ES2220704T3 - Utilizacion de interferon alfa en el tratamiento del sarcoma de ewing. - Google Patents

Abstract

Utilización del interferón alfa para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del sarcoma de Ewing.

Description

Utilización de interferón \alpha en el tratamiento del sarcoma de Ewing.

La invención se refiere a la utilización del interferón-alfa para el tratamiento del sarcoma de Ewing en mamíferos.

La familia de tumores de Ewing representa el segundo tipo más común de tumores de hueso observado en niños, después del osteosarcoma. La familia incluye el sarcoma de Ewing (EWS o tumor óseo de Ewing), tumor extraóseo de Ewing (EOE), neuroectodérmico primitivo (PNET o neuroepitelioma periférico) y tumor de Askin (PNET de la pared de vías respiratorias). Estos tumores son enfermedades raras en las que las células malignas se encuentran en el hueso y tejidos blandos, y protocolos recientes utilizan el mismo tratamiento para esta familia de tumores. EWS se observa, principalmente, en adolescentes y adultos jóvenes, y los lugares más comunes para la lesión primaria son los huesos pélvicos, fémur, húmero y costillas. La incidencia del sarcoma de Ewing se estima en aproximadamente un 60% de los tumores de la familia de Ewing.

Los estudios que utilizan marcadores inmunohistoquímicos, citogenéticos, genéticos moleculares y cultivo de tejidos indican que estos tumores derivan todos de la misma célula madre primordial. Estudios citogenéticos de la familia de tumores de Ewing han identificado una alteración consistente en el locus EWS en el cromosoma 22 banda q12 que puede implicar otros cromosomas, incluyendo el 11 ó 21. De manera característica, el amino terminal del gen de EWS se yuxtapone con el carboxi terminal de otro cromosoma. En la mayoría de casos (90%), esta translocación cromosómica dirige la fusión del extremo 5' del gen de EWS, codificante de una proteína capaz de participar en el metabolismo del RNA, con el extremo 3' del gen Fli-1, un miembro de la familia de factores de transcripción Ets localizados en el cromosoma 11 banda q24 (Delattre et al., Nature 359:162-165 (1992)). Se pueden generar varios genes de fusión de acuerdo con los puntos de escisión (entre los exones 7 y 11 de EWS y exones 3 a 9 de Fli-1).

La fusión más frecuente, EWS-Fli-1 tipo I, funde el exón 7 de EWS con el exón 6 de Fli-1 y representa un 50% de los casos. La fusión de tipo II (25% de los casos) liga el exón 7 de EWS con el exón 5 de Fli-1. Además de estos dos tipos de fusión principales, se han descrito aproximadamente diez combinaciones más.

En determinados casos de tumores de Ewing, el EWS no se funde con Fli-1 sino a otro miembro de la familia Ets, p.e., FEV. Otros miembros de la familia Ets que pueden combinarse con el gen EWS son ERG (localizado en el cromosoma 21), ETV (localizado en el cromosoma 7) y E_{1}AF (localizado en el cromosoma 17), los cuales resultan en las siguientes translocaciones: t(21;22), t(7;22) y t(17;22) respectivamente.

Estas alteraciones genéticas tienen una consecuencia bioquímica constante: las células de Ewing expresan siempre una proteína quimérica que lleva la región N-terminal del EWS fusionado a un dominio de unión del DNA de la familia de proteínas Ets. Esta constancia sugiere que esta fusión ejerce un papel central en el desarrollo del tumor de Ewing.

En el sarcoma de Ewing, se ha demostrado experimentalmente el papel de la proteína de fusión EWS/Fli-1. Esta proteína puede transformar fibroblastos de ratones y estas células son capaces de generar tumores en ratones desnudos.

De los experimentos in vitro, se demostró que la proteína de fusión EWS/Fli-1 era capaz de activar cierta transcripción del gen más eficientemente que Fli-1. Este hecho sugiere que la proteína de fusión EWS/Fli-1 ejerce su acción oncogénica a través de la activación anormal de determinados genes celulares.

