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EP2828297A1 - Oligosaccharides fonctionnalisés - Google Patents

Oligosaccharides fonctionnalisés

Info

Publication number
EP2828297A1
EP2828297A1 EP12726819.1A EP12726819A EP2828297A1 EP 2828297 A1 EP2828297 A1 EP 2828297A1 EP 12726819 A EP12726819 A EP 12726819A EP 2828297 A1 EP2828297 A1 EP 2828297A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
sodium
functionalized
acid
oligosaccharide
aspartate
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP12726819.1A
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Richard Charvet
Rémi SOULA
Olivier Soula
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Adocia SAS
Original Assignee
Adocia SAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from FR1154039A external-priority patent/FR2975099A1/fr
Priority claimed from FR1158885A external-priority patent/FR2980796B1/fr
Priority claimed from US13/287,793 external-priority patent/US20120094902A1/en
Application filed by Adocia SAS filed Critical Adocia SAS
Publication of EP2828297A1 publication Critical patent/EP2828297A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
    • C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
    • C08B37/0021—Dextran, i.e. (alpha-1,4)-D-glucan; Derivatives thereof, e.g. Sephadex, i.e. crosslinked dextran
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin

Definitions

  • the present invention relates to anionic oligosaccharides for therapeutic and / or prophylactic use, for the administration of active principle (s) to humans or animals.
  • oligosaccharides according to the invention having carboxyl groups have, because of their structure and their biocompatibility, a certain interest for the pharmaceutical industry, especially for the stabilization of active principles, for example protein,
  • the oligosaccharides according to the invention retain the property of creating interactions with active principles, for example proteins.
  • the present invention aims to provide oligosaccharides for stabilization, administration and delivery of active ingredients, which can be prepared by relatively simple methods to implement.
  • the present invention is thus intended to provide oligosaccharides capable of allowing the stabilization, administration and delivery of active ingredients of great diversity.
  • the present invention also aims to obtain oligosaccharides with a degree of functionalization in anionic groups that can go beyond two carboxylate groups per saccharide unit.
  • the invention also aims at obtaining oligosaccharides which may have a biodegradability sufficiently fast and appropriate for their use in the preparation of a broad category of pharmaceutical formulations, including for medicaments intended for chronic administration and / or of high frequency,
  • the invention aims to provide oligosaccharides meeting the constraints established by the pharmaceutical industry, particularly in terms of stability under normal conditions of storage and storage including in solution.
  • the present invention relates to an oligodextran, chosen from dextrans whose average degree of polymerization is less than 10, modified by:
  • radical - [AA] - denotes an amino acid residue attached to the backbone of dextran via a linker -Ri, and optionally carrying a radical - [R 2 ] n
  • the linker -Ri is a C1-C15 carbon chain, optionally substituted and / or comprising at least one heteroatom (such as O, N and S) and optionally a carboxylic acid function; it forms with the amino acid residue [AA] an amide bond, and is directly attached to the dextran backbone by an ester, carbamate or ether bond
  • radical -R 2 is an optionally substituted C1-C18 carbon chain
  • n 0, 1 or 2
  • -RI is a C1 to C15 carbon chain, optionally substituted and / or comprising at least one heteroatom (such as O, N and S) and at least one carboxylic acid function
  • the oSigodextran is chosen from dextrans modified with:
  • radical - [AA] - denotes an amino acid residue attached to the backbone of the dextran via a linker -Ri, and optionally carrying a radical - [R2] n
  • the linker -Ri is a C1-C15 carbon chain, optionally substituted and / or comprising at least one heteroatom (such as O, N and S) and optionally a carboxylic acid function; it forms with the amino acid residue [AA] an amide bond, and is directly attached to the dextran backbone by an ester, carbamate or ether bond
  • the radical -R 2 is a carbon chain C1 to C18, optionally substituted
  • n 0, 1 or 2
  • One or more substituents -R'I- which is a C1-C15 carbon chain, optionally substituted and / or comprising at least one heteroatom (such as O, N and S) and at least one acid function in the form of a salt of alkaline cations and is directly attached to the dextran backbone by an ester, carbamate or ether bond
  • hetero atoms is meant an oxygen, nitrogen or sulfur atom.
  • the linker -R1 forms with the amino acid residue [AA] an amide bond, and is directly attached to the dextran backbone through an ether linkage.
  • the linker -R1 forms with the amino acid residue [AA] an amide linkage, and is directly attached to the dextran backbone via a carbamate linkage.
  • the link arms -RI- and -R'I- are identical.
  • the link arms -RI- and -R'I- are different.
  • the linking arms -RI- and -R'I- are chosen from among the radicals
  • O and p are the same or different, greater than or equal to 1 and less than or equal to 12, and
  • R 3 and R 4 which are identical or different, are chosen from the group consisting of a hydrogen atom, a saturated or unsaturated, linear, branched or cyclic C1 to C6 alkyl, a benzyl or an alkyl-aryl and optionally containing heteroatoms selected from the group consisting of O, N and / or S, or functions selected from the group consisting of carboxylic acid, amine, alcohol or thiol functions,
  • R ' 3 and R' 4 which are identical or different are chosen from the group consisting of a hydrogen atom, a saturated or unsaturated, linear, branched or cyclic C1 to C6 alkyl, a benzyl, an alkyl-aryl and optionally containing heteroatoms selected from the group consisting of O, N and / or S, or functions selected from the group consisting of carboxylic acid, amine, alcohol or thiol functions.
  • the oligosaccharide is characterized in that the radical -R'I- is -CH2-. In one embodiment, the oligosaccharide is characterized in that Se radical -RI- is -CH2-.
  • the polysaccharide is characterized in that the radical -R'1- is chosen from the group consisting of the following radicals:
  • the polysaccharide is characterized in that the radical -RI - is chosen from the group consisting of the following radicals:
  • the oligosaccharide is chosen from oligodextrans.
  • the oligodextran has a number average molecular weight of less than 2000 g / me.
  • At least 50% of the oligosaccharide population has a degree of polymerization of less than 10.
  • the cations are chosen from alkaline cations, such as Na + or K + .
  • the amino acids are selected from alpha amino acids. In one embodiment, the alpha amino acids are chosen from alpha natural amino acids.
  • the natural alpha amino acids are chosen from hydrophobic amino acids chosen from the group comprising tryptophan, leucine, alanine, iso-leucine, glycine, phenylalanine and valine. .
  • its natural alpha amino acids are selected from polar amino acids selected from the group consisting of aspartic acid, glutamic acid, lysine, serine.
  • the oligosaccharide is characterized in that the radical R 2 is a benzyl radical.
  • the oligosaccharide is characterized in that the radical -R 2 is derived from a hydrophobic alcohol.
  • the hydrophobic alcohol is chosen from alcohols consisting of an unsaturated and / or saturated, branched or unbranched alkyl chain comprising from 4 to 18 carbons.
  • the hydrophobic alcohol is chosen from alcohols consisting of an unsaturated and / or saturated, branched or unbranched alkyl chain comprising from 6 to 18 carbons.
  • the hydrophobic alcohol is chosen from alcohols consisting of an unsaturated and / or saturated, branched or unbranched alkyl chain comprising from 8 to 16 carbons.
  • the hydrophobic alcohol is octanol.
  • the hydrophobic alcohol is 2-ethylbutanol.
  • the fatty alcohol is selected from meristyl, ie cetyl, stearyl, cetearyl, butyl, oleyl, lanolin.
  • the hydrophobic alcohol is selected from the group consisting of cholesterol and its derivatives.
  • the hydrophobic alcohol is cholesterol
  • the hydrophobic alcohol is chosen from menthol derivatives.
  • the hydrophobic alcohol is menthol in its racemic form.
  • the hydrophobic alcohol is the D-isomer of menthol.
  • the hydrophobic alcohol is the L-isomer of menthol.
  • the hydrophobic alcohol is chosen from tocopherols.
  • the tocopherol is S'aipha tocopherol.
  • alpha tocopherol is the racemic of alpha-tocopherol.
  • tocopherol is the D isomer of alpha tocopherol.
  • tocopherol is the L isomer of alpha tocopherol.
  • the hydrophobic alcohol is chosen from alcohols bearing an aryl group.
  • the aryl group-bearing alcohol is selected from the group consisting of benzyl alcohol and phenethyl alcohol.
  • the ofigosaccharide is characterized in that the radical - 2 is derived from a hydrophobic acid.
  • the hydrophobic acid is selected from fatty acids.
  • the fatty acids are chosen from the group consisting of acids consisting of an unsaturated or saturated, branched or unbranched alkyl chain comprising from 6 to 50 carbons.
