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EP1421065A1 - Hydrazinopeptoides et leurs utilisations dans le traitement des cancers - Google Patents

Hydrazinopeptoides et leurs utilisations dans le traitement des cancers

Info

Publication number
EP1421065A1
EP1421065A1 EP20020796313 EP02796313A EP1421065A1 EP 1421065 A1 EP1421065 A1 EP 1421065A1 EP 20020796313 EP20020796313 EP 20020796313 EP 02796313 A EP02796313 A EP 02796313A EP 1421065 A1 EP1421065 A1 EP 1421065A1
Authority
EP
European Patent Office
Prior art keywords
group
compounds
formula
deprotected
salt
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
EP20020796313
Other languages
German (de)
English (en)
Inventor
Yannick Bonnemains
Karine Bouget
Michèle FLOC'H
Philippe Le Grel
Sandrine Aubin
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Original Assignee
Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Centre National de la Recherche Scientifique CNRS filed Critical Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Publication of EP1421065A1 publication Critical patent/EP1421065A1/fr
Withdrawn legal-status Critical Current

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Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/06—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom containing only hydrogen and carbon atoms in addition to the ring nitrogen atom
    • C07D213/16—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom containing only hydrogen and carbon atoms in addition to the ring nitrogen atom containing only one pyridine ring
    • C07D213/20—Quaternary compounds thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C243/00—Compounds containing chains of nitrogen atoms singly-bound to each other, e.g. hydrazines, triazanes
    • C07C243/24—Hydrazines having nitrogen atoms of hydrazine groups acylated by carboxylic acids
    • C07C243/26—Hydrazines having nitrogen atoms of hydrazine groups acylated by carboxylic acids with acylating carboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C243/34—Hydrazines having nitrogen atoms of hydrazine groups acylated by carboxylic acids with acylating carboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of a carbon skeleton further substituted by nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C281/00—Derivatives of carbonic acid containing functional groups covered by groups C07C269/00 - C07C279/00 in which at least one nitrogen atom of these functional groups is further bound to another nitrogen atom not being part of a nitro or nitroso group
    • C07C281/02—Compounds containing any of the groups, e.g. carbazates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F5/00—Compounds containing elements of Groups 3 or 13 of the Periodic Table
    • C07F5/02—Boron compounds
    • C07F5/025—Boronic and borinic acid compounds

Definitions

  • the present invention relates to 'the use of hydrazinopepto ⁇ diques compounds within the scope of tumor therapy.
  • the invention also relates to new hydrazinopeptoid compounds, as well as their methods of synthesis.
  • the cell cycle of most cells allows them to increase in size, double their amount of DNA, and then separate and distribute their chromosomes to give birth to two daughter cells that are identical to each other and identical to the cell of which they are. issues.
  • the cell cycle is divided into two very distinct periods: the interphase during which T DNA replication occurs and mitosis.
  • the replication and mitosis phases are controlled by protein complexes regulated by their phosphorylation state and / or their degradation.
  • Many neurodegenerative and / or cancerous pathologies associated with the presence of incorrectly structured proteins (aberration in the secondary and tertiary structure of the molecule) or with the presence of proteins not degraded at a stage where it is essential that they either, are currently known.
  • the ubiquitin / proteasome system plays a major role in intracellular proteolysis, the breakdown of a certain number of proteins associated with the good progress of the cell cycle. Inactivation of the proteasome by specific inhibitors of the active site will make it possible to understand the mechanics of the dysfunction of protein degradation and thus to envisage new classes of antitumor molecules.
  • peptide-aldehyde inhibitors of calpain and proteasome such as N-acetyl-leucinyl-leucinyl-norleucinal (ALLN).
  • ALLN N-acetyl-leucinyl-leucinyl-norleucinal
  • MG132 benzyloxycarbonyl leucinyl-leucinyl-leucinal
  • AVP N-acetyl-leucinyl-valinyl-phenylalaninal
  • ALLM N-acetyl-leucmyl-leucmyl-methioninal
  • the transformed peptides and in particular the pseudopeptides arouse a great interest because they are able to behave like more effective analogues than the peptides themselves whose therapeutic applications are however limited by a significant biodegradability, a weak power of crossing of the physiological barriers and by the lack of selectivity vis-à-vis the target. It is therefore necessary to design more active, more stable and more specific analogs.
  • Pseudopeptides for which the chemical nature of the peptide backbone and of the amide bond (CO-NH) is modified make it possible to induce a much greater bioavailability than that of the mimed peptides while preserving good biological activity.
  • pseudopeptides such as azapeptides and peptoids
  • This property of pseudopeptides is linked in particular to the resistance induced with respect to peptidases, which very quickly degrade any exogenous peptide by cutting the peptide skeleton at the level of the amide bonds, and whose action is then slowed down by the modification of these links.
  • the present invention follows from the discovery by the Inventors of the fact that the hydrazinopeptoid compounds of formula (I), described below, have a specific action on cancer cells by induction of apoptosis of the latter according to a mechanism of inhibition of the enzymatic activities produced by the proteasome.
  • the subject of the invention is the use of compounds of general formula (I) below:
  • n represents an integer from 1 to 10, in particular n represents 1 or 2,
  • Y represents CH 2 and Z represents CO, or Y represents CO and Z represents CH 2 ,
  • R ⁇ independently of each other, represent: o a hydrogen atom, o a group which can be used in the context of the protection of nitrogen atoms in peptide synthesis, such as the group BOC, FMOC or Z, o a group of formula -COR, or -CH 2 COR in which R represents:
  • R 1 is hydrogen, it is in the form of a salt soluble in aqueous solvents, such as a trifluoroacetate salt,
  • an alkyl group of 1 to 10 carbon atoms optionally substituted by one or more halogen atoms, such as the groups R representing -CF 3 or a group -CH 2 X, X representing a halogen atom such that Cl or Br, or an above-mentioned alkyl group substituted by a cyano group, such as the group R representing -CH 2 -CN, or by a sulfur group such as the group R representing -CH 2 -SC 2 H 5 ,
  • R a represents H or an alkyl group, such as a methyl or ethyl group
  • an alkoxy group such as a methoxy -OMe, or ethoxy -OEt group
  • R, R 3 , R4 and R5 independently of each other, representing: o a hydrogen atom, o an alkyl group of 1 to 10 carbon atoms, optionally substituted, in particular by one or more atoms of halogen or by one or more amino or phenyl groups, such as butyl, isobutyl, - (CH 2 ) 4 NH 2 , -CH 2 Ph, - (CH 2 ) 4 NHBoc,
  • Ri represents a BOC, FMOC, Z or H group, provided that when
  • R ⁇ represents H, this is in the form of a salt, such as a salt of
  • R 2 represents H or an alkyl group of 1 to 10 carbon atoms, such as an isobutyl group
  • R 3 represents H or an alkyl group of 1 to 10 carbon atoms, such as an isobutyl group
  • one of i or R 5 represents H, while the other represents an alkyl group as defined above, and R ⁇ represents a group of formula
  • n 1 or 2
  • Y and Z are as defined above.
  • the invention relates more particularly still to the above-mentioned use of compounds of general formula (I) in which R 5 represents H, and R ⁇ represents a group -COR or -CH 2 COR in which R represents a group -CH 2 X, X representing a halogen atom such as Cl or Br, or a pyridinium group.
  • a more particular subject of the invention is also the above-mentioned use of compounds of general formula (I) in which R 5 represents H and R 6 represents a
  • the invention relates more particularly still to the aforementioned use of compounds of general formula (I) in which Ri and R 2 represent H.
  • n, and Ri to R ⁇ are as defined above.
  • the deprotected compounds being in the form of a salt, such as a trifluoroacetate salt.
  • the deprotected compounds being in the form of a salt, such as a trifluoroacetate salt.
  • a subject of the invention is also the aforementioned use of the compounds of general formula (I), in which Y represents CO and Z represents CH 2 , namely the compounds of formula (Ib) below:
  • n, and Ri to R ⁇ 5 are as defined above.
  • Ri represents a group Z, or H, provided that when Ri represents H, the latter is in the form of a salt, such as a trifluoroacetate salt of formula CF 3 CO 2 ⁇ H 3 N + -
  • R 2 or R represents H, while the other represents an alkyl group as defined below, in particular an isobutyl group,
  • R 4 represents an alkyl group as defined above, in particular an isobutyl group, or a group -CH 2 C 6 H 5 , or (CH 2 ) -NH 2 , or - (CH 2 ) 4 -NHBoc.
  • R 5 represents H
  • R 6 represents a group of formula -COR as defined above
  • R 5 in combination with R ⁇ represents a group of formula
  • a more particular subject of the invention is the use of the compounds defined above, for the preparation of a medicament intended for the treatment of cancers such as cancers of the liver, of the colon, of the breast, by inducing the entry into apoptosis cancer cells by inhibiting the functioning of the proteasome.
  • a subject of the invention is also the compounds of general formula (I) mentioned above, and more particularly those of formula (la) and (Ib) defined above. O 03/018557
  • R 5 represents H
  • R 6 represents a group -COR or -CH 2 COR in which R represents a group -CH 2 X, X representing a halogen atom such as Cl or Br, or a pyridimurn group,
  • the deprotected compounds being in the form of a salt, such as a trifluoroacetate salt.
  • the invention also relates to the compounds of general formula (la) in which:
  • one of P ⁇ or R 5 represents H, while the other represents an alkyl group as defined above,
  • R 2 , R 3 and Rg are as defined above.
  • a subject of the invention is also the compounds of general formula (Ib) defined above.
  • Ri represents a group Z, or H, provided that when Ri represents H, the latter is in the form of a salt, such as a trifluoroacetate salt of formula CF 3 CO 2 ⁇ , H 3 N + - - l one of R 2 or of R 3 represents H, while the other represents an alkyl group as defined above, in particular an isobutyl group,
  • - A represents an alkyl group as defined above, in particular an isobutyl group, or a group -CH 2 C 6 Hs, or (CH 2 ) 4 -NH 2 , or - (CH 2 ) 4 -NHBoc, - R 5 represents H, and Rg represents a group of formula -COR as defined above,
  • the invention also relates to any pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising a compound of formula (I) as defined above in association with a pharmaceutically acceptable vehicle.
  • compositions of the invention are administered orally or subcutaneously, and are in the form of doses. about 20 to 50 mg each, for a daily administration of about 100 mg / kg.
  • the subject of the invention is also the process for the synthesis of the compounds of formula (I) defined above, and mainly comprising the following steps:
  • ALLN inhibitor of cysteine proteases and proteasome
  • ALLN has a terminal aminoaldehyde C as an electrophilic group.
  • Other inhibitors of comparable activities have been developed such as the dipeptide Z-Leu-Norleu-H also shown in the diagram.
  • amino aldehydes are not very stable and racemize very quickly, which leads to a loss of activity.
  • the inventors therefore synthesized analogs having no center of asymmetry of fixed configuration in order to obtain a specific inhibition activity for the degradation of the proteins involved in the cycle.
  • ALLN N-acetyl-Leucyl-Leucyl-Norleucinal
  • the cells can then start a second cycle.
  • the peptidomimetics which have been synthesized according to an iterative method are hydrazinoazapeptoids approaching the class of peptoids, azatides and ureapeptoids, since they have no center of asymmetry of fixed configuration.
  • the oligomers of these different families with a peptidomimetic vocation all share the characteristic of presenting their side chains, mimicking their amino acid counterparts, on nitrogen atoms which are isoelectronic of CH ⁇ which gives them great conformational freedom.
  • Other potential benefits also result from this, such as a simplification of the synthesis methods (elimination of stereochemical problems) and greater resistance of such analogs to modified skeletons with respect to the action of peptidases, by modifying the amide bond.
  • N-hydrazino acids are introduced in two chemical steps which can be repeated.
  • the presence in hydrazinoazapeptoidal units of additional nitrogen atoms compared to natural peptides offers the possibility from this method of introducing on this atom side chains of various natures.
  • the inventors have thus been able to introduce various functionalities (trifluoroacetyl, ketoester, amide, etc.). We know that the electrophilia of such functions is lessened when they are carried by a nitrogen atom, but it is moreover a bias to increase the selectivity of an inhibitor with respect to cysteine proteases (SH plus nucleophile than OH).
  • the various pseudopeptides synthesized are indicated below.
  • the inventors have also deprotected the N terminal end and introduced a new hydrazinopeptoid unit by repeating steps A and B in order to obtain a tripeptide analog (PTPl) closer to the tripeptide structure of ALLN.
