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ES2255295T3 - 2'-deoxi-beta-l-nucleosidos para el tratamiento de la hepatitis b. - Google Patents

2'-deoxi-beta-l-nucleosidos para el tratamiento de la hepatitis b.

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Publication number
ES2255295T3
ES2255295T3 ES99941027T ES99941027T ES2255295T3 ES 2255295 T3 ES2255295 T3 ES 2255295T3 ES 99941027 T ES99941027 T ES 99941027T ES 99941027 T ES99941027 T ES 99941027T ES 2255295 T3 ES2255295 T3 ES 2255295T3
Authority
ES
Spain
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hepatitis
pharmaceutically acceptable
deoxynucleoside
deoxy
ref
Prior art date
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Expired - Lifetime
Application number
ES99941027T
Other languages
English (en)
Inventor
Gilles Gosselin
Jean-Louis Imbach
Martin L. Bryant
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Idenix Cayman Ltd
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Idenix Cayman Ltd
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Publication date
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Abstract

Uso de una cantidad efectiva de un a-L-2¿- desoxinucleósido de fórmula: o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección por virus de hepatits B en un huésped.

Description

2'-desoxi-\beta-L-nucleósidos para el tratamiento de la hepatitis B.
Antecedentes de la invención
La presente invención se encuadra dentro del área de los métodos de tratamiento del virus de la hepatitis B (también denominado "HBV") los que incluye la administración al receptor que así lo requiere de, o bien en solitario o bien en combinación, una cantidad efectiva de uno o más de los compuestos activos aquí descritos, o una sal farmacéuticamente aceptable de uno de dichos compuestos.
HBV es la segunda causa después del tabaco del cáncer humano. El mecanismo a través del cual HBV induce cáncer es desconocido, si bien se postula que puede ser el detonante directo del desarrollo del tumor, o puede disparar indirectamente el desarrollo del tumor a través de inflamación crónica, cirrosis y regeneración celular asociada con la infección.
El virus de la hepatitis B ha alcanzado niveles epidémicos a nivel mundial. Tras un período de incubación de dos a seis meses en el que el huésped es inconsciente de la infección, la infección HBV puede conducir a hepatitis aguda y daños en el hígado, lo que causa dolor abdominal, ictericia y niveles en sangre de ciertas enzimas elevados. HBV puede causar hepatitis fulminante, una forma rápidamente progresiva, a menudo fatal, de la enfermedad en la que secciones masivas del hígado son destruidas.
Los pacientes típicamente se recuperan de hepatitis aguda. En algunos pacientes, sin embargo, persisten altos niveles de antígeno viral en la sangre durante un período de tiempo indefinido y prolongado causando una infección crónica. Las infecciones crónicas pueden conducir a hepatitis persistente crónica. Los pacientes infectado con HBV persistente crónica son sobre todo comunes en los países en vías de desarrollo. A mediados de 1991, había aproximadamente 225 millones de portadores de HBV crónicos solamente en Asia, y en todo el mundo, la cifra ascendía a casi 300 millones de portadores. La hepatitis persistente crónica puede causar fatiga, cirrosis del hígado y carcinoma hepatocelular, un cáncer de hígado primario.
En los países industrializados occidentales, los grupos de alto riesgo de infección HBV incluyen aquellos que están en contacto de portadores de HBV o sus muestras de sangre. La epidemiología de HBV es muy similar a la del síndrome de inmunodeficiencia adquirida, lo que explica por qué la infección HBV es común entre los pacientes con SIDA o complejo relacionado con SIDA. No obstante, HBV es más contagioso que HIV.
No obstante, más recientemente, se han producido también vacunas por ingeniería genética y su uso está bastante extendido actualmente. Desgraciadamente, las vacunas no pueden ayudar a los que ya están infectados con HBV. Los tratamientos diarios con \alpha-interferón, una proteína obtenida por ingeniería genética, son también prometedores, pero es una terapia que tiene éxito tan sólo con aproximadamente un tercio de los pacientes tratados. Por otra parte, interferón no puede ser administrado por vía oral.
Se ha identificado una serie de nucleósidos sintéticos que presentan actividad contra HBV. El (-)enantiómero de BCH-189, conocido como 3TC, reivindicado en la patente EE.UU. 5.539.116 para Liotta, y cols., ha sido aprobado por la Food and Drug Administration de EE.UU. para el tratamiento de hepatitis B. Consultar también EPA 0.494.119 A1 registrada por BioChem Pharma, Inc.
Cis-2-hidroximetil-5-(5-fluorocitosin-1-il)-1,3-oxatiolano ("FTC") presenta actividad contra HBV. Consultar WO 92/15308; Furman, y cols., "The Anti-Hepatitis B Virus Activities, Cytoxicities, and Anabolic Profiles of the (-) and (+) Enantiomers of cis-5-Fluoro-1-[2-(hidroximetil)-1,3-oxatiolan-5-il]-Cytosine" Antimicrobial Agents and Chemotherapy, diciembre 1992, página 2686-2692; y Cheng, y cols., Journal of Biological Chemistry, volumen 267(20), 13938-13942 (1992).
Von Janta-Lipinski y cols., describen el uso de los L-enantiómeros de 5'-triofosfatos de \beta-2'-desoxiribunucleosido modificados con 3'-fluoro para la inhibición de polimerasas de hepatitis B (J. Med. Chem., 1998, 41, 2040-2046). Específicamente, los 5'-trifosfatos de 3'-desoxi-3'-fluoro-\beta-L-timidina (\beta-L-FTTP), 2',3'-didesoxi-3'-fluoro-\beta-L-citidina (\beta-L-FdCTP) y 2',3'-didesoxi-3'-fluoro-\beta-L-5-metilcitidina (\beta-L-FMetCTP) han sido descritos como inhibidores de ADN polimerasas de HBV.
T.S. Lin y cols. (Tetrahedron, vol. 51(4), 1995, páginas 1055-1068) describen que \beta-L-5-yodo-2'-desoxiuridina (\beta-L-IUdR) es activo contra la infección herpes y otros virus ADN, que BVdU y \beta-L-BV-ara-U son también activos contra herpes, que \beta-L-BV-ara-U es activo contra el virus varicella-zóster y que se observó que 2',3'-dedexosi-\beta-L-azacitidina era activo contra HVB.
CA-A-2.206.878 y WO-A-99.45.935, ambas para Weis y cols., describen el uso de ciertos dímeros de dinucleósido que contienen al menos un L-azúcar, principalmente para el tratamiento de tumores. Ambas solicitudes describen que es la forma dimérica la que presenta la actividad.
\newpage
WO 96/13512 para Genencor International, Inc., and Lipitek, Inc. describe que determinados nucleósidos L-ribofuranosil pueden ser útiles para el tratamiento de cáncer y virus. Específicamente, se describe el uso de esta clase de compuestos para el tratamiento de cáncer e HIV.
Las patentes EE.UU. Nº 5.565.438; 5.567.688 y 5.587.362 (Chu y cols.) describen el uso de 2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabinofuranoliluridina (L-FMAU) para el tratamiento de hepatitis B y virus Epstein Barr.
La Yale University y la universidad de Georgia Research Foundation, Inc., describen el uso de L-FddC (\beta-L-5-fluoro-2',3'-didesoxicitidina) para el tratamiento del virus de la hepatitis B en WO 92/18517.
Los nucleósidos sintéticos \beta-L-2'-desoxicitidina (\beta-L-2'-dC), \beta-L-2'-desoxitimidina (\beta-L-dT) y \beta-L-2'-desoxiadenosina (\beta-L-2'-dA) son conocidos en la técnica. Antonin Holy fue el primero en describir \beta-L-dC y \beta-L-dT en 1972 "Nucleic Acid Components and Their Analogs. CLII. Preparation of 2'-deoxy-L-Ribonucleosides of the Pyrimidine Series", Collect, Czech. Chem. Commun (1972), 37(12), 4072-87. Morris S. Zedeck y cols., describieron por primera vez \beta-L-dA para la inhibición de la síntesis de enzimas inducidas en Pseudomonas testosteroni, Mol. Phys. (1967), 3(4), 386-95.
Se sabe que determinados 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos presentan actividad antiviral selectiva y antineoplástica. Verri y cols., describen el uso de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos como agentes antineoplásticos y como agentes anti-herpéticos (Mol. Pharmacol. (1997), 51(1), 132-138 y Biochem. J. (1997), 328 (1), 317-20). Saneyoshi y cols., demuestran el uso de 2'-desoxi-L-ribonucleósidos como inhibidores de transcriptasa inversa (I) para el control de retrovirus y para el tratamiento de SIDA, Jpn, Kokai Tokkyo Koho JP06293645
(1994).
Giovanni y cols., han sometido a ensayo 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos contra virus de la pseudorrabia parciales (PRV), Biochem., J. (1993), 294(2), 381-5.
Los usos quimioterapéuticos de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranucleósidos han sido estudiados por Tyrsted y cols., (Biochim. Biophys. Acta (1968), 155(2), 619-22) y Bloch, y cols., (J. Med. Chem. (1967), 10(5), 908-12).
Se sabe dentro de la técnica que \beta-L-2'-desoxitimidina (\beta-L-dT) inhibe timidina cinasa (TK) de virus herpes simplex tipo 1 (HSV-1). Iotty y cols, WO 92/08727, describe que \beta-L-dT inhibe selectivamente la fosforilación de D-timidina mediante TK HSV-1, pero no mediante TK humana. Spaldari y cols. han descrito que L-timidina es fosforilada por timidina cinasa de virus herpes simplex tipo 1 e inhibe el crecimiento viral, J. Med. Chem. (1992), 35(22), 4214-20.
A la luz del hecho de que el virus hepatitis B ha alcanzado niveles epidémicos en todo el mundo y que produce efectos graves y a menudo trágicos en los pacientes infectados, sigue existiendo una fuerte necesidad de proporcionar nuevos agentes farmacéuticos eficaces para tratar a los seres humanos infectados con el virus que presenten una baja toxicidad para el huésped.
Por lo tanto, uno de los objetos de la presente invención consiste en proporcionar nuevos métodos para el tratamiento de pacientes humanos y otros huéspedes infectados con el virus de la hepatitis B.
Se describe un método para el tratamiento de infección de hepatitis B en seres humanos y otros animales huésped que incluye la administración de una cantidad efectiva de un 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido biológicamente activo (denominado aquí alternativamente \beta-L-d-nucleósido o \beta-L-2'-d-nucleósido) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, administrado en solitario o en combinación, opcionalmente, en un vehículo farmacéuticamente aceptable. El término 2'-desoxi, tal como se utiliza en la presente memoria descriptiva, se refiere a un nucleósido que no tiene sustituyente en la posición 2'.
Los 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos descritos, o sus sales farmacéuticamente aceptables, o las formulaciones farmacéuticamente aceptables que contienen estos compuestos, son útiles en la prevención y tratamiento de infecciones de hepatitis B y otros estados patológicos relacionados, como por ejemplo estados anticuerpo anti-HBV positivos y HBV-positivos, inflación del hígado crónica causada por HBV, cirrosis, hepatitis aguda, hepatitis fulminante, hepatitis persistente crónica y fatiga. Estos compuestos o formulaciones se pueden utilizar también profilácticamente para prevenir o retardar el avance de la enfermedad clínica en individuos que son anticuerpo anti-HBV o HBV-antígeno positivos o que han sido expuestos a HBV.
En uno de los modos de realización, la presente invención incluye el uso de una cantidad efectiva de un \beta-L-2'-desoxinucleósido de fórmula:
1
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis B en un huésped.
En otro modo de realización, la invención incluye el uso de una cantidad efectiva de un \beta-L-2'-desoxinucleósido de fórmula:
2
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de infección por virus de la hepatitis B en un huésped.
En otro modo de realización, se administra el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido de forma alternativa o en combinación con el otro 2'-desoxi-\beta-L-eritro pentofuranonucleósido o uno o más compuestos que presentan actividad contra el virus de la hepatitis B. En general, durante la terapia de alternancia, se administra una dosis efectiva de cada uno de los agentes sucesivamente, mientras que en la terapia de combinación, se administra una dosis efectiva de dos o más agentes a la vez. Las dosis dependerán de las velocidades de absorción, inactivación y excreción del fármaco, así como otros factores conocidos entre las personas especializadas en este campo. También debe advertirse que los valores de dosis variarán también de acuerdo con la gravedad del estado patológico que se va a aliviar. Debe entenderse además que para un sujeto en particular, los regímenes y programas de dosis específicos deberán ajustarse a lo largo del tiempo según las necesidades individuales y el criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones.
Breve descripción de las figuras
La figura 1 ilustra un proceso general para obtener \beta-L-eritro-pentafuranonucleósidos (\beta-L-dN) empleando L-ribosa o L-xilosa como material de partida.