  • the fatty acids are chosen from the group consisting of linear fatty acids.
  • the linear fatty acids are selected from the group consisting of caproic acid, oenanthic acid, caprylic acid, capric acid, nonanoic acid, decanoic acid, undecanoic acid, dodecanoic acid, palmitic acid, stearic acid, arachidic acid, behenic acid, tricosanoic acid, lignoceric acid, heptacosanoic acid, octacosanoic acid and melissic acid.
  • the fatty acids are selected from the group consisting of unsaturated fatty acids.
  • the unsaturated fatty acids are selected from the group consisting of myristoleic acid, palmitoleic acid, oleic acid, elaidic acid, linoleic acid, alpha linoleic, arachidonic acid, eicosapentaenoic acid, erucic acid and docosahexaenoic acid.
  • the fatty acids are chosen from the group consisting of ile acids and their derivatives,
  • the bile acids and their derivatives are selected from the group consisting of cholic acid, dehydrocholic acid, deoxycholic acid, and chenodeoxycholic acid. In one embodiment, 0.1 ⁇ i ⁇ , 3
  • the igosaccha wrinkle according to the invention has a mean degree of polymerization of between 2 and 10.
  • it has a mean degree of polymerization of between 2 and 8.
  • it has a mean degree of polymerization of between 3 and 6.
  • anionic is meant an oligosaccharide which contains unfunctionalized and salt-forming carboxyl functional groups.
  • polymerization degree DP is meant the average number of repeating units (monomers) per polymer chain. It is calculated by dividing the number average molar mass by the average mass of the repeating unit.
  • M n number average molar mass
  • the polymers can also be characterized by the chain length distribution, also called polydispersity index (Ip), and is equal to M w divided by M n .
  • Ip polydispersity index
  • the invention relates to an oligosaccharide chosen from the group consisting of the following oligosaccharides:
  • the invention also relates to the use of functionalized oligosaccharides according to the invention for the preparation of pharmaceutical compositions.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising one of the oligosaccharides according to the invention as described above and at least one active ingredient.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition characterized in that the active ingredient is selected from the group consisting of proteins, glycoproteins, peptides and non-peptide therapeutic molecules.
  • active principle is meant a product in the form of a single chemical entity and / or in the form of a combination having a physiological activity.
  • Said active ingredient may be exogenous, that is to say that it is provided by the composition according to the invention. It may also be endogenous, for example the growth factors that will be secreted in a wound during the first healing phase and that may be retained on said wound by the composition according to the invention.
  • the modes of administration envisaged are intravenous, subcutaneous, intradermal, transdermal, intramuscular, oral, nasal, vaginal, ocular, oral, pulmonary and so on.
  • compositions according to the invention are either in liquid form, in aqueous solution, or in powder, implant or film form. They further comprise conventional pharmaceutical excipients well known to those skilled in the art.
  • compositions may advantageously comprise, in addition, excipients for formulating them in the form of gel, sponge, injectable solution, oral solution, lyoc, etc.
  • the invention also relates to a pharmaceutical composition, characterized in that it is administrable in stent form, film or "coating" of implantable biomaterials, implant.
  • Oligosaccharide 1 Sodium phenylalaninate functionalized dextranmethylcarboxylate [1DMC (1.03) PheOC 8 (0.2)]
  • Octyl phenylalaninate, para-toluenesulfonic acid salt is prepared from octanol and phenylalanine according to the process described in US Patent 4,826,818 (Kenji M., et al.).
  • [oligosaccharide] 31.5 mg / g
  • the degree of substitution of methyicarboxyate is 1.03 per glucosidic unit.
  • This sodium dextranethylcarboxylate is lyophilized for 18 hours.
  • the sodium dextranmethylcarboxylate solution is acidified on a Purolite resin (anionic) to obtain the acid dextranemethylcarboxylic acid which is then lyophilized for 18 hours.
  • the solution of phenylalaninate is added.
  • octyl is added and the mixture is stirred at 10 ° C.
  • the mixture is then heated to 50 ° C.
  • 70 ml of an aqueous solution of imidazole (150 g / l) and 120 ml of water are added.
  • the solution thus obtained is purified by ultrafiltration on PES membrane of 1 kDa against 0.9% NaCl, 0.01N NaOH, 0.9% NaCl and water.
  • the oligosaccharide concentration of the final solution is determined by dry extract.
  • a sample of solution is lyophilized and analyzed by RM NMR in D 2 0 to determine the degree of substitution of octyl phenylalaninate-grafted methyl carboxylates.
  • Oligosaccharide 2 sodium dextranmethylcarboxylate functionalized with dilaurylate aspartate [lDMC (1.03) Asp (OC 12 ) 2 (0.07) 3
  • the dilauryl aspartate, para-toluenesulfonic acid salt is prepared from dodecane and aspartic acid according to the process described in US Patent 4,826,818 (Kenji M., et al.).
  • Oligosaccharide 3 Sodium dextranemethylcarboxylate functionalized with dilauryl aspartate [lDMC (1.65) Asp (OC 12 ) 2 (0.07)]
  • the degree of substitution in methylcarboxylate is 1.65 per glucosidic unit.
  • the sodium dextranemethylcarboxylate solution is passed through a Puroiite (anionic) resin to obtain the acid dextran-methylcarboxylic acid which is then lyophilized for 18 hours.
  • Oligosaccharide 3 is a sodium dextranemethylcarboxylate functionalized with dilauryl aspartate prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 2.
  • Oligosaccharide 4 Sodium dextranemethylcarboxylate functionalized with dilauryl aspartate [lDMC (1.65) Asp (OCi 2 ) 2 (0.15)] 10 g of dextranethyl carboxylic acid characterized by a degree of substitution of methylcarboxylate of 1.65 per glucosidic unit are synthesized from a dextran with a weight average molecular mass of 1 kg / mol (Pharmacosmos, degree of polymerization of 3 9), according to a method similar to that described for Oligosaccharide 3, and then lyophilized.
  • Oligosaccharide 5 Dextranmethyl sodium carboxylate functionalized with didecyl aspartate [1D C (1.03) Asp (OCi 0 ) 2 (0.05)]
  • Didecyl aspartate, para-toluenesulfonic acid salt is prepared from decanol and aspartic acid according to the process described in US Pat. No. 4,826,818 (Kenji M., et al.).
  • Oligosaccharide 5 is a sodium dextranmethylcarboxylate functionalized with didecyl aspartate, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 2.
  • N 1 the degree of substitution in methylcarboxylates functionalized aspartate didecyl is 0.05.
  • Oligosaccharide 6 Dioctylated aspartate functionalized sodium dextranmethylcarboxylate [1DMC (1.03) Asp (OC 3 ) 2 (0.07)]
  • the dioctyl aspartate, para-toluenesulfonic acid salt is prepared from octanol and aspartic acid according to the process described in US Patent 4,826,818 (Kenji M., et al.).
  • Oligosaccharide 6 is a sodium dextranethylcarboxylate functionalized with dioctyl aspartate, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 2.
  • Oligosaccharide 7 Sodium dextranmethylcarboxylate functionalized with ⁇ -benzyl aspartate [lDMC (1.65) Asp (OBzl) OH (0.6)]
  • Oligosaccharide 7 is a sodium dextranethylcarboxylate functionalized with ⁇ -benzyl aspartate, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 2 using aspartic acid of ⁇ -benzyl (Bachem).
  • Oligosaccharide 8 Tryptophan Functionalized Dextranmethylcarboxylate [lDMC (1.65) Trp (1.0)]
  • Oligosaccharide 9 Sodium dextranmethylcarboxyate functionalized with tryptophan [lDMC (2.1) Trp (1.3)]
  • the concentration of oligosaccharides of the final solution is determined by dry extract, then an acid / base assay in a water / acetone 50/50 (V / V) mixture is carried out to determine the degree of substitution in methylcarboxylate.
  • the degree of substitution in methylcarboxylate is 2.1 per glucosidic unit.
  • Oligosaccharide 9 is a tryptophan functionalised sodium dextranmethylcarboxylate, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 8.
  • Oligosaccharide 10 Sodium Dextranmethylcarboxylate Functionalized With Phenylalanine [lDMC (1.65) Phe (0.65)]
  • the ethyl phenylalaninate solution is added and the mixture is stirred at 10 ° C.
  • An aqueous solution of imidazole (340 g / l) is added.