  • PTP1 tripeptide analog
  • Bromoacetylation In a solution cooled to 0 ° C., with stirring of N-protected hydrazine, described in the article by Cheguillaume et al. above, (10 mmol, 1 equi) in dichloromethane (10 ml) and pyridine (12 mmol, 1.2 equi), bromoacetyl bromide (12 mmol, 1.2 equi) is added dropwise in dichloromethane (10 ml). The mixture is stirred for 5 hours then washed three times with 50 ml of water. The organic phase is dried over sodium sulfate, the solvent is evaporated off under reduced pressure and, depending on the nature of the protective group, the product precipitates (Fmoc, Z) or is obtained in the form of an oil (CONH 2 ).
  • ketone and keto-ester groups In a solution cooled to 0 ° C, with stirring, of pseudodipeptoid (5 mmol, 1 equi) in ether (5 ml) and triethylamine (5.5 mmol, 1.1 equi), the electrophilic agent (5.5 mmol, 1.1 equi) is added dropwise in solution in ether (5 ml) (trifluoroacetic anhydride and ethyloxalyl chloride). The reaction medium is left under stirring for 6 hours.
  • the triethylammonium salt When the triethylammonium salt is insoluble in ether, it is filtered and the filtrate is evaporated under reduced pressure; when it is not, the medium is washed three times with 30 ml of water, the organic phase is dried over sodium sulfate and the solvent is evaporated under reduced pressure. In both cases, the expected product precipitates slowly in cold ether.
  • borylated group To a stirred solution of pseudopeptoid (5 mmol, 1 equi) in 5 ml of ether is added in small fractions the borylated aldehyde (5.5 mmol, 1.1 equi) in solution in the ether (10 mL). A white precipitate forms instantly, but the medium is left under stirring for 1 hour. The white precipitate is filtered on a frit and is washed several times with ether.
  • the molecules synthesized were tested in vitro on the described proteolytic activities of the proteasome and then in vivo on cultures of Xenopus cells (XL2).
  • XL2 Xenopus cells
  • the compounds P14 and P17 exhibit a particularly interesting inhibitory activity. It is possible to inhibit the proteasome activity by 70% with 2mM of these compounds. ImN of ALLN is necessary to inhibit this activity by 90%.
  • Two inhibitors P14 and P17 exhibit an activity comparable to that of ALLN, if the percentage of cells blocked in mitosis is analyzed.
  • the percentage of cells blocked in mitosis is greater than 20% for many of these products.
  • the inventors have therefore improved the bioactivity of the products by the modification of the C-terminal end and by the position of the side chains on the pseudopeptide skeleton.
  • the concentration of P14 necessary, in order to obtain a blockage in equivalent mitosis in the medium is 2 ⁇ M.
  • the two inhibitors P14 and P17 are capable of blocking the progression of the cycle and more particularly in mitosis. It can be seen that the concentration of P14 in the medium, necessary to obtain a blockage in mitosis is 2 ⁇ M while the concentration of ALLN which allows the blocking of cells in mitosis is 100 ⁇ M. inhibitors tested
  • R 6 COCH 2 Br.
  • the monomer (A. Cheguillaume, I. Dzzi-Bounoua, M. Baudy-Floc'h, P. Le Grel Synlett, 2000, 3, 331-334) deprotected at the N-terminal end (3.0 mmol), DMAP (0.1 mmol) and the deprotected monomer at the C-terminal end (3.0 mmol) are dissolved in 50 ml of dichloromethane. The temperature of the reaction mixture is lowered to 0 ° C and the DCC (4.5 mmol), 1.5 equi.) Is added in small portions. After 5 min at this temperature, the reaction mixture is left to stir overnight. The DCU formed is filtered through celite and the residue obtained is purified by flash chromatography. After washing with a 2N aqueous hydrochloric acid solution, drying over sodium sulfate, the solvent is evaporated. The dimer obtained is then deprotected in the N-terminal position and re-functionalized according to the above methods.
  • the proteasome is a protein structure involved in the degradation processes of regulatory proteins in the cycle; it is a protein structure which has several proteolytic activities associated with different subunits of the proteasome.
  • proteasome inhibitors can stop cell progression and cause apoptosis, they have become potentially very attractive drugs for the treatment of certain tumors.
  • Proteasome inhibitors have very serious anti-cancer potential and the numerous clinical studies currently underway to assess their role as an adjuvant in cliotherapy protocols demonstrate this importance.
  • the compounds PR7, PR6 and P21 are proliferation inhibitors and they do not affect cell viability.
  • the compounds PR1, PR2, PR3, PR5, PR8 and P22 (non-retro compound described above) and inhibit proliferation and cause cell death with kinetics which vary from 2 to 12 hours depending on the products.

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Abstract

L'invention concerne l'utilisation de composés de formule générale (I) dans laquelle n représente un nombre entier de 1 à 10; Rl et R6, indépendamment l'un de l'autre, représentent un atome d'hydrogène, un groupe utilisable dans le cadre de la protection des atomes d'azote en synthèse peptidique ou un groupe de formule -COR ou -CH2COR dans laquelle R représente un atome d'hydrogène, un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, un groupe -COORa dans lequel Ra représente H ou un groupe alkyle, un groupe amine primaire -NH2 ou une amine II<re> ou III<re>, un groupe alkoxy, un groupe phényle ou un groupe pyridinium ; R2, R3, R4 et R5, indépendamment les uns des autres, représentent un atome d'hydrogène, un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, Y représente CH2 et Z représente CO, ou Y représente CO et Z représente CH2, pour la préparation d'un médicament pour le traitement des pathologies tumorales ou des maladies neurodégénératives telles que les maladies d'Alzheimer ou de Lehn.

Description

HYDRAZINOPEPTOIDES ET LEURS UTILISATIONS DANS LE TRAITEMENT DES CANCERS
La présente invention a pour objet ' l'utilisation de composés hydrazinopeptoïdiques dans le cadre du traitement des tumeurs. L'invention a également pour objet de nouveaux composés hydrazinopeptoïdiques, ainsi que leurs procédés de synthèse.
Le cycle cellulaire de la plupart des cellules leur permet d'augmenter en taille, de doubler leur quantité d'ADN, et ensuite de séparer et répartir leurs chromosomes pour donner naissance à deux cellules filles identiques entre elles et identiques à la cellule dont elles sont issues. Le cycle cellulaire est divisé en deux périodes bien distinctes : l'interphase pendant laquelle se produit la réplication de T ADN et la mitose. Les phases de réplication et de mitose sont contrôlées par des complexes protéiques régulés par leur état de phosphorylation et/ou leur dégradation. De nombreuses pathologies neuro- dégénératives et/ou cancéreuses, associées à la présence de protéines incorrectement structurées (aberration dans la structure secondaire et tertiaire de la molécule) ou à la présence de protéines non dégradées à un stade où il est indispensable qu'elles le soient, sont connues actuellement. Le système ubiquitine/protéasome joue un rôle majeur dans la protéolyse intracellulaire, la dégradation d'un certain nombre de protéines associées au bon déroulement du cycle cellulaire. L'inactivation du protéasome par des inhibiteurs spécifiques du site actif permettra de comprendre la mécanistique du dysfonctionnement de la dégradation des protéines et ainsi d'envisager de nouvelles classes de molécules antitumorales.
Il a été observé que des peptides-aldéhydiques inhibiteurs de la calpaïne et du protéasome tel que le N-acétyl-leucinyl-leucinyl-norleucinal (ALLN). le benzyloxycarbonyl leucinyl-leucinyl-leucinal (MG132) et le N-acétyl-leucinyl-valinyl- phénylalaninal (ALVP), mais pas le N-acétyl-leucmyl-leucmyl-méthioninal (ALLM), ont une action synergique dans la suppression de la prolifération cellulaire et l'induction de l'apoptose dans trois lignées cellulaires tumorales humaines ainsi que dans les adénocarcinomes pulmonaires, les carcinomes de prostate, et les carcinomes du sein (Cusak JC, Liu R, Houston M, Adendroth K, Elliot PJ, Adams J and Baldwin AS Jr (2001) Cancer Res, 61, 3535-3540 ; Soligo D, Servida D, Fontanella E, Lamorte G, Caneva L, Fumiatti R, and Lambertenghi Deliliers G (2001) Br J Haematol, 113, 126- 135 ; Sun J, Nam S, Lee CS, Li B, Coppola D, Hamilton AD, Dou QP and Sebti SM (2001) Cancer Res, 61, 1280-1284.
Les peptides transformés et en particulier les pseudopeptides suscitent un grand intérêt car ils sont capables de se comporter comme des analogues plus efficaces que les peptides eux-mêmes dont les applications thérapeutiques sont toutefois limitées par une biodégradabilité importante, un faible pouvoir de franchissement des barrières physiologiques et par le manque de sélectivité vis-à-vis de la cible. Il est donc nécessaire de concevoir des analogues plus actifs, plus stables et plus spécifiques. Les pseudopeptides pour lesquels la nature chimique du squelette peptidique et de la liaison amide (CO-NH) est modifiée, permettent d'induire une biodisponibilité bien plus importante que celle des peptides mimés tout en préservant une bonne activité biologique. Cette propriété des pseudopeptides, tels que les azapeptides et les peptoïdes, est liée notamment à la résistance induite vis-à-vis des peptidases, qui dégradent très rapidement tout peptide exogène en coupant le squelette peptidique au niveau des liaisons amide, et dont l'action est alors ralentie par la modification de ces liaisons.
Des composés précurseurs dans le domaine des hydrazinopeptoïdes, ainsi que leurs procédés de synthèse, sont décrits dans l'article de Cheguillaume et al, J. Org. Chem., 1999, 64, 2924-2927. Toutefois, cet article ne décrit aucune des propriétés biologiques de ces composés.
Par ailleurs, l'article de Bouget et al. paru dans Peptides 2000, Jean Martinez and Jean-Alain Fehrentz (Eds.) EDK, Paris, France © 2001, pp 793-794, décrit l'effet de composés de type hydrazinopeptoïdes dans le cadre de l'inhibition de la progression du cycle cellulaire. Toutefois, les résultats présentés dans cet article peuvent être liés à tout autre mécanisme non spécifique des cellules cancéreuses que celui impliquant le protéasome (tel que la dépolymérisation des microtubules entraînant une désorganisation du cytosquelette et provoquant ainsi un arrêt du cycle), ce qui rendrait impossible l'utilisation des composés décrits dans cet article dans le cadre du traitement des cancers. La présente invention découle de la mise en évidence par les Inventeurs du fait que les composés hydrazinopeptoïdes de formule (I), décrits ci-après, ont une action spécifique sur les cellules cancéreuses par induction de l'apoptose de ces dernières selon un mécanisme d'inhibition des activités enzymatiques produites par le protéasome. L'invention a pour objet l'utilisation de composés de formule générale (I) suivante :
dans laquelle :
" n représente un nombre entier de 1 à 10, notamment n représente 1 ou 2,
" Y représente CH2 et Z représente CO, ou Y représente CO et Z représente CH2,
» Ri et RÔ, indépendamment l'un de l'autre, représentent : o un atome d'hydrogène, o un groupe utilisable dans le cadre de la protection des atomes d'azote en synthèse peptidique, tel que le groupe BOC, FMOC ou Z, o un groupe de formule -COR, ou -CH2COR dans laquelle R représente :
> un atome d'hydrogène, sous réserve que lorsque Ri est un hydrogène, celui-ci se présente sous forme d'un sel soluble dans les solvants aqueux, tel qu'un sel de trifluoroacétate,
> un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, tels que les groupes R représentant -CF3 ou un groupe -CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou un groupe alkyle susmentionné substitué par un groupe cyano, tel que le groupe R représentant -CH2-CN, ou par un groupe soufré tel que le groupe R représentant -CH2-SC2H5,
> un groupe -COORa dans lequel Ra représente H ou un groupe alkyle, tel qu'un groupe méthyle ou éthyle,
> un groupe aminé primaire -NH2 ou une a iné JJre ou Iïïre,
> un groupe alkoxy, tel qu'un groupe méthoxy -OMe, ou éthoxy -OEt,
> un groupe phényle, > un groupe pyridinium, tel que le groupe de formule
" R , R3, R4 et R5, indépendamment les uns des autres, représentant : o un atome d'hydrogène, o un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué, notamment par un ou plusieurs atomes d'halogène ou par un ou plusieurs groupes aminé ou phényle, tels que les groupes butyle, isobutyle, -(CH2)4NH2, -CH2Ph, -(CH2)4NHBoc,
" ou Ri en association avec R2, ou RÔ en association avec R5, représentent un
pour la préparation d'un médicament pour le traitement des pathologies tumorales ou des maladies neurodégénératives telles que les maladies d'Alzheimer ou de Lehn.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée de composés de formule générale (I) dans laquelle :
• Ri représente un groupe BOC, FMOC, Z ou H, sous réserve que lorsque
R\ représente H, celui-ci se présente sous forme de sel, tel qu'un sel de
+ trifluoroacétate de formule CF3CO2 , Fi3N -,
" R2 représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle, " R3 représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle, ; " l'un de i ou de R5 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, et Rό représente un groupe de formule
-COR ou -CH2COR tel que défini ci-dessus, » ou R5 en association avec Rβ représente groupe de formule
n représente 1 ou 2,
Y et Z sont tels que définis ci-dessus. . L'invention concerne plus particulièrement encore l'utilisation susmentionnée de composés de formule générale (I) dans laquelle R5 représente H, et RÔ représente un groupe -COR ou -CH2COR dans lequel R représente un groupe -CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou un groupe pyridinium.