La figura 2 es un gráfico en el que se ilustra el metabolismo de L-dA, LdC y L-dT en células Hep G2 humanas en cuanto a la acumulación y la degradación. Se incubaron las células con 10 \muM del compuesto.
La figura 3 es un gráfico en el que se ilustra el efecto antiviral de \beta-L-dA, \beta-L-dT y \beta-L-dC en un modelo de hepatitis crónica de marmota.
Tal como se utiliza aquí el término "sustancialmente en forma de un isómero simple" o "en forma aislada" se refiere a un 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido que está, al menos en aproximadamente un 95%, en la estereo-configuración designada. En un modo de realización preferible, se administra el compuesto activo en al menos este nivel de pureza al huésped que requiere dicha terapia.
Tal como se utiliza aquí, el término hepatitis B y estados patológicos relacionados se refiere a hepatitis B y a estados patológicos relacionados, tales como estados anticuerpo anti-HBV positivos y HBV-positivos, inflamación del hígado crónica causada por HBV, cirrosis, hepatitis aguda, hepatitis fulminante, hepatitis persistente crónica y fatiga. El método de la presente invención incluye el uso de derivados de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos profilácticamente para prevenir o retardar el avance de la enfermedad clínica en individuos que son anticuerpo anti-HBV o HBV-antígeno positivos o que han sido expuestos a HBV.
El término nucleósido biológicamente activo, tal como se utiliza aquí, se refiere a un nucleósido que presenta una EC_{50} de 15 micromoles o menos cuando se ensaya en células 2.2.15 transfectadas con virión de la hepatitis.
Se puede proporcionar el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido como un 5'-fosfolípido o un lípido de 5'-éter, tal como se describe en los siguientes documentos de referencia: Kucera, L.S.,N. Lyer, E. Leake, A. Raben, Modest E.J., D.L.W., y C. Piantadosi, 1990. Novel membrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-1 production and induce defective virus formation. AIDS Res Hum Retroviruses. 6:491-501; Piantadosi, C., J. Marasco C.J., S.L. morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, C.A.,
Wallen, S. Piantadosi, y E.J. Modest. 1991-Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates for anti-HIV activity. J. Med. Chem. 34:1408-1414; Hostler, K.Y., D.D. Richman, D.A. Carson, L.M. Stuhmiller, G.M.T. van Wijk and H. van den Bosch. 1992. Greatly enhanced inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication in CEM and HT4-6C cells by 31-deoxythimidine diphosphate dimyristoylglycerol, a lipid prodrug of 31-deoxythymidine. Antimicrob Agents Chemother. 36:2025-2029; Hostler, K.Y., L.M. Stuhmiller, H.B. Lenting, H. van den Bosch, and D.D. Richman. 1990. Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs of azidothymidine and other antiviral nucleosides. J. Biol Chem. 265:6112-7.
El 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleosido se puede convertir a un éster farmacéuticamente aceptable por reacción con un agente de esterificación apropiado, por ejemplo, un haluro ácido o anhídrido. El nucleósido o su profármaco farmacéuticamente aceptable se puede convertir a una sal farmacéuticamente aceptable del mismo de manera convencional, por ejemplo, por tratamiento con un ácido o base apropiados. El éster o la sal se pueden convertir al nucleósido de origen, por ejemplo, por hidrólisis.
Tal como se utiliza aquí, el término sales o complejos farmacéuticamente aceptables se refiere a sales o complejos de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos que retienen la actividad biológica deseada del compuesto de origen y presentan efectos toxicológicos no deseados mínimos, o ninguno en absoluto. Entre los ejemplos no limitadores de dichas sales se incluyen (a) sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos (por ejemplo ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico y similares) y sales formadas con ácidos orgánicos como ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido palmoico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácidos naftalensulfónicos, ácidos naftalendisulfónicos y ácido poligalactourónicos; (b) sales de adición de base formadas con cationes como sodio, potasio, zinc, calcio, bismuto, bario, magnesio, aluminio, cobre, cobalto, níquel, cadmio, sodio, potasio y similares, o con un catión orgánico formado a partir de N,N-dibenciletilen-diamina, amonio o etilendiamina; o (c) combinaciones de (a) y (b); v.g., una sal de tanato de zinc o similar.
Las modificaciones de los compuestos activos, específicamente en las posiciones N^{4} y 5'-O, pueden afectar a la biodisponibilidad y ritmo metabólico de las especies activas, proporcionando así un control sobre la distribución de las especies activas.
Un modo de realización preferible de la presente invención consiste en un método para el tratamiento de infecciones HBV en seres humanos y otros animales huésped, que incluye la administración de una cantidad efectiva de uno o más derivados de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido seleccionado del grupo que consiste en \beta-L-2'-desoxicitidina y \beta-L-2'-desoxitimidina o una sal fisiológicamente aceptable del mismo, opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable. En un modo de realización preferible, el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido se administra sustancialmente en forma de un isómero simple, es decir, al menos aproximadamente un 95% en la estereoconfiguración designada.
Terapia de combinación o alternancia
Se ha reconocido que las variantes resistentes a fármaco de HBV pueden emerger tras un tratamiento prolongado con un agente antiviral. La resistencia al fármaco tiene lugar típicamente sobre todo por mutación de un gen que codifica una enzima utilizada en el ciclo vital del virus, y típicamente sobre todo en el caso de HVB, ADN polimerasa. Recientemente, se ha demostrado que la eficacia de un fármaco contra infección HVB puede prolongarse, aumentarse o restaurarse administrando el compuesto en combinación o de manera alterna con un segundo, y quizá un tercer, compuesto antiviral, que induce una mutación diferente de la causada por el fármaco principal. Alternativamente, la farmacocinética, biodistribución y otros parámetros del fármaco pueden ser alterados a través de dicha terapia de combinación o alternancia. En general, la terapia de combinación es típicamente preferible en relación con la terapia de alternancia ya que induce múltiples tensiones simultáneas al virus.
La actividad viral anti-hepatitis B de \beta-L-2'-dC ó L-2'-dT que se proporcionan aquí, o las sales de estos compuestos, se puede mejorar administrando dos o más de estos nucleósidos en combinación o alternancia. Alternativamente, por ejemplo, se pueden administrar uno o más entre \beta-L-2'-dC o \beta-L-2'-dT que se proporcionan aquí en combinación o alternancia con 3TC, FTC, L-FMAU, DAPD, famciclovir, penciclovir, BMS-200475, bis pom PMEA (adefovir, dipivoxil); lobucavir, ganviclovir, o ribavarin.
En cualquiera de los modos de realización aquí descritos, si se administra el \beta-L-2'-nucleósido de la presente invención en combinación o de forma alterna con un segundo inhibidor de transcriptasa inversa nucleósido o no nucleósido que se fosforila a una forma activa, es preferible que el segundo compuesto esté fosforilado mediante una enzima que es diferente de la que fosforila el \beta-L-2'-nucleósido seleccionado de la presente invención in vivo. Entre los ejemplos de enzimas cinasa se incluyen timidina cinasa, citosina cinasa, guanosina cinasa, adenosina cinasa, desoxicitidina cinasa, 5'-nucleotidasa y desoxiguanosina cinasa.
Preparación de los compuestos activos
Los derivados de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido de la presente invención son conocidos dentro de la especialidad y se pueden preparar con arreglo al método descrito en Holy, Collect. Czech. Chem. Commun. (1972), 37(12), 4072-87 y Mol. Phys. (1967), 3(4), 386-95.
En la figura 1 se muestra un proceso general para obtener \beta-L-eritro-pentafuranonucleósidos (\beta-L-dN), utilizando L-ribosa o L-xilosa como material de partida.
Protocolos experimentales
Se determinaron puntos de fusión en tubos capilares abiertos en un aparato Gallenkamp MFB-595-010 M y están sin corregir. Se registraron los espectros de absorción de UV en un espectrofotómetro Uvikon 931 (KONTRON) en etanol. Se pusieron en marcha los espectros de ^{1}H-RMN a temperatura ambiente en DMSO-d_{6} con un espectrómetro Bruker AC 250 ó 400. Los desplazamientos químicos se dan en ppm, estando ajustado DMSO-d_{5} a 2,49 ppm como referencia. Se llevaron a cabo los experimentos de desacoplamiento con intercambio de deuterio o 2D-COSY con el fin de confirmar las asignaciones de protón. las multiplicidades de señal se representan por s (singlete), d (duplete), dd (duplete de dupletes), t (triplete), q (cuadruplete) o br (ancho), m (multiplete). Todos los valores J son en Hz. Los espectros de masa de BAR fueron registrados en modo iónico (BAR>0) positivo o (BAR<0) negativo en un espectrómetro de masa JEOL DX 300. La matriz fue alcohol 3-nitrobencílico (NBA) o una mezcla (50:50, v/v) de glicerol o tioglicerol (GT). Se midieron rotaciones específicas en un espectropolarímetro Perkin-Elmer 241 (longitud de trayecto 1 cm) y se dan en unidades de 10^{-1} deg cm^{2}g^{-1}. Se llevaron a cabo los análisis elementales a través del "Service de Microanalyses du CNRS, Division de Vernaison" (Francia). Los análisis indicados por los símbolos de los elementos o funciones estuvieron dentro de \pm 0,4% de valores teóricos. Se realizó la cromatografía de capa fina sobre láminas de aluminio pre-recubiertas de Gel de Sílice 60 F_{254} (Merck, Art. 5554), llevándose a cabo la visualización de los productos por absorción de UV seguido de la carbonización con ácido etanólico sulfúrico al 10% y calentamiento. Se realizó la cromatografía de columna sobre gel de sílice 60 (Merck, Art. 9385) a presión atmosférica.
Ejemplo de referencia 1
Síntesis estereoespecífica de 2'-desoxi-\beta-L-adenosina
3
9-(3,5-di-O-benzoíl-\beta-L-xilofuranosil)adenina (3)
Se agitaron una solución de 9-(2-O-acetil-3,5-di-O-benzoíl-\beta-L-xilofuranosil)adenina 2 [Ref: Gosselin, G.;
Bergogne, M.C.; Imbach, J.-L., "Synthesis and Antiviral Evaluation of \beta-L-Xylofuranosyl Nucleosides of the Five Naturally Occuring Nucleic Acid Bases", Journal of Heterocyclic Chemistry, 1993, 30 (oct-nov)., 1229-1233] (8,30 g, 16,05 mmoles) e hidrato de hidrazina 98% (234 mL, 48,5 mmoles) mezclados con piridina/ácido acético glaciar (4/l, v/v, 170 mL) a temperatura ambiente, durante 22 h. Se enfrió la reacción por adición de acetona (40 mL) y se continuó agitando durante una hora más. Se redujo la mezcla de reacción a la mitad de su volumen, se diluyó con agua (250 mL) y se extrajo con cloroformo (2 x 150 mL). Se lavó la capa orgánica sucesivamente con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (3x 10 mL) y agua (3 x 100 mL), se secó, se filtró, se concentró y se co-evaporó con tolueno y metanol. Se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice (0-3% MeOH en diclorometano) para dar 3 (5,2 g, 68%) se hizo precipitar en éter diisopropílico: ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}): \delta 4,5-4,9 (m, 4H, H-2', H-4', H-5' y H-5''), 5,64 (t, 1H, H-3', J_{2',3'} = J_{3',4'} = 3,5 Hz), 6,3 (ancho s, 1H, OH-2'), 6,45 (d, 1H, H-1', J_{1',2'} = 4,6 Hz), 7,3 (ancho s, 2H, NH_{2}-6), 7,4-7,9 (m, 10H, 2 benzoílos), 8,07 y 8,34 (2s, 2H, H-2 y H-8); em: matriz G/T, (BAR^{+}) m/z 476 [M+H]^{+}, 136 [BH_{2}]^{+}, (BAR^{-}) m/z 474 [M-H]^{-}, 134 [B]^{-}; UV (95% etanol); \lambda_{max} 257 nm (\varepsilon 16400), 230 nm (\varepsilon 29300), \lambda_{min} 246 nm (\varepsilon (14800); [\alpha]_{D}^{20} = -64 (c,1,07, CHCl_{3}).
\vskip1.000000\baselineskip
Análisis calculado para C_{24}H_{21}N_{5}O_{4} (M = 475,45):
C, 60,43; H, 4,45; N, 14,73.
Encontrado: C, 60,41; H, 4,68; N, 14,27. 