  • the solution is then heated to 30 ° C., 70 ml of water are added and the solution obtained is purified by ultrafiltration on a PES membrane of 1 kDa against 7 volumes of IMaOH ⁇ , ⁇ ⁇ , 7 volu mes of NaCl 0, 9% and 3 volumes of water.
  • the concentration of oligosaccharides of the final solution is determined by dry extract.
  • a sample solution is lyophilized and analyzed by NMR in D 2 0 s to determine the mole fraction of grafted methylcarboxylate by phenylalanine.
  • Oligosaccharide 11 Sodium dextranmethylcarboxylate functionalized with phenylalanine [lDMC (2.1) Phe (1.0)]
  • Oligosaccharide 11 is a phenylalanine functionalized dextranmethylcarboxylate, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 10.
  • Oligosaccharide 12 sodium N-methylcarboxylate dextran carbamate modified with L-Phenylaianin [lDUGIy (1.65) Phe (0.65)]
  • the degree of substitution of the hydroxyl functions by N-methylcarboxylate carbamate functions is 1.65 per saccharide unit.
  • the solution of sodium N-methylcarboxylate dextran carbamate is acidified on a Purolite resin (anionic) to obtain the IM-methylcarboxylic acid dextran which is then lyophilized for 18 hours.
  • Oligosaccharide 12 is a sodium N-methylcarboxylate dextran carbamate functionalized with phenylalanine, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 10.
  • [Oligosaccharide 12] 23.8 mg / g
  • N-methylcarboxylic acid dextran characterized by a degree of substitution of N-methylcarboxylate of 1.65 per glucosidic unit are synthesized from a dextran with a weight average molar mass of 1 kg / mol (Pharmacosmos, degree of polymerization of 3.9), according to a method similar to that described for Oligosaccharide 12, and then lyophilized.
  • Oligosaccharide 13 is a sodium N-methylcarboxylate dextran carbamate functionalized with tryptophan, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 9.
  • Oligosaccharide 14 Sodium dextranmethylcarboxylate functionalized with cholesteryl leucinate [lDMC (1.65) LeuChol (0.05)]
  • Cholesteryl leucinate, paratoluenesulfonic acid salt is prepared from cholesterol and leucine according to the process described in US Pat. No. 4,826,818 (Kenji M., et al.).
  • Oligosaccharide 14 is a sodium dextranmethylcarboxylate functionalized with cholesteryl leucinate, prepared according to a process similar to that described for Oligosaccharide 1.
  • the degree of substitution with methylcarboxylates functionalized with cholesteryl leucinate is 0.05.
  • the isocyanate of the ⁇ -benzyl-L-aspartate dipeptide of ethyl L-phenylalaninate is obtained according to the method described in the publication (Tsai, JH et al., Organic Synthesis 2004, 10, 544-545) from ethyl L-phenylalaninate ⁇ -benzyl-L-aspartate hydrochloride and triphosgene (Sigma).
  • Toluene is added to the mixture and the medium is dehydrated by heteroazeotropic distillation.
  • 80 ° C. 15.81 g (0.04 mol) of isocyanate of the ⁇ -benzyl-L-aspartate dipeptide of ethyl L-phenylalaninate are progressively introduced.
  • the medium is diluted with water and purified by diafiltration on a 5 kD PES membrane against 0.1N NaOH, 0.9% NaCl and water.
  • the final solution is assayed by dry extract to determine the polymer concentration, assayed by acid / base assay in water / acetone 50/50 (V / V) and then analyzed by 1 H NMR to determine the degree of hydroxyl functionalisation.
  • 10DMC (II) Phe (0.45) is synthesized according to the same process as the oligosaccharide 10 from the dextran of average molar mass by weight of 10 kg / mol (Pharmacosmos, degree of polymerization of 19).
  • Literature establishes, on the basis of dextran, a correlation between molecular weight and renal clearance of macromolecules (Caulfield, J. et al., The Journal of Cell Biology 1974, 63, 883-903; Chang RLS Kidney International 1975, 8, 212-218). These results establish that macromolecules with a molecular weight greater than 30 kDa are hardly eliminated by the kidney.
  • a solution of 250 ml of oligosaccharide 10 at 20 g / l is ultrafiltered on PES membrane of 30 kDa against 20 volumes of water.
  • the oligosaccharide concentration of the final solution is determined by dry extract and indicates a recovery of less than 10%.
  • a solution of 250 ml of 10DMC (l.l) Phe (0.65) at 20 g / L is ultrafiltered on PES membrane of 30 kDa against 20 volumes of water.
  • the polymer concentration of the final solution is determined by dry extract.
  • BMP-7 Bone Morphogenetic Protein 7
  • the oligosaccharides described in this application are implemented in this test.
  • the test consists in using a solution of BMP-7 at acidic pH, for example a 10 mM lactate buffer at pH 3.
  • BMP-7 is at an initial concentration of 2.47 mg / ml.
  • 2.02 ml of this BMP-7 solution are mixed with 2.7 ml of a 18.5 mg / ml polymer solution containing 18 mM phosphate buffer at pH 7.4.
  • After mixing the final pH is adjusted to physiological pH by adding a mixture of IN sodium hydroxide and water to obtain a final formulation volume of 5 mL.
  • the formulations are analyzed by visual observation, turbidity and dynamic scattering of light to detect the presence of aggregates.
  • oligosaccharides according to the invention thus make it possible to form complexes with a protein despite a very small number of saccharide units,

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Abstract

L'invention concerne un Oligodextrane, choisi parmi les dextranes dont le degré de polymérisation moyen est inférieur à 10, modifié par au moins un substituant de formule générale (I) : -R1-[[AA]-[R2]n]m Elle concerne également une composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un oligosaccharide selon l'invention et un principe actif est choisi dans le groupe constitué par les protéines, les glycoprotéines, les peptides et les molécules thérapeutiques non-peptidiques.

Description

Oligosaccharides fonctio finalisés
[0001] La présente invention concerne des oligosaccharides anioniques destinés à un usage thérapeutique et/ou prophylactique, pour l'administration de principe(s) actif(s) aux hommes ou aux animaux.
[0002] Les oligosaccharides selon l'invention comportant des groupes carboxyles présentent, du fait de leur structure et de leur biocompatibilité, un intérêt certain pour l'industrie pharmaceutique, notamment pour la stabilisation de principes actifs par exemple protéiques,
[0003] De façon surprenante et malgré la réduction de la longueur de la chaîne macromolécuiaire les oligosaccharides selon l'invention conservent la propriété de créer des interactions avec des principes actifs, protéiques par exemple.
[0004] D'autre part la fonctionnalisation de ces oligosaccharides par des groupements carboxyles permet avantageusement de moduler les forces d'interaction mises en jeu entre l'oligosaccharide et le principe actif.
[0005] La présente invention vise à proposer des oligosaccharides, destinés à la stabilisation, l'administration et la délivrance de principes actifs, pouvant être préparés par des méthodes relativement simples à mettre en œuvre. La présente invention a ainsi vocation à proposer des oligosaccharides aptes à permettre la stabilisation, l'administration et la délivrance de principes actifs d'une grande diversité.
[0006] La présente invention vise également à obtenir des oligosaccharides avec un degré de fonctionnalisation en groupements anioniques pouvant aller au-delà de deux groupements carboxylates par unité saccharidique.