L'invention a plus particulièrement pour objet encore l'utilisation susmentionnée de composés de formule générale (I) dans laquelle R5 représente H et R6 représente un
L'invention concerne plus particulièrement encore l'utilisation susmentionnée de composés de formule générale (I) dans laquelle Ri et R2 représentent H.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation -susmentionnée des composés de formule générale (I) dans laquelle Y représente CH2 et Z représente CO, à savoir les composés de formule (la) suivante :
dans laquelle n, et Ri à RÔ sont tels que définis ci-dessus.
Des composés de formule (la) particulièrement préférés à utiliser dans le cadre de la présente invention sont ceux de formules suivantes :
déprotégé
déprotégé
déprotégé
PI 3 déprotégé
P14 déprotégé
déprotégé
déprotégé
déprotégé
déprotégé
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation susmentionnée des composés de formule (la) correspondant aux formules suivantes :
déprotégé
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate. L'invention a également pour objet l'utilisation susmentionnée des composés de formule générale (I), dans laquelle Y représente CO et Z représente CH2, à savoir les composés de formule (Ib) suivante :
dans laquelle n, et Ri à R<5 sont tels que définis ci-dessus.
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation "susmentionnée de composés de formule (Ib) définie ci-dessus dans laquelle :
- n représente 1,
- Ri représente un groupe Z, ou H, sous réserve que lorsque Ri représente H, celui-ci se présente sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate de formule CF3CO2 ~ H3N+-
- l'un de R2 ou de R représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessμs, notamment un groupe isobutyle,
- R4 représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, notamment un groupe isobutyle, ou un groupe -CH2C6H5, ou (CH2) -NH2, ou -(CH2)4-NHBoc.
- R5 représente H, et R6 représente un groupe de formule -COR tel que défini ci-dessus,
- ou R5 en association avec Rβ représente un groupe de formule
Des composés de formule (Ib) particulièrement préférés à utiliser dans le cadre de la présente invention sont ceux de formules suivantes :
L'invention a plus particulièrement pour objet l'utilisation des composés définis ci-dessus, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de cancers tels que les cancers du foie, du colon, du sein, en induisant l'entrée en apoptose des cellules cancéreuses par inhibition du fonctionnement du protéasome.
L'invention a également pour objet les composés de formule générale (I) susmentionnée, et plus particulièrement ceux de formule (la) et (Ib) définies ci-dessus. O 03/018557
12
. L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule générale (la) dans laquelle :
- n = 1,
- R5 représente H, et R6 représente un groupe -COR ou -CH2COR dans lequel R représente un groupe -CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou un groupe pyridimurn,
- Ri à Rt sont tels que définis ci-dessus.
L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule (la) j susmentionnés, correspondant aux formules suivantes :
déprotégé
déprotégé
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate. L'invention concerne également les composés de formule générale (la) dans laquelle :
- n = 2,
- l'un de P^ ou de R5 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus,
- Ri, R2, R3 et Rg, sont tels que définis ci-dessus.
L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule (la) susmentionnés correspondant aux formules suivantes :
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate. L'invention a également pour objet les composés de formule générale (Ib) définie ci-dessus.
A ce titre, l'invention concerne plus particulièrement les composés de formule (Ib) définie ci-dessus dans laquelle :
- n représente 1,
- Ri représente un groupe Z, ou H, sous réserve que lorsque Ri représente H, celui-ci se présente sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate de formule CF3CO2 ~, H3N+- - l'un de R2 ou de R3 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, notamment un groupe isobutyle,
- A représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, notamment un groupe isobutyle, ou un groupe -CH2C6Hs, ou (CH2)4-NH2, ou -(CH2)4-NHBoc, - R5 représente H, et Rg représente un groupe de formule -COR tel que défini ci-dessus,
- ou R5 en association avec R représente un groupe de formule
L'invention a plus particulièrement pour objet les composés de formule (Ib) correspondant aux formules suivantes :
PR7 PR8
L'invention a également pour objet toute composition pharmaceutique comprenant un composé de formule (I) telle que définie ci-dessus en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Avantageusement, les compositions pharmaceutiques de l'invention sont administrées par voie orale ou sous-cutanée, et se présentent sous forme de doses unitaires d'environ 20 à 50 mg, pour une administration journalière d'environ 100 mg/kg.
L'invention a également pour objet le procédé de synthèse des composés de formule (I) définie ci-dessus, et comprenant principalement les étapes suivantes :
substitution du composé de formule
avec les produits de formule
ce qui conduit respectivement à l'obtention de composés de formules A et B
B
dans lesquelles *, R5 et Rβ sont tels que définis ci-dessus,
réaction du composé de formule
dans lequel Ri à R3 sont tels que définis ci-dessus, avec les composés de formules A et B susmentionnées, ce qui conduit respectivement aux composés de formule (I) ci- après :
dans laquelle Ri. à R6 sont tels que définis ci-dessus, - le cas échéant, une étape de déprotection par élimination du groupe Ri, notamment selon les méthodes de déprotection décrites ci-après,
- le cas échéant, la répétition des étapes susmentionnées, pour allonger la chaîne du composé de formule (I) du nombre n souhaité. L'invention sera davantage illustrée dans la description détaillée qui suit de la synthèse de composés de l'invention, et de l'étude de leurs propriétés biologiques.
L'ALLN (inhibiteur des cystéines protéases et du protéasome) possède un aminoaldéhyde C terminal comme groupement électrophile. D'autres inhibiteurs d'activités comparables ont été développés tel que le dipeptide Z-Leu-Norleu-H également représenté sur le schéma. Toutefois, il est bien connu que les amino aldéhydes sont peu stables et se racemisent très rapidement, ce qui entraîne une perte d'activité. Les Inventeurs ont donc synthétisé des analogues ne possédant aucun centre d'asymétrie de configuration fixée afin d'obtenir une activité d'inhibition spécifique de la dégradation des protéines impliquées dans le cycle.
ALLN Ki= 0,19μM Ki= 0, 07μM
L'ALLN (le N-acétyl-Leucyl-Leucyl-Norleucinal) inhibe la progression du cycle cellulaire en affectant la transition Gl/S et la transition métaphase - anaphase. De fortes concentrations d' ALLN (> 50 μg/ml) produisent un arrêt prolongé en mitose tandis que des concentrations plus faibles ont pour conséquence un ralentissement de la mitose.
Les cellules peuvent ensuite engager un second cycle.
C'est la reproduction de l'activité de ces peptides impliqués dans les fonctions cellulaires que les Inventeurs ont visé à travers la synthèse de peptidomimétiques tels que les hydrazinoazapeptoïdes et les hydrazinopeptoïdes qui sont des analogues peptidiques (franchissement des barrières physiologiques maximal, résistance aux peptidases).
Les peptidomimétiques qui ont été synthétisés selon une méthode itérative sont des hydrazinoazapeptoïdes se rapprochant de la classe des peptoïdes, des azatides et des uréapeptoïdes, puisqu'ils ne possèdent aucun centre d'asymétrie de configuration fixée. Les oligomères de ces différentes familles à vocation peptidomimétique partagent tous la caractéristique de présenter leurs chaînes latérales, mimant leurs homologues aminoacides, sur des atomes d'azote qui sont isoélectroniques des CHα ce qui leur confère une grande liberté conformationnelle. D'autres bénéfices potentiels en résultent également tels qu'une simplification des méthodes de synthèse (suppression des problèmes stéréochimiques) et une plus grande résistance de tels analogues aux squelettes modifiés vis à vis de l'action des peptidases, de par la modification de la liaison amide.
I) SYNTHESES DES COMPOSES DE FORMULE (la)
Les unités "N-hydrazinoacides" sont introduites en deux étapes chimiques qui peuvent être réitérées. De plus la présence dans les motifs hydrazinoazapeptoidiques d'atomes d'azote supplémentaires par rapport aux peptides naturels offre la possibilité à partir de cette méthode d'introduire sur cet atome des chaînes latérales de natures variées.
Nα h N aza
Aia Nature des unités Nα-hydraz in o acides en fonction de R Les Inventeurs ont synthétisé, selon la méthodologie ci-dessus, les composés associant une unité aza amino ester, respectivement N-aza amino ester C terminale à α une unité N -hydrazino acide. Ceci permet d'obtenir un squelette pseudodipeptidique qui présente les chaînes latérales mimant les aminoacides Leucine, Norleucine et Phénylalanine présents dans la plupart des inhibiteurs connus à ce jour, dans diverses positions relatives Le clivage sélectif du groupement protecteur de l'extrémité C terminale permet ensuite de refonctionnaliser et d'introduire ainsi des groupements susceptibles d'interagir avec la chaîne latérale de la cystéine. Les Inventeurs ont ainsi pu introduire diverses fonctionnalités (trifluoroacétyle, cétoester, amide...). On sait que l'électrophilie de telles fonctions est amoindrie lorsqu'elles sont portées par un atome d'azote mais c'est par ailleurs un biais pour augmenter la sélectivité d'un inhibiteur vis-à-vis des cystéines proteases (SH plus nucléophile que OH). Les différents pseudopeptides synthétisés sont indiqués ci-après.
Les Inventeurs ont par ailleurs déprotégé l'extrémité N terminale et introduit une nouvelle unité hydrazinopeptoïdique par réitération des étapes A et B afin d'obtenir un analogue tripeptidique (PTPl) plus proche de la structure tripeptidique de l'ALLN. R PTP1
1 HYDRAZINES BROMOACETYLEES
Bromoacétylation : A une solution refroidie à 0°C, sous agitation d'hydrazine N- protégée, décrite dans l'article de Cheguillaume et al. susmentionné, (10 mmol, 1 équi) dans le dichloromethane (10 ml) et la pyridine (12 mmol, 1,2 équi), est ajouté goutte à goutte le bromure de bromoacétyle (12 mmol, 1,2 équi) dans le dichloromethane (10 ml). Le mélange est agité pendant 5 heures puis lavé trois fois par 50 ml d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, le solvant est évaporé sous pression réduite et, selon la nature du groupement protecteur, le produit précipite (Fmoc, Z) ou est obtenu sous forme d'huile (CONH2).
Br-CH2CO-azaLeu-Fmoc
Rdt 45% ; pf = 133°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,83 (large, 6H), 1,73 (large, 1H), 2,81 (large, 2H), 3,26 (s large, 2H), 4,22 (large, 1H), 4,55 (d, 2H), 7,25-7,77 (m, 8H), 8,28 (s, 1H) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 19,8 (q), 26,2 (t), 26,7 (d), 47,1 (d), 56,8 (t), 67,5 (t), 119,9 (d), 124,7 (d), 127,1 (d), 127,7 (d), 141,3 (s), 143,5 (s), 155,9 (s),
164,8 (s) ; Analyse calculée pour C2ιH23N2O3Br : C, 58,47 ; H, 5,34 ; N, 6,50 ; Br, 18,56. Trouvée : C, 58,52 ; H, 5,50 ; N, 6,64 ; Br, 17,98. Br-CH CO-azaNorleu-Fmoc
Rdt 58% ; pf = 118°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 1,06 (t, 3H), 1,41 (m, 2H), 1,61 (m, 2H), 3,63 (large, 2H), 3,81-4,01 (s large, 2H), 4,38 (t, IH), 4,69 (d, 2H), 7,44-7,95 (m, 8H), 8,15 (s large, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 14,1 (q), 20,2 (t), 26,7 (t), 29,9 (t), 47,5 (d), 49,9 (t), 68,3 (t), 119,9 (d), 120,4 (d), 125,2 (d), 127,6 (d), 128,2 (d), 141,8 (s), 144,1 (s), 155,9 (s), 165,1 (s) ; Analyse calculée pour C21H23N2O3Br : C, 58,47 ; H,
5,34 ; N, 6,50 ; Br, 18,56. Trouvée : C, 58,43 ; H, 5,16 ; N, 6,44 ; Br, 17,90.
