EA045291B1 - Антитела, содержащие только тяжелые цепи, которые связываются с cd22 - Google Patents
Антитела, содержащие только тяжелые цепи, которые связываются с cd22 Download PDFInfo
- Publication number
- EA045291B1 EA045291B1 EA202091557 EA045291B1 EA 045291 B1 EA045291 B1 EA 045291B1 EA 202091557 EA202091557 EA 202091557 EA 045291 B1 EA045291 B1 EA 045291B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- heavy chain
- antibody
- seq
- antibodies
- sequence
- Prior art date
Links
- 101000884305 Homo sapiens B-cell receptor CD22 Proteins 0.000 title claims description 97
- 102100038080 B-cell receptor CD22 Human genes 0.000 title claims description 84
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 107
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 63
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 63
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 63
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 60
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 45
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 claims description 34
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 claims description 34
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims description 33
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 29
- 239000012636 effector Substances 0.000 claims description 18
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 14
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 9
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 29
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 28
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 23
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 21
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 20
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 18
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 17
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 16
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 14
- 102000044389 human CD22 Human genes 0.000 description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 13
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 13
- 208000031671 Large B-Cell Diffuse Lymphoma Diseases 0.000 description 12
- 206010012818 diffuse large B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 12
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 11
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 10
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 10
- 101000820585 Homo sapiens SUN domain-containing ossification factor Proteins 0.000 description 9
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 102100021651 SUN domain-containing ossification factor Human genes 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 208000037914 B-cell disorder Diseases 0.000 description 7
- 108010019670 Chimeric Antigen Receptors Proteins 0.000 description 7
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 7
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 7
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 7
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 7
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 6
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 6
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 5
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 5
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 5
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 5
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 5
- 102000017420 CD3 protein, epsilon/gamma/delta subunit Human genes 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 4
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000003519 mature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 4
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 4
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 4
- 201000000596 systemic lupus erythematosus Diseases 0.000 description 4
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 3
- WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N Benzyl alcohol Chemical compound OCC1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000011691 Burkitt lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 241000282836 Camelus dromedarius Species 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 3
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 3
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 3
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 description 3
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 3
- -1 framework 2 Proteins 0.000 description 3
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 3
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 3
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 2
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 2
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 2
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 2
- 108091007741 Chimeric antigen receptor T cells Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 208000002250 Hematologic Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 2
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Natural products OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 206010065857 Primary Effusion Lymphoma Diseases 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 108010003723 Single-Domain Antibodies Proteins 0.000 description 2
- 238000003314 affinity selection Methods 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000008135 aqueous vehicle Substances 0.000 description 2
- 238000012575 bio-layer interferometry Methods 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N catechol Chemical compound OC1=CC=CC=C1O YCIMNLLNPGFGHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 2
- 230000006240 deamidation Effects 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003297 immature b lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 2
- RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N m-cresol Chemical compound CC1=CC=CC(O)=C1 RLSSMJSEOOYNOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 2
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 208000024191 minimally invasive lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N pentan-3-ol Chemical compound CCC(O)CC AQIXEPGDORPWBJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 231100000683 possible toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N resorcinol Chemical compound OC1=CC=CC(O)=C1 GHMLBKRAJCXXBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-fluorophenyl)oxane-4-carboxylic acid Chemical compound C=1C=C(F)C=CC=1C1(C(=O)O)CCOCC1 CYDQOEWLBCCFJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-anilino-5-sulfonaphthalen-1-yl)diazenyl]-5-hydroxynaphthalene-2,7-disulfonic acid Chemical compound C=12C(O)=CC(S(O)(=O)=O)=CC2=CC(S(O)(=O)=O)=CC=1N=NC(C1=CC=CC(=C11)S(O)(=O)=O)=CC=C1NC1=CC=CC=C1 QFVHZQCOUORWEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- 206010069754 Acquired gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 206010002412 Angiocentric lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 235000002198 Annona diversifolia Nutrition 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000036170 B-Cell Marginal Zone Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000025324 B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000012526 B-cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 206010003908 B-cell small lymphocytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000025321 B-lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000282828 Camelus bactrianus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000251730 Chondrichthyes Species 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102100023044 Cytosolic acyl coenzyme A thioester hydrolase Human genes 0.000 description 1
- 101710152190 Cytosolic acyl coenzyme A thioester hydrolase Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N Dihydrogen disulfide Chemical compound SS BWGNESOTFCXPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017274 Diospyros sandwicensis Nutrition 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 206010061850 Extranodal marginal zone B-cell lymphoma (MALT type) Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Polymers OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 1
- 101100327294 Homo sapiens CD22 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical class C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241000282842 Lama glama Species 0.000 description 1
- 241000282852 Lama guanicoe Species 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- 201000003791 MALT lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 206010064912 Malignant transformation Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 208000025205 Mantle-Cell Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101100058506 Mus musculus Bloc1s5 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000007452 Plasmacytoma Diseases 0.000 description 1
- 229920000954 Polyglycolide Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 241000508269 Psidium Species 0.000 description 1
- 101710138747 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 1
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108010029157 Sialic Acid Binding Ig-like Lectin 2 Proteins 0.000 description 1
- 102000007073 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108010047827 Sialic Acid Binding Immunoglobulin-like Lectins Proteins 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)=CNC2=C1 LCPVBXOHXMBLFW-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- 241000282830 Tylopoda Species 0.000 description 1
- 108091005906 Type I transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001416177 Vicugna pacos Species 0.000 description 1
- 241000282840 Vicugna vicugna Species 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 1
- 238000012382 advanced drug delivery Methods 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 238000004873 anchoring Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000611 antibody drug conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000011230 antibody-based therapy Methods 0.000 description 1
- 229940049595 antibody-drug conjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- 229960000686 benzalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- 229960001950 benzethonium chloride Drugs 0.000 description 1
- UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M benzethonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(C(C)(C)CC(C)(C)C)=CC=C1OCCOCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 UREZNYTWGJKWBI-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019445 benzyl alcohol Nutrition 0.000 description 1
- CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N benzyl(dimethyl)azanium;chloride Chemical compound [Cl-].C[NH+](C)CC1=CC=CC=C1 CADWTSSKOVRVJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000013357 binding ELISA Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H bis[(2-oxo-1,3,2$l^{5},4$l^{2}-dioxaphosphaplumbetan-2-yl)oxy]lead Chemical compound [Pb+2].[Pb+2].[Pb+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O HUTDDBSSHVOYJR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N butyl alcohol Substances CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 238000005515 capillary zone electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229940044683 chemotherapy drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000004154 complement system Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N cyclohexanol Chemical compound OC1CCCCC1 HPXRVTGHNJAIIH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 239000002355 dual-layer Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 229950009760 epratuzumab Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 201000003444 follicular lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 108091008053 gene clusters Proteins 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 201000009277 hairy cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 208000025750 heavy chain disease Diseases 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000710 homodimer Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 108091008042 inhibitory receptors Proteins 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229950004101 inotuzumab ozogamicin Drugs 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 1
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 1
- 238000005305 interferometry Methods 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004068 intracellular signaling Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000006116 lymphomatoid granulomatosis Diseases 0.000 description 1
- 201000007919 lymphoplasmacytic lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 230000036212 malign transformation Effects 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 210000003826 marginal zone b cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 201000000638 mature B-cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000010915 neoplasm of mature B-cells Diseases 0.000 description 1
- 230000006780 non-homologous end joining Effects 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N p-hydroxybenzoic acid methyl ester Natural products COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 208000010626 plasma cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 208000017426 precursor B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000000541 pulsatile effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 201000006845 reticulosarcoma Diseases 0.000 description 1
- 208000029922 reticulum cell sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 125000005629 sialic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 229940126586 small molecule drug Drugs 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001540 sodium lactate Substances 0.000 description 1
- 229940005581 sodium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000011088 sodium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 230000037439 somatic mutation Effects 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 206010062113 splenic marginal zone lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Description
Перекрестная ссылка на родственные заявки
Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/609759, поданной 22 декабря 2017 г., описание которой включено в данный документ в полном объеме посредством ссылки.
Область техники
Данное изобретение относится к антителам человека, содержащим только тяжелые цепи, (например, UniAbs™), которые связываются с CD22. Данное изобретение также относится к способам получения таких антител, композициям, включая фармацевтические композиции, содержащие такие антитела, и их применению для лечения В-клеточных расстройств, которые характеризуются экспрессией CD22.
Уровень техники
CD22.
CD22, также известный как SIGLEC-2 (UniProt P20273), является рецептором клеточной поверхности, который экспрессируется на зрелых В-клетках. CD22 содержит несколько доменов Ig и является членом суперсемейства иммуноглобулинов. Внеклеточный домен CD22 взаимодействует с фрагментами сиаловой кислоты, включая те, которые присутствуют на белке клеточной поверхности CD45. Считается, что CD22 функционирует как ингибиторный рецептор для сигналинга В-клеточных рецепторов. Наряду с CD20 и CD19, ограниченная экспрессия В-клеток CD22 делает его привлекательной мишенью для терапевтического лечения В-клеточных злокачественных новообразований. Моноклональные антитела, специфичные к CD22, были описаны в литературе (например, Jabbour, Elias, et al. Monoclonal antibodies in acute lymphoblastic leukemia. Blood 125.26 (2015): 4010-4016) и терапевтически использовались в качестве стандартных препаратов моноклональных антител (например, эпратузумаба), а также в качестве конъюгатов антитело-лекарственное средство (инотузумаб озогамицин). Кроме того, в клинической практике для лечения лейкемии использовались Т-клетки анти-CD22 химерного антигенного рецептора (Fry, Terry J., et al. CD22-targeted CAR T cells induce remission in B-ALL that is naive or resistant to CD19targeted CAR immunotherapy. Nature medicine (2017)).
Антитела, содержащие тяжелые цепи.
В обычном антителе IgG, ассоциация тяжелой цепи и легкой цепи частично обусловлена гидрофобным взаимодействием между константной областью легкой цепи и константным доменом CH1 тяжелой цепи. В областях тяжелой цепи каркаса 2 (FR2) и каркаса 4 (FR4) имеются дополнительные остатки, которые также способствуют этому гидрофобному взаимодействию между тяжелой и легкой цепями.
Известно, однако, что сыворотка верблюдовых (подотряд Tylopoda, который включает верблюдов, дромадеров и лам) содержит основной тип антител, состоящих исключительно из парных Н-цепей (антитела, содержащие только тяжелые цепи или UniAbs™). UniAbs™ Camelidae (Camelus dromedarius, Camelus bactrianus, Lama glama, Lama guanaco, Lama alpaca и Lama vicugna) имеют уникальную структуру, состоящую из одного вариабельного домена (VHH), шарнирной области и двух константных доменов (СН2 и СН3), которые высокогомологичны доменам СН2 и СН3 классических антител. Данные UniAbs™ не имеют первого домена константной области (СН1), который присутствует в геноме, но подвергается сплайсингу во время процессинга мРНК. Отсутствие домена СН1 объясняет отсутствие легкой цепи в UniAbs™, поскольку этот домен является местом закрепления константного домена легкой цепи. Такие UniAbs™ естественным образом эволюционировали для придания антигенсвязывающей специфичности и высокой аффинности тремя CDR из обычных антител или их фрагментов (Muyldermans, 2001; J Biotechnol 74:277-302; Revets et al., 2005; Expert Opin Biol Ther 5:111-124). Хрящевые рыбы, такие как акулы, также выработали особый тип иммуноглобулина, обозначенный как IgNAR, который лишен легких полипептидных цепей и полностью состоит из тяжелых цепей. Молекулами IgNAR можно манипулировать с помощью молекулярной инженерии для получения вариабельного домена полипептида с одной тяжелой цепью (vNAR) (Nuttall et al. Eur. J. Biochem. 270, 3543-3554 (2003); Nuttall et al. Function and Bioinformatics 55, 187-197 (2004); Dooley et al., Molecular Immunology 40, 25-33 (2003)).