[0007] L'invention vise aussi l'obtention d'oligosaccharides pouvant présenter une biodégradabilité suffisamment rapide et appropriée à leur utilisation dans la préparation d'une large catégorie de formulations pharmaceutiques, y compris pour des médicaments destinés à une administration chronique et/ou de fréquence élevée, Outre l'exigence d'une biodégradabilité modulable après administration, i'invention vise à proposer des oligosaccharides répondant aux contraintes établies par l'industrie pharmaceutique, notamment en termes de stabilité dans les conditions normales de conservation et de stockage et notamment en solution. [0008] La présente invention concerne un oligodextrane, choisi parmi les dextranes dont le degré de polymérisation moyen est inférieur à 10, modifiés par :
• au moins un substituant de formule générale I :
-Ri-[[AA]-[ 2]n]m Formule I ies substituants étant identiques ou différents lorsqu'il y a au moins deux substituants, dans lequel :
- le radical -[AA]- désigne un résidu d'acide aminé fixé sur le squelette du dextrane par l'intermédiaire d'un bras de liaison -Ri-, et portant éventuellement un radical -[R2]n
- le bras de liaison -Ri- est une chaîne carbonée en Cl à C15, éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome (tels que O, N et S) et éventuellement une fonction acide carboxylique; il forme avec le résidu d'acide aminé [AA] une liaison amide, et est directement fixé sur le squelette du dextrane par une liaison de type ester, carbamate ou éther
- le radical -R2 est une chaîne carbonée en Cl à C18, éventuellement substituée,
- n étant 0, 1 ou 2,
- m étant 1 ou 2,
- le degré de substitution j, en -Rl-[[AAj-[R2]n]m lorsque m>0 étant compris entre 0,01 et 2,9, et, et, éventuellement,
• un ou plusieurs substituants de même formule générale I, dans laquelle m =0
- -RI est une chaîne carbonée en Cl à C15, éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome (tels que 0, N et S) et au moins une fonction acide carboxylique
- le degré de substitution i, en -RI étant compris entre 0,1 et 3. et,
• lorsque m ou n est égal à 0 alors les fonctions salifiables libres sont sous forme de sels de cations alcalins,
• i+j < 3. [0009] Dans un mode de réalisation, l'oSigodextrane est choisi parmi les dextranes modifiés par :
• au moins un substituant de formule générale I :
-Ri-[[AA]-[ 2]n]m Formule I les substituants étant identiques ou différents lorsqu'il y a au moins deux substituants, dans lequel :
- le radical -[AA]- désigne un résidu d'acide aminé fixé sur le squelette du dextrane par l'intermédiaire d'un bras de liaison -Ri-, et portant éventuellement un radical - [ R2]n
- le bras de liaison -Ri- est une chaîne carbonée en Cl à C15, éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome (tels que O, N et S) et éventuellement une fonction acide carboxylique; il forme avec le résidu d'acide aminé [AA] une liaison amide, et est directement fixé sur le squelette du dextrane par une liaison de type ester, carbamate ou éther
- Le radical -R2 est une chaîne carbonée en Cl à C18, éventuellement substituée,
- n étant 0, 1 ou 2,
- m étant 1 ou 2,
- le degré de substitution j, en -Rl-[[AA]-[R2]n]m lorsque m>0 étant compris entre 0,01 et 2,9, et,
et, éventuellement,
• un ou plusieurs substituants -R'I- qui est une chaîne carbonée en Cl à C15, éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome (tels que 0, N et S) et au moins une fonction acide sous forme de sel de cations alcalins et est directement fixé sur le squelette du dextrane par une liaison de type ester, carbamate ou éther
- le degré de substitution i, en -R'I-, étant compris entre 0,1 et 3, et,
- -R'I- identique ou différent de -RI-, .
et,
• lorsque n est égal à 0 alors les fonctions salifiabîes libres sont sous forme de sels de cations alcalins, et
• i+j < 3.
[00010] On entend par hétéroatomes, un atome d'oxygène, d'azote ou de soufre. [00011] Dans un mode de réalisation, le bras de liaison -Rl-forme avec le résidu d'acide aminé [AA] une liaison amide, et est directement fixé sur le squelette du dextrane par une liaison éther.
[00012] Dans un mode de réalisation, le bras de liaison -Rl-forme avec le résidu d'acide aminé [AA] une liaison amide, et est directement fixé sur le squelette du dextrane par une liaison carbamate.
[00013] Dans un mode de réalisation, les bras de liaison -RI- et -R'I- sont identiques.
[00014] Dans un mode de réalisation, les bras de liaison -RI- et -R'I- sont différents.
[00015] Dans un mode de réalisation, les bras de liaison -RI- et -R'I- sont choisis parmi les radicaux
Formule II Formule III, dans lesquelles :
• o et p identiques ou différents, supérieurs ou égaux à 1 et inférieurs ou égaux à 12, et
• R3 et R4 identiques ou différents sont choisis dans le groupe constitué par un atome d'hydrogène, un a!kyle saturé ou insaturé, linéaire, ramifié ou cyclique en Cl à C6, un benzyle, un aikyle-aryle et comportant éventuellement des hétéroatomes choisis dans le groupe constitué par 0, N et/ou S, ou des fonctions choisies dans le groupe constitué par les fonctions acide carboxylique, aminé, alcool ou thiol,
• R'3 et R'4 identiques ou différents sont choisis dans le groupe constitué par un atome d'hydrogène, un alkyle saturé ou insaturé, linéaire, ramifié ou cyclique en Cl à C6, un benzyle, un aikyle-aryle et comportant éventuellement des hétéroatomes choisis dans le groupe constitué par O, N et/ou S, ou des fonctions choisies dans le groupe constitué par les fonctions acide carboxylique, aminé, alcool ou thiol.
[00016] Dans un mode de réalisation, l'oligosaccharide est caractérisé en ce que le radical -R'I- est -CH2-. [00017] Dans un mode de réalisation, l'oligosaccharide est caractérisé en ce que Se radical -RI- est -CH2-.
[00018] Dans un mode de réalisation, ie polysaccharide est caractérisé en ce que !e radical -R'1- est choisi dans le groupe constitué par les radicaux suivants :
[00019] Dans un mode de réalisation, le polysaccharide est caractérisé en ce que le radical -RI - est choisi dans le groupe constitué par les radicaux su ivants :
[00020] Dans un mode de réalisation, i'oiigosacchande est choisi parmi les oligodextranes.
[00021 ] Dans u n mode de réalisation, l'oligodextrane a une masse molaire moyenne en nombre inférieure à 2000 g/moi .
[00022] Dans un mode de réalisation au moins 50% de la population d'oligosaccharide a un degré de polymérisation inférieur à 10.
[00023] Les cations sont choisis parmi les cations alcalins, comme Na+ ou K+.
[00024] Dans un mode de réalisation, les acides aminés sont choisis parmi îes alpha acides aminés. [00025] Dans un mode de réalisation, les alpha acides aminés sont choisis parmi les alpha acides aminés naturels.
[00026] Dans un mode de réalisation, les alpha acides aminés naturels sont choisis parmi les acides aminés hydrophobes choisis dans le groupe comprenant le tryptophane, la leucine, l'alanine, l'iso-leucine, la glycine, la phénylalanine, la valine.
Dans un mode de réalisation, Ses alpha acides aminés naturels sont choisis parmi les acides aminés polaires choisis dans le groupe comprenant i'acide aspartique, l'acide glutamique, la lysine, la serine.
[00027] Dans un mode de réalisation, l'oligosaccharide est caractérisé en ce que le radical ~R2 est un radical benzyle.
[00028] Dans un mode de réalisation, l'oligosaccharide est caractérisé en ce que le radical -R2 est issu d'un alcool hydrophobe.
[00029] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools constitués d'une chaîne alkyle insaturée et/ou saturée, ramifiée ou non ramifiée, comprenant de 4 à 18 carbones.
[00030] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools constitués d'une chaîne alkyle insaturée et/ou saturée, ramifiée ou non ramifiée, comprenant de 6 à 18 carbones.
[00031] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools constitués d'une chaîne alkyle insaturée et/ou saturée, ramifiée ou non ramifiée, comprenant de 8 à 16 carbones.
[00032] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est l'octanol.
[00033] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est le 2-éthylbutanol.
[00034] Dans un mode de réalisation, l'alcool gras est choisi parmi le méristyl, ie cétyl, le stéaryi, le cétéaryi, le butyl, l'oléyl, la lanoline.
[00035] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi dans le groupe constitué par le cholestérol et ses dérivés.
[00036] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est le cholestérol.
[00037] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les dérivés du menthol.
[00038] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est le menthol sous sa forme racémique.
[00039] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est l'isomère D du menthol.
[00040] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est l'isomère L du menthol.
[00041] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les tocophérols. [00042] Dans un mode de réalisation, le tocophéroi est S'aipha tocophérol.
[00043] Dans un mode de réalisation, l'alpha tocophérol est le racémique de i'aipha tocophérol.
[00044] Dans un mode de réalisation, Je tocophérol est l'isomère D de l'alpha tocophérol.
[00045] Dans un mode de réalisation, le tocophérol est l'isomère L de l'alpha tocophéroi.
[00046] Dans un mode de réalisation, l'alcool hydrophobe est choisi parmi les alcools porteurs de groupe aryle.
[00047] Dans un mode de réalisation, l'alcool porteur de groupe aryle est choisi dans le groupe constitué par l'alcool benzylique et l'alcool phenéthylique.
[00048] Dans un mode de réalisation, l'ofigosaccharide est caractérisé en ce que le radical - 2 est issu d'un acide hydrophobe.
[00049] Dans un mode de réalisation, l'acide hydrophobe est choisi parmi les acides gras.
[00050] Dans un mode de réalisation, les acides gras sont choisis dans le groupe constitué par les acides constitués d'une chaîne alkyfe insaturée ou saturée, ramifiée ou non ramifiée, comprenant de 6 à 50 carbones.