Br-CH2CO-N-azaLeu-Fmoc
Rdt 95% ; pf = 154°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,89 (d, 6H), 1,81 (m, IH), 3,59 (large, 2H), 3,93 (s large, 2H), 4,26 (t, IH), 4,74 (large, 2H), 6,84 (s, IH), 7,32- 7,89 (m, 8H) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 19,9 (q), 26,1 (d), 26,2 (t), 47,4 (d), 54,9 (t),
66,9 (t), 120,2 (d), 125,1 (d), 127,1 (d), 128,2 (d), 141,4 (s), 143,1 (s), 154,5 (s), 169,3 (s) ; Analyse calculée pour C2ιH23N2O3Br : C, 58,47 ; H, 5,34 ; N, 6,50 ; Br, 18,56. Trouvée : C, 56,13 ; H, 4,93 ; N, 6,89 ; Br, 19,44. >
Br-CH2CO-N-azaNorleu-Fmoc
Rdt 49% ; pf = 155°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 0,87 (t, 3H), 1,24 (large, 2H),
1,36 (large, 2H), 1,79 (s, 2H), 3,57 (s, 2H), 3,60 (s large, 2H), 4,20 (t, IH), 4,67 (large, 2H), 7,25-7,40 (m, 8H) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 13,7 (q), 19,7 (t), 26,3 (t), 28,2 (t), 47,3 (d), 47,7 (t), 66,9 (t), 120,1 (d), 124,6 (d), 127,1 (d), 127,9 (d), 141,5 (s), 143,0 (s), 154,7 (s), 168,8 (s) ; Analyse calculée pour C2ιH23N2O3Br : C, 58,47 ; H, 5,34 ; N, 6,50 ; Br, 18,56. Trouvée : C, 58,34 ; H, 5,34 ; N, 6,64 ; Br, 18,20.
Br-CH2CO-N-azaLeu-CONH2
Rdt 63% ; pf = 168°C ; RMN 1H (DMSO d6) δ (ppm) 0,85 (d, 6H), 1,88 (m, IH), 2,82-3,69 (syst AB, 2H), 3,91-4,21 (syst AB, 2H), 6,21 (s, 2H), 8,58 (s, IH) ; RMN 13C
(CDC13) δ (ppm) ; 20,8 (q), 29,6 (d), 48,3 (t), 55,3 (t), 157,8 (s), 169,6 (s) ; Analyse calculée pour C7Hι4N3O2Br : C, 33,33 ; H, 5,56 ; N, 16,67 ; Br, 31,75. Trouvée : C,
33,34 ; H, 5,65 ; N, 16,92 ; Br, 31,44.
Br-CH2CO-N-azaLeu-CO2Me
Rdt 56% ; pf = 108°C ; RMN 1H (DMSO d6) δ (ppm) 0,93 (d, 6H), 1,95 (m, IH),
3,41 (large, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,89 (s, 2H), 8,55 (s large, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20,3 (q), 26,9 (d), 28,1 (t), 53,2 (q), 55,7 (t), 156,6 (s), 169,5 (s) ; Analyse calculée pour C8Hι5N2O3Br : C, 35,95 ; H, 5,62 ; N, 10,4,9 ; Br, 25,96. Trouvée : C, 35,91 ; H, 5,52 ; N, 10,50 ; Br, 25,78.
Br-CH2CO-N-azaPhe-Z
Rdt 66% ; pf = 76°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 3,98 (s, 2H), 4,15-5,40 (syst AB, 2H), 5,19 (s, 2H), 6,97 (s, IH), 7,34-7,40 (m, 5H) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 26,7 (t), 51,2 (t), 68,7 (t), 128,8 (d), 129,1 (d), 129,4 (d), 134,8 (d), 135,5 (d), 155,2 (s), 169,4 (s) ; Analyse calculée pour Cι7Hι7N2O3Br : C, 54,11 ; H, 3,56 ; N, 7,43 ; Br,. 21,22. Trouvée : C, 54,56 ; H, 4,67 ; N, 7,54 ; Br, 20,45.
Br-CH2CO-N-azaLeu-Z
Rdt 58% ; pf = 76°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,94 (d, 6H), 1,95 (m, IH), 2,79- 4,18 (large, 2H), 3,90 (s, 2H), 5,24 (s, 2H), 7,09 (s, IH), 7,41 (s, 5H) ; RMN 13C
(CDC13) δ (ppm) 20,3 (q), 26,5 (q), 26,9 (q), 55,5 (t), 68,3 (t), 68,7 (t), 128,5 (d), 128,8
(d), 129,0 (d), 129,2 (d), 135,5 (d), 155,3 (s), 169,9 (s) ; Analyse calculée pour
Cι7Hι7N2O3Br : C, 54,11 ; H, 3,56 ; N, 7,43 ; Br, 21,22.
Br-CH2CO-N-azaPhe-Boc
Rdt 64% ; pf = 76°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 1,35 (s, 9H), 3,87 (d, 2H), 4,14-
5,20 (s large, 2H), 6,73 (s, IH), 7,17-7,27 (m, 5H) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 27,1 (t), 28,5 (q), 51,3 (t), 83,1 (t), 128,6 (d), 128,7 (d), 129,3 (d), 129,5 (d), 129,7 (d), 135,1 (s), 154,3 (s), 169,5 (s).
Br-CH2CO-N-azaLeu-Boc
Rdt 78% ; pf =96°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 0,98 (d, 6H), 1,55 (s, 9H), 1,99
(m, IH), 2,86-4,22 (large, 2 x 2H), 6,80 (s, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20,4 (q), 26,6 (d), 26,9 (t), 28,6 (q), 55,7 (t), 82,9 (s), 154,3 (s), 169,9 (s) ; Analyse calculée pour Cι7Hι7N2O3Br : C, 54,11 ; H, 3,56 ; N, 7,43 ; Br, 21,22. 2) HYDRAZINOAZPEPTOIDES ORTHOGONALEMENT PROTEGES
Substitution de l'atome de brome : A une solution sous agitation d'hydrazine N- protégée (25 mmol, 2,5 équi) dans le chloroforme (10 ml) est ajouté lentement l'α- bromohydrazide (lO'mmol, 1 équi) en solution dans le chloroforme (10 ml). Le mélange réactionnel est porté au reflux, sous agitation pendant 24 heures. Après refroidissement, le milieu est lavé successivement trois fois par 50 ml d'eau, 50 ml d'HCl 2N, 50 ml de NaHCO3 et 50 ml d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium et le solvant est évaporé sous pression réduite. Selon la nature des deux groupements protecteurs, le produit précipite lentement dans l'éther à froid, ou est obtenu sous la forme d'une huile blanchâtre.
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-Fmoc
Rdt 77% huile ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,83 (d, 6H), 0,87 (d, 6H), 1,34 (s,
9H), 1,59 (m, IH), 1,78 (m, IH), 2,37 (d, 2H), 3,32 (s, 2H), 3,43 (large, 2H), 4,14 (t, IH), 4,43 (d, 2H), 6,01 (s, IH), 7,15-7,73 (m, 8H), 8,87 (s, IH).
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-Z
Rdt 63% ; pf = 85°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,89 (d, 6H), 0,94 (d, 6H), 1,43
(s, 9H), 1,65 (m, IH), 1,94 (m, IH), 2,35 (d, 2H), 3,35-3,50 (large, 2 x 2H), 5,20 (s, 2H), 5,60 (s, IH), 7,39 (s, 5H), 8,96 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 20,7 (q), 21,1 (q), 26,5 (d), 26,9 (d), 28,7 (q), 56,1 (t), 62,9 (t), 67,4 (t), 80,8 (s), 128,9 (d), 136,2 (d), 155,9 (s), 156,4 (s), 171,4 (s) ; Analyse calculée pour C23H38N4O5 : C, 61,31 ; H, 8,50 ; N, 12,43, Trouvée : C, 60,80 ; H, 8,59 ; N, 12,46.
Z-NαhLeu-N-azaLeu-Boc
Rdt 65% ; pf = 90°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,82 (d, 6H), 0,89 (d, 6H), 1,44
(s, 9H), 1,62 (m, IH), 1,77 (m, IH), 2,53 (d, 2H), 3,18-3,51 (syst.AB, 2H), 3,38 (s, 2H), 5,04 (s, 2H), 7,35 (s, 5H), 8,44 (s, IH), 9,37 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 20,3 (q), 20,9 (q), 26,2 (d), 26,4 (d), 28,2 (q), 54,9 (t), 60,1 (t), 65,2 (t), 65,8 (t), 80,6 (s), 128,0 (d), 128,2 (d), 128,7 (d), 137,1 (d), 154,6 (s), 156,3 (s), 171,2 (s) ; Analyse calculée pour C23H38N4O5 : C, 61,31 ; H, 8,50 ; N, 12,43. Trouvée : C, 61,14 ; H, 8,56 ;
N, 12,48.
Z-NαhLeu-N-azaPhe-Boc
Rdt 72% ; pf ≈ 98°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 1,05 (d, 6H), 1,52 (s, 9H), 1,82
(m, IH), 2,72 (d, 2H), 3,78 (s, 2H), 4,25-5,55 (large, 2H), 5,09 (s, 2H), 6,94 (s, IH), 7,43 (s, 5H), 7,64 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 21,1 (q), 26,7 (d), 28,5 (q), 51,4 (t), 60,5 (t), 66,6 (t), 67,2 (t), 82,3 (s), 128,3 (d), 128,5 (d), 128,9 (d), 129,1 (d), 129,7 (d), 135,8 (d), 136,6 (d), 154,4 (s), 156,6 (s), 172,1 (s) ; Analyse calculée pour C26H36N4O5 : C, 64,46 ; H, 7,44 ; N, 11,57. Trouvée : C, 64,20 ; H, 7,45 ; N, 11,63. 3) PSEUDOPEPTOIDES DEPROTEGES
Déprotection sélective d'une des extrémités
Pour un groupement Fmoc : A une solution de pseudodipeptoïde (10 mmol, 1 équi) dans un minimum d'éther (5 ml) est ajoutée goutte à goutte la pipéridine (20 mmol, 2 équi) en solution dans l'éther (3 ml). Le mélange réactionnel est laissé sous agitation pendant 15 heures. Le solvant est évaporé sous pression réduite et le brut est recristallisé dans l'éthanol. Le précipité blanc obtenu est un adduit de la réaction, provenant de l'addition de la pipéridine sur le groupement fiuorène. Après recristallisation sélective et filtration de la totalité de cet adduit, le produit attendu précipite lentement dans l'éther à froid.
Pour un groupement Z : A une solution sous agitation de pseudopeptoïde (10 mmol, 1 équi) dans l'éthanol (15 ml) sont ajoutés 3 gouttes d'acide acétique et du palladium sur charbon (Pd/C) à 10% (50 mg par mmol de produit). Le mélange est placé sous atmosphère d'hydrogène pendant 24 heures. Le mélange est filtré sur célite et on ajoute du dichloromethane pour solubiliser le produit obtenu (particules blanches dans l'éthanol). Les solvants sont évaporés sous pression réduite et le produit est obtenu sous la forme d'un solide blanc, insoluble dans l'éther.
Pour un groupement Boc : A une solution sous agitation de pseudopeptide (10 mmol, 1 équi) dans l'éther (10 ml), on fait buller HC1 gazeux, par déshydratation de 15 ml d'acide chlorhydrique à 37% sur de l'acide sulfurique concentré (20 ml). L'apparition du chlorhydrate est quasi instantanée et le mélange est laissé sous agitation pendant 2 heures. Le précipité est alors filtré sur fritte et est lavé plusieurs fois à l'éther (si l'on veut conserver le produit, il vaut mieux le laisser sous la forme de chlorhydrate). Le chlorhydrate est alors solubilisé dans une solution IN de NaHCO3 et F aminé libre est extraite à l'éther. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit est obtenu sous la forme d'une huile épaisse. Z-NαhLeu-N-azaLeu-H
Rdt 78% ; huile ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,93 (d, 2 x 6H), 1,77 (m, IH), 2,02
(m, IH), 2,70 (d, 2H), 3,33 (d, 2H), 3,85-4,13 (large, 2H), 4,01 (s, 2H), 5,13 (s, 2H),
7,26 (s, IH), 7,36 (m, 5H) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 20,6 (q), 21,2 (q), 26,7 (d), 28,6 (d), 56,1 (t), 63,2 (t), 67,2 (t), 81,3 (s), 128,3 (t), 128,6 (t), 128,9 (t), 136,5 (t), 154,7 (t),
157,1 (s), 172,2 (s).