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9-(3,5-di-O-benzoíl-2-desoxi-\beta-L-treo-pentofuranosil)adenina (4)
Se añadieron a una solución del compuesto 3 (1,00 g, 2,11 mmoles) en acetonitrilo seco (65 mL) 4-(dimetilamino)piridina (0,77 g, 6,32 mmoles) y cloruro de fenoxitiocarbonilo (0,44 mL, 3,16 mmoles). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 2 horas. Tras la concentración, se disolvió el residuo en diclorometano (50 mL) y se lavó sucesivamente con agua (2 x 30 mL), solución acuosa de ácido clorhídrico 0,5 N(30 mL) y agua (3 x 30 mL). Se secó la capa orgánica, se filtró y se concentró a sequedad. Se trató directamente el producto intermedio tiocarbonilado en bruto con hidruro de tris-(trimetilsilil)silano (0,78 mL, 5,23 mmoles) y \alpha,\alpha'-azoisobutironitrilo (AIBN, 0,112 g, 0,69 mmoles) en dioxano seco (17 mL) a reflujo durante 2 horas. Se eliminó el disolvente al vacío y se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice (0-5% MeOH en diclorometano) para dar 4 puro (0,93 g, 96%) como una espuma: ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 2,9-3,1 (m, 2H, H-2' y H-2''), 4,6-4,7 (m, 3H, H-4', H-5' y H-5''), 5,8 (ancho s, 1H, H-3'), 6,43 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'} = 3,1 Hz, J_{1',2''} = 7,6 Hz), 7,3 (ancho s, 2H, NH_{2}-6), 7,4-7,9 (m, 10H, 2 benzoílos), 8,05 y 8,33 (2s, 2H, H-2 y H-8); em: matriz G/T, (BAR^{+}) m/z 460 [M+H]^{+}, 325 [S]^{+}, 136 [BH_{2}]^{+}, (BAR^{-}) m/z 458 [M-H]^{-}, 134 [B]^{-}; UV (95% etanol): \lambda_{max} 261 nm (\varepsilon 14400), 231 nm (\varepsilon 26300), \lambda_{min} 249 nm (\varepsilon 12000); [\alpha]_{D}^{20} = -38 (c. 1,04, DMSO).
6-N-(4-monometoxitritil)-9-(3,5-di-O-benzoíl-2-desoxi-\beta-L-treo-pento-furanosil)adenina (5)
Se añadió a una solución del compuesto 4 (0,88 g, 1,92 mmoles) en piridina seca (40 mL) cloruro de 4-monometoxitritilo (1,18 g, 3,84 mmoles). Se agitó la mezcla a 60ºC durante 24 horas. Tras la adición de metanol (5 mL), se concentró la solución a sequedad, se disolvió el residuo en diclorometano (50 mL) y se lavó sucesivamente con agua (30 mL), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (30 mL) y agua (30 mL). Se secó la capa orgánica, se filtró, se concentró y se co-evaporó con tolueno para dar 5 puro (1,01 g, 72%) como una espuma: H^{1} RMN (CDCl_{3}): \delta 2,9-3,0 (m, 2H, H-2' y H-2''), 3,62 (s, 3H, OCH_{3}), 4,6-4,8 (m, 3H, H-4', H-5' y H-5''), 5,85 (pt, 1H, H-3'), 6,44 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'} = 3,1 Hz, J_{1',2'} = 7,3 Hz), 6,9 (ancho s, 1H, NH-6), 6,7-6,8 y 7,2-7,4 (2m, 24H, 2 benzoílos y MMTr), 7,97 y 8,13 (2s, 2H, H-2 y H-8); em: matriz G/T, (BAR^{+}) m/z 732 [M+H]^{+}, (BAR^{-}) m/z 730 [M-H]^{-}; UV (95% etanol): \lambda_{max} 274 nm (\varepsilon 12100), 225 nm (\varepsilon 24200), \lambda_{min} 250 nm (\varepsilon (5900); [\alpha]_{D}^{20} = -16 (c 1,12, DMSO).
6-N-(4-monometoxitritil)-9-(2-desoxi-\beta-L-treo-pentofuranosil)-adenina (6)
Se trató el compuesto 5 (0,95 g, 1,30 mmoles) con una solución (saturada a -10ºC) de amoníaco metanólico (40 mL), a temperatura ambiente durante toda la noche. Tras la concentración, se disolvió el residuo en diclorometano (60 mL) y se lavó con agua (30 mL). Se extrajo la capa acuosa dos veces con diclorometano (10 mL). Se secó la capa orgánica combinada, se filtró y se concentró. Se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice (0-5% MeOH en diclorometano) para dar 6 puro (0,67 g, 98%) como espuma: ^{1}H RMN (CDCl_{3}): \delta 2,6-2,9 (m, 2H, H-2' y H-2''), 3,5 (ancho s, 1H, OH-5'), 3,55 (s, 3H, OCH_{3}), 3,9-4,0 (m, 3H, H-4', H-5' y H-5''), 4,5-4,6 (m, 1H, H-3'), 6,03 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'} = 4,0 Hz, J_{1',2'}= 8,8 Hz), 7,0 (ancho s, 1H, NH-6), 6,7-6,8 y 7,1-7,4 (2m, 14H, MMTr), 7,40 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} = 10,6 Hz), 7,80 y 7,99 (2s, 2H, H-2 y H-8); em: matriz G/T, (BAR^{+}) m/z 524 [M+H]^{+}, 408 [BH_{2}]^{+} (BAR^{-}) m/z 1045 [2M-H]^{-}, 522 [M-H]^{-}, 406 [B]^{-}; UV (95% etanol): \lambda_{max} 275 (\varepsilon 12300), \lambda_{min} 247 nm (\varepsilon 3600); [\alpha]_{D}^{20} = +28 (c 0,94, DMSO).
6-N-(4-monometoxitritil)-9-(2-desoxi-5-O-(4-monometoxi-tritil)-\beta-L-treo-pentofuranosil)adenina (7)
Se trató el compuesto 6 (0,62 g, 1,24 mmoles) en piridina seca (25 mL) con cloruro de 4-monometoxitritilo (0,46 g, 1,49 mmoles) a temperatura ambiente durante 16 horas. Tras la adición de metanol (5 mL), se concentró la mezcla a sequedad. Se disolvió el residuo en diclorometano (60 mL) y se lavó sucesivamente con agua (40 mL), una solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (40 mL) y agua (3 x 40 mL). Se secó la capa orgánica, se filtró, se concentró y se co-evaporó con tolueno y metanol. Se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice (0-10% MeOH en diclorometano) para dar 7 (0,71 g, 72%) como una espuma: ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 2,21 (d, 1H, H-2' J_{2',2''} = 14,3 Hz), 2,6-2,7 (m, 1H, H-2''), 3,1-3,3 (2m, 2H, H-5' y H-5''), 3,64 y 3,65 (2s, 6H, 2 x OCH_{3}), 4,1-4,2 (m, 1H, H-4'), 4,2-4,3 (m, 1H, H-3'), 5,68 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} = 5,2 Hz), 6,24 (d, 1H, H-1', J_{1',2''}=7,0 Hz), 6,7-6,8 y 7,1-7,3 (2m, 29H, 2 MMTr y NH-6), 7,83 y 8,21 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (BAR^{+}) m/z 796 [M+H]^{+}, 408 [BH_{2}]^{+}, (BAR^{-}) m/z 794 [M-H]^{-}, 406 [B]^{-}; UV (95% etanol): \lambda_{max} 275 nm (\varepsilon 30900), \lambda_{min} 246 (\varepsilon 12800); [\alpha]_{D}^{20} = +14 (c 1,03,
DMSO).
6-N-(4-monometoxitritil)-9-(3-O-benzoíl-2-desoxi-5-O-(4-monometoxitritil)-\beta-L-eritro-pentofuranosil)adenosina (8)
Se añadió una solución de dietilazodicarboxilato (0,38 mL, 2,49 mmoles) en tetrahidrofurano seco (20 mL) gota a gota a una solución enfriada (0ºC) de nucleósido 7 (0,66 g, 0,83 mmoles), trifenilfosfina (0,66 g, 2,49 mmoles) y ácido benzoico (0,30 g, 2,49 mmoles) en THF seco (20 mL). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 18 horas y se añadió metanol (1 mL). Se eliminaron los disolventes a presión reducida y se purificó el material en bruto por cromatografía de columna sobre gel de sílice (0-5% acetato de etilo en diclorometano) para dar el compuesto 8 contaminado ligeramente con óxido de trifenilfosfina.
6-N-(4-monometoxitritil)-9-(2-desoxi-5-O-(4-monometoxi-tritil)-\beta-L-eritro-pentofuranosil)adenina (9)
Se trató el compuesto 8 con una solución (saturada a -10ºC) de amoníaco metanólico (20 mL), a temperatura ambiente durante 24 horas, a continuación, se concentró a sequedad la mezcla de reacción. Se disolvió el residuo en diclorometano (30 mL) y se lavó con agua (20 mL). Se extrajo la capa acuosa con diclorometano (2 x 20 mL) y se secó la fase orgánica combinada, se filtró y se concentró. Se obtuvo el compuesto 9 puro (0,50 g, 76% a partir de 7) como una espuma tras la purificación por cromatografía de columna sobre gel de sílice (0-2% MeOH en diclorometano): ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 2,2-2,3 (m, 1H, H-2'), 2,8-2,9 (m, 1H, H-2''), 3,1-3,2 (m, 2H, H-5' y H-5''), 3,64 y 3,65 (2s, 6H, 2 x = OCH_{3}), 3,97 (pq, 1H, H-4'), 4,4-4,5 (m, 1H, H-3'), 5,36 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} = 4,5 Hz), 6,34 (t, 1H, H-1', J_{1',2'}= J_{1',2''} = 6,4 Hz), 6,8-6,9 y 7,1-7,4 (2m, 29H, 2 MMTr y NH-6), 7,81 y 8,32 (2s, 2H, H-2 y H-8); em: matriz G/T, (BAR^{+}) m/z 796 [M+H]^{+}, 408 [BH_{2}]^{+}, (BAR^{-}) m/z 794 [M-H]^{-}, 406 [B]^{-}; UV (95% etanol): \lambda_{max} 276 nm (\varepsilon 42600), \lambda_{min} 248 nm (\varepsilon 23300); [\alpha]_{D}^{20} = +29 (c 1,05, DMSO).
2'-desoxi-\beta-L-adenosina (\beta-L-dA)
Se trató el compuesto 9 (0,44 g, 0,56 mmoles) con una solución acuosa de ácido acético al 80% (17 mL) a temperatura ambiente durante 5 horas. Se concentró la mezcla a sequedad, se disolvió el residuo en agua (20 mL) y se lavó con éter dietílico (2 x 15 mL). Se concentró la capa acuosa y se co-evaporó con tolueno y metanol. Se obtuvo el 2'-desoxi-\beta-L-adenosina deseado (\beta-L-dA) (0,12 g, 83%) tras la purificación por cromatografía de columna sobre gel de sílice (0-12% MeOH en diclorometano) y filtración a través de una unidad Millex HV-4 (0',45 \mu, Millipore): pf. 193-194ºC (cristalizado en agua) (Lit. 184-185ºC para L-enantiómero [Ref: Robins, M.J. Khwaja, T.A.; Robins, R.K. J. Org. Chem. 1970, 35, 636-639] y 187-189ºC para D-enantiómero [Ref: Ness, R.K. en Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry; Zorbach, W.W. Tipson, R.S., Eds; J. Wiley and sons; Nueva York, 1968; vol. 1, pp. 183-187]; ^{1}H- RMN (DMSO-d_{6}): \delta 2,2-2,3 y 2,6-2,7 (2 m, 2H, H-2' y H-2''), 3,4-3,6 (2m, 2H, H-5' y H-5''), 3,86 (pq, 1H, H-4'), 4,3-4,4 (m, 1H, H-3'), 5,24 (t, 1H, OH-5', J_{H-OH} = 5,8 Hz), 5,30 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} =4,0 Hz), 6,32 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'}=6,2 Hz, J_{1',2''} =7,8 Hz), 7,3 (ancho s, 2H, NH_{2}-6), 8,11 y 8,32 (2s, 2H, H-2 y H-8); em: matriz G/T, (BAR^{+}) m/z 252 [M+H]^{+}, 136 [BH_{2}]^{+}, (BAR^{-}) m/z 250 [M-H]^{-}, 134 [B]^{-}; UV (95% etanol): \lambda_{max} 258 nm (\varepsilon 14300), \lambda_{min} 226 nm (\varepsilon (2100); [\alpha]_{D}^{20} = +25 (c 1,03, H_{2}O), (Lit. [\alpha]_{D}^{20} = +23 (c 1,0, H_{2}O) para L-enantiómero [Ref: Robins, M.J.; Khwaja, T.A.; Robins, R. K. J. Org. Chem., 1970, 35, 636-639] y [\alpha]_{D}^{20} = -25 (c 0,47, H_{2}O) para D-enantiómero [Ref: Ness, R. K. en Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry; Zorbach, W.W. Tipson, R. S., Eds.; J. Wiley and sons: Nueva York, 1968; vol. 1, pp. 183-187]).
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Análisis calculado para C_{10}H_{13}N_{5}O_{3} + 1,5 H_{2}O (M = 278,28):
C, 43,16; H, 5,80; N, 25,17.