[00051] Dans un mode de réalisation, (es acides gras sont choisis dans ie groupe constitué par les acides gras linéaires.
[00052] Dans un mode de réalisation, les acides gras linéaires sont choisis dans ie groupe constitué par l'acide caproïque, l'acide oenanthique, l'acide caprylique, l'acide caprique, l'acide nonanoïque, l'acide décanoïque, l'acide undécanoïque, l'acide dodécanoïque, l'acide palmitique, l'acide stéarique, l'acide arachidique, l'acide béhénique, l'acide tricosanoïque, l'acide lignocérique, l'acide heptacosanoïque, l'acide octacosanoïque et l'acide mélissique.
[00053] Dans un mode de réalisation, les acides gras sont choisis dans le groupe constitué par les acides gras insaturés.
[00054] Dans un mode de réalisation, les acides gras insaturés sont choisis dans le groupe constitué par l'acide myristoléique, l'acide palmitoléique, l'acide oléique, l'acide élaidique, ['acide linoléique, l'acide alpha-linoléique, ['acide arachidonique, l'acide eicosapentaenoïque, l'acide erucique et ['acide docosahexaenoïque.
[00055] Dans un mode de réalisation, les acides gras sont choisis dans le groupe constitué par les acides de ia bile et leurs dérivés,
[00056] Dans un mode de réalisation, ies acides de la bile et feurs dérivés sont choisis dans le groupe constitué par ['acide cholique, l'acide déhydrocholique, l'acide désoxycholique et l'acide chénodésoxycholique. [00057] Dans un mode de réalisation, 0,1< i≤,3
[00058] Dans un mode de réalisation, 0,5 < i < 2,5
[00059] Dans un mode de réalisation, 0,7< i < 2
[00060] Dans un mode de réalisation, 0,9< i < 1,7
[00061] Dans un mode de réalisation, 0,01 < j≤ 2,9
[00062] Dans un mode de réalisation, 0,02 < j≤ 2
[00063] Dans un mode de réalisation, 0,03< j < 1,2
[00064] Dans un mode de réalisation, 0,04< j < 0,7
[00065] LOI igosaccha ride selon l'invention, a un degré moyen de polymérisation compris entre 2 et 10.
[00066] Dans un mode de réalisation, il a un degré moyen de polymérisation compris entre 2 et 8.
[00067] Dans un autre mode de réalisation, il a un degré moyen de polymérisation compris entre 3 et 6.
[00068] On entend par anionique un oligosaccharide qui contient des fonctions carboxyles non fonctionnalisées et salifiables.
[00069] On entend par degré de polymérisation DP le nombre moyen d'unités répétitives (monomères) par chaîne de polymère. Il se calcule en divisant la masse molaire moyenne en nombre par la masse moyenne du motif répété.
[00070] On entend par masse molaire moyenne en nombre (Mn) la moyenne arithmétique des masses de chacune des chaînes de polymère. Ainsi pour un nombre n, de chaînes i de masse molaire Mj, on a Mn = (∑ Μ,)/(∑ίηί).
[00071] La masse molaire moyenne en poids (Mw) est obtenue par Mw = n( étant le nombre de chaînes de polymère i de masse molaire M|.
[00072] Les polymères peuvent également être caractérisés par la distribution de longueurs de chaînes, aussi appelée indice de polydispersité (Ip), et est égal au Mw divisé par le Mn.
[00073] Dans un mode de réalisation l'invention concerne un oligosaccharide choisi dans le groupe constitué par les oligosaccharidés suivants :
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de
dilauryle [lDMC(1.03)Asp(OC12)2(0.07)] dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dilauryle [lDMC(1.65)Asp(OC12)2(0.07)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par 'aspartate de dilauryle [lDMC(1.65)Asp(OC12)2(0.15)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par 'aspartate de didécyle [lDMC{1.03)Asp(OC10)2(0.05)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par 'aspartate de dioctyle [lDMC(1.03)Asp(OC8)2(0.07)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par 'aspartate de β- benzyle [lDMC(1.65)Asp(OBzl)OH(0.6)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par e tryptophane
[lDMC(1.65)Trp(1.0)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par e phénylalaninate d'octyle [lDMC(l.Û3)PheOC8(0.2)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par e tryptophane
[lDMC(2.1)Trp(1.3)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par a phenylalanine
[lDMC(1.65)Phe(0.65)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par a phénylalanine
[lDMC(2.1)Phe(1.0)]
N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate mod fié par la L- Phenylalanine [lDUGIy(1.65)Phe(0.65)]
N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate mod fié par le tryptophane [lDUGIy(1.65)Trp(1.0)]
dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le leucinate de cholestéryle [lDMC(1.65)LeuChol(0.05)]
dextrane modifié par le L-aspartate de L-phenylalaninate de sodium carbamate [lDUAspPhe(l.O)]
[00074] L'invention concerne également l'utilisation des oligosaccharides fonctionnalisés selon l'invention pour la préparation de compositions pharmaceutiques.
[00075] L'invention concerne également une composition pharmaceutique comprenant l'un des oligosaccharides selon l'invention tel que décrit précédemment et au moins un principe actif.
[00076] L'invention concerne également une composition pharmaceutique caractérisée en ce que le principe actif est choisi dans le groupe constitué par les protéines, les glycoprotéines, les peptides et les molécules thérapeutiques non-peptidiques. [00077] On entend par principe actif un produit sous forme d'entité chimique unique et/ou sous forme d'une combinaison ayant une activité physiologique. Ledit principe actif peut être exogène c'est-à-dire qu'il est apporté par la composition selon l'invention. Il peut également être endogène, par exemple les facteurs de croissance qui vont être sécrétés dans une plaie pendant la première phase de cicatrisation et qui pourront être retenus sur ladite plaie par la composition selon l'invention.
[00078] Selon les pathologies visées elle est destinée à un traitement local et/ou systémique.
[00079] Dans le cas des libérations locale et systémique, les modes d'administration envisagés sont par voie intraveineuse, sous-cutanée, intradermique, transdermique, intramusculaire, orale, nasale, vaginale, oculaire, buccale, pulmonaire etc.
[00080] Les compositions pharmaceutiques selon l'invention sont soit sous forme liquide, en solution aqueuse, soit sous forme de poudre, d'implant ou de film. Elles comportent en outre les excipients pharmaceutiques classiques bien connus de l'homme de l'art.
[00081] En fonction des pathologies et des modes d'administration les compositions pharmaceutiques pourront avantageusement comporter, en outre, des excipients permettant de les formuler sous forme de gel, d'éponge, de solution injectable, de solution buvable, de lyoc etc.
[00082] L'invention concerne également une composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle est administrable sous forme de stent, de film ou « coating » de biomatériaux implantables, d'implant.
Exemples
OS7
ΟΞ8
OS9
OS10
OS11
Tableau 1 : Oligosaccharides
Oligosaccharide 1 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le phénylalaninate d'octyle [lDMC(1.03)PheOC8(0,2)]
[00083] Le phénylalaninate d'octyle, sel d'acide paratoiuènesulfonique est préparé à partir d'octanol et de phénylalanine selon le procédé décrit dans le brevet US 4,826,818 (Kenji M., et al.).
[00084] 8 g (148 mmol de fonctions hydroxyles) de dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), sont dissouts dans l'eau (420 g/L). A cette solution sont ajoutés 15 mL de NaOH 10 l\l (48 mmol). Le mélange est chauffé à 35°C, et 23 g de chioroacétate de sodium (198 mmol) sont ajoutés. Le mélange est progressivement porté à une température de 60°C et est maintenu à cette température pendant 100 minutes supplémentaires. Le mélange est dilué avec de l'eau, neutralisé par l'acide acétique puis purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre de l'eau. La concentration en oligosaccharide de la solution finale est déterminée par extrait sec, puis un dosage acide/base dans un mélange eau/acétone 50 / 50 (V/V) est effectué pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylate.
[00085] D'après l'extrait sec : [oligosaccharide] = 31,5 mg/g [00086] D'après !e dosage acide/base, Se degré de substitution en méthyicarboxyiate est de 1,03 par unité giucosidique. Ce dextraneméthylcarboxylate de sodium est iyophilisé pendant 18 heures.
[00087] La solution de dextraneméthylcarboxylate de sodium est acidifiée sur une résine Purolite (anionique) pour obtenir le dextraneméthyicarboxylique acide qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures.