Способность антител, содержащих только тяжелые цепи, лишенных легкой цепи, связывать антиген была установлена в 1960-х годах (Jaton et al. (1968) Biochemistry, 7, 4185-4195). Тяжелая цепь иммуноглобулина, физически отделенная от легкой цепи, сохранила 80% антигенсвязывающей активности относительно тетрамерного антитела. Sitia et al. (1990) Cell, 60, 781-790 продемонстрировали, что удаление домена СН1 из перегруппированного гена μ мыши приводит к получению антитела, содержащего только тяжелые цепи, лишенного легкой цепи, в клеточной культуре млекопитающих. Вырабатываемые антитела сохраняли специфичность связывания VH и эффекторные функции.
Антитела, содержащие только тяжелые цепи, с высокой специфичностью и аффинностью могут создаваться против различных антигенов посредством иммунизации (van der Linden, R. H., et al. Biochim. Biophys. Acta. 1431, 37-46 (1999)), а часть VHH может быть легко клонирована и экспрессирована в дрожжах (Frenken, L. G. J., et al. J. Biotechnol. 78, 11-21 (2000)). Их уровни экспрессии, растворимости и стабильности значительно выше, чем у классических фрагментов F(ab) или Fv (Ghahroudi, M. A. et al. FEBS Lett. 414, 521-526 (1997)).
Мыши, у которых λ (лямбда) локус легкой (L)-цепи и/или λ и к (каппа) локусы L-цепи были функ
- 1 045291 ционально подавлены, и антитела, продуцируемые такими мышами, описаны в патентах США № 7541513 и 8367888. Рекомбинантное продуцирование антител, содержащих только тяжелые цепи, у мышей и крыс было описано, например, в WO 2006008548; публикации заявки на патент США № 20100122358; Nguyen et al., 2003, Immunology; 109(1), 93-101; Bruggemann et al., Crit. Rev. Immunol; 2006, 26(5):377-90; and Zou et al., 2007, J Exp Med; 204(13): 3271-3283. Получение нокаутных крыс с помощью микроинъекций эмбрионам цинк-пальцевой нуклеазы описано в Geurts et al., 2009, Science, 325(5939):433. Растворимые антитела, содержащие только тяжелые цепи, и трансгенные грызуны, содержащие гетерологичный локус тяжелой цепи, продуцирующий такие антитела, описаны в патентах США № 8883150 и 9365655. Структуры CAR-T, содержащие однодоменные антитела в качестве связывающего (нацеливающего) домена, описаны, например, в Iri-Sofla et al., 2011, Experimental Cell Research 317:2630-2641 и Jamnani et al., 2014, Biochim Biophys Acta, 1840:378-386.
Сущность изобретения
Аспекты изобретения относятся к антителам, содержащим только тяжелые цепи, включая, без ограничения, UniAbs™, с аффинностью связывания к CD22. Дополнительные аспекты изобретения относятся к способам получения таких антител, композициям, содержащим такие антитела, и их применению для лечения В-клеточных расстройств, которые характеризуются экспрессией CD22.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержащее только тяжелые цепи, которое связывается с CD22, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: (a) CDR1, имеющую две или менее замены в любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 1-10, и/или (b) CDR2, имеющую две или менее замены в любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 11-17, и/или (с) CDR3, имеющую две или менее замены в любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 18-23. В некоторых вариантах осуществления последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 присутствуют в каркасе человека. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, дополнительно содержит последовательность константной области тяжелой цепи в отсутствие последовательности СН1.
В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, содержит: (а) последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и/или (b) последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 11-17, и/или (с) последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-23. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, содержит: (а) последовательность CDR1, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и (b) последовательность CDR2, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 11-17, и (с) последовательность CDR3, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-23.
В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, содержит: (а) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 11 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 18 или (b) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 19, или (с) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 20. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, содержит вариабельную область тяжелой цепи, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с любой из последовательностей SEQ ID NO: 24-84. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 24-84. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, содержит последовательность вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 24.
В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, которое связывается с CD22, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую (а) последовательность CDR1 формулы:
G X1 S I Х2 Х3 Х4 Х5 Х6 Y, где Х1 представляет собой D или G; Х2 представляет собой S, Т, I или N; Х3 представляет собой S или D; Х4 представляет собой G, S или N; Х5 представляет собой D, G или S, а Х6 представляет собой Y или Н; и (b) последовательность CDR2 формулы:
Х7 Х8 Y Х9 G Х10 Х11, где Х7 представляет собой I или V; Х8 представляет собой Y или Н; Х9 представляет собой S или Т; Х10 представляет собой А, V или S, а Хп представляет собой Т или А; и (с) последовательность CDR3 формулы:
Х12 R Х13 D S S Х14 W R S, где Х12 представляет собой Т, А или K; Х13 представляет собой D или Е, a Хм представляет собой N или S.
В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, которое связывается с CD22, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 в каркасе VH человека, причем последовательности CDR представляют собой последовательности, имеющие две или менее замены в последовательности CDR, выбранной из группы, состоящей
- 2 045291 из SEQ ID NO: 1-23.
В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 в каркасе VH человека, причем последовательности CDR выбраны из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-23.
В некоторых вариантах осуществления антитело содержащее только тяжелые цепи, которое связывается с CD22, содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую: (а) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 11 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 18 или (b) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 19, или (с) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 20 в каркасе VH человека.
В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, является мультиспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, является биспецифичным. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, имеет аффинность связывания с двумя различными белками CD22. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, имеет аффинность связывания с двумя разными эпитопами на одном и том же белке CD22. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, имеет аффинность связывания с эффекторной клеткой. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, имеет аффинность связывания с Тклеточным антигеном. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, имеет аффинность связывания с CD3. В некоторых вариантах осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, имеет формат CAR-T.
Аспекты изобретения относятся к фармацевтическим композициям, содержащим антитело, содержащее только тяжелые цепи, как описано в данном документе.
Аспекты изобретения относятся к способам лечения В-клеточного расстройства, характеризующегося экспрессией CD22, включающим введение субъекту с указанным расстройством антитела или фармацевтической композиции, как описано в данном документе. В определенных других аспектах изобретение относится к применению антитела, описанного в данном документе, при получении лекарственного средства для лечения В-клеточного расстройства, характеризующегося экспрессией CD22. В еще других аспектах изобретение относится к антителу, описанному в данном документе, для применения в лечении В-клеточного расстройства, характеризующегося экспрессией CD22. Что касается данных аспектов, и в некоторых вариантах осуществления расстройство представляет собой диффузную Вкрупноклеточную лимфому (ДВККЛ). В некоторых вариантах осуществления расстройство представляет собой неходжкинскую лимфому (НХЛ). В некоторых вариантах осуществления расстройство представляет собой системную красную волчанку (СКВ). В некоторых вариантах осуществления расстройство представляет собой ревматоидный артрит (РА). В некоторых вариантах осуществления расстройство представляет собой рассеянный склероз (PC).
Аспекты изобретения относятся к полинуклеотидам, кодирующим антитело, описанное в данном документе, векторам, содержащим такие полинуклеотиды, и клеткам, содержащим такие векторы.
Аспекты изобретения относятся к способам получения антитела, описанным в данном документе, включающим выращивание клетки, описанной в данном документе, в условиях, благоприятных для экспрессии антитела, и выделение антитела из клетки.
Аспекты изобретения относятся к способам получения антитела, описанным в данном документе, включающим иммунизацию животного UniRat при помощи CD22 и идентификацию CD22-связывающих последовательностей тяжелой цепи.
Данные и другие аспекты будут дополнительно объяснены в остальной части раскрытия, включая примеры.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1 показаны уникальные аминокислотные последовательности CDR антитела к CD22, содержащего только тяжелые цепи.
На фиг. 2 показаны аминокислотные последовательности вариабельного домена антитела к CD22, содержащего только тяжелые цепи.
На фиг. 3 показаны аминокислотные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 антитела к CD22, содержащего только тяжелые цепи.
На фиг. 4 показана биологическая активность антитела к CD22, содержащего только тяжелые цепи.
На фиг. 5А представлен график, изображающий процент специфического лизиса как функцию концентрации антител для клеток Daudi.
На фиг. 5В представлен график, изображающий процент специфического лизиса как функцию концентрации антител для клеток Raji.
На фиг. 5С представлен график, изображающий процент специфического лизиса как функцию концентрации антител для клеток Ramos.
На фиг. 5D представлена схематическая иллюстрация биспецифичного антитела к CD22xCD3 в соответствии с одним вариантом осуществления изобретения.
- 3 045291
На фиг. 6 представлена серия графиков, показывающих титр сыворотки как функцию разбавления.
Детальное описание предпочтительных вариантов осуществления
При практической реализации настоящего изобретения применяют, если не указано иное, традиционные методики молекулярной биологии (включая рекомбинантные методики), микробиологии, клеточной биологии, биохимии и иммунологии, которые известны специалистам в данной области техники. Такие способы подробно описаны в литературе, например, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait, ed., 1984); Animal Cell Culture (R. I. Freshney, ed., 1987); Methods in Enzymology (Academic Press, Inc).; Current Protocols in Molecular Biology (F. M. Ausubel et al., eds., 1987, and periodic updates); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., ed., 1994); A Practical Guide to Molecular Cloning (Perbal Bernard V., 1988); Phage Display: A Laboratory Manual (Barbas et al., 2001); Harlow, Lane and Harlow, Using Antibodies: A Laboratory Manual: Portable Protocol No. I, Cold Spring Harbor Laboratory (1998); и Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory; (1988).
Когда приводится диапазон значений, следует понимать, что данное изобретение охватывает каждое промежуточное значение с точностью до десятого знака нижнего предела, если в контексте явно не указано иное, между верхним и нижним пределом этого диапазона, а также любое другое указанное или промежуточное значение в таком указанном диапазоне. Верхний и нижний пределы данных меньших диапазонов могут быть независимо включены в меньшие диапазоны и также включены в данное изобретение с учетом любого специальным образом исключенного предела в указанном диапазоне. Если указанный диапазон включает один или оба предела, диапазоны, исключающие один или оба этих включенных предела, также включены в данное изобретение.
Если не указано иное, остатки антител в данном документе нумеруются в соответствии с системой нумерации Kabat (e.g., Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)).
Для обеспечения полного понимания настоящего изобретения в нижеследующем подробном описании изложены многочисленные конкретные детали. Однако для специалиста в данной области техники будет очевидно, что настоящее изобретение может применяться на практике и без одной или более указанных конкретных деталей. В других случаях общеизвестные отличительные признаки и процедуры, хорошо известные специалистам в данной области техники, не были описаны во избежание затруднения понимания изобретения.
Все приведенные в настоящем документе ссылки, включая патентные заявки и публикации, включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
I. Определения.
Под термином содержащий подразумевается, что перечисленные элементы требуются для композиции/способа/набора, однако для формирования композиции/способа/набора и т.д. в рамках формулы изобретения могут быть включены и другие элементы.
Под термином состоящий по существу из подразумевается ограничение рамок описанной композиции или способа указанными материалами или поэтапными действиями, не оказывающими существенного влияния на основную и новую характеристику(-и) объекта изобретения.
Под термином состоящий из подразумевается исключение любого элемента, поэтапного действия или ингредиента, не указанного в формуле изобретения, из композиции, способа или набора.