Encontrado: C, 43,63; H, 5,45; N, 25,33. 
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Ejemplo de referencia 2
Síntesis estereoselectiva de 2'-desoxi-\beta-L-adenosina (\beta-L-dA)
4
Reacción 1
5
Precursor: L-ribosa (Cultor Science Food, CAS [24259-59-4], lote RIB9711013).
Reactivos: Ácido sulfúrico 95-97% (Merck; ref. 1.00731.1000); Cloruro de benzoílo (Fluka; ref. 12930); sulfato sódico (Prolabo; ref 28111.365).
Disolventes: Metanol P.A. (Prolabo; ref. 20847.295); piridina 99% (Acros; ref. 131780025); Diclorometano P.A. (Merck; ref. 1.06050.6025); ácido acético P.A. (Carlo erba; ref. 20104298); anhídrido acético (Fluka; ref. 45830); Etanol 95 (Prolabo; ref. 20823.293).
Referencias: Recondo, E.F. y Rinderknecht, H. Eine neue, Einfache Synthese des 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-\beta-D-Ribofuranosides. Helv. Chim. Acta. 1171-1173 (1959).
Se trató una solución de L-ribosa 140 (150 g, 1 mol) en metanol (2 litros) con ácido sulfúrico (12 ml) y se dejó en reposo a +4ºC durante 12 horas, y después se neutralizó con piridina (180 ml). La evaporación dio una mezcla \alpha,\beta de metil ribofuranosidas 141 como un jarabe. Se trató una solución de esta mezcla anomérica en piridina (1,3 litros) con cloruro de benzoílo (580 ml, 5 moles) con enfriado y agitación mecánica. Se dejó en reposo a temperatura ambiente durante 12 horas y después se vertió sobre hielo (aproximadamente 10 litros) con agitación continua. Se filtró la mezcla (un aceite en agua) sobre un lecho de Celite. Se lavó el aceite resultante sobre el lecho de celite con agua (3 x 3 litros) y después se disolvió en acetato de etilo (3 litros). Se lavó la fase orgánica con una solución de NaHCO_{3} al 5% (2 litros) y agua (2 litros), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar 1-O-metil-2,3,5-tri-O-benzoíl-\alpha/\beta-L-ribofuranosa 142 como un jarabe espeso. Se disolvió el aceite en anhídrido acético (560 ml) y ácido acético (240 ml). Se mantuvo la solución, tras la adición gota a gota de ácido sulfúrico concentrado (80 ml) en frío (+4ºC) con agitación mecánica durante 10 horas. A continuación, se vertió la solución sobre hielo (aproximadamente 10 litros) con agitación continua. Se filtró la mezcla (compuesto oleoso en agua) sobre un lecho de celite. Se lavó el sólido gomoso resultante sobre el lecho de celite con agua (3 x 3 litros) y después se disolvió en diclorometano (2,5 litros). Se lavó la fase orgánica con 5% de NaHCO_{3} (1 litro) y agua (2 x 2 litros), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar un sólido gomoso 143, que fue cristalizado en etanol 95 (rendimiento 225 g, 44%).
Análisis para 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoíl-\beta-L-ribofuranosa 143
p.f. 129-130ºC (EtOH 95) (lit (1) pf. 130-131ºC)
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,09-7,87 (m, 6H, H_{Arom}), 7,62 -7,31 (m, 9H, H_{Arom}), 6,43 (s, 1H, H_{1}), 5,91 (dd, 1H, H_{3}, J_{3,4}, J_{3,4}, 6,7 Hz; J_{3,2} 4,9 Hz), 5,79 (pd, 1H, H_{2}, J_{2,3}, 4,9 Hz; J_{1,2}<1), 4,78 (m, 2H, H_{4} y H_{5}); 4,51 (dd, 1H, H_{5}, J_{5,5'} 13,1 Hz, J_{5',4} 5,5Hz), 2,00 (s, 3H, CH_{3}CO); (idéntico a 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoíl-\beta-D-ribofuranosa comercial).
Análisis de masa (BAR+, GT) m/z 445 (M-OAc)+
\vskip1.000000\baselineskip
Análisis elemental C_{28}H_{24}O_{9} Calculado: C 66,66 H 4,79;
encontrado C H
Reacción 2
6
Precursor: Adenina (Pharma-Waldhof; ref 400134.001 lote 45276800).
Reactivos: Cloruro estánico fumante (Fluka: ref. 96558); NH_{3}/Metanol (metanol saturado con NH_{3}; ver página 5); sulfato sódico (Prolabo; ref. 28111.365).
Disolventes: Acetonitrilo (Riedel-de Hean; ref. 33019; destilado sobre CaH_{2}); cloroformo Pur (Across; ref.
22706463); acetato de etilo Pur (Carlo erba; ref 528299).
Referencias: Saneyoshi, M. y Satoh, E., Synthetic Nucleosides and Nucleotides. XIII. Stannic Chloride Catalyzed Ribosylation of Several 6-Substituted Purines. Chem. Pharm. Bull. 27, 2518-2521 (1979); Nakayama, C. and Saneyoshi, M. Synthetic Nucleosides and Nucleotides. XX. Synthesis of Various 1-\beta-Xylofuranosyl-5-Alkyluracils and Related Nucleosides. Nucleosides, Nucleotides, 1, 139-146 (1982).
Se suspendió adenina (19,6 g, 144 mmoles) en acetonitrilo (400 ml) con 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoíl-\beta-L-ribofuranosa 143 (60 g, 119 mmoles). Se añadió a esta suspensión cloruro estánico fumante (22 ml, 187 mmoles). Al cabo de 12 horas, se concentró la reacción a un pequeño volumen (aproximadamente 100 ml) y se añadieron hidrogencarbonato sódico (110 g) y agua (120 ml). Se extrajo el sólido blanco resultante (sales de estaño) con cloroformo caliente (5 x 200 ml). Se filtraron los extractos combinados sobre un lecho de celite. Se lavó la fase orgánica con solución de NaHCO_{3} al 5% y agua, se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó para dar el compuesto 144 (60 g, espuma incolora). Se trató la espuma con metanol saturado con amoníaco (220 ml) en un recipiente sellado, a temperatura ambiente con agitación durante 4 días. Se evaporó el disolvente a presión reducida y se suspendió el polvo resultante en acetato de etilo (400 ml) a reflujo durante 1 hora. Tras la filtración, se cristalizó el polvo en agua (220 ml) para dar L-adenosina 145 (24 g, cristales, 75%).
Análisis para \beta-L-adenosina
p.f. 233-234ºC (agua) (lit(4) p.f. 235ºC-238ºC).
^{1}H RMN (200 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 8,34 y 8,12 (2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 7,37 (1s, 2H, NH_{2}), 5,86 (d, 1H, H_{1'}, J_{1',2'} 6,2Hz), 5,43 (m, 2H, OH_{2'} y OH_{5'}), 5,19 (d, 1H, OH_{3'}, J 3,7 Hz), 4,60 (m, H_{2'}), 4,13 (m, 1H, H_{3'}), 3,94 (m, 1H, H_{4'}), 3,69 -3,49 (m, 2H, H_{5'a} y H_{5'b}), (idéntico a D-adenosina comercial).
Análisis de masa (BAR+, GT) m/z 268 (M+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}
Reacción 3
7
Reactivos: 1,3-dicloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (Fluka, ref 36520); sulfato sódico (Prolabo; ref 28111.365).
Disolventes: Piridina 99% (Acros; ref 131780025); acetato de Etilo Pur (Carlo erba; ref. 528299); Acetonitrilo (Riedel-de- Haen; ref. 33019).
Referencia: Robins, M.J. y cols., Nucleic Acid Related Compounds. 42. A General Procedure for the Efficient Deoxygenation of Secondary Alcohols. Regiospecific and Stereoselective Conversion of Ribonucleosides to 2'-Deoxynucleosides. J. Am. Chem. Soc. 105, 4059-4065 (1983).
Se añadió a L-adenosina 145 (47,2 g, 177 mmoles) suspendida en piridina (320 ml) 1,3-cloro-1,1,3,3-tetraisopropildisiloxano (63 ml, 201 mmoles) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 12 horas. Se evaporó piridina y se repartió el residuo con acetato de etilo (1 litro) y una solución de NaHCO_{3} al 5% (600 ml). Se lavó la fase orgánica con solución 0,5N de HCl (2 x 500 ml) y agua (500 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó a sequedad. Se cristalizó el sólido resultante en acetonitrilo para dar el compuesto 146 (81 g, 90%).
Análisis 3',5'-O-(1,1,3,3-tetraisopropil-1,3-disiloxanil)-\beta-L-adenosina 146
p.f. 97-98ºC (acetonitrilo) (lit.(5) enantiómero D p.f. 98ºC)
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,28 y 7,95(2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 5,96 (d, 1H, J_{1',2'} 1,1Hz), 5,63 (s, 2H, NH_{2}), 5,10 (dd, 1H, H_{3'}, J_{3',4'}, 7,6 Hz, J_{3',2'}; 5,5 Hz), 4,57 (dd, 1H, H_{2'}, J_{2',1'}, 1,2Hz; J_{2'3'} 7,6 Hz), 4,15-3,99 (m, 3H, H_{4'}, H_{5'a} y H_{5'b}), 3,31 (sl, 1H, OH_{2'}), 1,06 (m, 28H, protones isopropilo)
Análisis de masa (BAR-, GT) m/z508 (M-H)^{-}; 134 (B)^{-}; (BAR+, GT) m/z 510 (m+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}.
Reacción 4
8
Reactivos: Dimetilaminopirina, 99% (Acros; ref. 1482702050); Fenilclorotionocarbonato 99% (Acros;
ref 215490050); Tris(trimetilsilil)silano "TTMSS" (Fluka; ref 93411); \alpha,\alpha'-Azoisobutironitrilo "AIBN" (Fluka, ref. 11630); sulfato sódico (Prolabo; ref 28111.365).
Disolventes: Acetonitrilo (Riedel-de-Haen; ref. 33019); acetato de etilo Pur (Carlo Erba; ref. 528299); Dioxano P.A. (Merck; ref. 1.09671.1000); Diclorometano (Merck; ref. 1.06050.6025); metanol (Carlo Erba; ref. 309002);
Referencia: Robins, M.J. Wilson, J.S. and Hansske, F., Nucleic Acid Related Compounds. 42. A General
Procedure for the Efficient Deoxygenation of Secondary Alcohols. Regiospecific and Stereoselective Conversion of Ribonucleosides to 2'-Deoxynucleosides. J. Am. Chem. Soc., 105, 4059-4065 (1983).
Se añadieron al compuesto 146 (34 g, 67 mmoles) acetonitrilo (280 ml), DMAP (16,5 g, 135 mmoles) y clorotionocarbonato de fenilo (10,2 ml, 73 mmoles). Se agitó la solución a temperatura ambiente durante 12 horas. Se evaporó el disolvente y se repartió el residuo entre acetato de etilo (400 ml) y solución 0,5N de HCl (400 ml). Se lavó la capa orgánica con solución 0,5 N de HCl (400 ml) y agua (2 x 400 ml), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó al sequedad para dar el producto intermedio como un sólido amarillo pálido. Se disolvió el producto bruto 147 en dioxano (ml) y se añadieron AIBN (3,3 g, 20 mmoles) y TTMSS (33 ml, 107 mmoles). Se calentó progresivamente la solución hasta el reflujo y se agitó durante 2 horas. Se concentró la reacción hasta obtener un aceite amarillo que fue cromatografiado (eluyente diclorometano/metanol 95/5) para dar el compuesto 148 (23 g, espuma incolora, 70%). Se cristalizó una parte alícuota en etanol/éter de petróleo.
Análisis para 3',5'-O-(1,1,3,3-tetraisopropil-1,3-disiloxanil)-2'-desoxi-\beta-L-adenosina 148
p.f. 110-111ºC (EtOH/éter de petróleo) (Lit.(5) p.f. 113-114ºC (EtOH).
^{1}H RMN (200 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,33 y 8,03 (2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 6,30 (dd, 1H, H_{1'}, J 2,85 Hz, J 7,06 Hz), 5,63 (sl, 2H, NH_{2}), 4,96 (m, 1H, H_{3'}), 4,50 (m, 2H, H_{5'a} y H_{5'b}), 2,68 (m, 2H, H_{2'a} y H_{2'b}), 1,08 (m, 28H, protones de isopropilo).
Análisis de masa (BAR+, GT) m/z 494 (M+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}.
Reacción 5
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9 
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Reactivos: Fluoruro amónico (Fluka; ref. 09742); gel de sílice (Merk; ref. 1.07734.2500).
Disolventes: Metanol P.A. (Prolabo; ref. 20847.295); diclorometano P.A. (Merck: ref. 1.06050.6025); Etanol 95 (Prolabo; ref. 20823.293).