[00088] 10 g de dextraneméthyicarboxylique acide (46 mmol de fonctions méthylcarboxylique acide) sont solubilisés dans le D F (23 g/L) puis refroidis à 0°C. Un mélange de phénylalaninate d'octyle, sel d'acide paratoluènesuifonique (4,0 g ; 9 mmol) dans du DMF est préparé (100 g/L). 0,9 g de triéthylamine (9 mmol) sont ajoutés au mélange. Une fois la solution d'oligosaccharide à 0°C, une solution de NMM (5,2 g, 51 mmol) et de EtOCOCI (5,6 g ; 51 mmol) est rajoutée, Après 10 minutes, la solution de phénylalaninate d'octyle est ajoutée et le mélange est agité à 10°C. Le mélange est ensuite chauffé à 5Û°C. 70 mL d'une solution aqueuse d'imidazole (150 g/L) et 120 mL d'eau sont ajoutés. La solution ainsi obtenue est purifiée par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre NaCI 0,9%, NaOH 0,01N, NaCI 0,9% et de l'eau. La concentration en oligosaccharide de la solution finale est déterminée par extrait sec. Un échantillon de solution est lyophilisé et analysé par RMN Η dans D20 pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylates greffés par le phénylalaninate d'octyle.
[00089] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 1] = 11,1 mg/g
[00090] D'après la RMN ^ ; le degré de substitution en méthylcarboxylates greffés par le phénylalaninate d'octyle est de 0,2.
Oligosaccharide 2 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dilauryie [lDMC(1.03)Asp(OC12)2(0.07)3
[00091] L'aspartate de dilauryie, sel d'acide paratoluènesuifonique est préparé à partir de dodécanoi et d'acide aspartique selon le procédé décrit dans le brevet US 4,826,818 (Kenji M., et al.).
[00092] 10 g de dextraneméthyicarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,03 par unité giucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), selon un procédé similaire à celui décrit pour l'oligosaccharide 1, puis lyophilisés.
[00093] Par un procédé similaire à celui utilisé pour ia préparation de l'oligosaccharide 1, un sodium méthylcarboxylate dextrane fonctionnalisé par l'aspartate de dilauryie est obtenu. [Q0094] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 2] = 12,3 mg/g
[00095] D'après !a RMN JH : le degré de substitution en méthylcarboxyiates fonctionnalisés par l'aspartate de dilauryle est de 0,07.
Oligosaccharide 3 : Dextraneméthyicarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dilauryle [lDMC(1.65)Asp(OC12)2(0.07)]
[00096] 10 g de dextraneméthyicarboxylate de sodium caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,03 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oûgosaccharide 1, puis lyophilisés.
[00097] 8 g (64 mmol of hydroxyl functions) dextraneméthyicarboxylate de sodium caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,03 par unité glucosidique sont solubilisés dans de l'eau (1000 g/L). 6 mL de NaOH 10 N (64 mmol) sont ajoutés. Le mélange est chauffé à 35°C, et 7,6 g de chîoroacétate de sodium (65 mmol) sont ajoutés. Le mélange est progressivement porté à une température de 60°C, et est maintenu à cette température pendant 100 minutes supplémentaires, Le mélange est diiué avec de l'eau, neutralisé par l'acide acétique puis purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre de l'eau. La concentration en oligosaccharide de la solution finale est déterminée par extrait sec, puis un dosage acide/base dans un mélange eau/acétone 50 / 50 (V/V) est effectué pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylate.
[00098] D'après l'extrait sec : [oligosaccharide] = 45,8 mg/g
[00099] D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylate est de 1,65 par unité glucosidique.
[000100] La solution de dextraneméthyicarboxylate de sodium est passée sur une résine Puroiite (anionique) pour obtenir le dextraneméthylcarboxylique acide qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures.
[000101] L'Oligosaccharide 3 est un dextraneméthyicarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dilauryle préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 2.
[000102] Extrait sec : [Oligosaccharide 3] = 17,5 mg/g
[000103] D'après la RMN 1H : le degré de substitution en méthylcarboxyiates fonctionnalisés par l'aspartate de dilauryle est de 0,07.
Oligosaccharide 4 : Dextraneméthyicarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dilauryle [lDMC(1.65)Asp(OCi2)2(0.15)] [000104] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,65 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse moiaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 3, puis lyophilisés.
[000105] L'Oligosaccharide 4 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dilauryle, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 2. D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 4] = 16,7 mg/g [000106] D'après la RI N 1H : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par de l'aspartate de dilauryle est de 0,15.
Oligosaccharide 5 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de didécyle [lD C(1.03)Asp(OCi0)2(0.05)]
[000107] L'aspartate de didécyle, sel d'acide paratoluènesulfonique est préparé à partir de décanol et d'acide aspartique selon le procédé décrit dans le brevet US 4,826,818 (Kenji M., et al.).
[000108] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,03 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse moiaire moyenne en poids 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9) selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 1, puis lyophilisés.
[000109] L'Oligosaccharide 5 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de didécyle, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 2.
[000110] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 5] - 19,4 mg/g
[000111] D'après la R. N 1 : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par l'aspartate de didécyle est de 0,05.
Oligosaccharide 6 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dioctyle [lDMC(1.03)Asp(OC3)2(0,07)]
[000112] L'aspartate de dioctyle, sel d'acide paratoluènesulfonique est préparé à partir d'octanol et d'acide aspartique selon le procédé décrit dans le brevet US 4,826,818 (Kenji M., et al.).
[000113] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,03 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9) selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 1, puis lyophilisés.
[000114] L'Oligosaccharide 6 est un dextraneméthylcarboxyîate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dioctyle, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 2.
[000115] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 6] = 9,8 mg/g
[000116] D'après la RMN 'H : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par l'aspartate de dioctyle est de 0,07.
Oligosaccharide 7 : Dextraneméthylcarboxyîate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de β-benzyle [lDMC(1.65)Asp(OBzl)OH(0.6)]
[000117] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,65 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9) selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 3, puis lyophilisés.
[000118] L'Oligosaccharide 7 est un dextraneméthylcarboxyîate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de β-benzyle, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 2 en utilisant l'acide aspartique de β-benzyfe (Bachem).
[000119] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 7] = 26,0 mg/g
[000120] D'après la RMN X : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par l'aspartate de β-benzyle est de 0,6,
Oligosaccharide 8 : Dextraneméthylcarboxyîate de sodium fonctionnalisé par le tryptophane [lDMC(1.65)Trp(1.0)]
[000121] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,65 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9) selon un procédé simiiaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 3, puis lyophilisés.
[000122] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide (64 mmol de fonctions méthylcarboxylique acide) sont solubilisés dans le DMF (22 g/L) puis refroidis à 0°C. Une fois la solution d'oligosaccharide à 0°C, une solution de NMM (7,1 g ; 70 mmol) et de EtOCOCI (7,6 g ; 70 mmol) est rajoutée. Après 10 minutes, 11,9 g de tryptophane (Ajinomoto) (58 mmol) sont ajoutés et !e mélange est agité à 10°C. 26 mL d'une solution aqueuse d'imidazole (340 g/L) sont ajoutés. Le mélange est ensuite chauffé à 30°C. Lorsque la température atteint 20°C, 70 mL d'eau sont ajoutés. Quand la température atteint 30°C, ie mélange est sorti du réacteur et la solution obtenue est purifiée par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre 6 volumes de NaCI 0,9%, 2 volumes de NaOH Ο,ΟΙΝ, 4 volumes de NaCi 0,9% and 3 volumes d'eau. La concentration en oligosaccharide de la solution finale est déterminée par extrait sec. Un échantillon de solution est lyophilisé et analysé par RM!M 1H dans D20 pour déterminer la fraction molaire des méthylcarboxylates greffés par le tryptophane.
[000123] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 8] = 47,1 mg/g
[000124] D'après la RMN *H : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le tryptophane est de 1.
Oligosaccharide 9 : Dextraneméthylcarboxyiate de sodium fonctionnalisé par ie tryptophane [lDMC(2.1)Trp(1.3)]
[000125] 10 g de dextraneméthylcarboxyiate de sodium caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,65 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9) selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 2, puis lyophilisés.
[000126] 8 g (37 mmol de fonctions hydroxyles) de dextraneméthylcarboxyiate caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,65 par unité glucosidique sont solubilisés dans l'eau (430 g/L). La solution est portée à 65°C et 11,1 g de chloroacétate de sodium sont ajoutés. Le mélange à 65°C est agité pendant 30 minutes, 14 mL de NaOH 10N (136 mmol) sont ajoutés au compte-gouttes. Puis le mélange est agité à 65°C. Le mélange est dilué de l'eau, neutralisé par l'acide acétique puis purifié par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre de l'eau. La concentration en oligosaccharides de la solution finale est déterminée par extrait sec, puis un dosage acide/base dans un mélange eau/acétone 50 / 50 (V/V) est effectué pour déterminer le degré de substitution en méthylcarboxylate.