Se demostró también que la proteína PU-1, también procedente de la familia Ets, está implicada en el control de la expresión del gen regulado por interferón y citoquina (Pérez et al., Mol. Cell Biol. 14:5023-5031 (1994)).

Los factores de pronóstico importantes para la familia de tumores de Ewing incluyen el punto y volumen del tumor primario y si la enfermedad está metastatizada. El tamaño del tumor se piensa que es también una variable importante. Con el tratamiento actual, los estudios sugieren que el 50-70% de pacientes sin enfermedad metastatizada tienen una supervivencia sin enfermedad durante más tiempo, comparado con solo el 20%-30% de pacientes que presentan enfermedad metastatizada. De esta manera, permanece una necesidad importante en la materia de un procedimiento efectivo para el tratamiento de los tumores de la familia de Ewing, en concreto el sarcoma de Ewing.

De acuerdo con esto, la presente invención proporciona medios efectivos para el tratamiento del sarcoma de Ewing en un mamífero. Otras características y ventajas de la presente invención serán indicadas en la descripción detallada de las realizaciones preferidas que siguen, y en parte serán evidentes a partir de la descripción o se pueden aprender poniendo en práctica la invención. Estas ventajas de la invención serán realizadas y conseguidas mediante las utilizaciones indicadas de manera particular en la descripción escrita y reivindicaciones del presente del documento.

Se ha descubierto que el interferón-alfa (IFN-\alpha) tiene una acción antiproliferativa en el sarcoma de Ewing. Por lo tanto, una realización de la presente invención está dirigida a la utilización del IFN-\alpha para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del sarcoma de Ewing. El medicamento es adecuado para la administración a un mamífero, para el tratamiento del sarcoma de Ewing, y comprende IFN-\alpha en una cantidad terapéuticamente efectiva junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Se debe entender que tanto la descripción general precedente como la siguiente descripción detallada son solo ejemplificativas y explicativas y están pensadas para que proporcionen una explicación adicional de la invención según se reivindica.

A no ser que se indique de otra manera, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen la intención de tener el mismo significado que el comúnmente entendido por un experto ordinario de la materia.

Las células individuales del sarcoma de Ewing y EOE contienen un núcleo de redondo a oval con una cromatina fina dispersa sin nucleolo. Ocasionalmente, las células más pequeñas, los núcleos más hipercromáticos (y probablemente degenerativos) están presentes dando un patrón de "célula luminosa-célula oscura". El citoplasma varía en cantidad, pero es evidente en el caso clásico y contiene glicógeno, el cual se puede destacar con un colorante periódico de ácido Schiff (PAS). Las células tumorales están fuertemente empaquetadas y crecen con un patrón difuso sin evidenciar una organización estructural.

La apariencia histológica del PNET difiere algo del sarcoma de Ewing y del EOE. Estos tumores están compuestos alrededor, típicamente, de células hipercromáticas ovoides con un citoplasma mínimo. Las células tumorales se disponen, típicamente, en nidos y trabéculas con formación variable de rosetas. Las rosetas pueden tener un lúmen central, pero se definen frecuentemente como enfermas, compuestas de células tumorales dispuestas alrededor de un espacio vacío. El patrón de crecimiento lobular clásico se aprecia mejor a una fuerza menor y difiere del crecimiento difuso típico visto en EOE. Ocasionalmente, los grupos de células uniformes, redondas con cromatina dispersa que se parecen a aquellas en el EOE se ven intercaladas en otra PNET típica. Este solapamiento de características da lugar a la idea de que estos tumores son, de hecho, el mismo tumor con un espectro de diferenciación.

Tal y como se utiliza aquí, el término "mamífero" indica cualquier especie de mamífero e incluye, pero no se limita a, conejos, ratones, perros, gatos, primates y humanos, preferiblemente humanos. Tal y como se utiliza aquí, el término "tratamiento" se refiere a cualquier procedimiento, acción, aplicación, terapia o similares, en donde un mamífero, incluyendo el ser humano, es sometido a una ayuda médica con el objeto de mejorar el estado del mamífero, directamente o indirectamente. En el contexto del crecimiento tumoral o crecimiento de células tumorales, "tratamiento" incluye, pero no se limita a, inhibición y prevención.

