano, 0,3 ml, 5 equivalentes). Se calienta a 60ºC durante 16 h. Se extrae con acetato de etilo frente a agua, se concentra la fase orgánica. Se vuelve a disolver en una cantidad mínima de metanol y se carga en una columna SCX^{TM} Varian (pretratada con una solución de ácido acético al 5%:metanol). Se lava con metanol y acetato de etilo para retirar las impurezas, se lava abundantemente con amoniaco 2 M en metanol recuperando el producto. EN (M^{+}+H) 444,0.

Los siguientes compuestos se preparan de manera similar a la descrita anteriormente.

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Ejemplo 126 3-[5-(Éster metílico del ácido carbámico)benzofur-7-il]-4-[1-metil-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se enfría una solución de 3-(5-aminobenzofur-7-il)-4-(1-metil-1H-indol-3-il)furo-2,5-diona (30 mg, 0,084 mmol) en diclorometano (1 ml) a -78ºC, se añade gota a gota trietilamina (0,035 ml, 0,25 mmol) y cloroformiato de metilo (0,013 ml, 0,17 mmol). Se agita la reacción durante 10 minutos, se calienta a 20ºC. Se diluye con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra a un sólido naranja. Se disuelve el sólido en bruto en N,N-dimetilformamida (1 ml), metanol (0,1 ml), se añade 1,1,1,3,3,3-hexametil-disilazano (0,2 ml). Se calienta la reacción a 80ºC durante 5 horas, se diluye con acetato de etilo, se lava con agua, ácido clorhídrico 0,1 N y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra a una película naranja. La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (acetato de etilo al 40%:hexanos) produce el compuesto del título (6 mg) en forma de un sólido naranja.

EMAR (M+H) 416,1248

Ejemplo 127 3-(5-(N-metanosulfonamida)benzofur-7-il)-4-[1-metil-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se sigue el procedimiento similar al del Ejemplo 96, partiendo con 3-(5-aminobenzofur-7-il)-4-(1-metil-1H-indol-3-il)furo-2,5-diona (20 mg, 0,056 mmol) y cloruro de metanosulfonilo (0,004 ml, 0,056 mmol). La cromatografía ultrarrápida sobre gel de sílice (acetato de etilo al 40%:hexanos) produce el compuesto del título (8 mg) en forma de un sólido naranja. EMAR (M+H) 436,0939.

Ejemplo 128 3-(6-Fluorobenzofur-7-il)-4-{1-[1-(2-glicil)piperidin-4-il]-1H-indol-3-il}pirrol-2,5-diona

Se combina 3-(6-fluorobenzofur-7-il)-4-[1-(piperidin-4-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (90 mg, 0,22 mmol), ácido terc-butoxicarbonilamino-acético (40 mg, 0,22 mmol), 4-N,N-dimetilaminopiridina (10 mg), trietilamina (0,091 ml, 0,66 mmol) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (63 mg, 0,33 mmol) en diclorometano (5 ml) y se agita a temperatura ambiente durante una noche. Se purifica la mezcla de reacción en bruto por una columna SCX^{TM} Varian de 10 gramos, se lava la columna con metanol, y después se retira por lavado el producto con amoniaco 2,0 M en solución de metanol. Se concentran las fracciones del producto a un sólido amarillo, se tritura con éter dando el compuesto del título en forma de un sólido amarillo. EMAR (EN+): 487,1779.

Usando el procedimiento descrito en el Ejemplo 128, pueden prepararse los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

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Ejemplo 131 3-(4-Hidroxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-hidroxipropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-(4-metoxibenzofur-7-il)-4-[1-(3-hidroxipropil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (0,1 g, 0,24 mmol) en 2,5 ml de diclorometano en atmósfera de nitrógeno a -78ºC. Se añade gota a gota tribromuro de boro (0,11 ml, 1,16 mmol, 5 equiv.) y se agita a -78ºC durante 1 h, se calienta a temperatura ambiente y se agita durante 1 h. Se interrumpe la reacción con hielo y después se extrae con acetato de etilo. Se lavan los extractos orgánicos con salmuera, se secan sobre sulfato sódico, se filtran, y se concentran al vacío. La purificaciónpor cromatografía en columna (acetato de etilo al 25%:hexanos a acetato de etilo al 50%:hexanos) produjo 0,050 g (52%) del producto del título. Espec. Mas. Alta Resol. (m/z): Calc. 403,1301 Encontrado 403,1294.

Los siguientes compuestos pueden prepararse de una manera similar a la del Ejemplo 131:

53

Ejemplo 136 3-(5-Hidroxibenzofur-7-il)-4-[1-(piperidin-4-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se combina 3-(5-metoxibenzofur-7-il)-4-[1-(piperidin-4-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (0,125 g, 0,24 mmol) y clorhidrato de piridina (2,2 g, exceso de 18 veces en peso) en atmósfera de nitrógeno. Se acopla una manta de calentamiento y se calienta a 190ºC durante 45 min. Se deja enfriar a 20ºC, después se extrae con acetato de etilo frente a agua. Se lava con salmuera, se seca la fase orgánica sobre sulfato de magnesio, se filtra y se concentra. La purificación por cromatografía en columna (metanol al 5%:diclorometano) da 0,085 g (70%) del producto. Espec. Mas. Alta Resol. (m/z): Calc. 518,2080 Encontrado 518,2080.