Referencia: Zhang. W. and Robins, M. J., Removal of Silyl Protecting Groups from Hydroxyl Functions with Ammonium Fluoride in Methanol Tetrahedron Lett., 33, 1177-1180 (192).
Se agitó una solución de 3',5'-O-(1,1,3,3-tetraisopropil-1,3-disiloxanil)-2'-desoxi-L-adenosina 148 (32 g, 654 mmoles) y fluoruro amónico (32 g, mmoles) en metanol a reflujo durante 2 horas. Se añadió gel de sílice y se evaporó cuidadosamente la mezcla para dar un polvo blanco. Se añadió este polvo a la parte superior de una columna de sílice, que fue eluida con diclorometano/metanol 9/1. Se combinaron las fracciones apropiadas y se evaporaron para dar un polvo blanco, que fue cristalizado en etanol 95 (12,1 g, 75%).
\newpage
Análisis para 2'-desoxi-\beta-L-adenosina 149
p.f. 189-190ºC (EtOH 95) (idéntico a 2'-desoxi-D-adenosina comercial).
^{1}H RMN (200 MHz, DMSO-d_{6}); \delta 8,35 y 8,14 (2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 7,34 (sl, 2H, NH_{2}), 6,35 (dd, 1H, H_{1'}, J 6,1 Hz, J 7,85 Hz), 5,33 (d, 1H, OH_{2'}, J 4,0 Hz), 5,28 (dd, 1H, H_{3'}, J 4,95 Hz; J 6,6 Hz), 4,42 (m, 1H, OH5'), 3,88 (m, 1H, H_{4'}), 3,63-3,52 (m, 2H, H_{5'a} y H_{5'b}), 2,71 (m, 1H, H_{2'a}), 2,28 (m, 1H, H_{2'b}) (idéntico a 2'-desoxi-D-adenosina comercial).
\alphaD+26º (c 0,5 agua) 2'-desoxi-D-adenosina comercial -25º(c 0,5 agua)).
UV \lambda_{max} 260 nm (\varepsilon 14100) (H_{2}O).
Análisis de masa (BAR+, GT) m/z 252 (M+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}.
Ejemplo 1 Síntesis estereospecífica de 2'-desoxi-\beta-L-citidina
10
1-(3,5-Di-O-benzoíl-\beta-L-xilofuranosil)uracilo (11)
Se añadió hidrato de hidrazina (1,4 ml; 28,7 mmoles) a una solución de 1-(2-O-acetil-3,5-di-O-benzoíl-\beta-L-xilofuranosil)uracilo 10 [ref: Gosselin, G.; Bergogne, M.-C.; Imbach, J-L-, "Synthesis and Antiviral Evaluation of \beta-L-Xylofuranosyl Nucleosides of the Five Natually Occuring Nucleic Acid Bases", Journal of Heterocyclic Chemistry,
1993, 30 (oct-nov), 1229-1233] (4,79 g, 9,68 mmoles) en piridina (60 mL) y ácido acético (15 mL). Se agitó la solución durante toda la noche a temperatura ambiente. Se añadió acetona (35 mL) y se agitó la mezcla durante 30 minutos. Se evaporó la mezcla de reacción a presión reducida. Se purificó el residuo resultante por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de metanol en etapas (0-4%) en diclorometano para dar 11 (3,0 g, 68%), que fue cristalizado en ciclohexano/diclorometano: p.f. = 111-114ºC; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}): \delta 11,35 (ancho s, 1H, NH), 7,9-7,4 (m, 11H, 2 C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,38 (d, 1H, OH-2', J_{OH-2'} =4,2 Hz), 5,77 (d, 1H, H-1', J_{1',2'} =1,9 Hz), 5,55 (d, 1H, H-5, J_{5-6} =8,Hz), 5,54 (dd, 1H, H-3', J_{3',2'} = 3,9 Hz y J_{3',4'} = 1,8 Hz), 4,8 (m, 1H, H-4'), 4,7 (m, 2H, H-5' y H-5''), 4,3 (m, 1H, H-2'); EM: BAR > 0 (matriz GT) m/z 453 (M+H)^{+}; 105 (C_{6}H_{5}CO)^{+}); BAR <0 (matriz GT) m/z 451 (M-H)^{-}; 121 (C_{6}H_{5}CO_{2})^{-}, 111 (B)^{-};
Análisis calculado para C_{23}H_{20}N_{2}O_{8}. H_{2}O:
C, 58,09; H, 4,76; N, 5,96.
Encontrado: C, 57,71; H, 4,42; N, 5,70.
1-(3,5-di-O-benzoíl-\beta-L-arabinofuranosil)uracilo (12)
Se añadieron a una solución de 1-(3,5-di-O-benzoíl-\beta-L-xilofuranosil)uracilo 11 (8 g, 17,7 mL) en una mezcla de benceno anhídro-DMSO (265 mL, 6:4, v/v) piridina anhidra (1,4 mL), diciclohexilcarbodiimida (10,9 g, 53 mmoles) y ácido dicloroacético (0,75 mL). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante 4 horas, después se diluyó con acetato de etilo (400 mL) y se añadió una solución de ácido oxálico (4,8 g, 53 mmoles) en metanol (14 mL). Después de agitar durante 1 hora, se filtró la solución. Se lavó el filtrado con una solución de NaCl saturada (2 x 500 mL), solución de NaHCO_{3} al 3% (2 x 500 mL) y agua (2 x 500 mL). Se secó la fase orgánica sobre Na_{2}SO_{4}, a continuación se evaporó a presión reducida. A continuación se solubilizó el residuo resultante en una mezcla de EtOH absoluto-benceno (140 mL, 2:1, v/v). Se añadió a esta solución a 0ºC NaBH_{4} (0,96 g, 26,5 mmoles). Después de agitar durante 1 hora, se diluyó la solución con acetato de etilo (400 mL), a continuación se filtró. Se lavó el filtrado con solución de NaCl saturada (400 mL) y agua (400 mL). Se secó la fase orgánica sobre Na_{2}SO_{4}, después se evaporó a presión reducida. Se purificó el material bruto resultante por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de metanol en etapas (0-3%) en diclorometano para dar 12 (5,3 g, 66%) que fue cristalizado en acetonitrilo: pf. = 182-183ºC; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta 11,35 (ancho s, 1H, NH), 8,0-7,5 (m, 11H, 2 C_{6}H_{5}CO, H-6); 6,23 (ancho s, 1H, OH-2'), 6,15 (d, 1H, H-1', J_{1'2'} = 4Hz), 5,54 (d, 1H, H-5, J_{5-6} = 8,1 Hz), 5,37 (t, 1H, H-3', J_{3'2'} = J_{3'4'} =2,6 Hz), 4,7 -4,6 (m, 2H, H-5' y H-5''), 4,5 (m, 1H, H-4'), 4,4 (m, 1H, H_{-}2'); EM; BAR>0 (matriz GT) m/z 453 (M+H)^{+}, 341 (S)^{+}, 113 (BH_{2})^{+}, 105 (C_{6}H_{5}CO)^{+}; BAR<0 (matriz GT) m/z 451 (M-H)^{-}, 121 (C_{6}H_{5}CO_{2})^{-}, 111 (B)^{-};
Análisis calculado para C_{23}H_{20}N_{2}O_{8}:
C, 61,06; H, 4,46; N, 6,19.
Encontrado: C, 60,83; H, 4,34; N, 6,25.
1-(3,5-di-O-benzoíl-2-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranosil) uracilo (13)
Se añadió a una solución de 1-(3,5-di-O-benzoíl-\beta-L-arabinofuranosil)uracilo 12 (56,2 g, 11,4 mmoles) en 1,2-dicloroetano anhidro (120 mL) cloruro de fenoxitiocarbonilo (4,7 mL, 34,3 mL) y 4-(dimetilamino)piridina (DMAP, 12,5 g, 102,6 mmoles). Se agitó la solución resultante a temperatura ambiente bajo una atmósfera de argon durante 1 hora y después se evaporó a presión reducida. Se disolvió el residuo en diclorometano (300 mL) y se lavó sucesivamente la solución orgánica con una solución de ácido clorhídrico 0,2 N enfriada con hielo (3 x 200 mL) y agua (2 x 200 mL), se secó sobre Na_{2}SO_{4}, después se evaporó a presión reducida. Se co-evaporó el material en bruto varias veces con dioxano anhidro y se disolvió en este disolvente (110 mL). Se añadieron a la solución resultante bajo argon hidruro de tris-(trimetilsilil)silano (4,2 mL, 13,7 mmoles) y \alpha,\alpha'-azoisobutironitrilo (AIBN, 0,6 g, 3,76 mmoles). Se calentó la mezcla de reacción y se agitó a 100ºC durante 1 hora bajo argon, a continuación, se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de metanol en etapas (0-5%)] para dar 13 (2,78 g, 56%) que fue cristalizado en EtOH: p.f.= 223-225ºC; H-RMN (DMSO-d_{6}): \delta 11,4 (ancho s, 1H, NH), 8,0 -7,5 (m, 11H, 2, C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,28 (t, 1H, H-1', J = 7 Hz), 5,5 (m, 2H, H-1' y H-5), 4,6-4,4 (m, 3H, H-4', H-5' y H-5''), 2,6 (m, 2H, H-2' y H-2''); EM: BAR>0 (matriz GT) m/z 437 (M+H)^{+}, 3325 (S)^{+}; BAR<0 (matriz GT) m/z 435 (M-H)^{-}, 111 (B)^{-};
Análisis calculado para C_{23}H_{20}N_{2}O_{7}: C, 63,30; H, 4,62; N, 6,42.
Encontrado: C, 62,98; H, 4,79; N, 6,40.
2'-desoxi-\beta-L-citidina (\beta-L-dC)
Se añadió reactivo de Lawesson (1,72 g, 4,26 mmoles) bajo argon a una solución de 1-(3,5-di-O-benzoíl-2-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranosil)uracil 13 (2,66 g, 6,1 mmoles) en 1,2-dicloroetano anhidro (120 mL) y se agitó la mezcla de reacción a reflujo durante 2 horas. A continuación, se evaporó el disolvente a presión reducida y se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de acetato de etilo por etapas (0-8%) en diclorometano] para dar el producto intermedio 4-tio como una espuma amarilla. Se calentó una solución de este producto intermedio tio (1,5 g, 3,31 mmoles) en amoníaco metanólico (saturado previamente a -10ºC y tapado herméticamente) (50 mL) a 100ºC en una bomba de acero inoxidable durante 3 horas y después se enfrió a 0ºC. Se evaporó la solución a presión reducida. Se purificó el material bruto resultante por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de metanol por etapas (0-20%) en diclorometano]. Finalmente, se distribuyeron las fracciones apropiadas, se filtraron a través de una unidad Millex HV-4 (0,45 \mum, Milliporo) y se evaporaron a presión reducida para proporcionar el 2'-desoxi-\beta-L-citidina deseado (\beta-L-dC) como una espuma (0,6 g, 80%) que fue cristalizado en EtOH absoluto: p.f. = 198-199ºC; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}); \delta 7,77 (d, 1H, H-_{6}, J_{6-5} = 7,4 Hz), 7,10 (ancho d, 2H, NH-_{2}), 6,13 (t, 1H, H-1', J= 6,7 Hz), 5,67 (d, 1H, H-5, J_{5-6} = 7,4 Hz), 5,19 (d, 1H, OH-3', J_{OH-3'} = 4,1 Hz), 4,96 (t, 1H, OH-5', J_{OH-5'} = J_{OH-5''} = 5,2 Hz), 4,1 (m, 1H, H-3'), 3,75 (m, 1H, H-4'), 3,5 (m, 2H, H-5' y H-5''), 2,0 (m, 1H, H-2'), 1,9 (m, 1H, H-2''); EM: BAR>0 (matriz GT) m/z 228 (M+H)^{+}, 112 (BH_{2})^{+}; BAR<0 (matriz GT) m/z 226 (M-H)^{-}; [\alpha]^{20}D = -69 (c 0,52, DMSO) [[\alpha]^{20}D = +76 (c 0,55, DMSO) para una sal de hidrocloruro comercial del enantiómero
D].
Análisis calculado para C_{9}H_{13}N_{3}O_{4};
C, 47,57; H, 5,77; N, 18,49.
Encontrado: C, 47,35; H, 5,68; N, 18,29.
Ejemplo 2 Síntesis estereoselectiva de 2'-desoxi-\beta-L-citidina (\beta-L-dC)
11
2-amino-\beta-L-arabinofurano[1',2':4,5]oxazolina (1)
Se agitó una mezcla de L-arabinosa (170 g, 1,13 moles), cianamida (100 g, 2,38 moles), metanol (300 ml) y 6M-NH_{4}OH (50 ml) a temperatura ambiente durante 3 días y se mantuvo a -10ºC durante toda la noche. Se recogió el producto con succión, se lavó sucesivamente con metanol y éter y se secó al vacío. Rendimiento, 130 g (66,0%) del compuesto 1 analíticamente puro. p.f. 170-172ºC; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta ppm 6,35 (ancho s, 2H, NH_{2}), 5,15 (d, 1H, H-1, J = 5,6 Hz), 5,45 (ancho s, 1H, OH-3), 4,70 (ancho s 1H, OH-5), 4,55 (d, 1H, H-2, J = 5,6 Hz), 4,00 (ancho s, 1H, H-3), 3,65 (m, 1H, H-4), 3,25 (m, 2H, H-5, H-5').