Tal y como se utiliza aquí, el término "inhibición" se puede calcular mediante la aparición retrasada de los tumores primarios o secundarios, desarrollo lento de los tumores primario y secundario, incidencia disminuida de los tumores primario y secundario, severidad de los efectos secundarios de la enfermedad relentizados o disminuidos, crecimiento tumoral retenido y regresión de los tumores, entre otros. En este extremo, la inhibición completa se refiere aquí a la prevención.

Tal y como se utiliza aquí el término "prevención" significa ningún tumor o crecimiento de una célula tumoral si no ninguna y no más crecimiento de un tumor o de una célula tumoral si hubiera estado creciendo.

Tal y como se utiliza en la presente invención, el término "tratamiento terapéutico" indica el tratamiento en un sujeto después de contraer una enfermedad e incluye la terapia profiláctica.

Tal y como se utiliza aquí, el término "cantidad efectiva" significa una cantidad efectiva para llevar a cabo la función especificada. Una "cantidad terapéuticamente efectiva", en referencia al tratamiento de un tumor, se refiere a una cantidad suficiente para llegar a uno o más de los siguientes resultados: reducir el tamaño del tumor, inhibir la metastásis del tumor, inhibir el crecimiento del tumor, prevenir el crecimiento del tumor, aliviar el malestar debido al tumor o prolongar la vida de un paciente afectado por el tumor.

Tal y como se utiliza aquí, el término "interferón" significa la familia de proteínas citoquinas y glicoproteínas altamente homólogas que son conocidas por tener diferentes actividades biológicas, como la actividad antivírica, antiproliferativa e inmunomoduladora, por lo menos en la especie de animal del cual se derivan dichas sustancias.

Actualmente, los interferones se clasifican en cinco categorías diferentes: IFN alfa (IFN de leucocito), IFN beta (IFN de fibroblasto), IFN gamma (IFN inmune), IFN omega e IFN tau (factor trofoblástico). Para una revisión de los detalles y relaciones de homología de las proteínas IFN conocidas, véase, p.e., Viscomi, Biotherapy 10:59-86 (1997).

Tal y como se utilizan aquí, los términos "interferón-alfa" y "IFN-\alpha" incluyen todas las proteínas, polipéptidos y péptidos que son IFN-\alpha naturales o recombinantes o derivados de los mismos, y que se caracterizan por la actividad biológica de estos IFN-\alpha contra enfermedades malignas, no malignas o víricas. Estos incluyen los compuestos similares a IFN-\alpha procedentes de una variedad de fuentes tales como los IFN-\alpha naturales (humanos y no humanos), IFN-\alpha recombinantes y sintéticos o semisintéticos.

El IFN-\alpha es en sí mismo una mezcla de proteínas con una homología muy extensa codificado por una familia de varios genes estructurales diferentes. Estos subtipos tienen un espectro funcional idéntico pero sus actividades específicas son diferentes. Se han identificado más de 20 subtipos diferentes de IFN-\alpha que tienen secuencias de aminoácidos diferentes se han identificado mediante aislamiento y secuenciación del DNA que codifica estos péptidos, incluyendo el IFN-\alpha2a, 2b y 2c, por ejemplo. La mayoría de especies tienen una secuencia de un péptido señal de 23 residuos de aminoácidos y una secuencia de aminoácidos madura de 166 residuos de aminoácidos (Goeddel, D. V. et al., Nature, 290:20-26 (1981); Weissman, C. And Weber, H., Prog, Nuc. Acid Res. Mol. Biol. 33:251-300 (1986); Zoon, K. C., Interferon 9:1-12 (1987)). La secuencia de aminoácidos y la preparación recombinante de IFN-\alpha-2a e IFN-\alpha-2b se describen, por ejemplo, en la patente europea con número de publicación 0 043 980 y en la patente europea con número de publicación 0 321 134, respectivamente.