Boc-NtxhLeu-N-azaLeu-H
Rdt 84% ; pf = 104°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,93 (d, 6H), 0,97 (d, 6H), 1,45 (s, 9H), 1,76 (m, IH), 2,04 (m, IH), 2,64 (d, 2H), 3,35 (d, 2H), 3,93 (d, 2H), 4,03 (s,
2H), 6,69 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 20,3 (q), 21,1 (q), 26,1 (d), 27,1 (d), 28,7 (q), 57,1 (t), 58,1 (t), 65,8 (t), 79,9 (s), 155,8 (s), 173,2 (s) spectre présentant deux formes, seule la forme majoritaire est indiquée ; Analyse calculée pour Cι5H 2N4O3 : C, 56,96 ; H, 10,13 ; N, 17,72. Trouvée : C, 56,73 ; H, 10,19 ; N, 17,73.
Boc-NαhLeu-N-azaNorleu-H
Rdt 78% ; pf = 105°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,93 (d, 6H), 0,94 (t, 3H), 1,34 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 1,57 (m, 2H), 1,73 (m, IH), 2,61 (d, 2H), 3,50 (t, 2H), 3,88 (s large, 2H), 4,31 (s large, 2H), 6,79 (s large, IH) spectre présentant deux formes, seule la forme majoritaire est indiquée ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 14,1 (q), 20,1 (t), 21,0 (q), 26,9 (d), 28,7 (q), 30,2 (t), 49,3 (t), 57,9 (t), 59,6 (t), 65,9 (t), 79,7 (s), 155,8 (s), 172,3 (s) spectre présentant deux formes, seule la forme majoritaire est indiquée ; Analyse calculée pour Cι5H32N4O3 : C, 56,96 ; H, 10,13 ; N, 17,72. Trouvée : C, 56,77 ; H, 9,99 ; N, 17,57.
Boc-NαhLeu-N-azaPhe-H
Rdt 86% ; pf = fusion pâteuse à partir de 90°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 1,01 (d, 6H), 1,52 (s, 9H), 1,82 (m, IH), 2,76 (d, 2H), 3,86 (s, 2H), 4,05 (s, 2H), 4,77 (s, 2H), 6,98 (s, IH), 7,41 (s, 5H) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 21,1 (q), 27,1 (d), 28,8 (q), 53,2
(t), 59,0 (t), 65,8 (t), 79,8 (s), 127,3 (d), 128,4 (d), 129,0 (d), 129,3 (d), 135,9 (d), 155,7 (s), 173,1 (s) ; Analyse calculée pour Cι8H30N4O3 : C, 61,69 ; H, 8,63 ; N, 15,99. Trouvée : C, 61,16 ; H, 8,66 ; N, 15,71.
Z-NαhLeu-N-azaPhe-H
Rdt 64% ; huile ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 0,96 (d, 6H), 1,77 (m, IH), 2,50 (s, IH), 2,75 (d, 2H), 3,73 (s, 2H), 4,02 (s, 2H), 4,66 (s, 2H), 5,11 (s, 2H), 7,30 (m, 2 x 5H). H-NαhLeu-N-azaLeu-Z
Rdt 84% ; pf = 132°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 0,86 (d, 2 x 6H), 1,28 (m, 2H), 2,65 (d, 2H), 3,0-4,0 (signaux superposés, 4H), 5,18 (s, 2H), 7,41 (m 5H), 8,81 (s large, IH), 9,67 (s large, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20,2 (q), 20,4 (q), 25,2 (d), 25,9 (d), 54,4 (t), 62,9 (t), 67,1 (t), 128,2 (d), 128,6 (d), 128,9 (d), 136,4 (s), 155,5 (s), 171,3 (s).
H-NαhPhe-N-azaLeu-Z
Rdt 64% ; pf = 134°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 0,94 (d, 6H), 1,93 (m, IH), 3,0-
3,55 (signaux superposés, 6H), 3,90 (s, 2H), 5,19 (s, 2H), 7,33 (m, 5H), 7,39 (m, 5H), 7,82 (s large, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 25,3 (q), 31,3 (d), 59,7 (t), 64,2 (t), 69,0
(t), 72,4 (t), 132,4 (d), 133,4 (d), 133,5 (d), 133,6 (d), 133,7 (d), 134,4 (s), 141,0
(s),143,0 (s), 160,6 (s), 177,7 (s).
H-NαhPhe-azaLeu-Z
Rdt 55% ; huile ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,95 (d, 6H), 1,93 (m, IH), 3,2-3,45 (signaux superposés, 6H), 4,01 (s, 2H), 5,21 (s, 2H), 7,31 (m, 10H), 9,01 (s large, IH). 4) HYDRAZINOAZAPEPTOÏDES
Fonctionnalisation de l'extrémité C-terminale
Pour les groupements cétone et céto-ester : A une solution refroidie à 0°C, sous agitation, de pseudodipeptoïde (5 mmol, 1 équi) dans l'éther (5 ml) et la triéthylamine (5,5 mmol, 1,1 équi), est ajouté goutte à goutte l'agent électrophile (5,5 mmol, 1,1 équi) en solution dans l'éther (5 ml) (anhydride trifluoroacétique et le chlorure d'éthyloxalyle). Le milieu réactiormel est laissé sous agitation pendant 6 heures. Lorsque le sel de triéthylammonium est insoluble dans l'éther, il est filtré et le filtrat est évaporé sous pression réduite ; lorsqu'il ne l'est pas, le milieu est lavé trois fois par 30 ml d'eau, la phase organique est séchée sur sulfate de sodium et le solvant est évaporé sous pression réduite. Dans les deux cas, le produit attendu précipite lentement dans l'éther à froid.
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CF3 : R1 = Boc, R3 = R4 = i-Bu, R5 = H, R6 = COCF3 composé P8
Rdt 65% ; pf = 110°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,84 (d, 6H), 0,88 (d, 6H), 1,35 (s, 9H), 1,67 (m, IH), 1,77 (m, IH), 2,31 (d, 2H), 3,33 (d, 2H), 3,35 (s, 2H), 5,39 (s, IH), 11,22 (s, IH). Analyse calculée pour C17H3.F3N4O4 : C, 49,51 ; H, 7,52 ; F, 13,83 ; N, 13,59. Trouvée : C, 49,30 ; H, 7,83 ; F, 13,51 ; N, 13,86. . Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CO2Et : R1 = Boc, R3 = R4 = i-Bu, R5 - H, R6 = COCO2Et ; composé P9
Rdt : 54% ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,99 (d, 2 x 6H), 1,49 (t, 3H), 1,51 (s, 9H), 1,78 (m, IH), 1,94 (m, IH), 2,49 (d, 2H), 3,48 (s, 2H), 3,54 (d, 2H), 4,45 (q, 2H), 5,91 (s, IH), 11,06 (s, IH). Analyse calculée pour Cι9H36N4O6 : C, 54,81 ; H, 8,65 ; N, 13,46. Trouvée : C, 54,85 ; H, 8,58 ; N, 13,31.
PhCO-NαhLeu-N-azaLeu-CF3 : R1 = COPh, R3 = R4 = i-Bu, R5 = H, R6 = COCF3 ; composé Pli
Rdt 82% ; pf = 144°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,87 (d, 6H), 0,99 (d, 6H), 1,68
(m, IH), 1,86 (m, IH), 2,54 (d, 2H), 3,44 (large, 2H), 3,51 (s, 2H), 7,46-7,76 (m, 5H), 8,79 (s, IH), 11,90 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 20,8 (q), 21,1 (q), 26,5 (d), 27,3
(d), 55,9 (t), 63,7 (t), 67,5 (t), 127,8 (d), 129,1 (d), 132,1 (d), 132,9 (d), 155,9 (s), 156,7
(s), 168,8 (s), 169,8 (s) ; Analyse calculée pour Cι9H27F3N4O3 : C, 54,81 ; H, 6,49 ; F, 13,46 ; N, 13,70. Trouvée : C, 55,15 ; H, 6,53 ; F, 13,28 ; N, 13,61.
PhCO-NαhLeu-N-azaLeu-CO2Et : R1 = COPh, R3 = R4 = i-Bu, R5 = H, R6 =
COCO2Et ; composé P10
Rdt 48% ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,77 (d, 6H), 0,86 (d, 6H), 1,34 (t, 3H), 1,70 (m, IH), 1,76 (m, IH), 2,47 (d, 2H), 3,35 (d, 2H), 3,49 (s, 2H), 4,31 (q, 2H), 7,33-7,67 (m, 5H), 7,83 (s, IH), 11,16 (s, IH) ; Analyse calculée pour C2ιH32N4O5 : C, 60,00 ; H, 7,62 ; N, 13,33. Trouvée : C, 59,69 ; H, 7,69 ; N, 12,96.
Boc~NαhLeu-N-azaNorleu-CF3 : R^Boc, R3= i-Bu, R4=n-Bu, R5=H,
Rdt 68% ; pf = fusion pâteuse à partir de 90°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,80 (d, 6H), 0,86 (t, 3H), 1,24 (m, 2H), 1,35 (s, 9H), 1,45 (m, 2H), 1,65 (m, IH), 2,32 (d,
2H), 3,34 (s, 2H), 3,49 (large, 2H), 5,73 (s, IH), 11,22 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 14,1 (q), 20,3 (t), 20,9(q), 26,3 (d), 28,5 (q), 29,3 (t), 48,2 (t), 64,1 (t), 67,7 (t), 81,6 (s), 113,2 (q), 156,2 (q), 157,3 (s), 168,5 (s) ; Analyse calculée pour Cι7H3ιF3N4O4 : C, 49,52 ; H, 7,52 ; F, 13,84 ; N, 13,59. Trouvée : C, 49,68 ; H, 7,68 ; F, 13,77 ; N, 13,55.
Boc-NαhLeu-N-azaNorleu-CO2Et : R1 = COPh, R3 = i-Bu, R4 = n-Bu, R5 = H, R6 = COCO2Et ; composé P3
Rdt 55% ; pf = 105°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,83? (d, 6H), 0,85 (t, 3H), 1,17- 1,41 (m, 2x2H), 1,30 (t, 3H), 1,32 (s, 9H), 1,61 (m, IH), 2,30 (d, 2H), 3,34 (s, 2H), 3,46 (t, 2H), 4,24 (q, 2H), 5,93 (s, IH), 11,01 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 14,1 (q),
14,2 (q), 20,3 (t), 21,0 (q), 26,4 (d), 28,6 (q), 29,3 (t), 48,1 (t), 63,1 (t), 63,6 (t), 67,4 (t), 80,9 (s), 155,7 (s), 156,6 (s), 159,5 (s), 169,1 (s) ; Analyse calculée pour Cι9H36N4O6 : C, 54,81 ; H, 8,65 ; N, 13,46. Trouvée : C, 54,62 ; H, 8,81 ; N, 13,48. Boc-NαhLeu-azaLeu-CF3 : R1 = Boc, R3 = R5 = i-Bu, R4 .= H, R6 = COCF3 ; composé PI
Rdt 73% ; pf = 105°C ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,87 (d, 2 x 6H), 1,37 (s, 9H), 1,57 (m, IH), 1,88 (m, IH), 2,50 (large, 2H), 3,07-3,86 (syst.AB, 2H), 3,42 (s, 2H), 5,81 (s, IH), 10,70 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 20,1 (q), 20,7 (q), 26,1 (d), 26,9 (d), 28,4 (q), 56,2 (t), 62,3 (t), 69,1 (t), 81,8 (s), 119,3 (q), 157,3 (d, s), 158,5 (q), 170,1 (s) ; Analyse calculée pour Cι7H3ιF3N4O4 : C, 49,52 ; H, 7,52 ; F, 13,84 ; N, 13,59.
Trouvée : C, 49,77 ; H, 7,80 ; F, 13,42 ; N, 13,88.
Boc-NαhLeu-azaLeu-CO2Et : R1 = Boc, R3 = R5 = i-Bu, R4 ≈ H, R6 = COCO2Et ; composé P5
Rdt 56% ; pf = 147°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 0,86 (d, 6H), 0,90 (d, 6H), 1,24 (t, 3H), 1,38 (s, 9H), 1,57 (m, IH), 1,85 (m, IH), 2,47 (d, 2H), 3,38 (s, 2H), 3,40 (d, 2H), 4,18 (q, 2H), 5,75 (s, IH), 10,40 (s, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 14,3 (q), 20,2
(q), 20,8 (q), 26,3 (d), 26,8 (d), 28,5 (q), 62,2 (t), 62,7 (t), 68,8 (t), 81,7 (s), 157,1 (s), 162,5 (s), 163,6 (s), 169,8 (s) ; Analyse calculée pour Cι9H36N4O6 : C, 54,81 ; H, 8,65 ; N, 13,46. Trouvée : C, 54,26 ; H, 8,49 ; N, 13,04.