Reactivos: L-arabinosa: Fluka, >99,5%, ref. 10839
cianamida: Fluka, >98%, ref. 28330
O^{2,2}-anhidro-\beta-L-uridina (2)
Se sometió a reflujo una solución del compuesto 1 (98,8 g, 0,57 moles) y propilato de metilo (98 ml) en etanol acuoso al 50% (740 ml) durante 5 horas, a continuación, se enfrió y se concentró a presión disminuida hasta la mitad del volumen original. Tras la precipitación con acetona (600 ml), se recogió el producto con succión, se lavó con etanol y éter y se secó. Se concentró parcialmente el licor madre, se hizo precipitar el concentrado con acetona (1000 ml), se recogió el sólido con succión y se lavó con acetona y éter para dar otro cultivo del producto. Rendimiento global, 80 g (62%) del compuesto 2 p.f. 236-240ºC; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta ppm 7,87 (d, 1H, H-6, J = 7,4 Hz), 6,35 (d, 1H, H-1', J = 5,7 Hz), 5,95 (d, 1H, H-5, J = 7,4 Hz), 5,90 (d, 1H, OH-3'), 5,20 (d, 1H, H-2', J = 5,7Hz), 5,00 (m, 1H, OH-3'), 4,44 (ancho s, 1H, H-3'), 4,05 (m, 1H, H-4'), 3,25 (m, 2H, H-5, H-5').
Reactivo: Propiolato de metilo; Fluka, >97%, ref. 81863.
3,5-di-O-benzoíl-O^{2,2+}anhidro-\beta-L-uridina (3)
Se añadió a una solución del compuesto 2 (71,1 g, 0,31 moles) de piridina anhidra (1200 ml) cloruro de benzoílo (80,4 ml) a 0ºC y bajo argon. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 5 horas bajo exclusión de humedad atmosférica y se detuvo por adición de etanol. Se evaporaron los disolventes a presión reducida y se co-evaporó el residuo resultante con tolueno y etanol absoluto. A continuación, se diluyó la mezcla en bruto con etanol y se recogió el precipitado con succión, se lavó sucesivamente con etanol y éter y se secó. Rendimiento, 129 g (95,8%) del compuesto 3, p.f. 254ºC; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta ppm 8,1 -7,4 (m, 11H, C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,50 (d, 1H, H-1', J = 5,7 Hz), 5,90 (d, 1H, H-5, J = 7,5 Hz), 5,80 (d, 1H, H-2', J = 5,8 Hz), 5,70 (d, 1H, H-3'), 4,90 (m, 1H, H-4'), 4,35 (m, 2H, H-5, H-5').
Reactivo: Cloruro de benzoílo; Fluka, p.a, ref. 12930.
3,5'-di-O-benzoíl-2'-cloro-2'-desoxi-\beta,L-uridina (4)
Se añadió a una solución del compuesto 3 (60,3 g, 0,139 moles) en dimetilformamida (460 ml) a 0ºC, una solución de HCl/DMF 3,2N, (208 ml, preparada in situ por adición de 47,2 ml de cloruro de acetilo a 0ºC a una solución de 27,3 ml de metanol y 133,5 ml de dimetilformamida). Se agitó la mezcla de reacción a 100ºC durante 1 hora bajo exclusión de humedad atmosférica, se enfrió y se vertió en agua (4000 ml). Se recogió el precipitado del compuesto 4 con succión, se lavó con agua y se recristalizó en etanol. Se recogieron los cristales, se lavaron con etanol frío y éter y se secaron a presión disminuida. Rendimiento, 60,6 g (92,6%) del compuesto 4, p.f. 164-165ºC; ^{1}H RMN (DMSO-d_{6}) \delta ppm 8,7 (ancho s, 1H, NH), 8,1-7,3 (m, 11H, C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,15 (d, 1H, H-1', J = 4,8 Hz), 5,5 (m, 2H, H-5, H-2'), 4,65 (m, 4H, H-3', H-4', H-5', H-5'').
Reactivo: Cloruro de acetilo; Fluka, p.a. Ref. 00990.
3',5'-Di-O-benzoíl-2'-desoxi-\beta-L-uridina (5)
Se sometió a reflujo una mezcla del compuesto 4 (60,28 g, 0,128 moles), hidruro de tri-n-butilestaño (95 ml) y azabisisobutironitrilo (0,568 g) en tolueno seco (720 ml) con agitación durante 5 horas y después se enfrió. Se recogió el sólido con succión y se lavó con tolueno frío y éter de petróleo. Se concentró el filtrado a presión reducida y se diluyó con éter de petróleo para depositar un cultivo adicional del compuesto 5. Rendimiento, 54,28 g (97,2%) del compuesto 5: p.f. 220-221ºC; ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta ppm 8,91 (ancho s, 1H, NH), 8,1-7,5 (m, 11H, C_{6}H_{5}CO y H-6), 6,43 (q, 1H, H-1', J_{1',2'} = 5,7 Hz, y J 1',2'' = 8,3 Hz), 5,7-5,6 (m, 2H, H-3' y H-5), 4,8-4,6 (m, 3H, H-5', H-5'' y H-4'), 2,8 -2,7 (m, 1H, H-2'), 2,4-2,3, (m, 1H, H-2'').
Reactivos
Hidruro de Tri-n-butilestaño, Fluka, >98%, ref. 90915.
Azabisisobutironitrilo; Fluka, >98%, ref. 11630.
3',5'-Di-O-benzoíl-2'-desoxi-\beta-L-4-tio-uridina (6)
Se sometió a reflujo una solución del compuesto 5 (69g, 0,158 moles) y reactivo de Lawesson (74 g) en cloruro de metileno anhidro (3900 ml) bajo argon durante toda la noche. Tras la evaporación del disolvente, se purificó el residuo bruto por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de metanol (0-2%) en cloruro de metileno] para dar el compuesto 6 puro (73 g) en un rendimiento cuantitativo; ^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta ppm 9,5 (ancho s, 1H, NH), 8,1-7,4 (m, 10H, C_{6}H_{5}CO), 7,32 (d, 1H, H-6, J = 7,7 Hz), 6,30 (dd, 1H, H-1', J = 5,6 Hz y J = 8,2 Hz), 6,22 (d, 1H, H-5, J = 7,7 Hz), 5,6 (m, 1H, H-3'), 4,7 (m, 2H, H-5', H-5''), 4,5 (m, 1H, H-4'), 2,8 (m, 1H, H-2'), 2,3 (m, 1H,
H-2'').
Reactivo: reactivo de Lawesson, Fluka, >98%, ref. 61750.
2'-desoxi-\beta-L-citosina
Se calentó una solución del compuesto 6 (7,3 g, 0,016 moles) en metanol saturado con amoníaco (73 ml) a 100ºC en un cilindro de acero inoxidable durante 3 horas. Tras el enfriado cuidadoso, se evaporó el disolvente a presión reducida. Se lavó una solución acuosa del residuo con acetato de etilo y se evaporó a sequedad. Se llevó a cabo dicho procedimiento en otras 9 muestras (cada una 7,3 g) del compuesto 6 (cantidad total de 6 = 73 g). Se combinaron los 10 residuos, se diluyeron con etanol absoluto y se enfriaron para dar 7 como cristales. Se eliminó la traza de benzamida de los cristales de 6 a través de un procedimiento de extracción sólido-líquido (a reflujo en acetato de etilo durante 1 hora). Rendimiento 28,75 g (78,6%) del compuesto 6; p.f. 141-145ºC; ^{1}H RMN (DMSO) \delta ppm. 8,22 y 8,00 (2 ancho s, 2H, NH_{2}), 7,98 (d, 1H, H-6, J = 7,59 Hz), 6,12 (t, 1H, H-1', J = 6,5 Hz y J = 7,6 Hz), 5,89 (d, 1H, H-5, J = 7,59 Hz), 5,3 (ancho s, 1H, OH-3'), 5,1 (ancho s, 1H, OH-5'), 4,2 (m, 1H, H-3'), 3,80 (q, 1H, H-4', J = 3,6 Hz, y J = 6,9 Hz), 3,6-3,5 (m, 2H, H-5', H-5''), 2,2-2,0 (m, 2H, H-2', H-2''), BAR<0, (GT) m/e 226 (M-H)^{-}, 110 (B)^{-}; BAR>0(GT) 228 (M+H)^{+}, 112 (B+2H)^{+}; [\alpha]_{D}^{20}-56,48 (c =) 1,08 en DMSO); UV (pH 7) \lambda_{max} = 270 nm (\varepsilon = 10000).
Reactivo: amoníaco metanólico: saturado previamente a -5ºC, tapado herméticamente, y mantenido en un congelador.
Ejemplo 3 Síntesis estereoselectiva de 2'-desoxi-\beta-L-timidina (\beta-L-dT)
12
3',5'-Di-O-benzoíl-2'-desoxi-5-yodo-\beta-L-uridina (7)
Se agitó una mezcla del compuesto 5 (105,8 g, 0,242 moles), yodo 76,8 g), CAN (66,4 g) y acetonitrilo (2550 ml) a 80ºC durante 3 horas y se enfrió la mezcla de reacción a temperatura ambiente lo que llevó a la cristalización del compuesto 7 (86,6 g, 63,5%); p.f. 192-194; ^{1}H RMN (DMSO) \delta ppm 8,34 (s, 1H, NH), 8,2-7,2 (m, 11H, 2 C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,31 (q, 1H, H-1', J = 5,5 Hz, y J = 8,7 Hz), 5,5 (m, 1H, H-3'), 4,7 (m, 2H, H-5', H-5''), 4,5 (m, 1H, H-4'), 2,7 (m, 1H, H-2'), 2,3 (m, 1H, H-2''); BAR>0 (GT) m/e 561 (M-H)^{-}, 237 (B)^{-}; BAR>0 (GT) 563 (M+H)^{+}; [\alpha]_{D}^{20} + 39,05 (c = 1,05 en DMSO); UV (EtOH 95) \nu_{max} =281 nm (\varepsilon = 9000), \nu_{min} = 254 nm (\varepsilon = 4000), \nu_{max} = 229 nm (\varepsilon = 31000);
Análisis calculado para C_{23}H_{19}IN_{2}O_{7}:
C, 49,13 H, 3,41 N, 4,98 I, 22,57.
Encontrado: C, 49,31 H, 3,53 N, 5,05 I, 22,36.
Reactivos
Yodo: Fluja, 99,8%, ref, 57650.
Nitrato amónico de cerio (CAN): Aldrich, >98,5%, ref. 21,547-3.
3',5'-Di-O-benzoíl-2'-desoxi-3-N-toluoíl-\beta-L-timidina (9)
Se añadió a una solucióni del compuesto 7 (86,6 g, 0,154 moles) en piridina anhidra (1530 ml) que contenía N-etildiisopropilamina (53,6 ml), en porciones a 0ºC, cloruro de p-toluoilo (40,6 ml). Se agitó la mezcla de reacción durante 2 horas a temperatura ambiente, a continuación, se añadió agua para detener la reacción y se extrajo la mezcla de reacción con cloruro de metileno. Se lavó la fase orgánica con agua, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó a sequedad para dar 3',5'-di-O-benzoíl-2'-desoxi-3-N-toluoil-5-yodo-\beta-L-uridina en bruto (8) que fue utilizado en la siguiente etapa sin posterior purificación.
Se agitó una solución de la mezcla en bruto 8, acetato de paladio (3,44 g), trifenilfosfina (8,0 g) en N-metilpirolidinona (1375 ml) con trietilamina (4,3 ml) a temperatura ambiente durante 45 minutos. A continuación, se añadió tetrametilestaño (42,4 ml) gota a gota, a 0ºC bajo argon. Después de agitar a 100-110ºC durante toda la noche, se vertió la mezcla de reacción en agua y se extrajo con éter dietílico. Se secó la solución orgánica sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de acetato de etilo en etapas (0-10%) en tolueno] para dar el compuesto 9 como una espuma (42,3 g, 48,3%, para las 2 etapas). ^{1}H RMN (DMSO) \delta ppm, 8,3-7,2 (m, 15H, 2 C_{6}H_{5}CO, 1 CH_{3}C_{6}H_{4}CO, H-6), 6,29 (t, 1H, H-1', J = 7,0 Hz), 5,7 (m, 1H, H-3'), 4,7 - 4,5 (m, 3H, H-5', H-5'', H-4'), 2,7-2,6 (m, 2H, H-2', H-2''); BAR <0, (GT) m/e 567 (M-H)^{-}, 449 (M-CH_{3}C_{6}H_{4}CO)^{-}, 243 (B)^{-}; 121 (C_{6}H_{5}COO)^{-}; BAR>0 (GT) 1137 (2M+H)^{+}, 569 (M+H)^{+}, 325 (M-B)^{-},
245 (B+2H)^{+}, 119 (CH_{3}C_{6}H_{5}CO)^{+}.