Ejemplo 137 3-[5-(Piperidin-4-iloxi)benzofur-7-il]-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-[5-(1-bencilpiperidin-4-iloxi)benzofur-7-il]-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (0,050 g,
0,094 mmol) en 1,2-dicloroetano (10 ml) en atmósfera de nitrógeno y se añade cloroformiato de 1-cloroetilo (61 \mul). Se calienta a reflujo durante 4 horas, después se añade metanol (20 ml) y se calienta durante 1,5 horas adicionales. Se enfría a 20ºC, después se concentra y se vuelve a disolver en 1 ml de N,N-dimetilformamida. La purificación por fase inversa produce 0,018 g del producto del título en forma de la sal clorhidrato. Espec. Mas. Alta Resol. (m/z): Calc. 442,1767 Encontrado 442,1762.

Los siguientes compuestos pueden prepararse de una manera similar a la del Ejemplo 137:

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56

Ejemplo 146 Clorhidrato de 3-(benzofur-7-il)-4-[N-(endo-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se añade 3-(benzofur-7-il)-4-[N-(endo-8-carbetoxi-8-azabiciclo[3.2.1]octan-3-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona
(220 mg, 0,43 mmol) con piridina HCl (1 g, 8,65 mmol) y se calienta a 160ºC en atmósfera de argón durante 2 h. Se enfría la mezcla de reacción y se vierte en agua (100 ml). Después de la adición de hidróxido sódico (1 g, 25 mmol), se extrae la solución acuosa con diclorometano. Se evapora la fase orgánica y se agita el sólido restante con HCl al 10% en dioxano (3 ml). Se filtra el sólido resultante y se seca al vacío produciendo 160 mg del compuesto del título en forma de cristales rojos. EN (M^{+}+H): 438,2.

Ejemplo 147 3-(4-Hidroxibenzofur-7-il)-4-(2-cloro-1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-(4-hidroxibenzofur-7-il)-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (0,25 g, 0,70 mmol) en 50 ml de cloroformo en atmósfera de nitrógeno. Se añaden 0,093 g (0,70 mmol, 1 equiv.) N-clorosuccinimida y se acopla a un condensador de reflujo. Se calienta a 50ºC y se deja proseguir durante una noche. Se deja enfriar a temperatura ambiente, después se extrae con acetato de etilo frente a agua. Se lava con salmuera, después se seca sobre sulfato sódico. Se filtra y se concentra al vacío. La purificación por cromatografía en columna (acetato de etilo al 20%:hexanos) produce 0,034 g (12%) del producto. Espec. Mas. Alta Resol. (m/z): Calc. 393,0655 Encontrado 393,0642.

Ejemplo 148 3-(Benzofur-7-il)-4-[1-(4-oxociclohexil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se disuelve 3-(benzofur-7-il)-4-[1-(1,4-dioxa-espiro[4.5]dec-8-il)-4-fluoro-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (1,40 g, 2,88 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) y se agita a temperatura ambiente. Se añade ácido clorhídrico 1 N (20 ml) y se calienta la reacción a reflujo durante 24 h. Después de completarse, se filtra el producto, se aclara con agua fría, y se seca al vacío. El sólido naranja se usa sin purificación adicional, 1,1 g (87%). EM (EN, m/z): 443,18 (M^{+}+1), 441,13 (M^{+}-1).

El siguiente compuesto puede prepararse como se describe en el Ejemplo 148:

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Ejemplo 150 Clorhidrato de 3-(benzofur-7-il)-4-[4-fluoro-1-(4-trans-isobutilaminociclohexil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se añade a una suspensión de 3-(benzofur-7-il)-4-[4-fluoro-1-(4-oxociclohexil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona
(1,26 mmol, 0,678 g) en tetrahidrofurano anhidro (3 ml), isobutilamina (12,6 mmol) y una gota de ácido acético glacial, se agita a temperatura ambiente en atmósfera de nitrógeno durante varias horas. Se añade triacetoxiborohidruro sódico (2,52 mmol, 0,534 g) en dos porciones, y se agita a temperatura ambiente durante una noche. Después de completarse por CCF (se usa acetato de etilo/hexanos 1:1 con trietilamina al 10%), se diluye la reacción con acetato de etilo (300 ml) y se lava con una solución saturada de bicarbonato sódico (100 ml). Se separan las dos fases, se lava la fase orgánica con agua (50 ml) y salmuera (50 ml), se seca sobre sulfato sódico anhidro, y se concentra. Se purifica el residuo por cromatografía en columna ultrarrápida (acetato de etilo/hexanos con trietilamina al 10%) aislando el producto de amina. Se disuelve la amina (0,556 mmol) en metanol (3 ml) y se añade ácido clorhídrico concentrado (0,030 g, 0,600 mmol), se calienta la reacción a 45ºC en atmósfera de nitrógeno durante 30 min. Se enfría a temperatura ambiente, después en un baño de hielo. Se filtran los cristales de clorhidrato y se secan produciendo el compuesto del título. EM (EN, m/z): C30H30FN303,C1H: 500,38 (M^{+}+1), 498,11 (M^{+}-1).