Остатки антител в данном документе пронумерованы в соответствии с системой нумерации Kabat и системой нумерации EU. Система нумерации Kabat обычно используется для обозначения остатка в вариабельном домене (приблизительно остатки 1-113 тяжелой цепи) (например, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). Система нумерации EU или индекс EU обычно используется для обозначения остатка в константной области тяжелой цепи иммуноглобулина (например, индекс EU, описанный в Kabat et al., выше). Индекс EU в соответствии с Kabat относится к нумерации остатков EU человеческого антитела IgG1. Если не указано иное, то в данном документе ссылки на номера остатков в вариабельном домене антител означают нумерацию остатков в соответствии с системой нумерации Kabat. Если не указано иное, то в данном документе ссылки на номера остатков в константном домене антител означают нумерацию остатков в соответствии с системой нумерации EU.
Термин моноклональное антитело в данном документе относится к антителу, полученному из популяции в значительной степени однородных антител, то есть отдельные антитела в составе популяции являются идентичными, за исключением мутаций, происходящих по естественным причинам, которые могут присутствовать в небольших количествах. Моноклональные антитела являются высокоспецифичными и направлены против одного антигенного сайта. Кроме того, в отличие от препаратов обычных (поликлональных) антител, которые обычно включают разные антитела, направленные против разных детерминант (эпитопов), каждое моноклональное антитело направлено против одиночной детерминанты на антигене. Моноклональные антитела в соответствии с данным изобретением могут быть получены гибридомным способом, впервые описанным Kohler et al. (1975) Nature 256:495, также могут быть получены, например, способами получения рекомбинантного белка (см., например, патент США № 4816567).
- 4 045291
Термин вариабельный, в контексте данного документа, в связи с антителами относится к тому факту, что последовательности некоторых частей вариабельных доменов антитела сильно различаются у разных антител и вносят вклад в связывание и специфичность каждого конкретного антитела по отношению к его конкретному антигену. В то же время вариабельность не является равномерно распределенной по вариабельным доменам антител. Она сосредоточена в трех сегментах вариабельных доменов как легкой, так и тяжелой цепи, называемых гипервариабельными областями. Более консервативные фрагменты вариабельных доменов называются каркасными областями (FR). Вариабельные домены нативных легких и тяжелых цепей содержат по четыре FR, преимущественно принимающих конфигурацию β-листа и соединенных тремя гипервариабельными областями, образующими петли, соединяющие структуры β-типа, а в некоторых случаях, являющиеся их частью. Гипервариабельные области каждой цепи удерживаются вместе в непосредственной близости FR и, вместе с гипервариабельными областями другой цепи, участвуют в образовании антиген-связывающего сайта антител (см. Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Константные домены не принимают непосредственного участия в связывании антитела с антигеном, однако проявляют различные эффекторные функции, например, участие антитела в антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности (АЗКЦ).
Термин гипервариабельная область при применении в данном документе, относится к аминокислотным остаткам антитела, которые отвечают за связывание антигена. Гипервариабельная область обычно содержит аминокислотные остатки из области, определяющей комплементарность или CDR (например, остатки 31-35 (H1), 50-65 (Н2) и 95-102 (Н3) в вариабельном домене тяжелой цепи; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) и/или остатки из остатков гипервариабельной петли 26-32 (H1), 53-55 (Н2) и 96101 (Н3) в вариабельном домене тяжелой цепи; Chothia и Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Каркасная область или остатки FR, как определено в данном документе, представляют собой остатки гипервариабельной области, отличные от остатков вариабельного домена.
Примерные обозначения CDR показаны в данном документе, однако специалисту в данной области техники будет понятно, что обычно используется ряд определений CDR, включая определение по Kabat (см. Zhao et al. A germline knowledge based computational approach for determining antibody complementarity determining regions. Mol Immunol. 2010;47:694-700), которое основано на изменчивости последовательности и является наиболее часто используемым. Определение по Chothia основано на расположении областей замкнутой структуры (Chothia et al. Conformations of immunoglobulin hypervariable regions. Nature. 1989; 342:877-883). Представляющие интерес альтернативные определения CDR включают, без ограничения, те, которые раскрыты Honegger, Yet another numbering scheme for immunoglobulin variable domains: an automatic modeling and analysis tool. J Mol Biol. 2001;309:657-670; Ofran et al. Automated identification of complementarity determining regions (CDRs) reveals peculiar characteristics of CDRs and В cell epitopes. J Immunol. 2008;181:6230-6235; Almagro Identification of differences in the specificitydetermining residues of antibodies that recognize antigens of different size: implications for the rational design of antibody repertoires. J Mol Recognit. 2004;17:132-143; и Padlanet al. Identification of specificitydetermining residues in antibodies. Faseb J. 1995;9:133-139., содержание каждого из которых включено в данный документ в полном объеме посредством ссылки.
Термины антитело, содержащее только тяжелые цепи, антитело с тяжелыми цепями используются в данном документе взаимозаменяемо и относятся в самом широком смысле к антителам, в которых отсутствует легкая цепь обычного антитела. Термины, в частности, включают, без ограничения, гомодимерные антитела, содержащие антигенсвязывающий домен VH и константные домены СН2 и СН3, в отсутствие домена СН1; функциональные (антигенсвязывающие) варианты таких антител, растворимые варианты VH, Ig-NAR, содержащие гомодимер одного вариабельного домена (V-NAR) и пяти Сподобных константных доменов (C-NAR), и их функциональные фрагменты; и растворимые однодоменные антитела (sUniDabs™). В одном варианте осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, состоит из антигенсвязывающего домена вариабельной области, состоящего из каркаса 1, CDR1, каркаса 2, CDR2, каркаса 3, CDR3 и каркаса 4. В другом варианте осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, состоит из антигенсвязывающего домена по меньшей мере части шарнирной области и доменов СН2, и СН3. В другом варианте осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, состоит из антигенсвязывающего домена по меньшей мере части шарнирной области и домена СН2. В дополнительном варианте осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи, состоит из антигенсвязывающего домена, по меньшей мере части шарнирной области и домена СН3. Антитела, содержащие только тяжелые цепи, у которых домен СН2 и/или СН3 усечен, также включены в данный документ. В дополнительном варианте осуществления тяжелая цепь состоит из антигенсвязывающего домена и по меньшей мере одного домена СН (CH1, CH2, СН3 или СН4), но без шарнирной области. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, может быть в форме димера, в котором две тяжелые цепи дисульфидно связаны друг с другом, ковалентно или нековалентно связаны друг с другом. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, может принадлежать к подклассу IgG, но также в данном документе
- 5 045291 включены антитела, относящиеся к другим подклассам, таким как подкласс IgM, IgA, IgD и IgE. В конкретном варианте осуществления антитело, содержащее только тяжелые цепи имеет подтип IgG1, IgG2, IgG3 или IgG4, в частности подтип IgG1. В одном варианте осуществления антитела, содержащие только тяжелые цепи, в данном документе используются в качестве связывающего (нацеливающего) домена химерного антигенного рецептора (CAR). Определение, в частности, включает антитела человека, содержащие только тяжелые цепи, называемые UniAbs™, продуцируемые трансгенными крысами с иммуноглобулином человека (UniRat™). Вариабельные области (VH) UniAbs™ называют UniDabs™, и являются универсальными строительными блоками, которые могут быть связаны с областями Fc или сывороточным альбумином для разработки новых терапевтических средств с мультиспецифичностью, повышенной эффективностью и увеличенным периодом полужизни. Поскольку гомодимерные UniAbs™ лишены легкой цепи и, следовательно, домена VL, антиген распознается одним единственным доменом, то есть вариабельным доменом тяжелой цепи антитела, содержащего только тяжелые цепи (VH).
Термины CD22 и кластер дифференцировки-22 используемые в данном документе относятся к молекуле лектинов семейства SIGLEC, обнаруживаемой на поверхности зрелых В-клеток и в меньшей степени в некоторых незрелых В-клетках. Термин CD22 включает белок CD22 человека и любого вида животных, отличных от человека, и, в частности, включает CD22 человека, а также CD22 млекопитающих, отличных от человека.
Используемый в данном документе термин CD22 человека включает любые варианты, изоформы и видовые гомологи CD22 человека (UniProt P20273) независимо от их источника или способа получения. Таким образом, CD22 человека включает CD22 человека, естественно экспрессируемый клетками, и CD22, экспрессируемый в клетках, трансфицированных геном CD22 человека.
Термины анти-CD22 антитело, содержащее только тяжелые цепи, антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи, анти-CD22 антитело, содержащее тяжелые цепи и антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи используются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения антитела, содержащего только тяжелые цепи, как определено выше, для иммуноспецифического связывания с CD22, включая CD22 человека, как определено выше. Определение включает, без ограничения, антитела человека, содержащие только тяжелые цепи, продуцируемые трансгенными животными, такими как трансгенные крысы или трансгенные мыши, экспрессирующие иммуноглобулин человека, включая UniRats™, продуцирующие антитела UniAb™ к CD22 человека, как определено выше.
Процент (%) идентичности аминокислотной последовательности в отношении эталонной полипептидной последовательности определяется как процент аминокислотных остатков в кандидатной последовательности, которые идентичны с аминокислотными остатками в эталонной полипептидной последовательности, после выравнивания последовательностей и введения в случае необходимости гэпов для достижения максимального процента идентичности последовательности, и не считая любые консервативные замены частью идентичности последовательности. Выравнивание в целях определения процента идентичности аминокислотной последовательности может быть выполнено различными способами, известными специалисту в данной области техники, например, с помощью общедоступного программного обеспечения, такого как BLAST, BLAST-2, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области техники могут определить соответствующие параметры для выравнивания последовательностей, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей. Для целей данного документа, тем не менее, значения % идентичности аминокислотной последовательности получены с использованием программы для сравнения последовательностей ALIGN-2.
Выделенным антителом является такое, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено из компонента его естественной среды. Загрязняющий компонент естественного окружения представляет собой вещества, которые влияют на диагностическое или терапевтическое применение антитела, и могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В предпочтительных вариантах осуществления антитело будет очищено (1) до более 95% по массе антитела, как определено методом Лоури, и наиболее предпочтительно более 99% по массе, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков N-концевой или внутренней аминокислотной последовательности, используя секвенатор с вращающимся стаканом, или (3) до гомогенности (SDS-PAGE) в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием красителя Кумасси синего или, предпочтительнее, красителя на основе серебра. Выделенное антитело включает антитело in situ в рекомбинантных клетках, поскольку по меньшей мере один компонент естественной среды антитела будет отсутствовать. Обычно, однако, выделенное антитело будет получено с помощью по меньшей мере одного этапа очистки.
Антитела по настоящему изобретению включают мультиспецифичные антитела. Мультиспецифичные антитела имеют более чем одну специфичность связывания. Термин мультиспецифичный, в частности, включает биспецифичный и триспецифичный, а также аффинность независимого специфического связывания высшего порядка, такую как полиэпитопная специфичность высшего порядка, а также тетравалентные антитела и фрагменты антител. Мультиспецифичные антитела, в частности, включают
- 6 045291 антитела, содержащие комбинацию различных связывающих объектов, а также антитела, содержащие более чем один и тот же связывающий объект. Термины мультиспецифичное антитело, мультиспецифичное антитело, содержащее только тяжелые цепи, мультиспецифическое антитело, содержащее тяжелые цепи и мультиспецифичное UniAb™ используются в данном документе в самом широком смысле и охватывают все антитела с более чем одной специфичностью связывания. Мультиспецифичные антитела к CD22, содержащие тяжелые цепи, по данному изобретению, в частности, включают антитела, иммуноспецифически связывающиеся с более чем одним неперекрывающимся эпитопом на белке CD22, таким как CD22 человека.