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CONH2 : R1 = Boc, R3 = R4 = i-Bu, R5 = H, R6 =
CONH2 ; composé P7
Rdt 85% ; pf = 138°C ; RMN 1H (CDCI3) δ (ppm) 0,96 (d, 6H), 0,97 (d, 6H), 1,47
(s, 9H), 1,82 (m, IH), 2,01 (m, IH), 2,53 (d large, 2H), 3,47 (s large, 2H), 3,58 (s large, 2H), 5,37 (s large, 2H), 6,24 (s large, IH), 8,69 (s large, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) ; Analyse calculée pour Cι6H33N5O4 : C, 53,48 ; H, 9,19 ; N, 19,50. Trouvée : C, 53,27 ; H, 9,23 ;N, 19,39.
Pour le groupement borylé : A une solution sous agitation de pseudopeptoïde (5 mmol, 1 équi) dans 5 ml d'éther est ajouté par petites fractions l'aldéhyde borylé (5,5 mmol, 1,1 équi) en solution dans l'éther (10 mL). Un précipité blanc se forme instantanément, mais le milieu est laissé sous agitation pendant 1 heure. Le précipité blanc est filtré sur fritte et est lavé plusieurs fois à l'éther.
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CH-Ph-o-B(OH)2 : R1 = Boc, R3 = R4 = i-Bu, R5, R6 -
Rdt 94% ; pf = 159°C ; RMN 1H (DMSO d6) δ (ppm) 0,79 (d, 6H), 0,82 (d, 6H), 1,29 (s, 9H), 1,56 (m, IH), 1,97 (m, IH), 2,55 (d, 2H), 3,68 (d, 2H), 4,06 (s, 2H), 7,24- 7,5 l(m, IH + 3H), 7,76 (d, IH), 8,16 (s, 2H), 8,26 (s, IH) ; RMN 13C (DMSO d6) δ (ppm) 20,3 (q), 20,9 (q), 24,9 (d), 26,5 (d), 28,5 (q), 46,9 (t), 58,6 (t), 64,7 (t), 78,5 (s), 126,1 (d), 128,8 (d), 129,3 (d), 134,1 (d), 136,7 (d), 138,1 (s), 142,5 (s), 154,8 (s), 171,7
(s) ; RMN πB (DMSO d6/Et2OBF3) δ (ppm) 30 (s large) ; Analyse calculée pour C22H37N4O5B : C, 58,93 ; H, 8,32 ; N, 12,50 ; B, 2,41. Trouvée : C, 58,64 ; H, 8,45 ; N, 12,33 ; B, 2,16.
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CH-Ph-/>-B(OH)2 : R1 = Boc, R3 = R4 = i-Bu, R5, R6 =
Rdt 96% ; pf ≈ 186°C ; RMN 1H (DMSO d6) δ (ppm) 0,83 (d, 2 x 6H), 1,31 (s, 9H), 1,59 (m, IH), 1,95 (m, IH), 2,58 (d, 2H), 3,76 (d, 2H), 4,07 (s, 2H), 7,46 (s, IH), 7,64-7,81 (syst AB, 4H), 7,93 (s, IH), 8,10 (s, 2H) ; RMN 13C (DMSO d6) δ (ppm) 20,3 (q), 20,9 (q), 25,1 (d), 26,5 (d), 28,4 (q), 46,5 (t), 58,7 (t), 64,8 (t), 78,5 (s), 126,3 (d), 134,7 (d), 136,1 (d), 136,5 (s), 140,5 (s), 154,8 (s), 171,6 (s) ; RMN nB (DMSO d6/Et2OBF3) δ (ppm) 30 (s large) ; Analyse calculée pour C22H37N4O5B : C, 58,93 ; H, 8,32 ; N, 12,50 ; B, 2,41. Trouvée : C, 58,69 ; H, 8,32 ; N, 12,50 ; B, 2,45.
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CH-Ph-»ι-B(OH)2 : R1 ≈ Boc, R3 = R4 = i-Bu, R5, R6 =
Rdt 92% ; pf = fusion pâteuse à partir de 110°C ; RMN 1H (DMSO d6) δ (ppm)
0,92 (d, 6H), 0,95 (d, 6H), 1,41 (s, 9H), 1,54 (m, IH), 1,68 (m, IH), 2,68 (d, 2H), 4,00
(large, 2H), 4,13 (s, 2H), 7,45 (large, IH), 7,84 (s, IH), 7,88 (s, IH), 8,05 (s, IH), 8,17 (s, IH), 8,23 (s, 2H) ; Analyse calculée pour C22H37N4O5B : C, 58,93 ; H, 8,32 ; N,
12,50 ; B, 2,41.
Pour les groupements acétylés : A une solution refroidie à 0°C, sous agitation d'hydrazinoazapeptoïde déprotégé (5 mmol, 1 équi) dans le dichloromethane (10 mL) et la pyridine (6 mmol, 1,2 équi), est ajouté. goutte à goutte le bromure de bromoacétyle (6 mmol, 1,2 équi) dans le dichloromethane (5 mL). Le mélange est agité pendant 5 heures puis lavé trois fois par 50 ml d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit précipite lentement dans l'éther à froid.
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CH2Br : R1 = Boc, R3 = R5 = i-Bu, R4 = H, R6 = COCH2Br ; composé P14
Rdt 58%. Le produit se présente sous la forme d'une mousse ; RMN 1H (CDC13) δ 0,95 (d, 6H, J = 6,5 Hz), 0,98 (d, 6H, J ≈ 6,5 Hz), 1,48 (s, 9H), 1,75 (m, IH), 1,91 (m, IH), 2,51 (d, 2H, J = 7 Hz), 3,46 (d, 2H, J = 7 Hz), 3,49 (s, 2H), 3,89 (s, 2H), 5,79 (s, IH), 10,39 (s, IH) ;
Boc-NαhLeu-N-azaPhe-COCH2Br : R1 = Boc, R3 = i-Bu, R4 = CH2Ph, R5 = H, R6
Rdt 62% ; pf= 135°C ; RMN 1H (CDC13) δ 0,81 (d, 6H, J = 6,5 Hz), 1,44 (s, 9H),
1,65 (m, IH), 2,45 (d, 2H, J = 6 Hz), 3,52 (s, 2H), 3,85 (s, 2H), 4,85 (s large, 2H), 5,69 (s, IH), 7,33 (s, 5H), 10,15 (s, IH) ; Analyse calculée pour O-oH^O^r : C, 50,96 ; H, 6,63 ; N, 11,89 ; Br, 16,95. Trouvée : C, 50,87 ; H, 6,65 ; N, 11,79 ; Br, 16,46. "
Z-NαhLeu-N-azaPhe-CH2Br R1 = Z, R3 = i-Bu, R4 - CH2Ph, R5 ≈ H, R6 =
COCH2Br ; composé P21
Rdt 60% ; huile ; RMN 1H.(CDC13) δ 0,83 (d, 6H, J = 6,75 Hz), 1,68 (m, IH), 2,50 (d, 2H, J = 7 Hz), 3,54 (s, 2H), 3,75 (s, 2H), 4,77 (s, 2H), 5,01 (s, 2H), 6,67 (s, IH), 7,35 (s, 5H), 10,04 (s, IH).
Boc-NαhLeu-N-azaLeu-CH2Cl : R1 ≈ Boc, R3 = R4 = i-Bu, R 5= H, R6 =
COCH2Cl ; composé P
Rdt 57% ; huile ; J = 6,5 Hz), 0,98 (d, 6H, J = 6,5
Hz), 1,47 (s, 9H), 1,75 (m, IH), 1,88 (m, IH), 2,48 (d, 2H, J=7 Hz), 3,48 (s large, 2 x 2H), 4,10 (s, ZH), 5,63 (s, IH), 10,34 (s, IH). Pour le groupement vyridinium : A une solution sous agitation de pseudopeptoïde bromoacétylé (5 mmol, 1 équi) dans l'éther (5 ml), on ajoute la pyridine (6 mmol, 1,2 équi). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant 14 heures à température ambiante. Après évaporation sous pression réduite du solvant, on obtient une mousse contenant le produit et l'excès de pyridine. Cet excès est enlevé en ajoutant sur la mousse de l'éther de pétrole (la pyridine est soluble, mais pas le sel de pyridinium). L'éther de pétrole est retiré à la pipette et l'opération est réitérée trois fois. Le reste d'éther de pétrole est évaporé sous pression réduite et le produit obtenu est une mousse assez solide lorsqu'elle est sèche.
Boc NαhLeu-N-azaLeu-Ac-Pyr+Br" ; composé P19
Rdt 60%. Le produit se présente sous la forme d'une mousse ; RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,90 (d, 6H), 0,93 (d, 6H), 1,43 (s, 9H), 1,70 (m, IH), 1,98 (m, IH), 2,70 (d, 2H), 3,40 (d, 2H), 3,94 (s, 2H), 6,31 (s, 2H), 6,97 (s, IH), 8,12 (t, 2H), 8,54 (t, IH), 9,39 (d, 2H), 11,44 (s large, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 19,2 (q), 19,8 (q), 25,3 (d), 25,5 (d), 27,4 (q), 53,6 (t), 57,0 (t), 60,1 (t), 64,1 (t), 78,7 (s), 126,9 (d), 145,0 (d), 145,6 (d),
154,9 (s), 162,9 (s), 171,1 (s).
Pour le groupement aldéhyde : A une solution refroidie à 0°C, sous agitation, de pentafluorophénol (5 mmol, 2 équi) dans l'éther (5 ml) sont ajoutés l'acide formique (6 mmol, 2,4 équi) et le DCC (5 mmol, 2 équi). Après dix minutes d'agitation, le pseudopeptoïde (2,5 mmol, 1 équi) est ajouté en solution dans 5 ml de chloroforme, le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant 4 heures à température ambiante. Le mélange est alors dilué par 20 ml de chloroforme et on ajoute la DEEA (5 mmol, 2 équi). Le milieu est lavé par 10 ml de HC1 IN, 10 ml de NaHCO3 à 5% et 10 ml d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium et les solvants sont évaporés sous pression réduite. Le produit précipite après avoir été refroidi avec de l'air liquide (pâte qui se solidifie et qui est insoluble dans l'éther). Boc-NαhLeu-N-azaLeu-H : R1 = Boc, R3 = R4 = i-Bu, R5 = H, R6 = CHO ; composé P13
Rdt 85% ; p£= 124°C RMN 1H (CDC13) δ (ppm) 0,94 (d, 6H), 0,98 (d, 6H), 1,46 (s, 9H), 1,75 (m, IH), 1,94 (m, IH), 2,47 (d, 2H), 3,48 (s, 2H), 3,50 (d, 2H), 5,69 (s, IH), 8,12 (s, IH), 10,34 (s, IH) ; RMN 13C (CDC13) δ (ppm) 20,7 (q), 21,0 (q), 26,5 (d), 27,1 (d), 28,7 (q), 55,3 (t), 63,8 (t), 67,0 (t), 81,4 (s), 156,8 (d), 159,8 (s), 169,7 (s) : Analyse calculée pour Cι6H32N4O4 : C, 55,76 ; H, 9,36 ; N, 16,27. Trouvée : C, 55,74 ;
H, 9,47 ; N, 16,18.
Allongement de la chaîne par réitération des étapes A et B ; composé PTPl Z-NαhLeu-NαhLeu -N-azaLeu-CH2Br
Mousse ; RMN 1H (CDC13) δ 0,94 (d, 3 x 6H), 1,68 (m, 2 x IH), 1,91 (m, IH),
2,57 (d, 2 x 2H), 3,34 (s, 2H), 3,47 (s, 2 x 2H), 3,85 (s, 2H), 5,13 (s, 2H), 6,16 (s, IH), 7,36 (m, 5H), 9,31 (s, IH), 10,84 (s, IH).
Z-NahLeu-N-azaLys-COCH2Br : R =Z, R3= i-Bu, R4=(CH2)4NHBoc, R5=H, R6= COCH2Br. Composé
RMN XH (CDC13) δ 0.83 (d, 6H, J=6.5 Hz), 1.34 (s, 9H+4H), 1.65 (m, IH), 2.45 (d, 2H, 7.5 Hz), 2.65 (s, 2H), 2.98 (d, 2H, 7.5 Hz), 3.44 (s, 2H), 3.71 (s, 2H), 4.82 (si,
IH), 5.00 (s, 2H), 7.05 (s, IH) ), 7.23 (m, 5H), 10.2 (si, IH). RMN ^C (CDCI3) δ (ppm) : 20.95 (q), 24.3 (t), 26.4 (t), 27.5 (d), 28.8 (q), 41.2 (t), 47.5 (t), 62.0 (t), 6.6.1 (t), 67.5 (t), 79.8 (s), 128.2 (d), 128.6 (d), 128.9 (d), 136.3 (s), 157.4 (s), 166.1 (s), 172.3 (s).