Los siguientes compuestos se preparan como el Ejemplo 150:

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Ejemplo 156 Cis y trans 3-(6-fluorobenzofur-7-il)-4-[1-(4-hidroxiciclohexil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se enfría una solución de 3-(6-fluorobenzofur-7-il)-4-[1-(4-oxociclohexil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (395 mg, 0,89 mmol) en tetrahidrofurano (20 ml) en un baño de hielo. Se añade borohidruro sódico (10 mg, 0,27 mmol) en una porción y se agita durante 5 minutos. Se añade otra porción de borohidruro sódico (10 mg, 0,27 mmol) y se agita durante 10 minutos en el baño de hielo. Se interrumpe la reacción con agua, después se diluye con acetato de etilo, se lava con agua, HCl 1 N y salmuera, se seca sobre sulfato de magnesio, se filtra, se concentra a una espuma roja. La purificación por cromatografía ultrarrápida separa los isómeros cis y trans dando cis 3-(6-fluorobenzofur-7-il)-4-[1-(4-hidroxiciclohexil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona y trans 3-(6-fluorobenzofur-7-il)-4-[1-(4-hidroxiciclohexil)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona en forma de sólidos rojos. EN (M^{+}+H): 445,1.

Ejemplo 157 Clorhidrato de 3-[5-(2-dietilaminoetoxi)benzofur-7-il]-4-(1-metil-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona

Se añade a una solución agitada de 3-[5-(2-dietilaminoetoxi)benzofur-7-il]-4-(1-metil-1H-indol-3-il)furo-2,5-diona (490 mg, 1,07 mmol) en N,N-dimetilformamida (20 ml), metanol (0,2 ml) y 1,1,1,3,3,3-hexametil-disilazano (2,25 ml, 10,7 mmol). Se calienta la reacción a 60ºC durante una noche. Se reacción se continúa en las siguientes dos noches, junto con adiciones adicionales de 1,1,1,3,3,3-hexametil-disilazano (3 x 1 ml), hasta que la reacción se completa. Se diluye con acetato de etilo, se lava con agua y salmuera, se seca sobre sulfato sódico, se filtra y se concentra a un aceite rojo. La cromatografía en fase inversa (acetonitrilo:ácido clorhídrico al 0,1%/H_{2}O) produce el producto en forma de un sólido naranja. La trituración a partir de metanol al 5%:diclorometano con éter dietílico, después filtración, da el compuesto del título (230 mg, 43%) en forma de un sólido naranja. EMAR: calculado 458,2080 encontrado 458,2069.

Usando el procedimiento descrito anteriormente, se preparan los siguientes compuestos de una manera sustancialmente similar:

60

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Ejemplo 162 3-(Imidazo[1,2-a]piridin-3-il)4-{1-[1-(N,N-dimetilacetamida)piperidin-4-il]indol-3-il}pirrol-2,5-diona

Se disuelve clorhidrato de 3-imidazo[1,2-a]piridin-3-il-4-[1-(piperidin-4-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona (200 mg, 0,45 mmol) en metanol (2 ml). Se añade trietilamina (0,19 ml, 1,34 mmol), seguido de cloruro de N,N-dimetil-carbamilo (0,06 ml, 0,67 mmol) y se agita en atmósfera de nitrógeno durante una hora. Se concentra a un aceite rojo. La purificación por cromatografía ultrarrápida (acetato de etilo) produce 180 mg (83%) del compuesto del título en forma de un sólido naranja. EN (M+1): 483,2.

Los siguientes compuestos pueden prepararse esencialmente como se ha descrito anteriormente:

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61

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Ejemplo 166 3-(Imidazo[1,2-a]piridin-3-il)-4-[1-(1-propionilpiperidin-4-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Se disuelve clorhidrato de 3-(imidazo[1,2-a]piridin-3-il)-4-[1-(piperidin-4-il)-1H-indol-3-il]-pirrol-2,5-diona (90 mg, 0,22 mmol) y ácido clorhídrico 1,0 M en 10 ml de metano:agua destilada 8:2. Se añade anhídrido propiónico (0,1 ml, 0,078 mmol) inmediatamente seguido de trietilamina (0,3 ml, 2,1 mmol). Se agita la reacción a 20ºC durante 30 minutos, se filtra el sólido, se aclara con metanol frío y se seca a 70ºC a presión reducida de vacío proporcionando el compuesto del título. EN (M++H): 468,2.

Ejemplo 167 3-(6-Fluoro-2,3-dihidrobenzofur-7-il)-4-{1-[1-(2-metoxietiléster del ácido 1-carboxílico)piperidin-4-il]-1H-indol-3-il}-pirrol-2,5-diona

Se añade trietilamina (0,1 ml, 0,7mmol) y 2-metoxietiléster del ácido clorofórmico (50 \muM, 0,46 mmol) a una solución de 3-(6-fluoro-2,3-dihidrobenzofur-7-il)-4-[1-(piperidin-4-il)-1H-indol-3-il]-pirrol-2,5-diona (100 mg, 0,23 mmol) en metanol (3 ml). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 2 horas. Se diluye con acetato de etilo y se lava la fase orgánica con agua, se seca (MgSO_{4}), se concentra, y se somete a cromatografía (gel de sílice; hexano/EtOAc, 1:1 a 0:1). Se aísla un sólido naranja (55 mg, 45%). EM (IEN) m/z 534 (M+H)^{+}.

Los siguientes compuestos pueden prepararse esencialmente como se ha descrito anteriormente:

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Ejemplo 170 3-(6-Fluoro-2,3-dihidrobenzofur-7-il)-4-{1-[1-(pirazina-2-carbonil)piperidin-4-il]-1H-indol-3-il}pirrol-2,5-diona

Se mezcla 3-(6-fluoro-2,3-dihidrobenzofur-7-il)-4-[1-(piperidin-4-il]-1H-indol-3-il)pirrol-2,5-diona (180 mg, 0,42 mmol) en dimetilformamida con trietilamina (0,2 ml, 1,4 mmol), ácido 2-pirazinacarboxílico (57 mg, 0,46 mmol), clorhidrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (106 mg, 0,55 mmol), y 1-hidroxibenzotriazol (74 mg, 0,55 mmol). Se agita la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 18 horas. Se diluye con acetato de etilo, y se lava la fase orgánica con agua/salmuera (X4). Se seca sobre sulfato de magnesio y se concentra. Se purifica por cromatografía (gel de sílice; hexano/EtOAc; 1:1 a 0:1) dando un sólido naranja (105 mg, 49%). EM (IEN) m/z 538 (M+H)^{+}.