Tal y como se utiliza aquí, el término "interferón-alfa recombinante" se refiere al IFN-\alpha producido por técnicas de ADN recombinantes, es decir, producido a partir de células transformadas con una construcción de DNA exógeno que codifica el polipéptido IFN-\alpha deseado.

Tal y como se utiliza aquí, el término "Unidad Internacional" significa la unidad de potencia establecida internacionalmente de medición del IFN según se define en la International Conference for Unification of Formulae y que es reconocida por los expertos en la materia.

Tal y como se utiliza aquí, el término "vehículo farmacéuticamente aceptable" se refiere a un diluyente, adyuvante, excipiente o vehículo con el que se administra el terapéutico. Esto incluye cualquiera o todos los disolventes, medios de dispersión, disoluciones acuosas, revestimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes de retraso isotónicos y de absorción, y similares. La utilización de dichos medios y agentes para sustancias farmacéuticas activas es bien conocida en la materia. Excepto en la medida en que cualquier medio o agente convencional es incompatible con el ingrediente activo, se contempla la utilización del mismo en las composiciones farmacéuticas. Se dice que una composición es "farmacológicamente aceptable" si su administración puede ser tolerada por un paciente receptor.

Tal y como se utiliza aquí, "simultáneo o secuencial" se entiende que el IFN-\alpha se coadministra con otra citoquina o agente quimioterapéutico o junto con radioterapia o cirugía o donde la administración de IFN-\alpha va precedida o seguida de un tratamiento sin IFN-\alpha. Cuando se da una terapia "secuencial", la diferencia de tiempo entre la administración de IFN-\alpha y el tratamiento sin IFN-\alpha puede ser de minutos, horas, días, semanas o meses dependiendo del tumor o sarcoma a ser tratado, siendo tratado el mamífero y la efectividad del tratamiento global.

El término "sustancialmente simultáneo" significa "aproximadamente a la vez" siendo la única limitación que ambas sustancias deben estar presentes juntas en el lugar del tumor.

De acuerdo con la presente invención, se ha descubierto que el IFN-\alpha puede inhibir y/o prevenir de manera significativa el crecimiento tumoral en el sarcoma de Ewing. Por lo tanto, en un aspecto de la invención se proporciona la utilización de IFN-\alpha para la preparación de un medicamento destinado a ser utilizado en un procedimiento de tratamiento del sarcoma de Ewing en un mamífero, que comprende administrar al mamífero, que necesita dicho tratamiento, una cantidad terapéuticamente efectiva de IFN-\alpha.

El IFN-\alpha fue de las primeras citoquinas en ser producidas mediante tecnología del DNA recombinante y sus propiedades, naturaleza química y procedimientos de preparación han sido ampliamente estudiados y documentados. En general, el IFN-\alpha se puede preparar u obtener a partir de una diversidad de fuentes, síntesis bioquímica y purificación y técnicas de DNA recombinantes, tales como las que utilizan genes sintéticos expresados en E. coli (véase la patente US Nº 5.710.027). Véase también Pestka, "Interferon alpha" en Human Cytokines, Blackwell Scientific Publications 1-16 (1992).

En una realización preferida, el IFN-\alpha es un IFN-\alpha recombinante. Por ejemplo, se puede utilizar IFN-\alpha 1a, 2a recombinantes (comercializados como Laroferon® o Roferon A® por Hoffman La Roche o como Inter-A-2® por Bio Sidus) o 2b (comercializada con el nombre de INTRON A®, Viraferon® por Schering Plogh o como Bioferon® por Bio Sidus). Más preferiblemente, se utiliza el IFN-\alpha2a recombinante.

Se puede utilizar, también, en la presente invención un extracto natural de IFN-\alpha. El IFN-\alpha humano natural se ha purificado de varias fuentes celulares que incluyen los leucocitos aislados de sangre total, fibroblastos neonatales, linfoblastoides y varias líneas celulares leucémicas. El IFN-\alpha también puede ser un extracto de mamífero como un IFN-\alpha de rumiante o bovino. Por lo tanto, el IFN-\alpha utilizado puede ser "homólogo" al mamífero a ser tratado que significa que tiene el mismo origen que la especie de mamífero a ser tratada (p.e. IFN-\alpha humana para el tratamiento de un humano o IFN-\alpha murino para el tratamiento de un ratón) o puede ser "heterólogo" para el mamífero a ser tratado que significa que el origen de la especie de IFN-\alpha y la especie de mamífero son diferentes (p.e. IFN-\alpha humano para el tratamiento de un ratón o IFN-\alpha murino para el tratamiento de un humano).