Эпитоп представляет собой участок на поверхности молекулы антигена, с которым связывается одна молекула антитела. Обычно антиген имеет несколько или много разных эпитопов и вступает в реакцию со многими различными антителами. Термин, в частности, включает линейные эпитопы и конформационные эпитопы.
Эпитопное картирование представляет собой процесс идентификации сайтов связывания или эпитопов антител на их целевых антигенах. Эпитопы антител могут быть линейными или конформационными эпитопами. Линейные эпитопы образованы непрерывной последовательностью аминокислот в белке. Конформационные эпитопы образуются из аминокислот, которые являются прерывистыми в последовательности белка, но которые объединяются при сворачивании белка в его трехмерную структуру.
Термин полиэпитопная специфичность относится к способности специфически связываться с двумя или более различными эпитопами на одной или разных мишенях. Как отмечено выше, данное изобретение, в частности, включает антитела к CD22, содержащие только тяжелые цепи, с полиэпитопной специфичностью, то есть антитела к CD22, содержащие только тяжелые цепи, связывающиеся с двумя или более неперекрывающимися эпитопами на белке CD22, таком как CD22 человека. Термин неперекрывающийся эпитоп(ы) или неконкурентный эпитоп(ы) антигена определяется в данном документе как означающий эпитоп(ы), которые распознаются одним членом пары антигенспецифичных антител, но не другим членом. Пары антител или антигенсвязывающие области, нацеленные на один и тот же антиген на мультиспецифичном антителе, распознающие неперекрывающиеся эпитопы, не конкурируют за связывание с этим антигеном и способны связывать этот антиген одновременно.
Антитело связывает по существу тот же эпитоп, что и эталонное антитело, когда два антитела распознают идентичные или стерически перекрывающиеся эпитопы. Наиболее широко используемыми и быстрыми способами для определения того, связываются ли два эпитопа с идентичными или стерически перекрывающимися эпитопами, являются анализы конкурентного связывания, которые могут быть сконфигурированы во всем количестве различных форматов с использованием либо меченого антигена, либо меченого антитела. Обычно антиген иммобилизуют в 96-луночном планшете, и способность немеченых антител блокировать связывание меченых антител измеряют с использованием радиоактивных или ферментных меток.
Термин валентный, в контексте настоящего документа, относится к указанному количеству сайтов связывания в молекуле антитела.
Поливалентное антитело имеет два или более сайтов связывания. Таким образом, термины двухвалентный, трехвалентный и четырехвалентный относятся к наличию двух сайтов связывания, трех сайтов связывания и четырех сайтов связывания, соответственно. Таким образом, биспецифичное антитело по изобретению является по меньшей мере двухвалентным и может быть трехвалентным, четырехвалентным или иным образом поливалентным.
Известно большое разнообразие способов и конфигураций белка и используется для получения биспецифичных моноклональных антител (BsMAB), триспецифичных антител и тому подобного.
Термин биспецифичная трехцепочечная антителоподобная молекула или ТСА используется в настоящем документе для обозначения антителоподобных молекул, включающих, состоящих по существу или состоящих из трех полипептидных субъединиц, две из которых содержат, состоят по существу из или состоят из одной тяжелой и одной легкой цепи моноклонального антитела, или функциональных антигенсвязывающих фрагментов таких цепей антитела, содержащие антигенсвязывающую область и по меньшей мере один СН-домен. Данная пара тяжелая цепь/легкая цепь обладает специфичностью связывания для первого антигена. Третья полипептидная субъединица содержит, состоит по существу или состоит из антитела, содержащего только тяжелые цепи, содержащего участок Fc, содержащий домены СН2 и/или СН3, и/или СН4, в отсутствие домена СН1, и антигенсвязывающий домен, который связывает эпитоп второго антигена или другой эпитоп первого антигена, причем такой связывающий домен происходит из или имеет идентичность последовательности вариабельной области тяжелой или легкой цепи антитела. Части такой вариабельной области могут кодироваться сегментами гена VH и/или VL, сегментами гена D и JH, или сегментами гена JL. Вариабельная область может кодироваться реаранжированными генными сегментами VHDJH, VLDJH, VHJL или VLJL. Белок ТСА использует антитело, содержащее только тяжелые цепи, как определено выше.
Термин химерный антигенный рецептор или CAR используется в данном описании в самом широком смысле для обозначения сконструированного рецептора, который прививает желаемую специфичность связывания (например, антигенсвязывающую область моноклонального антитела или другого
- 7 045291 лиганда) к охватывающему мембрану и внутриклеточному сигнальному доменам. Как правило, рецептор используется для прививки специфичности моноклонального антитела на Т-клетку для создания химерных антигенных рецепторов (CAR). (J Natl Cancer Inst, 2015; 108(7):dvj439; and Jackson et al., Nature Reviews Clinical Oncology, 2016; 13:370-383).
Термин антитело человека используется в данном документе для включения антител, которые имеют вариабельные и константные области, полученные из последовательностей иммуноглобулина человеческой зародышевой линии. В данном документе, антитела человека могут включать аминокислотные остатки, не кодируемые последовательностями иммуноглобулина человека зародышевой линии, например, мутации, введенные случайным или специфичным для сайта мутагенезом in vitro или с помощью соматической мутации in vivo. Термин антитело человека, в частности, включает антитела, содержащие только тяжелые цепи, имеющие последовательности вариабельной области тяжелой цепи человека, продуцируемые трансгенными животными, такими как трансгенные крысы или мыши, в частности UniAbs™, продуцируемые UniRats™, как определено выше.
Под химерным антителом или химерным иммуноглобулином подразумевается молекула иммуноглобулина, содержащая аминокислотные последовательности по меньшей мере из двух разных локусов Ig, например, трансгенное антитело, содержащее часть, кодируемую локусом Ig человека, и часть, кодируемую локусом Ig крысы. Химерные антитела включают трансгенные антитела с нечеловеческими Fc-областями или искусственными Fc-областями, и человеческие идиотипы. Такие иммуноглобулины могут быть выделены из животных по изобретению, которые были сконструированы для получения таких химерных антител.
Используемый в данном документе термин эффекторная клетка относится к иммунной клетке, которая участвует в эффекторной фазе иммунного ответа, в отличие от когнитивной и активационной фаз иммунного ответа. Некоторые эффекторные клетки экспрессируют специфические рецепторы Fc и выполняют специфические иммунные функции. В некоторых вариантах осуществления эффекторная клетка, такая как естественная клетка-киллер, способна индуцировать антителозависимую клеточную цитотоксичность (АЗКЦ). Например, моноциты и макрофаги, которые экспрессируют FcR, участвуют в специфическом уничтожении клеток-мишеней и представлении антигенов другим компонентам иммунной системы или связываются с клетками, которые представляют антигены. В некоторых вариантах осуществления эффекторная клетка может осуществлять фагоцитоз антигена-мишени или клетки-мишени.
Эффекторные клетки человека представляют собой лейкоциты, которые экспрессируют рецепторы, такие как рецепторы Т-клеток или FcR, и осуществляют эффекторные функции. Предпочтительно, такие клетки экспрессируют по меньшей мере FcyRIII и осуществляют эффекторную функцию АЗКЦ. Примеры лейкоцитов человека, которые опосредуют АЗКЦ, включают, естественные клетки-киллеры (NK), моноциты, цитотоксические Т-клетки и нейтрофилы; причем NK-клетки являются предпочтительными. Эффекторные клетки могут быть выделены из нативного источника, например, из крови или МКПК, как описано в данном документе.
Термин иммунная клетка используется в данном описании в самом широком смысле, включая, без ограничения, клетки миелоидного или лимфоидного происхождения, например лимфоциты (такие как В-клетки и Т-клетки, включая цитолитические Т-клетки (ЦТЛ)), клетки-киллеры, естественные клетки-киллеры (NK), макрофаги, моноциты, эозинофилы, полиморфно-ядерные клетки, такие как нейтрофилы, гранулоциты, тучные клетки и базофилы.
Эффекторные функции антитела относятся к той биологической активности, которая относится к области Fc (области Fc нативной последовательности или области Fc варианта аминокислотной последовательности) антитела. Примеры эффекторных функций антитела включают связывание C1q; комплемент-зависимую цитотоксичность; связывание с рецептором Fc; антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (АЗКЦ); фагоцитоз; подавление рецепторов поверхности клетки. (например, В-клеточный рецептор, BCR) и т.д.
Антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность и АЗКЦ соответствуют опосредованной клетками реакции, в которой неспецифические цитотоксические клетки, которые экспрессируют рецепторы Fc (FcR) (например, естественные клетки-киллеры (NK), нейтрофилы и макрофаги), распознают связанное антитело на целевой клетке и, таким образом, приводят к лизису клетки-мишени. Первичные клетки, опосредующие АЗКЦ, естественные клетки-киллеры, экспрессируют только FcyRIII, тогда как моноциты экспрессируют FcyRI, FcyRII и FcyRIII. данные по экспрессии FcR на гемопоэтических клетках обобщены в табл. 3 на странице 464 публикации Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991). Для оценки активности АЗКЦ интересующей молекулы может быть проведен анализ АЗКЦ in vitro, описанный в патенте США № 5500362 или 5821337. Эффекторные клетки, пригодные для такого анализа, включают мононуклеарные клетки периферической крови (МКПК) и естественные клетки-киллеры (NK). В качестве альтернативы или дополнения, АЗКЦ-активность молекулы, представляющей интерес, можно оценить in vivo, например, в животной модели, например, согласно описанию в публикации Clynes et al. PNAS (USA) 95:652-656 (1998).
Комплементзависимая цитотоксичность или CDC относится к способности молекулы лизиро
- 8 045291 вать мишень в присутствии комплемента. Путь активации комплемента инициируется связыванием первого компонента системы комплемента (C1q) с молекулой (например, антителом), образующей комплекс с распознаваемым антигеном. Для оценки активации комплемента, может быть выполнен анализ CDC, например, как описано в Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996).
Аффинность связывания относится к силе суммарного количества нековалентных взаимодействий между одним сайтом связывания молекулы (например, антителом) и ее связывающим партнером (например, антигеном). Если не указано иное, как используется в данном документе, аффинность связывания относится к аффинности собственного связывания, которая отражает взаимодействие 1:1 между членами пары связывания (например, антителом и антигеном). Аффинность молекулы X к ее партнеру Y в целом можно выразить константой диссоциации (Kd). Аффинность может быть измерена обычными методами, известными в данной области техники. Низкоаффинные антитела обычно связывают антиген медленно и склонны легко диссоциировать, тогда как высокоаффинные антитела обычно связывают антиген быстрее и имеют тенденцию оставаться связанными.
Используемый в данном документе термин Kd или значение Kd относится к константе диссоциации, определенной методом интерферометрии BioLayer, с использованием прибора Octet QK384 (Fortebio Inc., Menlo Park, СА) в режиме кинетики. Например, анти-мышиные Fc-датчики загружают со слитым Fc-антигеном мыши и затем погружают в лунки, содержащие антитела, для измерения зависимых от концентрации скоростей (kon). Скорости диссоциации антител (koff) измеряются на последнем этапе, когда датчики погружают в лунки, содержащие только буфер. Kd представляет собой соотношение koff/kon. (Подробнее см. Conception, J, et al., Comb Chem High Throughput Screen, 12(8), 791-800, 2009).
Термины лечение, лечить и тому подобное используются в данном документе для обозначения достижения желаемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Эффект может быть профилактическим с точки зрения полного или частичного предотвращения заболевания или его симптомов и/или может быть терапевтическим с точки зрения частичного или полного излечения заболевания и/или неблагоприятного явления, связанного с этим заболеванием. В контексте данного документа термин лечение охватывает любое лечение заболевания у млекопитающего, и включает в себя:
(a) предотвращение появления заболевания у субъекта, который может быть предрасположен к заболеванию, но у которого это заболевание еще не диагностировано;
(b) ингибирование заболевания, т.е. прекращение его развития; или (с) облегчение заболевания, т.е. регрессию заболевания.