II) ANALYSES BIOLOGIQUES DES COMPOSES DE FORMULE (la)
Les molécules synthétisées ont été testées in vitro sur les activités protéolytiques décrites du protéasome puis in vivo sur des cultures de cellules de Xénope (XL2). La connaissance du cycle cellulaire des cellules de XL2 a permis d'effectuer des expériences de synchronisation et également d'évaluer la durée de chacune des phases du cycle.
Analyses in vitro des potentialités inhibitrices des Hydrazinoazapeptoïdes synthétisés vis à vis des activités enzymatiques du protéasome. Les potentialités inhibitrices des hydrazinoazapeptoïdes ont été quantifiées sur les activités enzymatiques chymotrypsine du protéasome purifié. Les résultats sont exprimés en pourcentage d'inhibition des activités.
Mesure des propriétés inhibitrices des composés synthétisés sur l'activité catalytique chymotrypsine du protéasome purifié.
"% PI P2 P3 P4 P5 P6 P7 P8 P9 P10 Pli P12 P13 P14 P15 P16 P17 ALLN 2mM 29 47 31 29 32 38 23 28 30 42 40 48 35 71 3*5 34 80 I M ' 91
On remarque que les composés P14 et P17 présentent une activité inhibitrice particulièrement intéressante. Il est possible d'inhiber de 70% l'activité du protéasome avec 2mM de ces composés. ImM d'ALLN est nécessaire pour inhiber de 90% cette activité.
Analyse par FACS
Les résultats biologiques des produits testés sur les cultures de cellules XL2 sont rassemblés dans le tableau ci-dessous. Des effets doses (de 2μM à 174μM) et des cinétiques (de 0,5h à 7h) ont été réalisés. % de cellules bloquées en G2/M μM h % μM h %
Témoin 4,2 P13 174 7 20,8
ALLN 100 7 53 P14 137 0,5 37,9
MG132 ,50 7 60,6 P14 137 1 50,2
PI 145 7 9,2 P14 2 0,5 48,2
P2 160 7 6,7 P14 4 0,5 44,8
P3 144 4 14,9 P14 11 0,5 47,4
P3 144 6 15,2 P14 22 0,5 46,2
P3 144 8 13,8 P14 45 0,5 48,3
P4 145 4 16,5 P14 91 0,5 50,2
P4 145 8 13,4 P14 137 0,5 42,8
P5 144 7 5,2 P15 133 7 35,8
P6 167 7 9,2 P16 143 7 24,2
P7 167 7 12,3 P17 127 0,5 42,8
P8 146 7 19,1 P17 127 1 41,7
P9 144 7 14,1 P17 127 2 38,3
P10 143 7 23,1 P17 21 0,5 46,8
Pli 144 7 17,2 P17 42 0,5 47,3
P12 156 7 23,5 P17 85 0,5 50,9
Deux inhibiteurs P14 et P17 présentent une activité comparable à celle de l'ALLN, si l'on analyse le pourcentage de cellules bloquées en mitose.
Le pourcentage de cellules bloquées en mitose est supérieur à 20% pour bon nombre de ces produits. Les Inventeurs ont donc amélioré la bioactivité des produits par la modification d'extrémité C-terminale et par la position des chaînes latérales sur le squelette pseudopeptidique. De plus, on peut constater que la concentration de P14 nécessaire, pour obtenir un blocage en mitose équivalent dans le milieu est de 2 μM.
Il est particulièrement intéressant de noter que les deux inhibiteurs P14 et P17 sont capables de bloquer la progression du cycle et plus particulièrement en mitose. On peut constater que la concentration de P14 dans le milieu, nécessaire pour obtenir un blocage en mitose est de 2 μM alors que la concentration d' ALLN qui permet le blocage des cellules en mitose est de 100 μM. inhibiteurs testés
Analyse par microscopie à fluorescence
L'observation du contenu nucléaire permet de déterminer les différentes étapes de la mitose. Les résultats suivants ont été réalisés sur 50 cellules bloquées en mitose. Les 7 premiers inhibiteurs ont été étudiés en microscopie à fluorescence.
Selon la nature des modifications apportées sur le squelette peptidique, le blocage des cellules se fait à différentes phases du cycle cellulaire. On peut remarquer que les produits P6 et P7 n'ont pas la même sélectivité inhibitrice lors des différents stades de la mitose. On peut ainsi voir que P6 bloque majoritairement les cellules en fin de mitose, alors que P7 se montre beaucoup moins sélectif.
III) SYNTHESE DES COMPOSES DE FORMULE (Ib)
1) HYDRAZINOAZAPEPTOÏDES RETRO (inversion de la liaison hydrazide)
Fonctionna lisation de l'extrémité N-terminale
Pour les groupements bromo-acétylés : A une solution refroidie à 0°C, sous agitation d'hydrazinoazapeptoïde déprotégé (5 mmol, 1 équi) dans le dichloromethane (10 mL) et la pyridine (6 mmol, 1.2 équi), est ajouté goutte à goutte le bromure de bromoacétyl (6 mmol, 1.2 équi) dans le dichloromethane (5 mL). Le mélange est agité pendant 5 heures puis lavé trois fois par 50ml d'eau. La phase organique est séchée sur sulfate de sodium, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit précipite lentement dans l'éther à froid. BrH2COC-NαhLeu-N-azaLeu-Z : R1 = Z, R2 = R5 = H, R3 = R4 = i-Bu,
(m, 1H),1.81 (m, IH), 2.46 (d large, 2H), 3.29-3.61 (6H), 5.09 (s, 2H), 7.27 (m, 5H), 8.14 (s, IH), 8.42 (s, IH). M+' : m/z théorique: 471.16069 ; m/z trouvé: 471.1613.
BrH2COC-NαhPhe-N-azaLeu-Z : R1 = Z, R2 = R5 = H, R3 = i-Bu, R4 = CH2Ph, R6 = COCH2Br. composé PR2.
mp=109°C; RMN H (CDCI3) δ 0.99 (d, 6H, J=6.6 Hz), 1.72 (m, IH), 3.1-4.3 (signaux imbriqués, 8H), 5.24 (s, 2H), 7.44 (m, 10H) ), 7.78 - 8.51 (large, 2H). RMN 13C
(CDCI3) δ (ppm) 20.5 (q), 27.0 (q), 55.9 (t), 57.8 (t), 61.7 (t), 68.3 (t), 68.5 (t), 128.4,
128.8, 129.1, 129.9, 130.3, 135.8, 155.5, 165.4, 172.2 (s). Analyse calculée pour C23H29N4θ4Br : C, 54.66 ; H, 5.78; N, 11.09 ; Br, 15.91 . Trouvée : C, 54.61 ; H, 5.80;
N, 11.06; Br, 15.98. M+' : m/z théorique: 505.14504 ; m/z trouvé: 505.1454.
BrH2COC-NαhPhe-azaLeu-Z : R1 = Z, R2 = i-Bu, R3 ≈ R5 = H, R4 = CH2Ph,
R6 = COCH2Br. composé PR3.
mp=130°C ; RMN H (CDC1 δ 0.98 (d, 6H, J=6.6 Hz), 1.91 (m, IH), 3.30, 3.58,
3.80 (signaux imbriqués, 6H), 4.03 (s, 2H), 5.15 (s, 2H), 7.37 (m, 10H) ), 7.46 (s, IH), 9.69 (s, IH). Analyse calculée pour C23H29N4θ4Br : C, 54.66 ; H, 5.78 ; N, 11.09 ; Br, 15.91. Trouvée : C, 54.55 ; H, 5.77 ; N, 11.19 ; Br, 15.92. BrH2COC-NαhLys(Boc)-azaLeu-Z : R1 = Z, R2 = R5 ≈ H, R3 = i-Bu, R4 = (CH2)4Lys(Boc), R6= COCH2Br. Composé PR4.
RMN Η (CDC13) δ 1.39 (d, 6H, J=6.3 Hz), 1.45 (s, 9H+4H), 1.88 (m, IH), 2.81 (s, 2H),
3.55 (s, 2H), 3.76 (s, 2H), 4.73 (si, IH), 5.19 (s, 2H), 6.82 (si, IH), 7.39 (m, 5H) ), 8.41
(si, IH). RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) : 20.5 (q), 21.3 (t), 26.8 (t), 27.3 (d), 28.7 (q), 40.2 (t), 56.1 (t), 57.3 (t), 60.7 (t), 68.8 (t), 79.1 (s), 128.6 (d), 128.9 (d), 135.9 (d), 156.5 (s),
166.7 (s), 172.4 (s).
Pour les groupements cétone: A une solution refroidie à 0°C, sous agitation, de pseudodipeptoïde (5 mmol, 1 équi) dans l'éther (5 ml) et la triéthy lamine (5.5 mmol, 1.1 équi), est ajouté goutte à goutte anhydride trifluoroacétique (5.5 mmol, 1.1 équi) en solution dans l'éther (5 ml). Le milieu réactionnel est laissé sous agitation pendant 4 heures. Lorsque le sel de triéthy lammonium précipite, il est filtré et le filtrat est évaporé sous pression réduite; sinon, le milieu est lavé trois fois par 30 ml d'eau, la phase organique est séchée sur sulfate de sodium et le solvant est évaporé sous pression réduite. Dans les deux cas, le produit attendu précipite lentement dans l'éther à froid.
F3COC-NαhLeu-N-azaLeu-Z : R*=Z, R3=R4=i-Bu, R2=R5=H, R6= COCF3. composé PR5
mp=105°C ; RMN Η (CDCI3) δ 0.78 (d, 6H, J=6.6 Hz), 0.81 (d, 6H, J=6.6 Hz),
1.48 (m, IH), 1.78 (m, IH), 2.51 (d large), 3.27 (d large) , 3.60 (s, 2H), 5.10 (s, 2H),
7.28 (m, 5H) , 7.99 (s large, IH), 9.05 (s large, IH). RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20.4 { , 20.8 (q), 26.7 (q), 26.8 (q), 56.0 (t), 59.2 (t), 65.8 (t), 68.4 (t), 113.4, 119.1, 128.9,
129.1, 135.7, 135.4, 172.2 (s). Pour le groupement borylé : A une solution sous agitation de pseudopeptoïde (5 mmol, 1 équi) dans 5 ml d'éther est ajouté par petites fractions l'aldéhyde borylé (5.5 mmol, 1.1 équi) en solution dans l'éther (10 mL). Un précipité blanc se forme instantanément, mais le milieu est laissé sous agitation pendant 1 heure. Le précipité blanc est filtré sur fritte et est lavé plusieurs fois à l'éther.
0-B(OH)2-Ph-HC=NαhLeu-N-azaLeu-Z : R1 ≈ Z, R2 ≈ H, R3 = R4 = i-Bu, R5, R6 = (HO)2B -(C6H4)CH=. composé PR6
mp =128 °C ; 6H), 1.12 (d, 6H), 1.86 (m, IH), 2.15 (m, IH), 3.16 (d, 2H), 3.78 (d, 2H), 4.53 (AB, 2H), 7.01 (t, IH), 7.52(m, 8H), 8.21
(s, 2H), 9.30 (s, IH), 11.27 (2H) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20.2 (q), 21.0 (q), 26.3
(d), 27.2 (d), 55.5 (t), 57.0 (t), 60.1 (t), 68.2 (t), 127.7, 128.6, 128.9, 129.1, 131.2, 132,7, 136.1, 136.6, 138.3, 140.4, 155.8, 172.4 (s). Analyse calculée pour C^s^OBS : C, 62.25 ; H, 7.31; N, 11.61. Trouvée : C, 62.20 ; H, 7.28; N, 11.71.