El IFN-\alpha utilizado en la invención incluye, también, por ejemplo, secuencias conocidas y aquellas variantes cuyos genes se caracterizan por un grado de homología elevado con la secuencia conocida y que codifican un IFN-\alpha biológicamente activo y compuestos que tienen sustancialmente la misma actividad como formas conocidas del IFN-\alpha. El IFN-\alpha también puede contener una inserción o múltiples inserciones, deleciones y/o adiciones a la secuencia que se encuentra de manera natural y se pueden fragmentar a una parte que lleve el sitio activo de IFN-\alpha.

En general, cualquier molécula de IFN-\alpha se puede utilizar en la presente invención y se incluye en la expresión "IFN-\alpha" con la condición de que todas estas moléculas tengan el efecto de prevenir o reducir el tamaño de los tumores de la familia de Ewing in vitro, en un animal de ensayo de laboratorio in vivo o en un mamífero a ser tratado.

La presente invención se ejemplifica por el ejemplo del IFN-\alpha contra los tumores del sarcoma de Ewing en ratones. Se debe entender, sin embargo, que la presente invención se extiende a los efectos in vivo del IFN-\alpha en todos los mamíferos tales como los humanos. En una realización preferida, el mamífero es un humano. Ejemplos de mamíferos no humanos incluyen los animales de ganado como vacas, cerdos, ovejas, caballos, cabras, animales de compañía como gatos y perros y animales de ensayo de laboratorio como ratones, conejos, cobayas o hámsters.

De acuerdo con la presente utilización, el IFN-\alpha se puede administrar mediante la utilización de cualquier ruta adecuada tal como la oral o parenteral, es decir, cualquier ruta diferente del canal alimenticio. En una realización preferida, la administración parenteral significa intravenosa (dentro de o en una vena), intramuscular (dentro del músculo), subcutánea (introducida bajo la piel) o percutánea (efectuada a través de la piel). Es preferida una inyección sistémica en donde el IFN-\alpha entra en el torrente sanguíneo, pero también se puede utilizar, de manera ventajosa, una inyección en el tumor en sí mismo.

La administración puede ser como dosis única o dosis repetidas una o más veces después de un determinado periodo de tiempo. Cuando se administra el IFN-\alpha mediante inyección, la administración puede ser mediante inyecciones continuas o mediante bolos sencillo o múltiples. Los modos de administración y posología pueden ser determinados por los expertos en la materia de acuerdo con el criterio considerado, de manera general, para el tratamiento terapéutico adaptado a un paciente. Por lo tanto, la dosificación del agente administrado variará dependiendo de factores tales como la edad del paciente, peso, altura, sexo, condición médica general, historial médico previo, etc.

La cantidad efectiva de IFN-\alpha dependerá del mamífero y de la condición a ser tratada. En general, es deseable proporcionar al receptor una dosificación que esté en el rango de aproximadamente 1 x 10^{6} a aproximadamente 90 x 10^{6} unidades internacionales (UI), aunque se puede administrar una dosis más baja o más alta. Preferiblemente, se puede administrar una dosis en el rango de aproximadamente 1 x 10^{6} a aproximadamente 45 x 10^{6} UI. Los practicantes expertos ajustarán el tiempo y dosificación para ajustar los síntomas clínicos de los pacientes. Tal conocimiento se ha acumulado durante décadas y está publicado en la literatura. La composición del IFN-\alpha se puede administrar solo o formulado con vehículos farmacéuticamente aceptables, en dosis únicas o sencillas. Por lo tanto, en otra realización el IFN-\alpha se administra como parte de una composición farmacéutica que comprende un vehículo farmacéuticamente aceptable.

Vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, diluyentes sólidos o rellenos inertes, disoluciones acuosas estériles y varios disolventes orgánicos no tóxicos. Los vehículos farmacéuticamente aceptables deberían ser inertes. Además, el vehículo no debería reaccionar con o reducir de otra manera la efectividad de los ingredientes activos, y más particularmente, no debería de disminuir de manera significativa la efectividad o estabilidad del IFN-\alpha. Los vehículos farmacéuticamente aceptables incluyen agua, etanol, polietilenglicol, aceite mineral, petrolatum, propilenglicol, lanolina y agentes similares.

Las formas farmacéuticas adecuadas para la utilización inyectable incluyen disoluciones acuosas estériles (cuando sean solubles en agua) o dispersiones y polvos estériles para la preparación extemporánea de disoluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debería de ser estéril y debería ser fluida con el fin que exista una fácil jeringabilidad. Debería de ser también estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y ser conservado contra la acción contaminante de microorganismos tales como bacterias y hongos.

En otra realización, la composición de IFN-\alpha se administra solo o en combinación con otro agente farmacéutico, es decir, "terapia combinada". El IFN-\alpha se puede administrar con otras citoquinas y/o agentes quimioterapéuticos y/o un protocolo radioterapéutico y/o con cirugía. Dichas citoquinas incluyen, pero no se limitan a, Doxorubicina, Actimomicina, Ciclofosfamida (VadriaC), Etoposida, Ifosfamida y Vincristina. Es particularmente preferida la Ifosfamida.

Las cantidades de otras citoquinas serán similares a las cantidades efectivas de IFN-\alpha. Las cantidades efectivas de agentes quimioterapéuticos variarán dependiendo del agente y son conocidos en la materia. Las composiciones objeto se puede administrar ya sea junto con las modalidades de segundo tratamiento o separadamente, p.e. a tiempos diferentes o en jeringas o cápsulas diferentes.

La cirugía se puede utilizar en determinados casos para intentar eliminar el cáncer y algo del tejido que lo rodea. La cirugía también se puede utilizar para eliminar cualquier tumor que quede después de quimioterapia o terapia de radiación. En una realización preferida, la composición del IFN-\alpha se administra en combinación con terapia quirúrgica.

Otro aspecto adicional comprende la administración sustancialmente simultánea o secuencial de una o más citoquinas, derivadas de las mismas y/o uno o más agentes quimioterapéuticos y/o el tratamiento simultáneo o secuencial mediante radioterapia. De acuerdo con esto, el IFN-\alpha se puede coadministrar con otra citoquina o agente quimioterapéutico o junto con radioterapia o cuando la administración de IFN-\alpha está precedido o seguido por un tratamiento sin IFN-\alpha. Cuando tiene lugar la terapia "secuencial", la diferencia de tiempo entre la administración de IFN-\alpha y el tratamiento sin IFN-\alpha pueden ser minutos, horas, días, semanas o meses dependiendo del sarcoma a ser tratado, del mamífero que es tratado y de la efectividad del tratamiento en conjunto.

La presente invención se refiere, además, a la utilización del IFN-\alpha o fragmento activo, mutante o derivado del mismo solo o junto con una o más citoquinas y/o agentes quimioterapéuticos en la fabricación de un medicamento destinado al tratamiento de pacientes que sufren el sarcoma de Ewing.

Un procedimiento de preparación de la composición farmacéutica anteriormente mencionada se caracteriza por mezclar, de acuerdo con los procedimientos conocidos, los ingredientes activos con excipientes aceptables que son farmacéuticamente aceptables.

En todos los casos anteriores, la presente invención también abarca la utilización de los derivados de IFN-\alpha y los derivados de otras citoquinas y/o agentes quimioterapéuticos. Por "derivado" se entiende forma recombinante, química o sintética de IFN-\alpha u otra citoquina o agente quimioterapéutico y/o cualquier alteración como la adición, sustitución y/o supresión del componente de la secuencia de aminoácidos de la molécula, con la condición de que el derivado tenga la capacidad de prevenir y/o inhibir el sarcoma de Ewing.