Терапевтическое средство можно вводить до, во время или после начала заболевания или травмы. Лечение текущего заболевания, при котором лечение стабилизирует или уменьшает нежелательные клинические симптомы пациента, представляет особый интерес. Такое лечение желательно проводить до полной потери функции в пораженных тканях. Терапия субъекту может быть введена во время симптоматической стадии заболевания, и в некоторых случаях после симптоматической стадии заболевания.
Термин терапевтически эффективное количество означает количество активного агента, которое необходимо для придания терапевтического эффекта у субъекта. Например, терапевтически эффективное количество представляет собой количество, которое вызывает, ослабляет или иным образом вызывает улучшение патологических симптомов, прогрессирования заболевания или физиологических состояний, связанных с заболеванием, или которое повышает устойчивость к расстройству.
Термины В-клеточные новообразования или зрелые В-клеточные новообразования в контексте данного изобретения включают мелкоклеточную лимфоцитарную лимфому, В-клеточную пролимфоцитарную лимфому, В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз, лимфому из мантийных клеток, лимфому Беркитта, фолликулярную лимфому, диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВККЛ), множественную миелому, лимфоплазмацитарную лимфому, лимфому маргинальной зоны селезенки, новообразования плазматических клеток, такие как миелома клеток плазмы, плазмоцитома, болезнь отложения моноклональных иммуноглобулинов, болезнь тяжелых цепей, MALT-лимфома, узловая Вклеточная лимфома из клеток маргинальной зоны, внутрисосудистая В-крупноклеточная лимфома, первичная выпотная лимфома, лимфоматоидный гранулематоз, неходжкинская лимфома, лимфома Ходжкина, волосатоклеточный лейкоз, первичная выпотная лимфома и СПИД-ассоциированная неходжкинская лимфома.
Термины субъект, индивидуум и пациент используются в данном документе взаимозаменяемо для обозначения млекопитающего, которого оценивают на предмет лечения и/или которое подвергается лечению. В одном варианте осуществления млекопитающее является человеком. Термины субъект, индивидуум и пациент охватывают, без ограничения, индивидуумов, имеющих рак, индивидуумов с аутоиммунными заболеваниями, патогенными инфекциями и тому подобное. Субъектами могут быть люди, но также могут быть и другие млекопитающие, в частности те млекопитающие, которые могут быть использованы в качестве лабораторных моделей заболеваний человека, например, мышь, крыса и т.д.
Термин фармацевтическая композиция относится к составу, который находится в такой форме, которая позволяет биологической активности активного ингредиента быть эффективной, и который не
- 9 045291 содержит дополнительных компонентов, которые являются неприемлемо токсичными для субъекта, которому будет вводиться композиция. Такие составы являются стерильными. Фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества (носители, адьюванты) являются таковыми, которые резонно могут вводиться субъекту-млекопитающему и обеспечивать эффективную дозу используемого активного ингредиента.
Стерильная композиция является асептической или свободной от, или практически не содержит любых живых микроорганизмов и их спор. Замороженная композиция является композицией при температуре ниже 0°С.
Стабильная композиция является таковой, в которой белок практически полностью сохраняет свою физическую стабильность и/или химическую стабильность и/или биологическую активность во время хранения. Предпочтительно, композиция практически полностью сохраняет свою физическую или химическую стабильность, а также свою биологическую активность. Период хранения в общем выбран на основании срока годности композиции. Разнообразные техники для измерения стабильности белка известны в данной области техники и рассмотрены в Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301. Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991) и Jones. A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90) (1993), например. Стабильность может быть измерена при выбранной температуре для выбранного периода времени. Стабильность может быть оценена качественно и/или количественно различными способами, включая оценку образования агрегатов (например, с использованием эксклюзионной хроматографии, путем измерения мутности и/или визуальным контролем); путем оценки неоднородности заряда с помощью катионообменной хроматографии, изоэлектрического фокусирования изображения (icIEF) или электрофореза в капиллярной зоне; анализ аминоконцевой или карбоксиконцевой последовательности; масс-спектрометрический анализ; SDS-PAGE анализ для сравнения восстановленного и интактного антитела; анализ пептидной карты (например, триптический или LYS-C); оценку биологической активности или антигенсвязывающей функции антитела; и т.п. Нестабильность может включать в себя одно или несколько из: агрегации, дезамидирования (например, Asn дезамидирование), окисление (например, окисление Met), изомеризации (например, изомеризаци Asp), отсечение/гидролиз/фрагментация (например, фрагментация шарнирной области), образование сукцинимида, неспаренный цистеин(ы), удлинение N-конца, обработка С-конца, различия гликозилирования, и т.п.
II. Подробное описание сущности изобретения
Антитела к CD22.
Данное изобретение относится к семейству тесно связанных антител, содержащих только тяжелые цепи, которые связываются с CD22 человека. Антитела данного семейства содержат последовательности CDR, как определено в данном документе и показано на фиг. 1, и иллюстрируются приведенными последовательностями вариабельной области тяжелой цепи (VH) SEQ ID NO: 24-84, указанными на фиг. 2. Семейства антител обеспечивают ряд преимуществ, которые благоприятствуют применению их в качестве клинического(-их) терапевтического(-их) агента(-ов). Антитела включают членов с диапазоном аффинностей связывания, позволяющих выбирать конкретную последовательность с желаемой аффинностью связывания.
Подходящее антитело может быть выбрано из представленных в данном документе, для разработки и терапевтического или другого применения, включая, без ограничения, использование в качестве биспецифичного антитела, например, приведенного на фиг. 5В, или триспецифичного антитела или части структуры CAR-T.
Определение аффинности к белку-кандидату может быть выполнено с использованием способов, известных в данной области, таких как измерения Biacore. Члены семейства антител могут иметь аффинность к CD22 с Kd от около 10-6 до около 10-11 , в том числе без ограничения: от около 106 до около 1010; от около 106 до около 109; от около 10-6 до около 10-8; от около 10-8 до около 10'11; от около 10-8 до около 10-10; от около 10-8 до около 10-9; от около 10-9 до около 10-11; от около 10-9 до около 10-10; или любое значение в этих диапазонах. Выбор аффинности может быть подтвержден биологической оценкой для модуляции, например, блокирование, биологическая активность CD22, включая анализы in vitro, доклинические модели и клинические испытания, а также оценку потенциальной токсичности.
Члены семьи антител описанные в данном документе не являются перекрестно-реактивными с CD22 белком макака Cynomolgus, но могут быть сконструированными для получения перекрестнойреактивности с белком CD22 макака Cynomolgus или белками CD22 других видов, при необходимости.
Семейство специфических для CD22 антител в данном документе включает домен VH, содержащий последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 в каркасе VH человека. Последовательности CDR могут быть расположены, например, в области около аминокислотных остатков 26-35; 53-59; и 98-117, для CDR1, CDR2 и CDR3 соответственно, предоставленных примерных последовательностей вариабельной области, приведенных в SEQ ID NO: 24-84. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что последовательности CDR могут находиться в других положениях, если выбрана другая каркасная последовательность, хотя, как правило, порядок последовательностей остается неизменным.
Последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 антител к CD22 по данному изобретению могут охватываться следующими структурными формулами, где X обозначает вариабельную аминокислоту, которая
- 10 045291 может представлять собой специфические аминокислоты, как указано ниже.
CDR1.
G X1 S I Х2 Х3 Х4 Х5 Х6 Y, где X1 представляет собой D или G;
Х2 представляет собой S, Т, I или N;
Х3 представляет собой S или D;
Х4 представляет собой G, S, или N;
Х5 представляет собой D, G или S; а
Х6 представляет собой Y или Н.
CDR2.
Х7 X8 Y Х9 G Х10 Х11, где Х7 представляет собой I или V;
Х8 представляет собой Y или Н;
Х9 представляет собой S или Т;
Х10 представляет собой А, V или S; а
Х11 представляет собой Т или А.
CDR3.
X12 R X13 D S S X14 W R S, где X12 представляет собой Т, А или K;
Х13 представляет собой D или Е; а
Х14 представляет собой N или S.
Иллюстративные последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 показаны на фиг. 1 и 3.
В некоторых вариантах осуществления антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи, по данному изобретению содержит последовательность CDR1 любой из SEQ ID NO: 1-10. В конкретном варианте осуществления последовательность CDR1 представляет собой SEQ ID NO: 1.
В некоторых вариантах осуществления антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи, по данному изобретению содержит последовательность CDR2 любой из SEQ ID NO: 11-17. В конкретном варианте осуществления последовательность CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 11.
В некоторых вариантах осуществления антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи, по данному изобретению содержит последовательность CDR3 любой из SEQ ID NO: 18-23. В конкретном варианте осуществления последовательность CDR2 представляет собой SEQ ID NO: 18.
В дополнительном варианте осуществления антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи, по данному изобретению содержит последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1; последовательность CDR2 SEQ ID NO: 11 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 18.
В дополнительных вариантах осуществления антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи, по данному изобретению, содержит любую из аминокислотных последовательностей вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: от 24 до 84 (фиг. 2).
В другом дополнительном варианте осуществления антитело к CD22, содержащее только тяжелые цепи, по данному изобретению, содержит вариабельную область тяжелой цепи SEQ ID NO: 24.
В некоторых вариантах осуществления последовательность CDR в антителе к CD22, содержащее только тяжелые цепи, по данному изобретению, содержит одну или две аминокислотные замены относительно последовательности CDR1, CDR2 и/или CDR3 или набора последовательностей CDR1, CDR2 и CDR3 в любой из SEQ ID NO: 1-23 (фиг. 1). В некоторых вариантах осуществления указанная аминокислотная замена(ы) представляет собой одно или два аминокислотных положений 4-6 CDR1 и/или одно или два аминокислотных положений 2, 4-7 CDR2, и/или одно или два аминокислотных положений 5-12 CDR3, относительно формул, предложенных выше. В некоторых вариантах осуществления антитела к CD22, содержащие только тяжелые цепи, будут содержать последовательность вариабельной области тяжелой цепи с по меньшей мере около 85% идентичности, по меньшей мере 90% идентичности, по меньшей мере 95% идентичности, по меньшей мере 98% идентичности, или по меньшей мере 99% идентичности любым последовательностям вариабельной области тяжелой цепи SEQ ID NO: 24-84 (показанным на фиг. 2).
В некоторых вариантах осуществления предлагаются биспецифичные или мультиспецифичные антитела, которые могут иметь любую из конфигураций, обсуждаемых в данном документе, включая, без ограничения, биспецифичную трехцепочечную антителоподобную молекулу. В некоторых вариантах осуществления биспецифичное антитело может содержать по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи, обладающую специфичностью связывания для CD22, и по меньшей мере одну вариабельную область тяжелой цепи, имеющую специфичность связывания для белка, отличного от CD22. В некоторых вариантах осуществления биспецифичное антитело может содержать пару тяжелая цепь/легкая цепь, которая обладает специфичностью связывания для первого антигена, и тяжелую цепь из антитела, содержащего только тяжелые цепи, содержащего часть Fc, содержащую СН2 и/или СН3 и/или домены СН4, в отсутствие домена СН1, и антигенсвязывающего домена, который связывает эпитоп второго антигена или другой эпитоп первого антигена. В одном конкретном варианте осуществления биспецифич
- 11 045291 ное антитело содержит пару тяжелая цепь/легкая цепь, которая обладает специфичностью связывания для антигена на эффекторной клетке (например, белок CD3 на Т-клетке), а тяжелая цепь из антитела, содержащего только тяжелые цепи, содержит антигенсвязывающий домен, имеющий специфичность связывания для CD22.