[000127] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide] = 25,8 mg/g
[000128] D'après le dosage acide/base, le degré de substitution en méthylcarboxylate est de 2,1 par unité glucosidique.
[000129] La solution de dextraneméthylcarboxyiate de sodium est passée sur une résine Purolite (anionique) pour obtenir le dextraneméthyicarboxylique acide qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures, [000130] L'Oligosaccharide 9 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le tryptophane, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 8.
[000131] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 9] = 31, 1 mg/g
[000132] D'après la RM IN 1 : !e degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par le tryptophane est de 1 ,3.
Oligosaccharide 10 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par la phénylalanine [ lDMC( 1.65)Phe(0.65)]
[000133] 10 g de dextraneméthylcarboxyl ique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,65 pa r unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 3, puis lyophilisés.
[000134] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide (64 mmol de fonctions méthylcarboxylique acide) sont solubifisés dans le DMF (58 g/L) puis refroidis à 0°C. Un mélange de phénylalaninate d'éthyle, sel d'hydrochlorure (6,2 g ; 27 mmol) dans du DMF est préparé (100 g/L) , 2,7 g de triéthyiamine (27 mmol) sont ajoutés à ce mélange. Une fois la solution d'oligosaccharide à 0°C, une solution de NMM (6,5 g, 64 mmol) et de EtOCOCI (6,9 g ; 64 mmol) est rajoutée. Après 10 minutes, la solution de phénylalaninate d'éthyle est ajoutée et le mélange est agité à 10°C. Une solution aqueuse d'imidazole (340 g/L) est ajoutée. La solution est alors chauffée jusqu'à 30°C, 70 mL d'eau sont ajoutés et la solution obtenue est purifiée par ultrafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre 7 volumes de IMaOH Ο, Ι ΙΜ, 7 volu mes de NaCI 0,9% et 3 volumes d'eau . La concentration en oligosaccharides de la solution finale est déterminée par extrait sec. Un échantillon de solution est lyophilisé et analysé par RMN l dans D20 pour déterminer la fraction molaire des méthylcarboxylates greffés par la phénylalanine.
[000135] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 10] = 24,2 mg/g
[000136] D'après la RMN XH : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par la phénylalanine est de 0,65.
Oligosaccharide 11 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par la phénylalanine [ lDMC(2.1) Phe( 1.0)]
[000137] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide caractérisé par un deg ré de substitution en méthylcarboxylate de 2, 1 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 9, puis lyophilisés.
[000138] L'Oligosaccharide 11 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par la phénylalanine, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 10.
[000139] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 11] = 31,8 mg/g
[000140] D'après la RMN lH : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par la phénylalanine est de 1.
Oligosaccharide 12 : N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate modifié par la L-Phenylaianine [lDUGIy(1.65)Phe(0.65)]
[000141] 8 g (soit 148 mmol de fonctions hydroxyles) de dextrane de masse molaire moyenne en poids d'environ 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9) sont solubilisés dans un mélange DMF/DMSO , en présence de NaBH4 (0,5 g ; 13 mmol). Après 30 minutes d'agitation DABCO (l,4-Diazabicyclo[2.2.2]octane, 2,2 g ; 20 mmol) et 9 mL de toluène sont ajoutés au mélange qui est porté à 120°C sous agitation et distillé hétéroazéotropiquement. Après retour du mélange réactionnel à 80°C, 19,1 g (148 mmol) d'éthyle isocyanatoacétate sont progressivement Introduits. Après 1,5 heure de réaction, le milieu est dilué en eau et purifié par diafiltration sur membrane PES de 1 kDa contre NaOH 0,1N, NaCI 0.9% et de l'eau. La solution finale est dosée par extrait sec pour déterminer la concentration en oligosaccharide, puis dosée par dosage acide/base dans de l'eau/acétone 50 / 50 (V/V) pour déterminer le degré de substitution en charges carboxylates.
[000142] D'après l'extrait sec : [polymère] = 25,0 mg/g
[000143] D'après le dosage acide/base, le degré de substitution des fonctions hydroxyles par des fonctions N-méthyicarboxylates carbamate est de 1,65 par motif saccharidique.
[000144] La solution de N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate est acidifiée sur une résine Purolite (anionique) pour obtenir le dextrane IM- méthylcarboxylique acide qui est ensuite lyophilisé pendant 18 heures.
[000145] L'Oligosaccharide 12 est un N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate fonctionnalisé par la phénylalanine, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 10.
[000146] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 12] = 23,8 mg/g
[000147] D'après la RMN 'H : le degré de substitution en N-méthylcarboxylates fonctionnalisés par la phénylalanine est de 0,65. Oligosaccharide 13 : N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate modifié par le tryptophane [lDUGIy(1.65)Trp(1.0)]
[000148] 10 g de dextrane N-méthylcarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en N-méthylcarboxylate de 1,65 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 12, puis lyophilisés.
[000149] L'Oligosaccharide 13 est un N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate fonctionnalisé par le tryptophane, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 9.
[000150] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 13] = 37,1 mg/g
[000151] D'après la RMN *H : le degré de substitution en N-méthylcarboxylates fonctionnalisés par le tryptophane est de 1.
Oligosaccharide 14 : Dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le leucinate de cholestéryle [lDMC(1.65)LeuChol(0.05)]
[000152] 10 g de dextraneméthylcarboxylique acide caractérisé par un degré de substitution en méthylcarboxylate de 1,65 par unité glucosidique sont synthétisés à partir d'un dextrane de masse molaire moyenne en poids de 1 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 3,9), selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 3, puis lyophilisés.
[000153] Le leucinate de cholestéryle, sel d'acide paratoluènesulfonique est préparé à partir de cholestérol et de leucine selon le procédé décrit dans le brevet US 4,826,818 (Kenji M., et al.).
[000154] L'Oligosaccharide 14 est un dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le leucinate de cholestéryle, préparé selon un procédé similaire à celui décrit pour l'Oligosaccharide 1.
[000155] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 14] - 13,7 mg/g
[000156] D'après la RMN 1H : le degré de substitution en méthylcarboxylates fonctionnalisés par leucinate de cholestéryle est de 0,05.
Oligosaccharide 15 dextrane modifié par le L-aspartate de L-phehylalaninate de sodium carbamate [lDUAspPhe(l.O)] [000157] Le chlorhydrate de β-benzyle-L-aspartate de L-phenylalaninate d'ethyle est synthétisé selon un procédé de couplage peptidique décrit dans la publication (Carpino et al. J. Org. Chem. 1995, 60, 3561) à partir de l'acide 2-[(tert- butoxycarbonyl)amino]-4-benzyioxy-4-oxobutanoïque (Boc-Asp(OBzl)-OH, disponible chez Bachem) et du chlorhydrate de L-phenylalaninate d'ethyle HCI-PheOEt suivi d'une déprotection du groupement tert-butoxycarbonyl (Boc) dans l'acide chlorhydrique à 0°C.
[000158] L'isocyanate du dipeptide β-benzyle-L-aspartate de L-phenylalaninate d'éthyle est obtenu selon le procédé décrit dans la publication (Tsai, J.H. et al. Organic Synthesis 2004, 10, 544-545) à partir du chlorhydrate de β-benzyle-L-aspartate de L- phenylalaninate d'ethyle et du triphosgene (Sigma).
[000159] Le greffage de l'isocyanate du dipeptide β-benzyle-L-aspartate de L- phenylalaninate d'éthyle sur le dextrane est effectué selon le procédé décrit dans la publication (Arranz, F. et al. Makromol. Chemie 1987, 188, 2831-2838). 4 g (soit 0,07 mol de fonctions hydroxyles) de dextrane de masse molaire moyenne en poids d'environ 1 kg/mol (Pharmacosmos) sont solubilisés dans un mélange DMF/DMSO, en présence de DABCO (l,4-Diazabicyclo[2.2.2]octane). Du toluène est ajouté au mélange et le milieu est déshydraté par distillation hétéroazéotropique. A 80°C, 15,81 g (0,04 mol) d'isocyanate du dipeptide β-benzyle-L-aspartate de L-phenylalaninate d'éthyle sont progressivement introduits. Après 12 heures de réaction, le milieu est dilué en eau et purifié par diafiltration sur membrane PES de 5 kD contre NaOH 0,1N, NaCI 0,9% et de l'eau. La solution finale est dosée par extrait sec pour déterminer la concentration en polymère, dosée par dosage acide/base dans de l'eau/acétone 50 / 50 (V/V) puis analysée par RMN 1H pour déterminer le degré de fonction nalisation des hydroxyles en carbamate de L-aspartate de L-phenylalaninate de sodium.