En todos los casos anteriores, la presente invención también se amplía a la utilización reivindicada del IFN-\alpha y/o sus derivados solos o en combinación con una o más citoquinas y/o derivados y/o agentes quimioterapéuticos y uno o más vehículos y/o diluyentes farmacéuticamente aceptables.

Teniendo ahora descrita la invención, la misma será más fácilmente entendida mediante referencia a los siguientes ejemplos que se proporcionan con el fin de ilustrar, y no tienen la intención de limitar la presente invención, a menos que se especifique.

Leyendas de las figuras

La Figura 1 representa el efecto del IFN-\alpha sobre el desarrollo de un tumor de Ewing cuando se genera por una inyección subcutánea de células EW-7 a ratones. Los volúmenes de tumor relativos (RTV) se miden en una manera dependiente de tiempo.

La figura 2 muestra una línea de la velocidad de crecimiento de tumores de Ewing desarrollados en ratones desnudos después de una inyección de IFN-\alpha. Se representa el valor promedio de los volúmenes de tumor relativo (RTV) de 12 ratones.

La figura 3 representa el efecto del IFN-\alpha sobre los tumores de Ewing en ratones desnudos. Los volúmenes tumorales se determinan dos veces por semana para cada grupo, y se determinó la media del volumen.

La figura 4 representa el efecto del IFN-\alpha (100 000 U/ratón/5 veces por semana, intratumoral) e Ifosfamida (60 mg/kg (d1 a d3 : IP)) en el desarrollo del sarcoma de Ewing en ratones desnudos. Los volúmenes tumorales relativos (RTV) se miden de una manera dependiente del tiempo.

Ejemplos Ejemplo 1 Inyección de células malignas

Los tumores sólidos se generaron mediante inyección subcutánea de 20 x 10^{6} células EW7 (línea celular derivada de un tumor de omoplato) a partir de un tumor primario antes de quimioterapia (exón 7 de EW/exón 6 de Fli) en ratones desnudos de 6 semanas de edad.

Después de diez días, se constituyeron dos grupos de cinco ratones cada uno, un grupo de ratones control y un grupo de ratones receptores de IFN-\alpha (r-hu-a2a de Hoffman LaRoche).

Se llevaron a cabo las inyecciones en el tumor en sí mismo con 5x10^{5} unidades de IFN por ratón, tres veces de manera semanal. Se continuó el tratamiento durante un periodo de cinco semanas durante el cual se determinaron los volúmenes tumorales cada tres días.

Los volúmenes tumorales relativos (RTV) demuestran un crecimiento tumoral más lento después de la inyección de IFN-\alpha. La figura 1 construida a partir de los datos promedio de RTV muestra un descenso profundo de las velocidades de crecimiento después de la inyección con IFN-\alpha.

Estos resultados a partir de tumores establecidos en la fase de crecimiento experimental permiten confirmar los resultados in vitro con líneas celulares.

Ejemplo 2 Injerto de un tumor sólido

Se llevó a cabo un segundo experimento in vivo en ratones desnudos de ocho semanas de edad. Se injertó en ratones desnudos una muestra de tumor de 5 mm de diámetro a partir de un tumor sólido desarrollado en un ratón desnudo después de inyecciones de 20 x 10^{6} células EW7, conservadas mediante transferencia in vivo.

Tres días después del injerto, se constituyeron dos grupos de 12 ratones cada uno, un grupo control que recibió inyecciones de una disolución tampón de fosfato (PBS) y un grupo que recibió inyecciones de IFN-\alpha. Se inyectó en los sitios tumorales 1 x 10^{6} unidades de IFN-\alpha 5 días por semana (Lunes a Viernes) durante 1 mes.

Las curvas de crecimiento tumoral se determinaron después de medir los diámetros de tumor insertados en cada ratón dos veces por semana (Figura 2).