Los siguientes compuestos se preparan esencialmente como se ha descrito anteriormente:

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Ejemplo 175 3-(6-Fluoro-2,3-dihidrobenzofur-7-il)-4-[1-(1-metilpiperidin-4-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Comenzando con 3-(6-fluoro-2,3-dihidrobenzofur-7-il)-4-{1-[1-(Boc)piperidin-4-il]-1H-indol-3-il}pirrol-2,5-diona, se prepara el compuesto del título esencialmente como se ha descrito en la Preparación 134. EM (M+H)=446.

Ejemplo 176 3-(Imidazo[1,2-a]piridin-3-il)-4-[1-(1-isopropilpiperidin-4-il)-1H-indol-3-il]pirrol-2,5-diona

Comenzado con 3-(imidazo[1,2-a]piridin-3-il)-4-{1-[1-(Boc)piperidin-4-il]-1H-indol-3-il}pirrol-2,5-diona, se prepara el compuesto del título esencialmente como se ha descrito en la Preparación 134. EM (M+H)=454.

Ensayo de Inhibición de Quinasa

Un importante ensayo in vitro es la capacidad del compuesto de inhibir la actividad de la enzima GSK-3\beta. Este ensayo se hace de acuerdo con un protocolo convencional. (Véase Fiol, y col., A Secondary Phosphorylation of CREB341 at Ser129 Is Required for the cAMP-Mediated Control of Gene Expression: A Role for Glycogen Synthase Kinase-3 in the Control of Gene Expression, J. Biol. Chem., 269, 32187-32193 (1994)).

La catálisis de la reacción:

KRREILSRRP(pS)YR + AT^{33}P \rightarrow KRREIL(^{33}pS)RRP(pS)YR [medido] + ADP

por GSK-3\beta se mide en una mezcla de reacción constituida por lo siguiente: MOPS (ácido 4-morfolinapropanosulfónico) 50 mM pH 7,0; péptido fosfoCREB 50 \muM; ATP 50 \muM; 0,5 \muCi de ATP[\gamma^{33}P]; MgCl_{2} 12,5 mM; Triton-X al 0,03%; DMSO al 4%; y GSK-3\beta humana recombinante 1 nM. La reacción se inicia por la adición de enzima. El volumen de reacción final es 100 \mul. Se deja que proceda la reacción durante 60 minutos a temperatura ambiente y se detiene por la adición de 75 \mul de ácido fosfórico al 10%. Para capturar KRREIL(^{33}pS)RRP(pS)YR formado en la reacción y para retirar el AT^{33}P que no ha reaccionado, se transfieren 160 \mul de la mezcla de reacción detenida a una placa de microfiltración de fosfocelulosa prehumedecida (ácido fosfórico al 0,75%) [Millipore Nº Cat. MAPH NOB 50] y después de 90 minutos de incubación en la placa, la mezcla de reacción detenida se pasa a través del filtro usando un Titertek Map Extractor. El filtro que contiene el KRREL(^{33}pS)RRP(pS)YR atrapado se lava con 220 \mul de ácido fosfórico al 0,75%. Las placas de filtro se transfieren para retirar las gotas del drenaje. El drenaje se retira del filtro y el filtro se coloca en un revestimiento de placa transparente (Wallac, Inc.). Se añaden a cada pocillo 100 \mul de Microscint 20 (Packard).

Después de reposar al menos seis horas (preferiblemente durante una noche), las placas se cuentan en un contador de centelleo Trilux (Wallac, Inc.). La capacidad de un compuesto de inhibir GSK-3\beta se determina incluyendo diversas concentraciones del compuesto en la mezcla de reacción y comparando la señal producida con la señal producida en una mezcla de reacción sin el compuesto.

El ensayo produce la concentración molar del compuesto de ensayo que produce una inhibición del 50% de la actividad enzimática de GSK-3\beta. Cuanto menor es el valor en este ensayo, más activo es el compuesto de ensayo. Los compuestos ejemplificados muestran CI50\leq1 \muM.

En la presente invención, se prefieren inhibidores que muestran concentraciones eficaces al 50% (CI_{50}) de aproximadamente 200 nM o menos. Además, también se prefieren aquellos que muestran concentraciones eficaces al 50% de 50 nM o menos, más preferiblemente aquellos que muestran concentraciones eficaces al 50% de 20 nM o menos, y más preferiblemente aquellos que muestran concentraciones eficaces al 50% de 10 nM o menos en el protocolo descrito por FIOL, Carol J., y col., J. Biol. Chem., 269, 32187-32193 (1994). También se prefiere, en la práctica de la presente invención, que el inhibidor de GSK-3 consiga exposiciones en plasma >1000 ng*h/ml. Además, los inhibidores de GSK-3 que muestran un bajo valor de CI_{50}, tal como por debajo de 10 nm, y exposiciones en plasma <1000 ng*h/ml representan una realización preferida adicional de la presente invención.