В некоторых вариантах осуществления, когда белок по изобретению представляет собой биспецифичное антитело, одно плечо антитела (один связывающий фрагмент) является специфичным для CD22 человека, в то время как другой фрагмент может быть специфичным для клеток-мишеней, ассоциированных с опухолью антигенов, целевых антигенов, например, интегринов и т.д., антигенов патогенов, белков контрольных точек и тому подобное. Клетки-мишени конкретно включают раковые клетки, включая без ограничения, клетки из гематологической опухоли, например В-клеточные опухоли, как описано выше.
Различные форматы биспецифичных антител находятся в пределах объема изобретения, включая без ограничения одноцепочечные полипептиды, двухцепочечные полипептиды, трехцепочечные полипептиды, четырехцепочечные полипептиды и кратные им полипептиды. В данном документе биспецифичные антитела конкретно включают биспецифичные антитела Т-клеток, связывающиеся с CD22, который избирательно экспрессируется на зрелых В-клетках, и CD3 (антитела к CD22xCD3). Такие антитела индуцируют сильное опосредованное Т-клетками уничтожение клеток, экспрессирующих CD22.
Получение антител к CD22, содержащих только тяжелые цепи.
Антитела, содержащие только тяжелые цепи, по данному изобретению могут быть получены при помощи методов, известных в данной области техники. В предпочтительном варианте осуществления антитела, содержащие только тяжелые цепи в данном случае продуцируются трансгенными животными, включая трансгенных мышей и крыс, предпочтительно крыс, у которых эндогенные гены иммуноглобулина нокаутированы или отключены. В предпочтительном варианте осуществления антитела, содержащие только тяжелые цепи, по настоящему изобретению продуцируются в UniRat™. UniRat™ имеют молчащие гены собственного эндогенного иммуноглобулина и используют транслокус тяжелой цепи иммуноглобулина человека для экспрессии разнообразного, естественно оптимизированного репертуара полностью человеческих HCAb. В то время как эндогенные локусы иммуноглобулина у крыс могут быть нокаутированы или заглушены с использованием различных технологий, в UniRat™ технология цинкпальцевой (эндо)нуклеазы (ZNF) была использована для инактивации эндогенного J-локуса тяжелой цепи крысы, локуса Ск легкой цепи и локуса Cλ легкой цепи. Конструкции ZNF для микроинъекции в ооциты могут продуцировать нокаутные (KO) линии IgH и IgL. Подробнее см., например, Geurts et al., 2009, Science 325:433. Characterization of Ig heavy chain knockout rats has been reported by Menoret et al., 2010, Eur. J. Immunol. 40:2932-2941. Преимущества технологии ZNF заключаются в том, что негомологичное присоединение конца для подавления гена или локуса посредством делеций размером до нескольких т.п.н. также может обеспечить сайт-мишень для гомологичной интеграции (Cui et al., 2011, Nat Biotechnol 29:64-67). Антитела тяжелой цепи человека, продуцируемые в UniRat™, называются UniAbs™ и могут связывать эпитопы, которые нельзя атаковать обычными антителами. Их высокая специфичность, аффинность и небольшой размер делают их идеальными для моно- и полиспецифичных применений.
В дополнение к UniAbs™, в частности, в данный документ включены антитела, содержащие только тяжелые цепи, лишенные верблюжьего каркаса и мутаций VHH, и их функциональные области VH. Такие антитела, содержащие только тяжелые цепи, можно, например, продуцировать у трансгенных крыс или мышей, которые содержат полностью человеческие генные локусы, содержащие только тяжелые цепи, как описано, например, в WO 2006/008548, но также можно использовать других трансгенных млекопитающих, таких как кролик, морская свинка, крыса, предпочтительными являются крысы и мыши. Антитела, содержащие только тяжелые цепи, включая их функциональные фрагменты VHH или VH, также могут быть получены с помощью технологии рекомбинантных ДНК путем экспрессии кодирующей нуклеиновой кислоты в подходящем эукариотическом или прокариотическом хозяине, включая, например, клетки млекопитающих (например, клетки СНО), кишечную палочку или дрожжи.
Домены антител, содержащих только тяжелые цепи, сочетают в себе преимущества антител и низкомолекулярных лекарственных средств: могут быть моно- или мультивалентными; имеют низкую токсичность; и экономически выгодны в производстве. Из-за их небольшого размера эти домены легко вводить, включая пероральное или местное введение, они характеризуются высокой стабильностью, включая желудочно-кишечную стабильность; и их период полужизни может быть адаптирован к желаемому применению или показаниям. Кроме того, домены VH и VHH HCAb могут быть получены экономически эффективным способом.
В конкретном варианте осуществления антитела, содержащие только тяжелые цепи, по данному изобретению, включая UniAbs™, имеют нативный аминокислотный остаток в первом положении области FR4 (аминокислотное положение 101 согласно системе нумерации Kabat), замещенный другим аминокислотным остатком, который способен разрушать поверхностно экспонированный гидрофобный пэтч, содержащий или связанный с нативным аминокислотным остатком в этом положении. Такие гидрофоб
- 12 045291 ные пэтчи обычно скрыты на границе с константной областью легкой цепи антитела, но становятся открытыми для поверхности в HCAb и, по меньшей мере, частично, для нежелательной агрегации и ассоциации легкой цепи HCAb. Замещенный аминокислотный остаток предпочтительно является заряженным и, более предпочтительно, является положительно заряженным, таким как лизин (Lys, K), аргинин (Arg, R) или гистидин (His, Н), предпочтительно аргинин (R). В предпочтительном варианте осуществления антитела, содержащие только тяжелые цепи, полученные от трансгенных животных, содержат мутацию Trp-Arg в положении 101. Полученные HCAb предпочтительно имеют высокую антигенсвязывающую аффинность и растворимость в физиологических условиях в отсутствие агрегации.
В рамках данного изобретения были идентифицированы антитела IgG человека, содержащие только тяжелые цепи, к CD22 с уникальными последовательностями от животных UniRat™ (UniAb™), которые связывают CD22 человека в ИФА связывания белка и клеток (рекомбинантный внеклеточный домен CD22). Идентифицированные последовательности вариабельной области тяжелой цепи (VH) (см. фиг. 2) являются положительными в отношении связывания белка CD22 человека и/или в отношении связывания с клетками CD22+, и все они являются отрицательными в отношении связывания с клетками, которые не экспрессируют CD22.
Антитела, описанные в данном документе, связывают CD22-положительную лимфому Беркитта в клеточной линии Daudi (ATCC® CCL-213™), и некоторые перекрестно реагируют с белком CD22 яванского макака. Кроме того, они могут быть сконструированы для обеспечения перекрестной реактивности с белком CD22 любых видов животных, если это желательно.
Антитела к CD22, содержащие только тяжелые цепи, такие как UniAbs™, могут иметь аффинность к CD22 с Kd от около 10-6 до около 10-11, в том числе без ограничения: от около 10-6 до около 10-10; от около 10-6 до около 10-9; от около 10-6 до около 10-8; от около 10-8 до около 10-11; от около 10-8 до около 10-10; от около 10-8 до около 10-9; от около 10-9 до около 10-11; от около 10-9 до около 10-10; или любое значение в этих диапазонах. Выбор аффинности может быть подтвержден биологической оценкой для модуляции, например, блокирование, биологическая активность CD22, включая анализы in vitro, доклинические модели и клинические испытания, а также оценку потенциальной токсичности.
Антитела, содержащие только тяжелые цепи, которые связываются с неперекрывающимися эпитопами на белке CD22, например UniAbs™, можно идентифицировать с помощью анализов конкурентного связывания, таких как иммуноферментные анализы (ИФА) или анализы конкурентного связывания с помощью проточной цитометрии, например, можно использовать конкуренцию между известными антителами, связывающимися с антигеном-мишенью, и интересующим антителом. Используя этот подход, можно разделить набор антител на те, которые конкурируют с эталонным антителом, и те, которые не конкурируют. Неконкурентные антитела идентифицируются как связывающиеся с отдельным эпитопом, который не перекрывается с эпитопом, связанным с эталонным антителом. Часто одно антитело иммобилизуется, антиген связывается, а второе меченое (например, биотинилированное) антитело тестируется в ИФА на способность связывать захваченный антиген. Его также можно проводить с использованием платформ поверхностного плазмонного резонанса (SPR), включая ProteOn XPR36 (BioRad, Inc), Biacore 2000 и Biacore T200 (GE Healthcare Life Sciences), и томограф МХ96 SPR (Ibis technologies BV), а также на биослойные интерферометрические платформы, такие как Octet Red384 и Octet HTX (ForteBio, Pall Inc). Для дальнейших деталей смотрите примеры в данном документе.
Как правило, антитело конкурирует с эталонным антителом, если оно вызывает снижение связывания эталонного антитела с антигеном-мишенью на около 15-100%, что определено стандартными методами, такими как анализы конкурентного связывания, описанные выше. В различных вариантах осуществления относительное ингибирование составляет по меньшей мере около 15%, по меньшей мере около 20%, по меньшей мере около 25%, по меньшей мере около 30%, по меньшей мере около 35%, по меньшей мере около 40%, по меньшей мере около 45%, по меньшей мере около 50%, по меньшей мере около 55%, по меньшей мере около 60%, по меньшей мере около 65%, по меньшей мере около 70%, по меньшей мере около 75%, по меньшей мере около 80%, по меньшей мере около 85%, по меньшей мере около 90%, по меньшей мере около 95% или выше.
Фармацевтические композиции, применения и способы лечения.
Другим аспектом настоящего изобретения является предложение фармацевтических композиций, содержащих одно или более антител по настоящему изобретению в смеси с подходящим фармацевтически приемлемым носителем. Фармацевтически приемлемые носители, используемые в данном документе, например, но не ограничиваются ими, адъюванты, твердые носители, вода, буферы или другие носители, используемые в данной области для хранения терапевтических компонентов или их комбинаций.
В одном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит антитело, содержащее только тяжелые цепи, (например, UniAb™), которое связывается с CD22. В другом варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит мультиспецифичное (включая биспецифичное) антитело, содержащее только тяжелые цепи, (например, UniAb™) со специфичностью связывания для двух или более неперекрывающихся эпитопов на белке CD22. В предпочтительном варианте осуществления фармацевтическая композиция содержит мультиспецифичное (включая биспецифичное) антитело, содержа
- 13 045291 щее только тяжелые цепи, (например, UniAb™) со специфичностью связывания с CD22 и со специфичностью связывания с мишенью связывания на эффекторной клетке (например, мишенью связывания на Т-клетка, такой как, например, белок CD3 на Т-клетке).