Reactivos
Cloruro de t-toluoílo, Aldrich, 98%, ref. 10.663-1.
Diisopropiletilamina, Aldrich, >99,5%, ref. 38.764-9.
N-metilpirrolidinona, Aldrich, >99%, ref. 44.377-8.
Acetato de paladio, Aldrich, >99,98%, ref. 37.987-5.
Trifenilfosfina, Fluka, >97%, ref. 93092.
Tetrametilestaño, Aldrich, >99%, ref. 14.647-1.
2'-desoxi-\beta-L-timidina
Se agitó una solución del compuesto 9 (42,3 g, 0,074 moles) en metanol saturado con amoniaco (1850 ml) a temperatura ambiente durante dos días. Tras la evaporación del disolvente, se diluyó el residuo con agua y se lavó varias veces con acetato de etilo. Se separó la capa acuosa, se evaporó al presión reducida y se purificó el residuo por cromatografía de columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de metanol en etapas (0,10%) en cloruro de metileno] para dar 2'-desoxi-\beta-L-timidina puro (11,62 g, 64,8%) que fue cristalizado en etanol; p.f. 185-188ºC; ^{1}H RMN (DMSO) \delta ppm 11,3 (s, 1H, NH), 7,70 (s, 1H, H-6), 6,2 (pt, 1H, H-1'), 5,24 (d, 1H, OH-3', J = 4,2 Hz), 5,08 (t, 1H, OH-5', J = 5,1 Hz), 4,2 (m, 1H, H-3'), 3,7 (m, 1H, H-4'), 3,5-3,6 (m, 2H, H-5', H-5''), 2,1-2,0 (m, 2H, H-2', H-2''), BAR<0, (GT) m/e 438 (2M-H)^{-}, 349 (M+T-H)^{-}; 241 (M-H)^{-}, 125 (B)^{-}; BAR>0 (GT) 243 (M+H)^{+}, 127 (B+2H)^{+};)^{+};
[\alpha]_{D}^{20}-13,0 (c = 1,0 en DMSO); UV (pH 1) \nu_{max} = 267 nm (\varepsilon = 9700), \nu_{min} = 234 nm (\varepsilon = 2000).
Reactivo
Amoniaco metanólico: previamente saturado a -5ºC, tapado herméticamente y mantenido en el congelador.
Ejemplo de referencia 3
Síntesis estereoselectiva de 2'-desoxi-\beta-L-inosina (\beta-L-dI)
Se sintetizó \beta-L-dI por desaminación de 2'-desoxi-\beta-L-adenosina (\beta-L-dA) seguido del procedimiento descrito en la serie 9-D-glucopiranosilo descrita anteriormente (ref: I.Iwai. T., Nishimura and B. Shimizu, Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, W.W. Aorbach and R.S. Tispon, eds, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, vol., pp. 135-138 (1968).
13
De este modo, se calentó una solución de \beta-L-dA (200 mg) en una mezcla de ácido acético (0,61 ml) y agua (19 ml) con nitrito sódico (495 mg) y se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante toda la noche. A continuación, se evaporó la mezcla a sequedad a presión disminuida. Se aplicó una solución acuosa del residuo a una columna de resina de intercambio iónico IR-120 (H^{+}) y se eluyó la columna con agua. Se recogieron las fracciones apropiadas y se evaporaron a sequedad para dar \beta-L-dI puro que fue cristalizado con metanol (106 mg, 53% rendimiento no optimizado); p.f. 209º-211ºC; UV (H_{2}O), \lambda_{max} = 247 nm; ^{1}H-RMN (DMSO-d_{6}) = 8,32 y 8,07 (2s, 1H cada, H-2 y H-8), 6,32 (pt, 1H, H-1; 6,7 Hz,), 4,4 (m, 1H, H-3'), 3,9 (m, 1H, H-4'), 3,7-3,4 (m, 2H, oscurecido parcialmente por HOD, H-5',5''), 2,6 y 2,3 (2m, 1H cada, H-2', H-2''); espectro de masa (maduro, glicerol-tioglicerol, 1:1, v/v), BAR>0: 253 (m+H)^{+}, 137 (base + 2H)^{+}; BAR<0: 251 (m-H)^{-}; 135 (base); [\alpha]_{D}^{20} = +19,3 (-c 0,88 H_{2}O).
Actividad anti-HBV de los compuestos activos
Se puede evaluar la capacidad de los compuestos activos para inhibir el crecimiento del virus en cultivos de células 2.2.15 (células HepG2 transformadas con virión de hepatitis) tal como se describe en detalle a continuación.
Se ha expuesto un resumen y una descripción del ensayo para determinar efectos antivirales en este sistema de cultivo y el análisis de ADN HBV (Korba and Milman, 1991, Antiviral Res., 15:217). Se llevan a cabo las evaluaciones antivirales en dos pasos de células por separado. Se siembran todos los pocillos, en todas las placas, a la misma densidad y al mismo tiempo.
Debido a las variaciones inherentes de los niveles de ADN HBV tanto intracelular como extracelular, solamente se consideran depresiones superiores a 3,5 veces (para virión ADN de HBV) o 3,0 veces (para intermediarios de replicación de ADN HBV) a partir de los niveles medios para estas formas ADN HBV en células sin tratar como estadísticamente significativas (P<0,05). Se utilizan los niveles de ADN HBV integrados en cada preparación de ADN celular (que permanece constante a nivel celular en estos experimentos) para calcular los niveles de formas ADN HBV intracelulares, asegurando así que se comparan cantidades iguales de ADN celular entre muestras por
separado.
Los valores típicos para ADN de virión HBV extracelular en células sin tratar oscilan entre 50 y 150 pg/ml de medio de cultivo (media de aproximadamente 76 pg/ml). Los intermediarios de replicación de ADN HBV intracelular en células sin tratar oscilan entre 50 y 100 \mug/pg de ADN celular (media aproximadamente 74 pg/\mug de ADN celular). En general, las depresiones en los niveles de ADN HBV intracelular debido al tratamiento con compuestos antivirales son menos pronunciadas, y se dan con menor lentitud que las depresiones en los niveles del ADN de virión de HBV (Korba and Milman, 1991), Antiviral Res., 15:217).
La manera en la que se llevan a cabo los análisis de hibridación para estos experimentos tiene como resultado una equivalencia de aproximadamente 1,0 pg de ADN HBV intracelular para 2-3 copias genómicas por células y 1,0 pg/ml de ADN HBV extracelular para 3 x 10^{5} partículas virales/ml.
Ejemplo 4
Se sometió a ensayo la capacidad de los derivados de trifosfato de \beta-L-dA, \beta-L-dC, \beta-L-dU, \beta-L-2'-dG, \beta-L-dI y \beta-L-dT para inhibir la hepatitis B. En la tabla 1 se describen las actividades de inhibición comparativas de trifosfatos de \beta-L-dT (\beta-L-dT-TP), \beta-L-dC (\beta-L-dC-TP), \beta-L-dU (\beta-L-dU-TP) y \beta-L-dA (\beta-L-dA-TP) en ADN polimerasa de virus de hepatitis de marmota (WHV), ADN polimerasas humanas, \alpha, \beta, \gamma.
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TABLA 1
Inhibidor ADN pol WHV ADN pol \alpha ADN pol \beta ADN pol \gamma
IC_{50} K_{i}^{b} (\muM) K_{i}^{b} (\muM) K_{i}^{b} (\muM)
\beta-L-dT-TP 0,34 >100 >100 >100
\beta-L-dA-TP 2,3 >100 >100 >100
\beta-L-dC-TP 2,0 >100 >100 >100
\beta-L-dU-TP 8 >100 >100 >100
^{a}IC_{50} : 50% concentración inhibidora
\begin{minipage}[t]{155mm} K_{i}^{b} se determinó este valor utilizando ADN activado de timo de becerra como plantilla-cebador y dATP como sustrato. Se analizaron los sustratos por análisis de gráfico de Dixon. En estas condiciones, la K_{m} media calculada de ADN polimerasa \alpha humana para dATP fue aproximadamente 2,6 \mu M. ADN polimerasa \beta humana presentó un estado K_{m} constante de 3,33 \mu m para dATP. ADN polimerasa \gamma humana presentó una K_{m} constante de 5,2 \mu M. \end{minipage} 
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Ejemplo 5
Se sometió a ensayo la actividad anti virus hepatitis B de \beta-L-dA, \beta-L-dC, \beta-L-dU, \beta-L-2'-dG y \beta-L-dT en células Hep G-2 transfectadas (2.2.15) En la tabla 2 se ilustra el efecto de \beta-L-dA, \beta-L-dC, \beta-L-dU, y \beta-L-dT contra la replicación del virus de la hepatitis B en células Hep G-2 transfectadas (2.2.15).
TABLA 2
Compuesto EC_{50} (\muM) EC_{50} (\muM) Citoxicidad Índice selectividad
viriones HBV^{a} Ri HVB^{b} EC_{50} (\muM) EC_{50}/EC_{50}
\beta-L-dT 0,05 0,05 >200 >4000
\beta-L-dC 0,05 0,05 >200 >4000
\beta-L-dA 0,10 0,10 >200 >2000
\beta-L-dI 1,0 1,0 >200 >200
\beta-L-dU 5,0 5,0 >200 >40
^{a}ADN extracelular
^{b} Intermediarios replicativos (ADN intracelular) 
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Ejemplo 6
Se midió el efecto de \beta-L-dA, \beta-L-dC y \beta-L-dT en combinación con el crecimiento de hepatitis B en células 2.2.15. En la tabla 3 se exponen los resultados.
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TABLA 3
Combinación Relación EC_{50}
L-dC+L-dT 1:3 0,023
L-dC+L-dT 1:1 0,053
L-dC+L-dT 3:1 0,039
L-dC+L-dA 1:30 0,022
L-dC+L-dA 1:10 0,041
L-dC+L-dA 1:3 0,075
L-dT+L-dA 1:30 0,054
L-dT+L-dA 1:10 0,077
L-dT+L-dA 1:3 0,035 
\vskip1.000000\baselineskip
Cada una de las combinaciones produjo actividad anti-HBV que fue sinérgica. Por otra parte, también fue sinérgica en este modelo la combinación de L-dA+L-dC+L-dT.
Ejemplo 7
Se midió la inhibición de replicación de hepatitis B en células 2.2.15 por \beta-L-dA y \beta-L-dC, en solitario y en combinación. En la tabla 4 se muestran los resultados.
TABLA 4
^{a}\beta-L-2'desoxi-adenosina ^{b}\beta-L-2'-desoxi- % inhibición ^{c}C.I.
(\muM) citidina (\muM)
0,5 90
0,05 24
0,005 1
0,5 95
0,05 40
0,005 10
0,05 0,05 80 0,34
0,05 0,005 56 0,20
0,05 0,0005 50 0,56
0,005 0,05 72 0,35
0,005 0,005 54 0,35
0,005 0,0005 30 0,16
0,0005 0,05 50 0,83
0,0005 0,005 15 0,28
0,0005 0,0005 0 N.A.
^{a}\beta-L-2'desoxi-adenosina: IC_{50} = 0,09 \muM
^{b}\beta-L-2'-desoxi-citidina: IC_{50} = 0,06 \muM
\begin{minipage}[t]{150mm}^{c}Valores de índices de combinación indican el efecto sinérgico (<1), efecto aditivo (=1) y efecto de antagonismo (>1).\end{minipage} 
\vskip1.000000\baselineskip
Ejemplo 8
Se determinó la eficacia de L-dA, L-dT y L-dC contra la infección de hepadnavirus en marmotas (Marmota monax) infectadas crónicamente con virus de la hepatitis de marmota (WHV). El modelo animal de infección HBV está ampliamente aceptado y se ha demostrado que es útil para la evaluación de agentes antivirales dirigidos contra
HBV.
Protocolo
Grupos experimentales (n = 3 animales/grupo de fármaco, n = 4 animales/control)
\vskip1.000000\baselineskip
Grupo 1 control vehículo
Grupo 2 lamivudina (3TC) (10 mg/kg/día)
Grupos 3-6 L-dA (0,01, 0,1, 1,0, 10 mg/kg/día)
Grupos 7-10 L-dT (0,01, 0,1, 1,0, 10 mg/kg/día)
Grupos 11-14 L-dC (0,01, 0,1, 1,0, 10 mg/kg/día) 
\vskip1.000000\baselineskip
Se administraron fármacos por vía oral, por alimentación forzada, una vez al día, se tomaron muestras los días 0, 1, 3, 7, 14, 21, 28 y después del tratamiento los días +1, +3, +7, +14, +28 y +56. La valoración de la actividad y la toxicidad se basó en la reducción de ADN de WHV en suero: punto-mancha, PCR cuantitativa.