Los ejemplos representativos se muestran en la Tabla II.

TABLA II

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Ensayo de Síntesis de Glucógeno

Este ensayo mide el aumento en la producción de glucógeno tanto en ausencia como en presencia de insulina en las células. Este ensayo se hace de acuerdo con protocolos convencionales. (Véase Berger y Hayes, A High-Capacity assay for Activators of Glucose Incorporation into Glycogen in L6 Muscle Cells, Analytical Biochemistry. 261, 159-163 (1998)).

En resumen, se siembran adipocitos 3T3-L1 y se diferencian en una placa de 96 pocillos a 25.000 células/pocillo. La placa se priva de suero durante una noche. El medio de privación de suero se retira justo antes del ensayo, y la placa se lava con 100 \mul/pocillo de tampón de Krebs-Ringer-Hepes (KRBH). El KRBH se retira y se añaden 50 \mul de compuesto (dos veces la cantidad de la concentración final) a la placa de ensayo. Después, se añaden 50 \mul de glucosa marcada con ^{14}C a la placa de ensayo a 0,1 \muCi/pocillo. La placa después se incuba a 37ºC durante 2 horas.

La placa se lava con 100 \mul/pocillo de PBS, y las células se lisan con 75 \mul/pocillo de NaOH 1 N La placa se calienta a 70ºC durante 20 minutos. Se transfiere una alícuota (50 \mul) del sobrenadante desde la placa de ensayo hasta una placa de filtro Millipore FC que contiene 120 \mul/pocillo de etanol enfriado en hielo. La placa se deja reposar durante 2 horas a 4ºC para facilitar la precipitación. El etanol se retira de la placa de filtro mediante un colector de vacío, y la placa se lava con 100 \mul/pocillo de etanol al 70% enfriado con hielo. La placa se dejó secar durante una noche, y se añadieron 75 \mul/pocillo de Microscint-20 a la placa de filtro. La placa después se contó con un Packard Topcount.

Ensayo de Disminución de Glucosa

Este ensayo mide el efecto del compuesto de ensayo en los niveles de glucosa y triglicéridos sanguíneos con relación a la insulina. (Véase Eldar-Finkleman, y col., Expression and Characterization of Glycogen Synthase Kinase-3 Mutants and Their Effect on Glycogen Synthase Activity in Intact Cells, Proc. Nat. Acad. Sci., 93, 10228-10233 (1996)).

Se alojaron individualmente ratas ZDF (Charles River, Inc.) a las seis semanas de edad con acceso libre a alimento y agua. Se dosificó a las ratas fármaco una vez al día por sonda oral, con el compuesto preparado en forma de una suspensión en carboximetilcelusolve al 1%/Tween 80 al 0,25% (CMC-Tween). A los controles de vehículo se les dosificó CMC-Tween solamente. La duración del estudio varió de acuerdo con el protocolo usado, durando los estudios de dosificación aguda un día y durando los estudios de aumento de dosis siete días. También se realizaron medidas de los pesos y el consumo de alimento una vez a la semana para estudios de siete días. Para la medida de los niveles de glucosa y triglicéridos sanguíneos, se recogen muestras de sangre de 600 \mul por el procedimiento de recorte de la cola. (El recorte de la cola para el muestreo de sangre es del siguiente modo: se recortan 1-2 mm de la cola con una cuchilla afilada. Después de la recogida de sangre, se forma una costra en el sitio de la herida. Esta costra se retira y la cola se masajea suavemente para otros sangrados posteriores.) Las determinaciones de glucosa y triglicéridos se realizan en un analizador metabólico Hitachi 912, con un kit que utiliza el procedimiento de Trinder. Al terminar el estudio, se escinden tejidos específicos (por ejemplo, corazón, páncreas, tejidos adiposos, e hígado) para evaluar el efecto de estos fármacos en sus funciones metabólicas.

Ensayo Cerebral Ex Vivo

Este ensayo evalúa la actividad GSK-3\beta quinasa del compuesto de ensayo en el tejido de la corteza cerebral. Se realiza de acuerdo con protocolos convencionales (Wang, y col., Anal. Biochem., 220, 397-402 (1994)).

La actividad GSK-3\beta quinasa ex vivo de un compuesto se ensaya después de la dosificación oral de ratones PDAPP o CD-1 de 2 a 3 meses de edad. Después de una dosis de 24 horas de 20 mg/kg, seguida de una dosis adicional de tres horas, se disecciona el tejido de la corteza cerebral y se homogeneiza en tampón de lisis recién preparado (K_{2}HPO_{4} 10 mM pH 7,2, EDTA 1 mM, EGTA 5 mM, MgCl_{2} 10 mM, \beta-Glicerofosfato 50 mM, Na_{3}VO_{4} 1 mM, DTT 2 mM, Microcistina 1 \muM, comprimido inhibidor de proteasa COMPLETE, sin detergente). Después de una incubación de treinta minutos en hielo, se centrifugan las muestras de homogeneizado de la corteza (100.000 G) durante 30 minutos a 4ºC. La concentración total de proteínas del homogeneizado se determina usando el procedimiento de BCA (Pierce). Después se ensaya la actividad GSK-3\beta en homogeneizado citosólico de ratones tratados con vehículo y compuesto. La reacción quinasa sucede en un volumen total de 50 \mul que contiene MOPS 20 mM pH 7,4, \beta-glicerol fosfato 25 mM, EGTA 5 mM, NA_{3}VO_{4} 1 mM, DTT 1 mM, MgCl_{2} 15 mM, ATP frío 100 \muM, péptido CREB 200 \muM, 10 \mul de homogeneizado cerebral de corteza citosólica, y 5 \muCi de \gamma-^{33}P-ATP. Las reacciones se incuban durante treinta minutos a 30ºC usando una placa Costar de polipropileno redonda de 96 pocillos. Las reacciones después se detienen con la adición de H_{3}PO_{4} al 10% y se transfieren a una placa de fosfocelulosa Millipore MAPH-NOB de 96 pocillos. Después, la reacción se incuba a temperatura ambiente durante 1,5 horas, se filtra y se lava con 320 \mul de H_{3}PO_{4} al 0,75%, y se filtra y se lava con 160 \mul de H_{3}PO_{4} a la misma concentración usando un colector de vacío. La placa de filtro después se coloca en una placa de transporte, y se añaden 100 \mul de Microscint 20 a cada pocillo. La placa se precinta con cinta de precintado y se incuba durante una noche a temperatura ambiente. El siguiente día, la placa de filtro se lee para ^{33}P en una Top Count (Packard). Finalmente, se normalizan las CPM a CPM por \mug de proteína total.