Фармацевтическую композицию антител, используемых согласно настоящему изобретению, готовят для хранения путем смешивания белков, имеющих желаемую степень чистоты, с необязательными фармацевтически приемлемыми носителями, вспомогательными веществами или стабилизаторами (см., например, Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)), например, в форме лиофилизированных композиций или водных растворов. Приемлемые носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы являются нетоксичными для реципиентов при используемых дозировках и концентрациях и включают в себя буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту и метионин; консерванты (такие как хлорид октадецилдиметилбензиламмония; хлорид гексаметония; хлорид бензалкония, хлорид бензетония; фенол, бутиловый или бензиловый спирт; алкилпарабены, такие как метил или пропилпарабен; катехол; резорцинол; циклогексанол; 3-пентанол; и м-крезол); низкомолекулярные (менее чем около 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, гистидин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатообразующие агенты, такие как ЭДТК; сахара, такие как сахароза, маннит, трегалоза или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; комплексы металлов (например, комплексы Zn-белок); и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как TWEEN™, PLURONICS™ или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
Фармацевтические композиции для парентерального введения предпочтительно стерильны и по существу изотоничны и произведены согласно условиям правил производства и контроля качества лекарственных средств (GMP). Фармацевтические композиции могут быть предложены в единичной дозажной форме (например, дозажной форме для единичного введения). Подходящая лекарственная форма зависит от выбранного пути введения. Антитела описанные в данном документе могут вводиться посредством внутривенной инъекции или инфузии, или подкожно. Для инъекционного введения, антитела описанные в данном документе могут быть составлены в водных растворах, предпочтительно в физиологически-совместимых буферах для уменьшения дискомфорта в месте инъекции. Раствор может содержать носители, вспомогательные вещества или стабилизаторы как описано выше. В качестве альтернативы, антитела могут быть лиофилизированы для смешивания с подходящим носителем, например, стерильной апирогенной водой, перед применением.
Составы антител раскрыты, например, в патенте США № 9034324. Подобные составы могут быть использованы для антител, содержащих только тяжелые цепи, включая UniAbs™, по данному изобретению. Композиции антитела для подкожного введения описаны, например, в патентах США 20160355591 и США 20160166689.
Способы применения.
Антитела к CD22, содержащие только тяжелые цепи, мультиспецифичные антитела и фармацевтические композиции, описанные в данном документе, можно применять для лечения заболеваний и состояний, характеризующихся экспрессией CD22, включая, без ограничения, состояния и заболевания, описанные далее в данном документе. Аспекты данного изобретения также относятся к применению антитела, описанного в данном документе, при получении лекарственного средства для лечения Вклеточного расстройства, характеризующегося экспрессией CD22. Аспекты данного изобретения также относятся к антителу, описанному в данном документе, для применения в лечении В-клеточного расстройства, характеризующегося экспрессией CD22.
CD22 представляет собой трансмембранный белок типа I с молекулярной массой 135 кДа, который экспрессируется на низких уровнях в пре- и незрелых В-клетках, максимально в зрелых В-клетках и в конечном итоге подавляется в плазматических клетках. (Например, Walker et al., Immunology, 2008 Mar; 123(3) 314-25). CD22 в большом количестве экспрессируется в фолликулярных (первичных и вторичных зонах В-клеток), В-клетках мантийных и маргинальных зон и, как сообщается, присутствует в 60-80% образцов от пациентов со злокачественными опухолями В-клеток (Alderson et al., Clin. Cancer Res 2009;15(3) February 11, 2009). Из-за его наблюдаемой экспрессии в ряде гематологических злокачественных новообразований, CD22 является многообещающей мишенью для терапии на основе антител.
В одном аспекте антитела к CD22, содержащие только тяжелые цепи, (например, UniAbs™) и фармацевтические композиции по данному изобретению могут быть использованы для лечения гематологических злокачественных опухолей, характеризующихся экспрессией CD22, включая, без ограничения, диффузную В-крупноклеточную лимфому (ДВККЛ), неходжкинскую лимфому, В-клеточный хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ) и В-клеточный острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ).
Диффузная В-крупноклеточная лимфома (ДВККЛ или DLBCL) является наиболее распространенной формой неходжкинской лимфомы среди взрослых (Blood 1997 89 (11): 3909-18), с оценкой ежегодной заболеваемости от 7 до 8 случаев на 100000 человек в год в США и Великобритании. Она характери
- 14 045291 зуется как агрессивный рак, который может возникнуть практически в любой части тела. Причины ДВККЛ не совсем понятны, и он могут быть вызваны нормальными В-клетками, а также злокачественной трансформацией других типов клеток лимфомы или лейкоза. Подходы к лечению обычно включают химиотерапию и облучение, и в результате общая пятилетняя выживаемость составляет в среднем около 58% для взрослых. Хотя некоторые моноклональные антитела продемонстрировали перспективность лечения ДВККЛ, последовательная клиническая эффективность еще не была окончательно продемонстрирована. Поэтому существует большая потребность в новых способах лечения, включая иммунотерапию, для лечения ДВККЛ.
В другом аспекте антитела к CD22, содержащие только тяжелые цепи, (например, UniAbs™) и фармацевтические композиции по данному изобретению могут быть использованы для лечения аутоиммунных нарушений, характеризующихся патогенными В-клетками, которые экспрессируют CD22, включая, без ограничения, системную красную волчанку (СКВ), ревматоидный артрит (РА) и рассеянный склероз (PC).
Эффективные дозы композиций по данному изобретению для лечения заболевания варьируются в зависимости от многих различных факторов, включая способы введения, место назначения, физиологическое состояние пациента, является ли пациент человеком или животным, вводятся ли другие лекарственные препараты, и является ли лечение профилактическим или терапевтическим. Обычно пациентом является человек, но млекопитающие, отличные от человека, также могут поддаваться лечению, например, домашние животные, такие как собаки, кошки, лошади и т.д., лабораторные млекопитающие, такие как кролики, мыши, крысы и т.д., и тому подобное. Для оптимизации безопасности и эффективности можно подбирать лекарственные дозировки.
Уровни дозировки могут быть легко определены обычным квалифицированным врачом и могут быть изменены при необходимости, например, при необходимости изменения реакции субъекта на терапию. Количество действующего вещества, которое можно комбинировать с материалами носителя для получения единичной лекарственной формы, варьируется в зависимости от хозяина, который поддается лечению, и конкретного способа введения. Стандартные лекарственные формы обычно содержат от около 1 до около 500 мг действующего вещества.
В некоторых вариантах осуществления терапевтическая дозировка агента может составлять от около 0,0001 до 100 мг/кг и более обычно от 0,01 до 5 мг/кг от массы тела хозяина. Например, дозировка может составлять 1 мг кг массы тела или 10 мг/кг массы тела или в пределах 1-10 мг/кг. Примерный режим лечения включает введение один раз каждые две недели или один раз в месяц или один раз каждые от 3 до 6 месяцев. Терапевтические вещества по настоящему изобретению обычно вводят несколько раз. Интервалы между однократными дозами могут быть еженедельными, ежемесячными или ежегодными. Интервалы также могут быть нерегулярными, на что указывает измерение уровня терапевтического вещества в крови пациента. Альтернативно, терапевтические вещества по настоящему изобретению можно вводить в виде композиции с замедленным высвобождением, и в этом случае требуется менее частое введение. Дозировка и частота варьируются в зависимости от периода полувыведения полипептида у пациента.
Как правило, композиции готовят в виде инъекционных препаратов, либо в виде жидких растворов, либо суспензий; также могут быть получены твердые формы, подходящие для растворения или суспендирования в жидких носителях перед инъекцией. Фармацевтические композиции, описанные в данном документе, подходят для внутривенного или подкожного введения, непосредственно или после восстановления из твердой (т.е. лиофилизированной) композиции. Препарат также может быть эмульгирован или инкапсулирован в липосомы или микрочастицы, такие как полилактид, полигликолид или сополимер, для усиления адъювантного эффекта, как описано выше. Langer, Science 249: 1527, 1990 и Hanes, Advanced Drug Delivery Reviews 28: 97-119, 1997. Вещества по данному изобретению можно вводить в форме депо-инъекции или препарата имплантата, который может быть составлен таким образом, чтобы обеспечить длительное или пульсирующее высвобождение действующего вещества. Фармацевтические композиции, как правило, сформулированы как стерильные, практически изотонические и полностью соответствующие всем нормам Правил производства и контроля качества лекарственных средств (GMP) Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов США.
Токсичность антител и структур антител, описанных в данном документе, может быть определена стандартными фармацевтическими процедурами на клеточных культурах или экспериментальных животных, например, путем определения LD50 (доза, летальная для 50% популяции) или LD100 (доза, летальная до 100% популяции).
Соотношение доз между токсическим и терапевтическим эффектом является терапевтическим показателем. Данные, полученные из этих анализов клеточных культур и исследований на животных, могут быть использованы при составлении диапазона доз, который не токсичен для применения у людей. Дозировка антител, описанных в данном документе, предпочтительно находится в диапазоне циркулирующих концентраций, которые включают эффективную дозу с небольшой токсичностью или без нее. Дозировка может варьироваться в пределах данного диапазона в зависимости от используемой лекарственной формы и используемого пути введения. Точный состав, способ введения и дозировка могут быть выбра
- 15 045291 ны индивидуально врачом с учетом состояния пациента.
Композиции для введения обычно содержат антитело или другой абляционный агент, растворенный в фармацевтически приемлемом носителе, предпочтительно в водном носителе. Могут быть использованы различные водные носители, например забуференный солевой раствор и тому подобное. Данные растворы являются стерильными и, как правило, не содержат нежелательных веществ. Данные композиции могут быть стерилизованы обычными, хорошо известными способами стерилизации. Композиции могут содержать фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, необходимые для приближения их к физиологическим условиям, такие как регулирующие рН агенты и буферные агенты, регулирующие токсичность агенты и тому подобное, например ацетат натрия, хлорид натрия, хлорид калия, хлорид кальция, лактат натрия и тому подобное. Концентрация активного агента в данных составах может варьироваться в широких пределах и будет выбираться в основном на основе объемов жидкости, вязкости, массы тела и тому подобного в соответствии с конкретным выбранным способом введения и потребностями пациента (например, Remington's Pharmaceutical Science (15th ed., 1980) и Goodman & Gillman, The Pharmacological Basis of Therapeutics (Hardman et al., eds., 1996)).
Также в объем изобретения входят наборы, содержащие активные агенты и их составы, изобретения и инструкции по применению. Набор может дополнительно содержать по меньшей мере один дополнительный компонент, например, химиотерапевтический препарат и др. Наборы обычно включают этикетку, указывающую на предполагаемое применение содержимого набора. Термин этикетка, используемый в данном документе, включает любые письменные или записанные материалы, поставляемые в комплекте или вместе с ним, или иным образом сопровождающие набор.
Теперь, когда изобретение полностью описано, для специалиста в данной области техники будет очевидно, что различные изменения и модификации могут быть сделаны без отклонения от сущности или объема изобретения.
Примеры
Материалы и методы.
Связывание белка CD22.
Эксперименты по кинетическому связыванию для определения аффинности антиген-антитело проводили на системе Octet QK-384 (ForteBio) с использованием двухслойной интерферометрии. Биосенсоры анти-человеческого IgG Fc Capture (AHC) (Forte Bio, №: партии 18-5064) гидратировали в буфере для анализа (1x PBS, 0,1% БСА, 0,02% Tween-20, pH 7,2) и предварительно обрабатывали в 100 мМ глицине рН 1,5. Исходный уровень был установлен в буфере для анализа на уровне 120 с. Биосенсоры АНС затем иммобилизировали с UniAbs™ в концентрации 5 мкг/мл в течение 120 с. Другой исходный уровень (120 с) был установлен в буфере для анализа. Затем их погружали в 7-точечную серию разведений 1:2 белка CD22 человека в буфере для анализа, начиная с 250 нМ. Последняя лунка колонки аналита содержала только буфер для анализа для проверки неспецифического связывания между буфером и загруженными биосенсорами и использовалась в качестве контрольной лунки. Ассоциация наблюдалась в течение 600 с, с последующей диссоциацией в течение 900 с. Анализ данных проводили с использованием Octet Data Analysis v9.0 (ForteBio). Кинетики связывания анализировали с использованием модели связывания 1:1.
Связывание клеток CD22.