La Figura 2 muestra las líneas obtenidas a partir de los promedios de RTV para cada grupo de 12 ratones. Se observó una progresión casi lineal del desarrollo del tumor en ratones control, mientras que la proliferación del tumor fue prácticamente nula en los injertos que recibieron IFN-\alpha. Este resultado se confirmó mediante el cálculo de la media para cada grupo (Figura 3).

Cabe destacar que un mes después de la interrupción de la inyección con IFN, el 40% de los ratones que habían recibido IFN-\alpha no desarrollaron tumores.

Ejemplo 3 Combinación de IFN-\alpha/Ifosfamida

La Figura 4 representa el efecto del IFN-\alpha en tumores de Ewing establecidos. Este experimento se llevó a cabo in vivo en ratones desnudos de 8 semanas de edad.

Se insertaron en ratones desnudos una muestra de un tumor de 5 mm de diámetro para un tumor sólido desarrollado después de una inyección de 20 x 106 células EW-7 y se mantuvieron mediante transferencia in vivo. Después de 15 días, se constituyeron cuatro grupos de 8 ratones cada uno: un grupo control, un grupo de ratones que recibieron IFN-\alpha (rHu-IFN-\alpha2b de Biosidus), un tercer grupo que recibió ifosfamida y un cuarto grupo que recibió ifosfamida más IFN-\alpha.

Al segundo grupo se le inyectó de manera intraperitoneal ifosfamida (60 mg/kg) durante tres días consecutivos. Al tercer grupo se le inyectó intratumoralmente el interferón alfa (1 x 10^{5} unidades) 5 días a la semana (Lunes a Viernes) durante tres semanas. (Interferón utilizado: alfa 2 b Biosidus).

Al cuarto grupo se le inyectó de manera intraperitoneal ifosfamida, siguiendo el protocolo utilizado con el segundo grupo. Al segundo día después de la administración de ifosfamida, se le inyectó a los ratones IFN alfa intratumoralmente y se trataron, a continuación, de acuerdo con el protocolo aplicado al tercer grupo.

Las curvas tumorales se determinaron después de medir el diámetro del tumor insertado en cada ratón, dos veces por semana.

La Figura 4 muestra las líneas obtenidas del promedio de RTV (Volúmenes tumorales relativos) para cada grupo de 8 ratones. Se observó una progresión casi lineal del desarrollo del tumor en ratones control. RTV demostró un crecimiento tumoral más lento en ratones tratados con IFN-\alpha o ifosfamida. Se observó una inhibición del crecimiento tumoral más fuerte bajo tratamiento combinado de ifosfamida/IFN-\alpha.

En vista de la descripción anterior junto con los Ejemplos, aquellos expertos en la materia serán capaces de practicar esta invención de diferentes maneras y realizaciones sin alejarse del ámbito de la invención según se define en las reivindicaciones adjuntas.

Claims (10)

1. Utilización del interferón alfa para la preparación de un medicamento destinado al tratamiento del sarcoma de Ewing.

2. Utilización según la reivindicación 1, en donde dicho interferón-alfa es interferón-alfa-2a.

3. Utilización según la reivindicación 1, en donde dicho interferón-alfa es el interferón-alfa-2b.

4. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en donde dicho interferón-alfa es el interferón-alfa recombinante.

5. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde dicho interferón-alfa es para ser administrado de manera oral o parenteral.

6. Utilización según la reivindicación 5, en donde dicha administración parenteral es mediante administración intramuscular, intravenosa, subcutánea o percutánea.

7. Utilización según la reivindicación 5, en donde dicho interferón-alfa es para ser administrado por inyección sistemática o directa al tumor.

8. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde dicho interferón-alfa es para ser administrado en una cantidad efectiva de aproximadamente 1 a aproximadamente 90 millones de unidades internacionales, preferiblemente de aproximadamente 1 a aproximadamente 45 millones de unidades internacionales.

9. Utilización según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 8, en donde dicho interferón-alfa es para ser administrado de manera simultánea o secuencial, junto con uno o más agentes utilizados en el tratamiento del sarcoma de Ewing.

10. Utilización según la reivindicación 9, en donde dicho interferón-alfa es para ser administrado de manera simultánea o secuencial, junto con ifosfamida.