Ensayo de Protección de \beta-Catenina

Este ensayo mide la cantidad de inducción sobre \beta-catenina basal y se realiza de acuerdo con protocolos convencionales (Hedgepeth, C.M., Dev. Biol., 185, 82-91 (1997); Chen, G., y col., J. Neurochem., 72, 1327-1330 (1999); Hong, M., y col., J. Biol. Chem., 272, 25326-25332 (1997)).

La línea celular de linfoblastos presenilina-1 AG04160C (Coriell Cell Repository, Camden, NJ) de la enfermedad de Alzheimer familiar humana (FAD) se mantiene como un cultivo en suspensión en RPMI 1640 (con L-Glutamina) suplementado con suero bovino fetal al 10% y penicilina-estreptomicina al 1% en una atmósfera de 37ºC y CO_{2} al 5%. Las células de linfoblastos AG04160C FAD se siembran en matraces T-25 cm^{2} de 2,5 a 5,0X10^{5} células/ml en un volumen total de 10 ml. Después de 16-18 horas de cultivo, las células se tratan con compuesto a concentraciones de 0,1 \muM, 1,0 \muM, y 10 \muM, y se incuban durante 24 horas adicionales. Al completarse la incubación de 24 horas, las células se recogen, se lavan con PBS, y se lisan en tampón de lisis recién preparado (K_{2}HPO_{4} 10 mM pH 7,2, EDTA 1 mM, EGTA 5 mM, MgCl_{2} 10 mM, \beta-Glicerofosfato 50 mM, Na_{3}VO_{4} 1 mM, DTT 2 mM, Microcistina 1 \muM, PMSF 1 mM, 10 \mug/ml de leupeptina, 1 \mug/ml de pepstatina, 1 \mug/ml de aprotinina, Triton X-100 al 1%). Después de una incubación de treinta minutos en hielo, las células se centrifugan (14.000 rpm) durante 30 minutos a 4ºC, y los sobrenadantes resultantes se usan como lisados celulares completos. La concentración total de proteínas en la muestra de lisado celular completo se determina usando el procedimiento de BCA (Pierce). Después, se cargan 15 \mug de muestra en un gel Bis-Tres NuPage al 10% y se transfieren a una membrana de nitrocelulosa pura seguido de análisis de inmunotransferencia de \beta-catenina usando un anticuerpo específico para \beta-catenina (Transduction Labs). La acumulación/estabilidad de \beta-catenina se cuantifica después siguiendo el análisis de densitometría de las bandas de proteínas. Los resultados finales se presentan como la cantidad de inducción sobre la \beta-catenina basal.

Los ejemplos representativos se muestran en la Tabla III.

TABLA III

66

Ensayo en Rata Ovariectomizada

Se mantienen ratas Sprague-Dawley vírgenes de seis meses de edad en un ciclo de 12 horas de luz, 12 horas de oscuridad a 22ºC con acceso ad libitum a alimento (TD89222 con calcio al 0,5% y fosfato al 0,4%, Teklad, Madison, Wl) y agua. Se realizan ovariectomías bilaterales o simuladas en las ratas y se les deja que tengan pérdida ósea durante 1 mes. Cuando las ratas son de 7 meses de edad, a los controles simulados y ovariectomizados (Ovx) (7 animales por grupo) se les administra por vía oral vehículo (carboximetilcelulosa al 1%/Tween 80 al 0,25%) y a un segundo grupo de 7 animales Ovx se les administra por vía oral el compuesto de ensayo en vehículo. La dosificación se hace una vez al día durante 2 meses. Al final de los 2 meses, se sacrifica a las ratas con eutanasia usando anestesia de CO_{2} y se retiran el fémur izquierdo y las vértebras, se limpian de tejido blando y se almacenan en etanol al 50%/solución salina. Los huesos se analizan por QCT como se ha descrito previamente (Sato M., Comparative x-ray densitometry of bones from ovariectomized rats. Bone 17: 157S-162S (1995); Sato M., Kim J., Short L.L., Slemenda C.W, Bryant H.U., Longitudinal and cross-sectional analysis of raloxifene effects on tibiae from ovariectomized aged rats. J Pharmacol Exp Ther 272:1252-1259 (1995)).