En la figura 3 y en la tabla 5 se ilustran los resultados.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 5 Actividad antiviral de LdA, LdT, LdC en modelo de infección HBV crónica en marmotas
Control LdA LdT LdC
Día ng WHV-ADN por ml suero^{1,2}
0 381 436 423 426
1 398 369 45 123
3 412 140 14 62
7 446 102 6 46
14 392 74 1 20
^{1} LdA, LdT, LdC administrados por vía oral una vez al día a 10 mg/kg.
^{2} El límite de detección es 1 ng/ml WHV-ADN por ml de suero. 
\vskip1.000000\baselineskip
Los datos demuestran que L-dA, LdT y LdC son muy activos en este modelo in vivo. En primer lugar, se reduce la carga viral a niveles no detectables (L-dT) o casi no detectables (L-dA, L-dC). En segundo lugar, se demuestra que L-dA, LdT y LdC son más activos que 3TC (lamivudina) en este modelo. En tercer lugar, no se detecta que vuelva a brotar el virus durante al menos dos semanas después de retirar L-dT. En cuarto lugar, las curvas de respuesta a dosis sugieren que un aumento de los modos de dosis de LdA y LdC podrían presentar una actividad similar a L-dT. En quinto lugar, todos los animales a los que se les administró los fármacos ganaron peso y no se detectó toxicidad relacionada con el fármaco.
Toxicidad de los compuestos
Se llevaron a cabo análisis de toxicidad para valorar si los efectos antivirales fueron debidos a un efecto general en la viabilidad celular. El método utilizado es la medida del efecto de \beta-L-dA, \beta-L-dC y \beta-L-dT en el crecimiento celular en ensayos clorogénicos de la médula ósea humana, en comparación con Lamuvidina. En la tabla 6 se proporcionan los resultados.
\vskip1.000000\baselineskip
TABLA 6
Compuestos CFU-GM (\muM) BFU-E (\muM)
\beta-L-dA >10 >10
\beta-L-dC >10 >10
\beta-L-dT >10 >10
\beta-L-dU >10 >10
Lamuvidina >10 >10 
\vskip1.000000\baselineskip
Preparación de composiciones farmacéuticas
Los seres humanos que padecen cualquiera de los trastornos aquí descritos, incluyendo hepatitis B, pueden ser tratados por administración a dichos pacientes de una cantidad efectiva de \beta-L-2'-desoxicitidina o \beta-L-2'-desoxitimidina o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos, en presencia de un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Se pueden administrar los materiales activos a través de cualquiera de las rutas apropiadas, como por ejemplo, oral, parenteral, intravenosa, intradérmica, subcutánea o tópica, en forma sólida o líquida.
Se incluye el compuesto activo en el vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable en una cantidad suficiente para administrar al paciente una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto para inhibir la replicación viral in vivo, sin causar efectos tóxicos graves en el paciente tratado. Se entiende por "cantidad inhibidora" una cantidad de ingrediente activo suficiente para ejercer un efecto inhibidor según se mide por ejemplo a través de un ensayo como los aquí descritos.
Una dosis preferible del compuesto para todos los estados patológicos que se han mencionado será la comprendida entre aproximadamente 1 y 50 mg/kg, preferiblemente entre 1 y 20 mg/kg, de peso corporal al día, más generalmente entre 0,1 y aproximadamente 100 mg por kilogramo de peso corporal del receptor al día.
Se administra convenientemente el compuesto en formas de dosis unitarias adecuadas, incluyendo, pero sin limitarse sólo a ellas, una forma de dosis unitaria con un contenido de 7 a 3000 mg, preferiblemente de 70 a 1400 mg de ingrediente activo por forma de dosis unitaria. La dosis oral de 50 a 1000 mg es normalmente la conveniente.
Idealmente, se deberá administrar el ingrediente activo para conseguir concentraciones en plasma máximas del compuesto activo de aproximadamente 0,2 a 70 \muM, preferiblemente aproximadamente de 1,0 a 10 \muM. Esto se puede conseguir por ejemplo por inyección intravenosa de una solución al 0,1 a 5% del ingrediente activo, opcionalmente en solución salina, o administrado como un bolo del ingrediente activo.
La concentración del compuesto activo en la composición de fármaco dependerá de los índices de absorción, inactivación y excreción del fármaco, así como de otros factores conocidos entre las personas especializadas en este campo. Debe advertirse que los valores de dosis variarán también según la gravedad del estado patológico que se está aliviando. Debe entenderse que para cualquier sujeto en concreto, los regímenes de dosis específicos deberán ser ajustados en el tiempo con arreglo a las necesidades individuales y al criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de concentración expuestos aquí son ilustrativos únicamente, no pretendiéndose limitar el marco o práctica de la composición que se reivindica. El ingrediente activo se puede administrar de una vez, o se puede dividir en una serie de dosis más reducidas que se administrarán en varios intervalos de tiempo.
Un modo preferible de administración del compuesto activo es por vía oral. Las composiciones orales incluirán generalmente un diluyente inerte o un vehículo comestible. Se pueden encerrar en cápsulas de gelatina o comprimir en comprimidos. Para fines de administración terapéutica oral, se pueden incorporar en el compuesto activo excipientes y utilizarse en forma de comprimidos, pastillas o cápsulas. Se pueden incluir agentes de unión, y/o otros materiales adyuvantes farmacéuticamente compatibles como parte de la composición.
Los comprimidos, píldoras, cápsulas, pastillas y similares pueden contener los siguientes ingredientes, o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante, como por ejemplo celulosa microcristalina, goma de tragacanto o gelatina; un excipiente, como por ejemplo almidón o lactosa, un agente disgregante, como ácido algínico, Primogel, o almidón de maíz; un lubricante como estearato de magnesio o Sterotes; un agente deslizante como dióxido de silicio coloidal; un agente edulcorante como sacarosa o sacarina; o un agente aromatizante como pipermitn, salicilato de metilo o aroma de naranja. Cuando la forma de dosis unitaria es una cápsula puede contener, además del material del tipo mencionado, un vehículo líquido como por ejemplo un aceite graso. Asimismo, las formas de dosis unitarias pueden contener otros materiales diversos que modifican la forma física de la unidad de dosis, como por ejemplo, recubrimientos de azúcar, shellac y otros agentes entéricos.
Se puede administrar el compuesto como componente de un elixir, una suspensión, un jarabe, una oblea, un chicle o similar. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como agente edulcorante y determinados conservantes, tintes y colorantes y aromatizantes.
El compuesto o derivados o sales farmacéuticamente aceptables del mismo puede mezclarse también con otros materiales activos que no influyan negativamente en la acción deseada, o con materiales que suplementen la acción deseada, tales como antibióticos, antifúngicos, antiinflamatorios, inhibidores de proteasa, u otros agentes antivarles de nucleósido o no nucleósido. Las soluciones o suspensiones utilizadas para administración parenteral, intradérmica, subcutánea o tópica pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril como agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilen glicoles, glicerina, propilen glicol u otros disolventes sintéticos; agentes antibacterianos como alcohol bencílico o metil parabenos; antioxidantes como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes quelantes como ácido etilendiaminotetraacético; tampones como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad como cloruro sódico o dextrosa. El preparado parenteral puede encerrarse en ampollas, jeringuillas desechables o viales de dosis múltiple hechos de vidrio o plástico.
Si se administra por vía intravenosa, los vehículos preferibles son solución salina fisiológica o solución salina tamponada con fosfato (PBS).
En un modo de realización preferible, se preparan los compuestos activos con vehículos que protegerán el compuesto contra la rápida eliminación del organismo, como por ejemplo una formulación de liberación controlada, incluyendo implantes y sistemas de administración microencapsulada. Se pueden utilizar polímeros biocompatibles, biodegradables, como acetato de etilen vinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliacético. Los métodos de preparación de dichas formulaciones serán evidentes para las personas especializadas en este campo. Los materiales se pueden obtener también en el comercio, distribuidos por Alza Corporation.
\newpage
Las suspensiones liposómicas (incluyendo liposomas dirigidos a células infectadas con anticuerpos monoclonales para antígenos virales) también son preferibles como vehículos farmacéuticamente aceptables. Se pueden preparar con arreglo a los métodos conocidos entre las personas especializadas en este campo, como por ejemplo, tal como se describe en la patente EE.UU. Nº 4.522.811. Por ejemplo, se pueden preparar formulaciones de liposoma disolviendo lípido(s) apropiado(s) (como estearoíl fosfatidil etanolamina, estearoíl fosfatidil colina, aracadoíl fosfatidil colina y colesterol) en un disolvente inorgánico que se evapora después, dejando detrás una película fina de lípido deshidratado sobre la superficie del contenedor. A continuación, se introduce una solución acuosa del compuesto activo o sus derivados monofosfato, difosfato y/o trifosfato en el contenedor. A continuación, se agita el contenedor manualmente para liberar el material de lípido de las paredes del contenedor y dispersar los agregados de lípidos, formando así la suspensión liposómica.

Claims (17)

1. Uso de una cantidad efectiva de un \beta-L-2'-desoxinucleósido de fórmula:
14
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección por virus de hepatitis B en un huésped.
2. Uso de una cantidad efectiva de \beta-L-2'-desoxinucleósido de fórmula:
15
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección por virus de la hepatitis B en un huésped.
3. Uso de una cantidad efectiva de una combinación de los siguientes \beta-L-2'-desoxinucleósidos:
16
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección por virus de hepatitis B en un huésped.
4. Uso de una cantidad efectiva de un \beta-L-2'-desoxinucleósido de fórmula:
17
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación o de manera alterna con una cantidad efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste en \beta-L-2-hidroximetil-5-(citosin-1-il)-1,3-oxatiolano (3TC), cis-2-hidroximetil-5-(5-fluorocitosin-1-il)-1,3-oxatiolano (FTC), \beta-L-2'-fluoro-5-metil-arabinofuranolil-uridina (L-FMAU), \beta-D-2,6-diaminopurina dioxolano (DAPD), famciclovir, penciclovir, 2-amino-1,9-dihidro-9-[4-hidroxi-3-(hidroximetil)-2-metilenciclopentil]-6H-purin-6-ona (entecavir, BMS-200475), 9-[2-fosfono-metoxi)etil]adenina
(PMEA, adefovir, dipivoxil); lobucavir, ganciclovir y ribavirin;
en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección por virus de hepatitis B en un huésped.
5. Uso de una cantidad efectiva de un \beta-L-2'-desoxinucleósido de fórmula:
18
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en combinación o en alternancia con una cantidad efectiva de un compuesto seleccionado del grupo que consiste en \beta-L-2-hidroximetil-5-(citosin-1-il)-1,3-oxatiolano (3TC), cis-2-hidroximetil-5-(5-fluorocitosin-1-il)-1,3-oxatiolano (FTC), \beta-L-2'-fluoro-5-metil-arabinofuranolil-uridina (L-FMAU), \beta-D-2,6-diaminopurina dioxolano (DAPD), famciclovir, penciclovir, 2-amino-1,9-dihidro-9-[4-hidroxi-3-(hidroxime-
til)-2-metilenciclopentil]-6H-purin-6-ona (entecavir, BMS-200475), 9-[2-(fosfono-metoxi)etil]adenina (PMEA, adefovir, dipivoxil); lobucavir, ganciclovir y ribavirina;
en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una infección por virus de la hepatitis B en un huésped.
6. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el \beta-L-2'-desoxinucleósido está en al menos un 95% en su forma enantiómera designada.
7. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-6, en el que el \beta-L-2'-desoxinucleósido se administra en un vehículo farmacéuticamente aceptable.
8. El uso de la reivindicación 7, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración oral.
9. El uso de la reivindicación 7, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración intravenosa.
10. El uso de la reivindicación 7, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración parenteral.
11. El uso de la reivindicación 7, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración intradérmica.
12. El uso de la reivindicación 7, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración subcutánea.
13. El uso de la reivindicación 7, en el que el vehículo farmacéuticamente aceptable es adecuado para administración tópica.
14. El uso de la reivindicaicón 7, en el que el \beta-L-2'-desoxinucleósido está en forma de una dosis unitaria.
15. El uso de la reivindicación 14, en el que la dosis unitaria contiene de 10 a 1500 mg del \beta-L-2'-desoxinucleósido.
16. El uso de la reivindicación 14 ó 15, en el que la dosis unitaria es un comprimido o una cápsula.
17. El uso de cualquiera de las reivindicaciones 1-16 en el que el huésped es un ser humano.
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