0-B(OH)2-Ph-HC=NαhPhe-N-azaLeu-Z : R*= Z, R2= H, R3= i-Bu, R4=CH2Ph, R5, R6 = composé PR7
mp ≈ 135°C ; RMN H (CDCI3) δ (ppm) 1.01 (d, 6H), 1.99 (m, IH), 3.43 (AB,
2H), 4.31 (AB, 2H), 4.74 (s, 2H), 5.31 (s,2H), 7.33 (t, IH), 7.52 (m, 14H), 7.61 (d, IH), 8.14 (s, 2H), 10.1 (s large, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20.4 (q), 26.1 (t), 53.5 (t),
54.7 (t),57.8 (t), 67.1 (t), 125.8, 126.4, 127.5, 128.3, 128.4, 128.6, 128.7, 128.8, 132.6, 133.7, 136.5, 137.9, 139.9, 155.7 (s), 170.8 (s); Analyse calculée pour C28H33N4O5B : C, 65.13 ; H, 6.44 ; N, 10.85 ; B, 2.09. Trouvée : C, 64.79 ; H, 6.39 ; N, 10.68 ; B, 1.80.
m-B(OH)2-Ph-HC=NαhPhe-N-azaLeu-Z : R*=Z, R2= H, R3= i-Bu, R4= CH2Ph, R5, R6= (HO)2Bm-(C6H4)CH=. composé PR8
mp = 157°C ; RMN Η (CDC13) δ (ppm) 0.77 (d, 6H), 1.76 (m, IH), 3.17 (AB,
2H), 4.09 (AB, 2H), 4.54 (s, 2H), 5.08 (s,2H), 7.09 (m, IH), 7.22 (m, 14H), 7.55 (d,
IH), 7.78 (s, IH), 7.99 (s, 2H), 10.0 (s large, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20.3 (q),
26.1 (t), 54.5 (t), 54.6 (t), 58.3 (t), 67.1 (t), 127.0, 127.4, 127.9, 128.4, 128.6, 128.8, 131.1, 131.8, 135.9, 136.5, 138.2, 155.7 (s), 170.8 (s); Analyse calculée pour
C28H33N4O5B : C, 65.13 ; H, 6.44 ; N, 10.85 ; B, 2.09. Trouvée : C, 65.39 ; H, 6.31 ; N,
11.23 ; B, 1.77.
jp-B(OH)2-Ph-HC=NαhPhe-N-azaLeu-Z : R =Z, R2= H, R3= i-Bu, R4= CH2Ph, R5, R6= (HO)2Bm-(C6H4)CH=. composé PR9
mp = 205°C ; RMN Η (CDCI3) δ (ppm) 0.86 (d, 6H), 1.85 (m, IH), 2.61-2.99 (AB, 2H), 4.09-4.28 (AB, 2H), 4.65 (s, 2H), 5.17 (s,2H), 7.37 (m, 14H), 7.76 (m, IH), 8.04 (s, 2H), 10.11 (s large, IH) ; RMN 13C (CDCI3) δ (ppm) 20.3 (q), 26.2 (t), 53.1 (t),
54.6 (t), 58.5 (t), 67.1 (t), 124.4, 127.5, 128.1, 128.4, 128.8, 130.5, 134.7, 136.5, 138.1,138.5, 155.7 (s), 170.6 (s); Analyse calculée pour C28H33N4θ5B : C, 65.13 ; H,
6.44 ; N, 10.85 ; B, 2.09. Trouvée : C, 64.47 ; H, 6.31 ; N, 10.82 ; B, 1.78. 2^ HYDRAZINOPEPTOÏDES RETRO
Méthodologie de synthèse
Le monomère (A. Cheguillaume, I. Doubli-Bounoua, M. Baudy-Floc'h, P. Le Grel Synlett, 2000, 3, 331-334) déprotégé à l'extrémité N-terminale (3.0 mmol), la DMAP (0.1 mmol) et le monomère déprotégé à l'extrémité C-terminale (3.0 mmol) sont mis en solution dans 50 mL de dichloromethane. La température du mélange réactionnel est abaissée à 0°C et le DCC (4,5 mmol), 1,5 équi.) est ajouté par petites fractions. Après 5 min à cette température, le mélange réactionnel est laissé sous agitation pendant une nuit. Le DCU formé est filtré sur célite puis le résidu obtenu est purifié par flash chromatographie. Après lavage par une solution aqueuse d'acide chlorhydrique 2N, séchage sur sulfate de sodium, le solvant est évaporé. Le dimère obtenu est ensuite déprotégé en position N-terminale et refonctionnalisé selon les méthodes ci-dessus.
BrH2COC-NαhLeu- NαhLeu -Z : R^Z, R2= i-Bu, R3=R5=H, R6= COCH2Br,
R4= i-Bu. Composé PR1
RMN Η (CDC13) δ 0.94 (2xd, 6H, J=7.6 Hz), 1.72 (m, 2xlH), 2.64 (d, 2H, 7 Hz), 2.73 (d, 2H, 7 Hz), 3.49 (s, 2H), 3.81 (s, 2H), 5.20 (s, 2H), 7.36 (m, 5H) ), 8.11 (si, IH, 9.05 (si, IH). IV) ANALYSE BIOLOGIQUE DES COMPOSES DE FORMULE (Tb) ET DES COMPOSES P21 ET P22 :
Le protéasome est une structure protéique impliquée dans les processus de dégradation des protéines régulatrices du cycle ; c'est une structure protéique qui possède plusieurs activités protéolytiques associées à des sous-unités différentes du protéasome.
Au cours du cycle cellulaire des disfonctionnements du protéasome peuvent entraîner des anomalies de déroulement du cycle qui peuvent être dramatiques pour la cellule et l'organe considéré. Comme les inhibiteurs du protéasome peuvent arrêter la progression cellulaire et provoquer l'apoptose, ils sont devenus des drogues potentiellement très intéressantes pour le traitement de certaines tumeurs.
Les inhibiteurs du protéasome ont un très sérieux potentiel anticancéreux et les nombreuses études cliniques actuellement en cours pour évaluer leur rôle comme adjuvant dans des protocoles de cl imiothérapie, témoignent de cette importance.
Nous avons analysé l'effet des composés rétro sur les cultures cellulaires de leucémie de souris et constaté que parmi ces produits, trois composés ont un effet antiprolifératif. Cet effet a été observé sur deux autres types cellulaires, les hépatocytes de rat et une lignée humaine de cancer du sein. Dans ces trois systèmes, l'index de prolifération est voisin de zéro ce qui indique que sous l'effet des composés cités, les cellules cessent de croître.
Les composés PR7, PR6 et P21 (déjà décrit dans le brevet) sont des inhibiteurs de prolifération et ils n'affectent pas la viabilité des cellules. Les composés PR1, PR2, PR3, PR5, PR8 et P22 ( composé non rétro décrit ci-dessus) et inhibent la prolifération et provoquent la mort cellulaire avec des cinétiques qui varient de 2 à 12h selon les produits.
Ces composés sont donc particulièrement intéressants en tant que molécules antitumorales.

Claims

REVENDICATIONS
1. Utilisation de composés de formule générale (I) suivante suivante :
dans laquelle :
" n représente un nombre entier de 1 à 10, notamment n représente 1 ou 2,
" Y représente CH2 et Z représente CO, ou Y représente CO et Z représente CH2,
" Ri et Rβ, indépendamment l'un de l'autre, représentent : o un atome d'hydrogène, o un groupe utilisable dans le cadre de la protection des atomes d'azote en synthèse peptidique, tel que le groupe BOC, FMOC ou Z, o un groupe de formule -COR, ou -CH2COR dans laquelle R représente :
> un atome d'hydrogène, sous réserve que lorsque Ri est un hydrogène, celui-ci se présente sous forme d'un sel soluble dans les solvants aqueux, tel qu'un sel de trifluoroacétate,
> un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué par un ou plusieurs atomes d'halogène, tels que les groupes R représentant -CF3 ou un groupe -CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou un groupe alkyle susmentionné substitué par un groupe cyano, tel que le groupe R représentant -CH2-CN, ou par un groupe soufré tel que le groupe R représentant -CH2-SC2H5,
> un groupe -COORa dans lequel Ra représente H ou un groupe alkyle, tel qu'un groupe méthyle ou éthyle,
> un groupe aminé primaire -NH2 ou une aminé πre ou Iïïre,
> un groupe alkoxy, tel qu'un groupe méthoxy -OMe, ou éthoxy -OEt,
> un groupe phényle, > un groupe pyridinium, tel que le groupe de formule
" R2, R3, R4 et R5, indép s autres, représentant : o un atome d'hydrogène, o un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, le cas échéant substitué, notamment par un ou plusieurs atomes d'halogène ou par un ou plusieurs groupes aminé ou phényle, tels que les groupes butyle, isobutyle, -(CH2)4NH2, -CH2Ph, -(CH2)4NHBoc, " ou Ri en association avec R2, ou R6 en association avec R5, représentent un groupe de formule __ B<OH)2 pour la préparation d'un médicament pour le traitement des pathologies tumorales ou des maladies neurodégénératives telles que les maladies d'Alzheimer ou de Lehn.
2. Utilisation selon la revendication 1 de composés de formule générale (I) dans laquelle :
• Ri représente un groupe BOC, FMOC, Z ou H, sous réserve que lorsque
Ri représente H, celui-ci se présente sous forme de sel, tel qu'un sel de
+ trifluoroacétate de formule CF3CO2 , H3N -,
" R2 représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle,
• R3 représente H ou un groupe alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, tel qu'un groupe isobutyle, " l'un de R4 ou de R5 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, et Rβ représente un groupe de formule -COR ou -CH2COR tel que défini ci-dessus,
• ou R5 en association avec Rç représente un groupe de formule
n représente 1 ou 2,
Y et Z sont tels que définis dans la revendication 1.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, de composés de formule générale (I) dans laquelle R5 représente H, et Rβ représente un groupe -COR ou -CH2COR dans lequel R représente un groupe -CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou un groupe pyridinium.
4. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, de composés de formule générale (I) dans laquelle R5 représente H et Rβ représente un groupe -COCH2Br,
5. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, de composés de formule générale (I) dans laquelle Ri et R2 représentent H.
6. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 5, de composés de formule générale (I) dans laquelle Y représente CH2 et Z représente CO, à savoir les composés de formule (la) suivante :
dans laquelle n, et Ri à R sont tels que définis dans l'une des revendications 1 à
7. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 6, des composés de formules suivantes :
déprotégé
P3 déprotégé
déprotégé
déprotégé
H HΛD Pβ9 déprotégé
déprotégé
déprotégé
P15p déprotégé déprotégé
P17 déprotégé
P18 déprotégé
P19 PI 9 déprotégé
PTPl PTPl déprotégé
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate.
8. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 7 des composés de formules suivantes :
déprotégé
P21 P22
PTPl PTPl déprotégé
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate.
9. Utihsation selon l'une des revendications 1 à 8, des composés de formule générale (I), dans laquelle Y représente CO et Z représente CH2, à savoir les composés de formule (Ib) suivante :
dans laquelle n, et Ri à Rβ sont tels que définis dans les revendications 1 à 8.
10. Utilisation selon de composés de formule (Ib) selon la revendication 10, dans laquelle :
- n représente 1,
-. Ri représente un groupe Z, ou H, sous réserve que lorsque Ri représente H, celui-ci se présente sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate de formule CF3CO2 _, H3N+-,
- l'un de R ou de R3 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, notamment un groupe isobutyle,
- R4 représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, notamment un groupe isobutyle, ou un groupe -CH2C6H5, ou (CH2)4-NH2, ou -(CH2)4-NHBoc,
- R5 représente H, et R<s représente un groupe de formule -COR tel que défini ci-dessus, - ou R5 en association avec R6 représente un groupe de formule
11. Utilisation selon la revendication 10, caractérisée en ce que les composés de formule (Ib) sont ceux de formules suivantes :
12. Utilisation selon l'une des revendications 1 à 11, pour la préparation d'un médicament destiné au traitement de cancers tels que les cancers du foie, du colon, du sein, en induisant l'entrée en apoptose des cellules cancéreuses par inhibition du fonctionnement du protéasome.
13. Composés de formule générale (la) dans laquelle :
- n = 1,
- R5 représente H, et Rβ représente un groupe -COR ou -CH COR dans lequel R représente un groupe -CH2X, X représentant un atome d'halogène tel que Cl ou Br, ou un groupe pyridinium,
- Ri à i sont tels que définis dans les revendications 1 à 5. ..
14. Composés selon la revendication 13 de formule suivante
déprotégé
rotégé
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate.
15. Composés de formule générale (la) dans laquelle :
- n = 2,
- l'un de R ou de R5 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini dans la revendication 1 ,
- Ri, R2, R3 et R5, sont tels que définis dans l'une des revendications 1 à 5.
16. Composés selon la revendication 15 de formules suivantes
les composés déprotégés étant sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate.
17. Composés de formule générale (Ib) suivante :
dans laquelle Ri à Rg sont tels que définis dans la revendication 1.
18. Composés selon la revendication 17 de formule (Ib) dans laquelle :
- n représente 1,
- Ri représente un groupe Z, ou H, sous réserve que lorsque Ri représente H, celui-ci se présente sous forme de sel, tel qu'un sel de trifluoroacétate de formule CF3CO2 ", H3N+-,
- l'un de,R2 ou de R3 représente H, tandis que l'autre représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, notamment un groupe isobutyle,
- R représente un groupe alkyle tel que défini ci-dessus, notamment un groupe isobutyle, ou un groupe -CH2C6H5, ou (CH2) -NH2, ou -(CH2)4-NHBoc,
- R5 représente H, et représente un groupe de formule -COR tel que défini ci-dessus,
- ou R5 en association avec Rβ représente un groupe de formule
19. Composés selon la revendication 17 ou 18, de formules suivantes
PR7 PR8
PR9 DR1
20. Composition pharmaceutique comprenant un composé selon l'une des revendications 10 à 19 en association avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
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