Los compuestos de Fórmula I pueden administrarse por vía oral, transdérmica, percutánea, intravenosa, intramuscular, intranasal o intrarrectal, en circunstancias particulares. La vía de administración puede variarse de cualquier manera, limitada por las propiedades físicas de los fármacos, la comodidad del paciente y el asistente sanitario, y otras circunstancias pertinentes. (Véase Remington's Pharmaceutical Sciences, 18ª Ed., Mack Publishing Co. (1990)).

Las composiciones farmacéuticas se preparan de un modo bien conocido en la técnica farmacéutica. El vehículo o excipiente puede ser un material sólido, semi-sólido, o líquido que puede servir como vehículo o medio para el ingrediente activo. Los vehículos o excipientes adecuados son bien conocidos en la técnica. La composición farmacéutica puede adaptarse para uso oral, por inhalación, parenteral, o tópico y puede administrarse al paciente en forma de comprimidos, cápsulas, aerosoles, inhalantes, supositorios, soluciones, suspensiones, o similares.

Los compuestos de la presente invención pueden administrarse por vía oral, por ejemplo, con un diluyente inerte o cápsulas o de forma comprimida en comprimidos. Para el propósito de administración terapéutica oral, los compuestos pueden incorporarse con excipientes y usarse en forma de comprimidos, trociscos, cápsulas, elixires, suspensiones, jarabes, obleas, gomas de masticar y similares. Estas preparaciones deben contener al menos un 4% del compuesto de la presente invención, el ingrediente activo, pero puede variarse dependiendo de la forma particular y puede ser convenientemente entre el 4% y aproximadamente el 70% del peso de la unidad. La cantidad del compuesto presente en composiciones es tal que se obtendrá una dosificación adecuada. Las composiciones y preparaciones preferidas de acuerdo con la presente invención puede determinarlas un especialista en la técnica.

Los comprimidos, píldoras, cápsulas, trociscos, y similares también pueden contener uno o más de los siguientes adyuvantes: aglutinantes tales como celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; excipientes tales como almidón o lactosa, agentes disgregantes tales como ácido algínico, Primogel, almidón de maíz y similares; lubricantes tales como estearato de magnesio o Sterotex; emolientes tales como dióxido de silicio coloidal; y pueden añadirse agentes edulcorantes tales como sacarosa o sacarina o un agente aromatizante tal como menta, salicilato de metilo o aroma de naranja. Cuando la forma unitaria de dosificación es una cápsula, puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un vehículo líquido tal como polietilenglicol o un aceite graso. Otras formas unitarias de dosificación pueden contener diversos materiales diferentes que modifican la forma física de la unidad de dosificación, por ejemplo, en forma de revestimientos. Por tanto, los comprimidos o píldoras pueden revestirse con azúcar, goma laca, u otros agentes de revestimiento. Un jarabe puede contener, además de los presentes compuestos, sacarosa como agente edulcorante y ciertos conservantes, tintes y colorantes y aromas. Los materiales usados para preparar estas diversas composiciones deben ser farmacéuticamente puros y no tóxicos en las cantidades usadas.

Para el propósito de administración terapéutica parenteral, los compuestos de la presente invención pueden incorporarse en una solución o suspensión. Estas preparaciones típicamente contienen al menos un 0,1% de un compuesto de la invención, pero puede variarse para que esté entre el 0,1 y aproximadamente el 90% del peso de las mismas. La cantidad del compuesto de Fórmula I presente en dichas composiciones es tal que se obtendrá una dosificación adecuada. Las soluciones o suspensiones también pueden incluir uno o más de los siguientes adyuvantes: diluyentes estériles tales como agua para inyección, solución salina, aceites fijados, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol vencí lico o metilparabeno; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes quelantes tales como ácido etilendiaminatetraacético; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro sódico o dextrosa. La preparación parenteral puede encerrarse en ampollas, jeringas desechables o viales de múltiples dosis fabricados de vidrio o plástico. Las composiciones y preparaciones preferidas las puede determinar un especialista en la técnica.

Los compuestos de la presente invención también pueden administrarse por vía tópica, y cuando se hace, el vehículo puede comprender adecuadamente una solución, pomada, o base de gel. La base, por ejemplo, puede comprender uno o más de los siguientes: vaselina, lanolina, polietilenglicoles, cera de abejas, aceite mineral, diluyentes tales como agua y alcohol, y emulsionantes, y estabilizantes. Las formulaciones tópicas pueden contener una concentración de la Fórmula I, o su sal farmacéutica, de aproximadamente el 0,1 a aproximadamente el 10% p/v (peso por volumen unitario).

Los compuestos de Fórmula I generalmente son eficaces sobre un amplio intervalo de dosificación. Por ejemplo, las dosificaciones por día normalmente están en el intervalo de aproximadamente 0,0001 a aproximadamente 30 mg/kg de peso corporal. En algunos casos, pueden ser más adecuados niveles de dosificación por debajo del límite inferior del intervalo mencionado anteriormente, mientras que en otros casos pueden emplearse dosis aún mayores sin causar ningún efecto secundario dañino, y por lo tanto no se pretende que el intervalo de dosificación anterior limite el alcance de la invención de ningún modo. Se entenderá que la cantidad del compuesto realmente administrada la determinará un médico, a la luz de las circunstancias pertinentes, incluyendo la afección a tratar, la vía de administración elegida, el compuesto o compuestos reales administrados, la edad, peso, y respuesta del paciente individual, y la gravedad de los síntomas del paciente.