Связывание с CD22-положительными клетками оценивали с помощью проточной цитометрии (Guava easyCyte 8HT, EMD Millipore) с использованием клеточной линии Daudi (ATCC). Вкратце, 100000 клеток-мишеней окрашивали серией разведений очищенного UniAbs™ в течение 30 мин при 4°С. После инкубации клетки дважды промывали буфером для проточной цитометрии (1X ФСБ, 1% БСА, 0,1% NaN3) и окрашивали козьим F(ab')2 анти-человеческим IgG, конъюгированным с R-фикоэритрином (РЕ) (Southern Biotech, кат. № 2042-09) для обнаружения связанных с клетками антител. После 20-минутной инкубации при 4°С клетки дважды промывали буфером для проточной цитометрии и затем измеряли среднюю интенсивность флуоресценции (MFI) с помощью проточной цитометрии. Значения ЕС50 рассчитывали с использованием GraphPad Prism 7. Связывание с CD22-положительными клетками яванского макака определяли с использованием того же протокола со следующими модификациями: клеткимишени представляли собой клетки СНО, стабильно трансфицированные для экспрессии внеклеточного домена CD22 яванского макака, и каждое антитело тестировали в одной концентрации (~1,7 мкг/мл) поэтому значения ЕС50 не были рассчитаны.
Пример 1. Генетически сконструированные крысы, экспрессирующие антитела, содержащие только тяжелые цепи.
Локус IgH человека и крысы был сконструирован и собран из нескольких частей. Это включало модификацию и объединение генов С-области крысы ниже JH человека, а затем добавление выше области VH6 -D-сегмента человека. Два ВАС с отдельными кластерами генов VH человека [ВАС6 и ВАС3] затем совместно вводили с помощью ВАС, называемого Georg, кодирующим собранную и модифицированную область, включающую VH6 человека, все D, все JH и модифицированный Сγ2а/1/2b (ACH1) крысы.
Были получены трансгенные крысы, несущие искусственные локусы иммуноглобулинов тяжелой цепи в неупорядоченной конфигурации. IgG2a(ACH1), IgG1(ACH1), IgG2b(ACH1) гены отсутствовали в
- 16 045291
CH1 сегменте. Гены константной области IgE, IgA и 3' энхансер были включены в ВАС Georg. ОТ-ПЦР и анализ сыворотки (ИФА) трансгенных крыс выявили продуктивную перестройку локусов трансгенных иммуноглобулинов и экспрессию в сыворотке только антител, содержащие только тяжелые цепи, различных изотипов. Трансгенные крысы скрещивались с крысами с мутированными эндогенными локусами тяжелой цепи и легкой цепи, ранее описанными в публикации патента США 2009/0098134 А1. Анализ таких животных продемонстрировал инактивацию экспрессии тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина крысы и высокий уровень экспрессии антител, содержащих только тяжелые цепи, с вариабельными областями, кодируемыми генами V, D и J человека. Иммунизация трансгенных крыс приводила к получению сывороточных ответов с высоким титром антиген-специфических антител, содержащие только тяжелые цепи. Данные трансгенные крысы, экспрессирующие антитела, содержащие только тяжелые цепи, с областью VDJ человека, были названы UniRats™.
Пример 2. Иммунизация.
Иммунизация рекомбинантным внеклеточным доменом CD22.
Двенадцать животных UniRat (6 НС27, 6 НС28) были иммунизированы рекомбинантным белком CD22 человека. Животных иммунизировали в соответствии со стандартным протоколом с использованием адъюванта Titermax/Alhydrogel. Рекомбинантный внеклеточный домен CD22 был приобретен у R&D Systems и разбавлен стерильным физиологическим раствором и объединен с адъювантом. Иммуноген комбинировали с адъювантами Titermax и Alhydrogel. Первая иммунизация (прайминг) иммуногеном в Titermax проводилась на левой и правой ногах. Последующие бустерные иммунизации были проведены в присутствии Alhydrogel и за три дня до отбора бустов были проведены иммуногеном в ФСБ. Сыворотку собирали у крыс при последнем заборе крови для определения сывороточных титров.
Результаты сывороточных титров.
Сводная информация о сывороточном титре представлена на фиг. 6. На графиках, изображенных на фиг. 6, каждая линия представляет отдельное животное. На условных обозначениях графиков показан идентификационный номер каждого отдельного животного. Активность связывания для серии сывороток с 8-точечным разведением тестировали с помощью ИФА против белка huCD22+ Fc, huCD22+His-метка, белка макака резуса CD22+His-метка и белка-мишени без His-метки. Среди этой группы животных наблюдался диапазон уровней реактивности сыворотки как к белку CD22 человека, так и макака резуса. Также наблюдался ответ сыворотки на His-метку белка.
Пример 3. Связывание с CD22-экспрессирующими клеточными линиями.
На фиг. 4 приведена активность связывания мишени антител к CD22, содержащих только тяжелые цепи, которые описаны в данном документе. В столбце 1 показан идентификационный номер (ID) клона антитела к CD22, содержащего только тяжелые цепи. В столбце 2 показана аффинность связывания с белком (KD), измеренная в молярности. В столбце 3 показана константа диссоциации связывания с белком (скорость K-off), измеренная в сах. В столбце 4 показано связывание с клетками Daudi, измеренное как кратность по сравнению с фоновым сигналом MFI. В столбце 5 показано связывание с клетками СНО, стабильно экспрессирующими CD22 яванского макака, измеренное как кратность по сравнению с фоновым сигналом MFI. В столбце 6 показано связывание с клетками СНО, которые не экспрессируют CD22, измеренное как кратность по сравнению с фоновым сигналом MFI.
Пример 4. Опосредованное биспецифичным антителами уничтожение опухолевых клеток человека путем перенаправления активированных Т-клеток.
Три различных CD22-положительных клеточных линии опухоли лимфомы Беркитта (Daudi, Raji и Ramos) были помечены красителем и инкубированы с увеличивающимися количествами биспецифичного антитела в присутствии предварительно активированных Т-клеток человека. Биспецифичное антитело состояло из анти-CD3-связывающего плеча, спаренного с анти-CD22 VH-связывающим доменом, что схематически изображено на фиг. 5D. Антитело отрицательного контроля содержало связывающий домен VH, который не связывался с CD22. CD22-отрицательные клетки K562 не проявляли специфического лизиса (данные не представлены). Данные трех биспецифичных антител, содержащих три различных связывающих домена к CD22 на основе только тяжелой цепи, спаренные с одним и тем же связывающим доменом к CD3, представлены на фиг. 5А, сравнивали с отрицательным контролем и демонстрировали опосредованное антителами уничтожение CD22-положительных опухолевых клеток Daudi посредством перенаправления активированных Т-клеток. Данные по двум биспецифичным антителам, содержащим один и тот же анти-CD22-связывающий домен на основе только тяжелой цепи, спаренный с двумя различными анти-CD3-связывающими доменами, представлены на фиг. 5В, сравнивали с отрицательным контролем и демонстрировали опосредованное антителами уничтожение CD22-положительных опухолевых клеток Raji посредством перенаправления активированных Т-клеток. Данные по двум биспецифичным антителам, содержащим один и тот же анти-CD22-связывающий домен на основе только тяжелой цепи, спаренный с двумя различными анти-CD3-связывающими доменами, представлены на фиг. 5С, сравнивали с отрицательным контролем и демонстрировали опосредованное антителами уничтожение CD22-положительных опухолевых клеток Ramos посредством перенаправления активированных Тклеток.
Несмотря на то что в настоящем документе были показаны и описаны предпочтительные варианты
-
Claims (18)
- осуществления настоящего изобретения, специалистам в данной области техники будет очевидно, что данные варианты осуществления приведены исключительно с целью иллюстрации. Множество вариаций, изменений и замен будут очевидны специалистам в данной области техники без отхода от объема и сущности настоящего изобретения. Следует понимать, что различные альтернативные варианты осуществления настоящего изобретения, описанные в настоящем документе, могут применяться при практической реализации настоящего изобретения. Предполагается, что нижеследующая формула изобретения определяет объем изобретения и, что таким образом охватываются способы и структуры в пределах объема данной формулы изобретения и их эквивалентов.ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, которое связывается с CD22, содержащее вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:(a) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 11 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 18; или (b) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 19; или (c) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 20.
- 2. Антитело, содержащее только тяжелые цепи по п.1, где последовательности CDR1, CDR2 и CDR3 находятся в каркасе VH человека.
- 3. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.1, где вариабельная область тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 24.
- 4. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.3, где вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 24.
- 5. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.1, где вариабельная область тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 25.
- 6. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.5, где вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 25.
- 7. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.1, где вариабельная область тяжелой цепи содержит последовательность, имеющую по меньшей мере 95% идентичности последовательности с SEQ ID NO: 32.
- 8. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.7, где вариабельная область тяжелой цепи содержит SEQ ID NO: 32.
- 9. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.1, дополнительно содержащее последовательность константной области тяжелой цепи.
- 10. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.9, где в последовательности константной области тяжелой цепи отсутствует последовательность CH1.
- 11. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.9, где последовательность константной области тяжелой цепи содержит домен СН2 и домен CH3.
- 12. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.1, дополнительно содержащее область IgG4 Fc человека.
- 13. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.12, где область IgG4 Fc человека является вариантом области IgG4 Fc человека.
- 14. Антитело, содержащее только тяжелые цепи, по п.12, где область IgG4 Fc человека является сайленсированной областью IgG4 Fc человека.
- 15. Мультиспецифичное антитело, содержащее первый связывающий фрагмент, который имеет специфичность связывания с CD22 и второй связывающий фрагмент, где первый связывающий фрагмент содержит вариабельную область тяжелой цепи, содержащую:(a) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 11 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 18; или (b) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 19; или (c) последовательность CDR1 SEQ ID NO: 1, последовательность CDR2 SEQ ID NO: 12 и последовательность CDR3 SEQ ID NO: 20.
- 16. Мультиспецифичное антитело по п.15, которое является биспецифичным антителом.
- 17. Мультиспецифичное антитело по п.15, где второй связывающий фрагмент имеет аффинность связывания с эффекторной клеткой.
- 18. Мультиспецифичное антитело по п.15, где второй связывающий фрагмент имеет аффинность связывания с Т-клеточным антигеном.-
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US62/609,759 | 2017-12-22 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA045291B1 true EA045291B1 (ru) | 2023-11-14 |
Family
ID=
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP7303126B2 (ja) | 抗ｂｃｍａ重鎖のみ抗体 | |
| US11905326B2 (en) | Multispecific heavy chain antibodies binding to CD22 and CD3 | |
| US12202898B2 (en) | Heavy chain antibodies binding to CD19 | |
| JP7240335B2 (ja) | 抗ｂｃｍａ重鎖のみ抗体 | |
| US20240117046A1 (en) | Heavy chain antibodies binding to cd22 | |
| RU2797348C2 (ru) | Антитела, содержащие только тяжелые цепи, которые связываются с cd22 | |
| TWI872082B (zh) | 與ｃ ｄ ２ ２ 及ｃ ｄ ３ 結合之多特異性重鏈抗體 | |
| RU2824170C2 (ru) | Антитела, содержащие только тяжелые цепи, которые связываются с cd19 | |
| EA045291B1 (ru) | Антитела, содержащие только тяжелые цепи, которые связываются с cd22 | |
| RU2816994C2 (ru) | Антитела к bcma, содержащие только тяжелую цепь | |
| RU2781301C2 (ru) | Анти-bcma антитела, содержащие только тяжёлую цепь | |
| EA048216B1 (ru) | Полиспецифические антитела, содержащие только тяжелые цепи, которые связываются с cd22 и cd3 | |
| TW202504931A (zh) | 與ｃｄ２２及ｃｄ３結合之多特異性重鏈抗體 |