[000160] D'après l'extrait sec : [Oligosaccharide 15] = 13,7 mg/g
[000161] D'après le dosage acide/base et la RMN 1H : le degré de substitution en carbamate de L-aspartate de L-phenylalaninate de sodium est de 1,0. Exemple 16 :
Etude des éliminations comparées de l'oligosaccharide 10 lDMC(1.65)Phe(0.65) et de son analogue 10DMC(l,l)Phe(0,45) à travers une membrane de seuil de coupure 30 kDa :
[000162] 10DMC(l.l)Phe(0.45) est synthétisé selon le même procédé que l'oligosaccharide 10 à partir du dextrane de masse molaire moyenne en poids de 10 kg/mol (Pharmacosmos, degré de polymérisation de 19). [000163J La litérature établit, sur la base du dextrane, une corrélation entre le poids moléculaire et l'élimination rénale des macromolécules (Caulfield, J. et al. The Journal of Cell biology 1974, 63, 883-903 ; Chang R.L.S. Kidney International 1975, 8, 212- 218). Ces résultats établissent que les macromolécules d'un poids molécumatre supérieur à 30 kDa sont difficilement éliminées par le rein.
[000164] Une solution de 250 mL d'oligosaccharide 10 à 20 g/L est ultrafiltrée sur membrane PES de 30 kDa contre 20 volumes d'eau. La concentration en oligosaccharide de la solution finale est déterminée par extrait sec et indique un recouvrement inférieur à 10%.
[000165] [Oligosaccharide 10] < 2 mg/g
[000166] Une solution de 250 mL de 10DMC(l.l)Phe(0.65) à 20 g/L est ultrafiltrée sur membrane PES de 30 kDa contre 20 volumes d'eau. La concentration en polymère de la solution finale est déterminée par extrait sec.
[000167] [10DMC(l.l)Phe(0.45)] > 12 mg/g. Le polymère a été recouvré après ultrafiltration avec un rendement supérieur à 60%.
[000168] Ces résultats confirment que ces oligosaccharides peuvent être éliminés par filtration de façon beaucoup plus efficace que des polymères de masse molaire plus élevée. Exemple 17 :
Solubilisation de la BMP-7 à pH neutre à un ratio massique polymère/BMP-7 de 10
[000169] Un essai de solubilisation de la Bone Morphogenetic Protein 7 (BMP-7) a été développé afin de mettre en évidence le pouvoir solubilisant de différents polymères à pH physiologique. La BMP-7 est soluble à pH acide et possède une limite de solubilité très basse à pH physiologique de l'ordre de quelques microgrammes/mL.
[000170] Les oligosaccharides décrits dans cette demande sont mis en œuvre dans ce test. Le test consiste à utiliser une solution de BMP-7 à pH acide, par exemple un tampon lactate lOmM à pH 3. La BMP-7 est à une concentration initiale de 2,47mg/ml. 2,02 mL de cette solution de BMP-7 sont mélangés à 2,7 mL d'une solution de polymère à 18,5 mg/mL contenant 18mM de tampon phosphate à pH 7,4. Après mélange le pH final est ajusté à pH physiologique par ajout d'un mélange de soude IN et d'eau pour obtenir un volume final de formulation de 5 mL. Les formulations sont analysées par observation visuelle, turbidité et diffusion dynamique de la lumière afin de détecter la présence d'agrégats.
Les résultats pour les différentes solutions sont rassemblés dans le tableau suivant.
[000171] A titre de comparaison, un polymère de masse molaire en poids de 10 kDa fonctionnaliéss par les mêmes substituants, méthylcarboxyîates et aspartate de dllauryle avec des degré de fonctionnalisation similaires conduit au même résultat.
[000172] Les oligosaccharides selon l'invention permettent donc de former des complexes avec une protéine malgré un nombre très réduit d'unités saccharidiques,

Claims

Revendications
1. Oligodextrane, choisi parmi les dextranes dont le degré de polymérisation moyen est inférieur à 10, modifié par :
• au moins un substituant de formule générale I :
-R1-[[AA]-[ 2]n]m Formule I · les substituants étant identiques ou différents lorsqu'il y a au moins deux substituants, dans lequel :
- le radical -[AA]- désigne un résidu d'acide aminé fixé sur le squelette du dextrane par l'intermédiaire d'un bras de liaison -Rt-, et portant éventuellement un radical -[R2]n
- le bras de liaison -Rt- est une chaîne carbonée en Cl à C15, éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome (tels que O, N et S) et éventuellement une fonction acide carboxylique; il forme avec le résidu d'acide aminé [AA] une liaison amide, et est directement fixé sur le squelette du dextrane par une liaison de type ester, carbamate ou éther,
- le radical -[R2]n est une chaîne carbonée en Cl à C18, éventuellement substituée,
- n étant 0, 1 ou 2,
- m étant 1 ou 2, et,
- le degré de substitution j, en -Rl-[[AA]-[R2]n]m lorsque m >0 étant compris entre 0,01 et 2,9,
et, éventuellement
• un ou plusieurs substituants de même formule générale I, dans laquelle m=0
- RI est une chaîne carbonée en Cl à C15, éventuellement substituée et/ou comportant au moins un hétéroatome (tels que O, N et S) et au moins une fonction acide carboxylique,
- le degré de substitution i, en -RI étant compris entre 0,1 et 3,
et,
• lorsque m ou n sont égaux à 0 alors les fonctions salifiables libres sont sous forme de cation, et
· i+j < 3.
2. Oligodextrane selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il a une masse molaire moyenne en nombre inférieure à 2000 g/mol.
3. Oligodextrane selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que les acides aminés sont choisis parmi les alpha acides aminés naturels.
4. Oligodextrane selon la revendication 3, caractérisé en ce les alpha acides aminés naturels sont choisis parmi les acides aminés hydrophobes choisis dans le groupe comprenant le tryptophane, la leucine, l'alanine, l'iso-leucine, la glycine, la phényialanine, la valine
5. Oligodextrane selon la revendication 3, caractérisé en ce les alpha acides aminés naturels sont choisis parmi les acides aminés polaires choisis dans le groupe comprenant l'acide aspartique, l'acide glutamique, la lysine, la sérine.
6. Oligodextrane selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le radical -R2 est issu d'un alcool hydrophobe.
7. Oligodextrane selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que le radical -R2 est issu d'un acide hydrophobe.
8. Oligodextrane selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que 0,1< i≤ 3 et 0,01 < j < 2,9.
9. Oligodextrane selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupe constitué par les oligosaccharides suivants :
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de
dilauryle [lDMC(1.03)Asp(OCi2)2(0.07)]
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de
dilauryle [lDMC(1.65)Asp(OC12)2(0.07)]
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de
dilauryle [lDMC(1.65)Asp(OC12)2(0.15)]
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de didécyle
[lDMC(1.03)Asp(OC10)2(0.05)]
· dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de dioctyle
[lDMC(1.03)Asp(OC8)2(0.07)] • dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par l'aspartate de β- benzyle [lDMC(1.65)Asp(OBzl)OH(0.6)]
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le tryptophane
[lDMC(1.65)Trp(1.0)]
· dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le phenylalaninate d'octyle [lDMC(1.03)PheOC8(0.2)]
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par le tryptophane
[lDMC(2.1)Trp(1.3)]
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par la phénylalanine
[lDMC(1.65)Phe(0.65)]
• dextraneméthylcarboxylate de sodium fonctionnalisé par la phénylalanine
[lDMC(2.1)Phe(1.0)]
• N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate modifié par la L- Phenyîalanine [lDUGIy(1.65)Phe(0,65)]
· N-méthylcarboxylate de sodium dextrane carbamate modifié par ie tryptophane
[lDUG!y(l,65)Trp(l,0)]
• dextrane modifié par le L-aspartate de L-phenylalaninate de sodium carbamate [lDUAspPhe(l.O)]
10. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend un oligosaccharides selon l'une quelconsue des revendications précédentes et un principe actif est choisi dans le groupe constitué par les protéines, les glycoprotéines, les peptides et les molécules thérapeutiques non-peptidiques.
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