Claims (10)

1. Un compuesto de Fórmula I

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68

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en la que:

Ar es benzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con R^{8} y R^{9}, benzofur-4-ilo, quinolin-5-ilo, quinolin-7-ilo, isoquinolin-5-ilo, isoquinolin-3-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-3-ilo, imidazo[1,2-a]piridin-5-ilo, furo[3,2-c]piridin-7-ilo, o 2,3-dihidrobenzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con R^{8} y R^{9} y en el anillo dihidrofurilo con alquilo C_{1}-C_{4};

R^{1a} es hidrógeno, alcoxi C_{1}-C_{4}, -(CH_{2})_{m}-G, -O-(CH_{2})_{m}-G, halo, alquilo C_{1}-C_{4} opcionalmente sustituido con uno a tres halo, piperazin-1-ilo opcionalmente sustituido 1-2 veces con -(CO_{2})_{n}-(alquilo C_{1}-C_{4}), o -(CH_{2})-O-(CH_{2})-O-(CH_{3});

R^{1b} es hidrógeno o halo;

R^{1c} es hidrógeno o halo;

G es independientemente cada vez que aparece hidroxi, NR^{11}R^{12}, o piperidin-4-ilo;

R^{2} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, -(CH_{2})_{m}-G, tetrahidropiran-4-ilo, 4-(NR^{4}R^{5})ciclohex-1-ilo, 4-hidroxiciclohex-1-ilo, 2-azabiciclo[3.2.1]oct-5-ilo, el resto

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69

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el resto

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ciclohexan-1-on-4-ilo, piridin-4-ilo; y R^{3} es hidrógeno, halo, alquilo C_{1}-C_{4}, o ciclopropilo; o R^{2} y R^{3} tomados en conjunto representan

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R^{4} es hidrógeno y R^{5} es hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4}, o R^{4} y R^{5} tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forma un anillo pirrolidina;

R^{6} es hidrógeno, bencilo, -CO_{2}(alquilo C_{1}-C_{4}), -C(O)-(alquil C_{1}-C_{4})_{n}-NR^{14}R^{15}, -C(O)tetrahidropiran-4-ilo, -C(O)morfolin-4-ilo, -CH_{2}-tetrahidropiran-4-ilo, un resto aminoacídico, -C(O)piridin-2-ilo, -C(O)piridin-3-ilo, -C(O)piridin-4-ilo, -C(O)pirimidin-5-ilo, alquilo C_{1}-C_{4}, -C(O)pirazin-2-ilo, o -CO_{2}(alquil C_{1}-C_{4})-(alcoxi C_{1}-C_{4});

R^{7} es hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o -(CH_{2})_{m}-G;

R^{8} es -NHCO_{2}(alquilo C_{1}-C_{4}), -NHSO_{2}(alquilo C_{1}-C_{4}), halo, amino, -O-(CH_{2})_{m}-G, -NHC(O)(alquilo C_{1}-C_{4}), alcoxi C_{1}-C_{4}, hidroxi, -O-R^{10}, alquilo C_{1}-C_{4}, (alquil C_{1}-C_{4})tio, o -(CH_{2})_{m}-G;

R^{9} es halo;

R^{10} es piperidin-3-ilo, piperidin-4-ilo, o pirrolidin-3-ilo;

R^{11} y R^{12} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, ciclopropilmetilo, bencilo, o, tomados junto con el nitrógeno al que están unidos forman un anillo piperidina, 4-hidroxipiperidina, 4-(alquil C_{1}-C_{4})piperidina, N-(R^{13})-piperazina, o morfolina;

R^{13} es hidrógeno, C(O)-(alquilo C_{1}-C_{4}), o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{14} y R^{15} son independientemente hidrógeno o alquilo C_{1}-C_{4};

R^{16} es independientemente cada vez que aparece hidrógeno, dimetilo geminal, dietilo geminal, un cicloalquilo C_{3}-C_{6} espiro-condensado, o alquilo C_{1}-C_{4} opcionalmente sustituido con hidroxi; y R^{17} representa hidrógeno, alquilo C_{1}-C_{4}, o dimetilo geminal, con la condición de que la cantidad total de átomos de carbono entre R^{16} y R^{17} no exceda de cinco;

m es independientemente cada vez que aparece 2, 3, 4 ó 5;

n es independientemente cada vez que aparece 0 ó 1; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, sujeto a las siguientes condiciones:

i) cuando G es hidroxi, no más de dos R^{1a}, R^{2}, R^{7}, o R^{8} puede ser -(CH_{2})_{m}-G, o -O-(CH_{2})_{m}-G; y

ii) cuando G es NR^{11}R^{12}, no más de un R^{1a}, R^{2}, R^{7}, o R^{8} puede ser -(CH_{2})_{m}-G, o -O-(CH_{2})_{m}-G.

2. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que Ar es benzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con R^{8} y R^{9}.

3. Un compuesto de la reivindicación 1, en el que Ar es 2,3-dihidrobenzofur-7-ilo opcionalmente sustituido en el anillo fenilo con halo.

4. Un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2 ó 3, en el que R^{2} es

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5. Un compuesto de la reivindicación 4, en el que R^{6} es -C(O)morfolin-4-ilo o -C(O)pirazin-2-ilo.

6. Uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 5 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la diabetes.

7. Uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 5 para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de la enfermedad de Alzheimer.

8. Uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 5 para la fabricación de un medicamento para la inhibición de la glucógeno sintasa quinasa-3.

9. Uso de un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 5 para la fabricación de un medicamento para estimular la deposición ósea.

10. Una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1, 2, 3, 4 ó 5 en combinación con un vehículo, diluyente, o excipiente farmacéuticamente aceptable.